HU227042B1

HU227042B1 - Compostion for the prevention and/or treatment of circulatory disorders, comprising derivatives of l-carnitine and extracts of ginkgo biloba

Info

Publication number: HU227042B1
Application number: HU0203449A
Authority: HU
Inventors: Claudio Cavazza
Original assignee: Sigma Tau Ind Farmaceuti
Priority date: 1999-10-08
Filing date: 2000-10-02
Publication date: 2010-05-28
Also published as: IL148963A0; TNSN00186A1; ATE237341T1; EP1218022A2; US6641849B1; CZ20021062A3; PL199996B1; MXPA02003501A; NO20021640D0; WO2001026666A2; ITRM990618A0; AR025790A1; AU780643B2; DE60002226D1; WO2001026666A3; ES2195939T3; PL354413A1; ITRM990618A1; CA2386770C; DK1218022T3

Description

A jelen találmány tárgya perifériás és agyi keringési rendellenességek kezelésére és megelőzésére alkalmazható gyógyászati készítmény.

A készítmény formáját és hatását tekintve lehet táplálékkiegészítő vagy gyógyszer, attól függően, hogy a kezelés célja a betegség megelőzése vagy gyógyítása.

Közelebbről, a jelen találmány szerinti készítmény jellemző alkotórészei a következők:

(a) L-karnitin, L-acetil-karnitin és L-propionil-karnitin vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sóik vagy ezek elegyei, és (b) Ginkgo biloba kivonat vagy egy vagy több, a Ginkgo bilobából elkülönített ginkgolid.

Ismert, hogy a karnitin a szív- és érrendszerre, valamint az agyi energiaátadással kapcsolatos folyamatokra fejt ki élettani és gyógyászati hatást.

Az L-karnitin és származékai, így az L-acetil-karnitin és az L-propionil-karnitin, bár különböző mértékben, de kedvezően befolyásolják a szívizom-elégtelenséget és a koszorúér-rendellenességeket, valamint a perifériális érrendszeri rendellenességeket.

A karnitin kedvező hatása annak az összetett mechanizmusnak a következménye, amelynek eredménye a különböző sejtek és szövetek metabolikus folyamatainak energiaellátása a zsírsav β-oxidáció metabolikus rendszerének aktiválása, a a zsírsav β-oxidáció metabolikus rendszerének aktiválása, a glükózfelhasználás növelése, a lipid peroxidációs folyamatok gátlása és a szabad gyökök számának csökkenésének következtében.

Az L-karnitin és különösen az L-acetil-karnitin elsősorban az agyi folyamatokat befolyásolja kedvezően.

A W099/06039 számú nemzetközi bejelentésben L-karnitin vagy alkanoil-L-karnitinek (mint acetil-L-karnitin) polikozanollal alkotott kombinációit ismertetik, amelyekben például polikozanolforrásként G. biloba levelekből kapott extraktumokat használnak 1:1-2000:1 tömegarányban, adott esetben vitaminokkal és egyéb anyagokkal együtt. A készítményeket olyan szív-érrendszeri, trombotikus és atheroszklerotikus betegségek (mint például perifériás vaszkulopátiák és neuropátiák) esetén ajánlják alkalmazásra, amelyeket fokozott vérlemezke-aggregáció vagy ischaemiás szövetsérülés okoz.

A WO98/33494 nemzetközi bejelentésben olyan készítményeket ismertetnek, amelyek érrendszeri degeneratív betegségek, ezen belül szív-érrendszeri betegségek kezelésére és megelőzésére alkalmazhatók, például az oxidatív szövetsérülés csökkentése révén. Az ismertetett készítmények közül egyesek G. biloba extraktumot tartalmaznak, amelyben található flavonoidok antioxidáns hatásúak, továbbá a készítmények L-karnitint is tartalmaznak, amelyről ismert, hogy képes redukálni ketonokat, LDL-t és triglicerideket, továbbá értágító hatásúak. Az ismertetés szerint a G. biloba erek, kapillárisok és vénák tágulását okozza, gátolja a vérlemezke-aggregációt és vérnyomáscsökkentő hatású, továbbá szinergetikus hatású kombinációt alkot az igényelt készítmény további alkotóival és antioxidáns anyagaival.

Azt találtuk, hogy az L-acetil-karnitin ischaemia utáni átáramlásának hatására visszaáll a foszfortartalmú származékok és a glükóz lebontása, valamint az agyban lejátszódó folyamatok általában, és elmaradnak az ischaemia utáni neurológiai károsodások is.

Kimutattuk, hogy az L-acetil-karnitin védőhatást fejt ki a stroke utáni folyamatokban és gátolja a peroxidációs termékek létrejöttét.

