SK17532001A3

SK17532001A3 - Pyrazinónové inhibítory trombínu, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Info

Publication number: SK17532001A3
Application number: SK1753-2001A
Authority: SK
Inventors: Christopher S. Burgey; Kyle A. Robinson; Peter D. Williams; Craig A. Coburn; Terry A. Lyle; Philip E. Sanderson
Original assignee: Merck & Co., Inc.
Priority date: 1999-06-04
Filing date: 2000-06-01
Publication date: 2002-05-09
Also published as: WO2000075134A1; DZ3264A1; NO20015887L; HUP0202366A2; HK1047277A1; AU5457100A; CA2373999C; TR200103491T2; US6455532B1; IL146393A0; PL352558A1; HUP0202366A3; ES2190417T3; EP1189899B1; BR0011260A; ATE232527T1; CZ20014343A3; DE60001414T2; JP2003501426A; KR20020029653A

Description

-1 - TH¥S5^

Pyrazinónové inhibítory trombínu, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie

Oblasť techniky

Vynález sa týka pyrazinónových inhibítorov trombínu, farmaceutických prostriedkov s ich obsahom a ich použitia na inhibíciu trombínu v krvi.

Doterajší stav techniky

Trombín je serínová proteáza prítomná v krvnej plazme vo forme prekurzora, protrombínu. Trombín hrá hlavnú úlohu v mechanizme krvnej koagulácie konvertovaním roztoku plazmového proteínu, fibrinogénu, na rozpustný fibrín.

Edwards a ďalší, J. Amer. Chem. Soc., (1992), zväzok 114, strany 1854 až 63 opisuje peptidyl-a-ketobenzoxazoly, ktoré sú reverzibilnými inhibítormi serínovej proteázy ľudskej leukocytovej elastázy a prasačej panreatickej elastázy.

Európska prihláška 363 284 opisuje analógy peptidázových substrátov, v ktorých sa dusíkový atóm ľahko štiepiteľnej amidovej šupiny peptidového substrátu nahradil vodíkom alebo substituovanou karbonylovou skupinou.

Austrálska prihláška 86245677 tiež opisuje peptidázové inhibítory, ktoré majú aktivovanú elektrofilnú ketónovú skupinu, ako je fluórmetylénketón alebo a-keto-karboxylové deriváty. R. J. Brown a ďalší, J. Med. Chem., zväzok 37, strany 1259 až 1261 (1994) opisuje orálne aktívne, nepeptidové inhibítory ľudskej leukocytovej elastázy, ktoré obsahujú trifluórmetylketónovú a pyridinónovu skupinu. H. Mack a ďalší, J. Enzýme Inhibition, zväzok 9, strany 73 až 86 (1995) opisuje tuhé amidinofenylalanínové inhibítory trombínu, ktoré obsahujú pyridinónovú skupinu ako štruktúru centrálneho jadra.

Podstata vynálezu -2-

Vynález zahrnuje zlúčeniny na inhibíciu straty krvných doštičiek, inhibíciu tvorby agregátov krvných doštičiek, inhibíciu tvorby fibrínu, inhibíciu tvorby trombu, a inhibíciu tvorby embolu u cicavcov, ktoré zahrnujú zlúčeninu podľa vynálezu vo farmaceutický prijateľnom nosiči. Tieto zlúčeniny môžu voliteľne zahrnovať antikoagulanty, antiplateletné látky a trombolytické látky. Tieto zlúčeniny sa môžu pridať do krvi, krvných produktov, alebo cicavčích orgánov za účelom dosiahnutia žiadaných inhibícií.

Tento vynález tiež zahrnuje zlúčeniny na prevenciu alebo liečbu nestabilnej angíny, neustupujúcej angíny, infarktu myokardu, prechodných ischemických záchvatov, atriálnej fibrilácie, trombotickej porážky, embolickej porážky, hlbokej žilovej trombózy, roztrúsenej intravaskulárnej koagulácie, očného zhromažďovania fbrínu, a reoklúzie alebo restenózy rekanalizačných ciev v cicavca, ktoré zahrnujú zlúčeninu podľa vynálezu vo farmaceutický prijateľnom nosiči. Tieto zlúčeniny môžu voliteľne zahrnovať antikoagulanty, antiplateletné látky a trombolytické látky.

Tento vynález tiež zahrnuje spôsob redukovania trombogenicity povrchu u cicavca naviazaním zlúčeniny podľa vynálezu na povrch, buď kovalentne alebo nekovalentne.

Podstatou vynálezu sú pyrazinónové inhibítory trombínu použiteľné napríklad na prevenciu koronárnych tepnových chorôb všeobecného vzorca I

X

kde W je vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) vodík, 2) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo -3- b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) C^alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, iv) CONH2, v) CH2OH, vi) ŠO2NH2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, x) ' C3.7cykloalkyl, xi) CF3, xii) OCF3i xiii) N(CH3)2, xiv) C^alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) C1.4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) C-utioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C-ualkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) SO2NH2, g) halogén, -4- h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykIoalkyl, k) CF3i l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci^alkylaryl, p) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci-4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 4) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický neheterocyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci.4alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R’ je vodík alebo Ci-4alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) SO2NH2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C^cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci.4alkoxy, -5- q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ciwjtioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) CF3, 6) C3-7cykloalkylf nesubstituovaný, monosubstituovaný halogénom alebo arylom alebo disubstituovaný halogénom, 7) C7.i2bicyklický alkyl, 8) C i o-ι et ricy kl ický alkyl, 9) R2(GH2)m— C-j Ŕ'2 kde m je 0 až 3 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne R2 kde p je 1 až 4, 10) H-C-(CH2)p· OR2

kde m je 0 až 3,

13) R2(CH2)m—kde m je 0 aleb0 1 ’ 14) R2-OC-CH2 -6- R12 15) R2-C-(CH2)m— | Ŕ12 kde m je O až 3 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R12 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3-7cyklo-alkylom, R12 16) R2CH2 C—(CH2)q —| Ŕ12 kde q je 0 až 2 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R12 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3_7cyklo-alkylom, R2 17) H—C—(CH2)r —{ R2 kde r je 0 až 4 a R2 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R2 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3.7cykloalkylom, C7.i2bicyklickým alkylom, C10-16tricyklickým alkylom, alebo 5- až 7-členným mono-alebo 9- až 10-členným kondenzovaným bicyklickým heterocyklickým kruhom, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje jeden až tri heteroatómy zo skupiny zahrnujúcej N, O a S. 18> R2(CH2) o—(CH2)p — í kde n a p sú nezávisle 1 až 4, -7- R12R12 ? 1 1 19) R-C-C— Ŕ12Ŕ12 kde R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, R2CH2 I 4 20) H—C—| R2CH2 a 21) ^ (CH2)qs^ N—(CH2)t:—í R2(CH2)q kde t je 1 až 4 a q je nezávisle 0 až 2; R2 je vybrané zo skupiny obsahujúcej: 1) vodík, 2) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) Ci^alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR’, kde R' je vodík alebo C^alkyl iv) conh2, V) ch2oh, vi) so2nh2i vii) halogén, · viii) amino, -8- ix) aryl, x) C3.7cykloalkyl, xi) cf3, xii) ocf3, xiii) N(CH3)2, xiv) Ci.3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Či-4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) C-Mtioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci.4alkyl, d) CONH2i e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, -9- q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú bud\1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci.4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 4) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický neheterocyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci.4alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) so2nh2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, q) FwHxC(CH2)o.iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci^tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) Ci-7alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) hydroxy, b) COOH, c) halogén, -10- d) amino, e) a ryl, f) C3.7cykloalkyl, g) CF3, h) N(CH3)2, i) C^alkylaryl, j) heterocyklický kruh, k) C^alkoxy, l) C^tioalkoxy, alebo m) kyanoskupina, 6) CF3, 7) C3.7cykloalkyl, nesubstituovaný, monosubstituovaný halogénom alebo arylom alebo disubstituovaný halogénom, 8) C7-i2bicyklický alkyl, 9) C i o-ι etricy kl i cký alkyl, R3 a X sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej: 1) vodík, 2) halogén, 3) kyano, 4) Ci^alkyltio, 5) Ci^alkylsulfinyl, 6) Ci-4alkylsulfonyl, 7) Ci.4alkyl, 8) C3.7cykloalkyl, a 9) trifluórmetyl; A znamená

kde Y1 a Y2 sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej: -11 - 1) vodík, 2) Ci^alkyl, 3) Ci^alkoxy, 4) FuHvC(CH2)o-iO-, kde u a v sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak u je 1, v je 2 a ak u je 2, v je 1, 5) C3.7cykloalkyl, 6) Ci.4alkyltio, 7) C-ualkylsulfinyl, 8) Ci^alkylsulfonyl, 9) halogén, 10) kyano, a 11) trifluórmetyl; a pričom b je 0 alebo 1; a R12 je vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) vodík, 2) halogén, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) C^alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR', kde R' je vodík alebo Ci^alkyl, iv) conh2, V) ch2oh, vi) so2nh2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, -12- x) C3-7cykloalkyl, xi) CF3, xii) OCF3l xiii) N(CH3)2, xiv) Ci.3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Ci^alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) Ci-4tioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 4) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C-i^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C-Mälkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, h) amino, i) aryl, j) C3.7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, - 13- r) CMtioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický neheterocyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2i g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2i n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci.4alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, xje1, r) Ci^tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 6) bifenyl, 7) CF3, 8) C3.7cykloalkyl, 9) C7-i2bicyklický alkyl, a 10) Cio-i6tricyklický alkyl; alebo ich farmaceutický prijateľné soli. -14- V triede zlúčenín sú Y1 a Y2 nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, Ci.4alkyl, halogén, Ci^alkyltio, Ci^alkylsulfinyl, Ci_4alkylsulfonyl a Ci.4alkoxy. V podtriede zlúčenín sú Y1 a Y2 nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, F, CH3, SCH3i SOCH3i S02CH3 a OCH3. V skupine podtriedy zlúčenín je A vybrané zo skupiny zahrnujúcej:

kde b je 0 alebo 1. V podskupine zlúčenín je X vodík, R3 je CH3, Cl alebo CN a W je R2CF2C(R12)2 alebo R2CH2C(R12)2. V rodine podskupiny zlúčenín je R12 vodík. V podrodine zlúčenín je R2 vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo -15- b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) Ci.4alkyl, ii) hydroxy, in) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, iv) CONH2, v) CH2OH, vi) ŠO2NH2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, x) C3.7cykloalkyl, xi) CF3, xii) OCF3, xiii) N(CH3)2, xiv) Ci.3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Ci.4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) C-Mtioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 2) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický neheterocyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci.4alkyl, d) CONH2i e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, -16- h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci-4alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) C-Mtioalkoxy, alebo s) kyanoskupina. V podrodine zlúčenín je R2 pyridyl, metoxypyridyl a,lebo fenyl.

Do rodiny zlúčenín patria zlúčeniny uvedené nižšie (s tým, že metylové substituenty sú bežne znázornené ako väzbou pripojené na atóm). Inhibičná účinnosť zlúčenín podľa vynálezu znázornená ako "**" určuje Ki, ktoré je vyššie alebo rovné 1 nM alebo ak je inhibičná aktivita znázornená ako "*" určuje Ki menšie ako 1 nM. Hodnoty sú určené podľa skúšky in vitro opísanej nižšie.

-17-

-18-

Cl

CN N

N H

CH3

CN

- 19-

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu mať chirálne centrá a vyskytovať sa ako racemáty, racemické zmesi a ako jednotlivé diastereoméry alebo enantioméry a všetky izomérne formy sú zahrnuté v tomto vynáleze. Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu vyskytovať aj v polymorfných kryštalických formách a všetky polymorfné kryštalické formy sú zahrnuté v tomto vynáleze. -20-

Vynález zahrnuje tiež metabolity týchto zlúčenín, ktoré zahrnujú nasledujúce zlúčeniny:

Ak akákoľvek premenná sa vyskytuje viac ako raz v ktorejkoľvek skupine alebo vo všeobecnom vzorci I, je definovaná v každom ďalšom výskyte nezávisle na definícii v predošlom výskyte. Tiež kombinácie substituentov a/alebo premenných sú dovolené len ak výsledkom takýchto kombinácií sú stabilné zlúčeniny.

Niektoré skratky, ktoré sa môžu vyskytnúť v priebehu opisu sú nasledujúce: -21 -

Skratky zlúčenín bh4 - bórhydrid CH2CI2 - dichlórmetán DAST - dietylaminosulfurtrifluorid DBU -1,8-diazabicyklo[5.4.0]uňdek-7-én DCE -1,2-dichlóretán DMF - dimetylformamid DMSO - dimetylsulfoxid DPPA - difenylfosforylazid EDC - hydrochlorid 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu Et20 - dietyléter Et3N - trietylamín EtOH - etanol HCI - kyselina chlorovodíková HOBT - 1-hydroxybenzotriazol hydrát HO AT - 1-hydroxy-7-azabenzotriazol iPrOH - 2-propanol LDA - Iítiumdiizopropylamid L1AIH4 - hydrid hlinitolítny Mel - jódmetán MeOH - metanol MCPBA - kyselina m-chlórperoxybenzoová NaBH4 - tetrahydridoboritan sodný NaN3 - azid sodný NaSMe - tiometoxid sodný nBuLi - /7-butyllítium NCS - /V-chlórsukcínimid NMM - /V-metylmorfolín Pd/C - katalyzátor paládium na aktívnom uhlí PhCH3 - toluén Ph3P - trifenylfosfín POBr3 - oxybromid fosforitý -22- TBAF - tetrabutylamóniumfluorid TBSCI - ŕerc-butyldimetylsilylchlorid TEA - trietylamín THF - tetrahydrofurán TMSCN - trimetylsilylkyanid

