SK4052002A3

SK4052002A3 - Composition for the prevention and/or treatment of circulatory disorders, comprising derivatives of l-carnitine and extracts of ginkgo biloba

Info

Publication number: SK4052002A3
Application number: SK405-2002A
Authority: SK
Inventors: Claudio Cavazza
Original assignee: Sigma Tau Healthscience Spa
Priority date: 1999-10-08
Filing date: 2000-10-02
Publication date: 2002-09-10
Also published as: EP1218022A2; US6641849B1; NO20021640L; AR025790A1; CA2386770C; HUP0203449A3; ITRM990618A1; CA2386770A1; WO2001026666A3; DE60002226T2; HU227042B1; DK1218022T3; IL148963A0; ES2195939T3; CZ20021062A3; IT1306722B1; DE60002226D1; PL199996B1; EP1218022B1; MXPA02003501A

Description

Prostriedok na prevenciu a/alebo liečenie obehových ochoreni s obsahom derivátov L-karnitinu a výťažkov z ginka dvojlaločného

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka prostriedku vhodného na prevenciu a/alebo liečenie obehových ochorení na obvodovej a mozgovej úrovni,

V súlade s tým môže prostriedok mať formu a byť účinný ako potravinový doplnok alebo riadny liek v závislosti od toho či ide o podporné alebo preventívne účinky alebo presne o terapeutický účinok, na ktorý sa má prostriedok použiť pre jednotlivého človeka, ktorý ho potrebuje.

Presnejšie prostriedok podľa vynálezu obsahuje ako charakteristické účinné látky:

a) karnitín vybraný zo skupiny pozostávajúcej z acetyl-Lkarnitínu a propionyl-L-karnitínu alebo ich farmakologicky prijateľnej soli alebo ich zmesí, a

b) výťažok z ginka dvojlaločného alebo jedného alebo viacerých ginkolidov izolovaných z ginka dvojlaločného alebo ich zmesi.

Biologické a farmakologické vlastnosti karnitínov na srdcovej a svalovej ako aj mozgovej energetickej úrovni sú veľmi dobre známe.

L-karnitín aj jeho analógy ako je acetyl-L-karnitín a propionyl-L-karnitín sú schopné poskytovať priaznivý účinok pri myokardiálnej nedostatočnosti a v koronárnych ochoreniach ako aj pri obvodových vaskulárnych ochoreniach.

Tieto priaznivé účinky karnitínov existujú vďaka celkovému mechanizmu pôsobenia týchto látok, najmä vo vzťahu k možnosti dodávania energie rôznym bunkovým a tkanivovým metabolickým procesom cez aktiváciu metabolických systémov β-oxidácie mastných kyselín a zvýšenému využívaniu glukózy alebo cez inhibiciu lipidových peroxidačných procesov a redukciu voľných radikálov.

Zvláštny záujem sa týka interakcie, ktorú L-karnitin a vyššie uvedený acetyl-L-karnitin vyvíja na mozgovej úrovni.

Zistilo sa, že v skutočnosti acetyl-L-karnitín po postischemickej reperfúzii môže znovu obnoviť metabolizmus derivátov nesúcich fosfor a glukózy a vo všeobecnosti mozgové funkcie, ako aj je . schopný zabezpečiť prevenciu pred najvýznamnejšími post-ischemickými neurologickými poškodeniami.

Ten istý ochranný účinok acetyl-L-karnitínu sa zaznamenal po srdcovom infarkte aj v spojení produktmi peroxidácie.

Tieto experimentálne zistenia podčiarkujú priaznivé klinické účinky získané s acetyl-L-karnitínom v rôznych javoch spojených so starnutím mozgu.

Výťažky z ginka dvojlaločného tiež majú farmakologickú a klinickú účinnosť charakterizovanú trvalým priaznivým účinkom na obehovej úrovni a najmä na mozgovej obehovej hladine, pričom významné hodnoty sa dosiahli s ich využitím pri liečení a prevencii obvodovej a predovšetkým mozgovej vaskulárnej nedostatočnosti.

Ginko dvojlaločné je rastlina z čeľade Ginkgoaceae pôvodne pochádzajúca z Číny a Japonska, ale teraz rozšírená po celej Európe a používaná počas mnohých rokov v teraz obľúbenom lieku ako protizápalové, protiastmatické a ako činidlo proti nachladnutiu a nedávno po izolácii jeho aktívnych zložiek v skupine ochorení spojených s obehovou nedostatočnosťou alebo zápalovými alebo degeneratívnymi abnormalitami vyvolanými peroxidačnými javmi ako je ateroskleróza, trombóza alebo respiračné ochorenia.

