SK286616B6

SK286616B6 - Spôsob výroby paklitaxelu a medziprodukty

Info

Publication number: SK286616B6
Application number: SK697-2003A
Authority: SK
Inventors: Arturo Battaglia; Paolo Dambruoso; Andrea Guerrini; Ezio Bombardelli; Alessandro Pontiroli
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 2000-12-06
Filing date: 2001-12-03
Publication date: 2009-02-05
Also published as: EP1339703A1; SK6972003A3; NO328505B1; ITMI20002654A1; HUP0500615A2; CN1509277A; CA2430814C; IL156331A; TR200401435T4; PT1339703E; AU2002234535B2; JP2004515497A; IT1319682B1; AU3453502A; RU2276147C2; CZ300024B6; DE60103560D1; WO2002046177A1; HK1063052A1; ATE267820T1

Abstract

Je opísaný spôsob výroby paklitaxelu, v ktorom jevýchodiskovou látkou 10-deacetyl-bakatín III, a medziprodukty získané týmto spôsobom.

Description

Oblasť techniky

Predkladaný vynález sa vzťahuje na spôsob výroby paklitaxelu a na medziprodukty získané v tomto spôsobe.

Doterajší stav techniky

Paklitaxel je molekula prírodného pôvodu so širokým spektrom protirakovinového účinku štruktúrneho vzorca

Zlúčenina, prvýkrát získaná z kôry Taxus brevifolia a z iných prírodných zdrojov, môže byť pripravená polosynteticky veľa spôsobmi opísanými tak vo vedeckej literatúre, ako aj v patentových spisoch.

US-4,924,011 opisuje semi-syntézu paklitaxelu použitím 10-deacctylbakatínu III chráneného na C-7 hydroxyle prostredníctvom trialkylsilylovej skupiny a následne acetylovaného na C-10. Získaný medziprodukt reaguje s (27?,3.S')-;V-benzoyl-2-O-(l-etoxyetyl)-3-fenyl-izoserínom a výsledný produkt sa zbaví ochranných skupín, čo poskytne paklitaxel.

WO-93/06094 opisuje výrobu paklitaxelu prostredníctvom reakcie β-laktámového prekurzora so 7-O-trietylsilyl-bakatínom III, po ktorej nasleduje mierne kyslá hydrolýza.

Podľa US-5,476,954 sa paklitaxel pripraví z 10-deacetylbakatínu III esterifikovaného na C-7 2,2,2-trichlóretoxykarbonylovou skupinou (TROC).

Podľa US-5,917,062 a US 6,020,507 je C-7 hydroxyl chránený skupinou karbobenzoxy (CBZ) alebo karbo-rerc-butoxy (Boe), a potom nasleduje selektívna acetylácia C-10 hydroxylu.

Z literatúry je zjavné, že rozhodujúcim činiteľom semi-syntézy paklitaxelu je selektívna ochrana hydroxylov na diterpénovej skupine (kostra 10-deacetylbakatínu III). Poloha C-7 je naj reaktívnej šia, a preto sa na ňu naväzujú skupiny, ktoré sa následne ľahko odstraňujú. Najbežnejšie používanou skupinou je trietylsilyl (TES), ktorý je stály za podmienok používaných na esterifikáciu ďalších hydroxylov, zapojených do syntézy a poskytuje približne 85 % výťažok premeny. Približne 85 % výťažky sa získali v prípade, keď sa následne do polohy C-10 zaviedla acetylová skupina.

Teraz sa našiel nový spôsob syntézy paklitaxelu, ktorý poskytuje vyššie konečné výťažky, a takisto aj iné výhody v porovnaní so známymi metódami.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je spôsob výroby paklitaxelu, ktorý zahrnuje nasledujúce kroky:

a) ochranu hydroxylov v 7- a 10-polohe 10-deacetylbakatínu III (10-DAB III),

SK 286616 Β6 kde R = R' = trichlóracetyl, alebo R' = acetyl a R je vybraný zo skupiny zahrnujúcej íerc-butoxykarbonyl a trichlóracetyl,

b) esterifikáciu hydroxylu v polohe 13 s kyselinou 3-fenyl-2-epoxypropiónovou

c) odstránenie ochranných skupín v polohách 7 a 10 (krok 1), ak sú obidve trichlór-acetylové skupiny, potom nasleduje selektívna acetylácia v polohe 10 (krok 2) a otvorenie epoxidu pomocou azidu sodného (krok 3);

alebo alternatívne, c') ak R' = acetyl a R - trichlóracetyl, otvorenie epoxidu pomocou azidu sodného a následné odstránenie ochrannej skupiny z polohy 7