Ako je tu použitý výraz "alkyl" zahrnuje rozvetvené a nerozvetvené nasýtené alifatické uhľovodíkové skupiny, ktoré majú určený počet uhlíkových atómov. V celom opise sú použité bežné skratky pre alkylové skupiny, napríklad metyl môže byť označený ako "Me" alebo CH3, etyl môže byť označený ako "Et" alebo CH2CH3, propyl môže byť označený ako "Pr" alebo CH2CH2CH3, butyl môže byť označený ako "Bu" alebo CH2CH2CH2CH3, a podobne; "alkoxy" znamená lineárnu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu určenú počtom uhlíkových atómov pripojenú cez kyslíkový mostík; "halo" alebo "halogén" ako sa tu používa znamená fluór (F), chlór (Cl), bróm (Br) a jód (I); a protiión je použitý na označenie malej, jednoduchej negatívne nabitej skupiny, ako je napríklad chlorid, bromid, hydroxid, octan, trifluóracetäť, chloristan, dusičnan, benzoát, maleát, sulfát, vínan, hemivínan, benzénsulfonát, a podobne. Výraz "C3-7cykloalkyl" zahrnuje cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklo-hexyl a cykloheptyl a podobne. Výraz "C7.i2bicyklický alkyl" zahrnuje bicyklo[2.2.1]heptyl (norbomyl), bicyklo-[2.2.2]oktyl, I.I.S-trimetylbicyklotž.ž.ljheptyl (bornyl) a podobne. Výraz "aryl" ako je tu použitý znamená stabilný 6- až 10-členný mono- alebo bicyklický kruhový systém ako je napríklad fenyl alebo naftyl. Arylový kruh môže byť nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami vybranými z Ci^nižšieho alkylu, hydroxylu, alkoxylu, halogénu alebo aminoskupiny. Výraz "alkylaryl", napríklad Ci_3alkylaryl, znamená arylovú skupinu s alkylovým substituentom. Výraz "bifenyl" znamená kruh zložený z dvoch benzénových kruhov, napríklad -23- Výraz "heterocyklický kruh" ako je tu použitý znamená stabilný 5- až 7-členný monocyklický- alebo stabilný 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický heterocyklický kruhový systém, ktorého kruh môže byť nasýtený, ako je napríklad piperidinyl, čiastočne nasýtený alebo nenasýtený, ako je pyridinyl, a ktorý obsahuje uhlíkové atómy a jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, a kde heteroatómy dusíka a síry môžu byť voliteľne oxidované, a dusíkový heteroatóm môže byť kvarternizovaný a zahrnuje tiež akúkoľvek bicyklickú skupinu, v ktorej ktorýkoľvek z vyššie uvedených heterocyklických kruhov je kondenzovaný na benzénový kruh. Bicyklické nenasýtené kruhové systémy zahrnujú bicyklické kruhové systémy, ktoré môžu byť čiastočne nenasýtené alebo úplne nenasýtené. Čiastočne nenasýtené bicyklické kruhové systémy zahrnujú napríklad cyklopentenopyridinyl, benzodioxán, metyléndioxyfenyl. Výhodné sú kruhy obsahujúce jeden atóm kyslíka alebo síry, jeden až štyri dusíkové atómy alebo jeden atóm kyslíka alebo síry spolu s jedným alebo dvoma dusíkovými atómami. Heterocyklický kruh môže byť pripojený na ktorýkoľvek heteroatóm alebo uhlíkový atóm, ktorý má za následok vytvorenie stabilnej štruktúry. Príkladmi takýchto heterocyklických skupín sú: piperidinyl, piperazinyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperidinyl, 2-oxopyrolidinyl, 2-oxoazapinyl, azepinyl, pyrolyl, 4-píperidinyl, pyrolidinyl, pyrazolyl, pyrazolidinyl, imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, oxazolyl, oxazolídinyl, izoxazolyl, izoxazolidinyl, morfolinyl, tiazolyl, tiazolidinyl, izotiazolyl, chinuklidinyl, izotiazolidinyl, indolyl, chinolinyl, izochinolinyl, benzimidazolyl, tiadiazolyl, benzopyranyl, benzotiazolyl, benzoxazolyl, furyl, tetrahydrofuryl, tetrahydropyranyl, tetrazol, tienyl, benzotienyl, tiamorfolinyl, tiamorfolinylsulfoxid, tiamorfolinylsulfón a oxadiazolyl. Morfolino je totožný s morfolinyl. Výraz "neheterocyklický kruh" ako je tu použitý, okrem toho ak bol bližšie uvedený, znamená stabilný 5- až 7-členný monocyklický alebo 9- až 10-členný bicyklický kruhový systém, ktorý obsahuje uhlíkové atómy a ani jeden heterokruhový atóm, ktorý môže byť nasýtený, napríklad cyklohexyl, čiastočne nasýtený alebo nenasýtený, napríklad fenyl. Príkladmi takýchto neheterocyklických kruhov sú fenyl, naftylenyl, indenyl a cyklohexyl. -24- "Inhibítor cyklooxygenázy-2", "cyklooxygenázový-2 inhibítor" a "COX-2 inhibítor" ako je tu použitý zahrnuje zlúčeniny, ktoré selektívne inhibujú cyklooxy-genázu-2 viac ako cyklooxygenázu-1.

Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I (vo forme vo vode alebo v oleji rozpustných alebo dispergovateľných produktov) zahrnujú bežné netoxické soli ako aj soli odvodené z anorganických kyselín, napríklad z kyseliny chlorovodíkovej, bromovodíkovej, sírovej, sulfámovej, fosforečnej, dusičnej a podobne, alebo kvartérne amónne soli, ktoré sú vytvorené napríklad z anorganických alebo organických kyselín alebo báz. Príkladmi adičných solí s kyselinami sú acetáty, adipáty, algináty, aspartáty, benzoáty, benzénsulfonáty, bisulfáty, butyráty, citráty, kamforáty, kamfosulfonáty, cyklopentánpropionáty, diglukonáty, dodecylsulfáty, etánsulfonáty, fumaráty, glukoheptanoáty, glycerofosfáty, hemisulfáty, heptanoáty, hexanoáty, hydrochloridy, hydrobromidy, hydrojodidy, 2-hydroxyetánsulfonáty, laktáty, maleáty, metánsulfonáty, 2-naftalénsulfonáty, nikotináty, nitráty, oxaláty, pamoáty, pektináty, persulfáty, 3-fenylpropionáty, pikráty, pivaláty, propionáty, sukcináty, sulfáty, vínany, tiokyanáty, tosyláty a undekanoáty. Bázické soli zahrnujú amónne soli, alkalické kovové soli, napríklad sodné a draselné soli, soli alkalických kovov, napríklad vápenaté a horečnaté soli, soli s organickými bázami, napríklad dicyklohexylamínové soli, N-metyl-D-glukamínové soli a soli s aminokyselinami, ako je napríklad arginín, lyzín atď. Tiež bázické skupiny obsahujúce dusík môžu byť kvarternizované takými činidlami ako sú nižšie alkylhalogenidy, napríklad metyl-, etyl-, propyl- a butyl-chlorid, -bromid a -jodid; dialkylsulfáty ako napríklad dimetyl-, dietyl-, dibutyl- a diamylsulfáty; halogenidy s dlhým reťazcom, ako sú decyl-, lauryl-, myristyl- a stearyl-chloridy, -bromidy a -jodidy; aralkylhalogenidy, napríklad benzyl- a fenetylbromidy a iné. V zlúčeninách podľa vynálezu, ktoré majú pyridyl-A/-oxidové skupiny, pyridyl-/V-oxidová časť môže byť štruktúrne znázornená za použitia bežného označenia ako

O’ alebo 2 -25- ktoré majú ekvivalentné významy. V definícii premennej "A", kde premenná "b" je 0, A je

X-

alebo

Keď premenná "b" je 1, A je

Trombínové'inhibítory - terapeutické použitie - spôsob použitia

Antikoagulačná terapia sa indikuje pri liečbe a prevencii mnohých trombotických stavov, najmä ochorení koronárnej tepny a cerebrovaskulárnych ochorení. Odborníci v danej oblasti techniky si ľahko uvedomujú okolnosti, ktoré vyžadujú antikoagulačnú terapiu. Tu použitý termín "pacient" znamená cicavce ako sú primáty, ktoré zahrnujú človeka, ovce, kone, dobytok, ošípané, psy, mačky, potkany a myši.

Trombínová inhibícia je užitočná nielen pri koagulačnej terapii jedincov, ktorí majú trombotické stavy, ale je užitočná všade tam, kde sa vyžaduje inhibícia krvnej, koagulácie ako je prevencia koagulácie'skladovanej čistej . krvi a prevencia koagulácie v iných biologických vzorkách na testovanie alebo skladovanie. Teda, trombínové inhibítory sa môžu pridať alebo kontaktovať s akýmkoľvek médiom, ktoré obsahuje alebo sa predpokladá, že obsahuje trombín, a v ktorom je žiadaná inhibícia krvnej koagulácie, napríklad, keď sa kontaktuje krv cicavca s materiálmi vybranými zo skupiny, ktorá pozostáva z vaskulárnych transplantátov, stentov, ortopedických protéz, srdcových protéz a mimotelových cirkulačných systémov.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú užitočné na liečenie alebo prevenciu žilového tromboembolizmu (napríklad obštrukcia alebo oklúzia žily izolovaným trombom; obštrukcia alebo oklúzia pľúcnej tepny izolovaným trombom), kardiogénneho tromboembolizmu (napríklad obštrukia alebo oklúzia srdca izolovaným trombusom), -26- arteriálnej trombózy (napríklad tvorba trombu v artérii, ktorý môže zapríčiniť porušenie tkaniva, ktoré zásobuje artéria), aterosklerózy (napríklad arterosklerózy, ktorá je charakteristická nepravidelne rozloženými lipidovými usadeninami) u cicavcov a na zníženie tendencie zariadenia, ktoré príde do kontaktu s krvou, zrážať krv.

Príklady žilového tromboembolizmu, ktorý sa môže liečiť alebo sa mu môže predísť zlúčeninami podľa vynálezu, zahrnujú obštrukciu žily, obštrukciu pľúcnej artérie (pľúcny embolizmus), hlbokú žilovú trombózu, trombózu spojenú s rakovinou a rakovinovou chemoterapiou, trombózu dedičnú s trombofilnými ochoreniami ako je nedostatok proteínu C, nedostatok proteínu S, nedostatok antitrombínu III, a faktor V Leiden, a trombózu vyplývajúcu z nadobudnutých trombofilných ochorení, ako je systemický lupus erythematosus (zápalové ochorenia spojovacieho tkaniva). Tiež z hľadiska žilového tromboembolizmu sú zlúčeniny podľa vynálezu užitočné na udržanie priechodnosti zavedených katétrov.

Príklady kardiogénneho embolizmu, ktorý sa môže liečiť alebo sa mu môže predísť zlúčeninami podľa vynálezu, zahrnujú tromboembolickú porážku (izolovaný trombus zapríčiňuje neurologické ochorenie súvisiace s oslabeným zásobovaním cerebrálnej krvi), kardiogénny tromboembolizmus spojený s atriálnou fibriláciou (rýchle, nepravidelné mykanie svalových vlákien hornej srdcovej komory), kardiogénny tromboembolizmu spojený s chlopňami protetického srdca, ako sú mechanické chlopne srdca a kardiogénny tromboembolizmus spojený s ochorením srdca.

Príklady arteriálnej trombózy zahrnujú nestabilnú angínu (silnú zvierajúcu bolesť v hrudi koronárneho pôvodu), infarkt myokardu (zánik svalových buniek srdca, ktorý vyplýva z nedostatočného zásobovania krvou), ischemické srdcové ochorenia (lokálna anémia kvôli obštrukcii (ako je zúženie artérie) krvného zásobovania), reoklúziu počas alebo po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike, restenózu po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike, oklúziu bypasového transplantátu koronárnej artérie a okluzívne cerebrovaskulárne ochorenie. Teda z hľadiska arteriálnej trombózy sú zlúčeniny podľa vynálezu užitočné na udržanie priechodnosti v arteriovenóznych kanáloch.

Príklady aterosklerózy zahrnujú artériosklerózu. -27-

Príklady zariadení, ktoré prídu do kontaktu s krvou zahrnujú vaskulárne transplantáty, stenty, ortopedické protézy, srdcové protézy a mimotelové cirkulačné systémy.

Trombínové inhibítory podľa vynálezu sa môžu podávať v takých orálnych formách, ako sú tablety, kapsuly (každá forma obsahuje prostriedok na podporu uvoľňovania alebo prostriedok na časové uvoľňovanie), pilulky, prášky, granuly, elixíry, tinktúry, suspenzie, sirupy a emulzie. Podobne sa môžu podávať v intravenóznej (bolus alebo infúzia), intraperitoneálnej, subkutánnej alebo intra-muskulárnej forme, pričom všetky sú dobre známe odborníkom vo farmaceutickej oblasti techniky. Účinné ale netoxické množstvo požadovanej zlúčeniny sa môže použiť ako antiagregačné činidlo. Na liečbu očného zhromažďovania fibrínu sa môžu zlúčeniny podávať vnútroočne alebo topikálne, rovnako ako aj orálne alebo parenterálne.

Trombínové inhibítory sa môžu podávať vo forme injekčného prípravku s predĺženým účinkom alebo implantátu, ktoré sa môžu pripraviť takým spôsobom, aby umožnili trvalé uvoľňovanie aktívnej zložky. Aktívna zložka sa môže stlačiť do tabliet alebo malých valčekov alebo implantovať subkutánne alebo intramuskulárne ako injekčné prípravky s predĺženým účinkom alebo ako implantáty. Implantáty môžu použiť inertné materiály ako sú polyméry podliehajúce biologickému rozkladu alebo syntetické silikóny, napríklad Silastic, silikónovú gumu alebo iné polyméry vyrobené v Dow-Corning Corporation.

Trombínové inhibítory sa tiež môžu podávať vo forme lipozómového systému, ako sú malé unilamelárne mechúriky, veľké unilamelárne mechúriky a multilamelárne mechúriky. Lipozómy sa môžu vytvoriť z rôznych druhov fosfolipidov, ako je cholesterol, sterylamín alebo fosfatidylcholíny.

Trombínové inhibítory sa tiež môžu doručiť použitím monoklonálnych protilátok ako jednotlivých nosičov, na ktoré sa molekuly zlúčeniny viažu. Trombínové inhibítory sa môžu tiež spojiť s rozpustnými polymérmi ako sú nosiče liečiv, ktoré sú schopné dosiahnuť cieľ. Takéto polyméry môžu zahrnovať polyvinyl-pyrolidón, pyránový kopolymér, polyhydroxy-propyl-metakrylamid-fenol, poly-hydroxyetyl-aspartamid-fenol alebo polyetylénoxid-polylyzín substituovaný palmitoylovými skupinami. Ďalej, trombínové inhibítory sa môžu spojiť s triedou -28- polymérov, ktoré podliehajú biologickému rozkladu, ktoré sú užitočné na dosiahnutie kontrolovaného uvoľňovania liečiva, ako je napríklad kyselina polymliečna, kyselina polyglykolová, kopolyméry kyseliny polymliečnej a poly-glykolovej, polyepsilónkaprolaktón, kyselina polyhydroxymaslová, polyortoestery, polyacetály, polydihydropyrány, polykyanoakryláty a zotieťované alebo amfipatické blokové kopolyméry hydrogélov. Dávkový režim využívajúci trombínové inhibítory je vybraný podľa mnohých faktorov, ktoré zahrnujú: typ, druh, vek, váhu, pohlavie a liečený stav pacienta; vážnosť stavu, ktorý je liečený; spôsob podávania; renálnu a hepatickú funkciu pacienta; a konkrétnu zlúčeninu alebo jej soľ, ktorá je použitá. Bežne vzdelaný lekár alebo veterinár môže ľahko určiť a predpísať účinné množstvo zlúčeniny, ktoré je potrebné na prevenciu, liečenie alebo zastavenie postupu choroby.

