CZ180697A3 - Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors - Google Patents

Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors Download PDF

Info

Publication number
CZ180697A3
CZ180697A3 CZ971806A CZ180697A CZ180697A3 CZ 180697 A3 CZ180697 A3 CZ 180697A3 CZ 971806 A CZ971806 A CZ 971806A CZ 180697 A CZ180697 A CZ 180697A CZ 180697 A3 CZ180697 A3 CZ 180697A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
nucleic acid
motoneurons
adenovirus
genome
interest
Prior art date
Application number
CZ971806A
Other languages
English (en)
Inventor
Francoise Finiels
Minerva Gimenez-Ribotta
Jacques Mallet
Alain Privat
Frederic Revah
Original Assignee
Rhone Poulenc Rorer Sa
Inst Nat Sante Rech Med
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rhone Poulenc Rorer Sa, Inst Nat Sante Rech Med filed Critical Rhone Poulenc Rorer Sa
Publication of CZ180697A3 publication Critical patent/CZ180697A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Přenos genů do medulárních motoneuroriu prostřednictvím adenovirových vektorů
Oblast techniky
Vynález se týká oblasti genové terapie. Obzvláště se vynález týká nového způsobu léčení patologií nervového systému přenosem genů do medulárních motoneuronů za použití adenovirových vektorů.
Dosavadní stav techniky
Genová terapie a použití modifikovaných virů jako vektorů pro neurodegenerativní choroby představují nové terapeutické,obzvláště slibné přístupy k léčení neurodegenerativních chorob. Z virů, které byly za tímto účelem až dosud použity, lze zejména uvést adenoviry (Le Gal La Salle a kol., Science 259, 988-990), vir herpes, adeno-přidružené viry a retroviry. Studie popsané v rámci dosavadního stavu techniky ukazují, že tyto vektory, a zejména adenoviry, jsou schopné infikovat s velmi vysokou účinností buňky centrální nervové soustavy. Tyto výsledky takto umožňují realizovat způsoby léčení patologií centrální nervové soustavy přímou injekcí v úrovni centrální nervové soustavy (zejména stereotaxií) rekombinantních adenovirů obsahujích terapeutický gen.
Pokud jde o míchu, umožňovala by genová terapie v rámci některých neurodegenerativních chorob a úrazových stavů rovněž bojovat proti degeneraci motorických neuronů (motoneuronů) zavedením některých genů kódujících například růstové faktory. Nicméně tyto aplikace jsou až dosud omezeny neexistencí jednoduché metody, umožňující specifický přenos genu v úrovní míchy. Vynález umožňuje řešit tento problém
Podstata vynálezu
Vynález ve skutečnosti popisuje obzváště účinný způsob selektivního přenosu genů do míchy. Vynález je zejména odvozen od experimentálního důkazu o tom, že je možné specificky přenést gen v úrovni motoneuronů podáním v úrovni svalu adenovirového vektoru,, ve kterém je inkorporován uvedený gen.
Ve skutečnosti přihlašovatel nyní prokázal, že adenoviry jsou obzvláště výhodným způsobem absorbovány v úrovni neuromuskulárních spojů (motorické destičky) a vedeny až do buněčných tělísek motoneuronů (ventrální rohovina míchy) retrográdním transportem podél motoneuronálních axonů. Intramuskulární podání adenovirových vektorů podle vynálezu takto tvoří nový, velmi specifický způsob infekce motoneuronů retrográdním transportem, umožňující velmi přesně zacílit medulární oblast ve které má být proveden zákrok a ve které byl lokalizován úrazový stav nebo/a ve které byla lokalizována degenerace.
Způsob podle vynálezu je obzvláště výhodný vzhledem k tomu, že umožňuje při přesném sledování kartografie neuromuskulárních spojů infikovat specifickým a unilaterálním způsobem motoneurony různých funkčních medulárních oblastí. Aplikace podle vynálezu se ukazuje být mnohem méně traumatizu jící než stereotaxická injekce do medulárního parenchymu, kte rá by v každém případě byla difuznější a nerestriktivní k neu ronům motorického typu.
První předmět vynálezu takto spočívá v použití rekombinantního adenoviru obsahujícím ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
Jak již bylo uvedeno výše, je způsob podle vynálezu obzvláště výhodný vzhledem k tomu, že umožňuje přesně zacílit motoneurony každé funkční medulární oblasti. Takto podle místa poruchy, která má být léčena, se aplikace provádí do svalu nesoucího nervovou vazbu s uvedeným místem poruchy. V rámci vynálezu je nyní možné rozumnou volbou různých injekcí specificky a unilaterálně infikovat velký počet medulárních motoneuronů rozdělených v různých úrovních. V rámci výhodného provedení způsobu podle vynálezu umožňuje podání do svalů horních končetin (bicepcy, tricepsy) přenos genu do motoneuronů v cervikální úrovni. Podání do svalů hrudníku (pektorální svaly) umožňuje přenos genu do motoneuronů v hrudní oblasti, zatímco podání do svalů dolních končetin (svaly tvoří cí součást svalů lýtka) umožňuje přenos genu do motoneuronů v bederní a křížové oblasti. Je samozřejmé, že i ostatní svaly mohou být použity pro podání v úrovni uvedených motoneuronů, přičemž mohou být zacíleny i ostatní motoneurony.
Za tímto účelem je možné použít přesnou kartografii neuromuskulárních spojů pro stanovení v závislosti na cílené medulární oblasti, který ze svalů nebo které ze svalů jsou nejvhodnější pro podání v každém jednotlivém případě. Takové kartografie jsou odborníkovi v daném oboru k dispozici (viz zejména Nicholopoulos a kol., J.Comp.Neurol.217, 78-85, Peyronnard et Charon, Exp. Brain. Res. 50, 125-132). V závislosti na medulární oblasti, která se ukáže být vhodná pro infikování mohou být takto vybrány jeden nebo několik svalů, o kterých je známo, že mohou být enervovány uvažovanou medulární oblastí.
