SK14762001A3

SK14762001A3 - Ligandy receptora estrogénu beta

Info

Publication number: SK14762001A3
Application number: SK1476-2001A
Authority: SK
Inventors: Bernard Christophe Barlaam; Timothy Martin Piser
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1999-04-16
Filing date: 2000-04-11
Publication date: 2002-10-08
Also published as: HUP0200740A3; KR20010108509A; JP2002542187A; AU4128800A; IL145839A0; HUP0200740A2; BG106103A; AR043085A1; CZ20013714A3; CA2370126A1; EP1173164A2; IS6108A; PL351314A1; NO20015015L; US6518301B1; BR0009814A; NO20015015D0; TR200102992T2; MXPA01010423A; EE200100526A

Description

Použitie ligandov receptora estrogénu β

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka série ligandov a konkrétnejšie ligandov estrogénového receptora β, ktoré majú lepšiu selektivitu ako estrogén pre estrogénový receptor β v porovnaní s estrogénovým receptorom a, ako aj ich použitia pri liečbe chorôb týkajúcich sa estrogénového receptora β, konkrétne Alzheimerovej choroby, úzkostných porúch, depresívnych porúch, osteoporózy, kardiovaskulárnych chorôb, reumatoidnej artritídy alebo rakoviny prostaty.

Doterajší stav techniky

Estrogénová substitučná terapia („EST“) redukuje incidenciu Alzheimerovej choroby a zlepšuje kognitívnu funkciu pacientov s Alzheimerovou chorobou (Nikolov et al. Drugs of Today, 34 (11), 927-933 (1998)). EST tiež vykazuje priaznivé účinky pri osteoporóze a kardiovaskulárnej chorobe a môže mať anxiolytické a antidepresívne terapeutické vlastnosti. EST však vykazuje škodlivé vedľajšie účinky na maternicu a prsníky, ktoré obmedzujú jej využitie.

Priaznivé účinky EST u postmenopauzálnych žien sa odrážajú v priaznivých účinkoch estrogénu v modeloch relevantných pre kognitívnu funkciu, úzkostné stavy, depresiu, stratu kostnej hmoty a kardiovaskulárne poškodenie u ovariektomizovaných potkanov. Estrogén tiež vyvoláva maternicovú a prsníkovú hypertrofiu v zvieracích modeloch, čo pripomína jeho mitogénne účinky na tieto tkanivá u ľudí.

Priaznivé účinky EST u postmenopauzálnych žien sa odrážajú v priaznivých účinkoch estrogénu v modeloch relevantných pre kognitívnu funkciu, úzkostné stavy, depresiu, stratu kostnej hmoty a kardiovaskulárne poškodenie u ovariektomizovaných potkanov. Experimentálne štúdie špecificky dokázali, že estrogén ovplyvňuje centrálnu nervovú sústavu (CNS) medzi iným zvyšovaním cholinergickej funkcie, zvyšovaním expresie neurotrofínu/neurotrofínového receptora, menením spracovania amyloidového prekurzorového proteinu, poskytovaním neuroprotekcie proti radu inzultov a zvyšovaním gultamatergického synaptického prenosu. Celkový CNS profil estrogénových účinkov v predklinických štúdiách je konzistentný s jeho klinickou užitočnosťou pri zlepšovaní kognitívnej funkcie a oneskorovaním progresu Aizheimerovej choroby. Estrogén produkuje aj mitogénne účinky v maternicovom a prsníkovom tkanive, čo indikuje jeho škodlivé vedľajšie účinky v týchto tkanivách u ľudí.

Estrogénový receptor (ER) u ľudí, potkanov a myší existuje v dvoch podtypoch, ER-α a ER-β, ktoré majú približne 50 % identitu v doméne viazania ligandu (Kuipere/a/. Endocrinology 139 (10) 4252-4263 (1998)). Rozdiel v identite podtypov vysvetľuje fakt, že niektoré malé zlúčeniny sa viažu preferenčne na jeden podtyp oproti druhému (Kuipere/a/.).

U potkanov sa ER-β v porovnaní s ER-α intenzívne exprimuje v mozgu, kostiach avaskulárnom epiteli, ale slabo v maternici a prsníkoch. Navyše ER-a knockout (ERKO-a) myši sú sterilné a vykazujú slabé alebo žiadne náznaky hormonálnej reakcie reprodukčných tkanív. Naproti tomu ER-β knockout (ERKO-β) myši sú plodné a vykazujú normálny vývoj a funkciu prsníkového a maternicového tkaniva. Tieto pozorovania naznačujú, že selektívne zacielenie sa na ER-β v porovnaní s ER-α by mohlo mať priaznivé účinky pri niekoľkých dôležitých ľudských chorobách, napríklad Aizheimerovej chorobe, úzkostných poruchách, depresívnych poruchách, osteoporóze a kardiovaskulárnej chorobe, bez vedľajších účinkov na reprodukčný systém. Selektívne účinky na tkanivá exprimujúce ER-β (CNS, kosti atď.) povedľa maternice a prsníkov by bolo možné dosiahnuť prostriedkami, ktoré selektívne interagujú s ER-β voči ER-a.