Orálne dávky trombínových inhibítorov, keď sa použijú na indikované účinky sa budú pohybovať medzi približne 0,01 mg na kilogram telesnej hmotnosti za deň (mg/kg/deň) až 30 mg/kg/deň, výhodne 0,025 mg/kg/deň až 7,5 mg/kg/deň, ešte výhodnejšie 0,1 mg/kg/deň až 2,5 mg/kg/deň a najvýhodnejšie 0,1 mg/k/deň až 0,5 mg/kg/déň (ak nie je špecifikované inak, množstvá aktívnych zložiek sú vztiahnuté na voľnú bázu). Napríklad, 80 kg pacient bude prijímať medzi približne 0,8 mg/deň až 2,4 g/deň, výhodne 2 mg/deň až 600 mg/deň, výhodnejšie 8 až 200 mg/deň a najvýhodnejšie 8 mg/deň až 40 mg/deň. Vhodne pripravený liek na podávanie raz za deň bude teda obsahovať 0,8 mg a 2,4 g, výhodne 2 mg až 600 mg, výhodnejšie 8 mg až 200 mg a najvýhodnejšie 8 mg až 40 mg, napríklad 8 mg, 10 mg, 20 mg a 40 mg. Výhodne sa môžu trombínové inhibítory podávať v oddelených dávkach, dva, tri alebo štyrikrát denne. Na podávanie dvakrát denne by vhodne pripravený liek mal obsahovať 0,4 mg až 1,2 g, výhodne 1 mg až 300 mg, výhodnejšie 4 mg až 100 mg a najvýhodnejšie 4 mg až 20 mg, napríklad 4 mg, 5 mg, 10 mg a 20 mg.

Intravenózne, by pacient prijímal aktívnu zložku v množstvách postačujúcich na dodanie 0,025 až 7,5 mg/kg/deň, výhodne 0,1 až 2,5 mg/kg/deň a výhodnejšie 0,1 až 0,5 mg/kg/deň. Takéto množstvá sa môžu podávať množstvom vhodných spôsobov, napríklad veľké objemy s nízkou koncentráciou aktívnej zložky počas jednej predĺženej časovej periódy alebo niekoľkokrát denne, nízke objemy s vysokou koncentráciou aktívnej zložky počas krátkej časovej periódy, napríklad raz -29- denne. Typicky, bežný intravenózny prostriedok sa môže pripraviť tak, aby obsahoval.koncentráciu aktívnej zložky 0,01 až 1,0 mg/ml, napríklad 0,1 mg/ml, 0,3 mg/ml a 0,6 mg/ml a podával v množstvách 0,01 ml/kg hmotnosti pacienta až 10,0 ml/kg hmotnosti pacienta denne, napríklad 0,1 ml/kg, 0,2 ml/kg, 0,5 ml/kg. V jednom prípade, 80 kg pacient, prijímajúci 8 ml dvakrát denne intravenózneho prostriedku, ktorý má koncentráciu aktívnej zložky 0,5 mg/ml prijíma 8 mg aktívnej zložky denne. Ako tlmivý roztok sa môže použiť kyselina glukurónová, kyselina L-mliečna, kyselina octová, kyselina citrónová alebo akákoľvek farmaceutický prijateľná kyselina/konjugovaná báza s primeranou pufrovacou kapacitou v rozmedzí pH vhodnom na intravenózne podávanie. Pri výbere vhodného pufra by sa mala brať do úvahy rozpustnosť liečiva a pH prostriedku. Výber vhodného pufra v závislosti od rozpustnosti podávaného liečiva sa ľahko uskutoční odborníkom v danej oblasti techniky.

Zlúčeniny sa môžu tiež podávať v intranazálnej forme topickým použitím vhodného intranazálneho vehikula alebo transdermálnym spôsobom použitím takých foriem transdermálnych kožných náplastí, ktoré sú dobre známe odborníkom v danej oblasti techniky. Podacia dávka v prípade podávania transdermálnym spôsobom bude samozrejme skôr nepretržitá ako prerušovaná počas dávkového režimu.

Trombínové inhibítory sa typicky podávajú ako aktívna zložka v zmesi s vhodným farmaceutickým riedidlom, excipientom alebo nosičmi (spoločne tu odkazované ako "nosičový" materiál) vhodne vybratými s ohľadom na zamýšľanú formu podávania, t.j. , perorálne tablety, kapsuly, elixíry, sirupy a podobne, a v súlade s bežnými farmaceutickými praktikami.

Napríklad, na orálne podávanie vo forme tablety alebo kapsuly, sa môže aktívna zložka kombinovať s perorálnym netoxickým, farmaceutický prijateľným inertným nosičom, ako je laktóza, škrob, sacharóza, glukóza, metylcelulóza, strearan horečnatý, fosforečnan vápenatý, síran vápenatý, manitol, sorbitol a podobne; na orálne podávanie v tekutej forme, zložky liečiva na orálne podanie sa môžu kombinovať s akýmkoľvek perorálnym netoxickým, farmaceutický prijateľným inertným nosičom, ako je etanol, glycerol, voda a podobne. Okrem toho, keď je to požadované alebo potrebné, sa môžu k zmesi pridať vhodné spojivá, lubrikanty, -30- dezintegračné činidlá a farbivá. Vhodné spojivá zahrnujú škrob, želatínu, prírodné cukry, ako je glukóza alebo beta-laktóza, kukuričné sladidlá, prírodné a syntetické gumy ako je arabská guma, tragant, alebo alginát sodný, karboxymetylcelulóza, poyletylénglykol, vosky a podobne. Lubrikanty použité v týchto dávkových formách zahrnujú olean sodný, stearan sodný, stearan horečnatý, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný a podobne. Dezintegranty zahrnujú, bez limitácie, škrob metylcelulózy, agar, bentonit, xantánovú gumu a podobne.

Vynález zahrnuje tiež spôsob liečby zápalových ochorení u pacienta, ktorý zahrnuje liečbu pacienta farmaceutickým prostriedkom, ktorý obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu. Také ochorenia zahrnujú, ale nie sú limitované nefritídou, systemickým lupus erythematosus, reumatoidnou artritídou, glomerulonefritídou a sakoidózou.

Vynález zahrnuje tiež spôsob liečby zápalových ochorení u pacientov, ktorý zahrnuje liečbu pacienta kombinovaným prostriedkom, ktorý obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu a NSAID, napríklad COX-2-inhibítor. Také ochorenia zahrnujú ale nie sú limitované nefritídou, systemickou erymatózou lupusu, reumatoidnou artritídou, glomerulonefritídou, vaskulitídou, sakoidózou.

Tento vynález zahrnuje aj spôsob utíšenia bolesti, horúčky a množstva zápalových stavov, ktoré zahrnujú nefritídu, systemický lupus erythematosus, reumatoidnú artritídu, glomerulonefritídu, sakoidózu, reumatickú horúčku, symptómy spojené s chrípkou alebo inými vírusovými infekciami, bežné nachladenie, bolesti dole v chrbte a bolesti krku, dysmenoreu, bolesti hlavy, bolesti zubov, výrony a natiahnutia, myozitídu, neuralgiu, synovitídu, artritídu, zahrnujúcu degeneratívne ochorenia spojené s reumatoidnou artritídou (osteoartritída), pakostnicu a ankylóznu spondylitídu, bursitídu, úpaly, úrazy, po ktorých nasledujú chirurgické a dentálne zákroky u pacienta podávaním pacientovi terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa vynálezu. Trombínové inhibítory môžu byť tiež užitočné pri liečbe demencie, ktorá zahrnuje pred-senilnú a senilnú demenciu a najmä demenciu spojenú s Alzheimerovou chorobou. U zápalových ochorení, kde je tvorba fibrínu markantná, môže byť fibrín rozhodujúcim činiteľom patológie. Fibrín slúži ako matrix pre tie zápalové bunky, ktoré môžu migrovať a adherovať (pozri Sherman a ďalší 1977 J. Exp. Med. 145: 76 -31 - až 85; Altieri a ďalší, 1986 J. Clin; Invest. 78: 968 až 976; Wright a ďalší, 1983 Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 7734 až 7738; Altieri a ďalší, 1993 J. Biol. Chem. 268; 1847 až 1853). Fibrín tiež zvyšuje expresiu zápalového IL-1 beta cytokínu a znižuje expresiu receptora IL-1 pomocou ľudských periférnych mononukleárnych krvných buniek (pozri Perez 1995 J. Immunol. 154: 1879 až 1887). Antikoagulanty wafarín a heparín zmierňujú oneskorené hypersenzitívne reakcie a experimentálnu nefritídu u zvierat (pozri Jasain a ďalší, Immunopathogenesis of Reumatoid Atrhritis Eds. G. S. Panayi a ďalší, Surrey, UK, Reedbooks, Lts. a Halpern a ďalší, 1965 Náture 205: 257 až 259). Enzymatická defibrinácia s ancordom znižuje stupeň experimentálnej nefritídy (Naish a ďalší, 1972 Clin. Sci. 42: 643 až 646), systemického lupus erythematosus (Cóle a ďalší, 1990 Kidney Int. 37: 29 až 35), a reumatoidnej artritídy (pozri Busso a ďalší, 1998 J. Clin. Invest. 102: 41 až 50) u zvierat, a glomerulo-nefritídy u človeka (pozri Kim a ďalší, 1988 Q. J. Med. 69: 879 až 905). Okrem toho, intraartikulárna injekcia fibrínu vyvolá artritídu u potkanov imunizovaných fibrínom (Dumonde a ďalší, 1961 British Journal of Experimental Pathology XLIII: 373 až 383), a artritída u myší vyvolaná antigénom sa zhoršila u myší s nedostatkom urokinázy, pričom fibrinolýzne synoviálny fibrín sa vyrovná (pozri Busso a ďalší, 1998 J. Clin. Invest. 102:41 až 50). U ochorení, kde je ukladanie fibrínu markantné, ako je ale bez limitovania, reumatoidná artritída, systemický lupus erythematosus, glomerulonefritída, vaskulitída a sakoidóza, bude znižovanie koncentrácie konštantného stavu fibrínu podávaním zlúčeniny podľa vynálezu, znižovať patologické zápalové odozvy spojené s týmito ochoreniami.

Podobne, zlúčeniny podľa vynálezu budú užitočné ako čiastočné alebo úplné náhrady pre bežné NSAlDs v prípravkoch, pričom sa teraz podávajú spolu s inými činidlami alebo zložkami. Teda z ďalšieho hľadiska, vynález zahrnuje farmaceutické prostriedky na liečbu zápalových ochorení, ako je vyššie opísané, ktoré obsahujú netoxické, terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny podľa vynálezu, ako je opísané vyššie, a jednu alebo viac zložiek, ako je iný prostriedok na uľahčenie bolesti zahrnujúci acetominofén alebo fenacetín; potenciátor zahrnujúci kofeín; H2-antagonista, hydroxid hlinitý alebo horečnatý, simetikón, dekongestant zahrnujúci fenylefrín, fenylpropanolamín, pseudofedrín, oxymetazolín, efinefrín, nafazolín, -32- xylometazolín, propylhexedrín alebo levodesoxyefedrín; prostriedky proti kašľu zahrnujúce kodeín, hydrokodón, karamifén, karbetapentán alebo dextrametorfán; diuretiká; sedatívne alebo nesedatívne antihistamíny. Okrem toho vynález zahrnuje spôsob liečby zápalových ochorení zahrnujúci podávanie netoxického, terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa vynálezu pacientovi, ktorý túto liečbu potrebuje, voliteľne podávanie spolu s jednou alebo viacerými zložkami ako je opísané bezprostredne vyššie.

Tento vynález tiež zahrnuje novú kombinovanú terapiu, ktorá zahrnuje podávanie terapeuticky účinného množstva NSAID, ako je COX-2-inhibítor v kombinácii s terapeuticky účinným množstvom zlúčeniny podľa vynálezu cicavcovi, a najmä človeku. Kombinovaná terapia sa používa pri liečbe zápalových ochorení.

Tieto farmaceutické kombinované terapie, zahrnujúce podávanie zlúčeniny podľa vynálezu v kombinácii s NSAID, ako je COX-2-inhibítor, zahrnujú podávanie jednotlivej farmaceutickej dávky prostriedku, ktorá obsahuje aj zlúčeninu podľa vynálezu aj NSAID, rovnako ako aj podávanie každej účinnej látky v jeho vlastnej oddelenej farmaceutickej dávke prostriedku. Tam, kde sa použijú oddelené dávky farmaceutického prostriedku, môže sa zlúčenina podľa vynálezu a NSAID podávať v podstate v rovnakom čase, t.j. súčasne alebo oddelene v rozvrhnutom čase, t.j. následne. Rozumie sa, že "táto farmaceutická kombinovaná terapia" zahrnuje všetky tieto režimy. Podávania týmito rôznymi spôsobmi podľa vynálezu sú vhodné do takej miery, aby sa prospešný farmaceutický účinok zlúčeniny podľa vynálezu a NSAID realizoval u pacienta v podstate v rovnakom čase. Takýto prospešný účinok sa výhodne dosiahne, ak sa cieľové koncentračné hladiny účinného liečiva v krvi udržiavajú v podstate v rovnakom čase. Je výhodne, aby zlúčenina podľa vynálezu a NSAID boli podávané súčasne v dávkovacom režime raz denne; hoci je tu tiež zahrnuté menenie dávkovacích režimov, napríklad, že zlúčenina podľa vynálezu sa podáva raz denne a NSAID jeden, dva alebo viackrát denne, alebo NSAID sa podáva raz denne a zlúčenina podľa vynálezu jeden, dva alebo viackrát denne. Výhodná je taká jednotlivá orálna dávka prostriedku, ktorá obsahuje aj zlúčeninu podľa vynálezu aj NSAID. Jednotlivá dávka prostriedku bude pre pacienta vhodná.

Tento vynález tiež poskytuje farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú terapeuticky účinné množstvo NSAID alebo farmaceutický prijateľné množstvo jej -33- soli, v kombinácii s terapeuticky účinným množstvom zlúčeniny podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli a farmaceutický prijateľného nosiča. Jedno uskutočnenie tohto farmaceutického prostriedku je jednotlivý farmaceutický prostriedok, ktorý je prispôsobený na orálne podávanie, ktorý obsahuje terapeuticky účinné množstvo COX-2 inhibítora v kombinácii s terapeuticky účinným množstvom zlúčeniny podľa vynálezu a farmaceutický prijateľným nosičom. Kombinovaný farmaceutický prostriedok sa tiež môže podávať v jednotlivých dávkových formách, pričom jednotlivé dávkové formy sa podávajú tak, aby sa prospešný účinok každého aktívneho činidla realizoval u pacienta v podstate rovnakom čase. Všeobecne NSAID zahrnuje salicyláty, ako je aspirín, salicylát sodný, cholínsalicylát, kyselinu salicylsalicylovú, diflunisal a salsalát; indoloctové kyseliny, ako je indometacín a sulindac; pyrazoly, ako je fenylbutazón, oxyfénbutazón; pyrolalkánové kyseliny, ako je tolmetín; fenyloctové kyseliny ako je ibuprofen, feroprofen, flurbiprofen, a ketoprofen; fenamáty ako je kyselina mefanámová a meklofenamát; oxikamy ako je piroxikam; a naftalénoctové kyseliny, ako je naproxén. Cyklooxygenázové inhibítory, ako je COX-1 a COX-2 inhibítory sú tiež NSAlD-y.

