CZ300024B6

CZ300024B6 - Zpusob výroby paclitaxelu

Info

Publication number: CZ300024B6
Application number: CZ20031534A
Authority: CZ
Inventors: Battaglia@Arturo; Dambruoso@Paolo; Guerrini@Andrea; Bombardelli@Ezio; Pontiroli@Alessandro
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 2000-12-06
Filing date: 2001-12-03
Publication date: 2009-01-14
Also published as: US20040049060A1; PT1339703E; TR200401435T4; PL195121B1; IL156331A; HK1063052A1; JP2004515497A; PL366120A1; EP1339703B1; EP1339703A1; CN1286828C; SK6972003A3; DE60103560T2; WO2002046177A1; ITMI20002654A1; CN1509277A; ATE267820T1; NO20032558D0; AU3453502A; KR20030055332A

Abstract

Zpusob výroby paclitaxelu vzorce I, pri nemž se vychází z 10-deacetylbaccatinu vzorce III a jímž jemožno získat paclitaxel vzorce I ve vyšším konecném výtežku ve srovnání se známými postupy, a meziprodukt.

Description

Způsob výroby paditaxelu

Oblast techniky

Vynález se týká nového způsobu výroby známého léčiva paditaxelu.

Dosavadní stav techniky io

Paclitaxel je molekula přírodního původu se širokým spektrem protinádorového účinku se struk· turním vzorcem

Uvedená látka byla poprvé izolována z kůry Taxus brevifolia a pak s dalších přírodních zdrojů a je možno ji připravit semisynteticky řadou způsobů, které jsou popsány ve vědecké i patentové literatuře.

US 4 924 011 popisuje sem i syntetický způsob pro výrobu paditaxelu, při němž se používá 10-deacetylbaccaíin III, chráněný na uhlíkovém atomu hydroxylové skupiny v poloze 7 trialkyl20 silylovou skupinou, tato látka se pak acetyluje na uhlíkovém atomu v poloze 10. Výsledný meziprodukt se nechá reagovat s (2R,3S)-N-benzoyl-2-0“(4-ethoxyethyl)-3-fenyíisoserinu a výsledný produkt se zbaví ochranné skupiny, čímž se získá výsledný paclitaxel.

V mezinárodní přihlášce WO 93/06094 se popisuje příprava paditaxelu, při níž se nechá reagovat β-laktamový prekurzor s 7-O—triethy Isily Ibaccatinem lil s následnou hydrolýzou v mírně kyselém prostředí.

Podle US 5 476 954 je možno připravit paclitaxel tak, že se vychází z 10-deacetylbaccatinu lil, esteritíkovaného na uhlíkovém atomu v poloze 7 pomocí 2,2,2-trichlorethoxykarbonylové skupijo ny (TROC).

Podle dokumentů US 5 917 062 a US 6 020 507 je možno hydroxylovou skupinu na atomu uhlíku v poloze 7 chránit při použití karbobenzoxyskupiny (CBZ) nebo pomocí karbo-tercbutoxyskupiny (Boc) s následnou selektivní acetylací hydroxylové skupiny na atomu uhlíku v poloze 10.

Z literatury je zřejmé, že při výrobě paditaxelu je nezbytné selektivně chránit hydroxylové skupiny na diterpenové skupině v základní struktuře 10-deacetylbaccatinu 111. Uhlíkový atom v poloze 7 je nejreaktivnější a je tedy možno na něj navázat skupiny, které je možno později snadno to odstranit. Běžně užívanou skupinou je triethy tsitylová skupina (TES), která je stálá za podmínek, užívaných pro esterifíkací ostatních hydroxylových skupin, které se účastní syntézy a je možno dosáhnout přibližně 85% přeměny. Přibližně 85% výtěžek je možno získat v případě, že se do polohy 10 na uhlíkový atom později zavede acetvlová skupina.

CZ 300024 Bó

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoří způsob výroby pac lí taxe lu vzorce l

který spočívá v tom, že se

a) zavedou ochranné skupiny R a R' na hydroxylové skupiny v polohách 7 a 10 ve výchozím 10-deacetylbaccatinu vzorce III

io za vzniku chráněného derivátu obecného vzorce lila

kde R=R'= trichloracetyl nebo R' - acetyí a R znamená /ťrc-butoxykarbonyí nebo trichloracetyl,

CZ 300024 Bó

b) hydroxylová skupina v poloze 13 tohoto derivátu se esterifikuje kyselinou J-ťenyl-2-epoxypropionovou za vzniku meziproduktu obecného vzorce íllb

OR’ ' \

OP.