Intramuskulární podání adenovirů může být provedeno různými způsoby. V rámci prvního způsobu provedení se toto podání praktikuje injekcí do několika bodů jednoho a téhož svalu tak, aby se dosáhlo zainteresování velkého počtu motorických destiček. Tento způsob provedení podání je obzvláště účinný v případech kdy nelze identifikovat bod vnoření nervu do uvažovaného svalu. V případě, že takové místo vnoření nervu do svalu lze spolehlivě identifikovat, potom se podání výhodně provádí jednou nebo několika injekcemi v úrovni uvedeného bodu nebo v blízkosti uvedeného bodu. Při tomto způsobu realizace podání je účinnost přenosu nejvyšší, nebot v úrovni neuromuskulárního spoje se absorbuje velké množství podaného vektoru.
Při první výhodné formě provedení vynálezu se tedy intramuskulární podání provádí injekcemi do několiks bodů jednoho a téhož svalu.
V rámci jiné výhodné formy provedení vynálezu :se intramuskulární podání provádí injekcí nebo injekcemi v úrovni bodu vnoření nervu do svalu nebo v blízkosti uvedeného bodu vnoření nervu.
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nuklovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do červi kálních medulárních motoneuronů podáním do svalů horních končetin (příklad: bicepsy, tricepsy).
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do hrudních medulárních motoneuronů podáním do svalů hrudníku (příklad: pektorální svaly).
V rámci dalšího předmětu vynálezu se vynález týká použití rekombinantního adenoviru obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do bederních nebo/a křížových medulárních neuronů podání do svalů dolních okončetin (například do svalu .tvořícího součást svalů lýtka).
Způsob podle vynálezu může být proveden za použití adenovirů různého původu. Ve skutečnosti byly charakterizovány různé sérotypy adenovirů, jejichž struktura a vlastnosti se poněkud mění. Z těchto sérotypů se v rámci vynálezu výhodně použijí lidské adenoviry typu 2 nebo 5 (Ad 2 nebo Ad 5) nebo adenoviry zvířecího původu (o tom viz francouzská patentová přihláška FR 9305954). Z adenovirů zvířecího původu, které jsou použitelné v rámci vynálezu, lze citovat adenoviry psího, bovinního, murinního (příklad: Mav1, Beard a kol., Virology 75 (1990) 81), ovčího, prasečího, ptačího nebo také opičího (příklad: SAV) původu. Výhodně je adenovirem zvířecího původu psí adenovir, obzvláště výhodně adenovir CAV2 /kmen manhattan nebo A26/61 (ATCC VR-800) jako příklad).
V rámci výhodné formy provedení vynálezu se jako adenovir použije adenovir lidského původu. Podle jiné výhodné formy provedení vynálezu se jako adenovir použije adenovir zvířecího původu.
Genom adenovirů zejména obsahuje opakovanou inverzní sekvenci (ITR) na každém konci, enkapsidační sekvenci (Psi), rané geny a pozdní geny. Základní rané geny jsou obsaženy v oblastech E1, E2, E3 a E4. Z těchto genů jsou geny obsažené v oblasti E1 (zejména E1a a E1b) nezbytné pro virální replikaci. Například oblasti E4 a L5 se uplatňují při virální propagaci. Základní pozdní geny jsou obsaženy v oblastech L1 až L5. Genom adenovirů Ad5 byl v celém rozsahu sekvencován a je odborníkům přístupný (například genová banka M73260). Stejně tak byly sekvencovány i části nebo celek genomu adenovirů různých sérotypů (Ad2, Ad7, Ad12, atd.). Adenovirální vektory použité v rámci realizace vynálezu obsahují sekvence ITR, sekvenci umožňující enkapsidaci a zainteresovanou nukleovou kyselinu.
V rámci výhodné formy provedení vynálezu je genom použitých adenovirů zbaven celé nebo části oblasti E1. Oblast E1 je totiž podstatná pro virální replikaci a její inaktivace vede k tvorbě defektního viru, pokud jde o jeho replikaci, tj. k tvorbě viru, který je neschopen vlastní replikace v infikovaných buňkách. Uvedená oblast E1 nebo jakákoliv jiná uvažovaná virální oblast může být učiněna nefunkční libovolnou známou technikou a zejména úplným vypuštěním, substitucí, částečnou delecí nebo adicí jedné nebo několika bází do uvažovaného genu nebo do uvažovaných genů. Takové modifikace mohou být provedeny in vitro (na izolované DNA) nebo in sítu, například za použití technik genového inženýrství, nebo také působením mutagenních činidel. Výhodně je genom použitého adenoviru zbaven části oblasti E1 odpovídající zbytkům 454 až 3328 (fragment PvuII-Bg1II) nebo 382 až 3446 (fragment HinfII-Sau3A).
V rámci obzvláště výhodné :formy provedení vynálezu je genóm použitého adenoviru rovněž zbaven celé nebo části oblasti E3 nebo/a E4. Přihlašovatel nyní prokázal, še je možné konstruovat vektory nesoucí tyto různé typy delecí. Takové dodatečné delece umožňují zvýšit bezpečnost vektoru a zvětšit jeho kapacitu.
Zainteresovaná nukleová kyselina může být vložena na různá místa genomu adenoviru. Výhodně je tato nukleová kyselina vložena v úrovni oblastí E1, E3 nebo E4. Nicméně je zřejmé, že mohou být použita i jiná místa. Přístup k nukleotidové sekvenci genomu umožňuje odborníkovi identifikovat nebo vytvořit restrikční místa použitelná k uvedenému účelu.