Analýzy zamerané na aktívne látky prítomné v listoch ginka dvojlaločného najmä pomocou plynovej chromatografie (HPLC), poskytli množstvo chemicky a farmakologicky odlišných látok pozostávajúcich najmä zo skupiny flavonoidov, benzoidov, diterpénov a seskviterpénov a z organických kyselín.

Izolované flavonoidy zahŕňajú amentoflavón, bilobetín, izoginkgetín, sciadopityzín, ginkgetín, katechín a epikatechín, izokvercetín, izoramnetol-3-O-rutinosid, kamferol-3-0rutinozid, kampferol-7-0-glukozid, syringetin-3-0-rutinozid, kvercetín kvercetín-3-O-rutinozid, luteolín, kaemferol, myricetín.

Benzoidy zahŕňajú galokatechín a epigalokatechín. Diterpény zahŕňajú ginkolid, A, ginkolid B, ginkolid C, ginkolid J a ginkolit M.

Seskviterpény zahŕňajú bilobalid a organické kyseliny zahŕňajúce kyselinu 6-hydroxykinurénovú, hydroxybenzoovú, kinurénovú, askorbovú a 3-metoxy-4-hydroxybenzoovú.

Početné články v literatúre uvádzajú, že všetky tieto zlúčeniny, či už samotné alebo v kombinácii, sú schopné poskytnúť antioxidačný účinok lapaním voľných radikálov, vaskulárnym regulačným pôsobením a anti-anoxickým pôsobením ako aj modulovaním mozgového energetického metabolizmu.

Väčšina zo štúdií, najmä klinické pokusy, boli zamerané nielen na zlúčeniny izolované z výťažkov ginka dvojlaločného, ale tiež na štandardizovaný extrakt z ginka dvojlaločného, ktorý obsahuje 24 % glykozidových flavonoidov a 6 % terpénových laktónov.

Antioxidačná aktivita výťažkov z ginka dvojlaločného sa potvrdila experimentami uskutočnenými in vitro ako aj in vivo. In vitro sa pozorovalo, že výťažky z ginka dvojlaločného sú schopné inhibovať peroxidáciu lipidov erytrocytových membrán vyvolanú peroxidom vodíka ako aj peroxidáciou polynenasýtených mastných kyselín prítomných v membránach hepatických mikrozómov vyvolanú železitými iónmi. In vivo sa pozorovalo, že výťažky z ginka dvojlaločného sú schopné poskytnúť ochranný účinok spinálnych lézií vyvolaných ischémiou a spojených s peroxidáciou lipidov. Tiež sa velmi jasne ukázalo, že inhibičný účinok výťažkov z ginka dvojlaločného na doštičkový aktivačný faktor (PAF), ktorý je faktorom nielen uznaným ako významným v zhlukovaní doštičiek, ale tiež ako zodpovedným za ischemické obehové ochorenia na srdcovej ako aj mozgovej úrovni. Antiischemická účinnosť výťažkov z ginka dvojlaločného sa potvrdila v niekoľkých klinických pokusoch a dokázalo sa, že tieto extrakty sú vo všeobecnosti účinné v dočasnej klaudikácii a periferálnej artériopatii. Ochorenia spojené s erektilnými vaskulárnymi ochoreniami a hučaním v ušiach vykázali zlepšenia s použitím výťažkov z ginka dvojlaločného.

V prípadoch mozgovej nedostatočnosti vaskulárneho a degeneratívneho pôvodu dvojlaločného dosiahli skúšky demonštrovali, sa s použitím výťažkov z ginka najvýznamnejšie výsledky. Klinické že podávanie výťažkov z ginka dvojlaločného poskytuje priaznivé výsledky na senilnú demenciu a Alzheimerovu chorobu ako aj na depresiu, pričom tieto štúdie tiež ukazujú ich nadradenosť nad liekmi ako je takrín, ktorý sa široko používa v týchto podmienkach.