A fenti kísérleti eredmények igazolják, hogy az L-acetil-karnitinnel kedvező gyógyászati hatás érhető el, mivel kedvezően befolyásolja az agyi öregedési folyamatokat.

A Ginkgo biloba kivonatok tartós és kedvező gyógyászati és klinikai hatást fejtenek ki a keringésre, különösen az agyi keringésre, aminek az a következménye, hogy alkalmazásával a perifériás és különösen az agyi keringési érrendszeri elégtelenségek kezelésében, illetve megelőzésében jelentős eredmények érhetők el.

A Ginkgo biloba a Kínában és Japánban őshonos Ginkgo-aceae növénycsaládba tartozik, már Európában is elterjedt és évek óta alkalmazzák gyulladásgátló, asztmaellenes és köhögésellenes szerként, valamint a legutóbbi időkben hatásos összetevőinek elkülönítése után a keringési elégtelenségek és a peroxidatív jelenségek által kiváltott gyulladásos vagy degeneratív rendellenességek, így az érelmeszesedés, trombózis és légzési rendellenességek kezelésére és megelőzésére szolgáló szerként is.

A Ginkgo biloba levelében lévő hatásos anyagok főként kromatográfiás (HPLC) - elemzésével számos különböző kémiai szerkezetű gyógyászatilag hatásos anyagot különítettek el, amelyek szerkezetük szerint főként flavonoidok, benzoidok, diterpének, szeszkviterpének és szerves savak.

Elkülönítették többek között a következő flavonoidokat: amentoflavon, bilobetin, izoginkgetin, szciadopitizin, ginkgetin, katechin és epikatechin, izoquercetin, izoramnetol-3-O-rutinozid, kempferol-3-O-rutinozid, kempferol7-O-glükozid, sziringetin-3-O-rutinozid, quercetin-3-Οrutinozid, luteolin, kempferol, quercetin és miricetin.

Az elkülönített benzoidok közé tartozik a gallokatechin és az epigallokatechin. Az elkülönített diterpének közül megemlíthetjük a ginkgolid A-, ginkgolid B-, ginkgolid C-, ginkgolid J- és ginkgolid M-származékokat.

Az elkülönített szeszkviterpének közé tartozik a bilobalid, elkülönített szerves sav például a 6-hidroxi-kinurénsav, a hidroxi-benzoesav, a kinurénsav, az aszkorbinsav és a 3-metoxi-4-hidroxi-benzoesav.

Széles körű kutatásokkal kimutatták, hogy mindegyik vegyület, önmagában és más hatóanyagokkal együttesen alkalmazva is gyökfogóként antioxidáns hatást fejt ki, szabályozza az érrendszeri folyamatokat, antianoxiás hatású és modulálja az agyi energiametabolizmushoz kapcsolódó folyamatokat is.

A vizsgálatok többségét, különösen a klinikai vizsgálatokat nemcsak a Ginkgo biloba kivonatból elkülönített vegyületekkel, hanem egy 24% flavonoidot és 6% terpén laktont tartalmazó standardizált Ginkgo biloba kivonattal is elvégezték.

HU 227 042 Β1

A Ginkgo biloba kivonatok antioxidáns hatását in vivő és in vitro vizsgálatokkal is megerősítették. Megfigyelték, hogy a Ginkgo biloba kivonatok in vitro képesek az eritrocita membránok hidrogén-peroxidáz által kiváltott lipid peroxidációjának gátlására, valamint a májban lévő mikroszómák membránjaiban jelen lévő politelítetlen zsírsavaknak a vasionok által kiváltott peroxidációjának gátlására. Megfigyelték azt is, hogy a Ginkgo biloba kivonatok in vivő védőhatást fejtenek ki az ischaemia által kiváltott, a lipid peroxidációval kapcsolatos gerincvelői károsodások ellen. Egyértelműen kimutatták azt is, hogy a Ginkgo biloba kivonatok gátlóhatást fejtenek ki a vérlemezke-aktiváló faktorra (platelet activating factor, PAF), amely nemcsak a vérlemezke-aggregációt csökkenti, hanem az agyi és a szívben lejátszódó ischaemiás keringési rendellenességekért is felelős. A Ginkgo biloba kivonatok antiischaemiás hatását számos klinikai vizsgálatsorozatban megerősítették; a kivonatok hatásosnak bizonyultak az intermittens klaudikáció (IMC) megelőzésében és a perifériás érrendszeri rendellenességekben általában. A vizsgálatok szerint az erekciós érrendszeri rendellenességekkel és a fülzúgással járó betegségek is javultak a Ginkgo biloba kivonatok hatására.