SK 286616 Β6

d) redukciu azidoskupiny na aminoskupinu

e) benzoyláciu, ktorá poskytne konečný produkt

Východiskovou látkou je 10-deacetylbakatín III (10-DAB III), ktorý sa extrahoval z listov Taxus baccata. N prvom kroku sa 10-DAB III kvantitatívne esterifikoval na C-7 a C-10 hydroxyloch. Keď je R = R' = trichlóracetyl, potom 10-DAB III reaguje s trichlóracetylchloridom v metylénchloride v prítomnosti trietylamínu a katalytických množstiev 4-dimetylaminopyridínu (DMAP). Keď R Φ R', najskôr sa 10-DAB III selektívne acetyluje acetanhydridom v prítomnosti solí céru, skandia, yterbia, výhodne CeCl₃.7H₂O. Výsledný bakatín III sa následne chráni v polohe C-7 s terc-butoxykarbonylovou alebo trichlóracetylovou skupinou. Prvý môže byť zavedený prostredníctvom reakcie bakatinu III s íerc-butoxypyrokarbonátom v prítomnosti DMAP a etyldiizopropylamínu alebo alternatívne spôsobom opísaným v US 5,917,062. Trichlóracetylová skupina môže byť zavedená do polohy 7 prostredníctvom reakcie s trichlóracetylchloridom v pyridíne.

V následnom kroku (b) sa hydroxyl v polohe 13 esterifikuje prostredníctvom kyseliny 3-fenyl-2-epoxypropiónovej, výhodne prostredníctvom jej amóniovej soli v toluéne v prítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu, DMAP a para-toluénsulfónovcj kyseliny, čím sa získa bakatín III ester kyseliny (2R,3J?)-3-fenyl-2,3-epoxypropiónovej.

Keď sú obidve ochranné skupiny R a R' trichlóracetyl, tieto môžu byť odstránené použitím podmienok a reakčných činidiel opísaných v Zheng a kol., Tetrahedron Letí, 1995, 36, 2001, a v Datta a kol., J. Org. Chem., 1995, 60, 761. Výhodne sa tie dve trichlóracetylové skupiny odstránia prostredníctvom dvoch ekvivalentov hydroxidu amónneho. Zlúčenina zbavená ochranných skupín sa selektívne acetyluje v polohe 10 prostredníctvom acetanhydridu v prítomnosti solí céru, skandia alebo yterbia, výhodne CeCl₃. 7H₂O.

Výsledná zlúčenina reaguje s NaN₃ vo vodnom roztoku metanolu v prítomnosti metylformiátu, v podmienkach, ktoré sú opísané v literatúre (Yamaguchi T., Tetrahedron Letters 39, 5575 až 5578, 1998), čo poskytne zodpovedajúci azid.

Alternatívne, keď R = trichlóracetyl a R' = acetyl (d) oxirán reaguje s NaN₃, čo poskytne zodpovedajúci azid, ktorý je zbavený ochrannej skupiny v polohe 7, zodpovedajúci zlúčenine získanej v kroku (c¹).

Azid sa redukuje na amín v následnom kroku (d). Redukcia sa môže uskutočniť pomocou vodíka na katalyzátore alebo pomocou PPh₃. Produkt získaný v poslednom kroku (e) sa benzoyluje na aminoskupine, čo poskytne paklitaxel. Benzoylácia sa môže uskutočniť prostredníctvom benzanhydridu buď simultánne s redukciou, alebo následne na izolovanom redukovanom produkte, použitím stechiometrických množstiev benzoylchloridu v prítomnosti uhličitanu draselného.

Nasledujúce príklady detailnejšie ilustrujú vynález.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Syntéza 7-trichlóracetyl-bakatínu III

V 25 ml banke s guľatým dnom sa pomocou magnetického miešania rozpustilo 0,603 g (1,03 mmol,

I, 0 ekvivalentov) bakatínu III v 9,7 ml suchého pyridínu pri teplote 25 C pod atmosférou dusíka. 138 μΐ (1,23 mmol, 1,23 ekvivalentov) trichlóracetylchloridu sa prikvapkalo do čistého svetložltého roztoku. 30 minút potom, ako bola adícia úplná sa vytvorila biela zrazenina. Do reakčnej suspenzie sa pri tých istých podmienkach, ako boli určené, prikvapkalo ďalších 120 μΐ (1,07 mmol; 1 ekvivalentov) trichlóracetylchloridu. Po 20 minútach mal roztok žltohnedú farbu. Takmer úplná konverzia východiskového bakatínu III sa pozorovala prostredníctvom TLC (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 2 : 3). Reakčná zmes sa zriedila s CH₂C12. Výsledný roztok sa opätovne premyl nasýteným roztokom CuSO₄, pokiaľ nebol pyridín úplne odstránený (roztok nemal viac modrú farbu). Organická fáza sa skoncentrovala vo vákuu, vysušila sa nad MgSO₄, prefiltrovala sa a rozpúšťadlo sa odparilo, čo poskytlo 0,612 g bieložltkastého prášku, zodpovedajúceho 7-trichlór-acetylbakatínu III, ktorý mal nasledovné spektroskopické charakteristiky.