Teraz sa s prekvapením zistilo, že prostriedok s obsahom charakteristických účinných zložiek:

a) karnitínu vybraného zo skupiny pozostávajúcej z acetyl-Lkarnitínu a propionyl-L-karnitínu alebo jeho farmakologicky prijateľnej soli alebo jeho zmesí, a

b) výťažku z ginka dvojlaločného alebo jedného alebo viacerých ginkolidov izolovaných z ginka dvojlaločného alebo ich zmesí, je najmä vhodný na prevenciu a/alebo liečenie periferálnej alebo centrálnej obehovej nedostatočnosti na myokardiálnej, mozgovej a obvodovej vaskulárnej úrovni ako aj koronárnych ochorení, nervových depresií, nespavosti, únavy, dočasnej klaudikácie, hučania v ušiach alebo erektívneho ochorenia penisu, mozgových funkčných nedostatkov, vaskulárnych aj metabolických, kĺbových a žalúdočných zápalových ochorení.

Termín ginkolidy izolované s ginka dvojlaločného znamená, že sú zahrnuté: ginkolid, A, ginkolid B, ginkolid C, ginkolid J a ginkolid M.

Kombinácia acetyl-L-karnitínu alebo propionyl-L-karnitínu alebo ich farmakologicky prijateľných solí alebo ich zmesi s výťažkom z ginka dvojlaločného ukazuje nielen vzájomný doplnkový účinok dvoch typov zložiek, ale tiež skutočný synergický účinok vyvolávajúci vzájomné zvýšenie ich aktivity, ktorý môže byť výrazný pri dosahovaní bezpečnejšieho a extenzívnejšieho praktického využitia pri liečení alebo prevencii foriem chorôb spojených s mozgovou funkciou, kde karnitíny aj výťažok z ginka dvojlaločného preukazujú svoju vlastnú priaznivú funkciu.

Experimenty zamerané na kombináciu rôznych zložiek podľa predloženého vynálezu skutočne viedli k neočakávanému a presvedčivému synergickému účinku, ktorý sa môže jasne dokázať, predovšetkým použitím týchto testov, ktoré sú najviac očakávané vzhladom na praktické použitie terapeutických alebo preventívnych charakteristík uvedených pre prostriedok, ktorý je predmetom predloženého vynálezu.

Jedny série experimentov sa uskutočňovali kombinovaním výťažkom z ginka dvojlaločného, t.j. je predmetom vynálezu, demonštroval synergického pôsobenia vzájomnému zvýšeniu ich zmesi karnitínov s prostriedok, ktorý dosiahnutie silného jednotlivých zložiek, neočakávaného ktorý viedol k účinkov ako napríklad k možnosti efektívnejšieho použitia ako potravinového alebo výživového doplnku alebo dokonca ako liečiva na prevenciu a/alebo liečenie mnohých obehových ochorení na obehovej ako aj mozgovej úrovni, ktoré zahŕňajú depresiu, senilnú demenciu a Alzheimerovu chorobu alebo nedostatočnosť spojenú so starnutím.

Tiež sa zistilo, že výhodne zložka a) tiež môže ďalej obsahovať karnitín vybraný zo skupiny pozostávajúcej z Lkarnitínu, valeryl-L-karnitínu, izovaleryl-L-karnitínu a butyryl-L-karnitínu alebo ich farmakologicky prijateľných solí alebo ich zmesi.

V prostriedku podľa predloženého vynálezu pomer hmotností a) : b) je v rozsahu 20:1 až 5:1 a výhodne od 15 : 1 až 7 : 1.

Výťažok z ginka dvojlaločného môže byť kvapalný, alkoholový alebo hydroalkoholový výťažok, tinktúra a zakalený výťažok alebo suchý prášok.

Výhodne výťažok z ginka dvojlaločného obsahuje aspoň 24 % glykozidových flavonoidov a aspoň 6 % terpénových laktónov.

Prostriedok podlá vynálezu môže ďalej obsahovať vitamíny, koenzýmy, minerálne zložky, aminokyseliny a antioxidanty.

- 6 Experimentálne testy

Testy mortality vyvolanej s PAF

Doštičkový aktivačný faktor (PAF) je acetylovaný alkylfosfoglycerid, ktorého uvoľňovanie v tele pri rôznych stimuloch spôsobuje reakcie cirkulačného typu, ktoré sa najmä vzťahujú k zvýšenej kapilárnej priepustnosti s následným presakovaním krvi do okolitých tkanív, zvýšenému zhlukovaniu doštičiek a trombóze, zníženému koronárnemu prietoku, uvoľňovaniu zápalových faktorov, lyzozomálnych enzýmov a peroxidov.

Pri intravenóznom podávaní (20 pg/kg) zvieratám zapríčiňuje PAF smrť zvierat v krátkom časovom rozmedzí, t.j. približne do 1 hod, najmä ako výsledok kardiocirkulačného kolapsu.