A fenti érrendszeri és degeneratív eredetű agyi elégtelenségek esetén a Ginkgo biloba kivonatok alkalmazásával lehetett a legkedvezőbb eredményeket elérni. Klinikai kísérletekkel kimutatták, hogy a Ginkgo biloba kivonatokkal való kezelés kedvezően befolyásolja az öregkori elbutulásban, Alzheimer-kórban és depresszióban szenvedő betegek állapotát. Kimutatták azt is, hogy a Ginkgo biloba kivonatok hatásosabbak mint a fenti betegségek kezelésére általában alkalmazott takrin.

Meglepő módon azt találtuk, hogy perifériás és központi érrendszeri, így miokardiális, agyi és perifériás érrendszeri keringési elégtelenségek, valamint a koszorúér-rendellenességek, az ideges eredetű depresszió, az álmatlanság, a fáradékonyság, az IMC, a fülzúgás, a pénisz merevedési rendellenességei, az éreredetű és a metabolikus eredetű károsodott agyműködés, valamint az ízületi gyulladásos reakciók és a gyomor gyulladásos reakcióinak megelőzésében és/vagy kezelésében különösen hatásos a következő összetevőket tartalmazó készítmény:

(a) L-karnitin, L-acetil-karnitin és L-propionil-karnitin vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sóik és ezek elegyei; és (b) Ginkgo biloba kivonat vagy egy vagy több, a Ginkgo bilobábó\ elkülönített ginkgolid vagy ezek elegyei.

A „Ginkgo bilobábó\ elkülönített ginkgolidok” meghatározásba tartoznak a fentiekben említett ginkgolid A-, ginkgolid B-, ginkgolid C-, ginkgolid J- és ginkgolid M-származékok.

Azt találtuk, hogy az L-acetil-karnitint és az L-propionil-karnitint vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sóit és ezek elegyeit egy Ginkgo biloba kivonattal kombinációban alkalmazva a két, saját hatással is rendelkező összetevő hatása nemcsak összeadódik, hanem valódi szinergetikus hatás jön létre, azaz a két összetevő erősíti egymás hatását. Ez különösen hasznos az agyműködéssel kapcsolatos betegségek megelőzése és kezelése során, a biztonságosabb és a szélesebb körű alkalmazás szempontjából.

A különböző alkotórészek jelen találmány szerinti együttes alkalmazására vonatkozó vizsgálatok azt mutatták, hogy váratlan és jelentős szinergetikus hatás alakul ki, amely egyértelműen kimutatható azokkal a vizsgálatokkal, amelyekből helytálló következtetések vonhatók le a találmány szerinti készítményeknek a fentiekben ismertetett, a megelőzésben és kezelésben való gyakorlati alkalmazásával kapcsolatban.

A karnitinelegyek és a Ginkgo biloba kivonatok együttes alkalmazására vonatkozó kísérletsorozattal, azaz a jelen találmány szerinti készítménnyel végzett kísérletsorozattal ki lehetett mutatni a jelentős és váratlan szinergetikus hatást, amely azáltal jön létre, hogy a két összetevő erősíti egymás hatását, ezért kedvezőbb hatást lehet elérni a készítmény étrendi kiegészítőként és gyógyszerként való alkalmazásával számos perifériás és agyi keringési rendellenesség kezelésében és megelőzésében, ahol az utóbbi betegségek közé tartozik például a depresszió, az öregkori elbutulás és az Alzheimer-kór, valamint az öregedéssel kapcsolatos degeneratív folyamatok.

Azt találtuk továbbá, hogy az (a) komponens előnyösen tartalmazhat további karnitin-származékokat is, az L-valeril-karnitin, L-izovaleril-karnitin és L-butiril-karnitin, valamint ezek gyógyászatilag elfogadható sóit és ezek elegyeit tartalmazó csoportból választva.

A jelen találmány szerinti készítményben az (a) és (b) komponens tömegaránya előnyösen 20:1-5:1, előnyösen 15:1-7:1 közötti.

A Ginkgo biloba kivonat lehet folyadék, alkoholos kivonat vagy vizes alkoholos kivonat, tinktúra, nebulizált kivonat vagy száraz por.

A Ginkgo biloba kivonat előnyösen legalább 24% flavonoid glikozidot és legalább 6% terpén laktont tartalmaz.