'H NMR (400 MHz, CDC1₃): ô_ppm=l,08 (s, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me), 1,86 (s, 3H, Me), 1,97 (ddd, 1H,

J, =14,4 Hz, J₂=10,3 Hz, J₃=l,9 Hz, C6-H), 2,13 (d, 3H, J=l,2 Hz, Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,30 (s, 3H, Me), 2,32 - 2,28 (m, 2H, C14-H₂), 2,68 (ddd, 1H, J,=14,4 Hz, J₂=9,3 Hz, J₃=7,3 Hz, C6-H), 4,04 (d, 1 H, J=7,0 Hz, C3-H), 4,17 (dd, 1H, 1,=8,4 Hz, J₂=l,0 Hz, C20-H), 4,34 (d, 1H, J=8,4 Hz, C20-H), 4,86 (t, 1H, J=7,5 Hz, C13-H), 4,98 (dd, 1H, J,=9,5 Hz, J₂=l,7 Hz, C5-H), 5,65 (d, 1H, J=7,0 Hz, C2-H), 5,70 (dd, 1H, J,=10,4 Hz, Jj-7.4 Hz, C7-H), 6,42 (s, 1H, C10-H), 7,52 - 7,46 (m, 2H, aróm), 7,62 (m, 1H, aróm), 8,10 (m, 2H, aróm); ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): δ_ρρη1=10,8, 15,5, 20,4, 20,9, 22,8, 26,9, 32,5, 38,6, 43,0, 47,2, 56,2, 68,1, 74,5,

75,5, 76,5, 77,0, 79,0, 80,5, 83,7, 89,9, 129,0, 129,4, 130,3, 132,0, 134,0, 145,4, 160,8, 167,2, 169,2, 171,0, 201,9.

Príklad 2

Syntéza (27?,3 'Ä)-7-trichlóracetyl-bakatín III-13-(3 '-fenyl-2',3 -epoxypropionátu)

0,164 g (1,00 mmol, 1 ekvivalentov) čerstvo pripravenej kyseliny 3-fenyl-2-epoxypropiónovej sa rozpustilo pri teplote 0 °C v 30 ml bezvodého toluénu. Následne sa pridalo 0,5 g (1 mmol, 0,68 ekvivalentov) 7-(trichlóracetyl)-bakatínu III [7-(TCA)-bakatín III] pod atmosférou dusíka pri teplote 0 °C. Nakoniec sa postupne pridali dicyklohexylkarbodiimid (DCC, 0,21 g, 1,00 mmol, 1,0 ekvivalentov), 4-dimetylaminopyridín (DMAP, 0,084 g, 0,68 mmol, 0,66 ekvivalentov) a kyselina para-toluénsulfónová (p-TSA, 0,17 g, 0,10 mmol, 0,1 ekvivalentov). Roztok sa potom ohrieval pri teplote 70 °C za magnetického miešania a prúdenia dusíka. Vývoj reakcie sa sledoval pomocou TLC (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 3 : 2). Prvá škvrna majúca Rf=0,28 zodpovedá epoxyesteru 7-(TCA)-bakatínu III. Druhá škvrna majúca Rf=O,l 1 zodpovedá 7-(TCA)-bakatínu III. Po 3 hodinách sa zmes ochladila a suspendovaná tuhá látka sa odfiltrovala. Vyzrážaná dicyklohexylmočovina (DCU) sa premyla CH₂C1₂. Spojené organické fázy sa skoncentrovali dosucha. Výsledný surový produkt (0,919 g) sa chromatograficky analyzoval prostredníctvom bleskovej chromatografie (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 3 : 2). Získalo sa 0,100 g (0,14 mmol, 20 %) nezreagovaného 7-TCA-bakatínu III a 0,435 g (0,49 mmol, 73 %) (2'R,3'Ä)-7-tri-chlóracetylbakatín III-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu) s nasledovnými spektroskopickými charakteristikami:

*H NMR (400 MHz, CDC1₃): ô_ppm=l, 11 (bs, 6H, 2Me), 1,25 (bs, 1H, OH), 1,76 (d, 3H, J=l,2 Hz, Me), 1,84 (s, 3H, Me), 2,02 - 1,92 (m, 3H, C14-H₂ + C6-H), 2,13 (s, 3H, Me), 2,39 (s, 3H, Me), 2,69 (ddd, 1H, J,=14,6 Hz, J₂=9,3 Hz, J₃=7,3 Hz, C6-H), 3,92 (d, 1H, J=6,9 Hz, C3-H), 3,97 (d, 1H, J=4,7 Hz, C2'-H), 4,15 (dd, 1H, J,=8,4 Hz, J₂=l,0 Hz, C20-H), 4,31 (d, 1H, J=8,3 Hz, C20-H), 4,33 (d, 1H, J -4,7 Hz, C3'-H), 4,97 (dd, III, 1)=9,5 Hz, J₂=l,8 Hz, C5-H), 5,63 (d, 1H, J=6,8 Hz, C2-H), 5,65 (dd, 1H, 1,=10,7 Hz, J₂=7,33 Hz, C7-H), 6,02 (dt, 1H, J,=8,8 Hz, J₂=l,8 Hz, C13-H), 7,45 - 7,30 (m, 5H, aróm), 6,34 (s, 1H, C10-H), 7,49 (m, 2H, aróm), 7,64 (m, 1H, aróm), 8,00 (m, 2H, aróm); ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): ô_ppm=l0,8, 14,9, 20,8, 21,0,