Série testov sa uskutočnili spôsobom opísaným Youngom (Young J.N., Prostaglandins 30:545, 1985) a Myersom (Myers H., Br. J. Pharmavol., 79:595, 1983) na určenie, či výťažky ginka dvojlaločného (ktorých účinnosť voči PAF je známa) chráni zvieratá naočkované s PAF pred smrťou a či karnitíny (najmä propionyl-L-karnitín, ktorého vaskulárna regulačná účinnosť je známa) sú schopné nárastu ochranného účinku proti PAF.

Testy sa uskutočnili na bielych myšiach s priemernou hmotnosťou 25 g rozdelených do rôznych skupín, pričom prvá slúžila ako kontrolná skupina a prijímala intravenózne injekcie PAF pri dávke 20 ug/kg, zatial čo ostatným skupinám sa podávali intraperitoneálne injekcie, jednu hodinu pred podávaním PAF, buď s výťažkom z ginka dvojlaločného, alebo rôznych karnitínov samotných alebo v kombinácii alebo ginka dvojlaločného s karnitínmi. Výsledky sú uvedené v tabulke 1.

Výsledky týchto testov indikujú, že nielen výťažok z ginka dvojlaločného ale tiež karnitíny sú schopné poskytnúť aspoň čiastočnú ochranu pred smrťou vyvolanou intravenóznou injekciou PAF, ale že kombinácia karnitínov s ginkom dvojlaločným vedie k recipročnému zvýšeniu ochranného účinku.

Ί

Tento synergický účinok sa dosiahol s acetyl-L-karnitinom, najmä s propionyl-L-karnitínom alebo s rôznymi karnitínmi v kombinácii s výťažkom ginka dvojlaločného.

Tabuľka 1

Testy úmrtnosti vyvolanej s PAF

Ošetrenie % úmrtnosti hod po injekcii PAF

100/100

L-karnitin	300 mg/kg	90/]00
Acetyl-L-karnitin	300 mg/kg	80/100
Propionyl-L-karnitin	300 mg/kg	80/100
L-karnitin	100 mg/kg⁺
Acetyl-L-karnitin	100 mg/kg⁺
Propionyl-L-karnitin	100 mg/kg	70/100
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	70/100
Acetyl-L-karnitin	300 mg/kg⁺
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	40/100

Propionyl-L-karnitín	300 mg/kg⁺
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	30/100
Acetyl-L-karnitín	100 mg/kg⁺
Propionyl-L-karnitín	100 mg/kg⁺
L-karnitín	100 mg/kg⁺
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	0/100
Testy zápalovej reakcie	vyvolanej PAF
V týchto experimentoch sa vstrekol roztok PAF do labiek potkanov podľa metódy opísanej Bursteinom (Burstein S.H., J. Pharmacol. Exptl. Ther., 251:531, 1989).
Ako je známe PAF vstreknutý do labky uvoľňovanie mnohých flogogénnych prostaglandínov, ktoré v krátkom čase výrazného edému v krátkom čase (Bonnet J.	potkana zapríčiňuje látok, vrátane zapríčiňujú vznik , J. Agent Actions,

11:559, 1981).

Použitím spôsobu opísaného Goldenbergom (Goldenberg M.M., Prostaglandins, 28:271,1984) a Silva (Silva P.M.R., Inflammation, 10:393, 1986), sa roztok PAF pri celkovej dávke 2 pg vstrekol do zadnej labky potkanov a nasledujúca odematózna reakcia sa vyhodnotila s pletysmografickou metódou podía techniky opísanej Ferreirom (Ferreira S.H., J. Pharmacol., 127:83, 1979).

Testy sa uskutočnili v rôznych skupinách potkanov, jednou z nich bola kontrolná skupina, zatial čo iné prijímali intraperitoneálne podávanie, jednu hodinu pred PAF injekciou, acetyl-L-karnitínu (300 mg/kg) alebo propionyl-L-karnitínu (300 mg/kg) alebo kombináciu L-karnitínu (75 mg/kg), acetyl-Lkarnitínu (75 mg/kg) a propionyl-L-karnitínu (75 mg/kg) alebo výťažku z ginka dvojlaločného (100 mg/kg) alebo výťažku z ginka dvojlaločného a karnitínov. Výsledky sú uvedené v tabuľke 2.

Výsledky tohto testu demonštrujú, že výťažok z ginka dvojlaločného a tiež propionyl-L-karnitín a acetyl-L-karnitín sú schopné znižovať intenzitu edému vyvolaného s PAF, pričom maximálny účinok sa dosiahol pri kombinácii výťažku z ginka dvojlaločného s propionyl-L-karnitínom alebo karnitinovým komplexom.

