HUT77258A - Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba - Google Patents

Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba Download PDF

Info

Publication number
HUT77258A
HUT77258A HU9701819A HU9701819A HUT77258A HU T77258 A HUT77258 A HU T77258A HU 9701819 A HU9701819 A HU 9701819A HU 9701819 A HU9701819 A HU 9701819A HU T77258 A HUT77258 A HU T77258A
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
nucleic acid
adenovirus
motoneurons
genome
medullary
Prior art date
Application number
HU9701819A
Other languages
English (en)
Inventor
Franqoise Finiels
Minerva Gimenez-Ribotta
Jacques Mallet
Alain Privat
Frédéric Revah
Original Assignee
Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale
Rhone-Poulenc Rorer S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale, Rhone-Poulenc Rorer S.A. filed Critical Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale
Publication of HUT77258A publication Critical patent/HUT77258A/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

A bejelentés napja:
1995.12.12
Elsőbbsége:
1994.12.13 (94/15014) FR
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/FR95/01650
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/18740
A találmány tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál. A kívánt nukleinsav olyan anyagot kódolhat, amely az idegsejtekre jótékony hatás kifejtésére képes, például növekedési faktort, neurotrofikus faktort, citokint, neurotranszmittert vagy enzimet vagy receptort. Az adenovírus lehet például emberi vagy állati eredetű. Az intramuszkuláris bevitelt végezhetik egy adott izom egy vagy több pontjába vagy több izomba történő injektálással. A gyógyszerkészítmény medulláris sérüléseknek vagy a motoneuronok degenerálódásos betegségeinek kezelésére szolgálhat .
ANVGiad jgjy.aiázzÓM ···· ·· ···· « · • · · · · · « · . * · · · • · ···· ·· · ·
s._.
Nemzetközi
Szabadalmi Iroda
H-1062 Budapest. Andrássy utl ·
63.871/BE
Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba
RHONE-POULENC RORER S.A., ANTONY, FR
INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE, PARIS, FR
Feltalálók:
FINIELS Fran^oise, PARIS, FR
GIMENEZRIBOTTA Minerva, MONTPELLIER, FR MALLET Jacques, PARIS, FR
PRIVÁT Alain, SAINT-CLÉMENT-DE-RIVIÉRE, FR REVAH Frédéric, ANTONY, FR
A bejelentés napja: 1995.12.12.
Elsőbbsége: 1994.12.13., FR 94/15014
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/FR95/01650
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/18740 • · · · • · · · ·· ···· ·· · · ·· ·
A találmány a génterápia területét érinti. Részletesebben egy, az idegrendszeri betegségek medulláris motoneuronokba történő adenovírus vektor által közvetített génátvitellel való kezelésére szolgáló új eljárásra vonatkozik.
A génterápia és a módosított vírusok vektorként való alkalmazása a neurodegeneratív betegségek esetében egy új, különösen ígéretes terápiás megközelítés. A szakirodalomban erre a célra alkalmazott vírusok közül különösen az adenovírusokat [ Le Gál La Salle et al., Science 259, 988-990], a herpesz vírusokat, az adeno-asszociált vírusokat és a retrovírusokat említhetjük meg. A szakterületen megjelent tanulmányok rámutatnak, hogy ezek a vektorok különösen az adenovírusok, képesek igen nagy hatásfokkal fertőzni a központi idegrendszer sejtjeit. Ezek az eredmények lehetővé teszik tehát a központi idegrendszer betegségeinek kezelésére szolgáló olyan eljárások kidolgozását, melyek során egy terápiás gént tartalmazó rekombináns adenovírust közvetlenül a központi idegrendszerbe injektálnak (különösen sztereotaxissal).
Ami a gerincvelőt illeti, bizonyos neurodegeneratív betegségekben vagy sérülésekben a génterápia itt is lehetővé tehetné a motoneuronok degenerálódása elleni küzdelmet bizonyos, például növekedési faktorokat kódoló gének bevitelével. Ezeket az alkalmazásokat azonban még korlátozza, hogy nincsenek olyan egyszerű eljárások, melyek lehetővé tennék egy gén specifikus transzferét a gerincvelőbe. A találmány erre a problémára nyújt megoldást.
A találmány egy különösen hatásos eljárást ír le gének gerincvelőbe történő szelektív bejuttatására. A találmány annak a felismerésnek az eredménye, hogy egy gént specifikusan bevihe• · · · ·· ···· • · · · • · .· β·· ····· • · ···· · · · «··· tünk a motoneuronokba egy, az adott gént tartalmazó adenovírus vektornak az izomba történő beadásával. A bejelentés rámutat arra, hogy különösen előnyös módon, az adenovirusok a neuromuszkuláris szinapszisok (motoros plakkok) területén abszorbeálódnak, és a motoneuronok sejttestjéig (a gerincvelő ventrális szarva) jutnak el a motoneuronok axonjai mentén retrográd transzporttal. Az adenovírus vektorok találmány szerinti intramuszkuláris bevitele tehát a motoneuronok egy új, igen specifikus, retrográd transzporttal megvalósuló transzformációs eljárását képezi, amely lehetővé teszi, hogy a velőnek pontosan azt a területét célozzuk meg, amelyre hatni szeretnénk, a sérülés és/vagy degenerálódás helyének függvényében.
A találmány szerinti eljárás különösen előnyös, mivel lehetővé teszi, hogy a neuro-muszkuláris szinapszisok pontos térképét követve a velő különböző funkcionális területeinek motoneuronjait egyoldalúan, specifikusan transzformáljuk. Ez az eljárás sokkal kevésbé bizonyult traumatikusnak, mint egy sztereotaxikus injekció a velő parenchimába, amely mindenképpen diffúzabb, és nem korlátozódik a motoneuronokra.
A találmány egyik tárgya tehát genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportáiására szolgál.