Defektní rekombinantní adenoviry podle vynálezu mohou ; být připraveny libovolnou známou technikou (Levrero a kol., Gene 101 (1991) 195, EP 185537, Graham, EMBO J. 3 (1984)2917). Zejména mohou být uvedené defektní adenoviry připraveny homologov.ou rekombinaci mezi adenovirem a plasmidem nesoucím mimo jiné sekvenci zainteresované DNA. Tato homologová rekombinace se realizuje po ko-transfekci uvedeného adenoviru a plasmidu ve vhodné buněčné řadě. Použitá buněčná řada výhodně musí (i) být transformovatelná uvedenými prvky a musí (ii) obsahovat sekvence schopné komplentovat část genomu defektního adenoviru, výhodně v integrované formě za účelem vyvarování se rekombinačních rizik. Jakožto příklad takové buněčné řady lze uvést řadu z ledvin lidského emrya 293 (Graham a kol., J.Gen.Virol.36 (1977)59), která zejména obsahuje v integrované formě ve svém genomu levou část genomu adenoviru Ad5 (12 %).
První metoda spočívá v tranfekci (defektního) rekombinantního viru, připraveného in vitro v kompetentní buněčné řadě, tj. nesoucí v poloze trans všechny funkce, které jsou nezbytné pro komplementování ídefektního viru. Tyto funkce jsou výhodně integrované v genomu buňky, což redukuje rekombinační rizika a uděluje buněčné řadě zvýšenou stabilitu. V případě adenovirů, ve kterých je deficitní pouze oblast E1, je použitou buněčnou řadou výhodně řada 293.
Druhá metoda spočívá v ko-transfekci ve vhodné buněčné řadě DNA defektního rekombinantního viru připraveného in vitro a DNA jednoho nebo několika virů nebo plasmidů helper. Při této metodě není nezbytné disponovat kompetentní buněčnou řadou schopnou komplementovat všechny defektní funkce rekombinantního adenoviru. Část těchto funkcí je ve skutečnosti komplementována virem nebo viry helper. Tento vir nebo viry helper jsou samotné defektní.
Strategie konstrukce vektorů odvozených od adenovirů byly rovněž popsány v patentových přihláškách FR93/05954 a FR93/08596.
Multiplikované adenoviry se potom izolují a purifikují klasickými technikami molekulární biologie, jak to bude dále ilustrováno v příkladové části.
Pro použití těchto adenovirů v rámci vynálezu jsou adenoviry výhodně sdruženy s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo nosiči za vzniku injikovatelné formulace. Zejména se může jednat o solné roztoky (fosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan sodný, chlorid sodný, chlorid draselný, chlorid vápenatý nebo chlorid hořečnatý, atd. nebo směsi takových solí) mající sterilní isotonický charakter, nebo o suché kompozice, získané zejména lyofilizaci, které po přidání sterilizované vody nebo fyziologického roztoku umožňují rekonstituci injikovatelných roztoků. Dávky použitého viru v rámci dané konkrétní aplikace jsou závislé na různých faktorech, zejména na místu (sval) podání, počtu injekcí, genu, který má být exprimován nebo také na zvolené době léčení. Obecně jsou rekombinantní adenoviry podle vynálezu formulovány a podávány ve formě dávek obsahujících mezi 10^ a 10 pfu, výhodně mezi 10° a 10 pfu. Jednotka pfu (plaque forming unit) odpovídá infekční potenci virového roztoku a je stanovena za použití infekce příslušné buněčné kultury, přičemž se obecně po 15 dnech stanoví počet kolonií infikovaných buněk. Techniky stanovení titru virálního roztoku jsou v odborné literatuře sdostatek dokumentovány.
Způsob podle vynálezu je obzvláště výhodný pro léčení medulárních poranění nebo nemocí způsobených degenerací motoneuronů. Medulární traumata odpovídají zejména sekcím v úrovni motoneuronů, které je zbavují jejich přívodných cest z vrchních center a způsobují jejich degeneraci. Přenos genů kódujících růstové faktory do motoneuronů ve stavu léze retrográdním transportem podle vynálezu nyní nabízí možnost omezit nebo dokonce eliminovat takovou degeneraci. V případě neuropatii motoneuronů lze uvést například amyotrofní laterální sklorózu, spinální amyotrofie typu I (Werdning-Hoffmanova nemoc), typu II nebo typu III (Kugelberg-Welanderova nemoc) a bulbární spinální amyotrofie (jako například Kennedyho nemoc). Přenos genů kódujících růstové faktory nebo další známé molekuly určené pro stimulování neurotrofního účinku na motoneurony ve stavu degenerace podle vynálezu nabízí rovněž nový směs léčení tohoto typu patologií. Účinnost způsobu podle vynálezu může být zejména prokázána na zvířecích modelech: model částečné nebo úplné sekce míchy, myš Wobbler (zvířecí model pro studium amyotrofní laterální sklerózy (Leestma J.E.,Am.J.Pathol.,100,821-824)); myš mnd (motoneuronová degenerace: zvířecí model pro studium amyotrofní laterální sklerózy (Messer a kol.,1992, Genomics,18,797-802)) nebo myš pmm (progresivní motoneuronová neuropatie: zvířecí model pro studium motoneuronální degenerace v průběhu jejího rozvoje),jak to bude dále ilustrováno v příkladové části. Inkorporace, tolerance a neškodnost ve vztahu k lidským pacientům mohou být testovány na modelech in vitro kultur lidských emryonálních medulárních neuronů.