Použitie testu COX-1 ľudskej nezmiešanej krvi a testu COX-2 ľudskej nezmiešanej krvi opísané v C. Brideau a ďalší, Inflamm. Res. 45: 68 až 74 (1996), ktoré je tu zahrnuté odkazom, výhodne teda, zlúčeniny majú IC50 cyklooxygenázy-2 menšie ako 2 μΜ v teste COX-2 nezmiešanej ľudskej krvi, ale majú IC50 cyklooxygenázy-1 väčšie ako približne 5 μΜ v teste COX-1 nezmiešanej ľudskej krvi. Teda výhodne majú zlúčeniny selektívny pomer inhibície cyklooxygenázy-2 a inhibície cyklooxygenázy-1 najmenej 10 a výhodnejšie najmenej 40. Výsledná selektivita môže vyvolať schopnosť redukcie výskytu bežných vedľajších účinkov, ktoré vyvoláva NSAID.

Inhibítor cyklooxygenázy-2 sa môže podávať v dávkovej hladiné až do bežnej dávkovej hladiny pre NSAlDs. Vhodné dávkové hladiny budú závisieť od protizápalových účinkov zvoleného inhibítora cyklooxygenázy-2, ale typicky vhodné hladiny budú približne 0,001 až 50 mg/kg/deň, výhodne 0,005 až 30 mg/kg/deň a ešte výhodnejšie 0,05 až 10 mg/kg/deň. Zlúčenina sa môže podávať v režime až 6 krát denne, výhodne 1 až 4 krát denne, a ešte výhodnejšie raz denne. -34- Dávkový režim, ktorý používa zlúčeninu podľa vynálezu v kombinácii s NSAID sa vyberie v súlade s množstvom faktorov, ktoré zahrnujú typ, druh, vek, hmotnosť, pohlavie a liečený stav pacienta; vážnosť stavu, ktorý je liečený; pôsob podávania; renálnu a hepatickú funkciu pacienta; a najmä zlúčeninu alebo jej soľ alebo ester, ktoré sa použili. Keďže dve aktívne zložky sa použili spolu v kombinovanej terapii, účinok každej z látok a interaktívne účinky dosiahnuté ich kombináciou sa tiež musia vziať do úvahy. Zváženie týchto faktorov je v kompetencii ošetrujúceho lekára za účelom určenia terapeuticky účinných alebo profylaktický účinných dávkových množstiev potrebných na prevenciu, liečenie alebo zastavenie zhoršovania stavu.

Podávanie kombinovaného lieku pacientovi zahrnuje samo-podávanie ako aj podávanie lieku pacientovi inou osobou.

Prídavné účinné látky sa môžu použiť v kombinácii so zlúčeninou podľa vynálezu v jednej dávkovej forme, alebo môžu byť podávané pacientovi v oddelených dávkových formách, ktoré dovoľujú súčasné alebo následné podávanie. Príkladmi prídavných účinných látok, ktoré sa môžu použiť zahrnujú HMG-CoA syntázové inhibítory; squalénové epoxidázové inhibítory; squalénové syntetázové inhibítory (tiež známe ako squalénové syntázové inhibítory), acyl-koenzým A: cholesterol-acyltransferázové (ACAT) inhibítory; probukol; niacín; fibráty ako je clofibrát, fenofibrát a gemfibrizol; inhibítory absorpcie cholesterolu; sequestranty žlčových kyselín; LDL (lipoproteín s nízkou hustotou) receptorové indukátory; vitamín Ββ (tiež známy ako pyridoxín) a jeho farmaceutický prijateľné soli ako je soľ HCI; vitamín B12 (tiež známy ako je kyanokobalamín); blokátory β-adrenergného receptora; kyselina listová alebo jej farmaceutický prijateľná soľ alebo estéŕ, ako je sodná soľ a metylg lúkami nová soľ; a antioxidačné vitamíny ako je vitamín C a E a betakarotén.

Trombínové inhibítory môžu byť tiež podávané spolu s vhodnými anti-plateletnými látkami, zahrnujúcimi, ale nelimitovanými na, fibrinogénové receptorové antagonisty (napríklad na liečbu alebo prevenciu nestabilnej angíny alebo na prevenciu reoklúzie po angioplastike alebo restenózy), antikoagulačné látky, ako je aspirín, trombolytické látky, ako sú plazminogénové aktivátory alebo streptokináza za účelom dosiahnutia synergických účinkov pri liečbe rôznych vaskulárnych stavov, -35- alebo látky, ktoré znižujú cholesterol, zahrnujúce antihypercholesterolemiká (napríklad HMG CoA reduktázové inhibítory ako je lovastatín a simvastatín, HMG CoA syntázové inhibítory, atď.) na liečbu alebo prevenciu aterosklerózy. Napríklad, pacienti, ktorí trpia ochorením koronárnej artérie a pacienti podrobení angioplastike budú mať prospech so spolupodávania antagonistov fibrinogénových receptorov a trombínových inhibítorov. Trombínové inhibítory tiež zvyšujú účinnosť trombolytickej reperfúzie spôsobenej tkanivovým plazminogénovým aktivátorom. Trombínové inhibítory môžu byť podávané prvé po vytvorení trombu a tkanivový plazminogénový aktivátor alebo iný plazminogénový aktivátor sa podá potom.

Typické dávky trombínových inhibítorov podľa vynálezu v kombinácii s inými vhodnými antiplateletnými látkami, koagulačnými látkami alebo trombolytickými látkami môžu byť rovnaké ako dávky trombínových inhibítorov, ktoré sa podávajú bez spolupodávania prídavných antiplateletných látok, antikoagulačných látok alebo trombolytických látok alebo môžu byť v podstate menšie ako dávky trombínových inhibítorov, ktoré sa podávajú bez spolupodania prídavných antiplateletných látok, · koagulačných látok alebo trombolytických látok, čo závisí od terapeutickej potreby pacienta.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I

kde W, X a R3 majú vyššie uvedený význam a A je fluórpyridyl, sa môžu pripraviť reakciou s

-36- Η2Ν

Y2 za podmienok vhodných na tvorbu amidovej väzby medzi kyselinou a amínom. Vhodná východisková karboxylová kyselina vzorca

X

sa môže pripraviť nasledujúcimi spôsobmi opísanými v publikácii Sanderson a ďalší, WO 97/40024, konkrétne Spôsob 1, krok F a zodpovedajúci príklad I, Spôsob 2 a zodpovedajúci príklad III, Spôsob 3, krok E a zodpovedajúci príklad V a Spôsob 5, krok E a zodpovedajúci príklad LXXXII, str. 29 až 58 a 108 až 111, ktorých obsah je tu zahrnutý odkazom. Alternatívne sa môžu pripraviť použitím etyl-3-bróm-6-metylpyrazín-2-ón-1-acetátu (pozri Sanderson a ďalší, WO 99/11267, zlúčenina 7-4, str. 34 až 37, obsah ktorého je tu zahrnutý odkazom, odkazované ako zlúčenina "A") kondenzačnou reakciou SW-NH2, nasledovanou zmydelnením za vzniku zodpovedajúcej kyseliny.

Zlúčeniny sa potom pripravia reakciou karboxylovej kyseliny s

N

podľa nasledujúcej schémy:

X

v -37-

kde môže byť napríklad 2-aminometyl-3-fluórpyridín (odkazované ako zlúčenina "B") a príbuzné fluórpyridínové deriváty, za vzniku konečného produktu. 2-Aminometyl-3-fluórpyridín sa pripraví podľa schémy ako je uvedená nižšie:

Syntéza 2-aminometyl-3-fluórpyridínu začína katalytickou redukciou 2-kyano-3-fluórpyridínu (Sakamoto a ďalší, Chem. Pharm. Bull. 33(2) 565 - 571 (1985) za -38- použitia paládia na aktívnom uhlí za vzniku 2-aminometyl-3-fluórpyridínu B ako dihydrochloridovej soli.

Naviazanie 2-aminometyl-3-fIuórpyridínu B a kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín-2-ón-1-octovej sa uskutočnilo v DMF použitím EDC, HOBT a trietylamínu. Pridaním vody sa vyzrážal produkt, ktorý sa potom čistil chromatografiou na silikagéli za vzniku v nadpise uvedenej zlúčeniny ako nepatrne sfarbenej tuhej látky. Konverzia na jej hydrochloridovú soľ sa môže uskutočniť pôsobením roztoku etylacetátu s 2 ekvivalentami 1M HCI v etylacetáte, po ktorom nasleduje filtrácia. 2-Aminometyl-3-fluórpyridín (B) ako dihydrochloridová soľ

Miešaný roztok 6,11 g (50,1 mmol) 2-kyano-3-fluórpyridínu v 250 ml etanolu a 12,5 ml (150 mmol) koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej sa hydrogenoval na 1,90 g 10% paládia na aktívnom uhlí pri tlaku 275,7 kPa (40 psi) počas 16 hodín. Katalyzátor sa odstránil filtráciou a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Výsledná tuhá látka sa zriedila acetonitrilom a filtrovala sa za vzniku 8,0 g v nadpise uvedenej zlúčeniny ako špinavo bielej tuhej látky. 1H NMR (CD3OD) δ: 8,48 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,69 (td, 1H, 9,2, 1,1 Hz), 7,68 (ddd, 1H, 8,8, 4,4, 4,4 Hz), 4,34 (s, 2H).

Typicky môže byť amidová väzbová reakcia za vzniku konečného produktu uskutočnená v kvapalnej fáze, ale môže byť nahradená aj syntézou v tuhej fáze pomocou klasického Merrifieldového postupu. Pridanie alebo odstránenie jednej alebo viacerých ochranných skupín je tiež typická prax.

Zlúčeniny, v ktorých premenná A znamená iné skupiny sa môžu pripraviť kopulačnou reakciou komerčne dostupných aminoderivátov

kde Y1 a Y2 sú určené vyššie, za použitia kopulačnej reakcie opísanej na naviazanie -39-

na karboxylovú kyselinu. Iné aminoderiváty a spôsoby na prípravu aminoderivátov sú známe odborníkom v danej oblasti techniky a sú uvedené nižšie. 1)

H2N je komerčne dostupný. 2)

„ 1) MCPBA NC'ίχγ —- Y1 2) TMSCN, Et3N

Nv & Y1

redukcia h2N

napríklad 1) LDA, -78°C V- 1) MCPBA “VS 2) Mel, -78°C F 2) TMSCN, EtoN ch3 O ch3

Pd/C, HCI | EtOH, 379,1 kPa H2 (55 psi) -40- η2ν

a tiež napríklad

% 2 1) MCPBA NC

Y1 2) TMSCN, EtaN y

LiAIH4 h2N

2 Y

Pokiaľ nie je uvedené inak, všetky NMR stanovenia boli urobené za použitia 400 MHz oblasti vlnovej dĺžky.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1 3-Fluór-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín-2-ón-1- acetamid

O 1-1

DAST

F F 1-2 v -41 - pokračovanie

anhydrid kyseliny triflátovej CH2CI2

NaN3 N'íSo°so2cf3

F F

DMF

N- 1-4

NHc

Ph-CH3 --—--w EtOH, 110°C

KOH/ vodný EtOH

Y

1-8 -42-

Syntéza 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamínu 1-6 zahŕňa vytvorenie 2-lítium-pyridínu z 2-brómpyridínu v éteri, nasleduje reakcia s dietyloxalátom, za vzniku 2-pyridylketoesteru 1-1. Pôsobenie nadbytkom dietylaminosulfurtrifluoridu poskytne etyldifluór-2-pyridylacetát 1-2, ktorý sa redukuje bez purifikácie použitím tetrahydro-borátu sodného. Výsledný 2,2-difluór-2-pyridyletanol 1-3 sa podrobil chromatografii a premenil sa na príslušný triflát 1-4 za použitia anhydridu kyseliny triflátovej a 2,6-di-ŕerc-butyl-4-metylpyridínu ako bázy. Na surový triflát sa potom pôsobilo azidom sodným v DMF, čím sa získal 2,2-difluór-2-pyridyletylazid 1-5, ktorý sa čistil pomocou chromatografie na silikagéli. Redukciou azidu pomocou katalytickej hydrogenácie sa získalo 2,2-difluór-2-pyridyletylamín 1-6.

Kondenzáciou tejto zlúčeniny s etyl-3-bróm-6-metylpyrazín-2-ón-1-acetátom A v zmesi toluén/etanol sa získal etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metyl-pyrazín-2-ón-1-acetát 1-7. Saponifikácia poskytla medziprodukt kyselinu 3-(2,2-di-fluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metyl-pyrazín-2-ón-1 -octovú 1 -8.

EDC/HOAT

DMF/NMM

h h Q ch3

O

Jl·9

Kopulácia 2-aminometyl-3-flórpyridínu B a kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín-2-ón-1-octovej 1-8 sa uskutočnilo v DMF za použitia EDC, HOAT a A/-metylmorfolínu. Pridaním vody sa vyzrážal produkt, ktorý sa následne čistil pomocou chromatografie na silikagéli, čím sa získala v nadpise -43- uvedená zlúčenina vo forme slabo sfarbenej tuhej látky. Premena na jeho hydro-chloridovú soľ sa uskutočnila pôsobením roztokom etylacetátu s dvoma ekvivalentmi 1M HCI v etylacetáte, po čom nasledovala filtrácia.

Etyl-2-pyridinoylformiát (1 -1)

Do roztoku 20 ml (210 mmol) 2-brómpyridínu v 500 ml suchého éteru, ktorý sa miešal sa pridalo pomalým prúdom pri -78 °C pod atmosférou Ar 85 ml 2,5M roztoku n-butyllítia v hexáne. Po miešaní v chlade 30 minút, roztok sa preložil počas 5 minút dvoma kanylami do 0 °C studeného miešaného roztoku 100 ml (736 mmol) dietyloxalátu v 1,0 I suchého éteru pod atmosférou Ar. Po miešaní 2 hodiny v chlade sa reakčná zmes premyla 600 ml nasýteného roztoku NaHC03, vodou a soľankou. Roztok sa vysušil nad MgS04 a rozpúšťadlá sa koncentrovali za zníženého tlaku, čím sa získal červený olej, ktorý sa čistil S1O2 chromatografiou (10 x 15 cm) za použitia 1:4 až 35:65 EtOAc-hexánov. Frakcie obsahujúce produkt sa koncentrovali za zníženého tlaku a poskytli zlúčeninu 1-1 vo forme načervenalého oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 1,42 (t, 3H), 4,45 - 4,55 (m, 2H), 7,55 - 7,6 (m, 1H), 7,9 - 7,95 (m, 1H), 8,11 (d, 1 H), 8,78 (d, 1 H).