Cieľom tohto vynálezu je identifikovať ligandy selektívne pre ER-β, ktoré sú užitočné pri liečbe chorôb, pri ktorých má ERT terapeutické priaznivé účinky.

Ďalším cieľom tohto vynálezu je identifikovať ligandy selektívne pre ER-β, ktoré napodobňujú priaznivé účinky ERT na mozog, kosti a kardiovaskulárnu funkciu. Ďalším cieľom tohto vynálezu je identifikovať ligandy selektívne pre ER-β, ktoré zvyšujú kognitívnu funkciu a oneskorujú progres Aizheimerovej choroby.

Podstata vynálezu

Predložený vynález sa týka použitia zlúčenín so všeobecnou štruktúrou I:

ako ligandov selektívnych voči ER β, ktoré napodobňujú ERT, ale nemajú nežiaduce vedľajšie účinky ERT. Tieto zlúčeniny konkrétne vyhovujú vzorcu:

(K_iaA/K_ipA)/(K_iaE/K_ipE) > 1, s výhodou:

(K_iaA/K_ipA)/(K_iaE/K_lpE) > 30, s väčšou výhodou:

(K_ioÄ/K_ipA)/(K_iaE/K_ipE) > 100, kde K_iaA je hodnota K, pre ligand v ER a; K_ipA je hodnota Kj pre ligand v ER β; K_iaE je hodnota K, pre estrogén v ER a; a K_ipE je hodnota K, pre estrogén v ER β.

Podrobný popis vynálezu

Predložený vynález sa týka použitia zlúčeniny, ktorá vyhovuje nerovnici (K_iaA/K_ipA)/(K_jaE/K_ipE) > 1, kde K_iaA je hodnota Kj pre agonistu v ER a; K_jpA je hodnota K| pre agonistu v ER-β; K_iaE je hodnota Kj pre estrogén v ER a; a K_ipE je hodnota Kj pre estrogén v ER β na prípravu lieku na liečenie choroby súvisiacej s estrogénovým receptorom β. Zlúčenina s výhodou vyhovuje nerovnici (K_iaA/K_ipA)/(K_iaE/K_ipE) > 100. Výhodné choroby súvisiace s estrogénovým receptorom β sú vybrané spomedzi Alzheimerovej choroby, úzkostných porúch, depresívnych porúch, osteoporózy, kardiovaskulárnej choroby, reumatoidnej artritídy a rakoviny prostaty. S väčšou výhodou sú chorobami Alzheimerova choroba alebo depresívne poruchy.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sú ligandy selektívne voči ER β nasledujúcej štruktúry I

V tejto štruktúre L¹ je -C(=O)-, =C(R⁶)-, -CH(R⁶)-, O, S alebo NR^a, s výhodou -C(=O)-, =C(R⁶)-, -CH(R⁶)- alebo O; L² je =C- alebo -CH-; L³ je =(R⁶)-, -CH(R⁶)alebo -C(=O)-; a L⁴ je -C(=O)-, CH2, O, S alebo NR^a, s výhodou -C(=O)-, CH2 alebo O, s tým, že keď L¹ je -C(=O)-, L⁴ je CH2, O, S alebo NR^a; keď L⁴ je -C(=O)-, L¹ je CH2, O, S alebo NR^a; a keď L³ je -C(=O)-, L¹ je =(R⁶)- alebo -CH(R⁶)-, a L⁴ je O alebo NR^a. Okrem toho keď Ľ je =C(R⁶)-, L² je =C-; keď L¹ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-;

keď L³ je -CH(R⁶)-, L² je =C-; a keď L³ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-. =- predstavuje jednoduchú väzbu alebo dvojitú väzbu v závislosti od hybridizácie L¹-L⁴. Štruktúry pre L² majú len tri väzby, pretože štvrtá väzba je jednoduchá väzba na R¹.

R¹ je pripojené na L² jednoduchou väzbou a je to fenyl, substituovaný fenyl, Het alebo substituovaný Het, ako je uvedené nižšie. R¹ je s výhodou:

kde: R⁷ je H, Cl alebo metyl; R⁸ je Br, Cl, F, R^a, OR^a alebo alyl; R⁹ je H, OH, NH2, Br, Cl; a R¹⁰ je H alebo metyl; alebo R⁸ a R⁹ môžu byť spojené na -OCH2O-, čím sa vytvorí sekundárny 5-členný kruh zvonka fenylu; alebo R¹ je substituovaný alebo nesubstituovaný heterocyklický substituent s nasledujúcou štruktúrou:

hry s ; s väčšou výhodou nesubstituovaný s

R², R³, R⁴ a R⁵ sú každé nezávisle -R^a, -OR^a-, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R^a, -NS(=O)2R^a, halogén, kyano, -CF3, -CO₂R^a, -C(=O)R^a, -C(=O)NHR^a, nitro, -S(=O)R^a alebo -S(=O)2R^a, a je to s výhodou R^a, OR^a, NR^a2, NC(=O)R^a, CF₃alebo halogén, s výhodou vodík, hydroxyl alebo metyl.