V tomto ohledu zainteresovaná nukleová kyselina inkorporovaná do adenovirálních vektorů podle vynálezu kóduje přednostně neuroaktivní látku, tj. látku schopnou realizovat příznivý účinek na nervové buňky. Může se jednat o látku schop nou kompenzovat deficit endogenní látky nebo redukovat přebytek endogenní látky, nebo také o látku udělující buňkám nové vlastnosti. Může se zejména jednat o růstový faktor, neurotrofní faktor, cytokin, neurotransmitor nebo také o enzym nebo o neurotransmitorový nebo hormonální receptor.
Z růstových faktorů lze přednostně uvést stimulační faktory kolonií (G-CSF, GM-CSF, M-CSF, CSF, atd.) nebo růstové faktory fibroplastů (FGFa, FGFb) nebo vaskulární buňky (VEGF). Z neurotrofnich faktorů lze jako výhodné faktory zejména uvést ciliární neurotrofní faktor (CNTF), maturační faktory gliálních buněk (GMFa,b), GDNF, BDNF, NT3, NT5, atd. Výhodnými cytokiny jsou interleukiny a interferony, zatímco z enzymů se přednostně používají biosyntézní neurotransmitorové enzymy (tyrosin-hydroxyláza, acetylcholin-transferáza, kyselina glutamová-dekarboxyláza), lysosomální enzymy (hexosaminidázy, arylsulfatáza, glukocerebrosidáza, HGPRT), enzymy uplatňující se při detoxifikaci volných radikálů (peroxyddismutáza I, II nebo III, kataláza, glutathion-peroxydáza).
Z receptorů lze mimo jiné použít receptory androgenů (uplatňující se při Kennedyho nemoci).
Uvedené různé faktory mohou být použity v nativní formě nebo ve formě variant nebo fragmentů mající účinnost stejného typu.
Rovněž je možné přenášet antimediátorové sekvence.
Nukleová kyselina může být přírodního nebo umělého původu. Může se zejména jednat o genomovou DNA (DNAg), komplementární DNA (DNAc), hybridní sekvence nebo syntetické nebo polosyntetické sekvence. Tato nukleová kyselina může být lidského, zvířecího, rostlinného, bakteriálního nebo virového původu a podobně. Nukleová kyselina může být získána libovolnou známou technikou a zejména vytříděním z bank, chemickou syntézou nebo také komplexními metodami zahrnujícími chemickou nebo enzymatickou modifikaci sekvencí získaných uvedeným vytříděním z bank. Výhodně se jedná o komplementární a genomovou nukleovou kyselinu DNAc resp. DNAg.
Obecně nukleová kyselina rovněž zahrnuje promoční oblast funkční transkripce do motoneuronů, jakož i oblast situovanou v poloze 3' zainteresovaného genu, která specifikuje signál transkripčního konce a místo polyadenylace. Soubor těchto prvků tvoří expresní kazetu. Pokud jde o uvedenou promoční oblast, může se jednat o promoční oblast přirozeně zodpovědnou za expresi uvažovaného genu v případě, že je tato oblast schopna funkce v infikované buňce. Rovněž se může jednat o oblasti různých původů (zodpovědné za expresi ostatních proteinů nebo dokonce syntetických proteinů). Zejména se může jednat o promoční sekvence eukaryotických nebo virálních genů. Tak například se může jednat o promoční sekvence pocházející z genomu buňky, která má být infikována. Stejně tak se může jednat o promoční sekvence pocházející z genomu viru, včetně použitého adenoviru. V tomto ohledu lze uvést například promotory genů E1A, MLP, CMV, RSV, atd.. Kromě toho mohou být tyto promoční oblasti modifikovány adicí aktivačních sekvencí, regulačních sekvencí nebo sekvencí umožňujících tkáňově specifickou a majoritní expresi (promotory GFAP, enoláza, atd.). Jinak v případě, že heterologová nukleo vá kyselina neobsahuje promoční sekvence, může býr vložena do genomu viru až za takovou promoční sekvencí.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob přenosu nukleových kyselin do motoneuronů, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje muskulární podání adenovirálního vektoru, v jehož genomu je zabudována uvedená nukleová kyselina. Výhodně se způsob podle vynálezu realizuje injekcí nebo injekcemi do několika bodů jednoho a téhož svalu nebo v případě, kdy je možné určit místo vnoření nervu do svalu, jednou nebo několika injekcemi v úrovni uvedeného místa vnoření nervu nebo v blízkosti uvedeného místa vnoření nervu.
V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí příkladů provedení vynálezu, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen definicí patentových nároků.
Stručný popis obrázků
Obr.1 (fotografie A):
Značení beta-galaktosidázy v podélných řezech (50/um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka:
- difuzní značení četných motoneuronálních buněčných tělísek (na fotografii A vyznačeno značkou ve tvaru prázdného řeckého písmene delta),
- intenzivnější značení několika motoneuronů v úrovni buněčného tělíska a neuritů, demonstrující typickou morfologii motoneuronů (na fotografii A vyznačeno značkou ve tvaru plného řeckého písmene delta).
Obr.2 (fotografie B): stejný objekt jako na fotografii A, avšak za použití většího zvětšení:
Značení beta-galaktosidázy v podélných řezech (50/Um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci ade12 noviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka.
Obr.3 (fotografie C):
Kombinované značení beta-galaktosidázy a imunocytochemické značení CGRP (Calciton Gene Related Peptide) v podélných řezech (50/Um) krysí míchy v bederní oblasti po intramuskulární injekci adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka.