Etyl-difluór-2-pyridylacetát (1-2)

Miešaná zmes 22 g (123 mmol) etyl-2-pyridinoylformiátu 1-1 a 75 g (465 mmol) dietylaminosulfurtrifluoridu (DAST) sa zahriala, počas noci na 55 °C pod atmosférou Ar. Pretože reakcia sa nedokončila, pridalo sa ďalších 5 g DAST-u a reakcia sa zahrievala ďalších 24 hodín. Reakčná zmes sa ochladila na teplotu miestnosti a pomaly sa naliala do miešanej zmesi 1 kg ľadu, 400 ml etylacetátu a 500 ml nasýteného roztoku NaHC03. Po pridaní sa zmes alkalizovala pridaním tuhého NaHC03. Vodná vrstva sa extrahovala EtOAc a spojené vrstvy sa premyli nasýteným roztokom NaHC03, soľankou, vysušili sa nad Na2S04 a rozpúšťadlá sa koncentrovali za zníženého tlaku, čím sa získala zlúčenina 1-2 vo forme hnedého oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 1,35 (t, 3H), 4,35 - 4,4 (m, 2H), 7,4 - 7,45 (m, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 8,45 (d, 1H). 2,2-Difluór-2-(2-pyridyl)etanol (1 -3) -44-

Do miešanej roztoku 19,5 g (97 mmol) etyl-difluór-2-pyridylacetátu 1-2 v 200 ml absolútneho etanolu sa pri 0 °C pridalo po malých dávkach 4,42 g (116 mmol) tetrahydroborátu sodného. Po 30 minútach sa reakcia uhasila pridaním 50 ml nasýteného roztoku NH4CI. Reakčná zmes sa koncentrovala za zníženého tlaku a zvyšok sa rozdelil medzi 500 ml etylacetátu a nasýtený roztok NaHC03. Organická vrstva sa premyla vodou, soľankou a vysušila Na2S04 a koncentrovala za zníženého tlaku, čím sa získal hnedý olej, ktorý sa čistil Si02 (10 x 17 cm) použitím 1:1 EtOAc-hexánu. Po opätovnej chromatografii zmiešaných frakcií sa všetky čisté frakcie spojili a koncentrovali za zníženého tlaku, poskytol sa 1-3 vo forme béžovej kryštalickej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 3,6 (t, 1H), 4,17 - 4,3 (m, 2H), 7,4 - 7,45 (m, 1 H), 7,73 (d, 1 H), 7,84 - 7,91 (m, 1 H), 8,61 (d, 1 H). 2.2- Difluór-2-(2-pyridyl)etyl-trifluórmetánsulfonát (1-4)

Do miešaného roztoku 5 g (31,4 mmol) 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etanolu 1-3 a 9,69 g (47,2 mmol) 2,6-di-ferc-butyl-4-metylpyridínu v 110 ml metylén chloridu pri -78 °C pod Ar sa po kvapkách pridalo 7,93 ml (47,2 mmol) anhydridu kyseliny triflátovej. Po 1 hodine sa reakčná zmes zriedila 100 ml pentánu a prefiltrovala sa. Filtrát sa skoncentroval a opäť sa na neho pôsobilo pentánom a nakoniec sa prefiltroval. Koncentráciou filtrátu sa získala zlúčenina 1-4 vo forme hnedého oleja, kontaminovaná 2,6-di-ferc-butyl-4-metylpyridínom: 1H NMR (CDCI3) δ 5,12 (t, 2H), 7,45 - 7,5.(m, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,86 - 7,94 (m, 1H), 8,65 (d, 1H). 2.2- Difluór-2-(2-pyridyl)etylazid (1-5)

Do miešaného roztoku 5,5 g 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etyl-trifluórmetán-sulfonátu 1-4 v 70 ml DMF sa pridalo 6,74 g (104 mmol) azidu sodného pod Ar. Zmes sa cez noc zahrievala na 60 . °C. Druhá várka sa spracovala rovnakým spôsobom a po ochladení na teplotu miestnosti sa obidve reakčné zmesi naliali na 600 ml vody, extrahovali 3 x 500 ml éteru. Spojené extrakty sa premyli soľankou, vysušili nad Na2SC>4 a koncentrovali za zníženého tlaku, čím sa získal olej, ktorý sa čistil Si02 (10 x 6 cm) za použitia hexánu 1:3 EtOAc-hexánu a 1:1 EtOAc-hexánu. Frakcie obsahujúce produkt sa koncentrovali za zníženého tlaku, čím sa získala -45- zlúčenina 1-5 vo forme žltého oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 4,05 (t, 2H), 7,4 - 7,45 (m, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,83 - 7,89 (m, 1H), 8,67 (d, 1H). 2,2-Difluór-2-(2-pyridyl)etylamín (1 -6)

Miešaný roztok 100 mg 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylazidu 1-6 sa hydrogenoval v 10 ml etylacetátu na 100 mg 10%ného paládia na aktívnom uhlí počas 1 hodfiny použitím balónu. Katalyzátor sa odstránil filtráciou a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku. Celkovo 1,8 g (9,7 mmol) azidu sa redukovalo za použitia postupu, čím sa získala zlúčenina 1-6 vo forme žltého oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 8,66 (d, 1H, 4,2 Hz), 7,82 (td, 1H, 7,7, 1,7 Hz), 7,68 (d, 1H, 8,1 Hz), 7,37 - 7,40 (m, 1H), 3,44 (t, 2H, 14,3 Hz), 1,41 (br s, 2H).

Etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín(1H)-2-ón-1-acetát (1-7)

Roztok 7,13 g (45,1 mmol) 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamínu a 12,4 g (45,1 mmol) etyl-3-bróm-6-metylpyrazín(1H)-2-ón-1-acetátu sa zahrial v 15 ml toluénu a 15 ml etanolu vo vzduchotesne uzavretej banke cez noc na 125 °C. Reakcia sa koncentrovala a zvyšok sa zriedil etylacetátom, premyl 15%ným NaHC03 a vodná vrstva sa opäť premyla 3 dávkami etylacetátu. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgS04 a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa získal olej, ktorý sa podrobil chromatografii na Si02 použitím zmesi 50:50 hexán-EtOAc, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme jasnožltej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,67 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,80 (t, 1H, 7,9 Hz), 7,68 (d, 1H, 7,9 Hz), 7,36 - 7,39 (m, 1H), 6,71 (s, 1H), 6,31 (br t, 1H), 4,69 (s, 2H), 4,35 (td, 2H, 14,1, 6,6 Hz), 4,24 (q, 2H, 7,1 Hz), 2,11 (s, 3H), 1,29 (t, 3H, 6,8 Hz).

Kyselina 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín(1 H)-2-ón-1 -octová (1-8)

Do miešaného roztoku 9,67 g (27,5 mmol) etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)-etylamino)-6-metylpyrazín-(1H)-2-ón-1-acetátu v 100 ml metanolu sa pridalo 8,58 g (153,0 mmol) hydroxidu draselného v 20 ml vody. Po 1 hodine sa roztok koncentroval za zníženého tlaku a zvyšok sa rozpustil v 25 ml vody. Roztok sa okyslil na pH = 7 použitím 1,3M HCI a koncentroval sa za zníženého tlaku, čím sa -46- získala žltá tuhá látka, ktorá obsahuje chlorid draselný a v nadpise uvedenú zlúčeninu: 1H NMR (CD3OD) δ 8,65 (d, 1H, 4,7 Hz), 7,95 (td, 1H, 7,9, 1,8 Hz), 7,72 -7,74 (m, 1H), 7,50 - 7,54 (m, 1H), 6,64 (d, 1H, 1,09 Hz), 4,78 (s, 2H), 4,31 (t, 2H, 14,1 Hz), 2,16 (s, 3H). 3-Fluór-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metylpyrazín-2-ón-1-acetamid (1-9)

Do miešaného roztoku 300,1 g (0,418 mmol) kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamÍno)-6-metylpyrazín(1H)-2-ón-1 -octovej 1-8 a 99 mg (0,501 mmol) dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fluórpyridínu B v 3 ml DMF sa pridalo 50,0 mg (0,26 mmol) EDC, 35,0 mg (0,26 mmol) HOBT a 304 mg (3,0 mmol) trietylamínu. Po miešaní 1 hodinu sa prchavé látky odstránili za zníženého tlaku. Výsledný tmavý olej sa zriedil etylacetátom, premyl 5%ným NaHCC>3 a vodná vrstva sa opäť premyla 3 dávkami etylacetátu. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgS04 a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa získal olej, ktorý sa podrobil chromatografii na Si02 použitím zmesi 95:5 chloroform-MeOH, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme jasnožltej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,67 (dd, 1H, 0,7, 4,8 Hz), 8,31 (ddd, 1H, 1,3, 1,3, 4,6 Hz), 7,81 (ddd, 1H, 1,7, 7,7, 7,7 Hz), 7,69 (ddd, 1H, 0,9, 0,9, 8,1 Hz), 7,20 (br t, 1H), 7,37 (m, 2H), 7,23 (ddd, 1H, 8,6, 4,3, 4,3 Hz), 6,75 (d, 1H, 0,9 Hz), 6,34 (br t, 1H, 6,3 Hz), 4,73 (s, 2H), 4,63 (dd, 2H, 4,7,1,6 Hz), 4,37 (td, 2H, 14,2, 6,5 Hz), 2,25 (d, 3H, 0,9 Hz)

Premena na jeho dihydrochloridovú soľ sa môže uskutočniť pôsobením roztoku dioxánu s dvoma ekvivalentmi 4,0M HCI v dioxáne, po čom nasleduje koncentrácia: 1H NMR (CD3OD) δ 8,71 (br d, 1H, 4,6 Hz), 8,56 (dd, 1H, 0,9,'5,3 Hz), 8,15 (ddd, 1H, 0,9, 8,9, 8,9 Hz), 8,05 (ddd, 1H, 1,6, 7,8, 7,8 Hz), 7,83 (d, 1H, 8,1 Hz), 7,81 (m, 1H), 7,61 (dd, 1H, 5,1, 7,3 Hz), 6,68 (d, 1H, 0,9 Hz), 4,88 (s, 2H), 4,74 (d, 2H, 1,3 Hz), 4,44 (t, 2H, 14,4 Hz), 2,25 (d, 3H, 0,8 Hz).

Príklad 2

Podľa syntézy opísanej nižšie sa pripravil chlórpyrazinónový derivát zlúčeniny 1-9.

0 -47- EtO

Cl

O O + hcih2n X ^ OEt

TEA DCE

2-1

MeO OMe

HCI 2-2 —- HOAc

TEA 1d, 120°Π PhCH3:EtOH (3:1)

T -48-

ΟΗ

Etyl-A/-(etylkarboxymetyl)oxamát (2-1)

Do suspenzie etylglycín.HCI (38,4 g, 275 mmol) v 1,2-dichlóretáne (360 ml) sa pridal trietylamín (77,0 ml, 550 mmol) pri teplote miestnosti. Po miešaní 30 minút sa heterogénna zmes ochladila na 0 °C a počas 1 hodiny sa po kvapkách pridával etyloxalylchlorid (30,3 ml, 275 mmol). Po dokončení pridávania sa odstránil chladiaci kúpeľ a reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Reakčná zmes sa zriedila vodou (250 ml) a vrstvy sa oddelili. Vodná vrstva sa opäť premyla 2 dávkami dichlórmetánu (250 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli vodou (250 ml), následne nato soľankou (250 ml), vysušili sa nad MgS04 a koncentrovali, čím sa získal olej 2-1, ktorý sa priamo použil v ďalšom kroku. A/-(Etylkarboxymetyl)-A/’-(2,2-dimetoxyetyl)oxamid (2-2)

Do roztoku oxamátu (84,0 g, 414 mmol) 2-1 v 2-propanole (500 ml) sa pridal aminoacetaldehyd-dimetylacetál (45,7 g, 435 mmol) v jednej dávke. Po miešaní počas noci pri teplote miestnosti sa reakčná zmes koncentrovala na hustý oranžový olej. Táto hustá kaša sa zriedila 2-propanolom (300 ml) a tuhá látka sa rozdrtila špachtľou. Filtrácia poskytla tuhú látku, ktorá sa ďalej premyla ďalšou dávkou -49- 2-propanolu. Odstránenie zvyšného propanolu sa uskutočnilo vo vysokom vákuu, čím sa získala svetlooranžová tuhá látka 2-2 (89,8 g): 1H NMR (CDCI3) δ 7,82 (br s, 1H), 7,50 (br s, 1H), 4,41 (t, 1H, 5,3 Hz), 4,24 (q, 2H, 7,1 Hz), 4,09 (d, 2H, 5,9 Hz), 3,47 (dd, 2H, 5,3, 6,2 Hz), 3,40 (s, 6H), 1,30 (t, 3H, 7,1 Hz).

Etyl-3-hydroxypyrazín(1 H)-2-ón-1 -acetát (2-3)

Roztok oxamidu (89,8 g, 343 mmol) 2-2, kyseliny octovej (400 ml) a koncentrovanej HCI sa zahrial do refluxu. Po jednej hodine sa čierna reakčná zmes koncentrovala na hustý olej, (použilo sa vysoké vákuum na zaistenie kompletného odstránenia AcOH), ktorý sa zriedil EtOH (150 ml) a MeOH (150 ml). Zoškrabanie hustého čierneho oleja špachtľou vyvolalo vyzrážanie produktu. MeOH sa odstránilo na rotačnej odparke a zvyšná kaša sa filtrovala a opláchla EtOH (200 ml) za poskytnutia svetlohnedej tuhej látky. Rekryštalizáciou z refluxujúceho EtOH (300 ml) sa získal šedobiely prášok 2-3: 1H NMR (CD3OD) δ 6,50 (d, 1H, 5,9 Hz), 6,36 (d, 1 H, 5,9 Hz), 4,58 (s, 2H), 4,23 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,28 (t, 3H, 7,1 Hz).

Naviac surový dión sa môže získať koncentráciou materského lúhu.

Etyl 3-brómpyrazín(1H)-2-ón-1-acetát (2-4)

Roztok hydroxypyrazinónu (25,0 g, 126 mmol) 2-3 a oxybromidu fosforečného (37,9 g, 132 mmol) v 1,2-dichlóretáne (250 ml) sa zahrial do refluxu. Po 8 hodinách sa na reakčnú zmes pôsobilo nasýteným vodným roztokom Na2C03 (250 ml) a zmes sa miešala 1 hodinu. Zmes sa zriedila vodou (100 ml) a dichlór-metánom (100 ml), vrstvy sa oddelili a vodná vrstva sa opäť premyla EtOAc (3 x 200 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušili (MgS04) a koncentrovali, čím sa získal olej, ktorý sa uschoval vo vysokom vákuu počas noci, čím sa poskytla hnedá tuhá látka 2-4:1H NMR (CDCI3) δ 7,17 (d, 1H, 4,2 Hz), 7,07 (d, 1H, 4,2 Hz), 4,65 (s, 2H), 4,27 (q, 2H, 7,2 Hz), 1,31 (t, 3H, 7,2 Hz).

Etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)pyrazín(1 H)-2-ón-1 -acetát (2-5)

Roztok 4,8 g (30,4 mmol) 2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamínu, 4,24 ml (30,4 mmol) trietylamínu a 7,93 g (30,4 mmol) etyl 3-brómpyrazín(1H)-2-ón-1-acetátu (2-4) sa zahrial v 12 ml toluénu a 4 ml etanolu cez noc vo vzduchotesne uzavretej -50- banke na 120 °C. Reakcia sa koncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi dichlór-metán a nasýtený vodný roztok NaHC03. Vodná vrstva sa opäť premyla 4 dávkami dichlórmetánu. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgSCU a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa poskytol olej, ktorý sa podrobil chromatografii na Si02 použitím zmesi 60:40 až 40:60 hexán-EtOAc, čím sa získala zlúčenina 2-5 vo forme žltej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,67 (dd, 1H, 4,8, 0,7 Hz), 7,81 (ddd, 1H, 7,8, 7,8, 1,7 Hz), 7,69 (dd, 1H, 7,8, 1 Hz), 7,38 (dd, 1H, 5,1, 7,0 Hz), 6,86 (d, 1H, 4,8 Hz), 6,54 (br t, 1H, 5,9 Hz), 6,40 (d, 1H, 4,6 Hz), 4,54 (s, 2H), 4,38 (td, 2H, 14,0, 6,4 Hz), 4,24 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,29 (t, 3H, 7,1 Hz).

Etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín(1 H)-2-ón-1 -acetát (2-6)

Miešaný roztok 6,81 g (20,1 mmol) etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-pyrazín-(1H)-2-ón-1-acetátu 2-5 a 2,42 g (18,1 mmol) /V-chlórsukcínimidu v 100 ml 1,2-dichlóretánu sa zahrial do refluxu. Do reakčnej zmesi sa po 1 hodine, prípadne po 1,5 hodine pridalo dodatočne 242 mg (1,81 mmol) a 75 mg (0,56 mmol) NCS. Po 2,5 hodinách sa roztok ochladil na teplotu miestnosti a rozdelil medzi dichlórmetán (150 ml) a nasýtený vodný roztok NaHC03 (200 ml). Vrstvy sa oddelili a vodná fáza sa opäť premyla dichlórmetánom (2 x 200 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgSC>4 a roztok sa koncentroval na množstvo 10 ml. Táto kvapalina sa priamo naliala na Si02 stĺpca a podrobila sa elúcii zmesou 65:35 až 55:45 hexán-EtOAc, čím sa poskytol 2-6 vo forme žltej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,68 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,83 (ddd, 1H, 7,7, 7,7,1,6 Hz), 7,9 (dd, 1H, 7,9 Hz), 7,40 (dd, 1H, 4,9, 7,3 Hz), 6,96 (s, 1H), 6,49 (br t, 1H, 5,9 Hz), 4,89 (s, 2H), 4,38 (td, 2H, 13,9, 6,5 Hz), 4,26 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,30 (t, 3H, 7,1 Hz).

Kyselina 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín(1 H)-2-ón-1 -octová (2-7)

Do miešaného roztoku 7,27 g (19,5 mmol) etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)-etylamino)-6-chlórpyrazín(1/-/)-2-ón-1-acetátu 2-6 v 200 ml metanolu sa pridalo 39 ml (39,0 mmol) 1M vodného roztoku hydroxidu draselného. Po 3 hodinách sa roztok okyslil na pH = 7 použitím koncentrovanej HCI a koncentroval sa za zníženého tlaku (azeotropická zmes s PhCH3), čím sa získala biela tuhá látka, ktorá obsahuje -51 - chlorid draselný a 2-7: 1H NMR (CD3OD) δ 8,64 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,93 (ddd, 1H, 7,7, 7,7, 1,5 Hz), 7,70 (d, 1H, 8,0 Hz), 7,49 (dd, 1H, 5,2, 7,4 Hz), 6,80 (s, 1H), 4,67 (s, 2H), 4,27 (t, 2H, 13,9 Hz). 3-Fluór-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid (2-8)

Do miešaného roztoku 330 mg (0,536 mmol) kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín(1H)-2-ón-1-octovej 2-7 a 160 mg (0,805 mmol) dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fluórpyridínu v 2 ml DMF sa pridalo 128 mg (0,67 mmol) EDC, 91 mg (0,67 mmol) HOAT a 0,30 ml (2,1 mmol) trietylamínu. Po miešaní cez noc sa pridalo 80 mg dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fluórpyridínu, 128 mg EDC, 91 mg HOAT a 0,08 ml (2,1 mmol) trietylamínu. Reakčná zmes sa miešala ďalších 24 hodín a prchavé látky sa odstránili vo vákuu. Zvyšok sa zriedil nasýteným vodným roztokom NaHC03 (10 ml) a vodou (15 ml) a filtroval sa, čím sa získala svetlohnedá tuhá látka. Táto látka sa podrobila chromatografii na S1O2 použitím zmesi 1:99 až 5:95 MeOH-CHaCb, čím sa získala žltá tuhá látka 2-8: 1H NMR (CDCI3) δ 8,67 (d, 1H, 4,6 Hz), 8,32 (d, 1H, 4,6 Hz), 7,81 (dd, 1H, 7,8, 6,4 Hz), 7,69 (d, 1H, 7,8 Hz), 7.4Í- 7,37 (m, 2H), 7,27 - 7,22 (m, 2H), 6,97 (s, 1H), 6,49 (br t, 1H, 6,0 Hz), 4,93 (s, 2H), 4,66 (d, 2H, 4,0 Hz), 4,38 (td, 2H, 13,9, 6,5 Hz).

Zlúčenina 2-8 sa tiež nazýva 2-{3-[(2,2-dilfuór-2-(2-pyridyl)etyl)amino]-6-chlór-2-oxohydropyrazinyl}-/V-{(3-fluór-(2-pyridyl))metyl]acetamid. Premena na jeho hydrochloridovú soľ sa môže uskutočniť zriedením produktu etylacetátom (2 ml) a pôsobením 5 ml 1,5M HCI v etylacetáte, po ktorom nasleduje filtrácia: 1H NMR (CD3OD) δ 8,72 (d, 1H, 4,6 Hz), 8,56 (dd, 1H, 0,9, 5,3 Hz), 8,16 - 8,11 (m, 2H), 7,87 (d, 1H, 8,1 Hz), 7,80 (ddd, 1H, 4,8, 4,8, 9,0 Hz), 7,68 (dd, 1H, 5,4, 7,2 Hz), 6,87 (s, 1H), 4,95 (s, 2H), 4,74 (d, 2H, 1,1 Hz), 4,35 (t, 2H, 13,8 Hz).

Príklad 3

Podľa syntézy opísanej nižšie sa pripravili tio-, sulfonyl a sulfinyl deriváty zlúčeniny 2-7 -52-

Pd/C, HCI

MeOH 379,1 kPa H2 (55 psi)

H2N

MeS 3-2

n-XTn- F F H

N ,Cl O

OEt O

EDC, HOBT, DMF, NMM 2-7

K

2 ekv. MCPBA MeOH -53-

1 ekv. MCPBA MeÓH

2-Kyano-3-metyltiopyridín (3-1)

Miešaný roztok 1,0 g (8,19 mmol) 2-kyano-3-fIuórpyridínu a 0,631 g (9,01 mmol) tiometoxidu sodného v 8 ml DMF sa miešal pri teplote miestnosti 1 hodinu. Reakčná zmes sa zriedila vodou (80 ml) a miešala sa 5 minút. Výsledná tuhá látka sa odfiltrovala a vysušila vo vysokom vákuu, čím sa získala zlúčenina 3-1 vo forme šedobielej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,46 (d, 1H, 4,6 Hz), 7,66 (d, 1H, 8,3 Hz), 7,44 (dd, 1H, 4,6, 8,3 Hz), 2,58 (s, 3H).

Dihydrochlorid 2-aminometyl-3-metyltiopyridínu (3-2)

Miešaný roztok 659 mg (4,39 mmol) 2-kyano-metyitiopyridínu 3-1 v 25 ml metanolu a 5 ml 6M vodnej HCI sa hydrogenoval 659 mg 10%ného paládia na aktívnom uhlí pri tlaku 379,1 kPa (55 psi) počas 5 hodín. Katalyzátor sa odstránil filtráciou a rozpúšťadlá sa koncentrovali za zníženého tlaku. Výsledná látka sa zriedila metanolom a koncentrovala (2x), čím sa získala zlúčenina 3-2 vo forme šedobielej tuhej látky: 1H NMR (CD3OD) δ 2,58 (s, 3H), 4,28 (s, 2H), 7,43 (m, 1H), 7,86 (dd, J = 1,3 a 8,1 Hz, 1H), 8,43 (dd, J = 1,3 a 4,8 Hz, 1H). -54- 3-Metyltio-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón- 1- acetamid (3-3)

Do miešaného roztoku 545 mg (0,886 mmol) kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín(1/-/)-2-ón-1-octovej 2-7 a 144 mg (0,930 mmol) dihydrochloridu 2-aminometyl-3-metyltiopyridínu 3-2 v 9 ml DMF sa pridalo 178 mg (0,930 mmol) EDC, 126 mg (0,930 mmol) HOBT a 179 mg (1,77 mmol) NMM. Po miešaní cez noc sa reakcia rozdelila medzi EtOAc a 10%ný vodný roztok NaHC03 a nerozpustná látka sa odfiltrovala. Organická fáza sa premyla vodou, soľankou, vysušila sa (MgS04) a koncentrovala sa. Tento zvyšok a odfiltrovaná tuhá látka sa spojili a podrobili chromatografii na Si02 použitím zmesi 1:99 až 5:95 MeOH-CHCl3. Táto látka sa rozpustila v 5 ml metanolu a pridali sa 3 kvapky etanolu nasýteného HCI. Koncentráciou sa poskytola zlúčenina 3-3 vo forme svetlo žltej tuhej látky: 1H NMR (D6DMSO) δ 2,49 (nejasný s, 3H), 4,22 (m, 2H), 4,42 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 4,82 (s, 2H), 6,91 (s, 1 H), 7,34 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,70 (m, 2H), 7,96 (m, 1H), 8.32 (d, J = 3,9 Hz, 1 H), 8,69 (m. 2H); HRMS (FAB) vypočítané pre C20H20CIF2N6O2S (M+1) 481,1019, nájdené 481,0999. 3-Metylsulfonyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín- 2- ón-1-acetamid (3-4) 3-Metyltio-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid (15 mg, 0,031 mmol) 3-3 sa suspendoval v 2,5 ml metanolu a pôsobilo sa na neho MCPBA (50 až 60%, 21,5 mg, 0,062 mmol). Po 3 hodinovom miešaní sa pridal ďalší ekvivalent MCPBA (50 až 60%, 10,75 mg, 0,031 mmol). Reakčná zmes sa miešala cez noc a pridal sa nasýtený vodný roztok NaHC03 pokým roztok nebol neutrálny. Táto zmes sa koncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi EtOAc a vodu. Organická fáza sa premyla vodou, soľankou a vysušila sa (MgS04) a koncentrovala sa. Táto látka sa podrobila chromatografii na Si02 použitím zmesi 1:99 až 3:97 MeOH-CHCI3, čím sa poskytla zlúčenina 3-4: 1H NMR (CDCI3) δ 3,25 (s, 3H), 4,38 (m, 2H), 4,91 (s, 2H), 4,96 (d, J = 5,3 Hz, 2H), 6,50 (t, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,26 (nejasný m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,70 (dd, 1H), 7,84 (t, 1H), 8.32 (d, 1H), 8,67 (m, 2H), 8,74 (t, 1H); HRMS (FAB) vypočítané pre C20H20CIF2N6O4S (M+1) 513,0923, nájdené 513,0895. -55- [R,S]-3-Metylsulfinyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlór-pyrazín-2-ón-1-acetamid (3-5) 3-Metyltio-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid (50 mg, 0,104 mmol) 3-3 sa suspendoval v 8 ml metanolu a pôsobilo sa na neho MCPBA (50 až 60%, 35,9 mg, 0,104 mmol). Po 1 hodinovom miešaní sa pridal nasýtený vodný roztok NaHC03 kým roztok nebol neutrálny. Táto zmes sa potom čistila HPLC, čím sa poskytla zlúčenina 3-5 vo forme bezfarebnej tuhej látky: 1H NMR (D6DMSO) δ 2,76 (s, 3H), 4,21 (m, 2H), 4,45 (m, 2H), 4,76 (s, 2H), 6,90 (s, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,55 (m, 1H), 7,61 (m, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,96 (t, 1H), 8,25 (d, 1 H), 8,69 (m, 2H), 8,96 (t, 1H); HRMS (FAB) vypočítané pre C20H20CIF2N6O3S (M+1) 497,0969, nájdené 497,0970. Enantioméry sa oddelili na stĺpci Chiralpak AD, eluovali sa zmesou 1:1 2-propanol:hexány/0,1% dietylamín (za získania rýchlejšieho eluujúceho enantioméru vo forme bezfarebnej tuhej látky), potom nasledovala elúcia so zmesou 7:3 2-propanol:hexány/0,1% dietylamín (za získania pomalšie eluujúceho enantioméru vo forme bezfarebnej tuhej látky).

Príklad 4

Príprava hydrochloridu 3-fluór-2-pyridylmetyl 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-kyanopyrazín-2-ón-1 -acetamidu (4-7)

-56-

Krok A: Etyl 6-formyl-3-hydroxypyrazín(1H)-2-ón-1-acetát (4-1)

Suspenzia hydroxypyrazinónu (5,0 g, 23,6 mmol) a oxidu seleničitého (2,62 g, 23,6 mmol) v 1,4-dioxáne (100 ml) sa zahriala do refluxu počas 24 hodín. Tmavá reakčná zmes sa ochladila a prefiltrovala cez lôžko celitu s MeOH. Koncentráciou a purifikáciou zvyšku na S1O2 stĺpci so zmesou 3:97 až 10:90 MeOl-kCHkCfe sa získala zlúčenina 4-1 vo forme oranžovej tuhej látky: 1H NMR (CD3OD) δ 9,11 (s, 1H), 7,39 (s, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,22 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,29 (t, 3H, 7,1 Hz).

Krok B: Etyl-6-formoximyl-3-hydroxypyrazín(1H)-2-ón-1-acetát (4-2)

Do suspenzie formylpyrazinónu 4-1 (5,43 g, 24,0 mmol) a hydrochloridu hydroxylamínu (1,67 g, 24,0 mmol) v etanole (100 ml) sa pridal pyridín (1,90 ml, 24,0 mmol). Po 2 hodinách pri refluxe sa reakčná zmes ochladila a koncentrovala. Surová tuhá látka sa opäť kryštalizovala z etanolu (100 ml) za získania zlúčeniny 4-2 vo forme tuhej látky. Ďalší produkt sa získal koncentráciou filtrátu a trituráciou s vodou (50 ml): 1H NMR (DMSO) δ 11,85 (d, 1 H), 11,19 (s, 1 H), 7,82 (s, 1 H), 6,79 (d, 1H, 5,9 Hz), 5,05 (s, 2H), 4,12 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,2 (t, 3H, 7,1 Hz).

,OH

N

OEt PPh3 Ν-γΟΝ0 DCE, CCI4 HO 'V'^OE, o 4-3

Krok C: Etyl-6-kyano-3-hydroxypyrazín(1H)-2-ón-1-acetát (4-3)

Kaša hydroxypyrazinónu 4-2 (2,7 g, 11,2 mmol) a polymérovo viazaného trifenylfosfínu (1,55 mmol/g živica: 15,1 g, 23,5 mmol) v 1,2-dichlóretáne (90 ml) a chloride uhličitom (9 ml) sa zahriala na réflux počas 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa -57- ochladila, prefiltrovala a živica sa prepláchla zmesou 1:1 MeOH:CH2CI2 (200 ml). Koncentráciou filtrátu sa získala zlúčenina 4-3 vo forme svetlohnedej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 7,06 (s, 1H), 4,73 (s, 2H), 4,29 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,33 (t, 3H, 7,1 Hz).