(Íllb),

HO

OaZ° O

c) v případě, že obé ochranné skupiny v polohách 7 a 10 jsou trichloracetylové skupiny, odstraní se tyto skupiny s následnou selektivní acetylací vzniklého meziproduktu v poloze 10 as následným otevřením epoxidu působením azidu sodíku za vzniku meziproduktu vzorce i ile

ííirc)_/ nebo io c') v případě, že R' = acetyl a R = trichloracetyl, otevře se epoxid působením azidu sodíku a současně se odstraní ochranná skupina v poloze 7 za vzniku téhož meziproduktu vzorce IIIc

d) azidoskupina v meziproduktu vzorce IIIc se redukuje na aminoskupinu za vzniku meziproduktu vzorce llíd

OAc

(Xlld)

CZ 3(10024 136

e) produkt vzorce llld se podrobí benzoylaci za vzniku výsledného paelitaxelu vzorce I.

Výchozím produktem je 10-deacetylbaccatin lil. (10-DAB III), který se extrahuje z listů Taxus baccata. V prvním stupni se tato látka kvantitativné esteriíikuje na hydroxylových skupinách na ; uhlíkových atomech v poloze 7 a 10, V případě, že R - R' - trichloracetyl, nechá se 10-DAB lil reagovat s trichloracety(chloridem v methylenchloridu v přítomnosti triethylaminu a v přítomnosti katalytického množství 4-dirnethylaminopyridinu (DMAP). V případě, že R je odlišné od R', uskuteční se nejprve selektivní acetylace 10-DAB lil působením anhydridu kyseliny octové v přítomnosti solí ceru skandia nebo ytterbia. s výhodou se použije CeCb.7H₂O. Výsledný kí baccatin NI se pak chrání na uhlíkovém atomu v poloze 7 při použití Zerc-butoxy kar bony lové nebo trichloracetylové skupiny. První z uvedených skupin je možno zavést reakcí baccatinu (II s /erc-butoxypyrokarbonátem v přítomnosti DMAP a ethyldiisopropylaminu nebo je možno použít postup, popsaný v US 5 917 062. Trichloracetylovou skupinu je možno do polohy 7 zavést reakcí s trichloraeetylchloridem v pyridinu.

V následujícím stupni b) se hydroxylová skupina v poloze 13 esterifíkuje působením kyseliny 3-fenyl-2-epoxypropionové, s výhodou působením amonné soli této kyseliny v toluenu v přítomnosti dicyklohexylkarbodi imidu (DMAP) a kyseliny p-toluensulfonové, čímž se získá ester baccatinu NI s kyselinou (2R,3R)-3-fenyl~2,3-epoxypropionovou.

V případě, že obě ochranné skupiny Rak' jsou trichloracetylové skupiny, je možno tyto skupiny odstranit při použití podmínek reakčních činidel, popsaných v publikacích Zheng a další, Tetrahedron Lett., 1995,36, 2001 a Datta a další, J. Org. Chem., 1995,60, 761. S výhodou se obě trichloracetylové skupiny odstraní působením 2 ekvivalentů hydroxidu amonného. Sloučeniny, zbavené ochranných skupin se pak selektivně acetylují v poloze 10 při použití anhydridu kyseliny octově v přítomnosti solí ceru, skandia nebo ytterbia, s výhodou se použije CeCl3.7H2O.

Výsledná látka se nechá reagovat s NaNj ve vodném methanolu v přítomnosti methylmraveněanu za podmínek, popsaných v publikaci Yamaguchi T., Tetrahedron Letters, 39, 5575-78, 1998 za vzniku odpovídajícího azidu.

V případě, že R znamená trichloracetyl a R' znamená acetyl (d), nechá se oxiran reagovat s NaN₃na odpovídající azid s následným odstraněním ochranné skupiny v poloze 7, což odpovídá sloučenině, získané ve stupni (c').

Azid se redukuje na amin v následujícím stupni (d). Redukci je možno uskutečnit působením vodíku v přítomnosti katalyzátoru nebo působením PPh₃. Získaný produkt se v posledním stupni (e) podrobí benzoylaci na aminoskupině, čímž se získá výsledný paclitaxel. Benzoylaci je možno uskutečnit působením anhydridu kyseliny benzoové, tento postup je možno provádět současně to s redukcí nebo následně na izolovaném redukovaném produktu při použití stech iometrického množství benzoyIchloridu v přítomnosti uhličitanu draselného.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Syntéza 7—trichloracetyl baccatinu NI

V baňce s okrouhlým dnem s objemem 25 ml se rozpustí 0,603 g, 1,03 mmol, 1,0 ekvivalentu 55 baccatinu 3 za míchání magnetickým míchadlem v 9,7 ml bezvodého pyridinu při teplotě 25 ^ŮC

CZ 300024 !Ϊ6 v atmosféře dusíku, Do vzniklého čirého světle žlutého roztoku se po kupkách přidá 138 μΐ,