22,5, 26,5, 32,4, 35,7, 43,2, 46,7, 56,0, 56,1, 57,9, 70,9, 74,5, 74,8, 76,4, 76,7, 79,0, 80,6, 83,6, 89,8, 126,8, 128,7, 128,9, 129,2, 129,3, 130,2, 132,6, 133,0, 134,1, 141,3, 160,7, 166,3, 167,1, 169,1, 170,1, 201,3.

Príklad 3

Syntéza (2'R,3 7?)-bakatin III-13-(3'-azido-2'-hydroxy-3'-fenylpropionátu)

V 25 ml banke s guľatým dnom a s jedným hrdlom, vybavenej magnetickým miešadlom sa suspendovalo 0,397 g (0,45 mmol, 1 ekvivalentov) (2'Ä,3'R)-7-tri-chlóracetylbakatín III 13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu) pri teplote 25 °C v 10,0 ml CH₃OH. Postupne sa pridalo 1,26 ml H₂O, 1,26 ml HCOOCH₃ a 0,735 g (11,3 mmol, 25,0 ekvivalentov) azidu sodného. Teplota sa zvýšila na 50 °C a vývoj reakcie sa sledoval prostredníctvom TLC (SiO₂, CHCI₃/EtOAc/MeOH, 12,0 : 2,0 : 0,3). Pozorovalo sa vymiznutie východiskovej látky a súčasná tvorba dvoch produktov majúcich Rf=0,22 a 0,29. Produkt majúci Rf=0,29 bol následne identifikovaný ako konečný produkt, pričom produktom s Rf=0,22 bol (27?,37?)-bakatin Ill-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxy

SK 286616 Β6 propionát), ktorý sa vytvoril ako reakčný medziprodukt. Produkt majúci Rf=0,29 časom rástol na úkor produktu majúceho Rf=0,22, Reakčný roztok mal po 46 hodinách žltohnedú farbu s bielou zrazeninou (nezreagovaný NaN₃). Reakcia sa po 46 hodinách stlmila prídavkom vody, pričom sa pozorovali dve ďalšie škvrny s R_f0,38 a 0,13 (neizolované produkty rozkladu). Vyzrážaná mlicčno-biela tuhá látka sa prefiltrovala, premyla sa vodou a potom AcOEt. Získala sa dvojfázová zmes, kde obidve fázy boli čisté. Tieto dve fázy sa odseparovali. Vodná fáza sa trikrát extrahovala s AcOEt a spojené organické fázy sa skoncentrovali a vysušili sa nad MgSO₄. Zmes sa prefiltrovala a rozpúšťadlo sa odparilo, čím sa získalo 0,335 g bieložltkastého prášku. Výsledný surový produkt sa čistil prostredníctvom bleskovej chromatografie (SiO₂, CHCl₃/EtOAc/MeOH 12:2: 0,3), čím sa získalo 0,279 g (0,36 mmol; 80 %; Rf=0,22) (27?,3'Ä)-bakatín III-13-(3'-azido-2’-hydroxy-3'-fenyl-propionátu).

Zlúčenina mala nasledovné spektroskopické charakteristiky:

'H NMR (400 MHz, CDC13): ô_ppm=l, 14 (s, 3H, Me), 1,25 (bs, 4H, Me + OH), 1,67 (s, 3H, Me), 1,87 (ddd, 1H, J,= 13,9 Hz, J₂=l 1,1 Hz, J₃=2,5 Hz, C6-H), 1,93 (d, 3H, J=0,8 Hz, Me), 2,08 (d, 2H, J=8,8 Hz, C14-H₂),