R⁶ je R^a, fenyl alebo CF₃.

R^a je nezávisle pri každom výskyte H alebo (C^C^alkyl.

Keď L¹ je -C(=O)- a R² je hydroxy alebo vodík a R³ je vodík a R⁴ je hydroxy a R⁵ je vodík a R⁶ je vodík, potom R¹ nie je para-fenol.

Na účely tohto vynálezu „substituovaný“ pri použití na rozvinutie pojmu fenyl alebo heteroatómového kruhu znamená taký kruh substituovaný v jednej alebo viacerých polohách nezávisle nasledujúcimi substituentmi: -R^a, -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R^a, -NS(=O)2R^a, halogén, kyano, -CF3, -CO₂R^a, -C(=O)R^a, C(=O)NHR^a, nitro, -S(=O)R^a alebo -S(=O)₂R^a.

Tiež na účely tohto vynálezu „Het“ znamená substituovaný alebo nesubstituovaný jedno- alebo dvojkruhový heterocyklus vybraný spomedzi nasledujúcich:

alebo kde prekrížená väzba znamená, že heterocyklus môže byť pripojený v ktorejkoľvek polohe na kruhu, ktorý križuje.

Merania viazania estrogénového receptora

Schopnosť zlúčeniny viazať sa na ER bola meraná jej schopnosťou súťažiť o viazanie s rádioaktívne označeným estrogénom, [¹²⁵l]-16a-jód-3,17p-estradiolom (NEN, katalógové č. NEX-144). Tento rádioligand sa ďalej označuje ako [¹²⁵J]estradiol.

cDNA ER-β (prírastkové číslo Gen Bank X99101) alebo ER-α (prírastkové číslo Gen Bank M 12674) sa klonovali do expresného vektora pSG5 (Stratagene), transformovali sa do e. coli, kmeň DHaF’, a vyčistili sa na kolónach aniónovýmennej živice (Qiagen, katalógové č. 12125). Receptorový protein sa pripravil in vitro transkripciou atransláciou týchto plazmidov pomocou retikulocytového lyzátového systému TNT T7 Quick-Coupled (Promega, katalógové č. L1170). Retikulocytový lyzát (12,5 ml) sa inkuboval 90 min pri 30 °C s 312,5 pg ER-α a 625 pg ER-β plazmidmi. Programovaný lyzát sa potom alikvótoval a uložil zmrazený pri -80 °C.

Zlúčeniny sa testovali v duplikátoch pri polovičných logaritmických koncentráciách pohybujúcich sa od 10 pM do 3 pM. Zlúčeniny boli pripravené ako 1 mM zásobné roztoky v DMSO, potom sa zriedili v tlmivom roztoku na test viazania (v mM: 20 HEPES, 150 NaCl, 1 EDTA, 6 monotioglycerol a 10 Na₂MoO₄; 10% hmotnosť/objem glycerol a pH = 7,9) na sériu trojnásobne koncentrovaných 20 pl alikvótov v 96-jamkovej platničke. Receptorové alikvóty sa rozmrazili na ľade a vhodne sa zriedili (pozrite nižšie) v tlmivom roztoku na test viazania. Do každej jamky sa pridal zriedený receptor (po 30 pl). [¹²⁵l]-estrádiol sa zriedil z etanolového zásobného roztoku od výrobcu na 900 pM pracovný roztok v tlmivom roztoku na test viazania. Konečný objem na test bol 60 pl, pričom pozostával z 20 pl zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, 30 pl programovaného retikulocytového lyzátu a 10 pl 900 pM [¹²⁵l]-estradiolu. Konečná koncentrácia [¹²⁵l]-estradiolu bola 150 pM. Platničky obsahujúce konečnú testovaciu zmes sa miešali na trepačke 2 min a inkubovali sa cez noc (~16 h) pri 4 °C.

Na receptor viazaný a neviazaný rádioligand sa oddelil filtráciou cez kolóny sephadex. Kolóny (45 pl objem vrstvy) boli pripravené pridaním suchého média kolóny (Pharmacia, kat. č. G-25) do 96-jamkových stĺpcových šablón (Millipore MultiScreen Plates, kat. č. MAHVN4510). Stĺpce sa potom nasýtili 300 pltlmivého roztoku na test viazania a uložili sa pri 4 °C. Pred použitím sa skladované kolóny centrifugovali 10 min pri 2000 ot./min a premyli sa dvakrát 200 pl čerstvého tlmivého roztoku na test viazania. Zmesi na test viazania (po 50 pl) sa potom aplikovali na kolóny a na kolónu sa okamžite aplikoval dodatočný elučný objem 35 pl. Na receptor viazaný rádioligand sa potom eluoval z kolóny centrifugáciou počas 10 minút pri 2000 RPM. Do eluovaného komplexu rádioligand/receptor sa pridal scintilačný koktail (145 pl) a rádioaktívna značka sa zmerala kvapalinovým scintilačným počítaním.