V tomto prípade silný synergický účinok sa zaznamenal medzi inhibičným pôsobením ginka dvojlaločného a týmto účinkom u karnitínového komplexu.

Tabulka 2

Inhibícia zápalovej reakcie vyvolanej s PAF

Ošetrenie		% zníženia edému
Acetyl-L-karnitín	300 mg/kg	15
Propionyl-L-karnitín	300 mg/kg	35
L-karnitín	300 mg/kg	10
Acetyl-L-karnitín	100 mg/kg+
Propionyl-L-karnitín	100 mg/kg⁺
L-karnitín	100 mg/kg	45
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	35
Acetyl-L-karnitín	300 mg/kg+
Výťažok z ginka
dvojlaločného	100 mg/kg	50

Propionyl-L-karnitín 300 mg/kg⁺

Výťažok z ginka dvojlaločného

100 mg/kg

Acetyl-L-karnitín

100 mg/kg⁺

Propionyl-L-karnitín 100 mg/kg

L-karnitín

Výťažok z ginka dvojlaločného

100 mg/kg

Testy na koronárny spazmus

Zvýšenie účinnosti ginka dvojlaločného pri kombinácii s karnitínmi sa tiež zistilo pri vyhodnocovaní účinkov podávania týchto látok samotných a v kombinácii na koronárnom spasme pokusne vyvolanom pitrezínom.

Ako je známe intravenózna injekcia 1 v/kg pitrezínu u potkana zapríčiňuje charakteristické elektrokardiografické abnormality, ktoré sú najviac pozorovateľné v príklade II ako pôsobenie T vlny (asfyxiálna T vlna) vďaka zmenšenému myokardilárnemu okysličovaniu vo vzťahu k zníženému koronárnemu prietoku spôsobenému vaskulárnym spazmom, ktorý sa vyvolal pitresínom.

V týchto testoch pred vstreknutím pitresínu prijímali potkany orálne počas troch po sebe idúcich dní 100 mg/kg výťažkov z ginka dvojlaločného alebo 300 mg/kg karnitínov samotných alebo zmesi karnitínov, alebo karnitínu alebo karnitínovej zmesi v kombinácii s ginkom dvojlaločným.

Ako je vidieť z výsledkov v Tabulke 3 výťažok z ginka dvojlaločného a karnitíny (najmä propionyl-L-karnitín a zmes Lkarnitínu s propionyl-L-karnitínom s acetyl-L-karnitínom) sú schopné vnášať ochranný účinok pred koronárnym spazmom, ale maximálny účinok sa dosiahol s kombináciou výťažku ginka dvojlaločného s karnitínmi, ktorá poskytuje takmer úplnú ochranu zvierat takto ošetrených pred príznakmi koronárneho spazmu, takto sa tiež preukázal v týchto testoch významný synergický účinok plynúci z účinkov ginka dvojlaločného a karnitínov.

Tabulka 3

Inhibícia koronárneho spazmu s pitrezínom

Ošetrenie

L-karnitín chránené potkany slabo chránené nechránené

3

Propionyl-L-karnitín 2

Acetyl-L-karnitín 1

L-karnitín⁺

Propionyl-L-karnitín* Acetyl-L-karnitín 2

Výťažok z ginka dvojlaločného

Propionyl-L-karnitín⁺Výťažok z ginka dvojlaločného

L-karnitín

Výťažok z ginka dvojlaločného

Propionyl-L-karnitín

Acetyl-L-karnitín⁺

L-karnitín⁺

Výťažok z ginka dvojlaločného 9

Testy zhlukovania doštičiek

V týchto testoch sa odobrala krv od zdravých dobrovolníkov s obsahom doštičiek aspoň 300 000/mm^J. Spôsob opísaný Bornom (Born J.V.R., J. Physiol., 26:25 1963) sa použil na vyvolanie zhlukovania doštičiek.

Zhlukovanie doštičiek sa vyvolalo kolagénom (2,5 pg/ml) a meralo sa na začiatku a po 10 minútach vstreknutia propionyl-Lkarnitínu, acetyl-L-karnitínu, výťažku z ginka dvojlaločného alebo s týmito zlúčeninami v rôznych kombináciách.

Zhlukovanie doštičiek sa znížilo, hoci iba slabo po vstreknutí buď propionyl-L-karnitínu alebo acetyl-L-karnitínu a významne po vstreknutí výťažku ginka dvojlaločného.