A jelen találmány szerinti készítmény tartalmazhat továbbá vitaminokat, koenzimeket, ásványi anyagokat, aminosavakat és antioxidánsokat is. A gyógyszer vagy a táplálékkiegészítő lehet szilárd, félszilárd vagy folyékony formájú. Lehet tabletta, drazsé, pirula, kapszula, granulátum, szirup, ampulla (fiola) vagy csepp formájú.

Vizsgálati eredmények

A vérlemezke-aggregáló faktor (PAF) egy acetilezett alkil-foszfoglicerid, amely a szervezetben különböző behatásokra szabadul fel, és keringési rendellenességeket okoz, amely főként megnövekedett hajszálérpermeabilitásban nyilvánul meg, aminek a következménye az, hogy a vér kikerül az érrendszerből, megnövekszik a vérlemezke-aggregáció és a trombózis veszélye, csökken a vér áramlása a koszorúerekben, és nő a gyulladással kapcsolatos faktorok és a lizozomális enzimek és szuperoxidok kibocsátása.

A PAF állatoknak intravénásán (20 pg/kg dózisban) beadva rövid idő, körülbelül egy óra elteltével az állatok

HU 227 042 Β1 halálát okozza, amelynek közvetlen oka általában keringési elégtelenség.

Számos vizsgálatot végeztünk Young [Young J. N., Prostaglandins 30, 545 (1985)] és [Myers (Myers) H., Br. J. Pharmacol., 79, 595 (1983)] módszerével. Ezekkel e kísérletekkel azt vizsgáltuk, hogy a Ginkgo biloba kivonatok (amelyek vérlemezke-aggregációt gátló hatása ismert) meggátolják-e az állatok PAF-injekció utáni elhalálozását, továbbá, hogy a karnitinszármazékok képesek-e a PAF elleni védőhatás fokozására.

A vizsgálatokat átlagosan 25 g tömegű albínó egereken végeztük, az egereket több csoportba osztva. Az első csoport volt a kontrollcsoport, amelybe tartozó egereknek 20 pg/kg dózisban PAF-injekciót adtunk, a többi csoportba tartozó egereknek intraperitoneálisan, egy órával a PAF-injekció előtt Ginkgo biloba kivonatot; valamilyen karnitinszármazékot vagy ezek elegyét; illetve egy Ginkgo biloba kivonatot és egy karnitinszármazékot adtunk. A kapott eredményeket a következő táblázatban tüntetjük fel.

A fenti vizsgálatok eredményei azt mutatják, hogy nemcsak a Ginkgo biloba kivonatok, hanem a karnitinszármazékok is képesek legalább az intravénás PAFinjekció által okozott halálozási arány csökkentésére, de a karnitinszármazékok és a Ginkgo biloba kivonatok együttes alkalmazásával a védőhatás felerősödik.

Szinergetikus hatást tapasztaltunk Ginkgo biloba kivonatoknak az L-acetil-karnitinnal való együttes alkalmazása esetén is, de különösen jelentős szinergetikus hatást az L-propionil-karnitin alkalmazásával értünk el. Más karnitinszármazékok alkalmazása esetén is fellépett a szinergetikus hatás.

1. táblázat

PAF által kiváltott halálozás vizsgálat

Kezelés		%-os halálozás 1 órával a PAF-injekció után
-		100/100
L-Karnitin	300 mg/kg	90/100
L-Acetil-karnitin	300 mg/kg	80/100
L-Propionil-karnitin	300 mg/kg	80/100
L-Karnitin	100 mg/kg +
L-Acetil-karnitin	100 mg/kg +
L-Propionil-karnitin	100 mg/kg	70/100
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	70/100
L-Acetil-karnitin	300 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	40/100
L-Propionil-karnitin	300 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	30/100
L-Acetil-karnitin	100 mg/kg +
L-Propionil-karnitin	100 mg/kg +
L-Karnitin	100 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	0/100

Ebben a kísérletsorozatban a PAF-tartalmú oldatot patkányok talpába injekcióztunk, a Burstein által leírt módszer szerint [Burstein S. H., J. Pharmacol. Exptl. Ther., 251, 253 (1989)].

Amint az ismert, a patkányok mancsába adott PAFinjekció flogogén anyagok, többek között prosztaglandinok felszabadulását váltja ki, ami rövid időn belül jelentős duzzanatot okoz [Bonnet J., J. Agent Actions, 11:559 (1981)].

A Goldenberg [Goldenberg Μ. M., Prostaglandins, 28, 271 (1984)] és Silva [Silva P. M. R., Infalmmation, 10, 393, (1986)] által leírt módszert alkalmazva PAF-oldatot összesen 2 pg dózisban injekcióztunk a patkányok hátsó talpába. A kialakuló ödémás reakciót pletizmográfiásan értékeltük, a Ferreira által leírt módszert alkalmazva [Ferreira S. H., J. Pharmacol., 127, 83 (1979)].