Nešpecifické viazanie bolo definované kompetíciou so 150 nM dietylstilbesterolom (DES). Afinity viazania sú vyjadrené ako K, vypočítané pomocou Cheng-Prushoffovho vzorca podľa hodnôt IC₅₀ generovaných korelovaním vzťahu koncentrácie k percentuálnemu špecifickému viazaniu (SB specific binding) pomocou nasledovnej rovnice:

% SB = Maximum - (Maximum - Minimum)/(1+10^(l°^{9lC50 l}°^{9lzlúčeninal)})

V tomto teste boli zistené štandardné ligandy estrogénového receptora estradiol a DES ako vysokoafinitné (Kj < 1 nM) neselektívne ligandy ER-β a ER-a.

Objem receptorovo programovaného retikulocytového lyzátu, ktorý sa mal pridať do testu viazania, sa určil nezávisle z dvoch meraní vykonaných na každej pripravenej várke receptora. Najprv sa určili Kj pre štandardné zlúčeniny pomocou série zriedení receptorového prípravku. Vykonala sa Scatchardova analýza na afinitu viazania ligandov pri zriedeniach receptora, ktoré produkovali udávané K, pre tieto zlúčeniny a prijateľný pomer signál : šum (—10). Tieto experimenty indikovali Kq pre [¹²⁵l]-estradiol 0,1 -1 nM a B_max 5-30 pmol.

Podávanie a použitie

Ukázalo sa, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu majú vysokú selektivitu na ER-β voči ER-α a môžu mať agonistickú aktivitu na ER-β bez nežiaducich účinkov na maternicu. Tieto zlúčeniny a kompozície ich obsahujúce možno teda používať ako terapeutické prostriedky pri liečbe rôznych chorôb CNS súvisiacich s ER-β, ako je napríklad Alzheimerova choroba. Predložený vynález poskytuje aj kompozície obsahujúce účinné množstvo zlúčenín podľa predloženého vynálezu vrátane ich netoxických adičných solí, amidov a esterov, ktoré môžu slúžiť na zabezpečenie vyššie vymenovaných terapeutických prínosov. Také kompozície možno poskytovať spolu s fyziologicky tolerovanými kvapalnými, gélovými alebo tuhými riedidlami, adjuvans alebo vehikulami. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu možno tiež kombinovať s inými zlúčeninami, o ktorých je známe, že sa používajú ako terapeutické prostriedky na vyššie uvedené alebo iné indikácie.

Tieto zlúčeniny a kompozície môžu podávať kvalifikovaní zdravotnícki pracovníci ľuďom spôsobom podobným ako iné terapeutické prostriedky a okrem toho aj iným cicavcom na veterinárne použitie, napríklad domácim zvieratám. Také kompozície sa väčšinou pripravujú ako injektovateľné, buď ako kvapalné roztoky alebo suspenzie; možno pripraviť aj tuhé formy vhodné na rozpustenie alebo suspendovanie v kvapaline pred injekciou. Prípravok môže byť aj emulgovaný. Aktívna zložka sa často mieša s riedidlami alebo vehikulami, ktoré sú fyziologicky tolerované a kompatibilné s aktívnou zložkou. Vhodnými riedidlami a vehikulami sú napríklad voda, fyziologický roztok, dextróza, glycerol a podobne a ich kombinácie. Okrem toho môžu kompozície v prípade potreby obsahovať malé množstvá pomocných látok, napríklad zmáčadlá alebo emulgátory, stabilizačné prostriedky alebo prostriedky tlmiace pH a podobne.

Kompozície sa konvenčné podávajú parenterálne, injekciou, napríklad buď subkutánne alebo intravenózne. Medzi ďalšie formulácie, ktoré sú vhodné pre ďalšie režimy podávania, patria supozitóriá, intranazálne aerosóly a v niektorých prípadoch orálne formulácie. Pre supozitóriá môžu tradičné spojivá avehikulá zahŕňať napríklad polyalkylénglykoly alebo triglyceridy; také supozitóriá možno vytvoriť zo zmesí obsahujúcich aktívnu zložku. Medzi orálne formulácie patria také bežne používané vehikulá ako napríklad farmaceutické akosti manitolu, laktózy, škrobu, stearanu horečnatého, sodnej soli sacharínu, celulózy, uhličitanu horečnatého a podobne. Tieto kompozície majú formu roztokov, suspenzií, tabliet, piluliek, kapslí, formulácií so stálym uvoľňovaním alebo práškov.

Predložené zlúčeniny možno formulovať do kompozícií ako neutrálne alebo soľné formy. Medzi farmaceutický prijateľné netoxické soli patria kyselinové adičné soli (vytvorené s voľnými aminoskupinami) a ktoré sú vytvorené s anorganickými kyselinami, napríklad kyselinou chlorovodíkovou alebo fosforečnou, alebo s organickými kyselinami, napríklad kyselinou octovou, štaveľovou, vínnou, mandľovou a podobne. Soli vytvorené s voľnými karboxylovými skupinami možno odvodiť od anorganických báz, napríklad hydroxidu sodného, draselného, amónneho, vápenatého alebo železitého, a takých organických báz ako izopropylamín, trimetylamín, 2-etylaminoetanol, histidín, prokaín a podobne.