Amint azt a korábbiakban jeleztük, a találmány szerinti eljárás igen előnyös, mivel lehetővé teszi, hogy a velő minden funkcionális területén pontosan a motoneuronokat célozzuk meg. így a • · · · kezelni kívánt módosítási hely szerint a bevitelt az adott helylyel idegi összeköttetésben levő izomba végezzük. A találmány szerint lehetőség van a különböző injekciók megfelelő megválasztásával különböző területeken elhelyezkedő nagy számú motoneuron specifikus és egyoldali fertőzésére. Egy előnyös megvalósítási módként a felső végtagok izmaiba (bicepsz, tricepsz) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét a nyaki motoneuronokba; a mellkas izmaiba (mellizmok) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét a mellkasi motoneuronokba; vagy az alsó végtagok izmaiba (lábszárizom) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét az ágyéki és keresztcsonti motoneuronokba. Természetesen más izmokat is alkalmazhatunk az ezen motoneuronokba történő bevitelhez, és más motoneuronokat is megcélozhatunk.
Ebből a célból a neuro-muszkuláris szinapszisok pontos térképeit használhatjuk ahhoz, hogy a megcélzott medulláris terület függvényében meghatározzuk a bevitelhez legmegfelelőbb izmot vagy izmokat. Az ilyen térképek a szakember számára hozzáférhetők [ lásd például Nicholopoulos et al., J. Comp. Neurol. 217, 78-85; Peyronnard et Charon, Exp. Brain Rés. 50, 125-132] . A fertőzéshez megfelelőnek mutatkozó medulláris terület alapján egy vagy több olyan izmot is választhatunk, melyről ismert, hogy a kérdéses területről idegződik be.
Az adenovírus intramuszkuláris bevitelét különböző módokon végezhetjük. Egy első megvalósítási mód szerint egy adott izom különböző pontjain történő injektálással végezzük oly módon, hogy a motoros plakkok igen nagy számát érintse. Ez a megvalósítási mód különösen akkor hatásos, ha az ideg csatlakozási pontja • · ···· ·· · az adott izomban nem azonosítható. Amennyiben az ideg csatlakozási pontja megismerhető, a bevitelt előnyösen az adott pont területén vagy ahhoz közeli helyen beadott egy vagy több injekcióval végezzük. Ezen megvalósítási mód szerint nagyobb az átvitel hatásfoka, mivel a bevitt vektorból nagyobb mennyiség abszorbeálódik a neuro-muszkuláris szinapszis területén.
A találmány egy első előnyös megvalósításában az intramuszkuláris bevitelt egy adott izom különböző pontjaiba történő injektálással végezzük.
A találmány egy másik előnyös megvalósításában az intramuszkuláris bevitelt az ideg csatlakozási pontjának területén vagy ahhoz közeli terület(ek)en történő injektálással végezzük.
A találmány tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a felső végtagok izmaiba (például bicepsz, tricepsz) történő bevitel útján a nukleinsav nyaki medulláris motoneuronokba való transzportálására szolgál.
A találmány másik tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a mellkas izmaiba (például mellizmok) történő bevitel útján a nukleinsav mellkasi medulláris motoneuronokba való transzportálására szolgál.
A találmány további tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely az alsó végtagok izmaiba (például lábszárizom) történő bevitel útján a nukleinsav ágyéki és/vagy keresztcsonti medulláris motoneuronokba való transzportálására • · · • · szolgál.
A találmány szerinti eljárást különböző eredetű adenovírusokat alkalmazva valósíthatjuk meg. Különböző szerotípusú adenovírusokat jellemeztek, melyeknek szerkezete és tulajdonságai kissé eltérnek. Ezen szerotípusok közül a találmány keretein belül előnyben részesítjük a 2 vagy 5 típusú humán adenovírusok (Ad 2 vagy Ad 5) vagy az állati eredetű adenovírusok (FR 93 05954 számú szabadalmi irat) használatát. A találmány keretein belül alkalmazható állati eredetű adenovírusok között megemlíthetjük a kutya, szarvasmarha, egér [például Mavl, Beard et al., Virology 75, 81 (1990)] , juh, sertés, madár vagy majom(például SAV) eredetű adenovírusokat. Az állati eredetű adenovírus előnyösen egy kutya adenovírus, még előnyösebben egy CAV2 adenovírus [ például a Manhattan vagy A26/61 (ATCC VR-800) törzs] .
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az alkalmazott adenovírus humán eredetű. Egy másik előnyös mód szerint az adenovírus egy állati eredetű adenovírus.
Az adenovírusok genomja mindkét végén tartalmaz egy inverz ismétlődő szekvenciát (ITR), ezen kívül egy kapszidképződésért felelős szekvenciát (Psi), korai és késői géneket. A főbb korai géneket az El, E2, E3 és E4 területek tartalmazzák. Ezek közül az El területen lévő gének (Ela és Elb) a virális replikációhoz szükségesek. Az E4 és L5 régióknak a vírus terjedésében van szerepük. A fő késői géneket az L1-L5 területek tartalmazzák. Az
Ad5 adenovírus teljes genomját szekvenálták, és adatbázisokban hozzáférhető (lásd nevezetesen Genebank M73260). Ezen felül különböző szerotípusú adenovírusok (Ad2, Ad7, Adl2, stb.) genom• · • · ···· · · • · ·· · jának részeit, egyes esetekben az egész genomot szintén szekvenálták. A találmány megvalósításához felhasznált adenovírus vektorok az ITR-eket, egy kapszidképződésért felelős szekvenciát és a kívánt nukleinsavat tartalmazzák.