Avšak zhlukovanie doštičiek sa takmer úplne inhibovalo kombináciou výťažku z ginka dvojlaločného s propionyl-Lkarnitínom a acetyl-L-karnitínom. Hodnoty ED₅o zistené pre rôzne použité zložky sú v skutočnosti rovné 30,5 ± 0,41 pg pre propionyl-L-karnitín, 26,4 ± 034 pg pre acetyl-L-karnitín a 38,4 pg pre výťažok z ginka dvoj laločného. Kombinácia pri tých istých dávkach ginka dvojlaločného a propionyl-L-karnitínu, acetyl-L-karnitínu alebo obidvoch karnitínov spolu viedla k 100 % inhibícii kolagénom indukovaného zhlukovania, čo demonštrovalo významný synergický účinok medzi karnitínmi a ginkom dvojlaločným.

Testy toxicity peroxidu vodíka (H₂O₂) na feochromcytómové bunky (PC-12)

Peroxidácia lipidov vyvolaná s H₂O₂ môže citelne znížiť prežitie buniek PC-12. Antioxidačné činidlá pridané ku kultúre sú schopné znížiť poškodenie lipidov peroxidáciou a predĺžiť prežitie (Nordman R., Free Rad. Biol. Med., 1227, 1996). V týchto testoch sa použila kultúra feochromcytómových buniek (PC-12) s obsahom 3 x 10⁵ M buniek/ml, ktorá sa vystavila na 30 minút 0,1 mM H₂O₂.

Po 24 hod pozorovania bolo prežitie buniek ošetrených s iba samotným H₂O₂ 38 %, zatial čo prežitie vzrástlo na 45 až 55 %, keď sa bunky inkubovali s propionyl-L-karnitínom a acetyl-Lkarnitínom (rovné IO'⁸ M) a na 60 % pri inkubácii s 10^-4 M výťažkom z ginka dvojlaločného.

Prežitie buniek bolo 85 % pri zmiešaní propionyl-Lkarnitínu alebo acetyl-L-karnitínu s výťažkom ginka dvojlaločného pri prvej použitej koncentrácii, ale 100 %, keď sa výťažok z ginka dvojlaločného zmiešal s propionyl-Lkarnitínom aj acetyl-L-karnitínom, čím sa demonštrovala schopnosť tejto kombinácie poskytovať synergický ochranný účinok medzi acetyl-L-karnitínom, propionyl-L-karnitínom a ginkom dvojlaločným.

Testy ochrany proti experimentálne vyvolanej mozgovej ischémii

Pretože hlavná príčina zapríčiňujúca poškodenie, ktoré nasleduje po mozgovej ischémii je tvorba peroxidov a voľných radikálov (Litton S.A., Náture, 364:625, 1993); v týchto testoch sa mozgová ischémia spôsobila oklúziou prostrednej mozgovej artérie (MCA) u potkana podľa metódy opísanej Scharkeyom (Scharkey Y., Náture, 371:336. 1994) vstreknutím anestetizovanému zvieraťu endotelínu-1 (120 pml), počas 3 minút s mikrokanylou umiestnenou stereotakticky v pyriforme kortexu na úrovni prostrednej mozgovej artérie (MCA).

Takto vytvorená ischemická oblasť sa skontrolovala po 3 dňoch s transkardiálnou perfúziou roztoku p-formaladehydu (4 % PBS) .

Po odstránení mozgu a jeho umiestnení do fixátora obsahujúceho 10 % sacharózy, kryostatové časti sa fixovali metylovou violeťou a sledovali sa pod mikroskopom.

Podávanie propionyl-L-karnitínu (50 mg/kg), acetyl-Lkarnitínu (50 mg/kg) a roztoku ginka dvojlaločného (10 mg/kg) alebo týchto zlúčenín v kombinácii sa uskutočnilo intravenózne minút po injekcii endotelínu-1.

Objem infarktovej oblasti sa vypočítal podlá metódy opísanej Parkom (Park C., Anns. Neurol., 20:150, 1989).

Výsledky sú uvedené v tabuľke 4.

Výsledky uskutočnených testov demonštrujú, že jednotlivé zlúčeniny použité v tomto experimente vykazujú zretelne merateľný ochranný účinok na tvorbu ischemických lézií. Avšak maximálny účinok sa dosiahol pri podávaní kombinácie rôznych zlúčenín.