Krok D: Etyl-3-chlór-6-kyanopyrazín(1 H)-2-ón-1 -acetát (4-4)

Suspenzia hydroxypyrazinónu 4-3 (450 mg, 2,02 mmol) a chloridu amónneho (237 mg, 4,44 mmol) v oxychloride fosforečnom (2 ml) sa zahriala do refluxu počas 1,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladila a prchavé látky sa odstránili na rotačnej odparke. Zvyšok sa uhasil vodou a tuhý Na2S04 sa pridával kým nebola zmes bázická. Táto vodná zmes sa extrahovala dichlórmetánom (3x) a spojené organické vrstvy sa vysušili (Na2S04) a koncentrovali, čím sa získala zlúčenina 4-4 vo forme jantárového oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 7,60 (s, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,32 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,31 (t, 3H, 7,1 Hz).

4-5 -58-

Krok E: Etyl-3-(2,2-dífluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-kyanopyrazín(1 H)-2-ón-1-acetát (4-5)

Zmes 0,3 g (1,9 mmol) 2)2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamínu 1-6, 0,35 ml (2,5 mmol), trietylamínu a 0,42 g (1,75 mmol) etyl-3-chlór-6-kyanopyrazín(1H)-2-ón-1-acetátu 4-4 v 3 ml toluénu a 0,5 ml etanolu sa zahriala na 60 °C počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa koncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi dichlórmetán a nasýtený vodný roztok NaHC03. Vodná vrstva sa opäť premyla dichlórmetánom (2x), vysušila sa a koncentrovala. Rýchlou chromatografiou na silikagéli, za použitia 25 až 50% zmesi EtOAc/hexánov sa získala zlúčenina 4-5 vo forme svetlohnedého prášku: 1H NMR (CDCI3) δ 8,67 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,86 (ddd, 1H, 1,6, 7,8, 7,8 Hz), 7,71 (dd, 1H, 0,9, 8,0 Hz), 7,43 (m, 2H), 7,35 (br t, 1^), 4,79 (s, 2H), 4,62 (dt, 2H, 6,5, 13,5 Hz), 4,29 (q, 2H, 7,1 Hz), 1,32 (t, 3H, 7,1 Hz).

Krok F: Kyselina 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-kyanopyrazín(1/V)-2-ón-1-octová (4-6)

Do miešaného roztoku 0,38 g (1,06 mmol) etyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)-etylamino)-6-kyanopyrazín(1/-/)-2-ón-1-acetátu 4-5 v dimetoxyetáne (10 ml) sa pridalo 1,6 ml roztoku hydroxidu lítneho (1,0M vo vode). Po 1 hodine sa roztok neutralizoval použitím 1M HCI. Koncentráciou za zníženého tlaku (azeotropná zmes s PhCHa) sa získala šedobiela tuhá látka, ktorá obsahuje chlorid lítny a zlúčeninu 4-6, ktorá sa priamo použila v ďalšom kroku.

Krok G: Hydrochlorid 3-fluór-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-kyanopyrazín-2-ón-1 -acetamidu (4-7)

Do miešaného roztoku 0,08 mmol kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etyl-amino)-6-kyanopyrazín(1H)-2-ón-1-octovej 4-6 a 24 mg (0,12 mmol) dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fIuórpyridínu v 1 ml DMF sa pridalo 23 mg (0,12 mmol) EDC, 16 mg -59- (0,12 mmol) HOAT a 0,056 ml (0,4 mmol) trietylamínu. Po miešaní 24 hodín sa pridalo 20 mg dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fluórpyridínu, 25 mg EDC, 0,05 ml trietylamínu. Reakčná zmes sa miešala ďalších 72 hodín a prchavé látky sa odstránili vo vákuu. Zvyšok sa zriedil nasýteným vodným roztokom NaHC03 (5 ml) a vodou (5 ml) a filtroval sa, čím sa získala svetlohnedá tuhá látka. Táto látka sa podrobila chromatografii na S1O2 použitím zmesi 2:98 až 4:96 MeOH-ChfeCfe, čím sa získala žltá tuhá látka 4-7:1H NMR (CDCI3) δ 8,66 (d, 1H, 4,8 Hz), 8,34 (dd, 1H, 1, 4,8 Hz), 7,84 (ddd, 1H, 1,5, 7,8, 7,8 Hz), 7,70 (dd, 1H, 1, 7,9 Hz), 7,44 - 7,39 (m, 3H), 7,33 (m, 2H), 7,26 (m, 2H), 4,83 (s, 2H), 4,68 (d, 2H, 4,4 Hz), 4,44 (dt, 2H, 6,5, 13,1 Hz).

Príklad 5

Príprava 3-fluór-4-metyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlór-pyrazín-2-ón-1-acetamidu (5-5)

-60- 3-Fluór-4-metylpyridín (5-1)

Do miešaného roztoku LDA (5,5 mmol) sa pri -78 °C po kvapkách pridal 3-fluórpyridín (486 mg, 5,0 mmol). Po miešaní 4 hodiny pri -78 °C sa po kvapkách pridal metyljodid (0,343 ml, 5,5 mmol). Reakcia sa po 2 hodinách pri -78 °C uhasila 20 ml nasýteného vodného roztoku NH4CI. Táto zmes sa extrahovala EtOAc (3 x 25 ml), spojené organické vrstvy sa vysušili a koncentrovali, čím sa poskytol produkt vo forme žltej tuhej látky 5-1:1H NMR (CDCI3) δ 8,36 (br s, 1H), 8,27 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,15 (br dd, 1 H, 5,7, 5,7 Hz), 2,32 (s, 3H). 3-Fluór-4-metylpyridín-/V-oxÍd (5-2)

Do miešaného roztoku 3,17 g (28,6 mmol) 3-fluór-4-metylpyridínu 5-1 v 35 ml dichlórmetánu sa pridalo 4,83 g NaHC03 (57,5 mmol, v 10 ml H20). Táto zmes sa ochladila na 0°C a v 3 dávkach sa 15 minút pridávalo 9,85 g MCPBA (57,1 mmol). Reakčná zmes sa nechala cez noc ohriať na teplotu miestnosti. Vrstvy dvojfázovej zmesi sa oddelili a vodná fáza sa premyla chloroformom (3 x 100 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgS04 a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa získal olej, ktorý sa podrobil chromatografii na Si02 za použitia 95:5 DCM-MeOH, čím sa získala zlúčenina 5-2 vo forme bielej tuhej látky: 1H NMR (CDCI3) δ 8,13 (d, 1H, 4,6 Hz), 7,99 (d, 1H, 6,6 Hz), 7,09 (br dd, 1H, 7,6, 7,6 Hz), 2,30 (s, 3H). 2-Kya ηο-3-fl uór-4-metyl pyrid í n (5-3)

Do miešaného roztoku 0,95 g (7,48 mmol) 3-fluór-4-metylpyridín-/\/-oxidu 5-2 v 20 ml acetonitrilu sa pridalo 1,14 g (11,2 mmol) trietylamínu, následne na to 1,48 g (15,0 mmol) trimetylsilylkyanidu. Táto reakčná zmes sa ohriala do refluxu počas 48 hodín, a po uplynutí tohto času sa roztok koncentroval za zníženého tlaku. Tmavý zvyšok sa rozpustil v CHCI3, premyl nasýteným vodným roztokom NaHC03 a vodná vrstva sa opäť premyla chloroformom (4x). Spojené organické vrstvy sa vysušili MgS04 a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa získal olej, ktorý sa podrobil chromatografii na Si02 za použitia zmesi 75:25 hexán-EtOAc, čím sa -61 - získala zlúčenina 5-3 vo forme žltého oleja: 1H NMR (CDCI3) δ 8,39 (d, 1H, 4,8 Hz), 7,09 (br dd, 1H, 5,8, 5,8 Hz), 2,41 (s, 3H).

Dihydrochlorid 2-aminometyl-3-fluór-4-metylpyridínu (5-4)

Miešaný roztok 332 mg (2,44 mmol) 3-kyano-3-fluór-4-metylpyridínu 5-3 v 15 ml etanolu a 0,61 ml (7,32 mmol) koncentrovanej HCI sa hydrogenoval na 175 mg 10%ného paládia na uhlí pri tlaku 379,1 kPa (55 psi) za 16 h. Katalyzátor sa odstránil filtráciou a rozpúšťadlá sa odstránili za zníženého tlaku, čím sa získala zlúčenina 5-4 vo forme žltej tuhej látky: 1H NMR (CD3OD) δ 8,41 (d, 1H, 5,1 Hz), 7,54 (dd, 1 H, 5,5, 5,5 Hz), 4,40 (s, 2H), 2,44 (s, 3H). 3-Fluór-4-metyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid (5-5)

Do miešaného roztoku 80 mg (0,197 mmol, zvyšok KCI) kyseliny 3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín(1H)-2-ón-1-octovej 2-7 a 63 mg (0,296 mmol) dihydrochloridu 2-aminometyl-3-fluór-4-metylpyridínu 5-4 v 1 ml DMF sa pridalo 77 mg (0,4 mmol) EDC, 54 mg (0,4 mmol) HOAT a 0,13 ml (0,89 mmol) TEA. Po miešaní cez noc sa prchavé látky odstránili vo vákuu. Zvyšok sa zriedil nasýteným vodným roztokom NaHC03, prefiltroval a prepláchol vodou, čím sa poskytla hnedá tuhá látka. Táto látka sa podrobila rýchlej chromatografii za použitia 2 až 4% zmesi MeOH:DCM, čím sa získala v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky. Premena na HCI soľ sa uskutočnila zriedením voľnej bázy s MeOH (5 ml), pôsobením na ňu 2,5M HCI (2 ml) a koncentrovaním na tuhú látku 5-5: 1H NMR (CD3OD) δ 8,82 (d, 1H, 4,1 Hz), 8,56 (d, 1H, 5,1 Hz), 8,33 (dd, 1H,‘7,4, 7,4 Hz), 8,04 (d, 1H, 7,8 Hz), 8,00 (br t, 1H), 7,87 (br t, 1H, 5,6 Hz), 6,92 (s, 1H), 5,0 (s, 2H), 4,80 (s, 2H), 4,44 (t, 2H, 13,6 Hz), 2,621 (s, 3H).

Typické tabletové jadrá vhodné na podávanie trombínových inhibítorov pozostávajú, ale nie sú limitované, nasledujúcimi množstvami štandardných zložiek: -62-

Doporučené zastúpenie excipientov v zmesi v nepoťahovaných tabletových jadrách

Excipient Všeobecné rozmedzie (%) Výhodné rozmedzie (%) Najvýhodnejšie rozmedzie (%) Manitol 10-90 25-75 30 - 60 Mikrokryštalická celuóza 10-90 25-75 30-60 Stearan horečnatý 0,1 -5,0 0,1 -2,5 0,5-1,5

Manitol, mikrokryštalická celulóza a stearan horečnatý môžu byť nahradené alternatívnymi farmaceutický prijateľnými excipientami.

Nasledujúce syntetické spôsoby sa môžu použiť pri príprave zlúčenín podľa vynálezu:

In vitro testy na určenie inhibície poteinázy

Testy ľudského α-trombínu a ľudského trypsínu sa uskutočnili spôsobmi v podstate ako je to opísané v Trombosis Research, Issue č. 70, strana 173 (1993) S. D. Lewisom a ďalší.

Testy sa uskutočnili pri teplote 25 °C v 0,05 M TRIS pufri s pH 7,4, 0,15 M NaCI, 0,1 % PEG. Trypsínové testy tiež zahrnujú 1 mM CaCb. V testoch, kde sa určovali rýchlosti hydrolýzy p-nitroanilidového (pna) substrátu sa použil Thermomax 96-jamkový čítač platní na meranie (pri 405 nm) vzniku časovej závislosti vzniku p-nitroanilínu. sar-PR-pna sa použil na testovanie ľudského α-trombínu (Km = 125 μΜ) a bovinného trypsínu (Km = 125 μΜ). Koncentrácia p-nitroanilidového substrátu sa určila z meraní absorbancie pri 342 nm použitím extinkčného koeficientu 8270 cm'1M‘1. V určitých štúdiách so silnými inhibítormi (K,· <10 nM), kde stupeň inhibície trombínu bol vysoký, sa použil citlivejší test aktivity. V tomto teste sa určila rýchlosť trombínom katalyzovanej hydrolýzy fluorogenického substrátu Z-GPR-afc (Km = 27 μΜ) zo zvyšovania sa fluorescencie pri 500 nm (excitácia pri 400 nm) spojenej s produkciou 7-amino-4-trifluórmetylkumarínu. Koncentrácie zásobných roztokov Z-GPR-afc sa určili z meraní absorbancie pri 380 nm 7-amino-4-trifluórmetyl- -63- kumarínu, ktorý sa vytvoril po úplnej hydrolýze alikvótu zásobného roztoku trombínom.

Testy aktivity sa uskutočnili zriedením zásobného roztoku substrátu najmenej desaťkrát na konečnú koncentráciu <0,1 Km do roztoku, ktorý obsahuje enzým alebo enzým ekvilibrovaný inhibítorbm. Časy potrebné na dosiahnutie rovnováhy medzi enzýmom a inhibítorom sa určili v kontrolných pokusoch. Začiatočné rýchlosti tvorby produktu sa merali v neprítomnosti (Vo) alebo prítomnosti (V,) inhibítora. Za predpokladu kompetitívnej inhibície, a ktorej zhoda je zanedbateľné vyrovnaná Km/[S], [l]/e, a [l]/e (kde [S], [I], a e jednotlivo znamenajú celkovú koncentráciu, substrátu, inhibítora a enzýmu), ekvilibračná konštanta (Kj) pre disociáciu inhibítora z enzýmu sa môže získať zo závislosti V0/Vi na [I], ako je znázornené v rovnici 1

Vo/Vi = 1 + [l]/Ki (1)

Aktivity, ukázané v tomto teste naznačujú, že zlúčeniny podľa vynálezu sú terapeuticky užitočné na liečenie rôznych stavov u pacientov, ktorí trpia nestabilnou angínou, neustupujúcou angínou, infarktom myokardu, prechodnými ischemickými záchvatmi, atriálnou fibriláciou, trombotickou porážkou, embolickou porážkou, hlbokou žilovou trombózou, roztrúsenou intravaskulárnou koaguláciou a reoklúziou alebo resténózou rekanalizačných ciev.

Inhibičná aktivita zlúčenín podľa vynálezu reprezentovaná označením znamená K| väčšie alebo rovné 1 nM, alebo znamená K, menšie ako 1 nM, a meraná použitím testu opísaného vyššie, je znázornená vyššie.

Príklad 6

Príprava tabliet

Tablety, ktoré obsahujú 8, 10, 20 a prípadne 40 mg nasledujúcej účinnej zlúčeniny sa pripravili postupom uvedeným nižšie (zmesi A až C). Aktívna zložka I sa vybrala zo skupiny zlúčenín, ktoré zahrnujú zlúčeninu 1-9 (3-fluór-2-pyridyl-metyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-metyl-pyrazín-2-ón-1-acetamid), zlúčeninu 2-8 (3-fluór-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlór-pyrazín-2-όη-1-acetamid), zlúčeninu 3-5 ([R,S]-3-metylsulfinyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2- -64- (2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid), zlúčeninu 4-7 (hydrochlorid 3-fluór-2-pyridyl-metyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-kyanopyrazín-2-ón-1-acetamidu) a zlúčeninu 5-5 (3-fluór-4-metyl-2-pyridylmetyl-3-(2,2-difluór-2-(2-pyridyl)etylamino)-6-chlórpyrazín-2-ón-1-acetamid). Množstvá, ktoré sú znázornené sú množstvá voľnej bázy.