A vizsgálathoz a patkányokat több csoportba osztottuk; (i) az egyik csoport a kontrollcsoport volt, míg a többi csoportban a PAF-injekció előtt 1 órával (ii) L-acetil-karnitint (300 mg/kg); (iii) L-karnitint (300 mg/kg); (iv) L-karnitint (75 mg/kg), L-acetil-karnitint (75 mg/kg) és L-propionil-karnitint (75 mg/kg); (iv) Ginkgo biloba kivonatot (100 mg/kg; (v) Ginkgo biloba kivonatot és karnitinszármazékokat adtunk. A kapott eredményeket a 2. táblázatban tüntettük fel.

A fenti vizsgálatsorozat eredményei azt mutatják, hogy a Ginkgo biloba kivonattal és az L-propionil-karnitinnal vagy L-acetil-karnitinnal végzett kezelés csökkenti a PAF által kiváltott ödéma nagyságát, de a legnagyobb hatás egy Ginkgo biloba kivonat és L-propionil-karnitin vagy L-karnitin elegy együttes alkalmazásával érhető el.

2. táblázat

A PAF által kiváltott gyulladásos reakció gátlása

Kezelés		Az ödéma csökkenése (%)
L-Acetil-karnitin	300 mg/kg	15
L-Propionil-karnitin	300 mg/kg	35
L-Karnitin	300 mg/kg	10
L-Acetil-karnitin	100 mg/kg +
L-Propionil-karnitin	100 mg/kg +
L-Karnitin	100 mg/kg	45
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	35
L-Acetil-karnitin	300 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	50
L-Propionil-karnitin	300 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	80
L-Acetil-karnitin	100 mg/kg +
L-Propionil-karnitin	100 mg/kg +
L-Karnitin	100 mg/kg +
Ginkgo biloba kivonat	100 mg/kg	90

HU 227 042 Β1

Koszorúérgörcs vizsgálata

Kimutattuk, hogy a Ginkgo biloba hatása növekszik egy karnitinszármazékkal való kombináció hatására. A fenti anyagok egyedüli és együttes alkalmazását vizsgáltuk pitresszin által kiváltott koszorúérgörcs kísérletsorozatban.

Amint az ismert, patkányoknak 1 v/kg pitresszininjekciót adva jellegzetes eltérések alakulnak ki az elektrokardiogramon, legfőképpen a II elvezetésen, a T hullám (aszfixiális T hullám) hatására, amelyet a pitresszin által kiváltott érgörcs következtében kialakult csökkent koszorúér-áramlással kapcsolatos elégtelen miokardiális oxigénellátás okozott.

Ezekben a vizsgálatokban a pitresszininjekció előtt a patkányoknak három egymást követő napon szájon át (i) 100 mg/kg Ginkgo biloba kivonatot; (ii) 300 mg karnitint vagy karnitin elegyet; (iii) karnitint vagy karnitin elegyet és Ginkgo biloba kivonatot adtunk.

Amint az a 3. táblázat adataiból látható, a Ginkgo biloba kivonat és a karnitin (különösen az L-karnitin, valamint az L-karnitin és L-propionil-karnitin és L-acetil-karnitin elegyei) védőhatást fejtenek ki a koszorúérgörcs ellen, a legnagyobb hatás azonban a Ginkgo biloba kivonat és a karnitinszármazékok együttes adásával érhető el, amely majdnem teljesen megvédi a kezelt állatokat a koszorúérgörcs ellen, tehát a vizsgálat azt mutatta, hogy jelentős szinergetikus hatást lép fel a Ginkgo biloba és a karnitinszármazékok együttes alkalmazása esetén.

3. táblázat

A koszorúérgörcs gátlása pitresszinnel

Kezelés	A védett patkányok száma	A gyengén védett patkányok száma	A nem védett patká- nyok száma
L-Karnitin	0	1	3
L-Propionil- karnitin	2	3	4
L-Acetil-karnitin	1	3	3
L-Karnitin+L-pro- pionil-karnitin+L- acetil-karnitin	2	4	4
Ginkgo biloba kivonat		3	3
L-Propionil-karnitin+G/n/rgo biloba kivonat		5	1
L-Karnitin+G/nkgo biloba kivonat		6	1
L-Propionil-karnitin+L-acetil-karnitin+L-kamitin+G/n/rgo biloba kivonat	9	1	0

Vérlemezke-aggregáció vizsgálata

Ezekben a vizsgálatokban egészséges önkéntes jelentkezőktől vérmintákat vettünk, akiknél a vérlemezke koncentrációja legalább 300 000 mm³ volt. A vérlemezke-aggregáció kiváltására a Born által leírt módszert alkalmaztuk (Born J. V. R. J. Physiol., 26:25 1963).