Popri zlúčeninách podľa predloženého vynálezu, ktoré vykazujú aktivitu ERβ, možno zlúčeniny podľa predloženého vynálezu využiť ako intermediáty pri syntéze takých užitočných zlúčenín.

Syntéza

Zlúčeniny v rámci rozsahu predloženého vynálezu možno syntetizovať chemicky prostriedkami všeobecne známymi v danej oblasti. Nasledujúce príklady majú ukázať všeobecné syntetické schémy, ktoré možno použiť na získanie mnohých rôznych variácií využitím rôznych komerčne dostupných východiskových látok. Tieto príklady sú mienené len ako návod na to, ako pripraviť niektoré zlúčeniny v rámci rozsahu tohto vynálezu a nemali by sa interpretovať ako obmedzenie rozsahu vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1 (cesta A) (3-Bróm-4-hydroxyfenyl)-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-ón

1,3,5-Trihydroxybenzaldehyd (1,01 g, 6,25 mmol) a kyselina 3-bróm-4hydroxyfenyloctová (1,44 g, 6,25 mmol) sa suspendovali v POCI₃ (4 ml). Po 1 min došlo k exotermickej reakcii. Zmes sa nechala vychladnúť na laboratórnu teplotu. Pridal sa chlorid zinočnatý (1 M roztok v éteri, 4,7 mmol) a zmes sa zahrievala na 75 °C počas 1 h. Po ochladení sa zmes rozdelila medzi etylacetát a 1 M vodný roztok HCI. Organická vrstva sa premyla chloridom sodným a vysušila sa MgSO₄. Vyčistením na silikagéle (MeOH/dichlórmetán, gradient) sa získal 1-(2,4,6trihydroxyfenyl)-2-(3-bróm-4-hydroxyfenyl)etanón (390 mg) vo forme svetlohnedej tuhej látky.

Do 1-(2,4,6-trihydroxyfenyl)-2-(3-bróm-4-hydroxyfenyl)etanónu (370 mg) v DMF (5 ml) pod dusíkom sa po kvapkách pridal BF₃-Et₂O (0,83 ml, 6,55 mmol), po čom nasledoval metánsulfonylchlorid (0,507 ml, 6,55 mmol). Zmes sa miešala pri teplote miestnosti 10 min a zahrievala sa na 55 °C počas 30 min. Po ochladení sa zmes rozdelila medzi etylacetát a 1 M vodný roztok HCI. Organická vrstva sa premyla 1M HCI a roztokom NaCl a vyčistila sa C₁₈ HPLC, čím sa získala titulná zlúčenina (55 mg).

Príklad 2 (zlúčenina č. 28; cesta B)

3-(4-hydroxyfenyl)-7-hydroxy-4-metylkumarín

Roztok 2,4-dihydroxyacetofenónu (1,1 g, 7,24 mmol), kyseliny 4hydroxyfenyloctovej (1,45 g, 9,5 mmol) a octanu draselného (0,9 g, 9,2 mmol) v acetanhydride (10 ml) sa zahrieval na reflux 18 h. Po ochladení sa zmes vyliala do zmesi ľadu a vody.

Tuhá látka sa odfiltrovala, premyla éterom a vysušila za zníženého tlaku, čím sa získal 3-(4-acetoxyfenyl)-7-acetoxy-4-metylkumarín (1,83 g).

Suspenzia 3-(4-acetoxyfenyl)-7-acetoxy-4-metylkumarínu (500 mg) v THF (10 ml) a 1 N vodnom hydroxide sodnom (10 ml) sa miešala 1 h. Zmes sa okyslila na pH = 1 koncentrovanou HCI a extrahovala sa zmesou EtOAc/voda. Organická vrstva sa premyla roztokom chloridu sodného a vysušila sa nad MgSO₄. Odparením rozpúšťadla a rozotrením zvyšku s éterom sa získala titulná zlúčenina (140 mg).

Podmienky HPLC (kolóna HPLC 4,6 x 250 mm C₁₈ 5 pm Vydax 218TP54. Prietok: 1,5 ml/min. acetonitril/voda 0,1 % TFA lineárny gradient od 10:90 do 50:50 v priebehu 30 min. UV detekcia: 254 nm) sa označujú ako podmienky A.

Podmienky HPLC (kolóna HPLC 2,1 x 30 mm C₁₈ 3,5 μηη Zorbax Rapid Resolution, prietok: 0,7 ml/min, voda - 0,05 % TFA v priebehu 0,5 min, potom 90 % acetonitril/voda 0,05 % TFA lineárny gradient od 0:100 do 80:20 v priebehu 9,5 min. UV detekcia) sa označujú ako podmienky B.

Nasledujúce zlúčeniny boli pripravené podľa týchto návodov z príslušných východiskových látok.