2.24 (s, 3H, Me), 2,26 (s, 3H, Me), 2,55 (m, 2H, C6-H + C7-OH), 3,28 (d, 1H, J=8,4 Hz, C2'-OH), 3,77 (d, 1H, J=7,2 Hz, C3-H), 4,15 (dd, IH, ^=8,2 Hz, J₂=0,8 Hz, C20-H), 4,28 (d, 1H, J=8,2 Hz, C20-H), 4,41 (m, 2H, C7-H + C2'-H), 4,93 (dd, 1H, J,=9,6 Hz, J₂-2,0 Hz, C5-H), 4,96 (d, 1H, J=4,4 Hz, C3’-H), 5,64 (d, 1H, J=7,2 Hz, C2-H), 6,17 (dt, 1 H, J,=7,9 Hz, J₂=l,2 Hz, C13-H), 6,30 (s, 1H, C10-H), 7,46 - 7,32 (m, 5H, aróm), 7,46 - 7,32 (m, 5H, aróm), 7,50 (m, 2H, aróm), 7,63 (m, III, aróm), 8,06 (m, 2H, aróm); ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): ô_ppm=9,8, 15,3, 21,1, 21,9, 22,6, 27,0, 35,6, 35,8, 43,3, 45,9, 58,8, 68,1, 72,0, 72,4, 75,1, 75,3, 75,8, 76,7, 79,4, 81,3, 84,6, 127,9, 128,9, 129,2, 129,5, 130,3, 133,4, 134,1, 135,3, 142,2, 167,2, 170,5,

171,5, 203,8.

Príklad 4

Syntéza V-debenzoyl-paklitaxelu

V 25 ml banke s guľatým dnom a s dvomi hrdlami sa rozpustilo 0,102 g (0,13 mmol, 1,0 ekvivalentov) (2'í?,3'R)-7-hydroxy-bakatín III-13-(3’-azido-2'-hydroxy-3'-fenyl-propionátu) v 5,2 ml čerstvo oddestilovaného CH₂CI₂ a k výslednému bledožltému roztoku sa pridala H₂O (0,05 ml), a potom 0,071 g (0,26 mmol, 2,0 ekvivalenty) PPh₃. Zmes sa za magnetického miešania nechala reagovať pri teplote miestnosti. Po 16 hodinách sa reakcia skontrolovala prostredníctvom TLC (SiO₂, CHC1₃/CH₃OH 9 : 1). Východisková látka (Rf=0,61) vymizla a pozorovala sa škvrna s Rf=0,19. Reakcia sa stlmila pomocou rozriedenia zmesi (bledožltej farby s bielou zrazeninou) s CHC1₃. Následne sa zmes premyla destilovanou H₂O a potom nasýteným roztokom chloridu sodného (soľanka). Jasnožltá organická fáza sa vysušila nad MgSO₄, potom sa prefiltrovala a rozpúšťadlo sa odparilo. Získalo sa 0,177 g okrovožltého oleja. Surový produkt sa podrobil bleskovej chromatografii (SiO₂, CHC1₃/CH₃OH 9 : 1), čím sa získalo 0,074 mg (0,10 mmol; 76 %) V-debenzoyl-paklitaxelu (bledožltý prášok).

'H NMR (400 MHz, CDC1₃): δ_ρρπ)=1,07 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,38 - 1,22 (bs, 2H, 2OH), 1,75 (s, 3H, Me), 1,88 (s, 3H, Me), 1,90 (s, 3H, Me), 1,93 (s, 3H, Me), 2,20 - 1,96 (m, 6H, C14-H₂ + C6-H, NH₂ + OH), 2,52 (ddd, 1H, J,=15,7 Hz, J₂=9,5 Hz, J₃=5,9 Hz, C6-H), 3,88 (d, 1H, J=7,2 Hz, C3-H), 4,10 (d, 1H, J=4,0 Hz, C20-H), 4,17 (d, 1H, J=4,0 Hz, C20-H), 4,22 (d, 1H, J=8,0 Hz, C2'-H), 4,26 (d, 1H, J=8,0 Hz, C3'-H), 4,56 (dd, 1H, J,=l 1,6 Hz, J₂=6,9 Hz, C7-H), 4,84 (d, 1H, J-8,8 Hz, C5-H), 5,83 (d, 1H, J=7,2 Hz, C2-H),

6.25 (t, 1H, J=8,0 Hz, C13-H), 6,51 (s, 1H, C10-H), 7,20 - 7,00 (m, 8H, aróm), 8,13 (m, 2H, aróm); ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): ô_ppm=9,8, 15,2, 21,1, 22,0, 22,7, 27,0, 30,0, 35,4, 35,8, 43,3, 45,9, 58,7, 71,3, 72,3, 75,2, 75,8, 76,6, 79,3, 81,2, 84,6, 127,2, 128,5, 128,9, 129,0, 129,4, 130,3, 133,1, 134,1, 142,6, 167,1, 170,4,

171,5, 173,2, 203,9.