A vérlemezke-aggregációt kollagénnel (2,5 pg/ml) váltottuk ki. A vérlemezke-aggregációt mértük a kísérlet kezdetén, majd L-propionil-karnitinnal, L-acetil-karnitinnal, Ginkgo biloba kivonattal, illetve ezek különböző kombinációival végzett 10 perces inkubálási idő után.

Az L-propionil-karnitinnal vagy L-acetil-karnitinnal végzett inkubálás után csökkent a vérlemezke-aggregáció, bár csak csekély mértékben; a Ginkgo biloba kivonattal végzett inkubáció után a vérlemezke-aggregáció csökkenése szignifikáns volt.

A vérlemezke-aggregációt azonban majdnem teljes mértékben meggátolta a Ginkgo biloba kivonat és az L-propionil-karnitin és L-acetil-karnitin kombinációja. A különböző kombinációknál mért EC₅₀-értékek a következők:

30,5±0,412 pg az L-karnitin esetén; 26,4±0,34 pg az L-acetil-karnitinnél és 38,4 pg a Ginkgo biloba kivonatnál. A Ginkgo biloba kivonat kombinációja azonos dózisok mellett L-propionil-karnitinnal, L-acetil-karnitinnal vagy mindkettővel 100%-osan gátolta a kollagén által kiváltott vérlemezke-aggregációt. Ez azt igazolta, hogy jelentős szinergetikus hatás lép fel a karnitinszármazékok és a Ginkgo biloba kivonat együttes alkalmazása esetén.

A H₂O₂ toxicitási vizsgálat feokromocitóma sejteken (PC-12)

A H₂O₂ által kiváltott lipidperoxidáció jelentős mértékben csökkenti a PC-12 sejtek túlélését. A sejtkultúrához adott antioxidánsok csökkentik a lipidperoxidáció által kiváltott károsodásokat és növelik a túlélési időt [Nordman R., Free Rád. Bioi. Med., 1227 (1996)]. Ezekben a vizsgálatokban feokromocitóma (PC-12) sejttenyészetet alkalmaztunk, amely 3x10% mól sejtet tartalmazott milliliterenként, ehhez adtunk hozzá 30 percre 0,1 mmol H₂O₂-oldatot.

órás megfigyelés után a csak H₂O₂-dal kezelt sejteknél a túlélési arány körülbelül 38% volt, míg az L-propionil-karnitinnal és az L-acetil-karnitinnal (mindegyiket 10-8 mol/l koncentrációban alkalmazva) kezelt sejteknél a túlélési arány 45%, illetve 55% volt; a 10^-4mol/l Ginkqo biloba kivonattal kezelt sejteknél pedig 60% volt.

A Ginkgo biloba kivonattal és L-karnitinnel vagy L-acetil-karnitinnel (a korábbi koncentrációban) kezelt sejtek túlélési aránya 85% volt, de ez az érték 100%-ra emelkedett, amikor a Ginkgo biloba kivonatot L-propionil-karnitinnel és L-acetil-karnitinnel együttesen alkalmaztuk. Ezzel kimutattuk azt, hogy az L-acetil-karnitin és az L-propionil-karnitin a Ginkgo biloba kivonattal együtt alkalmazva szinergetikus védőhatással rendelkezik.

A kísérletesen kiváltott agyi ischaemia elleni védőhatás vizsgálata

Az agyi ischaemia által okozott károsodások főként a szuperoxidok és szabad gyökök termelődésének tulajdoníthatók [(Litton S. A., Natúré, 364:625, (1993)]. Ebben a vizsgálatsorozatban a patkányoknál az agyi

HU 227 042 Β1 ischaemiát a középső agyi artéria (middle cerebral artery, MCA) elzárásával idéztük elő, Scharkey módszerét alkalmazva [Scharkey Y., natúré, 371:336 (1994)]. Az elaltatott patkányoknak 120 pml endotelin-1-et adtunk 3 percen át, egy kanül segítségével, amelyet a kijelölt piriform cortexbe helyezetünk a középső agyi artéria (MCA) szintjén.

Az így létrehozott ischaemiás területet 3 nappal később vizsgáltuk 4%-os PBS-ben lévő, a szíven átvezetett paraformaldehidperfúzióval.

Az agyat eltávolítottuk és 10% szacharózt tartalmazó fixálóoldatba helyeztük. A kriosztátterületet metilviolával fixáltuk és optikai mikroszkóppal vizsgálatuk.