Příklady provedení vynálezu
1. Injekce adenoviru-beta-galaktosidázy do svalu tvořícího součást svalů lýtka neporaněné krysy nebo krysy, která podstoupila hrudní hemisekci míchy
Tento příklad popisuje přenos genu b-gal v úrovni bederních motoneuronů podáním do svalu tvořícího součást svalů lýtka adenoviru, ve kterém je zabudován uvedený gen.
Studie byla realizována na modelu částečné nebo úplné sekce míchy krysy provedené ve spodní hrudní oblasti za účelem ochromení jedné nebo obou zadních končetin zvířete.Tato se ce zbaví motoneurony jejich přívodních cest vedoucích z vyšších center a způsobí jejich degeneraci. Podání bylo provedeno tak, aby se dosáhlo infekce motoneuronů ve stavu léze retro grádním transportem.
Adenovirálním vektorem použitým v tomto příkladu je vektor Ad.RSV.beta-gal. Tento vektor je zbaven sekvencí nezbyt ných pro jeho replikaci, i když nicméně obsahuje sekvence nezbytné pro proniknutí do buněk určených k infikování, jakož i veškeré podstatné sekvence nezbytné pro enkapsidaci tohoto adenoviru. Uvedený vektor rovněž nese pod kontrolou promotoru RSV gen beta-galaktosidázy z Escherichia coli. Konstrukce defektního rekombinantního adenoviru Ad.RSVbeta-gal byla popsá13 na v literatuře (Stratford-Perricaudet a kol., J.Clin.
Invest.90( 1 992)626 ) . Stručně řečeno je adenovirus Ad.RSBbGal defektním rekombinantním adenovirem (s deleci oblastí E1 a E3) získaným homologovou rekombinací in vivo mezi mutantním adenovirem Ad-d1324 (Thimmappaya a kol., Cell 31(1982)543) a plasmidem pAd.RSVbGal (Akli a kol.)1993).
Uvedený plasmid pAd.RSVbGal obsahuje v orientaci od 5’ do 3':
- fragment PvuII odpovídající levému konci adenoviru Ad5 obsahující: sekvenci ITR, počátek replikace, enkapsidační signály a amplifikátor E1A,
- gen kódující beta-galaktosidázu pod kontrolou promotoru RSV (vir Rousova sarkomu) a
- druhý fragment genomu adenoviru Ad5, který umožňuje homologovou rekombinaci mezi plasmidem pAd.RSVbGal a adenovirem d1324.
Po linearizaci enzymem Clal se plasmid pAd.RSVbGal a adenovir d1324 ko-transfekují do řady 293 v přítomnosti fosforečnanu vápenatého k umožnění homologové rekombinace. Rekom binantní adenoviry takto generované se selektují purifikací na purifikační plotně. Po izolaci se DNA rekombinantního adenoviru amplifikuje v buněčné řadě 293, což vede k supernatantu obsahujícímu nepurifikovaný defektní rekombinantní adenovir mající titr asi ΙΟ^θ pfu/ml. Virální částice se potom purifikují odstředěním v gradientu chloridu česného za použití známých technik (o tom viz zejména Graham a kol.,Virology 52 (1973)456). Adenovir se potom použije v purifikované formě fosfátového solného roztoku (PBS).
Bezprostředně potom,co pokusné zvíře podstoupilo (nebo nepodstoupilo) hemisekci míchy (ve spodní hrudní oblasti, což má za účinek ochrnutí jedné nebo obou zadních končetin), byly aplikovány do svalu tvořícího součást svalů lýtka tři injekce adenoviru Ad-RSV-b-Gal (10 pfu/ml injekcí). Do každého místa bylo aplikováno Hamiltonovou injekční stříkačkou 9/Ul adenoviru.
Pokusná zvířata byla potom utracena (infuze 4% formaldehydu) čtyři dny po injekci, což je minimální doba, ve které může dojít k retrográdnímu transportu ze svalu do míchy. V cervikální, hrudní a bederní oblasti byly potom z míchy vyříznuty tři řezy, přičemž každý z těchto řezů měl tlouštíku 50/Um a byl veden v podélném směru míchy. Získané řezy byly potom zpracovány za účelem vyvolání beta-galaktosidázy, což umožňuje zviditelnit buňky, které byly infikovány virem. Další řezy byly podrobeny imunocytochemickému značení CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide), což umožňuje specifické značení mononeuronů.
Beta-galaktosidáza byla vyvolána ze svého substrátu, X-Gal, přičemž produkt reakce poskytne modré zbarvení.
CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) je neurotransmitor, který je specifickým značkovačem motoneuronů. Tento CGRP je vyvolán imunocytochemicky se sekundární protilátkou kopulovanou s peroxydázou, přičemž je jako substrát enzymu použije diaminobenzidin. Produkt reakce poskytne kaštanově hnědé zbarvení.
Vyvolání beta-galaktosidázy umožňuje prokázat přítomnost infikovaných motoneuronů, výlučně v bederní oblasti, ve stavu léze v případě prys podrobených výše uvedené hemisekci a ze strany odpovídající injekci.
Byly získány dva typy značení, a to difuzní značení buněčného tělíska velkého počtu motoneuronů a intenzivnější značení buněčného tělíska a neuritů omezenějšího počtu motoneuronů (fotografie A a B). Tento rozdíl intenzity značení je pravděpodobně způsobem skutečností, že pouze omezený počet motoneuronů, které byly velmi blízko místu injekce, mohl absorbovat vir intenzivním způsobem.
Kombinace imunocytochemického značení CGRP a vyvolání beta-galaktosidázy umožnila prokázat dvojím vybarvením, že téměř všechny CGRP-pozitivní buněčná tělíska (tj. motoneurony) byly infikovány virem (viz fotografie C).

Claims (13)

1. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do cervikálních medulárních motoneuronů podáním do svalů horních končetin (například bicepsy, tricepsy).
2. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do hrudních medulárních motoneuronů podáním do svalů hrudníku (například hrudní svaly).
3. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do bederních nebo/a křížových medulárních motoneuronů podáním do svalů spodních končetin (například sval tvořící součást svalů lýtka).
4. Použití rekombinantního adenovirů, jehož genom je zbaven celé nebo části oblasti E1 a celé nebo části oblasti E3 nebo/a E4 a obsahuje zainteresovanou nukleovou kyselinu pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
5. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu nukleovou kyselinu kódující NT3 pro přípravu farmaceutické kompozice určené pro přenos uvedené nukleové kyseliny do medulárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
6. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačené tím, že adenovirem je adenovir lidského původu.
7. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačené t í m, že adenovirem je adenovir zvířecího původu.
8. Použití podle některého z předcházejících nároků, v y značené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina je vložena do genomu adenovirů v úrovni oblasti E1, E3 nebo E4.
9. Použití podle některého z nároků 1 až 4, vyznačené t í m, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje látku schopnou mít příznivý účinek na nervové buňky.
10. Použití podle nároku 9,vyznačené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina kóduje růstový faktor, neurotrofní faktor, cytokin, neurotransmitor nebo enzym nebo receptor.
11. Použití podle nároku 9,vyznačené tím, že zainteresovaná nukleová kyselina navíc obsahuje signály umožňující expresi látky v motoneuronech.
12. Použití podle některého z nároků 1 až 5, vyznačen é t i m, že se intramuskulární podání provede injekcí do několika bodů jednoho a téhož svalu.
13. Použití rekombinantního adenovirů obsahujícího ve svém genomu nukleovou kyselinu kódující neurotrofní faktor pro pří právu farmaceutické kompozice určené pro léčení amyotrofní laterální sklerózy přenosem uvedené nukleové kyseliny do medu lárních motoneuronů intramuskulárním podáním.
CZ971806A 1994-12-13 1995-12-12 Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors CZ180697A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9415014A FR2727867B1 (fr) 1994-12-13 1994-12-13 Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux
PCT/FR1995/001650 WO1996018740A1 (fr) 1994-12-13 1995-12-12 Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ180697A3 true CZ180697A3 (en) 1997-09-17

Family

ID=9469770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ971806A CZ180697A3 (en) 1994-12-13 1995-12-12 Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6632427B1 (cs)
EP (1) EP0797677A1 (cs)
JP (1) JPH10510428A (cs)
AU (1) AU712775B2 (cs)
BR (1) BR9510090A (cs)
CA (1) CA2208224A1 (cs)
CZ (1) CZ180697A3 (cs)
FI (1) FI972491A (cs)
FR (1) FR2727867B1 (cs)
HU (1) HUT77258A (cs)
NO (1) NO972712L (cs)
SK (1) SK74597A3 (cs)
WO (1) WO1996018740A1 (cs)

Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
US6465253B1 (en) 1994-09-08 2002-10-15 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US5770442A (en) * 1995-02-21 1998-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same
US6127525A (en) * 1995-02-21 2000-10-03 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same
IL122614A0 (en) 1995-06-15 1998-08-16 Introgene Bv Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy
CA2277869A1 (en) * 1997-01-17 1998-07-23 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons
FR2761258B1 (fr) * 1997-03-26 1999-06-11 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de stimulation de la regeneration nerveuse
US20030017138A1 (en) 1998-07-08 2003-01-23 Menzo Havenga Chimeric adenoviruses
US6929946B1 (en) 1998-11-20 2005-08-16 Crucell Holland B.V. Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells
US20050232900A1 (en) * 1999-05-18 2005-10-20 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6492169B1 (en) 1999-05-18 2002-12-10 Crucell Holland, B.V. Complementing cell lines
US6913922B1 (en) * 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US6582692B1 (en) * 1999-11-17 2003-06-24 Avigen, Inc. Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders
DE60138403D1 (de) 2000-09-26 2009-05-28 Crucell Holland Bv Adenovirale vektoren für die übertragung von genen in zellen der skelettmuskulatur oder myoblasten
US6998118B2 (en) * 2001-12-21 2006-02-14 The Salk Institute For Biological Studies Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection
CA2471812C (en) * 2001-12-21 2012-09-04 The Salk Institute For Biological Studies Targeted retrograde gene delivery to motor neurons
ES2335657T3 (es) * 2002-04-25 2010-03-31 Crucell Holland B.V. Medios y metodos para la produccion de vectores de adenovirus.