A találmány egy előnyös megvalósítási módjában az alkalmazott adenovírus genomjából a teljes El régió vagy annak egy része hiányzik. Az El régió elengedhetetlen a vírus replikációjához, és inaktivációja replikáció-defektív vírusok kialakulásához vezet, azaz olyan vírusokhoz, melyek képtelenek autonóm módon replikálódni a fertőzött sejtben. Az El régiót vagy bármely más virális területet működésképtelenné lehet tenni bármely, a szakember számára ismert eljárással, nevezetesen teljes szupresszióval, szubsztitúcióval, részleges delécióval vagy egy vagy több bázisnak a megfelelő génhez vagy génekhez való hozzáadásával. Ilyen módosításokat in vitro (izolált DNS-en) vagy in situ végezhetünk, például a géntechnológia módszereivel vagy mutagén ágensekkel végzett kezeléssel. Előnyösen az alkalmazott adenovírus genomjából az El régiónak a 454-3328. maradékoknak (PvuII-BglII fragmentum) vagy a 382-3446. maradékoknak (HinfII-Sau3A fragmentum) megfelelő része hiányzik.
Egy különösen előnyös megvalósítási mód szerint az alkalmazott adenovírus genomjából a teljes E3 és/vagy E4 régió vagy azok egy része is hiányzik. A bejelentés bemutatja, hogy elő lehet állítani az ezeket a különböző típusú deléciókat hordozó vektorokat. Ezek a kiegészítő deléciók megnövelik a vektor biztonságát és kapacitását.
A kívánt nukleinsavat az adenovírus genomjának különböző helyeire lehet beépíteni. Előnyösen az El, E3 vagy E4 régiók területére építhetjük be. Mindamellett világos, hogy más helyeket is alkalmazhatunk a beépítéshez. Részletesen a genom nukleotid szekvenciájának ismerete lehetővé teszi a szakember számára, hogy a beépítéshez alkalmazható restrikciós helyeket azonosítson vagy hozzon létre.
A találmány szerinti detektív rekombináns adenovírusokat bármely szakember számára ismert módszerrel előállíthatjuk [ Levrero et al., Gene 100, 195 (1991); EP 185 573; Graham, EMBO J. 3, 2917 (1984)] . Például egy adenovírus és egy többek között a kívánt DNS szekvenciát hordozó plazmid közötti homológ rekombinációval állíthatók elő. A homológ rekombináció egy megfelelő sejtvonalnak az adenovírussal és a plazmiddal való kotranszformálása után jön létre. Az alkalmazott sejtvonal előnyösen (i) transzformálható az említett elemekkel, és (ii) hordozza a detektív adenovírus genomjának hiányzó részét komplementálni képes szekvenciákat, előnyösen integrált formában, a rekombináció veszélyének elkerülésére. Példaképpen megemlíthetjük a 293 humán embrionális vese sejtvonalat [Graham et al., J. Gén. Virol. 36, 59 (1977)], amely genomjába integrált módon tartalmazza az Ad5 adenovírus genomjának bal részét (12%).
Egy első eljárás abból áll, hogy az in vitro előállított rekombináns vírus DNS-sel (detektív) egy kompetens, azaz a detektív vírus komplementációjához minden szükséges funkciót transz helyzetben hordozó sejtvonalat transzformálunk. Ezek a funkciók előnyösen a sejt genomjába integrálódtak, ami lecsökkenti a rekombináció veszélyét, és a sejtvonalnak megnövekedett stabili···· ·· ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · ·
9· ·· · ·· ·· ·· ···· ·· · · ·· · tást biztosít. Azon adenovírusok esetében, melyekből csak az El régió hiányzik, az előnyös sejtvonal a 293 sejtvonal.
Egy második megközelítés abból áll, hogy egy megfelelő sejtvonalat kotranszformálunk az in vitro előállított defektív rekombináns vírus DNS-ével és egy vagy több helper vírus vagy plazmid DNS-ével. E szerint az eljárás szerint nem szükséges olyan kompetens sejtvonallal rendelkezni, amely a rekombináns adenovírus minden hiányzó funkcióját képes komplementálni. Ezen funkciók egy részét ugyanis a helper vírus vagy vírusok komplementálják. Ez vagy ezek a helper vírusok maguk is defektívek.
Adenovírusokból származó vektorok előállításának stratégiáit ismertetik a FR 93/05954 és a FR 93/08596 számú szabadalmi iratok is.
Ezután a megsokszorozódott adenovírusokat a molekuláris biológia klasszikus módszerei szerint nyerjük ki és tisztítjuk, amint azt a példák bemutatják.
A találmány szerinti alkalmazásukhoz az adenovírusokat előnyösen injektálható formulázáshoz gyógyászatilag elfogadható hordozókkal kapcsoljuk. Különösen steril, izotóniás sóoldatokról (mononátrium-, dinátrium-foszfát, nátrium-, kálium-, kalciumvagy magnézium-klorid, stb. vagy ilyen sók keverékei) vagy száraz, nevezetesen liofilizált vegyületekről lehet szó, melyekkel az adott esettől függően steril víz vagy fiziológiás szérum hozzáadásával injektálható oldatokat hozhatunk létre. A bevitelhez alkalmazott vírusok dózisát különböző paraméterek, nevezetesen a bevitel helye, az injektálások száma, a kifejezni kívánt gén vagy a vizsgált kezelés időtartama függvényében választhatjuk • * · · · · · • · · ··· · • · ···· ·· · · ·· · meg. A találmány szerinti rekombináns adenovírusokat általánosan 104 és 1014 pfu, előnyösen 1O6-1O10 pfu közötti dózisban formulázzuk és visszük be. A pfu (plaque forming unit) kifejezés egy vírusoldat fertőzőképességét fejezi ki, és egy megfelelő sejtkultúra fertőzésével, és általában 15 nap elteltével a fertőzött sejt-plakkok számának mérésével határozzuk meg. Egy vírusoldat pfu titerének meghatározásának technikáit az irodalom bőségesen ismerteti.