Príklad 5

Syntéza paklitaxelu

V 10 ml banke s guľatým dnom sa rozpustilo 0,031 g (0,041 mmol, 1,0 ekvivalentov) V-debenzoylpaklitaxelu v 1,25 ml AcOEt. Kjasnožltému roztoku sa pridalo 1.25 ml nasýteného vodného roztoku NaHCO₃. Do výslednej dvojfázovej zmesi sa za silného magnetického miešania prikvapkalo 7,1 ml (0,064 mmol, 1,5 ekvivalentov) benzoylchloridu. Vývoj reakcie sa sledoval prostredníctvom TLC (SiO₂, CHC1₃/CH₃OH 9 : 1). Po vymiznutí východiskovej látky sa pozorovala jediná škvrna majúca R_r~0,50. Reakčná zmes sa zriedila s AcOEt. Organická fáza sa oddelila od vodnej fázy, ktorá sa extrahovala s AcOEt (tri extrakcie). Spojené organické fázy sa vysušili nad MgSO₄, prefiltrovali sa a skoncentrovali. Surový produkt 0,037 g) sa rozpustil v zmesi CH,Cl₂/etyléter v pomere 1 : 1, a potom sa pridal «-peritán (0,030 g, 0,035 mmol, 86 %), aby sa tak vyzrážal paklitaxel, ktorý má také spektroskopické charakteristiky, aké sú uvedené v literatúre.

Príklad 6

Syntéza (27?,37?)-7,10-bis-trichlóracetyl-10-deacetyl-bakatín III- 13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu)

V 100 ml banke s guľatým dnom sa pri teplote 0 °C rozpustilo 0,178 g (1,09 mmol, 1,0 ekvivalentov) čerstvo pripravenej kyseliny 3-fenyl-2-epoxypropiónovej v 30 ml bezvodého toluénu. Vo výslednom roztoku sa pod atmosférou dusíka a pri teplote 0 °C suspendovalo 0,663 g (0,79 mmol, 0,73 ekvivalentov) 7,10-bis(trichlóracetyl)-lO-deacetyl bakatínu III [7,10-bis-(TCA)-10-DAB III]. Nakoniec sa postupne pridali dicyklohexylkarbodiimid (DCC, 0,224 g, 1,09 mmol, 1,0 ekvivalentov), 4-dimetylaminopyridín (DMAP, 0,088 g, 0,72 mmol, 0,66 ekvivalentov) a kyselina //ara-toluénsulfónová (/>ara-TSA, 0,19 g, 0,11 mmol, 0,1 ekvivalentov). Reakcia sa uskutočnila v heterogénnej fáze pri teplote 70 °C za magnetického miešania a prúdenia dusíka. Vývoj reakcie sa sledoval prostredníctvom TLC (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 3 : 2). Prvá škvrna majúca Rt=0,28 zodpovedá epoxyesteru 7,10-bis-(TCA)-10-DAB III. Druhá škvrna majúca Rf=0,15 zodpovedá 7,10-bis-(TCA)-10-DAB III. Po 3 hodinách sa zmes ochladila a suspendovaná tuhá látka sa odfiltrovala. Tmavožltá zrazenina sa premyla CH₂C1₂, zvyškovou bielou tuhou látkou bol DCU. Spojené organické frakcie sa skoncentrovali a výsledná tuhá látka sa podrobila bleskovej chromatografii (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 3 : 2). Získalo sa 0,63 g (27?,37?)-7,10-bis-trichlóracetyl-10-deacetyl-bakatín III-13-3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu. 'H NMR (400 MHz, CDCI₃): ó_ppm=l, 12 (s, 3H, Me), 1,14 (s, 3H, Me), 1,76 - 1,60 (m, 2H, C6-H + OH), 1,81 (s, 3H, Me), 1,88 (s, 3H, Me), 2,04 - 1,98 (m, 2H, C14-H), 2,41 (s, 3H, Me), 2,69 (ddd, 1H, J_t=14,5 Hz, J₂=9,3 Hz, Jj=7,3 Hz, C6-H), 3,89 (d, 1H, J=7,2 Hz, C3-H), 3,98 (d, 1H, J=4,0 Hz, C2'H), 4,14 (d, 1H, J=8,0 Hz, C20-H), 4,32 (d, 1H, J=8,0 Hz, C20-H), 4,34 (d, 1H, J=4,0 Hz, C3'-H), 4,97 (d, 1H, J=7,6 Hz, C5-H), 5,70 - 5,62 (m, 2H, C7-H + C2-H), 6,05 (dt, 1H, Jj=8,4 Hz, J₂=l,0 Hz, C13-H), 7,52 - 7,30 (m, 7H, ArH), 6,39 (s, 1H, C10-H), 7,45 (m, 1H, ArH), 7,99 (m, 2H, ArH); ¹³C NMR (100 MHz, CDC1₃): ň_ppm=l0,9, 15,1, 20,8, 22,6, 26,3, 32,5, 35,6, 43,1, 46,7, 55,9, 56,5, 58,0, 70,8, 74,2, 76,4, 78,6, 78,9, 80,5, 83,5, 89,5, 89,6, 126,8,128,8,129,0, 129,1,129,4, 130,2, 131,5,132,5,134,2, 143,3, 160,6, 161,1,166,3,167,0, 170,3, 199,5.