V týchto podmienkach sa skutočne poskytuj takmer úplná ochrane, čím sa demonštruje významný a nepredpokladatelný synergický účinok, ktorý sa rozvíja keď sa jednotlivé zlúčeniny zmiešajú a tak sa vytvorí prostriedok podľa predloženého vynálezu.

Tabulka 4

Testy cerebrálnej ischémie vyvolanej endotelínom-1 [veľkosť ischémie (objem mm³) po MCA oklúzii (% zníženia objemu v porovnaní s kontrolami)]

Objem (mm³)

Propionyl-L-karnitín

32,6±2,4

Acety1-L-karnitín

21,6±1,8

Propionyl-L-karnitín+acetyl-L-karnitín

39,2±3,4

Ginko dvojlaločné

28,7±2,9

Propionyl-L-karnitín+ginko dvojlaločné

78, 8±6, 5

Acetyl-L-karntiín+ginko dvojlaločné

66,5±7,4

Propionyl-L-karnitín+Acetyl-L-karntiín+ ginko dvojlaločné 92,7:

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nižšie sú uvedené neobmedzujúce príklady podía vynálezu.

1) Propionyl-L-karnitín

Výťažok z ginka dvojlaločného (24 % glykozidových flavonoidov a 6 % terpénových laktónov)

2) Acetyl-L-karnitín

Výťažok z ginka dvojlaločného (24 S glykozidových flavonoidov a 6 % terpénových laktónov)

3) Propionyl-L-karnitín

Acetyl-L-karnitín

4) Propionyl-L-karnitín

8,1 prostriedkov

300 mg mg

200 mg

200 mg mg

500 mg

Výťažok z ginka dvojlaločného 80 mg (24 % glykozidových flavonoidov a 6 % terpénových laktónov)

5) Acetyl-L-karnitin 500 mg

6) Propionyl-L-karnitin 100 mg

Acetyl-L-karnitin 100 mg

L-karnitin 100 mg

Valeryl-L-karnitin 100 mg

Butyryl-L-karnitín 100 mg

Výťažok z ginka dvojlaločného 40 mg (24 % glykozidových flavonoidov a 6 % terpénových laktónov)

7) Propionyl-L-karnitin 200 mg

Acetyl-L-karnitin 200 mg

Resveratrol 1 mg

Výťažok z Panax ginseng 50 mg (24 % glykozidových flavonoidov a % terpénových laktónov)

DHA 50 mg

Melatonín 1 mg

Vitamín E 5 mg

Vitamín C 20 mg

Metionín seleničitý 50 mg β-karotén 10 mg

8) Propionyl-L-karnitín 100 mg

Acetyl-L-karnitín 100 mg

L-karnitín 100 mg

Výťažok z ginka dvojlaločného 40 mg (24 % glykozidových flavonoidov a % terpénových laktónov)

Resveratrol 1 mg

Výťažok z Panax ginseng 50 mg

Koenzým Qi₀ 10 mg

Omega-3 polynenasýtené kyseliny 100 mg

Fosfatidylcholín 100 mg

9) Propionyl-L-karnitín 250 mg

Acetyl-L-karnitín 250 mg

Výťažok z Hypericum 100 mg (0,3 % hypericín)

Výťažok z Panax gingseng 10 mg

Farmakologicky prijateľnou soľou L-karnitínu alebo alkanoyl-L-karnitínu je ktorákoľvek soľ týchto účinných zložiek s kyselinou, ktorá nezapríčiňuje vznik neželaných toxických alebo vedľajších účinkov. Také soli sú dobre známe odborníkom z oblasti farmácie.

Príklady vhodných solí, ale nie výhradne týchto, sú: chlorid, bromid, jodid, aspartát, kyslý aspartát, citrát, kyslý citrát, vínan, fosforečnan, kyslý fosforečnan, fumarát, kyslý fumarát, glycerofosforečnan, glukózfosfát, laktát, maleát, kyslý maleát, orotát, oxalát, kyslý oxalát, síran·, kyslý síran, trichlóracetát, trifluóracetát a metánsulfonát.

oznam FDA povolených farmakologicky prijateľných solí je uvedený v Int. J. of Pharm. 33, (1986), 201-217; táto publikácia je tu zavedená ako odkaz.

Claims

1. Kombinovaný prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako charakteristické účinné zložky:

a) zmes L-karnitínu, acetyl-L-karnitínu a propionyl-Lkarnitínu alebo ich farmakologicky prijateľných soli, a

1. Prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že hmotnostný pomer L-karnitínu:alkanoyl-Lkarnitíni:propionyl-L-karnitínu je 1:1:1.