A kezelést endotelin-1-injekció intravénás beadása után L-propionil-karnitinnel (50 mg/kg), L-acetil-karnitinnel (50 mg/kg), Ginkgo Moha-oldattal (10 mg/kg), valamint ezek kombinációjával végeztük.

Az infarktus által érintett terület nagyságát a Park által leírt módszerrel számítottuk [Park C., Anns. Neurol., 210, 150 (1989)]. A kapott eredményeket a 4. táblázatban tüntettük fel.

Az elvégzett vizsgálat eredményei szerint a kísérletben vizsgált különböző vegyületek határozottan mérhető védőhatást fejtenek ki az ischaemiás terület kialakulása ellen. A legnagyobb hatást azonban akkor kaptuk, amikor a kezelést a különböző vegyületek kombinációjával végeztük.

Az így előidézett védőhatás majdnem 100%-os; ezzel igazoltuk az előre nem látható jelentős szinergetikus hatást, amely akkor lép fel, amikor az egyes vegyületek elegyítésével a találmány szerint előállított készítményt alkalmazzuk.

4. táblázat

Az endotelin-1 által előidézett agyi ischaemia vizsgálata [az ischaemia magnitúdója, térfogat (mm³)], ami az MCA elzárásának tulajdonítható (a kontrolihoz viszonyított csökkenés %-ban kifejezve)

Vegyület	Térfogat
L-Propionil-karnitin	32,6±2,4
L-Acetil-karnitin	21,6±1,8
L-Propionil-karnitin±L-acetil-karnitin	39,2±3,4
Ginkgo biloba	28,7±2,9
L-Propionil-kamitin+G/'Mgo biloba	78,8±6,5
L-Acetil-karnitin+G/nkgo biloba	66,5±7,4
L-Propionil-karnitin±L-acetil-karnitin+G/Mgo biloba	92,7±8,1

A találmány szerinti készítményt a következő, nem korlátozó példákkal mutatjuk be.

1)	L-Propionil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakion)	300 mg 40 mg
2)	L-Acetil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton)	300 mg 40 mg

3)	L-Propionil-karnitin L-Acetil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton)	200 mg 200 mg 40 mg
4)	L-Propionil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton)	500 mg 80 mg
5)	L-Acetil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton)	500 mg 80 mg
6)	L-Propionil-karnitin L-Acetil-karnitin L-Karnitin L-Valeril-karnitin L-Butiril-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton)	100 mg 100 mg 100 mg 100 mg 100 mg 40 mg
7)	L-Propionil-karnitin L-Acetil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton) Rezervatol Panax ginseng kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton) DHA Melatonin E-vitamin C-vitamin Szelénium-metionin β-Karotin	200 mg 200 mg 40 mg 1 mg 50 mg 50 mg 1 mg 5 mg 20 mg 50 μ9 10 mg
8)	L-Propionil-karnitin L-Acetil-karnitin L-Karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton) Rezervatol Panax ginseng kivonat Koenzim Q10 Omega-3-politelítetlen savak Foszfatidil-kolin	100 mg 100 mg 100 mg 40 mg 1 mg 50 mg 10 mg 100 mg 100 mg
9)	L-Propionil-karnitin L-Acetil-karnitin Ginkgo biloba kivonat (24% flavonoid glikozid és 6% terpén lakton) Hypericumkivonat (0,3% hipericin) Panax ginzeng kivonat	250 mg 250 mg 40 mg 100 mg 10 mg

Az L-karnitin és az L-alkanoil-karnitinek gyógyászatilag elfogadható sói alatt a hatásos vegyületek olyan

HU 227 042 Β1 sóit értjük, amelyek nem váltanak ki toxikus vagy egyéb mellékhatást. Az ilyen sók a szakember számára ismertek.

Az alkalmazható sókra példaként említhetjük a következő sókat: kloridok, bromidok, jodidok, aszpartátok, aszpartámsav savaddíciós sók, citrátok, citromsavadd iciós sók, tartarátok, foszfátok és foszforsavaddíciós sók, fumarátok és fumársavaddiciós sók, glicerofoszfátok, glükóz-foszfátok, laktátok, maleátok, maleinsavadd iciós sók, orotátok, oxalátok, oxálsavadd iciós sók, szulfátok és kénsavaddíciós sók, triklór-acetátok, trifluor-acetátok és metánszulfonátok.