Príklad 7

Syntéza (27?,3'/?)-10-deacetyl-bakatín III-13-(3 '-fenyl-2',3 ’-epoxypropionátu)

V 25 ml banke s guľatým dnom sa suspendovalo 0,174 g (0,18 mmol, 1,0 ekvivalentov) (27?,37?)-7,10-bis(TCA)-10-DAB III-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu) v 3 ml CH₃OH. Výsledná suspenzia sa ochladila na 0 °C a do nej sa za silného magnetického miešania prikvapkalo 0,24 ml (0,36 mmol, 2,0 ekvivalentov) 1,57M vodného roztoku NH₃. Reakcia sa uskutočňovala 15 minút pri teplote 0 °C, pričom počas tohto času sa suspenzia sfarbila na žltozelenkasto. Potom sa zmes ohriala za teplotu miestnosti a reagovala ďalších 5 minút, aby sa úplne rozpustila zrazenina, čím sa získal čistý žltozelenkastý roztok. Úplné vymiznutie východiskových zlúčenín sa skontrolovalo prostredníctvom TLC (SiO₂, n-hexán/EtOAc, 3 : 2), ktorá poskytla jedinú škvrnu na základnej čiare. Reakčná zmes sa zriedila H₂O, čím sa získal mliečnobiely roztok. Organická fáza sa zo zmesi extrahovala (3 extrakcie) s AcOEt (po pridaní organického rozpúšťadla sa vytvorila emulzia, ktorá sa rozrušila tým, že sa v nej rozpustil NaCl). Spojené organické fázy sa vysušili nad MgSO₄, prefiltrovali sa a rozpúšťadlo sa odparilo. Získalo sa 0,194 g bieleho prášku (27?,37?)-10-deacetyl-bakatín lII-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu).

'H NMR (400 MHz, CDC1₃): δ_ρρη = 1,05 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,1 (s, 3H, Me), 1,72 (d, 3H, J=l,2 Hz, Me), 1,83 (m, 1H, C6-H), 1,95 (2H, d, J=8,8 Hz, C14-H₂), 2,34 (s, 3H, Me), 2,58 (ddd, 1H, J,=14,6 Hz, J₂=9,9 Hz, J₃=6,9 Hz, C6-H), 3,85 (d, 1H, J=7,3 Hz, C3-H), 3,95 (d, 1H, J=4,4 Hz, C2’-H), 4,14 (d, 1H, J=8,4 Hz, C20-H), 4,22 (dd, 1H, 1,=11,3 Hz, J₂=6,6 Hz, C7-H), 4,27 (d, 1H, J=8,4 Hz, C20-H), 4,31 (d, 1H, J=4,4 Hz, C3'-H), 4,95 (d, 1H, J=8,8 Hz, C5-H), 5,16 (s, 1H, C10-H), 5,59 (d, 1H, J=7,3 Hz, C3-H), 5,99 (dt, 1H, Ji=8,8 Hz, J₂=l,2 Hz, C7-H), 7,30 - 7,50 (m, 7H, aróm), 7,60 - 7,70 (m, 1H, aróm), 7,90 - 8,00 (m, 2H, aróm).

Príklad 8

Syntéza (27?,37?)-bakatín III-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu)

K roztoku (27?,3'R)-10-deacetyl-bakatín III-13-(3'-fenyl-2',3' epoxypropionátu) (138 mg) v 3 ml suchého tetrahydrofuránu sa pridalo 7,3 mg CeCl₃.7H₂O a 0,073 ml acetanhydridu. Reakčná zmes sa miešala 5 hodín pri teplote miestnosti, a počas tohto času sa stala homogénnou. Pridal sa 1 g ľadu a reakčná zmes sa miešala 1 hodinu. Organické rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa zriedil s 5 ml H₂O. Vytvorená zrazenina sa odfiltrovala a sušila sa pod vákuovou pumpou 8 hodín. Výsledný produkt (biely prášok, 130 mg) mal nasledovné charakteristiky:

'H NMR (400 MHz, CDC1₃): ô_ppm=l,05 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,71 (s, 3H, Me), 1,72 (d, 3H, J=l,2 Hz, Me), 1,83 (m, 1H, C6-H), 1,95 (2H, d, J=8,8 Hz, C14-H₂), 2,34 (s, 3H, Me), 2,58 (ddd, 1H, J,=14,6 Hz, J₂=9,9 Hz, J₃=6,9 Hz, C6-H), 3,85 (d, 1H, J=7,3 Hz, C3-H), 3,95 (d, 1H, 1-4,4 Hz, C2'-H), 4,14 (d, 1H, J=8,4 Hz. C20-H), 4,22 (dd, 1H, J_t=l 1,3 Hz, J₂=6,6 Hz, C7-H), 4,27 (d, 1H, J=8,4 Hz, C20-H), 4,31 (d, 1H, J=4,4 Hz, C3'-H), 4,95 (d, 1H, J=8,8 Hz, C5-H), 5,59 (d, 1H, J=7,3 Hz, C3-H), 5,65 (dd, 1H, J,=10,7 Hz, J₂=7,33

SK 286616 Β6

Hz, C7-H), 6,34 (s, 1H, C10-H), 7,30 - 7,50 (m, 7H, aróm), 7,60 - 7,70 (m, 1H, aróm), 7,90 - 8,00 (m, 2H, aróm).