A találmány szerinti eljárás különösen előnyös a medulláris sérüléseknek vagy a motoneuronok degenerálódásos betegségeinek kezelésére. A medulláris sérülések részletesebben a motoneuronok szintjén meglévő átmetszéseknek felelnek meg, amelyek megfosztják azokat a felsőbb központ felől jövő beidegződésüktől, és degenerálódásukhoz vezetnek. Egy növekedési faktorokat kódoló génnek a találmány szerinti retrográd transzporttal való bevitele a sérült terület alatti motoneuronokba megadja a lehetőségét annak, hogy visszaszorítsuk vagy akár meg is akadályozzuk ezt a degenerálódást. A motoneuronok neuropátiáiról beszélve például az amiotrófiás lateroszklerózist, az I. (Werdnig Hoffman betegség), II. vagy III. (Kugelberg-Welander betegség) típusú spinális izomsorvadást, a bulbáris spinális izomsorvadást (mint például a Kennedy betegség) említhetjük meg. A növekedési faktorokat vagy más, neurotrofikus hatásukról ismert molekulákat kódoló gének találmány szerinti átvitele a degenerálódó motoneuronokba új lehetőséget kínál az ilyen típusú betegségek kezelésében. A találmány szerinti eljárás hatásosságát különösen állatkísérletekkel tehetjük nyilvánvalóvá: a gerincvelő teljes vagy részle• · ··« ii .............
ges átmetszése, Wobbler egerek (amiotrófiás lateroszklerózis vizsgálatának modellállata [ Leestma J. E., Am. J. Pathol. 100,
821-824] ); mnd egerek (motoneuron degeneration: amiotrófiás lateroszklerózis vizsgálatának modellállata [ Messer et al., Genomics 18, 797-802 (1992)] ) vagy pmn egerek (Progressive motoneurone neuropathy: a fejlődés alatti motoneuronális degenerálódás vizsgálatának modellállata), a példákban bemutatott módon. A humán beépülést, toleranciát és az emberre való ártalmatlanságot in vitro humán embrionális medulláris neuronsejt tenyészeten tesztelhetjük.
A találmány szerinti adenovírus vektorokba beépült nukleinsav előnyösen neuroaktív anyagot kódol, azaz olyan anyagot, amely az idegsejtekre jótékony hatást tud kifejteni. Egy endogén anyag hiányának kompenzálására vagy túlsúlyának csökkentésére képes anyagról lehet szó, vagy egy olyan anyagról, mely a sejteket új tulajdonságokkal látja le. Részletesebben egy növekedési faktorról, egy neurotrofikus faktorról, egy citokinről, egy neurotranszmitterről vagy egy enzimről vagy egy hormon vagy neurotranszmitter receptoráról lehet szó.
A növekedési faktorok közül előnyösen a telep (colony) stimuláló faktorokat (G-CSF, GM-CSF, M-CSF, CSF, stb.), a fibroblaszt növekedési faktorokat (FGFa, FGFb) vagy a vaszkuláris sejtnövekedési faktorokat (VEGF) említhetjük meg. A neurotrofikus faktorok között az előnyben részesített faktorok a ciliáris neurotrofikus faktor (CNTF), a gliasejt érési faktorok (GMFa, b) , a GDNF, a BDNF, az NT3, az NT5, stb. Az előnyös citokinek az interleukinek és az interferonok, és az enzimek közül előnyösen • · · · « · · · » · « · • · « · · · · • · · ··· · • ·· · · · · ·· • · ···· · · · ··«· a neurotranszmitterek bioszintézisének enzimeit (tirozin hidroxiláz, acetilkolin transzferáz, glutaminsav dekarboxiláz), a lizoszómális enzimeket (hexóz-aminidázok, aril-szulfatáz, glukocerebrozidáz, HGPRT), a szabad gyökök detoxifikálásában résztvevő enzimeket (szuperoxid diszmutáz I, II vagy III, kataláz, glutation peroxidáz) alkalmazzuk. A receptorok közül többek között az androgének receptorait alkalmazhatjuk (a Kennedy betegségben van szerepük).
E különböző faktorokat natív formában vagy egy ugyanolyan típusú aktivitással rendelkező variáns vagy fragmentum formájában alkalmazhatjuk.
Antiszensz szekvenciák átvitele is lehetséges.
A nukleinsav lehet természetes vagy mesterséges eredetű.
Genomiális DNS-ről (gDNS), komplementer DNS-ről (cDNS), hibrid szekvenciákról vagy szintetikus vagy félig szintetikus szekvenciákról lehet szó. Ezek lehetnek humán, állati, növényi, bakteriális, virális, stb. eredetűek. Ezeket a szekvenciákat bármely, a szakember számára ismert eljárással megkaphatjuk, például bankok szűrésével, kémiai szintézissel vagy olyan kevert eljárásokkal, melyek a bankok szűrésével kapott szekvenciák kémiai vagy enzimatikus módosításait foglalják magukban. Előnyösen cDNS-ről vagy gDNS-ről van szó.
A nukleinsav általában tartalmaz egy a motoneuronokban működőképes transzkripciós promoter régiót is, valamint egy transzkripciós terminációs szignált meghatározó, a kérdéses géntől 3' irányban elhelyezkedő régiót és egy poliadenilációs helyet. Ezen elemek összessége képezi az expressziós kazettát.
• Μ· 4· • · *·«· w » ·* ♦ · · · • · · ··« · • ·· ·'·« · · • · ··«· ·· t ·« * ·
Ami a promoterrégiót illeti, amennyiben az működőképes a fertőzött sejtben, az adott gén expressziójáért természetes körülmények között felelős promoterről lehet szó. Eltérő eredetű területekről is lehet szó (melyek más proteinek expressziójáért felelősek, vagy szintetikusak). Részletesebben eukariota vagy virális gének promoter szekvenciáiról lehet szó. Például szó lehet a fertőzni kívánt sejt genomjából származó promoter szekvenciákról. Ezen felül szó lehet egy vírus genomjából származó promoter szekvenciákról is, beleértve az alkalmazott adenovírust is. Ebben a tekintetben például az E1A, MLP, CMV, RSV, stb. gének promotereit említhetjük meg. Másrészt ezeket a promoter régiókat aktivációs vagy regulációs, vagy szövetspecifikus vagy nagymértékű expressziét lehetővé tevő (GFAP, enoláz, stb.
promoterek) szekvenciák hozzáadásával módosíthatjuk is. Másrészt ha a heterológ nukleinsav nem tartalmaz promoter szekvenciákat, akkor a vírus genomjában egy ilyen szekvencia alá építhetjük be.