1.23 mmol, 1.23 ekvivalentu trichloracetylehloridu. 30 minut po skončeném přidávání se vytvoří bílá sraženina. Do reakční suspenze se po kapkách přidá ještě 120 μΐ, 1.07 mmol, 1 ekvivalent trichloracetylehloridu za svrchu uvedených podmínek. Po 20 minutách vznikne žlutohnědý roztok. Pomoeí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi n-hexanu a ethy láce tátu v poměru 2:3 je možno prokázat téměř úplnou přeměnu výchozího baccatínu 111, Reakční směs se zředí inethylenchloridem. Výsledný roztok se opakovaně promyje nasyceným vodným roztokem síranu měďnatého až do úplného odstranění pyridinu, takže již roztok není modře zbarven. Organická fáze se zahusti ve vakuu, vysuší se síranem horečnatým, z filtruje a rozpouštědlo se odpaří, čímž jo se získá 0.612 g běložlutého prášku, který je tvořen 7-trichloracetylbaccatinem U1 s následujícími spektroskopickými vlastnostmi.

Ή NMR (400 MHz, CDCl,): ó_ppríl - 1,08 fs, 3H, Me), 1,13 (s, 3H, Me), 1,86 (s, 3H, Me), 1.97 (ddd, 1H,= 14,4 Hz, J₂ - 10,3 Hz, f - 1,9 Hz, C6-H), 2,13 (d, 3H. ,/ = 1,2 Hz, Me), 2,15 (s, 3H, Me), 2,30 (s, 3H, Me), 2,32- 2,28 (m, 2H, C14-HJ, 2,68 (ddd, IH, = 14,4 Hz, ./,-9.3 Hz, ,/₃ - 7,3 Hz, C6-H), 4,04 (d, IH. 7- 7,0 Hz, C3-H), 4,17 (dd. IH, ./, = 8,4 Hz, .Λ - 1,0 Hz, C20-H), 4,34 (d, 1H, 7 = 8,4 Hz, C20-H), 4,86 (t, 1H, 7 = 7,5 Hz, C13-H), 4,98 (dd, IH, 7, = 9,5 Hz,7₂= 1,7 Hz, C5-H), 5,65 (d, 1H,7=7,O Hz, C2-H), 5,70 (dd, 1H,7, - 10,4 Hz, 7₂ = 7 A Hz, C7-H), 6,42 (s, IH, C10-H), 7,52 - 7,46 (m, 2H, arom.), 7,62 (rn, ÍH, arom.), 8,10 (rn, 2H, arom.); ¹³C NMR (100 MHz. CDC1₃): o_pprn = 10,8, 15,5, 20,4,20,9.22,8,26.9,32,5,38,6, 43,0, 47,2, 56,2, 68,1, 74,5, 75,5, 76,5, 77,0, 79,0, 80,5, 83,7, 89,9, 129,0, 129,4, 130,3, 132,0, 134,0, 145,4, 160,8, 167,2, 169,2, 171,0,201,9.

Příklad 2

Syntéza (2'R,3'R)-7-trichloracetylbaccatin 111-13-(3 -fenyl-2',3'-epoxypropionátu)

0,164 g, 1,00 mmol, 1 ekvivalent čerstvě připravené kyseliny 3~fenyl-2-epoxypropionové se rozpustí při teplotě 0 °C ve 30 ml bezvodého toluenu. Pak se v atmosféře dusíku při teplotě 0 °C přidá 0,5 g, 1 mmol, 0,68 ekvivalentu 7-(trichloracetyl)-baccatinu III (7-(TCA)-baccatmu III). Pak se postupné přidá 0,21 g, 1,00 mmol, 1,0 ekvivalentu dicyklohexylkarbodiimidu (DCC). 0,084 g, 0,68 mmol. 0,66 ekvivalentu 4-dímethylaminopyridinu DMAP a 0,17g, 0,10 mmol, 0,1 ekvivalentu kyseliny p-toluensulfonové (p-TSA). Pak se roztok zahřívá pod dusíkem za míchání magnetickým míchadlem na teplotu 70 °C. Postup reakce se sleduje pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi n-hexanu a ethyíacetátu v poměru 3:2. První skvrna s R_f= 0,28 odpovídá epoxyesteru 7-(TCA)~baccatinLi III. Druhá skvrna s R_f 7 0,11 odpovídá 7-(TCA)-baccatínu lil. Po 3 hodinách se směs zchladí a ze suspenze se odfiltruje pevná látka. Vysrážená dicyklohexylmočovina (DCD) se promyje methylenchloridem. Organické frakce se spojí a odpaří se do sucha. Získá se 0,919 g surového produktu, který se chromatograťuje rychlou chromatografií při použití oxidu křemičitého a směsi n-hexanu a ethyíacetátu 3:2. Získá se 0,100 g, 0,14 mmol, 20 % nezreagovaného 7-TCA-baccatinu lil a 0,435 g, 0,49 mmol, 73 % (2'R,3'R)-7-trichIoracetylbaccatin ffí-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropíonátu) s následujícími spektroskopickými vlastnostmi.

'H NMR (400 MHz, CDCIj): δ_ρρ1„ = 1,11 (bs, 6H, 2Me), 1,25 (bs, IH, OH), 1,76 (d, 3H,

7= 1,2 Hz, Me), 1,84 (s, 3H, Me), 2,02 - 1,92 (m, 3H, C14-H₂ + C6-H), 2,13 (s, 3H, Me),

2,39(s, 3H, Me), 2,69 (ddd, IH, 7, = 14,6 Hz, 7, = 9,3 Hz, J_} «= 7,3 Hz, C6-H), 3,92 (d, IH,

7= 6,9 Hz, C3-H) +, 3,97 (d, IH. 7 - 4,7 Hz, C2'-H), 4,15 (dd, IH, 7, = 8,4 Hz, 7, = 1,0 Hz,

SO C20-H), 4,31 (d, IH, 7= 8,3 Hz, C20-H), 4,33 (d, IH, 7= 4,7 Hz, C3'-H), 4.97 (dd, IH,

7, = 9,5 Hz, 7₂ = 1,8 Hz, C5-H), 5,63 (d, 1H, 7 = 6,8 Hz, C2-H), 5,65 (dd, 1H, ./, = 10,7 Hz,

7₂ = 7,33 Hz, C7-H), 6,02 (dt, 1H,7, = 8,8 Hz,7₂= 1,8 Hz, CI3-H), 7,45 - 7,30 (m, 5H, arom,),

6,34 (s, 1H, C10-H), 7,49 (m, 2H, arom.), 7,64 (m, 1H, arom.), 8,00 (m, 2H, arom.); ^,JC NMR (100 MHz, CDCIj): 6_ppra = 10,8, 14,9, 20,8, 21,0, 22,5, 26,5, 32,4, 35,7, 43,2, 46,7, 56.0, 56,1,

Příklad 3

Syntéza (2'R,3'R)-baccatin III— 13—{3 '-azido-2 -hydroxy-3 -fenylpropionátu)

V baňce s okrouhlým dnem s jedním hrdlem s objemem 25 ml, opatřené magnetickým míchadlo lem se při 25 ^,:C uvede do suspenze 0,397 g, 0,45 mmol, l ekvivalent (2'R.3'R)-7-trichloracetylbaccatin 111-13-(3'-fenyl~2',3'-epoxypropionátu) v 10,0 ml methanolu. Pak se postupně přidá

1,26 ml vody, 1,26 ml HCOOCH₃ a 0,735 g, 11.3 mmol, 25,0 ekvivalentu azidu sodíku. Teplota se zvýší na 50 °C a průběh reakce se sleduje pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu, ethylacetátu a methanolu 12,0:2,0:0,3. Je možno pozorovat vymizení výchozí látky a současnou tvorbu dvou produktů s Rf = 0,22 a 0,29. Produkt s Rf = 0,29 byl identifikován jako výsledný produkt, zatímco produkt s R_f= 0,22 byl identifikován jako (2'R,3'R)-baccatin 111-13(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionát), který se vytvořil jako reakční meziprodukt. V průběhu času se zvyšuje množství produktu s R_f= 0,29 na úkor produktu s R_t = 0,22. Po 46 hodinách má reakční roztok žlutohnědé zbarvené a obsahuje bílou sraženinu, kterou jc nezreagovaný NaN₃. Reakce se po 46 hodinách zastaví přidáním vody a při analýze je možno pozorovat 2 další skvrny s Rf 0,38 a 0.13, jde o neizolované produkty rozkladu. Vysrážená mléčně bílá pevná látka se odfiltruje a promyje se vodou a pak ethylacetátem. Vznikne dvoufázová směs s dvěma čirými fázemi, které se od sebe oddělí. Vodná fáze se třikrát extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí a vysuší síranem hořečnatým. Směs se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá 0,335 g bělo25 žlutého prášku. Tento surový produkt se čistí rychlou chromatografií při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu, ethylacetátu a methanolu 12:2:0,3, čímž se získá 0,279 g, 0,36 mmol, 80 % (2'R,3'R)-baccatin II1-13-(3'-azido-2'-hydroxy-3-fenylpropionátu). Rf = 0,22.

Výsledný produkt má následující spektroskopické vlastnosti.

Příklad 4

Syntéza N-debenzoylpaclitaxelu

V okrouhlé baňce s okrouhlým dnem s objemem 25 ml se dvěma hrdly se rozpustí 0,102 g, 0.13 mmol, LO ekvivalentu (2'R,3'R)-baccatin III—13—(3'-azido-2'-hydroxy-3-fenyIpropioná50 tu) v 5,2 ml čerstvě destilovaného methylenchloridu a výsledný světle žlutý roztok se smísí s

0,05 ml vody a pak se přidá 0,071 g, 0,26 mmol, 2,0 ekvivalentu PPh₃. Směs se nechá reagovat při teplotě místnosti za míchání magnetickým míchadlem. Po 16 hodinách se složení reakční směsi prokazuje pomocí TLC při použiti oxidu křemičitého a smési chloroformu a methanolu

9:1. Výchozí produkt o Rf- 0,61 vymizel aje možno pozorovat skvrnu s R_f = 0,19, Reakce se zastaví zředěním svede žluté směsi s bílou sraženinou přidáním chloroformu. Pak se směs promyje destilovanou vodou a pak nasyceným vodným roztokem chloridu sodného. Jasně žlutá organická táze se vysuší síranem horečnatým, zfiltruje se a rozpouštědlo sc odpaří. Získá se

0,177 g okrové žlutého oleje, Tento surový produkt se podrobí rychlé chromatografii při použití ? oxidu křemičitého a směsi chloroformu a methanolu 9:1, čímž se získá 0,074 mg, 0,10 mmol, % N-debenzoylpaelitaxelu jako světle žlutého prášku.

'H NMR (400 MHz, CDCl,): 6_ppm - 1,07 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,38 - 1,22 (bs, 2H.

2Í)H), 1,75 (s, 3H. Me), 1,88 (s, 3H, Me), 1.90 (s, 3H, Me), 1,93 (s, 3H, Me), 2,20 - 1,96 (m, 6H, io C14-TL + C6-H. NfL + OH), 2,52 (ddd, 1H,./, - 15.7 Hz,-A =9,5 Hz, ./, = 5.9 Hz, C6-H), 3,88 (d, IH, J = 7,2 Hz, C3-H), 4,10 (d, IH, ./ = 4,0 Hz, C20-H), 4,17 (d, IH, ./= 4,0 Hz, C20-H),

4.22 (d, IH. J = 8.0 Hz, C2'-H), 4,26 (d, IH. J = 8,0 Hz, C3'-H), 4,56 (dd, 1H, J, = 11,6 Hz,

T - 6,9 Hz, C7-H), 4,84 (d, IH, J - 8,8 Hz, C5-H), 5,83 fd, 1H, J = 7,2 Hz, C2-H), 6,25 (t, 1H,

J - 8.0 Hz. C13-H), 6.51 (s, IH, C10-H), 7,20 - 7,00 (m, 8H, arom.), 8,13 (m, 2H, arom.); 15 ^!;,C NMR (100 MHz, CDCfi): ó_ppm = 9,8, 15,2, 21,1, 22,0, 22,7, 27,0, 30,0, 35,4, 35,8, 43,3, 45,

58,7, 71,3, 72.3, 75,2, 75,8, 76,6, 79,3, 81,2, 84,6, 127,2, 128,5, 128,9, 129,0, 129,4, 130,3,

133,1, 134,1, 142,6, 167,1, 170,4, 171.5, 173,2,203,9.

Příklad 5

Syntéza paclitaxelu

V baňce s okrouhlým dnem s objemem 10 ml se rozpustí 0,031 g, 0,041 mmol, 1,0 ekvivalentu

N-debenzoyl paclitaxelu v 1,25 ml ethylacetátu. K čirému žlutému roztoku se přidá 1,25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhiičitanu sodného. Do vzniklé dvoufázové směsi se za energického míchání magnetickým míchadlem po kapkách přidá 7,1 ml, 0,064 mmol, 1,5 ekvivalentu benzoylchloridu. Reakce se sleduje pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu a methanolu 9:1. Po vymizení výchozí látky je možno pozorovat jedinou skvrnu s

Rf = 0,50. Reakční směs se zředí ethylacetátem. Organická ťáze se oddělí od vodné fáze a vodná fáze se 3krát extrahuje ethylacetátem. Organické fáze se spojí, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří. Získá se 0,037 g surového produktu, který se rozpustí ve směsi methylenchloridu a ethyletheru 1:1 a pak se přidá 0,030 g, 0,035 mmol, 86 % n-pentanu k vysrážení paclitaxelu, který má spektroskopické vlastnosti, popsané v literatuře.

Příklad 6 ......

Syntéza (2'R,3'R)-7,l0-bÍs-trichloracetyl-l0-deacetylbaccatÍn 111-13-(3 -feny 1-2',3'-epoxy40 propionátu)

V baňce s okrouhlým dnem s objemem 100 ml se při teplotě 0 °C rozpustí 0,178 g, 1,09 mmol, 1,0 ekvivalentu čerstvě připravené kyseliny 3-fenyl-2-epoxypropionové ve 30 ml bezvodého toluenu. Ve výsledném roztoku se v atmosféře dusíku při teplotě 0 °C uvede do suspenze 0,663 g,

0,79 mmol, 0.73 ekvivalentu 7. i0-bis~(trichloracetyl)-10-deacetylbaccatinu 111, 7,10-bis— (TCA)-10-DAB IH. Pak se postupné přidává 0,224 g, 1,09 mmol, 1,0 ekvivalentu dicyklohexylkarbodiimidu (DCC), 0,088 g, 0,72 mmol, 0,66 ekvivalentu 4-dimethylaminopyridÍnu. (DMAP) a 0,19g, 0,11 mmol, 0,1 ekvivalentu kyseliny p-toluensulfonové. Reakce se provádí v heterogenní fázi při teplotě 70 °C za míchání magnetickým míchadlem a pod proudem dusíku.

Průběh reakce se sleduje pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi n-hexanu a ethylacetátu 3:2. První skvrna o Rf = 0,28 odpovídá epoxyesteru 7,l0-bis-(TCA)-10-DAB III. Druhá skvrna o R_f = 0,15 odpovídá 7,10—bis—(TCA)—10—DAB III. Po 3 hodinách se sinés zchladí a pevný podíl se ze suspenze odfiltruje. Tmavě žlutá sraženina se promyje methy lenchloridem, zbývající bílá sraženina je DCU. Spojené organické frakce se odpaří a výsledný pevný odparek se podrobí rychlé chromatografii na oxidu křemičitém při použití směsi n-hexanu a ethylacetátu

CZ 500024 B6

3:2. čímž se získá 0,63 g výsledného (2'R,3'R)-7,10-bis-trichloraeetvI-10-deacetvIbaccatin l ϊ I— 13—<3'—feny I—2',3'—epoxypropionátu >.

Ή NMR (400 MHz. CDClj: Ó_ppm - 1.12 (s, 3H, Me), 1,14 (s, 3H, Me). 1,76 - 1.60 (rn, 2H, Có-H + OH), 1,81 Cs, 3H. Me), 1,88 (s, 3H, Me), 2,04- 1,98 (rn. 2H, Cl 4-H). 2,41 (s, 3H, Me), 2.69 (ddd, IH,7, - 14,5 Hz, 7> = 9,3 Hz, f = 7,3 Hz, C6-H), 3,89 (d, IH, 7 = 7,2 Hz, C3-H),

ID

3,98 (d. IH, 7 = 4.0 Hz. C2'-H), 4,14 (d. IH, 7= 8,0 Hz, C20-H), 4,32 (d, IH, 7 = 8,0 Hz, C20-H), 4.34 (d, 1 H, 7 = 4,0 Hz, C3'-H), 4,97 (d, IH, 7- 7,6 Hz, C5-H), 5,70 - 5,62 (m, 2H, C7-H + C2-I-1), 6.05 (dt, IH, 7, - 8,4 Hz. 7₂ - 1,0 Hz, C13-H), 7.52 - 7,30 (m, 7H, ArH), 6,39 (s, IH. CI0-H), 7,45 (m, 114, ArH), 7,99 (m, 2H, ArH); ^I;’C NMR (100 MHz, CDClj: Ó_ppm = 10,9. 15.1,20,8, 22,6, 26,3, 32,5, 35,6, 43,1,46,7, 55,9, 56,5, 58,0, 70,8, 74.2, 76,4, 78,6, 78,9, 80,5, 83,5, 89,5, 89,6, 126.8, 128,8, 129,0, 129,1, 129,4, 130,2, 131,5, 132,5, 134,2, 143,3, 160.6, 161,1, 166,3, 167,0, 170,3, 199,5.

Příklad 7

Syntéza(2'R,3'R)-IO-deaeetylbaeeatin ΙΙΪ-13-(3-fenyl-2',3'-epoxypropionátu)

V baňce s okrouhlým dnem s objemem 25 ml se uvede do suspenze 0,174 g, 0,18 mmol, 1,0 ekvivalentu (2'R,3'R)-7,10-bis(TCA)-l0~DAB ÍII-13-(3'-fenyl-2',3'-epoxypropionátu) ve 3 ml methanolu. Výsledná suspenze se zchladí na 0 °C a za energického míchání magnetickým míchadlem sc po kapkách přidá 0,24 ml, 0,36 mmol, 2,0 ekvivalentu 1,57M vodného roztoku NH;. Reakce se nechá probíhat 15 minut při teplotě 0 °C, v průběhu této doby se barva suspenze změní na žlutozelenou. Pak se směs zahřeje na teplotu místnosti a nechá se ještě 5 minut reagovat k úplnému rozpuštění sraženiny, čímž se získá čirý žlutozelený roztok. Úplné vymizení výchozích látek je možno ověřit pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi n-hexanu a ethylacetátu 3:2, je možno pozorovat jedinou skvrnu na základní čáře. Reakční směs se zředí vodou, čímž vznikne mléčně bílý roztok, organická fáze se 3krát extrahuje ethylacetátem, po jo přidání organického rozpouštědla vznikne emulze, která opět zanikne rozpuštěním chloridu sodného. Organické fáze se spojí, vysuší se síranem hořečnatým, z filtruj í a rozpouštědlo se odpaří. Tímto způsobem se získá 0,194 g bílého prášku, kterým je výsledný (2'R,3'R)-10-deacetyl· baccatin HI-13-(3'-fenyÍ-2',3'-epoxypropionát).

¹H NMR (400 MHz, CDCfi): S_ppni = 1,05 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,71 (s, 3H, Me), 1,72 (d, 3H, 7= 1,2 Hz, Me), 1,83 (m, IH, C6-H), 1,95 (2H, d,7= 8,8 Hz, Cl 4-H J, 2,34 (s, 3H, Me), 2,58 (ddd, IH, 7, = 14,6 Hz, 7₂ = 9,9 Hz, 7₃ = 6,9 Hz, C6-H), 3,85 (d, 1H, 7 = 7,3 Hz, C3-H), 3,95 (d, 1H, 7 = 4,4 Hz, C2'~H), 4,14 (d, 1H, 7 - 8,4 Hz, C20-H), 4,22 (dd, 1H, 7, = 11,3 Hz, 7₂ - 6,6 Hz, C7-H), 4,27 (d, l H, 7 = 8,4 Hz, C20-H), 4,31 (d, 1H, 7 = 4,4 Hz, C3'-H), 4,95 to (ď, IH, 7= 8,8 Hz, C5-H), 5,16 (s, IH, C10-H), 5,59 (d, 1H,7=7,3 Hz, C3-H), 5,99 (dt, IH, (d, IH. 7, = 8,8 Hz, 7> = 1,2 Hz, C7-H), 7,30 - 7,50 (m, 7H, arom.), 7,60 - 7,70 (m, 1H, arom.), 7,90 - 8,00 (m, 2H, arom.).

- :ΐ 45 Příklad 8

Syntéza (2'R,3'R)-baccatÍn Iíf-13-(3'-feny 1-2',3'-epoxypropionátu)

Kroztoku 138 mg (2'R,3'R)-10-deacetylbaccatin 111-13-(3 -feny 1-2', 3 -epoxypropionátu) ve

3 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 7,3 mg CeCl₃.7H₂O a 0,073 ml anhydridu kyseliny octové. Reakční směs se míchá 5 hodin při teplotě místnosti, v průběhu této doby se reakční směs stane homogenní. Přidá se 1 g ledu a směs se míchá ještě 1 hodinu. Organické rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se zředí 5 ml vody. Vytvořená sraženina se odfiltruje a suší ve vakuu

CZ .5110024 B6 celkem 18 hodin. Výsledný produkt má formu bílého prášku, získá se celkem 130 mg tohoto produktu s následujícími vlastnostmi:

‘1-1 NMR (400 MHz, CDCb): ó_FprTl - 1,05 (s, 3H, Me), 1,09 (s, 3H, Me), 1,71 (s, 3H, Me), 1,72 (d, 3H,./~ l,2Hz,Me), 1,83 (m, 1H,C6-H), 1,95 (2H, d, J-8,8 Hz, Cl4-lb), 2,34 (s, 3H, Me)_?

2,58 (ddd, 1H,./, --= 14,6 Hz, Z - 9,9 Hz, fl = 6,9 Hz, C6-H), 3,85 (d, 1H, J = 7,3 Hz, C3-H), 3,95 (d. 1H, .J = 4.4 Hz, C2'-H), 4,14 (d, IH, J 8,4 Hz, C20-H), 4,22 (dd, IH, 7, = 11,3 Hz, .A-6,6 Hz, C7-H), 4.27 (d, IH, V - 8,4 Hz, C20-H), 4,31 (d, IH. J = 4,4 Hz, C3'-H), 4,95 (d, 1H, J = 8,8 Hz, C5-H), 5,59 (d, IH, J = 7,3 Hz, C3-H), 5,65 (dd, 1H, .7, - 10,7 Hz, fl = 7,33 io Hz, C7-H), 6,34 (s, IH, C10-H), 7,30 - 7,50 (m, 7H. arom.), 7,60- 7,70 (m, IH, arom.),

7,90 - 8.00 (rn, 2H, arom.).