Príklad 9

Syntéza (2'7?,3 '7?)-bakatí n III-13-(3'-azido-2'-hydroxy-3'-fenyl-propionátu

V 25 ml banke s guľatým dnom a s jedným hrdlom, vybavenej magnetickým miešadlom sa suspendovalo 0,17 g (0,45 mmol, 1 ekvivalentov) (2'7?,37?)-bakatín III 13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu) pri teplote 25 “C v 5 ml CH₃OH. Postupne sa pridalo 63 ml H₂O, 0,23 ml HCOOCH₃ a 0,36 g (5,5 mmol, 12,5 ekvivalentov) azidu sodného. Zmes sa ohriala na 50 °C a vývoj reakcie sa skontroloval prostredníctvom TLC (SiO₂, CHCl₃/EtOAc/MeOH, 12,0 : 2,0 : 0,3). Reakčná zmes mala po 46 hodinách žltohnedú farbu s bielou zrazeninou (nezreagovaný NaN₃). Pridala sa H₂O (10 ml) a vyzrážaná mliečnobiela tuhá látka sa odfiltrovala, premyla sa vodou a potom AcOEt. Uvedené dve fázy sa odseparovali, vodná fáza sa trikrát extrahovala s AcOEt a spojené organické fázy sa skoncentrovali a vysušili sa nad MgSO₄, prefiltrovali sa a rozpúšťadlo sa odparilo, čím sa získalo 0,20 g bieložltkastého prášku. Výsledný surový produkt sa čistil pomocou bleskovej chromatografie (SiO₂, CHCl₃/EtOAc/MeOH 12 : 2 : 0,3), čím sa získalo 0,140 g (27?,37?)-bakatín III-13-(3'-azido-2'-hydroxy-3'-fenyl-propionátu).

Zlúčenina má také isté spektroskopické charakteristiky ako zlúčenina získaná v príklade 3.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob výroby paklitaxelu, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje nasledujúce kroky:

a) ochranu hydroxylov v 7- a 10- polohe 10-deacetylbakatínu III (10-DAB III) kde R = R' = trichlóracetyl, alebo R' = acetyl a R je vybraný zo skupiny zahrnujúcej terc-butoxykarbonyl a trichlóracetyl,

b) esterifikáciu hydroxylu v polohe 13 s kyselinou 3-fenyl-2-epoxypropiónovou

c) odstránenie ochranných skupín v polohách 7 a 10 (krok 1), ak sú obidve trichlóracetylové skupiny, potom nasleduje selektívna acetylácia v polohe 10 (krok 2) a otvorenie epoxidu pomocou azidu sodného (krok 3)

SK 286616 Β6 alebo alternatívne, c') ak R' = acetyl a R = trichlóracetyl, otvorenie epoxidu pomocou azidu sodného a následné odstránenie

5 ochrannej skupiny z polohy 7

d) redukciu azidoskupiny na aminoskupinu

SK 286616 Β6
2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že 10-DAB III je vpolohách 7 a 10 chránený trichlóracetylovou skupinou pomocou reakcie s trichlór-acetylchloridom v metylénchloride v prítomnosti trietylamínu a katalytických množstiev 4-dimetylaminopyridínu (DMAP).
3. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že 10-DAB III sa najskôr acetyluje v polohe 10 pomocou reakcie s acetanhydridom v prítomnosti solí céru, skandia, yterbia, a následne sa chráni hydroxyl na C-7 terc-butoxy-karbonylovou alebo trichlóracetylovou skupinou.
4. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že hydroxyl na C-13 je esterifikovaný amóniovou soľou kyseliny fenyl-2-epoxypropiónovej v toluéne v prítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu (DCC), DMAP a kyseliny /Mra-toluén-sultonovej.
5. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa odstránia pomocou hydroxidu amónneho.
6. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci nom roztoku metanolu v prítomnosti metylformiátu.
7. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci ka na katalyzátore alebo pomocou PPh₃.
8. Spôsob podľa nároku 1,vyznačujúci t ý m , že ochranné skupiny R = R' = trichlóracetyl t ý m , že epoxid sa otvorí pomocou NaN₃ vo vodt ý m , že sa azid redukuje na amín pomocou vodít ý m , že benzoylácia v poslednom kroku sa uskus točňuje prostredníctvom benzanhydridu buď súčasne s redukciou, alebo následne na izolovanom redukovanom produkte prostredníctvom benzoylchloridu v prítomnosti uhličitanu draselného.
9. Medziprodukty všeobecného vzorca kde R a R' sú určené v nároku 1 alebo sú vodík, na výrobu paklitaxelu spôsobom podľa nároku 1.

Koniec dokumentu