2. Prostriedok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že zložka a) ďalej obsahuje aspoň jeden ďalší karnitín vybraný zo skupiny pozostávajúcej z valeryl-L-karnitínu, izovaleryl-L-karnitínu a butyryl-L-karnitínu alebo ich farmaceutický prijateľných solí alebo ich zmesí.

3. Prostriedok podía nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že hmotnostný pomer a):b) je 20:1 až 5:1.

4. Prostriedok podľa nároku 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že hmotnostný pomer a):b) je 15:1 až 7:1.

5. Prostriedok podía ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že výťažok z ginka dvojlaločného je kvapalný alkoholový, hydroalkoholový výťažok, tinktúra, zakalený výťažok alebo suchý prášok.

6. Prostriedok podía ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým že výťažok z ginka dvojlaločného obsahuje aspoň 24 % glykozidových flavonoidov a aspoň 6 % terpénových laktónov.

7. Prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým že farmakologicky prijateľná soľ Lkarnitínu alebo jeho derivátov je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z chloridu, bromidu, jodidu, aspartátu, kyslého aspartátu, citranu, kyslého citranu, vínanu, fosforečnanu, kyslého fosforečnanu, fumarátu, kyslého fumarátu, glycerofosforečnanu, glukózfosfátu, laktátu, kyslého maleátu, orotátu, oxalátu, kyslého maleátu, oxalátu, síranu, kyslého síranu, trichlóracetátu, trifluóracetátu a metánsulfonátu.

8. Prostriedok podlá ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým že ďalej obsahuje vitamíny, koenzýmy, minerálne látky, aminokyseliny a antioxidanty.

9. Prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, na orálne podávanie vo forme výživového doplnku.

10. Prostriedok podlá ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, na parenterálne, rektálne, podjazykové alebo transdermálne podávanie vo forme liečiva.

11. Výživový doplnok podľa nároku 10 na prevenciu a/alebo liečenie periferálnej alebo centrálnej obehovej nedostatočnosti na myokardiálnej, cerebrálnej, periferálnej vaskulárnej úrovni alebo koronárnych chorôb, nervových depresií, nespavosti, únavy, občasnej klaudikácie, hučania v ušiach alebo erektívnych porúch penisu, vaskulárnych aj metabolických cerebrálnych funkčných nedostatočností a kĺbových alebo gastrických zápalových reakcií.

12. Liečivo podľa nároku 11 na prevenciu a/alebo liečenie periferálnej alebo centrálnej obehovej nedostatočnosti na myokardiálnej, cerebrálnej, periferálnej vaskulárnej úrovni alebo koronárnych chorôb, nervových depresií, nespavosti, únavy, občasnej klaudikácie, hučania v ušiach alebo erektívnych porúch penisu, vaskulárnych aj metabolických cerebrálnych funkčných nedostatočnosti a kĺbových alebo gastrických zápalových reakcií.

13. Výživový doplnok podlá nároku 12 v tuhej, polotuhej alebo kvapalnej- forme.

14. Liečivo podľa nároku 13 v tuhej, polotuhej alebo kvapalnej forme.

15. Výživový doplnok podľa nároku 14 vo forme tabliet, toboliek, piluliek, kapsúl, granulátov alebo sirupov.

16. Liečivo podľa nároku 15 vo forme tabliet, toboliek, piluliek, kapsúl, granulátov, sirupov, vialiek alebo kvapiek.

17. Terapeutický spôsob prevencie a/alebo liečenia periferálnej alebo centrálnej obehovej nedostatočnosti na myokardiálnej, cerebrálnej, periferálnej vaskulárnej úrovni alebo koronárnych chorôb, nervových depresií, nespavosti, únavy, občasnej klaudikácie, hučania v ušiach lebo erektívnych porúch penisu, vaskulárnych aj metabolických cerebrálnych funkčných nedostatočnosti a kĺbových alebo gastrických zápalových reakcií, ktorý zahŕňa podávanie osobe, ktorá to potrebuje, kombinácie prostriedku s obsahom nasledujúcich zložiek:

a) zmesi L-karnitínu, acetyl-L-karnitínu a propionyl-Lkarnitínu alebo ich farmaceutický prijateľných solí, a

b) výťažku z ginka dvojlaločného alebo jedného alebo viacerých ginkolidov izolovaných z ginka dvojlaločného alebo ich zmesi.