Příklad 9

Syntéza (2'R,3'R)-baccatin IH~13-(3'~azido-2-hydraxy-3'-fenylpropionátu)

V bance s okrouhlým dnem s objemem 25 ml s jedním hrdlem, opatřené magnetickým míchadlem se při teplotě 25 °C uvede do suspenze 0,17 g, 0,45 mmol, 1 ekvivalent (2'R,3^řR)-baccatin

111-13-(3-fenyl-2',3'-cpoxypropionátu) v 5 ml methanolu. Pak se postupně přidá 0,63 ml vody,

0,23 ml HCOOCHj a 0,36 g, 5,5 mmol, 12,5 ekvivalentu azidu sodíku. Směs se zahřeje na 50 °C a průběh reakce se sleduje pomocí TLC při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu, ethylacetátu a methanolu 12,0:2,0:0,3. Po 46 hodinách má reakční roztok žlutohnědé zbarvení a obsahuje bílou sraženinu, kterou je nezreagovaný NaNí. Reakce se po 46 hodinách zastaví přidáním 10 ml vody. Vysrážená mléčně bílá pevná látka se odfiltruje a promyje se vodou a pak ethylacetátem. Vznikne dvoufázová srněs s dvěma čirými fázemi, které se od sebe oddělí. Vodná fáze se třikrát extrahuje ethylacetátem, organické fáze se spojí a vysuší síranem hořečnatým. Směs se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá 0,20 g běložlutého prášku. Tento surový produkt sc čistí rychlou chromatografií při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu, ethylacetátu a methanolu 12:2:0,3, čímž se získá 0,140 g, (2'R,3'R)-baccatin III-13-(3 -azido2'-hydroxy-3 -fenylpropionátu).

Výsledný produkt má stejné spektroskopické vlastnosti jako sloučeniny, připravená podle příkladu 3.

ť\ (7 300024 B6

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY h Způsob výroby paclitaxelu vzorce ÍH, vyznačující se tím, že se io a) zavedou ochranné skupiny R a R' na hydroxylové skupiny v polohách 7 a 10 ve výchozím 10-deacetylbaccatinu vzorce lil ITT) za vzniku chráněného derivátu obecného vzorce ílla (lila) 15 kde R--R - trichloracetyI nebo Rř = acetyl a R znamená /erc-butoxykarbonyl nebo trichloracetyl, - 10CZ 300024 Bó b) hydroxy lová skupina v poloze 13 tohoto derivátu se esteriťikuje kyselinou 3-íenyl-2<poxypropioiiovou za vzniku meziproduktu obecného vzorce 111b e) v případě, že obé ochranné skupiny v polohách 7 a 10 jsou triehloracetylové skupiny, 5 odstraní se tyto skupiny s následnou selektivní acetylací vzniklého meziproduktu v poloze 10 a s následným otevřením epoxidu působením azidu sodíku za vzniku meziproduktu vzorce lile nebo jo c') v případě, že R' = acetyl a R = trichloracetyl, otevře se epoxid· působením azidu sodíku a současně se odstraní ochranná skupina v poloze 7 za vzniku téhož meziproduktu vzorce IIIe d) azidoskupina v meziproduktu vzorce Hic se redukuje na aminoskupinu za vzniku meziproduktu vzorce ÍÍId (rud)

1 1 ί’Ζ 31)0024 Β6

e) produkt vzorce Ilid se podrobí bcnzoylaei za vzniku výsledného paclitaxelu vzorce í.

2. Způsob podle nároku I.vyznačující se t í m , že se na hydroxylové skupiny meziproduktu vzorce III v polohách 7 a 10 zavedou trichloracetylové skupiny reakcí s trichloracetyI5 chloridem v melhy lenchloridu v přítomnosti triethylaminu a katalytického množství 4-dimethylaminopyndinu.

3. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c í se t í m , že se meziprodukt vzorce III nejprve acetyluje v poloze 10 reakcí s anhydridem kyseliny octové v přítomnosti soli ceru, skandia nebo jo ytterbia a pak se na hydroxylovou skupinu v poloze 7 zavede Λ/rc-butoxykarbonylová nebo trichloracety lová skupina.

4. Způsob podle nároku 1, vy z n a č u j í c í se t í m , že se hydroxylová skupina v poloze 13 estcrifikuje působením amonné soli kyseliny lěny[-2 epc\\propionove v toluenu v přítom15 nosti dicyklohexylkarbodiimidu, dimethylaminopyrídinu a kyseliny p-toluensulfonové.

5. Způsob podle nároku I, v y z n a č u j t c í se t í m , že se ochranné skupiny ve významu [< a R' odstraní působením hydroxidu amonného v případě, že běží o trichloracetylové skupiny.

20 ó. Způsob podle nároku 1, v y z n ač u j í c í se t í m . že se epoxid otevře působením NaNi ve vodném methanolu v přítomnosti methylenmraveněanu.

7. Způsob podle nároku I,vyznačuj ící se t í m , že se azid redukuje na amin působením vodíku v přítomnosti katalyzátoru nebo působením trifenylfosfinu.

3. Způsob podle nároku 1, v y z n a č uj í c í se t í m , že se benzoy láce v posledním stupni provádí působením anhydridu kyseliny benzoové současné s redukcí nebo následně na izolovaném redukovaném produktu působením benzoy lehloridu v přítomnosti uhličitanu draselného.

jo 9. Sloučeniny obecného vzorce Illb kde R a R' mají význam uvedený v nároku 1 nebo znamenají atomy vodíku.