Tabuľka 1

Č.	L¹	L²	L³	L⁴	R¹
1	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3,4-dihydroxyfenyl
2	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-CI-4-hydroxyfenyl
3	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-Me-4-hydroxyfenyl
4	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-F-4-hydroxyfenyl
5	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-CI-4-hydroxyfenyl
6	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-Br-4-hydroxyfenyl
7	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-alyl-4-hydroxyfenyl
8	C(=O)	=c-	=CR^e-	0	3-Pr-4-hydroxyfenyl
9	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-metoxy-4-hydroxyfenyl
10	C(=O)	=c-	-CR⁶-	0	3,5-diMe-4-hydroxyfenyl
11	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	4-fluórfenyl
12	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3,4-(OCH₂O)fenyl
13	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	4-aminofenyl
14	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-naftyl
15	C(=O)	=c-	II Q o> 1	0	3-hydroxyfenyl
16	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-hydroxyfenyl
17	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-tiofén
18	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	3-tiofén
19	C(=O)	=c-	=CR⁶-	0	2-chinolinyl

v c.	L¹	L²	L³	L⁴	R¹
20	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	4-brómfenyl
21	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	4-chlórfenyl
22	C(=O)	=C-	II O LD o> 1	0	4-hydroxyfenyl
23	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	4-hydroxyfenyl
24	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	3-F-4-hydroxyfenyl
25	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	4-hydroxyfenyl
26	C(=O)	-CH-	-CH R⁶-	0	4-hydroxyfenyl
27	C(=O)	-CH-	-CH R⁶-	ch₂	4-hydroxyfenyl
28	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
29	1 CO CC o II	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
30	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
31	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	2-tiofén
32	C(=0)	=C-	1 CO CC o II	0	4-hydroxyfenyl
33	C(=O)	=C-	=CR⁶-	0	2-F-fenyl
34	C(=0)	=C-	=CR⁶-	0	fenyl
35	C(=0)	=C-	=CR⁶-	0	fenyl
36	0	=C-	=CR⁶-	C(=0)	4-hydroxyfenyl
37	ch₂	-CH-	-CH R⁶-	C(=0)	4-hydroxyfenyl
38	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
39	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
40	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
41	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
42	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-CI-fenyl
43	=CR⁶-	=C-	C(=0)	0	4-hydroxyfenyl
44	C(=O)	=C-	1 CO CC o II	0	4-izopropoxyfenyl

v c.	L¹	L²	L³	L⁴	R¹
45	C(=O)	-CH-	-CH R⁶-	ch₂	3-Br-fenyl
46	ch₂	-CH-	-CH R⁶-	0	4-hydroxyfenyl

(Pokračovanie tabuľky 1)

Č.	R²	R³	R⁴	R⁵	R⁶
1	OH	H	OH	H	H
2	OH	H	OH-	H	H
3	OH	H	OH	H	H
4	OH	H	OH	H	H
5	OH	H	OH	H	H
6	OH	H	OH	H	H
7	OH	H	OH	H	H
8	OH	H	OH	H	H
g	OH	H	OH	H	H
10	OH	H	OH	H	H
11	OH	H	OH	H	H
12	OH	H	OH	H	H
13	OH	H	OH	H	H
14	OH	H	OH	H	H
15	OH	H	OH	H	H
16	OH	H	OH	H	H
17	OH	H	OH	H	H
18	OH	H	OH	H	H
19	OH	H	OH	H	H
20	OH	H	OH	H	H

w c.	R²	R³	R⁴	R⁵	R⁶
21	OH	H	OH	H	H
22	OH	H	OMe	H	H
23	Me	H	OH	H	H
24	H	H	OH	H	H
25	H	H	OH	H	cf₃
26	OH	H	OH	H	H
27	OH	H	OH	H	H
28	H	H	OH	H	Me
29	H	H	OH	H	Et
30	H	H	H	H	H
31	H	H	OH	H	H
32	OH	H	OH	OMe	H
33	OH	H	OH	H	H
34	OH	H	OH	H	Ph
35	H	H	OH	H	Ph
36	H	H	OH	H	H
37	H	H	OH	H	H
38	H	H	OH	H	H
39	OH	H	OH	H	H
40	H	H	H	OH	H
41	H	OH	H	H	H
42	H	H	OH	H	Me
43	H	H	OH	Me	Me
44	H	H	OH	H	cf₃
45	H	H	OH	H	H

v c.	R²	R³	R⁴	R⁵	R⁶
46	H	H	OH	H	H

Tabuľka 2. Čistenie, vlastnosti a syntetická cesta

v c.	HPLC min (metóda)	MS (MH⁺)	ER-β Kj nM	ER-a K, nM	Syntetická cesta
1			2,15	605	*
2	5,76 (B)	305 (³⁵CI)	0,55	56	A
3	5,41 (B)	285	1,2	61	A
4	5,62 (B)	289	0,5	74	A
5	6,11 (B)	305 (³⁵CI)	1,2	1100	A
6	25,6 (A)	349 (⁷⁹Br)	1,25	439	A
7	6,72 (B)	311	3,2	>3000	A
8	7,08 (B)	313	0,75	>3000	A
9			143	>3000	*
10	25,4 (A)	299	25	>3000	A
11	6,93 (B)	273	100	>3000	A
12			22	>3000	*
13			6	>3000	*
14	7,86 (B)	305	150	>3000	A
15	5,39 (B)	271	15	900	A
16	5,68 (B)	271	110	>3000	A
17	Ή NMR (DMSO-d₆): 12,59 (s, 1H), 10,99 (s, 1H), 8,88 (S, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,14 (m, 1H), 6,44 (S, 1 H), 6,27 (s, 1H)	3,3	>3000	A
18	¹H NMR (DMSO-d₆): 12,92 (s, 1H), 10,93 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,53 (m, 1H), 6,42 (s, 1H), 6,24 (s, 1H)	17	>3000	A

19	5,26 (B)	306	122	>3000	A
20	7,70 (B)	333 (⁷⁹Br)	25	>3000	A
21	7,55 (B)	289 TCI)	42	>3000	A
22			50	>3000	★
23	5,20 (B)	269	0,5	200	A
24	4,91 (B)	273	3,3	>3000	A
25	6,07 (B)	323	10	321	Poznámka a)
26			3,7	1000	*
27	5,43 (B)	271	5,7	3000	Poznámka b)
28	¹H NMR (DMSO-d₆): 10,47 (m, 1H), 9,55 (m, 1H), 7,6,7 (d, 1H), 7,1-6,7 (m, 6H), 2,22 (m, 3H); MS: 269	12	322	B
29	5,57 (B)	283	4	80	B
30	6,01 (B)	239	140	>3000	B
31	’H NMR (DMSO-d₆): 10,68 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,60 (m, 2H), 7,16 (m, 1H), 6,87 (dd, 1 H), 6,81 (m, 1H); MS: 245	108	>3000	B
32		33	>3000	*
33	¹H NMR (DMSO d-6): 12,66 (s, 1H), 10,98 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,27 (m, 2H), 6,44 (d, 1H, J= 2,1 Hz), 6,26 (d, 1H, J= 2,1 Hz); MS: 273	50	>3000	A
34		9,5	95	*
35		19	50	*
36		0,33	88	*
37	¹H NMR (DMSO d-6): 9,61 (s, 1H), 9,52 (s, 1H), 7,26 (d, 1H, J= 2,7 Hz), 7,21-7,13 (m, 3H), 6,99 (dd, 1H, J = 8,1 Hz, J’ = 2,7 Hz), 6,71 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 3,26 (m, 1 H), 3,07-2,80 (m, 3H), 2,64 (m, 1H); MS: 253 (M-H)	0,73	75	Poznámka c)

38	¹H NMR (DMSO d-6): 10,52 (s, 1H), 9,64 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 7,55 (m, 3H), 6,85-6,70 (m, 4H); MS: 255	4,9	220	B
39	¹H NMR (DMSO d-6): 10,63 (s, 1H), 10,33 (s, 1H), 9,60 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,50 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,80 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 6,28 (s, 1H), 6,22 (s, 1 H); MS: 271	79	>3000	B
40	¹H NMR (DMSO d-6): 10,18 (s, 1H),9,73 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,60 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,17 (m, 2H), 7,06 (m, 1H), 6,85 (d, 2H, J = 8,4 Hz); MS: 255	104	>3000	B
41	¹H NMR (DMSO d-6): 9,72 (s, 2H), 8,05 (s, 1 H), 7,58 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,25 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 7,07 (d, 1H, J = 2,7 Hz), 7,00 (dd, 1H, J = 8,4 Hz, ď = 2,7 Hz), 6,84 (d, 2H, J = 8,4 Hz); MS: 255	4,6	3000	B
42	¹H NMR (DMSO d-6): 10,56 (s, 1H), 7,50 (d, 2H, J = 7,8 Hz), 7,42 (d, 1 H, J = 8,7 Hz), 7,33 (d, 2H, J = 7,8 Hz), 6,84 (dd, 1 H, J = 7,8 Hz, J’ = 2,1 Hz), 6,75 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 2,21 (s, 3H); MS: 287 (³⁵CI)	51	>3000	B
43	¹H NMR (DMSO d-6): 10,36 (s, 1H), 9,55 (s, 1H), 7,49 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,08 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 6,87 (d, 1 H, J = 9 Hz), 6,81 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 2,21 (s, 3H), 2,19 (s, 3H); MS: 283	24	500	B
44	Ή NMR (DMSO d-6): 11,11 (s, 1 H), 7,93 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,16 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,036,93 (m, 4H), 4,66 (m, 1H), 1,30 (d, 6H, J = 6Hz); MS: 365	118	3000	Poznámka a)
45	¹H NMR (DMSO d-6): 10,39 (s, 1H), 7,78 (d, 1H, J= 8,4 Hz), 7,42 (m, 2H), 7,28 (t, 1H, J = 7,8 Hz), 7,19 (d, 1H, J= 7,8 Hz), 6,75 (dd, 1H, J = 8,4 Hz, J’ = 2,4 Hz), 6,69 (d, 1 H, J = 2,4 Hz), 3,86 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,4-2,1 (m, 2H); MS: 317 (⁷⁹Br)	116	3000	Poznámka b)
46		2	155	4r

* zlúčenina je komerčne dostupná.