Az Amerikai Egyesült Államok Gyógyszer- és Élelmiszer Hivatal (FDA) által elfogadhatónak minősített sókat ismerteti a következő irodalmi hely: Int. J. of Pharm. 33 (1986), 201-217.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Több hatóanyagot tartalmazó készítmény, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként (a) L-karnitin (LC), L-acetil-karnitin (ALC) és L-propionil-karnitin (PLC) vagy gyógyászatilag elfogadható sóik elegyét és (b) Ginkgo biloba kivonatot vagy egy vagy több ebből elkülönített ginkgolidot vagy ezek elegyét tartalmazza.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az L-karnitin:L-acetil-karnitin:L-propionilkarnitin tömegaránya 1:1:1.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az (a) komponens tartalmaz legalább még egy, a következő csoportból választott karnitinszármazékot: L-valeril-karnitin, L-izovaleril-karnitin, L-butiril-karnitin és ezek gyógyászatilag elfogadható sói vagy ezek elegyei.
4. Az 1-3. igénypontok szerinti készítmény, ahol az (a) és (b) komponensek tömegaránya 20:1-5:1.
5. Az 1-3. igénypontok szerinti készítmény, ahol az (a) és (b) komponensek tömegaránya 15:1-7:1.
6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a Ginkgo biloba kivonat folyékony alkoholos vagy vizes alkoholos kivonat, tinktúra, nebulizált kivonat vagy száraz por.
7. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a Ginkgo biloba kivonat legalább 24% flavonoid glikozidot és legalább 6% terpén laktont tartalmaz.
8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy az L-karnitin vagy az L-karnitin származékának gyógyászatilag elfogadható sóját a következő csoportból választjuk: klorid, bromid, jodid, aszpartát, aszparaginsavas só, cifrát, citromsavas só, tartarát, foszfát, foszforsavas só, fumarát, fumársavas só, glicerofoszfát, glükóz-foszfát, laktát, maleát, maleinsav savaddíciós só, orotát, oxalát, oxálsavas só, szulfát, kénsavas só, triklór-acetát, trifluoracetát és metánszulfonát.
9. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy tartalmaz vitaminokat, koenzimeket, ásványi anyagokat, aminosavakat és antioxidánsokat is.
10. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény szájon át adható táplálékkiegészítő.
11. Az előző igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy parenterálisan, rektálisan, nyelv alatt vagy transzdermálisan adható gyógyszer.
12. A 10. igénypont szerinti táplálékkiegészítő perifériás és központi idegrendszeri elégtelenségek, így szívizom-, agyi, perifériás érrendszeri és szívkoszorúér-rendellenességek, idegesség által kiváltott depresszió, álmatlanság, fáradékonyság, intermittens klaudikáció, fülzúgás, merevedési zavarok és az érrendszeri és metabolikus eredetű agyi károsodások, valamint az ízületi és gyomor- és bélrendszeri gyulladásos reakciók kezelésére és megelőzésére.
13. A 11. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény perifériás és központi idegrendszeri elégtelenségek, így szívizom-, agyi, perifériás érrendszeri és szívkoszorúér-rendellenességek, idegesség által kiváltott depresszió, álmatlanság, fáradékonyság, intermittens klaudikáció, fülzúgás, merevedési zavarok és érrendszeri és metabolikus eredetű agyi károsodások, valamint az ízületi és gyomor- és bélrendszeri gyulladásos reakciók kezelésére és megelőzésére.
14. A 12. igénypont szerinti táplálékkiegészítő, azzal jellemezve, hogy szilárd, félszilárd vagy folyékony formájú.
15. A 13. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy szilárd, félszilárd vagy folyékonyformájú.
16. A 14. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely tabletta, drazsé, pirula, kapszula, granulátum vagy szirup formájú.
17. A 15. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy tabletta, drazsé, pirula, kapszula, granulátum, szirup, csepp vagy ampulla.
18. Az (a) L-karnitint, L-acetil-karnitint és L-propionil-karnitint vagy ezek gyógyászatilag elfogadható sói elegyét és (b) Ginkgo biloba kivonatot vagy egy vagy több ebből elkülönített ginkgolidot vagy ezek elegyét tartalmazó összetétel alkalmazása perifériás és központi idegrendszeri elégtelenségek, így szívizom-, agyi, perifériás érrendszeri és szívkoszorúér-rendellenességek, idegesség által kiváltott depresszió, álmatlanság, fáradékonyság, intermittens klaudikáció, fülzúgás, merevedési zavarok és az érrendszeri és metabolikus eredetű agyi károsodások, valamint az ízületi és gyomor- és bélrendszeri gyulladásos reakciók kezelésére és megelőzésére szolgáló gyógyászati készítmény előállítására.