Tabuľka pre dávky, ktoré obsahujú 8 až 40 mg aktívnej zložky

Množstvo [mg] Zmes A B C D aktívna zložka I 8 10 20 40 mikrokryštalická celulóza 37,25 100 200 200 modifikovaný jedlý kukuričný škrob 37,25 4,25 8,5 8,5 stearan horečnatý 0,5 0,75 1,5 1,5 Všetko, aktívna zložka, celulóza, a časť kukuričného škrobu sa zmiešali a granulovali na 10% pastu kukuričného škrobu. Výsledný granulát sa preosial, sušil a zmiešal so zvyškom kukuričného škrobu a stearanom horečnatým. Výsledný granulát sa potom stlačil do tabliet, ktoré obsahujú 25, 50 alebo 100 mg aktívnej zložky na tabletu.

Príklad 7

Príprava tabliet

Príkladné zmesi tabliet s obsahom aktívnej zložky I sú znázornené nižšie:

Obsah aktívnej zložky 0,25 mg 2 mg 10 mg 50 mg aktívna zložka I 0,500 % 1,000 % 5,000 % 14,29 % manitol 49,50 % 49,25 % 47,25 % 42,61 % mikrokryštalická celulóza 49,50 % 49,25 % 47,25 % 42,61 % stearan horečnatý 0,500 % 0,500 % 0,500 % 0,500 % -65- V tabuľke napríklad tableta, ktorá obsahuje 2 mg aktívnej zložky I zahrnuje 98,5 mg manitolu, 98, 5 mg mikrokryštalickej celulózy a 1 mg stearanu horečnatého. 2, 10 a 50 mg tablety sa potiahli filmom vodnej disperzie hydroxypropylcelulózy, hydroxypropylmetylcelulózy a oxidu titaničitého pri minimálnom zväčšení hmotnosti.

Príprava tabliet prostredníctvom priamej kompresie

Aktívna zložka I, manitol a mikrokryštalická celulóza sa preosiali cez sitá špecifickej veľkosti (všeobecne 250 až 750 pm) a miešali vo vhodnej miešačke. Zmes sa následne miešala (typicky 15 až 30 min), pokiaľ sa liečivo rovnomerne nedistribuovalo do výslednej suchej práškovej zmesi. Stearan horečnatý sa skontroloval a pridal do miešačky a po ďalšom miešaní (typicky 2 až 10 min) sa získala predstlačená tabletová zmes. Predstlačená tabletová zmes sa potom stlačila použitím sily, ktorá sa typicky pohybuje v rozmedzí 0,5 až 2,5 metrických ton, ktoré stačia zmes na získanie tabliet s vhodnou fyzikálnou tuhosťou a prijateľnými dezintegračnými časmi (podmienky sa budú meniť s veľkosťou tablety a množstvom aktívnej zložky v stlačenej tablety). V prípade tabliet s obsahom 2, 10 a 50 mg aktívnej zložky sa tablety zbavili prachu a pokryli filmom vodnej disperzie vodo-rozpustných polymérov a farbiva.

Príprava tabliet prostredníctvom suchej granulácie

Alternatívne sa suchá prášková zmes stlačila malou silou a pomlela za vzniku granúl špecifickej veľkosti častíc. Granuly sa potom zmiešali so stearanom horečnatým a tabletovali, ako je opísané vyššie.

Príklad 8

Intravenózny farmaceutický prostriedok

Intravenózne farmaceutické prostriedky s obsahom aktívnej zložky I sa pripravili podľa všeobecných spôsobov výroby intravenóznych farmaceutických prostriedkov. -66-

Zložka Doporučené rozmedzia Aktívna zložka I 0,12 až 0,61 mg D-glukurónová kyselina* 0,5 až 5 mg Manitol NF 50 až 53 mg 1N hydroxid sodný podľa potreby, pH 3,9 až 4,1 Voda pre injekcie podľa potreby 1,0 ml

Príklady zmesi A až C sú nasledujúce:

Zmes A B C Aktívna zložka I 0,61 mg* 0,30** 0,15*** D-glukurónová kyselina* 1,94 mg 1,94 mg 1,94 mg Manitol NF 51,2 mg 51,2 mg 51,2 mg 1N hydroxid sodný podľa potreby pH 4,0 podľa potreby pH 4,0 podľa potreby pH 4,0 voda pre injekcie podľa potreby 1,0 ml podľa potreby 1,0 ml podľa potreby 1,0 ml * 0,50 mg voľnej bázy ** 0,25 mg voľnej bázy *** 0,12 mg voľnej bázy Rôzne iné pufrovacie kyseliny, ako je kyselina L-mliečna, kyselina octová, kyselina citrónová alebo akákoľvek farmaceutický prijateľná kyselina/konjugovaná báza s primeranou pufrovacou kapacitou v rozmedzí pH, ktoré sú prijateľné na intravenózne podanie sa môžu zameniť za kyselinu glukurónovú.

Claims

-67-'jrj> </¥63'έθνη PATENTOVÉ NÁROKY 1. Pyrazinónové inhibítory trombfnu všeobecného vzorca I

A (D kde W je vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) vodík, 2) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) Ci.4alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, iv) CONH2, V) ch2oh, vi) so2nh2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, x) C3-7cykloalkyl, xi) cf3, xii) ocf3, xiii) N(CH3)2i -68- xiv) Ci-3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) C^alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) Ci_4tioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) so2nh2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3.7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3> m) N(CH3)2, n) C1.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) CMalkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci.4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, -69- 4) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C-Malkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2i g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci-3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci-4alkoxy, q) FwHxC(CH2)0-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci^tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) CF3, 6) C3.7cykloalkyl, nesubstituovaný, monosubstituovaný halogénom alebo arylom alebo disubstituovaný halogénom, 7) C7.i2bicyklický alkyl, 8) Cio-iôtricyklický alkyl, R12 9) R2(CH2)m— C-f R12 kde m je 0 až 3 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, -70- R2 10) H-C— (CH2)p:—\ kde p je 1 až 4, OR2

13) R2(CH2)m ^7 kde m je 0 až 3, kde m je 0 alebo 1, 14) R2—C—C—CH2 — 15) « i . R2—C-(GH2)m — | Ŕ12 kde m je 0 až 3 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R12 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3-7cyklo-alkylom, R12 16) R2CH2—Ó-(CH2)q —Ϊ Ŕ12 kde q je 0 až 2 a R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R12 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3-7cyklo-alkylom, R i H-C-(CH2)r Ŕ2 17) -71 - kde r je O až 4 a R2 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, pričom substituenty R2 môžu spolu s C, na ktorý sú naviazané vytvárať kruh, reprezentovaný C3.7cykloalkýlom, C7-i2bicyklickým alkylom, Cio-ietricyklickým alkylom, alebo 5- až 7-členným mono-alebo 9- až 10-členným kondenzovaným bicyklickým heterocyklickým kruhom, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje jeden až tri heteroatómy zo skupiny zahrnujúcej N, O a S. 18) R2(CH2)n—0-^(CH2)p \ kde n a p sú nezávisle 1 až 4, 19) r,2r12 r2-c-Č—I Ŕ12Ŕ12 kde R12 môžu byť rovnaké alebo rozdielne, R2CH2 I , 20) a H-C-i R2CH2 21) R2(CH2)q. N (CH2), — { R2(CH2)q kde t je 1 až 4 a q je nezávisle 0 až 2; R2 je vybrané zo skupiny obsahujúcej: 1) vodík, 2) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo -72- b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) Ci-4alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR’, kde R' je vodík alebo Ci.4alkyl, iv) CONH2, v) CH2OH, vi) SO2NH2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, x) C3-7cykloalkyl, xi) CF3i xii) OCF3, .. xiii) N(CH3)2, . xiv) Ci.3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Ci-4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) Ci-4tioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) SO2NH2, g) halogén, -73- h) amino, i) a ryl, j) C3.7cykloalkyl, k) CF3) l) OCF3l m) N(CH3)2i n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci-4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 4) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci.4alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, -74- q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) Ci-4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) Ci-7alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) hydroxy, b) COOH, c) halogén, d) amino, e) a ryl, f) C3.7cykloalkyl, g) CF3, h) N(CH3)2, i) Ci.3alkylaryl, j) heterocyklický kruh, k) Ci^alkoxy, l) Ci-4tioalkoxy, alebo m) kyanoskupina, 6) CF3> 7) C3.7cykloalkyl, nesubstituovaný, monosubstituovaný halogénom alebo arylom alebo disubstituovaný halogénom, 8) C7.i2bicyklický alkyl, 9) Cio-ietricyklický alkyl, R3 a X sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej: 1) vodík, 2) halogén, 3) kyano, 4) Ci.4alkyltio, 5) C-ualkylsulfinyl, 6) Ci-4alkylsulfonyl, 7) Ci^alkyl, -75- 8) C3-7cykloalkyl, a 9) trifluórmetyl; A znamená

kde Y1 a Y2 sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej: 1) vodík, 2) C^alkyl, 3) CMalkoxy, 4) FuHvC(CH2)o-iO-, kde u a v sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak u je 1, v je 2 a ak u je 2, v je 1, 5) C3.7cykloalkyl, 6) Ci.4aikyltio, 7) Ci-4alkylsulfinyl, 8) Ci-4alkylsulfonyl, 9) halogén, 10) kyano, a 11) trifluórmetyl; a kde b je 0 alebo 1; a R12 je vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) vodík, 2) halogén, 3) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu a heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: -76- i) Ci^alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, iv) CONH2, v) CH2OH, vi) SO2NH2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, x) C3-7cykloalkyl, xi) CF3, xii) OCF3, xiii) N(CH3)2, xiv) C^alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Ci.4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) Ci.4tioalkoxy, alebo xix) kyanoskupina, 4) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo Ci^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) SO2NH2, g) halogén, h) amino, i) aryl, -77- j) C3-7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2i n) Ci-3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) Ci^alkoxy, q) FwHxC(ČH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, r) CMtioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 5) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický· nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) Ci.4alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, h) amino, i) a ryl, j) C3.7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) C^alkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, -78- r) Ci-4tioalkoxy, alebo s) kyanoskupina, 6) bifenyl, 7) CF3, 8) C3-7cykloalkyl, 9) C7.i2bicyklický alkyl, a 10) Coo-ietricyklický alkyl; alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
2. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 1 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde Y1 a Y2 sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, C^alkyl, halogén, C-Malkyltio, Ci^alkylsulfinýl, Ci^alkylsulfonyl a Ci^alkoxy.
3. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 2 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde Y1 a Y2 sú nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, F, CH3, SCHs, SOCH3i S02CH3 a OCH3.
4. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 3 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde A je vybrané zo skupiny zahrnujúcej:

-79-

a CH3 MeO

kde b je 0 alebo 1.
5. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 4 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde X je vodík, R3 je CH3, Cl alebo CN a W je R2CF2C(R12)2 alebo R2CH2C(R12)2.
6. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 5 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde R12 je vodík.
7. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 6 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde R2 je vybrané zo skupiny zahrnujúcej: 1) 5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický hetero-cyklický kruh s uhlíkovými atómami kruhu á heteroatómami kruhu, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, pričom kruh obsahuje: a) jeden až štyri heteroatómy vybrané zo skupiny zahrnujúcej N, O a S, pričom kruh je nesubstituovaný, alebo b) jeden až štyri atómy N, pričom jeden alebo viac atómov kruhu je substituovaných jednou alebo viacerými skupinami: i) C^alkyl, ii) hydroxy, iii) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, iv) CONH2, v) CH2OH, vi) S02NH2, vii) halogén, viii) amino, ix) aryl, -80- x) C3-7cykloalkyl, xi) CF3, xii) OCF3, xiii) N(CH3)2i xiv) Ci.3alkylaryl, xv) heterocyklický kruh, xvi) Ci.4alkoxy, xvii) FwHxC(CH2)0-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, xviii) Ci-4tioalkoxy, alebo xix) kyanoskupinou, 2) 6-členný mono- alebo 9- až 10-členný kondenzovaný bicyklický nehetero-cyklický nenasýtený kruh, ktorý je nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami: a) C^alkyl, b) hydroxy, c) COOR', kde R' je vodík alebo C^alkyl, d) CONH2, e) CH2OH, f) S02NH2, g) halogén, h) amino, 0 aryl. j) C3.7cykloalkyl, k) CF3, l) OCF3, m) N(CH3)2, n) Ci.3alkylaryl, o) heterocyklický kruh, p) CMalkoxy, q) FwHxC(CH2)o-iO-, kde w a x sú buď 1 alebo 2, za podmienky, že ak w je 1, x je 2 a ak w je 2, x je 1, -81 - r) CMtioalkoxy, alebo s) kyanoskupina.
8. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 7 alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde R2 je pyridyl, metoxypyridyl alebo fenyl.
9. Pyrazinónové inhibítory trombínu podľa nároku 8 alebo ich farmaceutický prijateľné soli vybrané zo skupiny zahrnujúcej:

-82-

-83-

-84-

alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
10. Pyrazinónový inhibitor trombínu podľa nároku 9 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli vzorca

-85-
11. Pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 9 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli vzorca -85-
12. Pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 9 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli vzorca
13. Pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 9 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli vzorca
14. Pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 9 alebo jeho farmaceutický prijateľné soli vzorca

" > H

-86-
15. Farmaceutický prostriedok, vy z n a č u j ú c i sa t ý m, že obsahuje pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.
16. Farmaceutický prostriedok na intravenózne podanie, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje pyrazinónový inhibítor trombínu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.
17. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na intravenózne podanie na inhibíciu trombínu v krvi.
18. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na intarvenózne podanie na inhibíciu tvorby agregátov krvných doštičiek v krvi.
19. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na intravenózne podanie na inhibíciu tvorby trombu v krvi.
20. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 spolu s antagonistom fibrinogénového receptora na výrobu lieku na inhibície tvorby trombu v krvi.
21. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 alebo ich farmaceutický prijateľných solí na výrobu lieku na inhibíciu trombínu, inhibíciu tvorby trombu, liečenie tvorby trombu alebo na prevenciu tvorby trombu u cicavcov.
22. Použitie pyrazinónových inhibítorov podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu tromboembolizmu a pľúcneho embolizmu u cicavcov.
23. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu žilovej trombózy u cicavcov.
24. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu kardiogénneho tromboembolizmu u cicavcov. -87-
25. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu tromboembolickej porážky u ľudí alebo iných cicavcov.
26. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu trombózy spojenej s rakovinou a rakovinovou chemoterapiou u cicavcov.
27. Použitie pyrazinónových inhibítorov trombínu podľa nároku 1 na výrobu lieku na liečenie alebo prevenciu nestabilnej angíny u cicavcov.