A találmány tárgya egy nukleinsavaknak a motoneuronokba való átvitelére szolgáló eljárás is, amely eljárás egy olyan adenovírus vektor muszkuláris beadását foglalja magában, amely a nukleinsavat genomjában beépítve tartalmazza. A találmány szerinti eljárást előnyösen egyetlen izom több pontján végzett injektálás (ok) kai valósítjuk meg, vagy amennyiben az ideg inszerciós pontja meghatározható, az inszerciós pontba vagy annak közelébe végzett egy vagy több injektálással.
A találmányt részletesebben a következő példák segítségével szemléltetjük, amelyek azonban nem korlátozzák a találmány oltalmi körét, csupán illusztrációként szolgálnak.
* » · · • · ··
Az ábrák magyarázata:
1. ábra:
Patkány gerincvelő ágyéki területének hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzéssel, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
- számos motoneuronos sejttest diffúz jelölődése (Δ),
- néhány motoneuron intenzívebb jelölődése a sejttestek és a axonok szintjén, mely a motoneuronok tipikus morfológiáját mutatja be (A) .
2. ábra (1-gyel azonos, nagyobb nagyítás):
Patkány gerincvelő ágyéki területének hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzéssel, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
3. ábra:
Patkány gerincvelő ágyéki területéhek hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzés - kalcitonin génnel kapcsolt peptid (Calcitonin Gene Related Peptid, CGRP) immunocitokémiai jelzés együttesen, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
Példák
1. A β-galaktozidáz-adenovírus injektálása egészséges vagy a gerincvelő mellkasi részén féloldali metszésnek alávetett patkányok lábszárizmába.
A példa a β-gal gén átvitelét írja le az ágyéki motoneuronokba, a gént tartalmazó adenovírus lábszárizomba történő bevitelével .
>.*· ** • « - ·* * » ··» « ο ·· » · · · * · ·» «.··· ·· * ♦*» ·
Részletesebben a vizsgálatot olyan modell patkányon végeztük, melynek gerincvelejét az alsó mellkasi területen teljesen vagy részlegesen átmetszettük, ami az állatot mindkét vagy egyik alsó végtagján megbénította. Egy ilyen metszés megfosztja a motoneuronokat a felsőbb központokból jövő beidegződésüktől, és degenerálódásukat vonja maga után. A bevitelt a sérülés területén lévő motoneuronok retrográd transzporttal történő fertőzésével valósítottuk meg.
Az ebben a példában alkalmazott adenovírus vektor az Ad.RSV.pgal vektor. Ez a vektor nem tartalmazza a replikációjához szükséges szekvenciákat, de az általa fertőzhető sejtekbe való bejutáshoz szükséges szekvenciákat, valamint az adenovírus részecske képződéséhez elengedhetetlenül szükséges szekvenciákat tartalmazza. Hordozza még az E. coli β-galaktozidáz génjét az RSV promoter szabályozása alatt. A detektív rekombináns Ad.RSV^gal adenovírus előállítását az irodalom ismerteti [Stratford-Perricaudet et al., J.
Clin. Invest. 90, 626 (1992)] . Röviden, az Ad.RSV^gal egy olyan detektív (El és E3 régiója deletált) rekombináns adenovírus, melyet a mutáns Ad-dl324 adenovírus [ Thimmappaya et al., Cell 31, 543 (1982)] és a pAD.RSVbGal plazmid [Akii et al. (1993)] közötti homológ rekombinációval kapunk meg.
A pAD.RSVbGal plazmid 5' ->3' irányban a következőket tartalmazza:
- az Ad5 adenovírus bal szélének megfelelő PvuII fragmentumot, amely az ITR szekvenciát, a replikációs origót, a részecskeképződés szignáljait és az E1A amplifikátort tartalmazza;
- a β-galaktozidázt kódoló gént az RSV promoter (Raus szarko16 ·· ···· · · • · · · .· · · · · • · · · · · · ma vírusból) kontrollja alatt;
- az Ad5 adenovírus genomjának egy második fragmentumát, amely a dl324 adenovírus és a pAD.RSVbGal plazmid közötti homológ rekombinációt teszi lehetővé.
Clal enzimmel végzett linearizálás után a pAD.RSVbGal plazmidot és a dl324 adenovírust kalcium-foszfát jelenlétében 293 sejtvonalba kotranszfektáljuk, ami lehetővé teszi a homológ rekombinációt. Az így kialakított rekombináns adenovírusokat plakk-tisztítással szelektáljuk. Izolálás után a rekombináns adenovírus DNS-ét 293 sejtvonalban amplifikáljuk, ami olyan sejttenyészet felülúszóhoz vezet, amely nem tisztított detektív rekombináns adenovírusokat tartalmaz körülbelül 1O10 pfu/ml titerrel. A vírus részecskéket azután cézium-klorid gradiens centrifugálással tisztítjuk az ismert eljárás szerint [ lásd Graham et al., Virology 52., 456 (1973)] . Az adenovírust azután tisztított formában alkalmazzuk egy foszfát sóoldatban (PBS).
Közvetlenül azután, hogy az állatot a gerincvelő féloldali átmetszésének (alsó mellkasi terület, melynek hatására az állat egyik alsó végtagja lebénul) vetettük alá (vagy nem vetettük alá) , háromszor injektáltunk Ad-RSV-b-Gal adenovírust (107 pfu injekciónként) a lábszárizomba. Injekciós pontonként 9 μΐ adenovírust injektáltunk Hamilton fecskendővel.