BRPI0710800A2 (pt) 2006-04-25 2012-01-17 Univ California administração de fatores de crescimento para o tratamento de distúrbios de snc
KR101682735B1 (ko) 2009-02-12 2016-12-06 큐알엔에이, 인크. 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ) 관련된 질환의 치료
JP6066035B2 (ja) 2009-02-12 2017-01-25 クルナ・インコーポレーテッド グリア細胞由来神経栄養因子（ｇｄｎｆ）関連疾病の、ｇｄｎｆに対する天然アンチセンス転写物の抑制による治療
US20110319317A1 (en) 2009-03-04 2011-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of sirtuin 1 (sirt1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to sirt1
CN102482677B (zh) 2009-03-16 2017-10-17 库尔纳公司 通过抑制nrf2的天然反义转录物治疗核因子(红细胞衍生2)‑样2(nrf2)相关疾病
JP5904935B2 (ja) 2009-03-17 2016-04-20 クルナ・インコーポレーテッド デルタ様１ホモログ（ｄｌｋ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｄｌｋ１関連疾患の治療
CA2761152A1 (en) 2009-05-06 2010-11-11 Opko Curna, Llc Treatment of lipid transport and metabolism gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a lipid transport and metabolism gene
CA2761142C (en) 2009-05-06 2021-06-08 Opko Curna, Llc Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
KR101749356B1 (ko) 2009-05-18 2017-07-06 큐알엔에이, 인크. 재편성 인자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 재편성 인자 관련된 질환의 치료
KR101703695B1 (ko) 2009-05-22 2017-02-08 큐알엔에이, 인크. 전사 인자 ｅ3(ｔｆｅ3)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 ｔｆｅ3 및 인슐린 수용체 기질 2(ｉｒｓ2)의 치료
EP2435571B1 (en) 2009-05-28 2016-12-14 CuRNA, Inc. Treatment of antiviral gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an antiviral gene
KR101801404B1 (ko) 2009-06-16 2017-12-20 큐알엔에이, 인크. 콜라겐 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 콜라겐 유전자 관련된 질환의 치료
KR101702689B1 (ko) 2009-06-16 2017-02-06 큐알엔에이, 인크. Ｐｏｎ1에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 파라옥소나제 1(ｐｏｎ1) 관련된 질환의 치료
ES2618894T3 (es) 2009-06-24 2017-06-22 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el receptor del factor de necrosis tumoral 2 (tnfr2) por inhibición del transcrito natural antisentido para tnfr2
CN102482672B (zh) 2009-06-26 2016-11-09 库尔纳公司 通过抑制唐氏综合征基因的天然反义转录物治疗唐氏综合征基因相关疾病
CN102762731B (zh) 2009-08-05 2018-06-22 库尔纳公司 通过抑制针对胰岛素基因(ins)的天然反义转录物来治疗胰岛素基因(ins)相关的疾病
EP2470657B1 (en) 2009-08-25 2019-10-23 CuRNA, Inc. Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap
RU2639550C2 (ru) 2009-12-16 2017-12-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с сайт-1 мембраносвязанной пептидазой транскрипционных факторов (mbtps1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к mbtps1
RU2609631C2 (ru) 2009-12-23 2017-02-02 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с фактором роста гепатоцитов (фрг), посредством ингибирования природного антисмыслового транскрипта к фрг
EP2515947B1 (en) 2009-12-23 2021-10-06 CuRNA, Inc. Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
CN102770540B (zh) 2009-12-29 2017-06-23 库尔纳公司 通过抑制肿瘤蛋白63(p63)的天然反义转录物而治疗p63相关疾病
KR101838305B1 (ko) 2009-12-29 2018-03-13 큐알엔에이, 인크. ＮＲＦ1(Ｎｕｃｌｅａｒ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｆａｃｔｏｒ 1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 핵 호흡 인자 1 관련된 질환의 치료
CN102906264B (zh) 2010-01-04 2017-08-04 库尔纳公司 通过抑制干扰素调节因子8(irf8)的天然反义转录物而治疗irf8相关疾病
WO2011085066A2 (en) 2010-01-06 2011-07-14 Curna, Inc. Treatment of pancreatic developmental gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a pancreatic developmental gene
US9200277B2 (en) 2010-01-11 2015-12-01 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (SHBG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to SHBG
ES2671877T3 (es) 2010-01-25 2018-06-11 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la RNASA (H1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a RNASA H1
KR101838308B1 (ko) 2010-02-22 2018-03-13 큐알엔에이, 인크. 피롤린-5-카르복실레이트 환원효소 1(ｐｙｃｒ1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｐｙｃｒ1과 관련된 질환의 치료
KR101900962B1 (ko) 2010-04-09 2018-09-20 큐알엔에이, 인크. 섬유아세포 성장 인자 21 (ｆｇｆ21)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 섬유아세포 성장 인자 21 (ｆｇｆ21) 관련된 질환의 치료
US9089588B2 (en) 2010-05-03 2015-07-28 Curna, Inc. Treatment of sirtuin (SIRT) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (SIRT)
TWI531370B (zh) 2010-05-14 2016-05-01 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
DK2576783T3 (en) 2010-05-26 2018-03-12 Curna Inc TREATMENT OF ATONAL HOMOLOGY 1- (ATOH1) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTS AT ATOH1
EP2593547B1 (en) 2010-07-14 2017-11-15 CuRNA, Inc. Treatment of discs large homolog (dlg) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to dlg
US8993533B2 (en) 2010-10-06 2015-03-31 Curna, Inc. Treatment of sialidase 4 (NEU4) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to NEU4
CA2815212A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Curna, Inc. Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua
RU2611195C2 (ru) 2010-10-27 2017-02-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с интерферон- связанным регулятором развития 1 (ifrd1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к ifrd1
KR102010598B1 (ko) 2010-11-23 2019-08-13 큐알엔에이, 인크. Nanog에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 nanog 관련된 질환의 치료
JP6188686B2 (ja) 2011-06-09 2017-08-30 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド フラタキシン（ｆｘｎ）への天然アンチセンス転写物の阻害によるｆｘｎ関連疾患の治療
DK2825648T3 (en) 2012-03-15 2018-10-15 Curna Inc TREATMENT OF BRAIN-DERIVATIVE NEUROTROPHIC FACTOR (BDNF) -related DISEASES BY INHIBITATION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTION TO BDNF