Poznámka a): Pripravené podľa metódy A; cyklizačný krok sa uskutočnil pomocou trifluóracetanhydridu podľa J. Med. Chem. 1992,15, 3519.

Poznámka b): Pripravené cyklizáciou príslušnej kyseliny 2,4-diarylbutánovej s POCI₃ a následnou demetyláciou metoxyesterov podľa J. Org. Chem. 1946,11,34.

Poznámka c): Pripravené podľa Aust. J. Chem. 1978, 31,1011.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použitie ligandov estrogénového receptora β, ktoré vyhovujú nerovnici:

(K_iaA/K_ipA)/(K_ioE/K_jpE) > 1_ľ kde

K_iaA je hodnota K, pre agonistu v ER-a;

K_ipA je hodnota Kj pre agonistu v ER-β;

K_iaE je hodnota K, pre estrogén v ER-α; a

K_ipE je hodnota K, pre estrogén v ER-β na prípravu lieku na liečenie choroby súvisiacej s estrogénovým receptorom β·
2. Použitie podľa nároku 1, kde zlúčenina vyhovuje nerovnici:

(K_iaA/K_ipA)/(K_iaE/K_ipE) > 100.
3. Použitie podľa nároku 2, kde liečená choroba je vybraná zo skupiny, ktorú tvoria Alzheimerova choroba, úzkostné poruchy, depresívne poruchy, osteoporóza, kardiovaskulárna choroba, reumatoidná artritída a rakovina prostaty.
4.

Použitie podľa nároku 3, kde zlúčenina má vzorec I:

kde:

Ľ je -C(=O)-, =C(R⁶)-, -CH(R⁶)-, O, S alebo NR^a;

L² je -C- alebo -CH-;

L³ je =C(R⁶)-, -CH(R⁶)- alebo -C(=O)-;

Ľ je -C(=O)-, CH₂, O, S alebo NR^a;

kde:

keď L¹ je -C(=O)-, L⁴ je CH₂, O, S alebo NR⁴;

keď L⁴ je -C(=O)-, L¹ je CH₂, O, S alebo NR²;

keď L³ je -C(=O)-, L¹ je =C(R⁶)- alebo -CH(R⁶)- a L⁴ je O alebo NR^a keď L¹ je =C(R⁶)-, L² je =C-;

keď L¹ je -CH(R⁶)-, L² je -CH-;

keď L³ je =C(R⁶)-, L² je =C-; a keď L³ je -CH(R⁶)-, L³ je -CH-;

R^a je nezávisle pri každom výskyte H alebo (C^C^alkyl;

R¹ je fenyl, substituovaný fenyl alebo Het;

R², R³, R⁴ a R⁵ sú nezávisle vybrané zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: -R^a, -OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NC(=O)R^a, -NS(=O)R³, -NS(=O)2R^a, halogén, kyano, -CF3, -CO₂R^a, -C(=O)R^a, -C(=O)NHR^a, nitro, -S(=O)R^a a -S(=O)₂R^a;

R⁶ je H, (C^CsJalkyl, fenyl alebo CF₃; a kde, keď L¹ je -C(=O)- a R³ je hydroxy alebo vodík a R³ je vodík a R⁴ je hydroxy a R⁵ je vodík a R⁶ je vodík, potom R¹ nie je para-fenol; a akákoľvek jej farmaceutický prijateľná soľ.
5. Použitie podľa nároku 4, kde R¹ je Het.
6. Použitie podľa nároku 4, kde:

R¹ má štruktúru:

kde:

R⁷ je H, Cl alebo metyl;

R⁸ je Br, Cl, F, R^a, OR^a alebo alyl;

R⁹ je H, OH, NH₂, Br alebo Cl; a

R¹⁰ je H alebo metyl; alebo

R⁸ a R⁹ spolu tvoria-OCH₂O-; alebo

R¹ je substituovaná alebo nesubstituovaná verzia jedného z nasledujúcich alebo
7. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, kde chorobou je Alzheimerova choroba alebo depresívne poruchy.
8. Použitie podľa nároku 6, kde R², R³, R⁴ a R⁵ sú nezávisle vybrané zo skupiny, ktorú tvorí R^a, OR^a, NR^a2, NC(=O)R^a, CF₃ a halogén.
9. Použitie podľa nároku 8, kde:

R² je hydroxyl alebo vodík;

R³ je vodík alebo metyl;

R⁴ je hydroxyl alebo vodík; a

R⁵ je vodík alebo hydroxyl.
10. Použitie podľa nároku 8, kde L⁴ je -C(=O)-.
11. Použitie podľa nároku 8, kde L³ je -C(=O)-.
12. Použitie podľa nároku 8, kde L¹ je -C(=O)-.
13. Použitie podľa nároku 9, kde R¹ je nesubstituovaná verzia