Az állatokat az injektálás után négy nappal öltük le (4% paraformaldehid perfúziójával), amely idő minimálisan szükséges ahhoz, hogy a retrográd transzport az izomtól a gerincvelőig megvalósuljon. Hosszában három gerincvelő blokkot vágtunk ki a nyaki, a mellkasi és az ágyéki területeken, 50 mM vastagságú • · · · • · · · · · • · • .· · ♦ · · · *·· ...........
metszetekként. A metszeteket a β-galaktozidáz kimutatására kezeltük, ami lehetővé tette a vírus által fertőzött sejtek kimutatását. Bizonyos metszeteket ezen felül anti-kalcitonin génnel kapcsolt peptid (CGRP) immuncitokémiai vizsgálatnak vetettünk alá, ami a motoneuronok specifikus jelölését tette lehetővé.
A β-galaktozidázt szubsztrátjával, az X-Gal-lal mutattuk ki;
a reakciótermék kék elszíneződést mutat.
A kalcitonin génnel kapcsolt peptid, a CGRP egy neurotranszmitter, a motoneuronok specifikus markere. Ezt egy peroxidázhoz kötött második antitesttel végzett immunkémiai vizsgálattal mutattuk ki, enzimszubsztrátként diamino-benzidint alkalmazva; a reakciótermék gesztenyebarna elszíneződést mutat.
A β-galaktozidáz vizsgálata kimutatta, hogy kizárólag az ágyéki területen vannak fertőzött motoneuronok, a sérülés alatt, az injekciónak megfelelő oldalon, a féloldali metszésnek alávetett patkányok esetében.
Két típusú jelölődést kaptunk. Nagy számú motoneuron esetében a sejttest jelölődött diffúz módon, a motoneuronok egy kisebb részénél a sejttest és a axonok intenzívebben jelölődtek (1. és
2. ábrák). Ez a jelölődés intenzitásában mutatkozó eltérés valószínűleg annak a ténynek tulajdonítható, hogy csak néhány, az injektálás helyéhez igen közeli motoneuron tudta intenzíven abszorbeálni a vírust.
A β-galaktozidáz kimutatással kapcsolt anti-CGRP immuncitokémiai vizsgálat azt mutatta ki kettős jelöléssel, hogy a CGRP-pozitív (azaz motoneuron) sejttestek majdnem mindegyike fertőzött a vírussal (3. ábra).
···· «· · · · · ·· · · • · · · · · · • · « · · · ·

Claims (13)

1. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a felső végtagok izmaiba (például bicepsz, tricepsz) történő bevitel útján a nukleinsav nyaki medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
2. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a mellkas izmaiba (például· mellizmok) történő bevitel útján a nukleinsav mellkasi medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
3. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely az alsó végtagok izmaiba (például lábszárizom) történő bevitel útján a nukleinsav ágyéki és/vagy keresztcsonti medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
4. Az El régióban vagy annak egy részében és az E3 és/vagy E4 régiókban vagy azok egy részében hiányos genommal rendelkező, egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál.
5. Genomjában az NT3-at kódoló nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal • · · · · · • · · · · jellemezve, hogy az adenovírus humán eredetű adenovírus.
7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírus állati eredetű adenovírus.
8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav az adenovírus genomjában az El, E3 vagy E4 régió területén van beépítve.
9. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav az idegsejtekre jótékony hatás kifejtésére képes anyagot kódol.
10. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav növekedési faktort, neurotrofikus faktort, citokint, neurotranszmittert vagy enzimet vagy receptort kódol.
11. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav többek között az anyagnak a motoneuronokban történő kifejeződését lehetővé tevő szignálokat tartalmaz.
12. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az intramuszkuláris bevitelt egy adott izom több pontjába történő injektálással valósítjuk meg.
13. Genomjában egy neurotrofikus faktort kódoló nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálásával az amiotrófiás lateroszklerózis kezelésére szolgál.
A meghatalmazott:
·· ·«·· » · • · · · • Λ · « ρ+ίΰΐί,η ANyaijd
ΙΊ31313ΖΖ0>ί
1/3
63?&71/ΒΕ
1. ábra
PTO Η19 KÖZZÉTÉTELI
PÉLDÁNY
2/3
- 63*871/BE
2. ábra
HU9701819A 1994-12-13 1995-12-12 Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba HUT77258A (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9415014A FR2727867B1 (fr) 1994-12-13 1994-12-13 Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HUT77258A true HUT77258A (hu) 1998-03-02

Family

ID=9469770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9701819A HUT77258A (hu) 1994-12-13 1995-12-12 Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6632427B1 (hu)
EP (1) EP0797677A1 (hu)
JP (1) JPH10510428A (hu)
AU (1) AU712775B2 (hu)
BR (1) BR9510090A (hu)
CA (1) CA2208224A1 (hu)
CZ (1) CZ180697A3 (hu)
FI (1) FI972491A0 (hu)
FR (1) FR2727867B1 (hu)
HU (1) HUT77258A (hu)
NO (1) NO972712L (hu)
SK (1) SK74597A3 (hu)
WO (1) WO1996018740A1 (hu)

Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6465253B1 (en) 1994-09-08 2002-10-15 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
US6127525A (en) * 1995-02-21 2000-10-03 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same
US5770442A (en) * 1995-02-21 1998-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same
ATE278794T1 (de) 1995-06-15 2004-10-15 Crucell Holland Bv Verpackungssysteme für humane, menschliche adenoviren, zur verwendung in die gentherapie
WO1998031395A1 (en) * 1997-01-17 1998-07-23 Rhone-Poulenc Rorer S.A. Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons
FR2761258B1 (fr) * 1997-03-26 1999-06-11 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de stimulation de la regeneration nerveuse
US20030017138A1 (en) 1998-07-08 2003-01-23 Menzo Havenga Chimeric adenoviruses
US6929946B1 (en) 1998-11-20 2005-08-16 Crucell Holland B.V. Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells
US20050232900A1 (en) * 1999-05-18 2005-10-20 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6492169B1 (en) 1999-05-18 2002-12-10 Crucell Holland, B.V. Complementing cell lines
WO2001036603A2 (en) * 1999-11-17 2001-05-25 Avigen, Inc. Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders
US7235233B2 (en) 2000-09-26 2007-06-26 Crucell Holland B.V. Serotype 5 adenoviral vectors with chimeric fibers for gene delivery in skeletal muscle cells or myoblasts
US6998118B2 (en) * 2001-12-21 2006-02-14 The Salk Institute For Biological Studies Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection
JP2005514403A (ja) * 2001-12-21 2005-05-19 ザ ソーク インスティテュート フォー バイオロジカル スタディーズ 運動ニューロンに対する標的化逆行性遺伝子送達
ATE447037T1 (de) * 2002-04-25 2009-11-15 Crucell Holland Bv Mittel und verfahren zur herstellung von adenovirusvektoren
DK2019683T4 (da) 2006-04-25 2022-08-29 Univ California Indgivelse af vækstfaktorer til behandling af CNS-lidelser
US9074210B2 (en) 2009-02-12 2015-07-07 Curna, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (BDNF) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to BDNF
JP6066035B2 (ja) 2009-02-12 2017-01-25 クルナ・インコーポレーテッド グリア細胞由来神経栄養因子（ｇｄｎｆ）関連疾病の、ｇｄｎｆに対する天然アンチセンス転写物の抑制による治療
EP2963116B1 (en) 2009-03-04 2020-11-11 CuRNA, Inc. Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirt 1
US9464287B2 (en) 2009-03-16 2016-10-11 Curna, Inc. Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (NRF2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NRF2
MX2011009752A (es) 2009-03-17 2011-09-29 Opko Curna Llc Tratamiento de enfermedades relacionadas a homologo tipo delta 1(dlk1) por inhibicion de transcrito antisentido natural a homologo tipo delta (dlk1).
JP5883782B2 (ja) 2009-05-06 2016-03-15 クルナ・インコーポレーテッド 脂質輸送代謝遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の抑制による脂質輸送代謝遺伝子関連疾患の治療
WO2010129746A2 (en) 2009-05-06 2010-11-11 Curna, Inc. Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
CA2762369C (en) 2009-05-18 2021-12-28 Joseph Collard Treatment of reprogramming factor related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a reprogramming factor
EP2432882B1 (en) 2009-05-22 2019-12-25 CuRNA, Inc. TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3
CN103221541B (zh) 2009-05-28 2017-03-01 库尔纳公司 通过抑制抗病毒基因的天然反义转录物来治疗抗病毒基因相关疾病
ES2629339T3 (es) 2009-06-16 2017-08-08 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la paraoxonasa 1 (pon1) por inhibición de transcrito antisentido natural a pon1
CA2765700C (en) 2009-06-16 2021-01-05 Opko Curna, Llc Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene
US8859515B2 (en) 2009-06-24 2014-10-14 Curna, Inc. Treatment of tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to TNFR2
CN102482672B (zh) 2009-06-26 2016-11-09 库尔纳公司 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病
US9234199B2 (en) 2009-08-05 2016-01-12 Curna, Inc. Treatment of insulin gene (INS) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (INS)
CA2771172C (en) 2009-08-25 2021-11-30 Opko Curna, Llc Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap
JP6025567B2 (ja) 2009-12-16 2016-11-16 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド 膜結合転写因子ペプチダーゼ、部位１（ｍｂｔｐｓ１）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるｍｂｔｐｓ１関連性疾患の治療
US8940708B2 (en) 2009-12-23 2015-01-27 Curna, Inc. Treatment of hepatocyte growth factor (HGF) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to HGF
WO2011079263A2 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Curna, Inc. Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
RU2615450C2 (ru) 2009-12-29 2017-04-04 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с ядерным респираторным фактором 1(nrf1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к nrf1
RU2611186C2 (ru) 2009-12-29 2017-02-21 Курна, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С ОПУХОЛЕВЫМ БЕЛКОМ 63 (р63), ПУТЕМ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРИРОДНОГО АНТИСМЫСЛОВОГО ТРАНСКРИПТА К р63
US8946181B2 (en) 2010-01-04 2015-02-03 Curna, Inc. Treatment of interferon regulatory factor 8 (IRF8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IRF8
WO2011085066A2 (en) 2010-01-06 2011-07-14 Curna, Inc. Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene
CA2786535C (en) 2010-01-11 2019-03-26 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (shbg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to shbg
RU2611192C2 (ru) 2010-01-25 2017-02-21 Курна, Инк. ЛЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ, СВЯЗАННЫХ С РНКазой Н1, ПУТЕМ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРИРОДНОГО АНТИСМЫСЛОВОГО ТРАНСКРИПТА К РНКазе Н1
EP2539452B1 (en) 2010-02-22 2016-07-27 CuRNA, Inc. Treatment of pyrroline-5-carboxylate reductase 1 (pycr1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pycr1
EP2556160A4 (en) 2010-04-09 2013-08-21 Curna Inc TREATMENT OF ILLNESSES ASSOCIATED WITH FIBROBLASTIC GROWTH FACTOR 21 (FGF21) BY INHIBITION OF THE NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT AGAINST FGF21
RU2018110642A (ru) 2010-05-03 2019-02-27 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с сиртуином (sirt), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к сиртуину (sirt)
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
EP3299464B1 (en) 2010-05-26 2019-10-02 CuRNA, Inc. Treatment of atonal homolog 1 (atoh1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to atoh1
NO2593547T3 (hu) 2010-07-14 2018-04-14
CA2813901C (en) 2010-10-06 2019-11-12 Curna, Inc. Treatment of sialidase 4 (neu4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to neu4
US9222088B2 (en) 2010-10-22 2015-12-29 Curna, Inc. Treatment of alpha-L-iduronidase (IDUA) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to IDUA
DK2633052T3 (en) 2010-10-27 2018-07-16 Curna Inc TREATMENT OF INTERFERON-RELATED DEVELOPMENT REGULATOR 1 (IFRD1) -RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPT TO IFRD1
CN103459599B (zh) 2010-11-23 2017-06-16 库尔纳公司 通过抑制nanog的天然反义转录物而治疗nanog相关疾病
RU2620980C2 (ru) 2011-06-09 2017-05-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с фратаксином (fxn), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта fxn
JP2015511494A (ja) 2012-03-15 2015-04-20 キュアナ，インク． 脳由来神経栄養因子（ｂｄｎｆ）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるｂｄｎｆ関連の疾患の処置
WO2015171918A2 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Compositions and uses for treatment thereof
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
AU2015327836B2 (en) 2014-10-03 2021-07-01 Cold Spring Harbor Laboratory Targeted augmentation of nuclear gene output
JP6923517B2 (ja) 2015-10-09 2021-08-18 ユニバーシティ・オブ・サザンプトン 遺伝子発現の調節及び脱制御されたタンパク質発現のスクリーニング
WO2017106382A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of central nervous system diseases
WO2017106283A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of liver diseases
JP7049248B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-06 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー 常染色体優性精神遅滞－５とドラベ症候群の処置のためのアンチセンスオリゴマー
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
WO2017106364A2 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of retinitis pigmentosa 18 and retinitis pigmentosa 13
JP2018538288A (ja) 2015-12-14 2018-12-27 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー アラジール症候群の処置のためのアンチセンスオリゴマー
SG11202001590RA (en) 2017-08-25 2020-03-30 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
US11845797B2 (en) 2018-07-03 2023-12-19 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
AU2021270720A1 (en) 2020-05-11 2022-12-08 Stoke Therapeutics, Inc. OPA1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
EP4320147A2 (en) 2021-04-08 2024-02-14 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof
JP2024516168A (ja) 2021-04-22 2024-04-12 デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド がんを治療するための組成物および方法
WO2023178311A1 (en) * 2022-03-18 2023-09-21 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods for treating disorders under hypothermia and compositions relating to the same

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
EP0607247A1 (en) * 1991-10-01 1994-07-27 Genentech, Inc. Production of gpa neurotrophic factor
DK0586076T3 (da) * 1992-08-07 2003-10-20 Wyeth Corp Rekombinant adenovirus-vacciner
NZ256018A (en) * 1992-09-25 1997-07-27 Rhone Poulenc Rorer Sa Recombinant adenoviral vectors and their use in directing expression and transcription of selected nucleotide sequences in cells of the central nervous system
ATE304604T1 (de) * 1993-06-24 2005-09-15 Frank L Graham Adenovirus vektoren für gentherapie
DE69435108D1 (de) * 1993-07-13 2008-08-14 Centelion Defekte adenovirus-vektoren und deren verwendung in der gentherapie

Also Published As

Publication number Publication date
FI972491A (fi) 1997-06-12
FI972491A0 (fi) 1997-06-12
FR2727867B1 (fr) 1997-01-31
MX9704102A (es) 1997-09-30
NO972712D0 (no) 1997-06-12
AU4350296A (en) 1996-07-03
US6632427B1 (en) 2003-10-14
NO972712L (no) 1997-06-12
BR9510090A (pt) 1998-07-14
SK74597A3 (en) 1997-12-10
EP0797677A1 (fr) 1997-10-01
CZ180697A3 (en) 1997-09-17
AU712775B2 (en) 1999-11-18
CA2208224A1 (fr) 1996-06-20
JPH10510428A (ja) 1998-10-13
FR2727867A1 (fr) 1996-06-14
WO1996018740A1 (fr) 1996-06-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUT77258A (hu) Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba
Short et al. Gene delivery to glioma cells in rat brain by grafting of a retrovirus packaging cell line
JP2012139220A (ja) 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター
Joung et al. Effective gene transfer into regenerating sciatic nerves by adenoviral vectors: potentials for gene therapy of peripheral nerve injury
AU2002364221B2 (en) Targeted retrograde gene delivery to motor neurons
KR20020013473A (ko) 아데노바이러스-매개 유전자 치료법
US20110178282A1 (en) Methods and compositions for cancer therapy using a novel adenovirus
US7018628B1 (en) Vectors derived from baculovirus and use for transferring nucleic acids into nerve cells of vertebrates
JP2001524934A (ja) 遺伝子治療ウイルスベクターの投与に対して哺乳類罹患動物を寛容化する方法
JPH11513390A (ja) 細胞殺傷のウイルス増強のための方法および組成物
US20020144302A1 (en) Novel constructs and vectors for the targeted and inducible expression of genes
US6552003B2 (en) Muscle reinnervation and motor axon sprouting by administering DNA sequences encoding NT-3 and CNTF
AU740641B2 (en) Method for treating amyotrophic lateral sclerosis
WO1995027494A1 (en) DEFECTIVE HERPES AND DEFECTIVE ADENO-ASSOCIATED VIRUS VECTORS WITH p53 FOR THE TREATMENT OF CANCER
JP2002503709A (ja) 遺伝子治療における治療用遺伝子のストレスプロモーターによる調節：その組成物及び方法
JP2003527816A (ja) バキュロウイルス由来のベクター及び脊椎動物の神経細胞に核酸を導入するための該ベクターの使用
JP2001519702A (ja) 神経再生刺激方法
JP2002529099A (ja) トランスジーンの新規な発現調節系
MXPA97004102A (en) Transfer of genes in the medular motoneurons by means of adenovira vectors
WO1999036559A1 (en) Viral vectors expressing self-polymerizing neuronal intermediate filaments and their use
Seddighi et al. Recent Progresses in Brain Gene Therapy
KR20000070272A (ko) 수질 운동 뉴런 중으로의 아데노바이러스 벡터 매개-유전자전달방법
AU2928202A (en) Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons
MXPA99000533A (en) Device for mixing an audio sequence with a video sequence
MXPA99008649A (en) Process for stimulating neural regeneration