WO2015171918A2 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Compositions and uses for treatment thereof
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
CN107109411B (zh) 2014-10-03 2022-07-01 冷泉港实验室 核基因输出的定向增加
IL308174A (en) 2015-10-09 2024-01-01 Univ Southampton Gene expression modulation and dysregulated protein expression scanning
JP7049249B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-06 コールド スプリング ハーバー ラボラトリー 中枢神経系疾患の処置のための組成物および方法
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
CA3005254A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of retinitis pigmentosa 18 and retinitis pigmentosa 13
EP3390636B1 (en) 2015-12-14 2021-05-19 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of dravet syndrome
EP3389671A4 (en) 2015-12-14 2019-07-17 Cold Spring Harbor Laboratory ANTISENSE OLIGOMERS FOR THE TREATMENT OF ALAGILLE'S SYNDROME
WO2017106283A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Cold Spring Harbor Laboratory Compositions and methods for treatment of liver diseases
GB2599884B (en) 2017-08-25 2022-08-31 Stoke Therapeutics Inc Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
US20210268667A1 (en) 2017-10-23 2021-09-02 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers for treatment of non-sense mediated rna decay based conditions and diseases
JP2021523227A (ja) 2018-05-04 2021-09-02 ストーク セラピューティクス，インク． コレステリルエステル蓄積症の処置のための方法及び組成物
US11845797B2 (en) 2018-07-03 2023-12-19 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
KR20230022409A (ko) 2020-05-11 2023-02-15 스톡 테라퓨틱스, 인크. 병태 및 질환의 치료를 위한 opa1 안티센스 올리고머
BR112023020832A2 (pt) 2021-04-08 2023-12-19 Marengo Therapeutics Inc Moléculas multifuncionais ligadas a tcr e seus usos
WO2022226291A1 (en) 2021-04-22 2022-10-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for treating cancer
WO2023178311A1 (en) * 2022-03-18 2023-09-21 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods for treating disorders under hypothermia and compositions relating to the same

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
CA2119580A1 (en) * 1991-10-01 1993-04-15 George Cachianes Production of gpa neurotrophic factor
ATE243755T1 (de) * 1992-08-07 2003-07-15 Wyeth Corp Rekombinente adenoviren-impfstoffe
AU692423B2 (en) * 1992-09-25 1998-06-11 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system, particularly in brain
JP3532566B2 (ja) * 1993-06-24 2004-05-31 エル． グラハム，フランク 遺伝子治療のためのアデノウイルスベクター
JP4190028B2 (ja) * 1993-07-13 2008-12-03 アベンテイス・フアルマ・ソシエテ・アノニム 欠陥組換えアデノウイルスベクター及び遺伝子治療での使用

Also Published As

Publication number Publication date
US6632427B1 (en) 2003-10-14
CA2208224A1 (fr) 1996-06-20
NO972712D0 (no) 1997-06-12
HUT77258A (hu) 1998-03-02
MX9704102A (es) 1997-09-30
JPH10510428A (ja) 1998-10-13
WO1996018740A1 (fr) 1996-06-20
NO972712L (no) 1997-06-12
FR2727867A1 (fr) 1996-06-14
FI972491A0 (fi) 1997-06-12
EP0797677A1 (fr) 1997-10-01
FI972491A (fi) 1997-06-12
AU4350296A (en) 1996-07-03
BR9510090A (pt) 1998-07-14
AU712775B2 (en) 1999-11-18
SK74597A3 (en) 1997-12-10
FR2727867B1 (fr) 1997-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ180697A3 (en) Transfer of genes in medullary motor neurons through the mediation of adenovirus vectors
Facchiano et al. Promotion of regeneration of corticospinal tract axons in rats with recombinant vascular endothelial growth factor alone and combined with adenovirus coding for this factor
Gravel et al. Adenoviral gene transfer of ciliary neurotrophic factor and brain-derived neurotrophic factor leads to long-term survival of axotomized motor neurons
US20020006395A1 (en) Defective adenoviruses including a therapeutic gene and an immunoprotective gene
US6245330B1 (en) Recombinant adenoviruses coding for glial-derived neurotrophic factor (GDNF)
JPH06508039A (ja) 抗腫瘍治療のためのサイトカインを発現する組換え型欠損アデノウイルス
Dijkhuizen et al. Adenoviral vector‐directed expression of neurotrophin‐3 in rat dorsal root ganglion explants results in a robust neurite outgrowth response
JP3835809B2 (ja) 組み換えアデノウイルスおよび眼疾患の治療のための遺伝子療法におけるそれらの使用
Lee et al. Replicating adenoviral vector–mediated transfer of a heat-inducible double suicide gene for gene therapy
JP2004501650A (ja) 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター
Smith et al. Astrocytes infected with replication-defective adenovirus containing a secreted form of CNTF or NT3 show enhanced support of neuronal populationsin vitro
US20040224409A1 (en) Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF)
Durham et al. Toxicity of replication-defective adenoviral recombinants in dissociated cultures of nervous tissue
JP2001524934A (ja) 遺伝子治療ウイルスベクターの投与に対して哺乳類罹患動物を寛容化する方法
CN101374853B (zh) 用新型腺病毒治疗癌症的方法和组合物
EP0969875B1 (en) Naked dna-mediated gene transfer into medullary motor neurons
IL112993A (en) Recombinant viruses, their preparation and their use in gene therapy
AU703793B2 (en) Recombinant adenoviruses coding for brain-derived neurotrophic factor (BDNF)
EP0879294B1 (en) Transduced human hematopoietic stem cells
MXPA97004102A (en) Transfer of genes in the medular motoneurons by means of adenovira vectors
WO1999036559A1 (en) Viral vectors expressing self-polymerizing neuronal intermediate filaments and their use
AU2928202A (en) Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons
KR100720201B1 (ko) 트랜스진의 신경-특이성 발현을 위한 음성 조절요소의 용도
KR20000070272A (ko) 수질 운동 뉴런 중으로의 아데노바이러스 벡터 매개-유전자전달방법
JPH09510356A (ja) 神経膠細胞成熟因子ベータ型（ＧＭＦ−β）のための組み換えアデノウィルス

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic