SK141899A3 - Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity - Google Patents

Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity Download PDF

Info

Publication number
SK141899A3
SK141899A3 SK1418-99A SK141899A SK141899A3 SK 141899 A3 SK141899 A3 SK 141899A3 SK 141899 A SK141899 A SK 141899A SK 141899 A3 SK141899 A3 SK 141899A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
compound
formula
extract
appetite
composition
Prior art date
Application number
SK1418-99A
Other languages
English (en)
Inventor
Heerden Fanie Retief Van
Robert Vleggaar
Roelof Marthinus Horak
Robin Alec Learmonth
Vinesh Maharaj
Rory Desmond Whittal
Original Assignee
Csir Corporate Building
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Csir Corporate Building filed Critical Csir Corporate Building
Publication of SK141899A3 publication Critical patent/SK141899A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/33—Cactaceae (Cactus family), e.g. pricklypear or Cereus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A61K31/78—Polymers containing oxygen of acrylic acid or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/27—Asclepiadaceae (Milkweed family), e.g. hoya
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
    • C07H13/08—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals directly attached to carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/04—Disaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/08—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium
    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J15/00—Stereochemically pure steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a partially or totally inverted skeleton, e.g. retrosteroids, L-isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/002—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa not substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/0025—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/0025—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16
    • C07J7/0035—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16 by a hydroxy group free esterified or etherified
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/0065—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by an OH group free esterified or etherified
    • C07J7/007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by an OH group free esterified or etherified not substituted in position 17 alfa
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Description

Farmaceutická kompozícia znižujúca chuť do jedla
Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka steroidných glykozidov, kompozícií, ktoré obsahujú steroidné glykozidy a nového použitia týchto steroidných glykozidov a kompozícií, ktoré ich obsahujú. Vynález sa týka spôsobu extrakcie a izolácie týchto steroidných glykozidov z rastlinného materiálu, spôsobu syntetickej prípravy týchto steroidných glykozidov a produktov takejto extrakcie a takýchto syntetických spôsobov.
Podstata vynálezu
Predovšetkým sa prihláška vynálezu týka činidla znižujúceho chuť do jedla, spôsobu syntetickej prípravy činidla znižujúceho chuť do jedla, spôsobu extrakcie činidla znižujúceho chuť do jedla z rastlinného materiálu, kompozície znižujúcej chuť do jedli.a obsahujúcej činidlo znižujúce chuť do jedla a spôsobu zníženia chuti do jedla.
Predkladaný vynález poskytuje postup prípravy extraktu rastliny rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, pričom extrakt zahrnuje činidlo znižujúce chuť do jedla, postup zahrnuje stupne spracovania zozbieraného rastlinného materiálu rozpúšťadlom s cielom extrakcie frakcií majúcich aktivitu znižujúcu chut do jedla, separáciu extrakčného roztoku od zvySku rastlinného materiálu, odstránenie rozpúšťadla z extrakčného roztoku a získanie extraktu. Takto získaný extrakt môže byť ďalej čistený, napríklad vhodnými rozpúšťadlovými extrakčnými postupmi.
Vynález ďalej poskytuje rastlinný extrakt pripravený zo skupiny zahrnujúcej rod Trichocaulon a rod Hoodia a majúci aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Extrakt sa môže pripraviť z rastlinného materiálu. ako sú stonky alebo korene uvedených rastlín rodu Trichocaulon alebo znižujúci chuť do jedla Hoodia gordonii alebo rodu Hoodia. Rod Trichooaulon a rod Hoodia sú šťavnaté rastliny rastúce vo vyprahnutých oblastiach, aké sa nachádzajú v Južnej Afrike. V jednej prihláške vynálezu sa extrakt znižujúci chuť do jedla ziska z druhu Trichocaulon piliferum. Druh Trichocaulon orfficianale sa môže tiež použiť na ciele získania extraktu znižujúceho chuť do jedla. V ďalej prihláške vynálezu sa extrakt môže ziskaĽ z druhu Hoodia eur r or ii, Hoodia lugardíi. Biologické skúšky uskutočnené prihlasovateľom ukázali, že niektoré tieto extrakty vykazujú aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Rastlinný materiál sa môže homogenizovať v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, ako je napríklad zmes metanolu a inetylénchloridu, zariadením akým je Waringov miešač. Extrakčný roztok sa potom môže oddeliť od zvyšku rastlinného materiálu vhodnou separačnou technikou, ako napríklad filtráciou alebo odstredením. Rozpúšťadla sa inôže odstrániť na rotačnej odparke, výhodne vo vodnom kúpeli, pri teplote 60 °C. Oddelený surový extrakt sa môže ďalej extrahovať inetylénchloridom a vodou, skôr než sa rozdelí na metylénchlorldový extrakt a vodný extrakt. Netylénchloridový extrakt môže mať rozpúšťadlo, ktoré sa môže výhodne odstrániť na rotačnej odparke a výsledný extrakt sa môže ďalej čistiť extrakciou zmesou metanolu a hexánu. Extrakčný produkt z extrakcie zmesou metanolu a hexánu sa potom môže rozdeliť na metariolový extrakt a hexánový extrakt. Netanolový extrakt sa môže odpariť s cieľom odstránenia rozpúšťadla, aby oa získal čiastočne čistý aktívny extrakt.
Čiastočne Čistý aktívny extrakt sa môže rozpustiť v metanole a ďalej sa môže frakcloriovať stĺpcovou chromatografiou pri použití silikagélu ako adsorpčného média a zmesi chloroformu a 30% metanolu ako eluenta. Získa sa veľké množstvo rôznych frakcií a každá môže byť hodnotená vhodnou biologickou skúškou s cieľom určenia aktivity na zníženie chuti k jedlu.
Frakcie majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla sa môžu výhodne ďalej frakcionovať stĺpcovou chromatografiou na slllkagéle ako adsorpCnom médiu a rozpúšťadle 9sl chloroformsmetanol a výsledné subfrakcie sa biologicky skúSajú na aktivitu znižujúcu chuĽ do jedla. Subfrakcie vyznaCujúce sa aktivitou znižujúcou chuť do jedla môžu byť ďalej, ak je to potrebné, frakcioriované a Čistené pri použití stĺpcovej chromatografie so silikagélom ako adsorpčnom médiu a zmesou etylacetátu a hexánu 9:1 ako rozpúšťadlom. Výsledné Čistené frakcie môžu byĽ opäť hodnotené vhodnými biologickými postupmi na aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Prihlasovateľ zistil, že aspoň jedna takáto Čistená frakcia má dobrú aktivitu znižujúcu chuť do jedla a aktívna látka vo frakcii bola identifikovaná konvenčnými chemickými technikami zahrnujúcimi nukleárnu magnetickú rezonanciu a zistilo sa, že ide o zlúCenlnu Štruktúrneho vzorca
C B A (D
V súlade s nomenklatúrou S.I., aktívna látka 1 je zlúCenina 3-0-C -a-D-thevetopyranozyl-C l->4) -a-D-cyinaropyranozyl-C l->4) -a-D-cymaropyranozyl3-12a-0-tigloyloxy-14-hydroxy-14a-pregn-5-en-20-ón CC^H7^O1S 1*1* 878).
Ďalším aspektom vynálezu je spôsob prípravy rastlinného extraktu rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, pričom extrakt zahrnuje činidlo znižujúce chuť do jedla, postup zahrnujúci lisovanie zozbieraného rastlinného materiálu na oddelené šťavy z pevného rastlinného materiálu a získanie voľnej šťavy pevného rastlinného materiálu za vzniku extraktu.
Extrakt môže byť sušený s cieľom odstránenia vlhkosti, napríklad sušením rozprašovaním, vymrazovaním alebo vákuovým sušením za vzniku voľne tečúceho prášku.
Vynález sa ďalej týka kompozície majúcej aktivitu znižujúcu chuť do jedla zahrnujúcej extrakt, ako je popísaný vyššie.
Kompozícia môže byť zmiešaná s farmaceutickým excipientom, riedidlom alebo nosičom a prípadne sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
Vynález sa ďalej rozširuj na použitie extraktu, ako je popísaný vyššie, na prípravu liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla, na extrakt, ako je popísaný vyššie, ktorý sa použije ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla a na spôsob zníženia chuti k jedlu tak, že sa človeku alebo zvieraťu podá účinná dávka kompozície popísanej vyššie.
Zlúčenina 1 je nová zlúčenina a vynález je rozšírený na zlúčeninu 1 a určité analógy alebo deriváty tohoto steroídného trisacharidu znižujúce chuť do jedla. Predpokladá sa, že molekuly vybrané ako analógy alebo deriváty dodávajú steroidnému trisacharidu vlastnosti zvyšujúce aktivitu aktívnej zložky. Pri výbere analógov boli brané do úvahy tieto účinky:
C í) Hydrofóbna interakcia a lipofilita
Modifikácia funkčnej skupiny aktívnej molekuly sa uskutočňuje s cieľom dosiahnutia hydrofóbnosti a lipofility molekuly. Bolo dokázané, že zvýšená lipofilita koreluje so zvýšenou biologickou aktivitou, menšou rozpustnosťou vo b
vode. zvýšenou detergenciou a bunkovou lýzou. zvýšeným ukladaním v tkanivách, rýchlejším metabolizmom a elimináciou zvýšenou väzbou plazmových proteínov a rýchlejším začiatkom pôsobenia.
Cii) Elektronické vlastnosti a Ionizačné konštanty
Modifikácia funkčnej skupiny sa tiež uskutočňuje s cieľom dosiahnutia zmeny kyslosti a bazicity, ktorá bude hrať hlavnú úlohu pri regulácii transportu zlúčeniny na miesta pôsobenia a pri väzbe ria tomto cieľovom mieste.
Ciii) Viazanie vodíka
Modifikácia funkčnej skupiny karboxylovej a karbonylovej skupiny v aktívne.j molekule sa uskutočňuje s cieľom dosiahnutia zmeny interakcie medzi proteínmi v biologických systémoch a chemicky modifikovanými funkčnými skupinami.
Civ) Sterické parametre
Úlohou zmeny sterických črt molekuly je zvýšenie väzby k jej receptoru a tak zvýšenie jej biologickej aktivity.
Nasledujúce chemické modifikácie sa uskutočňujú s cieľom dosiahnutia hydroťúbnosti a lipofility, elektronického viazania a sterických parametrov molekuly s
a) Chemická skupiny; modifikácia skupiny C-12 a e sterovej funkčnej
b) Chemická genácia a modifikácia migrácia; 5, 6-dvojitej väzby, napríklad hydro--
c) Chemická modifikácia C-20 karbonylovej skupiny a C-17
acetylovej skupiny;
d) Chemická modifikácia kruhu D steroidného alebo aglykónového kruhu;
e) Modifikácia cukrov trisacharidovej časti.
Predkladaný vynález poskytuje zlúčeninu všeobecného vzorca
(2) kde
R je alkyl;
Ri je K. alkyl. tigloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
Ra je H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2.6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
Predkladaný vynález tiež zahrnuje zlúčeninu, ako je popísaná vyššie, kde ďalej je ďalšia väzba medzi C5-C6. R = metyl, Ri = tigloyl. Ra = 3-0-Ľ-a-D-thevetopyranozyl-<l->4)-B-D-cymaropyranozyl-Cl->4)-a-D-cymaropyranozyl] a kde zlúčenina má všeobecný vzorec
Ί
Ďalšie aktivne analógy derivátov zlúčeniny 1 znižujúce chuť do jedla podľa vynálezu sú zlúčeniny majúce nasledujúci štruktúrny vzorec
(3) kde R = alkylj a
Ri = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo akákoľvek Iná organická esterová skupina.
(4) kde R = alkyl; a
Ri = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
OH (5) kde R = alkyl; a
Rx = H. alkyl. tigloyl, benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
(6} kde R = alkyl; a
Rx = H, alkyl. tigloyl, esterová skupina.
benzoyl alebo akákoľvek iná organická
kde R Rx alkyl; a
H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
kde R = alkyl; a
Ri = H, alkyl. tigloyl, berizoyl alebo iná organická esterová skupina;
Rs = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov. alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná čiara znamená prípadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4—C5 alebo C5-C6.
OH (9) kde R = alkyl; a
Rx - H. alkyl. tigloyl. benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
Rs = H alebo jeden alebo viac S-deoxysacharldov alebo jeden alebo viac 2. 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná Čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
(10) kde R = alkyl; a
Ri = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
Ra = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysachar±dov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná Čiara znamená prípadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
R
(11) kde R = alkyl; a
Rx = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo Iná organická esterová skupina;
Ra = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov. alebo molekuly glukózy alebo Ich kombinácie;
a kde prerušovaná Čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5, C5-C6 alebo C14-C15.
(12) kde R = alkyl; a
Rx - H, alkyl. tigloyl. berizoyl alebo iná organická esterová skupina;
Ra = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2. 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná Čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5, C5-C6 alebo C14-C15.
(13) kde R = alkyl; a
Ri = H. alkyl, tlgloyl. benzoyl alebo iná organická esterová skupina;.
Ra. = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov. alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5, C5-C6 alebo C14-C15; a
R» = H, alkyl. aryl, acyl alebo glukoxy.
Me
MeO—*-
kde R = H, alkyl. aryl alebo akýkoľvek steroid majúci C14 beta hydroxylovú skupinu, C12 beta hydroxylovú skupinu a C17 acylovú skupinu. C5-C6 olefin alebo ich kombinácie.
Vynález je ďalej rozšírený na postup na syntetickú prípravu zlúčeniny majúcej aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Postup používa steroid ako východiskový materiál (alebo medziprodukt alebo prekurzor), kde steroid má chemický vzorec
(15)
Steroid 15 sa môže pripraviť zo zlúčeniny majúcej vzorec 22. ktorý zahrnuje stupne
C i) spracovanie progesterúnu majúceho vzorec
(16) s mikroorganizmom Calonectrica decora za vzniku zlúčeniny 12b. 15ď-dihydroxyprogesterúnu vzorca
(17) <ii> spracovanie zlúčeniny 17 tosylchloridom a pyridínom za vzniku zlúčeniny 12e-hydroxy-15oŕ-C p-toluénsulf onyl) progesteróri vzorca
(18) <1115 spracovanie °C za vzniku zlúčeniny zlúčeniny 18 s kolidinom pri teplote 150 12a-hvdroxv-/\1 ’-progesterúnu vzorca
(19) (iv) spracovanie zlúčeniny 19 s acetylchloridom a acetanhydridom pri 120 °C za vzniku zlúčeniny 3,12a-diacetoxypregna-3, 5. 14-trien-20-ónu vzorca
AcO
(20) (v) spracovanie zlúčeniny 20 s etylénglykolom a katalytickým množstvom p-toluénsulfúriovej kyseliny za vzniku zlúčeniny 3.12a-diacetoxy-20, 20-etyléndioxypregna-3„ 5.14-triénu vzorca
AcO
(21)
C vi) spracovanie zlúčeniny 21 s NaBH4 za vzniku zlúčeniny 3b, 12a-dihydroxy-20, 20-etyléridioxypregna-5, 14-dién-12-acetátu vzorca
Prvý alternatívny postup prípravy steroidu 15 podlá vynálezu zahrnuje stupne s <a) spracovanie zlúčeniny 22 s redukčným činidlom, napríklad LiAlH^ za vzniku zlúčeniny 3b,12B-dihydroxy-20.20-etyléndioxypregna-5,14-diénu vzorca
(23,
C b) spracovanie zlúčeniny 23 s N-brúmacetamidom C NBA) a bázou, napríklad pyridinom, za vzniku zlúčeniny 3a. 12a-dihydroxy-14,15-epoxy-20, 20-etyléndioxypregnen-5-énu vzorca
(24)
C c) spracovanie zlúčeniny 24 s redukčným činidlom za vzniku zlúčeniny 3a, 12a. 14a-trihydroxy-20, 20-etyléndíoxypregn-5-ériu vzorca
Cd) spracovanie zlúčeniny 25 kyselinou octovou, a vodou za vzniku 3a, 12a, 14a-trihydroxypregn-5-énu.
s kyselinou. napríklad steroidnej zlúčeniny 15,
Reakčná schéma A zobrazuje postup prípravy steroídného medziproduktu 15 zo zlúčeniny 22 podľa prvého alternatívneho postupu podľa vynálezu Ca zahrnuje prípravu zlúčeniny 22 zo zlúčeniny 16 na llustratívne ciele).
Reakčná schéma A
(20) (21)
(15)
V druhom alternatívnom postupe prípravy steruidu 15 podľa vynálezu postup zahrnuje stupne*
C a) spracovanie zlúCeniny 22 C 3a. 12a-dihydroxy-20, 20-etyléndioxypregna-5,14-dlén-12-aceLát) s p- toluénsulf ony lchloridom á bázou, napríklad pyrldínom. za vzniku zlúčeniny 3a. 12a-dihydroxy-20, 20-etyléndioxypregna-5,14-diéri-3-tosyl-12-acetátu vzorca-
C b) spracoval íle zlúčeniny 26 octanom draselným v rozpúšťadle.
napríklad acetói ie.
za vzniku zlúCeniny 6a, 12a-dlhydr oxy-20, 20-etyléndioxy-3. 5of-cyklopregľian-14-én-12-aceLáLu vzorca
(27,
C c) spracovanie zlúCeniny 27 s redukCným Činidlom, napríklad L1A1H4. a napríklad tetrahydrofuránom. za vzniku zlúCeniny 6a. 12a-d±hydroxy-20. 20-etyléndioxy-3. 5ed-cyklopregnan-14-ériu vzorca
OH (28)
C d) spracovanie zlúčeniny 28 s N-brúmacetamidom. prípadne kyselinou octovou a bázou. napríklad pyrldlnom. za vzniku zlúčeniny 6a. 12a-dihydroxy-20. 20-etyléndioxy-14,15-epoxy-3, 5cé-cyklopregnánu vzorca
(29)
Ce) spracovanie zlúčeniny 29 s redukčným činidlom, napríklad L1A1H4, a napríklad tetrahydrofuránom. za vzniku zlúčeniny 6b, 12b, 14a-trihydroxy-20, 20-etyléridioxy-3, Scŕ-cyklopregnánu vzorca
OH (30) (f) spracovanie zlúCeniny 30 s kyselinou, napríklad kyselinou chlorovodíkovou, a rozpúšťadlom, napríklad acetúnom, za vzniku zlúCeniny 15.
ReakCná schéma B zobrazuje postup prípravy medziproduktu 15 zo zlúCeniny 22 podľa druhého alternatívneho postupu podľa vynálezu.
Reakčná schéma B
Zlúčenina 1 sa môže pripraviť syntézou z prvého karbohydrátového medziproduktu vo forme aktivovanej monosacharidov oymarozovej časti, ktorá sa mOže pripraviť zo zlúčeniny majúcej vzorec 36. Zlúčenina 36 sa mOže pripraviť podľa postupu, ktorý zahrnuje stupnes
C i) spracovanie oí-D-metyl-glukúzy majúcej vzorec
(31) s benzaldehydom a chloridom zinočnatým za vzniku zlúčeniny metyl-4. 6-benzylidén-eŕ-D-glukopyranozidu vzorca
(32)
Cii) spracovanie zlúčeniny 32 s tosylchloridom a pyridínom pri teplote 0 °C za vzniku zlúčeniny metyl-4, 6-0-benzylidéri-2-0-tosyl-oŕ-D-glukopyranozidu vzorca
(33)
C iii) spracovanie zlúčeniny 33 s NaOPIe pri teplote 100 °C za vzniku zlúčeniny met y 1-4. 6-0-benzylidén-3-0-metyl-oŕ-D-metylpyranozidu vzorca
Civ) spracovanie zlúčeniny 34 s N-brómsukcinimidom (NBS) za vzniku zlúčeniny metyl-6-bróm-4-0-benzoyl-3-0-metyl-6-deoxy-cŕ-D-altropyranozidu vzorca
C v) spracovanie zlúčeniny 35 s NaBH4 a NiCla za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl-6-deoxy-oí-D-altropyranozidu vzorca
(36)
Vynález je ďalej rozšírený na spôsob prípravy karbohydrátového medziproduktu vo forme aktivovanej moriosacharidovej cymarúzovej časti, ktorý zahrnuje stupne <i) spracovanie zlúčeniny 36 s PhSSil*le3, Znla a Bu4*I_ za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl—6-deoxy-c«B-D-fenyltioaltrozidu vzorca
(37) <ii) prípadne spracovanie zlúčeniny 37 s dietylaminosulfurtrifluoridom CDAST), napríklad pri 0 °C, za vzniku zlúčeniny
4-0-benzoyl-3-0-metyl-2-fenyltio-2, 6-dideoxy-oíB-D-fluúrcymaropyranozidu vzorca
alebo
Ciii) prípadne spracovanie zlúčeniny 37 s terc.butyldimetylsilylchloridom a imidazolom v rozpúšťadle, napríklad pyridíne, za vzniku 4-0-benzayl-3-0-metyl-2-0-terc. butyldimetylsilyl-cťo-D-fenyltioaltrozidu vzorca
OMe
SPh (39, kde Z = TBDMS ( = terc.butyldimetylsllyl);
a
Civ) spracovanie zlúčeniny 39 s bázou, napríklad metoxidom sodným, za vzniku 3-0-metyl-2-0-terc .butyldimetylsilyl-cŕa-D-fenylaltrozidu vzorca
SPh (40) kde Z = TBDMS ( = terc.butyldimetylsilyl).
Reakčná schéma C zobrazuje postup prípravy aktivovanej monosacharidovej cymarózovej časti 40 zo zlúčeniny 36 podía vynálezu C a zahrnuje prípravu zlúčeniny 36 zo zlúčeniny 31 na ilustratívne ciele).
Reakčná schéma C
(33)
s/3>
. PhCO ]—v
OMe
Z = t-butyld±metylsilyl
Syntéza zlúčeniny 1 mOže tiež zahrnovať druhý karbohydrátový medziprodukt vo forme aktivovanej moriosacharidovej thevetozovej časti, ktorá sa môže pripraviť zo zlúčeniny vzorca 47. Zlúčenina 47 sa môže pripraviť postupom, ktorý zahrnuje stupne*
C i) spracovanie ď-D-glukózy vzorca
(41} s acetónom a kyselinou sírovou za vzniku zlúčeniny 1, 2 * 5, 6-di-0-izopropylidén-cŕ-D-glukofuranúzy vzorca
(ii) spracovanie zlúčeniny 42 s NaH a Plel za vzniku zlúčeniny 1, 2*5, 6-di-0-izopropylidéri-3-0-metyl-cŕ-D-glukof uranúzy vzorca
(43) (iii) spracovanie zlúčeniny 43 s kyselinou octovou za vzniku zlúčeniny 3-0-metyl-ďa-D-glukopyranózy vzorca
(iv) spracovanie zlúčeniny 44 s metanolom a kyselinou chlorovodíkovou za vzniku zlúčeniny metyl-3-O-metyl-cŕa-D-glukopyranozidu vzorca
OMe (v) spracovanie zlnočnatým za vzniku -ofe-D-glukopyranozidu zlúčeniny 45 s benzaldehydom a chloridom zlúčeniny metyl-4. 6-0-benzylidén-3-0-metylvzorca
OMe (46)
C vi) spracovanie zlúčeniny 46 s N-brómsukcínamidom, chloridom nikelnatým a roztokom borohydridu za vzniku zlúčeniny inetyl-4-0-benzoyl-3-0-metyl-6-deoxy-oía-glukopyranozidu vzorca
(47,
Vynález je ďalej rozšírený na spôsob prípravy aktivovanej monosacharidovej thevetozovej časti, ktorý zahrnuje stupne:
C i) spracovanie zlúčeniny 47 s ťeriyltiotrimetylsilánom a trimetylsilyltríflučrmetárisulfonátom za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl-l-fenyltio-6-deoxy-oŕa-glukopyranozidu vzorca
SPh (48,
Cii) spracovanie zlúčeniny 48 s pivaloylchloridom a rozpúšťadlom, napríklad pyridíriom, za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl-2-0-pivaloyl-l-fenyltio-6-deoxy-aí&-glukopyranozidu vzorca
(49) a
C iii) spracovanie zlúCeniny 49 s broinaCným činidlom, napríklad N-brómsulcinimidom, a dietylaminosulfurtrioxidom za vzniku zlúCeniny 4-0-benzoyl-3-G-metyl-2-0-pivaloyl-l-fluór-G-deoxy-a-glukopyranozidu, ktorý sa vyskytuje ako stereoizoméry majúce vzorce
(50 A) (50 B)
ReakCná schéma D znázorňuje postup prípravy aktivovanej monosacharidovej thevetozovej Časti 50A a SOB zo zlúCeniny 48 podľa vynálezu C a zahrnuje prípravu zlúCeniny 47 zo zlúCeniny 41 na ilustratívne ciele).
Reakčná schéma D
(48)
149)
í 50 B)
Podľa ďalšieho aspektu vynález poskytuje postup syntetickej prípravy zlúčeniny vzorca 1. jej analogických derivátov, ktorý zahrnuje stupne syntézy vhodného steroidného medzíproduktu alebo prekurzora a kopuláciu požadovaného čísla vhodných monosacharidov so steroidným medziproduktom.
Vynález tiež poskytuje spôsob kopulácie monosacharidovej cymarózy so steroidným medziproduktom, ktorý zahrnuje stupne:
C i) reakciu cymarózovej časti vzorca 38 so steroidovým medziproduktom vzorca 15, napríklad pri teplote -15 °C v prítomnosti chloridu cínu v rozpúšťadle, napríklad éteri, za vzniku zlúčeniny 3-0-Ľ 4-0-benzoyl-2-f enyltio-a-D-cyinaropyranozyl]-12, 14-a-díhydroxypregnan-5-en-20-ónu vzorca
BzO
OMe
(51)
Cii) spracovanie zlúčeniny 51 s chloridom tiglovej kyseliny v pyridíne a potom s bázou, napríklad NaNOe, za vzniku zlúčeniny 3-0-C-2-fenyltio-a-D-cymaropyranozyl]-12e-tigloyl-oxy-14-hydroxy-14a-pregn-5-en-20-únu vzorca
Ο
HO
Ο
OMe (52)
Vynález je ďalej rozšírený na spôsob, ktorý zahrnuje kopuláciu monosacharidovej cymarózovej časti na monosacharidthevetozovú časť a kopuláciu vzniknutého dlsacharidu s kombinovaným steroidriým produktom 52 za vzniku zlúčeniny 1.
Kopulácia inonosacharldovej cymarózovej Časti na monosacharidovú thevetozovú časť a kopulácia vzniknutého disacharidu na kombinovaný steroidný produkt 52 môže zahrnovať stupne:
Ci) kopulácia selektívne chránenej cymarózovej časti vzorca 40 a selektívne chránenej thevetozovej časti 50 A pri použití chloridu cínatého CSnClÄ) a trifluórmetánsulfonátu strieborného, napríklad pri -15 °C, za vzniku zlúčeniny vzorca
ZO^SPh
OPv (53) kde Z - TBDMS (- terc.butyldimetylsilyl)
Cii) spracovanie zlúčeniny 53 s tetrabutylamúníumfluoridom za vzniku zlúčeniny vzorca
OPv (54)
C iii) trifluoridom, spracovanie zlúčeniny napríklad pri 0 eC, za vzniku s dietylaminosulfur-zlúčeniriy vzorca
OPv (55) <iv) reakciu zlúčeniny 55 so zlúčeninou 52 za vzniku zlúčeniny vzorca
ΟΡν
(56) a
C V) spracovanie zlúčeniny 56 Raney-niklovou reakciou a potom s bázou, napríklad Nal*IOe, za vzniku zlúčeniny 1. ako je popísané vyššie.
Reakčná schéma E znázorňuje postup syntézy medziproduktov 52 a 55 a ich kopuláciu za vzniku zlúčeniny 56.
Reakčná schéma E
(52)
I
ΟΡν
Podľa vynálezu alternatívny spôsob zahrnuje kopuláciu cymarózy a thevetozovej časti za vzniku trisacharidu a kopuláciu trisacharidu na steroidný derivát za vzniku zlúčeniny vzorca 1.
Proces vzniku trisacharidu a kopulácie vzniknutého trisacharidu na steroidný derivát môže zahrnovať stupne·
C i) kopulácia selektívne chránenej cymarúzovej časti vzorca 40 a zlúčeniny 45 pri použití chloridu cínatého, AgOTf, Cp-aZrCls. za vzniku zlúčeniny vzorca
OPv (57) kde Z = TBDMS ( = terc.butyldimetylsilyl) (ii) spracovanie zlúčeniny 57 s tetrabutylamúniumfluoridom a dietylamiriosulfurtrifluorldom za vzniku trisacharldovej zlúčeniny vzorca
ΟΡν (58) a
Ciii) kopuláciu trisacharidu vzorca 58 so steroidovým inedziproduktoin vzorca
pri použití chloridu cínatého, AgOTf, CpaZrC.la za vzniku zlúCeniny 1.
Steroidný medziprodukt 59 sa mOže pripraviť spracovaním steroldu 15 s chloridom tiglovej kyseliny.
Reakčná schéma F znázorňuje postup na syntézu trisacharidu 58 a syntézu zlúCeniny 1 kopuláciou trisacharidu 58 so steroldným medzlproduktom 59.
Reakčná schéma F
II /\| / 0Me
PhCO V—(
OPv (57) '
Z ~ t-butyldimetylsilyl
Medziprodukty 23, 24. 25, 27, 28. 29. 30, 37, 38. 39, 40. 48, 49, 50, 51, 53, 54. 55, 56, 57 a 58 popísané vyššie sú nové zlúčeniny a vynález je rozšírený na tieto zlúčeniny ako také.
Zlúčenina 1 3-0-Ľ -e-D-thevetopyranozyl-C l->4 )-o--D-cymaropyranozyl-C l->4) -a-D-cymaropyranozyl] -12a-U-tigloyloxy-14-hydroxy -14B-pregn-5-en-20--én a jeho rôzne analúgy a deriváty majú aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Vynález je ďalej rozšírený ria kompozíciu alebo formuláciu, majúcu aktivitu znižujúcu chuť do jedla, kde aktívna zložka je extrakt získaný z rastlín rodu Trichocaulart a rodu Hoodia.
I
Aktívna zložka môže byĽ zlúčenina všeobecného vzorca 1, extrahovaná z rastliny rodu Trichncaulori alebo Hoodia alebo jej der i. vát. Rastliny môže byť druhu Trichncaulan oFficinalo alebo Trichooaulon pilifnrum alebo z druhu Hoodia eurrorii, Hoodia cjordonii alebo Hnodia luqardii..
Vynález je ďale j rozšírený na kompozíciu alebo formuláciu majúcu aktivitu znižujúcu chuť do jedla, kde aktívna zložka je synteticky pripravená zlúčenina všeobecného vzorca 1 alebo jej derivát alebo jej analóg, ako je pripísané vyššie s odkazom na zlúčení.nu 2 až 14.
Podľa ďalšieho aspektu vynález poskytuje spôsob zníženia chuti k jedlu tak, že sa podá človekovi alebo zvieraťu vhodná dávka činidla znižujúceho chuť do jedla, zahrnujúca extrakt z rastliny rodu Triahocaulon alebo Hoodia. Extrakt môže byť včlenený do kompozície alebo formulácie, ktoré zahrnujú tiež farmaceutický prijateľné ďalšie zložky.
Činidlo znižujúce chuť do jedla môže byť Izolovaná prírodná alebo syntetická chemická zlúčenina vzorca s
alebo jej deriváty alebo analógy, ako je uvedené vyššie.
Kompozícia alebo formulácia znižujúca chuť do jedla sa môže skladať z činidla znižujúceho chuť do jedla zmiešaného s farmaceutický prijateľným excipientom, riedidlom alebo nosičom. i*IOžu sa pridať tiež ďalšie vhodné aditiva. zahrnujúce stabilizátor a ostatné zložky.
Vynález je rozšírený na použitie zlúčeniny 1 alebo jej derivátov alebo analógov pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Vynález je ďalej rozšírený na zlúčeninu 1 alebo jej deriváty alebo analógy, ako to bolo popísané vyššie, s cieľom použitia ako liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
Je takisto zahrnutý spôsob zníženia chuti k jedlu podaním účinnej dávky kompozície, ako je popísaná vyššie, človekovi alebo zvieraťu.
Je tu popísaný spôsob extrakcie steroidného glykozldu majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla z rastlinného materiálu získaného z rastliny Trichocaulon alebo Hoodia genus. Tak je vynález rozšírený na extrakt získaný z rastlinného materiálu rodu Trichocaulon alebo Hoodia a obsahujúci Čistý steroidný glykozld vzorca i.
Vynález je tiež rozšírený na potraviny alebo nápoje obsahujúce účinné množstvo steroidného glykozldu vzorca i alebo jeho derivátov alebo analógov. ako je to popísané vyššie, ktoré majú pri požití účinok znižujúci chuť do jedla.
Molekulové genetické štúdie viedli k značnému zvýšeniu telesnej hmotnosti. regulačných ciest, Udržanie normálnej rovnováhou medzi pochopenia regulácie chuti, presýtenostl. a Tieto štúdie odhalili mnoho centrálnych sprostredkovaných mnohými neuropeptldml. telesnej hmotnosti je dosiahnuté zložitou príjmom energie, príjmom potravy a výdajom energie. Energetická homeostáza je subjektom k širokému rozsahu vplyvov, hlavne kontrolovaných mozgom. Rozdielne signály zahrnujú také parametre, ako je zmysel šuch a chuť a gasrointestinálne signály, ako je rozšírenie gastrointestinálneho gastrickú mukózu a metabolity mastné kyseliny a glukóza.
traktu. chemické signály pre prenášané krvou, ako napríklad
Centrálny neuropeptid Y CNPY), ktorý je negatívne regulovaný leptínom, bol označený ako jeden z pozitívnych regulátorov prijímania potravy. Bolo dokázané, že expresia endogénneho aritagonistu k melanokortínovým receptorom je základom obezity v zvláštnom modeli Cmyš ob/ob). V skutočnosti nedostatok l*IC4 melanokortíriového receptora úplne repliku je syndróm obezity. Ďalší sprostredkovatelia, o ktorých sa uvádza, že majú úlohu v energetickej rovnováhe, zahrnujú bombesín, galonéri a glukagónu podobný peptid-1.
Bez toho, aby sme sa viazali na teóriu, prihlasovateľ sa domnieva, že zlúčenina i a jej analógy, ako sú popísané vyššie, pOsobia ako agonista receptora melanokortínu 4. Účinok tohoto pOsobenía spočíva v regulácii NPY ale tiež v zvýšení cholecystokininu. Účinok cholecystokinínu okrem iného inhibuje gastrické vyprázdnenie.
Podľa toho je vynález rozšírený na kompozíciu, majúcu aktivitu znižujúcu chuť do jedla, zahrnujúcu agonistu receptora melanokortínu 4.
Agonista môže byť extrakt alebo zlúčenina, ako je popísaná vyššie, predovšetkým zlúčenina vzorca 1. Kompozícia môže byť zmiešaná s farmaceutickým excipientom, riedidlom alebo nosičom a prípadne môže byť pripravená v jednotkovej dávkovej forme.
Vynález je ďalej rozšírený na použitie agonistu receptora melanokortínu 4 pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla, na agonistu melanokortínu 4 na použitie ako liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla, na spôsob zníženia chuti k jedlu tak, že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka zahrnujúca agonistu melanokortínu 4, ako je popísané vyššie, a na použitie agonistu receptora melanokortínu 4 na zníženie chuti a/alebo na boj proti obezite u ľudí alebo zvierat.
Vynález a jeho účinnosť bude ďalej popísaná nasledujúcimi príkladmi a výkresmi, ktoré však majú len informatívny charakter a v žiadnom prípade neobmedzujú rozsah vynálezu.
Vo výkresoch:
Obrázok 1 znázorňuje blokovú schému všeobecnej metódy extrakcie prvého surového extraktu znižujúceho chuť do jedla a čistenie extraktu znižujúceho chuť do jedla z rastlinného materiálu rodu Trichocaulon alebo Hoodíat
Obrázok 2 znázorňuje grafickú reprezentáciu biologickej skúšky uskutočnenú na potkanoch pri použití čiastočne čisteného metariolového extraktu Trichocaulon piliferumí
Obrázky 3 a 4 spoločne znázorňujú schematickú reprezentáciu výhodnej realizácie postupu podľa vynálezu na prípravu extraktu z *
rastlinného materiálu rodu Trichocaulon alebo Hoodia·, a
Obrázky 5 a 6 znázorňujú grafickú reprezentáciu percentnej zmeny telesnej hmotnosti potkanov pre rôzne skupiny v dňoch -7 až 7 a v dňoch 0 až 7 pri opakovanej dávkovej štúdii pri použití Stavového extraktu a materiálu získaného sušením rozprašovaním Stavového extraktu rastlinného materiálu druhu Hoodia gordonii.
Príklady realizácie vynálezu
Príklad 1
Všeobecný spôsob extrakcie prvého surového extraktu znižujúceho chuť do jedla a čistenie extraktu znižujúceho chuť do jedla z rastlinného materiálu rodu Trichocaulon alebo Hoodia je ilustrovaný spôsobom zobrazeným v blokovej schéme obrázku 1.
Príklad 2
Biologické skúšky uskutočnené na potkanoch pri. použití čiastočne metanolového extraktu získaného spôsobom ilustrovaným v príklade 1 ukázali, že extrakt v skutočností vykazuje aktivitu znižujúcu chuť od jedla. Aktivita znižujúca chuť do jedla aktívneho extraktu môže byť ilustrovaná typickým príkladom účinku metanolového extraktu Trichocaulon piliferum na potkanoch spôsobom grafickej reprezentácie na obrázku 2.
Z obrázku 2 bude zrejmé, že testovaná skupina potkanov, ktorá obdržala dávku extraktu 5. deň, vykazovala podstatne menšiu spotrebu potravy ďalšie dva dni, zatiaľ čo kontrolná skupina nevykazovala porovnateľné menši príjem potravy. Príjem potravy sa v prípade testovanej skupiny vrátil na normál, v skutočnosti sa zvýšil od 8. dňa.
Príklad 3
Výhodná realizácia postupu podľa vynálezu na prípravu extraktu majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla je ilustrované schematicky na príklade v obrázkoch 3 a 4, kde dva obrázky spoločne ukazujú úplný postup. Odborník však môže použiť rôzne ďalšie postupy.
Podľa obrázku 3 rastlinný materiál rodu Trichocaulon alebo Hoorfia je plnený do miešača, napríklad Uarlngovho miešača, pomocou dopravníka 1, s rozpúšťadlom vo forme roztoku metylénchlorld/metanol, privádzaným potrubím 2. Homogenizovaný produkt je privádzaný potrubím 4 do separačného stupňa 5, ktorým je napríklad filter alebo odstredivka, a zvyšný rastlinný materiál je odvádzaný potrubím 27.
Zmes rozpúšťadla a extraktu sa privádza potrubím 6 do odparovacieho stupňa, kde sa odstráni rozpúšťadlo, napríklad rotačnou odparkou. Sušený surový extrakt sa vedie potrubím 8 do ďalšieho extrakčného stupňa 9 za pridania roztoku zmesi metylénchlorldu a vody, privádzaného potrubím 29 s cieľom ďalšej extrakcie a potom do separačného stupňa 1.3, potrubím 11, kde sa odstránia vodná frakcia cez potrubie 31. Rozpustená extraktová frakcia sa privedie cez potrubie 15 do sušiaceho stupňa, kde sa odparí rozpúšťadlo, napríklad rotačnou odparkou.
Podľa obrázku 4, sušený extrakt sa vedie cez potrubie 10 do extrakčného stupňa 12. Roztok metanolu a hexánu sa tiež vedie cez potrubie 14 do extrakčného stupňa 12 s cieľom ďalšieho čistenia a extrakcie sušeného extraktu. Zmes extraktu, metanolu a hexánu sa vedie cez potrubie 16 do separačného stupňa 18, hexánová frakcia sa odstráni cez potrubie 20 a zmes metanolu a extraktu sa potom vedie cez potrubie 22 do sušiaceho stupňa 24. V sušiacom stupni 24 sa odstráni rozpúšťadlo, napríklad odparovaním na rotačnej odparke.
Sušený, čiastočne čistený aktívny extrakt sa vedie cez potrubie 26 a za pridania metanolu cez potrubie 28 do roztokového stupňa rozpustená frakcia sa vedie cez potrubie 36 do chromatografickej kolóny 38.
V kolóne 38 sa metariolová rozpustná frakcia ďalej frakcionuje pri použití silikagélu a rozpúšťadla chloroform/30% metanol. na rôzne frakcie, schematicky označené I až IV. Podľa aktuálneho postupu frakcionácie uskutočňovaného prihlasovateľom, frakcioriačným postupom sa dosiahli nasledujúce hmotnosti jednotlivých frakcii: I (3,9 g); II (2.6 g); III (2,1 g); IV (1,1 g) a V (2.0 g). Tieto frakcie sú individuálne hodnotené vhodnými biologickým skúškami (v stupni sa neuvádzajú) a frakcie identifikované ako frakcie I a II vykazujúce značnú aktivitu znižujúcu chuť do jedla, sú vedené cez potrubie 40 a 42 do kolóna 44 a 46, kde sú ďalej frakcionované a čistené stĺpcovou chromatografiou, opäť pri použití silikagélu a systému chloroform:metanol 9:1.
Subfrakcie II(A) - (C) získané z kolóny 44 nevykazujú pri biologických skúškach znateľnú aktivitu znižujúcu chuť do jedla a môžu byť recyklované pre ďalšie chromatografické spracovanie.
Subfrakcie I(A) - (L) získané z kolóny 46 sú tiež hodnotené (skúška nie je uvedená) a v prípade subfrakcie 1(0 bola zistená značná aktivita znižujúca chuť do jedla.
Subfrakcia I(C) sa vedie potrubím 48 do kolóny 50 s cielom ďalšej frakcionácie a ďalšieho čistenia pri použití silikagélu a rozpúšťadla etylacetátu a hexánu v pomere 9:1. Z výsledných čistených frakcii bola po biologickej skúške zistená v prípade frakcie 1(0 (ii) značná aktivita znižujúca chuť do jedla.
Čistený produkt je identifikovaný spektroskopiou jadrovej magnetickej rezonancie (ako sa uvádza v tabuľkách 1 a 2 ďalej) a ide o zlúčeninu 1.
Tabuľka 1. ‘H C300.13 MHz) dáta NMR pre zlúčeninu 1 CCDC13)
Zlúčenina 1
SH/p. p .m
Atóm vodíka
JCHH)/Hz
Aglykón-3
6 •
12 11,5.4,1
17 9,3. 9,3
18 -
19 -
21 -
3* 7,1. 1,5
4* 7,1. 1,2
5’ 1,6. 1,2
Cym-ľ 9,4. 2,1
2' 4 aa 13,8. 3,7. 2,1
9· M * ax 13,8, 9,4.2,6
3' 3,7, 2,9, 2,6
4* 9,4. 2,9
5* 6,3. 9,4
6' 6,3
3'-OMe •
1 9,4. 2,1
2 13,8, 3,7. 2,1
2„aq 13/8. 9/4,2,6
3»ax 3,7. 2,9. 2,6
4 9/4, 2,9
5” 6,3. 9,4
6 β/3
3”-OMe -
Thev-ľ 7/7
7/7, 8,0
3”' 8,0. 2,9
4' 9,3. 2,9
5' 6,3. 9,3
6'·' 6,3
3'-0Me -
3,522 m 5,381 m 4,607 dd 3,157 dd 1,029 s 0,951 s 2,164 s 6,888 qq 1,806 dq 1,853 dq
4,816 dd 2/055 ddd 1/552 ddd 3,776 ddd 3,179 dd 3/821 dd 1,279 da
3/408 sd 4,730 dd 2/1 OB ddd 1,601 ddd 3/755 ddd 3,239 dd 3,898 dd 1,243 db 3,392 s*
4/273 d 3,469 dd 3/)99 dd 3,179 dd 3,351 dd 1,183 d'c 3,622 s
i.ia.e v lordom stĺpci môže byt zameniteľné '·* v každom stĺpci môže byt zameniteľné 1 týka sa atómov tigloátovej skupiny
Tabuľka 2: Relevantné 13C <75,25 MHz) n.m.r. dáta pre zlúčeninu 1 V CDClíg
Aglykónová časť Cukrová časť
Uhlík Sc/p.p.in. Uhlík Sc/p.p-ni.
1 37,04 T cym- ľ 95,84 D
2 29,44 T 2' 35,57 T
3 77,24 D 3' 77,05 D
4 38,62 T 4' 82,57 D
5 138,95 S 5' 68,48 0
6 131,90 D 6' 18,14 Q
7 27y30T 3'-0Me 57,93 Q
8 35,30 D 1 99,54 D
S 43,04 D 2» 35,17 T
10 37,22 S 3 76,99 D
11 26,04 T 4*' 82,52 D
12 75,88 D 5 68,30 D
13 53,71 S 6'' 18,36 Q
14 85,69 S 3-0Me 57,09 Q
15 34,36 T Thev- ľ 104,28 D
16 24,31 T 74,62 0
17 57,18 D 3· 85,30 D
18 9,85 Q 4' 74,62 D
19 19,27 Q 5' 71,62 D
20 216,85 S 6' 17,75 Q
21 33,01 Q 3'-OMe 60,60 Q
• 1 167,60 S
2’ 128,69 D
3’ 137,66 D
4* 14,41 Q
5* 12,08 Q
** týka sa atómov tigloátovej skupiny
Zlúčenina 1
IR dáta: 3440 cm“1 COH). 2910 cm“1 CCH), Ccí]2O5B9 = 12, 67 ° C c = 3. CHC13) teplota topenia 147-152 °C.
1700 cm1 <C=0)
Príklady 4 až 13 ilustrujú syntetické postupy, zatiaľ Co medziproduktové zlúCeniny a steroid 15 sa môžu pripraviť podľa prvého alternatívneho postupu.
Príklad 4
12c\, 15<*-Dlhydroxyprogesterón 17
Kultúry Calonectria decora (ATCC 14767) sa pripravia oCkovanlm kultúrneho média zahrnujúceho sacharózu (90 g), Κ^ΗΡίΙη ¢30 g), Czapekov koncentrát C300 ml), nápoj z namoCenej kukurice C300 ml) a destilovanú vodu ¢30 1) ¢150 x 500 ml nádoby). Po 5 dňoch pretrepávania pri 26 C,C sa do nádob pridá progesterón 16 ¢150 g) v suspenzii. Tween 80 ¢0. IX roztok, 1,5 1). Kultúry sa lnkukiujú ďalších 5 dní a spracujú sa odstredením, dekantáciou, extrakciou média s chloroformom a odparením sa získa dihydroxyprogesterón 17 ¢17,5 g, 45 X).
11I NMR ¢0001^): 5,7.1. <1H, s, H-4); 4,12-4,22 <1H. m, H-15) ; 4,43 CLH. br, s, OH); 3.46-3,53 U.H, dd. J - 4,6 Hz, H-12) ; 2,16 ¢3^ s. H-21); 1, 18 ¢3^ s. H-19); 0,74 ¢311, s, H-18)
Príklad 5
12B-Hyäroxy-15cí^ p-toluénsulforiyl) progesterón ¢ 18)
Dihydroxyprogesterón 17 ¢75 g, 0,22 mol) sa rozpusti v suchom pyridíne ¢300 ml) a ochladí sa ria 0 e,C. Potom sa po kvapkách pridá pri 0 °C k reakčnej zmesi p-toluénsulfonylchlorid ¢46 g, 0,24 mol) v suchom pyridíne ¢200 ml). ReakCná zmes sa mieša cez noc pri teplote 0 °C a ochladí sa pridaním Ha0 ¢ 500 ml). Vodná vrstva a extrahuje etylacetátom ¢1 1) a organický extrakt sa premyje kyselinou chlorovodíkovou ¢6M, 3x11), vodným nasýteným hydrogeriuhllCitanom sodný ¢500 ml), vodným chloridom sodným ¢500 ml) a vodou ¢500 ml). Organická vrstva sa suší, filtruje a odparení sa získa p-toluénsulfónovaný progesterón 18 ¢98 g, 92 X) ako viskózny tmavožltý olej.
XH NI*IR <CDC13): 7. 7 <21-1. d. J = 14Hz. H-2, 6) ; 7,34 <2H. d. J -
8,4 Hz, H -3, 5) ; 5 , 67 < 1H, s, H-4) j 4,86-4,93 <1H, m, 1H-15);
3. 45-3, 50 < 1H, dd, J = 4, 6 Hz, H-12); 2.44 <3H, s, H-4l*le) 2, 15
<3H, s, H-21), 1, 13 < 3H, s. H-19) ; 0,74 <3H, s, H-18)
Príklad 6
12a-Hvdroxv-/\1^-progesterón 19
Roztok tosylovaného progesterónu 18 <98 g, 0,19 mol) v
2, 4, 6-trimetylkol:.Ldíne C 500 ml) sa zahrieva pri spätnom toku pri 150 °C počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladí a vleje sa do vody <500 ml) . Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom <1. 1) a organická vrstva sa premyje kyselinou chlorovodíkovou <61*1 3 x 1 1), vodným nasýteným hydrogenuhllčltanom sodným <500 ml), vodným nasýteným roztokom chloridu sodného <500 ml) a vodou. Po sušení <l*lgSCU) sa filtruje, etylacetát sa odparí a surová zmes sa čistí chromatografiou na silikagéle, eluovaním zmesou acetónu a chloroformu <1:10) a získa sa /\l4~progesterón 19 <50 g, 78 %) ak tmavý červený olej.
AH NI*IR <CDC13)» 5,73 < 1H. s. H-4), 5,28 < 1H. dd. J -2,2 Hz, H-15), 4,41 <1H, br, s, OH), 3,49-3,52 <1H, dd. J = 4,3 Hz, H-12), 2,80-2,84 < 1H, dd, J - 9,2 Hz, H-17), 2,14 <3h, s. H-21),
1,19 <3H, s. H—19). 0.89 <3H. s, H-18)
Príklad 7
3,12a-Diacetoxypregna-3, 5,14-trien-20-ón 20
Roztok /\1^-progesterónu 19 <50 g, 0.15 mol) v acetylchloride <1,5 1) a acetanhydrlde <750 ml) sa zahrieva pri spätnom toku 2 hodiny. Reakčná zmes sa vleje do suchého etylacetátu <1 1) a pridá sa vodný nasýtený hydrogenuhličitan sodný, dokiaľ roztok šumí. Etylacetátová vrstva sa oddelí od vrstvy hydrogenuhličitanu sodného a premýva sa ďalšou časťou vodného hydrogénuhličitanu sodného <3 x 700 ml) a potom nasýteným chloridom sodným <700 ml) a napokon vodou <700 ml). Organická vrstva sa suší <ľlgSCU), filtruje a odparením sa získa
3, 12e-d±acetoxypregna~3,5. 14-tr±en-20-ón 20 <60 g, oranžový olej.
X) ako XH NľlR <0001,5)! 5.68 <1H. s. H-14). 5.44 <1H, dd, J = 2.2Hz, H-15), 4,82-4.86 <lh, dd,
3,10-3.18 <1H, t. J = 9,5Hz. H-17), 2,18 <3H. o, 12-Ac:), 2,08 <3H, s. H-21), 1,02 <3H, s.
m, H-tí), 5, J - 4.5Hz, s, 3-Ac). 2 H-19), 1,01 <1H, H-1.2), <3h. <3H, s,
H-18)
Príklad 8
3, 12e-D±acetoxy-20, 20-ety].éndloxypregna-3, 5, 14- trlén 21
Diacetoxyiová zlúčenina 20 <60 g, IJ, 14 mol) sa rozpustí v benzéne <1 1) a etylériglykole <60 ml) a pridá sa p-toluénsulfúnová kyselina <1 g). <Benzén sa pred tým zahrieva pri spätnom toku v Dean--Starkovam zachytávači) . Zmes sa zahrieva pri spätnom toku pri miešaní a azeotropicky sa odstraňuje voda lEi hodín. K nehladenému roztoku sa pridá vodný nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného <500 ml). Roztok sa premyje soľankou <500 ml) a vodou <500 ml) a suší sa <ľlgSCU) . Rozpúšťadlo sa odparí a surová zmes sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle, eluuje sa zmesou etylacetátu a hexánu <2s8) a získa sa etyléndioxypregna-3, 5, 14-tri.én 21 <35 g, 53 X).
*H NľlR <CDC1^)S 5,68 <1H. s. H-4), 5,45 <1H, dd, J = 2, 2Hz, H-15), 4.73-4,85 <1H, dd, 3.78-3,98 <4h, m. etyléridioxy), 2,16 <3H. s,
12-Ac). 1.29 <3H. s. H-21). 1,12 <3H, s, m, H—6), 5, J = 4, 4Hz, 3-Ac), 2,04
H-19). 1,02 <1H, H-12), <3H, s, <3H, s.
H-18)
Príklad 9
3e. 12e-Dlhydroxy-20, 20-etyléndioxypregna-5, 14-dién-12-acetát 22
Dlenolát 21 (35 g, 0,077 mul) sa suspenduje v etanole (500 ml) a prd. 0 C,C sa pridá borohydrid sodný (2,0 g, 0,074 mol). Zmes sa nechá ohriať na teplotu miestnosti a m:i eša sa cez noc. Väčšina rozpúšťadla sa odstráni vo vákuu a zmes sa zriedi vodou (50Π ml) a extrahuje sa s etylacetátom (500 ml). Nasleduje chromátografla na silikagéle zmesou acetónu a chloroformu (1*10) a získa sa 3e-alkohol 22 (25 g. 80 %).
lH NMR (CDC1,)« 5.41 (1H, m, H-6), 5,20 (1H, dd, J = 2, 2Hz,
H-15), 4,72-4,81 (1H, dd, J - 4, 4Hz, H-12), 3,82-4,02 (4H. m, etyléndioxy), 3.45-3,50 (1H, m, H-3), 2,03 (3H, s, 12-Ac), 1.28 (3H, s, H-21). 1,10 (3H, s, H-19), 1,01 (3H, s, H-18)
Príklad 10
3b, 12ft-Dihydroxy-20, 20-eLyléndloxypregna-5. 14-dién 23
3e-alkohol 22 (25 g, 60,2 inmoľl) v suchom tetrahydrof uráne (300 ml) sa pridá po kvapkách k suspenzii J.ítiumalumíniumhydridu (2,7 g, 72,2 mmol) v suchom tetrahydrof ur áne (500 ml.). Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 24 hodín a pridá sa opatrne voda (2,7 ml) a zmes sa mieša ďalších 10 minút. Potom sa pridá hydroxid sodný (15% roztok 2,7 ml) a suspenzia sa mieša. Po 10 minútach sa pridá voda (8,1 ml.) a suspenzia sa mieša 10 minút, filtruje sa, suší (MgStU) a rozpúšťadlo sa odparí a získa sa 3a, 12a-dihydroxypregnadiéri 23 (20 g, 90 %) .
AH NMR (CDC13)í 5,36 (1H, m. H-6), 5.23 (1H, dd, J - 2. 2Hz,
H-15), 3,94-4,06 (4H, m, etyléndioxy), 3,41-3,52 (1H, m, H-3),
3,31-3,36 (1H, dd, J = 4. 3Hz, H-12), 1,31 (3H, s. H), 1,01 (3H, s, H-19), 0,96 (3H, s, H-18) iaC NMR (CDC13): 152.4 (C-14). 140.2 (C-5), 121.1 (C-15), 119,7 (C-6), 111.1 (C-20), 79.8 (C-12). 71.6 (C-3), 63,7 a 63,6 (etyléndioxy). 58,8 (C-17), 19.0 (C-19), 11,9 (C-18)
3b,12e-Dihydroxy-14, 15-epoxy-20, 20-etyléndioxypregn-5-én
3β, 12B-DihydrOxy-'5, 6-epoxy-20, 20-etyléndioxypregn-14-én
N-Brómacetamid C 211 ing, 1,5 mmol) sa pridá pri 0 °C k miešanému roztoku 5, 4-diénu 23 ¢500 mg, 1,34 mmol) v acetóne ¢100 ml), kyseline octovej ¢2.5 ml) a vode ¢5 ml). Po 15 minútach sa k reakčnej zmesi pridá slričitari sodný :5Z roztok, 50 ml). Acetón sa odparí a vodná vrstva sa extrahuje dichlórmetánom ¢3 x 50 ml). Organická vrstva sa suší CNgSlj^), filtruje a odparí. K produktu sa pridá pyridín ¢1 ml) a zines sa mieša 0,5 hodiny. Potom sa pridá k reakčnej zmesi dichlórmetán ¢100 ml) a dichlórmetán sa premyje kyselinou citrónovou ¢5% roztok, 3 x 100 ml), nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného ¢50 ml) a vodou ¢50 ml). Organická vrstva sa suší ^gSO4), filtruje a odparením sa získa zmes 14,15- a 5,6-epoxidov ¢360 mg, 69 Z) ako biela pena. Zmes epoxidov sa nemôže oddeliť stĺpcovou chromatografiou.
Príklad II
3&, 12e-Dihydr oxy-14, 15-epoxy--20, 20-etyléndioxypregn-5-én 24
Zmes 14, 15- a 5, 6-epoxidov ¢ 14, 4 g, 37, 0 tetrahydrofuráne ¢200 ml) sa pridá k lítiumalumíniumhydridu ¢1,69 g, 44.4 mmol) tetrahydrofuráne ¢300 ml). Reakčná zmes miestnosti 24 hodín a potom pridaním vody ¢1,69 ml) a mmol) v suchom suspenzii v suchom pri teplote sa spracuje, ako je popísané vyššie, hydroxidu sodného ¢15^ roztok, 1,69 ml). Po filtrácii a odparení rozpúšťadla sa surový produkt čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle pri použití zmesi metanolu a chloroformu 1:9 ako rozpúšťadla a získa sa nezreagovariý 14, 15-epoxy-20, 20-etyléndioxypregn-5-én 24 C 300 mg, 2, 1 Z) .
lH NMR ¢00013): 5,31 ¢11-1. m. H-6). 3,82-3.98 ¢48. m.
etyléndioxy), 3,43-3,52 <1H, m, H-3), 3,41 ¢18, s. H-15).
3.31-3,35 ¢18. dd. J = 4, 3 Hz, H-12), 1,29 ¢38, s, H-21). 1.17 (3Η, s, Η-19), 1,02 (3Η. s, H-18).
ι-Ί: NPIR <CDC1S). 139,8 (C-5), 120,8 (C-6), 112,1 (C-20), 77,2 (C-12), 75,4 (C—14), 61,0 (C-15), 22,3 (C-21), 19,2 (C-19), 9,5 (C-18)
Príklad 12
3b,12b,14e-Trihydroxy-20. 20-etyléndioxypregn-5-én 25
14, 15-epoxid 24 (300 mg, 0,77 mmol) v suchom tetrahydrofuráne (10 ml) sa pridá k suspenzii litiumalumíriiumhydridu (300 mg, 7,89 mmol) v tetrahydrofuráne a reakCná zmes sa zahrieva pri spätnom toku 48 hodín. Po pridaní vody (3 ml), hydroxidu sodného (15% roztok, 0,3 ml) a filtrácii, ako je popísané vyššie, sa zmes Čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle pri použití zmesi metanolu a chloroformu (1.9) ako rozpúšťadla a získa sa trihydroxypregnén 25 (250 mg, 83 %) .
Ή NI*IR (CDCls) s 5,38 (1H, m, H-6), 3,98 (4H, m, etylén. Jioxy),
3,43-3,53 (1H, m, H-3), 3,25-3,32 CIH, dd, J = 4, 1Hz, H-12), 1,32 (3H, s. H-21), 1,01 (3H, s, H-.1..9). 0,98 (3H, s, H-18) ,3C NI*IR (CDCls) s 139, J. (C-5). 122.1 (C-6), 112,2 (C-20, 85,1 (C-14), 75.1 (C-12). 71,6 (C-3), 23,4 (C-21), 19.4 (C-19). 8,9 (C-18)
Príklad 13
3b, 12b, 14B-TrlhydrOxypregri-5-én 15
Etyléndioxypregnén 25 (250 mg, 0,64 mmol) sa rozpustí v kyseline octovej (13,4 ml) a vode a po vymrazeni sa získa tríhydroxysteroid 15 (200 mg, 89 X), s teplotou topenia 228 °C až 235 °C, 1*1+ 348, C + 35° (lit. Ľ od“0 + 29°).
XH NľlR (CDCls)* 5.39 (1H, m, H-6), 3,56-3,62 (1H, t, J - 8, 1 Hz,
3, 28-3, 29 ( 1Η, dd, J = 4, 3Hz,
3H. s, H-19), 0,90 (3H, s, H-18)
H-17), H-1.2), 2 3.42-3.51 (1H, m.. H-3), 23 (3H, s, H-21), 1,01 (
l-’C NI*IR (CDCla): 217,7 (C-20),
(C-14), 73,6 (0-12). 71, 6 (0-3),
(0-9), 42,1 (0-4), 37,3 1 (C-l).
(0-15), 32,9 (C-21), 31, 5 (C-16)
(C-ll). 19,4 (C-19), 8,3 (C-18)
138, £ 1 (0-5), 122. 2 (0-6), 85, 5
57, 0 (0-17), 55. 1 (0-13), 43, 6
36, 8 (0-10). 35, 9 (0-8), 34, 5
, 30, 1 (C-2). 27, 4 (0-7), 24. 4
Príklady 14 až 19 ilustrujú syntetické postupy, kde sa medziproduktové zlúčeniny a steroid 15 môžu pripraviť podľa druhého alternatívneho postupu.
Príklad 14
20, 20-Etyléridioxy-3a-toluén-p-sulf onyloxypr egna-5, 1 4-dién-12e-ol acebáb 26
Zmes p-toluérisulfonylcliloridu (650 mg, 3, 4 mmol) v pyridíne (10 ml) sa pridá po kvapkách pri. teplote ľl °C k zmesí 20, 20-etyl éndioxypregria-5, 1.4-dién-3a, 12a-diol 12-acetátu 22 (1,3 g, 3,1 mmol) v pyridíne (15 ml). Reakčná zmes sa nechá stáť pri teplote miestností 24 hodín a potom sa pridá k reakčnej zmesi voda. Roztok sa extrahuje etylacetátom (2 x 50 ml), etylacetátová vrstva sa premyje kyselinou citrónovou (5 x 50 ml), nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (100 ml), nasýteným roztokom chloridu sodného (100 ml) a vodou (100 ml). Etylacetátová vrstva sa suší (ľlgSCl*), filtruje sa a po odparení a čistení bleskovou chromatograf iou pri. použití zmesi hexánu a etylacetátu (8:2, objem./objem.) ako eluaritu sa získa β-0-tosylsteroid 26 (1,5 g, 84 X), ako žltý olej (zistené 1*1 570,271, C32H4=.O7S vyžaduje: 1*1
570. 273) .
6h 1.021 (3H, s. 19-H), 1,131 (3H, s, 18-H), 1,282 (3H, s, 21-H), 2,021 (acetátOCHa), 2,431 (3H, s, Ar-CH3). 3.883 (4H, m. OCHaCHaO). 4,750 (1H. dd, β J 10,8 Hz. 5, 2Hz, lľ-H), 4,890 (1H, m, 30H). 5.281 (1H. dd 3 J 4, 2 Hz. 2,1 Hz. 15-H). 5,388 (1H, m.
6-Η), 7,341 (2Η, d, 3 J 8,2 Hz, ArH), 7,746 (2H, d, J 8, 2 Hz, ArH) .
6C 13. 4390 (C-18), 19, 0020 CC-19). 21. 6120 ( Ar-metyl) **, 21,6710 (C-21)**. 24, 1750 (metylacetát), 63, 4U1T (etyléndioxy), 63, 498T (etyléndioxy), 71. 531.S (C-13), 80, 912D (C-12), 82, 531.D (C-3),
111, 363S C C-20). 120, 881D C C-15), 12 L, 461 C C-6). 123. 715-133, 917 (aromatický), 139,903S (C-4), 151, 722S (C-5), 170. 819S ( karbonylester)
Príklad 15
20, 20-Etyléndioxy-3rt, 5-cyklo-5o£-pr egn-4-én-6e, 12B-di.ol-12-acetát 27
Roztok 3iä-taluén-p-sulťonyloxypregn-5, 14-dlénu 26 C 1,2 g, 2,1 ininol) a octanu draselného (2,2 g. 22.4 mmol) uo vode (250 ml) a acetónu (500 ml) sa zahrieva pri spätnom toku na 60 °C poóas 16 hodín. Acetón sa odparí a voda sa extrahuje etylacetátom (200 m'l). Etylacetát sa suší (ľlgSCU), filtruje a odparí. Bleskovou chromátografickou separáciou zmesi pri. použití zmesi chloroformu a acetónu (9:1 objem./objem.), ako eluenta, sa získa 3oí, 5—cykloderivát 27 (530 mg, 61 %), ako žltý olej (zistené 1*1
461, 262, 0^ε;Η^αΟ^ vyžaduje: ΙΊ 416,263).
6h 0,288 (1H. dd, * J 8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-Ha). 0,477 (1H, dd, * J
4.4 Hz. 4.4 Hz, 4-Ht,), 1,025 (3H. s, 19-H). 1,121 (3H, s, 18-H),
1,256 (3H, s, 21-H), 1,989 (3H, s, acetát-CH,). 3,02 (1H, dd, 3 J 2,8 Hz. 6-H), 3,784-3,947 (4H, m, UCHaCHa0). 4.721 (1H. dd, 3 J
8.5 Hz, 5.6 Hz, 12-H), 5,232 (1H, dd 3 J 3,9 Hz, 1,9 Hz, 15-H) .
6C 11,678T (C-4), 1.2,2980 (C-18), 19,9710 (C-19). 23.6230 (C-21). 24,1530 (metylacetát), 63, 700T (etyléndioxy), 63, 788T (etyléndioxy). 73. 591D (C-6). 80. 551D (C-12), 111, 126S (C-20),
118, 778D (C-15), 152. 959S (C-14), 170, 991S (karbonylester)
Príklad 16
20, 20-Etyléndioxy-3rt, 5-cyklo-5cŕ-pregri-14—éri-6e, 12o-diol 28
Roztok 3oŕ, 5-cykloderlvátu 27 (500 mg, 1, 2 mmol) v tetrahydrofuráne (20 ml) sa pridá po kvapkách k suspenzii lítiumalumínlumhydrldu (50 mg, 1,3 mmol) v tetrahydrofuráne (10 ml). Reakčná zmes sa mieša 4 hodiny a potom sa ochladí pridaním vody (50 ul). Po 30 minútach sa pridá hydroxid sodný (15% roztok, 50 ul) a miešanie pokračuje ďalších 30 minút. Pridá sa voda (150 ul) a reakčná zmes sa filtruje. Tetrahydrof urán sa suší. (MgSO^), filtruje a odparí, a čistením bleskovou chromatograf iou pri použití, chloroformu a acetónu (0s2 objem./objem.), ako eluantu, sa získa diol 29 (370 mg, 83 %), ako olej (zistené 1*1 374,250, CasHs^U* vyžaduje 1*1 374, 252) .
8h 0,208 (1H, dd, '* J 8,1, Hz, 4,0 Hz, 4-1 D). 0,510 (1H, dd, 7i J
4. 4 Hz, 4, 4Hz. 4-Hh.) , I I, HH5 ( 3H, s. 19-H), 1.1155 (3H, s, 18-H),
1,325 (3H, s, 21-14), 3, 3 1 8 (1Η, dd 3 J 3, 0 Hz. 3.0 Hz, 6-H),
3, 363 (J.H, dd. * H 11. 4 Hz. 4, 2 Hz, 12-H). 4,019 (4H, m.
OCHaCHi.0), 4,622 ( LH, s, UH), 5, 255 (1H, dd. 3 J 3, 9 Hz. 1, 9 Hz,
15-H)
6C U. 681 T (i:-4). 12, 243 (C- -18), 19, 8440 (C- 19), 23.6040 (C-21),
63, 620T ( etyléndioxy), 63, 733T ( etyléridioxy), 73. 569D ( C-6).
77, 478D (C-12), 111, 125S (0-2), 1.18, 702D (C-15). 152, 912S (C-14)
Príklad 17
20, 20-Etyléndioxy-14,15a-epoxy-3cŕ. 5-cyklo-5oí, 14a-pregnan-6a, 12e-diol 29
N-brúmacetamid (150 mg, 1,1 mmol) sa pridá pri 0 θ0 k roztoku 20, 20-etyléndioxy-3rt, 5-cyklo-5ce-pregn-14-én-6e, 12e-diolu 28 (340 mg, 0,91 mmol) v acetóne (20 ml). vode (0,25 ml). Po 15 minútach sa pridá k reakčnej zmesi siričitan sodný (5% roztok, 20 ml). Acetón sa odparí pri zníženom tlaku a zvyšný roztok sa extrahuje s dichlórmetánom (3 x 30 ml). Dlchlórinetánová vrstva sa suší CľlgSĽU). filtruje a odparí na koncentrovaný objem <50 ml). K zmesi sa pridá pyridín <0,5 ml) a zmes sa mieša ďalšiu hodinu a potom sa dlchlórinetánová vrstva premyje roztokom kyseliny citrónovej <5%, 3 x 30 ml), nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného <30 ml) a vodou <30 ml). Dlchlórinetánová vrstva sa suší CMgSCU). filtruje a odparí a Čistením bleskovou stĺpcovou chromatograf iou pri použití zmesi, chloroformu a metanolu <9. 510,5 objem./objem.), ako eluantu, sa získa epoxid 29 <180 mg, 51 %), ako pena (zistené 1*1 390,245, CH3H3402 vyžaduje: ľl 390,247).
fiH 0,287 <1H, dd, 3 J, 8,1 Hz. 4,9 Hz. 4--ΗΛ), 0,501 < 1H. 4,4 Hz. 4,4 Hz. 4-Ht,), 0,978 <3H, s. 19-H), 1,048 C3H, s.
1, 321 C3H, s, 21-H), 3,318 <1H, dd. 3 J 3 1, 1 Hz. 3, 1 Hz
3, 3FiF.i C1H, «Jd. * J 11,2 Hz, 4, 1 Hz, 12-H). 3, 491 C1H, s.
4, 001 <4H, III, OCH«CHaO), 4, 901 C 1.H, s, H)
dd, 3 J 18-H), . B-H), 15-H),
11, 688 Γ C C-4). 11,9730 ÍC-18). 19. 5.15U 59, 9L0D CC—15), 63, 601T (etyléndluxy),
72. 50.1.3 CC-14), 73,5710 <C-G), 77, 47 LD CC <C-19). 23.5190 <C-21). 63, 713T CeLyléndiuxy),
12), 111. 085S CC-20)
Príklad 18
20, 2l'J-Etyl.éndioxy-6e, 12a, 14-trihydroxy-3oí, 5-cyklo-5oí. 14a-pregnan 30
Roztok epoxidu 29 <170 mg, 0,44 mmol) v tetrahydrofuráne <10 ml) sa pridá k suspenzii, lítiumalumíniumhydridu <20 mg, 0, 53 mmol) v tetrahydrof uráne <5 ml) . ReakCriá zmes sa zahrieva pri spätnom toku 2 hodiny a pridá sa voda <20 ul) a miešanie pokraCuje 0,5 hodiny. Pridá sa roztok hydroxidu sodného <15%, 20 ul) a miešanie pokračuje ďalšiu polhodinu. Pridá sa ďalšie množstvo vody <60 ul) a suspenzia sa mieša 1 hodinu. Po filtrácii sa suspenzia suší <ľlgSO4), filtruje a tetrahydrofurán sa odparí. Bleskovým chromatograflckým rozdelením vzniknutej zmesi eluovaním zmesou chloroformu a metanolu (9:1 objem./objem.) sa získa vyžadovaný triol 30 <90 mg, 53 %), ako číry olej. (Zistené 1*1
392,261, CaaHseOs vyžaduje.· ľl 392.263).
6h Π. 287 <1H, dd, 3 J 8,1 Hz, 4,9 Hz, 4-Ha), 0,510 <1H, dd 3 J 4.4 Hz, 4.4 Hz, 4-Hfa), 0,971 <3H, s, 19-H), 1,042 <3H, s, 18-H), 1,319 <3H, s, 21-H), 3,321 <1H. dd. 3 J 3, O Hz, 3.0 Hz, 6-H), 3,321 <1H, dd, 3 J 11,1 Hz. 3,9 Hz, 12-H), 3,561 <1H, s, OH),
4,084 <4H, in. OCHaCHaO). 4,761 <1H, s, OH)
6C 11,6681 <C-4), 11,9710 CC-18). 19,5110 CC-19), 23,5200 CC-21), 63, 612T <etyléndioxy). 63,711T Cetyléndicixy), 73,4830 <Ľ-6).
76, 051D <C-'12), 84,3075 CC-14). 111,0995 CC-20)
Príklad 19
3a, 12a, 14-Trlhydroxy-14a-pregn-5-en-2U-ón 15
Zmes triolu 30 <80 mg, 0. 20 mmol) v acetóne <20 ml) a kyseline chlorovodíkovej <11*1. 10 ml) sa zahrieva pri spätnom toku pri 60 °C počas 2 hodín. Reakčná zmes sa oddelí a pridá sa nasýtený roztok hydrogénuhličitanu sodného <20 ml). Acetón sa odparí a vodná vrstva sa extrahuje s chloroformom <3 x 20 ml), chloroformová vrstva sa suší <l*lgS04), filtruje a odparí a získajú sa eplmérne trihydroxysteroidy <15a, 15b) <42 mg, 61%). Separácia epiinérnej zmesi 15a, 15b <15 mg) sa uskutoční chromatografickou separáciou pri použití zmesi chloroformu a metanolu <9sl objem./objem.), ako eluenta, sa získa čistý 17a-epimér C 15a) <10 mg), s teplotou topenia 224 až 229 °C <acetón), <lit. 226-223 °C), <zistené 1*1 348,234, C 72,32, H 9. 21 % CaiH3aO^ vyžaduje C,
72,38, H 9,26 %, 1*1 348,236) a 17oŕ-epimér 15b <3 mg), s teplotou topenia 183-191 °C <acetón, <lit. 814 až 196 °C).
3a. 12a. 14-Trihydroxy-14a-pregn-5-en-20-óri 15a s
6h 0,963 <1H, s, 19-H). 1.192 <3H. s. 18-H). 2.236 <3H. s, 21-H), 3,325 <1H. dd, 3 J 11.2 Hz. 3.9 Hz. 12-H). 3.464 <1H. s, OH),
3,5140 <1H. m, 3-H). 3,598 <1H. dd, 3 J 9. 6 Hz, 9.6 Hz, 17-H), 4.255 <1H, s, OH). 5.383 <1H, m, 5-H)
6α 8,2750 (Ľ-18). 19,4140 (C-19), 24, 400T (C-ll). 24, 581T (C-16).
27,443 (C-7). 30, 062T (C-2). 32.9720 (Ľ-21), 34, 543T (C-15),
35. 864D (C-R). 36,9755 (C-10). 37, 337T <C-1>, 42. 144T (C-4),
43, 565D (C-9), 55,1015 (C-13), 57.0380 (C-17). 71. 597D (C-3),
73, 558D (C-12), 85.5665 (C-14), 122, 223D (C-6), 138,9325 (6-5),
217,0115 (C-20)
3e, 12b, 14-Trihydroxy-14e-pregn-5-en-20-ún 15b *
6K 0,996 (IH, s, 19—H), 1,144 (3H, s, 18-H), 2,221. (3H. s, 21-H), 3,339 (IH, dd, 3 J 9,4 Hz. 9.4 Hz, 17-H), 3,492 (IH. in, 3-H), 3,629 (IH, dd, 3 J 11,1 Hz, 3,9 Hz, :12-H), 3,712 (11-1, s, OH), 4.325 (IH, s, OH), 5,383 (IH, πι, 5-H)
Príklady 20 až 28 Ilustrujú postupy, pomocou ktorých sa môžu pripraviť medziproduktové zlúčeniny s cieľom prípravy monosaeharidu 40.
Príklad 20 l*letyl-4. 6-0 --benzylidén-cŕ-D-glukopyranozid 32
Zmes metyl-rt-D-glukopyranozidu (30 g, U, 15 mol), benzaldehydu (70 ml) a chloridu zinočnatého (20 g) sa mieša pri teplote miestnosti 24 hodín. Reakčný produkt sa vleje do vody a miešanie pokračuje 15 minút. Biela zrazenina sa filtruje a premyje sa dietyléterom. Pevná látka sa mieša s roztokom metasiričitanu sodného (10X roztok) počas 15 minút, filtruje sa a premyje sa vodou. Pevný materiál sa kryštalizuje z chloroformu a éteru a získa sa berizylidénový produkt 32 (31 g, 72 X) .
Príklad 21 l*letyl-4. 6-0-benzylidén-2-0-tosyl-rt-D-glukopyranozid 33
P-Toluérisulfonylchlorld (25 g, 1,2 ekv.) v pyridíne (100 ml) sa pridá po kvapkách pri teplote 0 °Ľ k roztoku berizylidénglukózy 32 <31 g, 0,12 mol) v pyrldine <100 ml). Reakčná zmes a mieša pri teplote miestnosti 48 hodín a potom sa pridá k reakčnej zmesi ľad. Vzniknutý biely pevný materiál sa premyje vodou a rekryštalizuje sa z horúceho etanolu a získa sa tosylovaná glukóza 33 <28 g, 60 X).
Príklad 22
Metyl-4, 6-0-benzylidén-3-0-metyl-oí-D-altropyranozid 34
Tosylát 33 <28 g. 64 inmol) sa zahrieva v roztoku sodika <7 g) v metanole <150 ml) na teplotu 110 °C počas 48 hodín v autokláve. Reakčná nádobka sa ochladí a k reakčnej zmesi sa pridá pevný oxid uhličitý. Po filtrácii sa metanol odparí a pevný materiál sa prevedie od vody. Vodná vrstva sa extrahuje chloroformom <3x). Chloroform sa suší (MgSl'U), filtruje a odparí. Surová zmes sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle eluovaním zmesou chloroformu a acetónu <9s J.) a získa sa altrozid 34 <10 g, 52 X) .
Príklad 23
Mety l.-6-bróm-4-0-benzoyl-3-CJ-nietyl-6-denxy-oí~D-altrnpyranozid 35
Berizylidénaltrozid 34 <10 g, 33 mmol) sa pridá k roztoku N-brómsukeíni.midu <7,6 g) a uhličitanu bárnatého <20 g) v chloride uhličitom a reakčná zmes sa zahrieva pri spätnom toku na 75 °C počas 3 hodín. Reakčná zmes sa filtruje a tetrachlóruhličitová vrstva sa premyje vodou. Organická vrstva sa suší <MgSO4), filtruje a odparením sa získa 6-bróm-altrozld 35 <9 g, 69 X) .
Príklad 24
Metyl-4-0-benzoyl-3-0-metyl-6-deoxy~cŕ-D-altropyranozid 36
Borohydrld sodný ¢18 g) vo vode <30 ml) sa pridá po kvapkách pri teplote 0 °C k roztoku brómaltrozidu 35 <9 g, 23 mmol) a chloridu nlkelnatému C 1.8 g) v etanole <300 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri teplote spätného toku na 75 °C počas 1 hodiny a potom sa filtruje. Etanol sa odparí a zvyšná vodná vrstva sa extrahuje chloroformom <3x). Chloroform sa suší <MgS('U). filtruje a odparí a získa sa 6-deoxyaltrozid 36 <5 g. 72 X).
Príklad 25
4-fl-Benzoy 1-3-0-metyI-6-deoxy-oe-D-fenyltioaltropyranozid 37 fenyltiotrimetylsilán <5 ml) a trímetylsilyltrifluórmetánsulfonát <2 ml) sa pridajú pri Π °Ľ k roztoku 6-deoxyaltrozidu 36 <5 g. 1.7 mmol) v dichlórmetáne <200 ml) . Reakčná zmes sa mieša pri teplote miestnosti 6 hodín. Potom sa pridá k reakčnej zmesi nasýtený hydrogenuhličitan sodný. Dichlórmetánová vrstva sa suší CMgS(U), f Litruje a odparí. Surová zmes sa čistí stĺpcovou chromatografiou ria silikagéle eluovanim zmesou chloroformu a acetónu ¢9.-1) a získa sa cts-fenyltloaltrozid 37 <4 g, 63 X).
PrikLad 26
4-l'l-lienzoyl-3-0-metyl-2-fenyltlo-2. 6-dideoxy-c®-D-fluorocymaropyranozid 38
Dletylaminosulfurtrlfluorid <0,65 g) sa pridá rýchlo pri 0 C‘C k roztoku ata-fenyltloaltrozldu 37 <0,5 g, 1,33 mmol) v dichlórmetáne. Reakčná zmes sa mieša 0,5 hodiny pri 0 °C a potom sa pridá nasýtený hydrogenuhličitan sodný. Dichlórmetán sa oddelí od vodnej vrstvy, súši sa <l*lgSO^). filtruje sa a odparí a získa sa ďG-fluórcymaróza 38 < 450 mg, 90 X).
Príklad 27
4-0-Berizoyl-3-0-mety 1-2-0-terc. butyldimetylsilyl-cťB-D-fenyltioaltrozid 39
Κ6
6-Deoxyaltrozid 37 C5 g) sa silyluje použitím terc.butyldimetylsilylchloridu (3 g) a imidazolu ¢3 g) v pyrídíne C50 ml). Reakcia sa spracuje extrakciou s etylacetátom, premyje sa etylacetátom s kyselinou chlorovodíkovou C 6 IM), potom hydrogénuhličitan sodným a napokon vodou. Etylacetátová vrstva sa suší CMgSCU), filtruje sa a odparí a získa sa silylovaný benzoylfenyltloaltrozid 39 ¢80 %).
Príklad 28
3--0--inetyl-2-0-terc. butyldimetylsilyl-oŕe-D-feriyltioaltrozid 40
Silylovaný benzoylfenyltloaltrozid 39 <6 g) sa spracuje met oxidom sodným C100 ml) počas 4 hodín, ľletanol sa odparí a k reakčnej zmesi sa pridá voda. Vodná vrsLva sa akyslí C pH 5, AcOH) a extrahuje sa etylacetátom. Etylacetátová vrsLva sa premyje vodou, suší. sa CľlgSĽU), filtruje a odparí, a získa sa silylovaný metylfenyltioaltrozid 40 ¢75 %) .
Príklady 29 až 37 Ilustrujú postupy, pomocou ktorých sa môžu pripraviť medzíproduktové zlúčeniny s cieľom prípravy druhého monosacharldu 50.
Príklad 29
1, 2 .· 5, 6-Di-0-izopropylidén-4-oí- D-glukof uranóza 42
Kyselina sírová ¢40 ml) sa pridá po kvapkách pri 0 °C k roztoku oŕ-D-glukózy 41 ¢50 mg, 0,28 mol) v acetóne ¢1 1). Reakčná zmes sa mieša 24 hodín a potom sa neutralizuje pri použití hydroxidu sodného ¢6 1*1) . Acetón sa odparí a vodná vrstva sa extrahuje s chloroformom ¢2x) . Chloroform sa suší CMgSLU), filtruje a odparí. Kryštalizáciou z cyklohexánu sa získa diizopropylidénglukóza 42 ¢ 41 g. 57 %).
G7
Príklad 30
1. 2 s 5, 6-D±-0-izoprOpylidén-3-0-metyl-4--tf-D-glukafuranóza 43 ed-D-glukofuranóza 42 (41 g. 0.16 mol) v tetrahydrofuráne <300 ml) sa pridá po kvapkách k suspenzii hydridu sodného <5 g) v tetrahydrofuráne <200 ml). Po 0.5 hodine sa pridá k reakčnej zmesi metyljodid (25 g) v tetrahydrofuráne <100 ml) a reakčná zmes sa mieša 24 hodín. K reakčnej zmesi sa pridá voda a zmes sa extrahuje éterom (3x). Éterová vrstva sa suší (MgSCU). filtruje a odparí sa a získa sa metylchránená glukóza 43 <38 g, 83 %).
Príklad 31
3-fJ-Metyl-ceB-D-g'lukopyranozid 44
Metyldiizopropylidénová zlúčenina 43 <38 g, U. 14 mo'L) sa rozpustí v kyseline octovej <50%. 700 ml) a roztok sa zahrieva pri spätnom toku 18 hodín. Po ochLadení sa odparí kyselina octová. Surový produkt sa čistí stĺpcovou chromatografiou eluovaníin zmesou chloroformu, metanolu. acetónu a vody <70s27s2sl) a získa sa 3-íl--metyI-oŕB-glukopyranazid 44 <13 g. 50 %) .
Príklad 32 l*letyl-3-tl-metyl-oía-D-glukopyranozid 45
3-0-inetyl-oíe-glukopyranozid 44 <10 g) sa rozpustí v metanole <50 ml) a koncentrovanej kyseline chlorovodíkovej (1 ml) a zahrieva sa pri spätnom toku cez noc. Pridá sa pevný NaHCO3 a reakčná zmes sa filtruje. Metanol sa odparí a získa sa 1. 3-di-0-metyl-cíB-D-glukopyranozid 45 <95 %) .
Príklad 33
Metyl-4, 6-0-benzylidén-3-0-metyl-cÉB-glukopyranozid 46
Glukopyrariozid 45 CEí g) sa mieša pri teplote miestnosti v roztoku benzaldehydu <20 ml) a chloridu zinočnatého <5 g). Po 24 hodinách sa pridá ľad a vodná vrstva sa extrahuje chloroformom. Chloroformová vrstva sa suší CMgSrk). filtruje sa a odparí. Benzaldehyd sa odstráni vákuovou destiláciou a produkt sa čisti stĺpcovou chromatografiou na silikagéle eluovaním zmesou acetónu a chloroformu <0.5 s 9. 5) a získa sa benzylídén-oŕa-glukopyranozid 46 <60 *).
Príklad 34 ľletyl-4-0-benzoyl-0-metyl-6-deoxy-cŕo-glukopyrariozid 47
Benzylidériová zlúčenina 46 <5 g) sa zahrieva pri spätnom toku pri 80 °C v zmesi N-brómsukcínimidu <3,7 g) a uhličitanu bárnatého <4 g) v chloride uhličitom. Po 4 hodinách sa reakčná zmes filtruje a chlorid uhličitý sa premyje vodou, suší sa <l*lgSľl»), filtruje a odparením sa získa brómzlúčenina <70 X'i .
Brómzlúčenina <4,3 g) sa rozpustí pri 0 r,C v roztoku etanolu <300 ml) a chloridu nikelnatého <8,6 g). K tomuto roztoku sa pridá po kvapkách počas 15 minút borohydrid sodný <8,6 g) vo vode <50 ml). Reakčná zmes sa zahrieva pri spätnom toku pri 100 °C počas 45 minút, ochladí sa, filtruje a odparí. Pridá sa chloroform a chloroformová vrstva sa premyje vodou, suší sa <ľ1gSCU), filtruje a odparí a získa sa 6-deoxycukor 47 <70 %).
Príklad 35
4-U-Benzoyl-3-0-metyl-l-fenyltio-6-deoxy-oŕa-glukopyranozid 48
6-Deoxyglukopyrariozid 47 <3 g) sa rozpustí v dichlórmetáne <50 ml). K tomuto roztoku sa pridá fenyltiotrimetylsilán <2 g) a trimetylsilyltrifluórmetánsulfonát <0,2 ml). Roztok sa mieša pri teplote miestností cez noc a potom sa pridá nasýtený hydrogénuhličitan sodný. Dichlórmetánová vrstva sa suší <MgSCU), filtruje sa a odparí. Produkt sa čisti stĺpcovou chromatografiou ria silikagéle eluovaním zmesou etylacetátu a hexánu <2s85 a získa sa zlúčenina 48 ¢60 £) .
Príklad 36
4--0-Benzoyl-3~0-metyI-2-0-pívaIoyl-'l~f enyltio-6-deoxy-cŕB--glukopyranozid 49
K roztoku glukopyranozidu 48 C2 g) v pyridíne C20 ml) sa pridá pivaloylchlorid ¢2 ml). Roztok sa mieša pri teplote miestnosti cez noc a potom sa pridá voda. Vodná vrstva sa extrahuje etylacetátom a organická vrstva sa premyje HCI ¢6 N). Organická vrstva sa suší CHgSL'U), filtruje a odparením sa získa pivaloylester 49 ¢80 .
Príklad 37
4-0-8enzoyl-3-0-metyl-2-0-pivaloyl-l-fluór-6-deoxy-e-glukopyranozid 50
N-Brómsukcínimid ¢1. 2 g) a dimetylaminosulfurtrifluorid ¢1.2 g) sa pridajú pri 0 °C k roztoku pivaloylesteru 49 ¢2 g) v dichlórmetáne ¢100 ml). Po 1 hodine sa pridá nasýtený hydrngeriuhličitan sodný. Dichlórmetáriová vrstva sa suší CMgSQ*). filtruje a odparí. a-Fluórpyranozid 50 sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle eluovaním zmesou etylacetátu a hexánu ¢2.-8) (výťažok 45 %) .
Príklad 38 ilustruje postup. pomocou ktorého sa môže pripraviť 3-0-Ľ4-0-berizoyl-2-fenyltio-e-D-cymaropyranosyl] -12, 14b -dihydroxypregnan-5-en-20-ón ¢51).
Príklad 38
3-0-Ľ 4-0-benzoyl-2-fenyltio-e-D-cymaropyranosyl]-12, 14b-dihydroxypregri-5-en-20-ón 51
Chlorid cínatý C190 mg, 1. mmol) sa pridá pri teplote -15 °C k roztoku 3,12,14e-trihydroxypregnan-5-en-20-ónu 15 C100 mg, 0,28 mmol) a fluórcymaropyranozidu 38 <210 mg, 0,56 mmol) v suchom dietyléteri a 4A molekulových sít. Reakčná zmes sa udržiava pri -15 °C počas 3 dní. K reakčnej zmesí sa pridá nasýtený hydrogeriuhlčitari sodný. Éterová vrstva sa suší CI*lgSO4), filtruje a odparí. Produkt sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle eluovaním zmesou chloroformu a metanolu C 9,5:0, 5) a získa sa glykozid 51 <30 mg, 15 Z).
Príklady 39 až 41 ilustrujú syntetické postupy, pomocou ktorých sa môžu kopulovať cymarózové a thevetozové časti.
Príklad 39
TI icvetozo-cyrnarózový disacharid 53
Roztok thevetózy 50 A <1,5 g), nymarózy 41J <1,3 g) a molekulových sít 4A v dichlórmetáne sa mieša pri teplote miestnosti počas 1. hodiny. Reakčná zmes sa ochladí na -15 °C a pridá sa chlorid cínatý <0,8 g) a trifluórmetánsulfonát str ieborný Cl, 1 g) . Zmes sa mieša pri -15 *’C počas 16 hodín a pridá sa trietylainíri <0,5 ml). Reakčná produkt sa filtruje a dichlórmetán sa odparí. Disacharid sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle eluovaním zmesou etylacetátu a hexánu C2:8), výťažok 15 Z.
Príklad 40
Thevetozo-cymarózový disacharid 54
K roztoku disacharidu 53 <200 mg) v tetrahydrofuráne <20 ml) sa pridá tetrabutylamóniumfluorid (0, 4 ml). Zmes sa mieša pri teplote miestnosti 1 hodinu a pridá sa nasýtený hydrogeriuhličitan sodný. Reakčná zmes sa extrahuje etylacetátom a etylacetátová vrstva sa suší (PlgSO<), filtruje a odparí. Disacharid 54 sa čistí stĺpcovou chromatografiou na silikagéle zmesou acetónu a chloroformu ¢0,5:9,5), výťažok 60 X.
Príklad 41
Thevetozo-cymarózový disacharid 55
K roztoku disacharidu 54 ¢80 mg) v dichlórmetáne ¢10 ml) sa pridá pri 0 °C dietylamiriosulfurtrif luorid ¢80 ul) . Zmes sa mieša pri 0 °C počas 0, 5 hodiny a pridá sa nasýtený hydrogenuhličitan sodný a viac dichlórmetánu. Dichlórmetán sa suší CngSCl»), filtruje a odparí. Čistením stĺpcovou chromatografiou na silikagéle ¢etylacetát:hexán = 1:9) sa získa disacharid 55 v 65X výťažku.
Príklad 42
Výsledky nasledujúcich biologických skúšok na zníženie chuti do jedla sú uvedené ďalej, pozri.
a) Iruiriov test;
b) Test na akútnu toxicitu; a
c) Test na anorektickú orálnu dávku.
a) Irwinov test
Úlohou tohoto testu bolo hodnotenie činidla znižujúceho chuť do jedla podlá vynálezu, získaného z rastlinného extraktu, ako je popísané vyššie podlá Iruinovho testu sledujúceho trankvilizačné a sedatívne účinky.
Experimentálny postup
Činidlo znižujúce chuť do jedla sa extrahuje z rastlinného materiálu podľa metódy popísanej vyššie a podá sa dvom zo štyroch skupín zvierat, pričom každý skupina obsahuje tri zvieratá: jedna skupina sa neošetruje, jednej skupine sa podá dimetylsulfoxid
CDľlSO), jednej skupine sa podá skúšobná vzorka v dávke 5U mg/kg a jednej skupine sa podá skúšobná vzorka v dávke 300 mg/kg. Ošetrenie sa uskutoční iritraperiLoneálne injekciou a pozorovanie sa uskutočňuje v špecifických intervaloch do piatich hodín po podaní. Pri interpretácii výsledkov sa sledujú len tie symptómy, ktoré sú irié ako boli pozorované u zvierat ošetrených ONSO.
Výsledky
Je zrejmé, že; rozpúšťadlo, DMSO, má značný účinok ria zvieratá, predovšetkým na mechanizmus regulujúci teplotu. Telesná teplota všetkých zvierat ošetrených rozpúšťadlom, samotným alebo rozpúšťadlom s testovanou vzorkou, vykázala značný pokles.
Zvieratá v skupine, ktorá bola ošetrená nižšou dávkou testovanej zlúčeniny, sa prejavovali zníženým rozptýlením v klietke a zníženou pohybovou aktivitou, ako vo všetkých ostatných skupinách, vrátane kontrolnej skupiny. Apatia bola pozorovaná na rovnakej úrovni ako v prípade skupiny ošetrované i DMSIJ. Znížené dýchanie bolo pozorované 15 až KU minút po ošetrení. Ptóza (pokles očných viečok) bol tiež pozorovaný vo väčšom stupni než v prípade skupiny ošetrenej DMSO. Reakcia na ušnici bola pozitívna, rovnako ako aj odpoveď na prst, a ukazovala bojazlivosť. Telesná teplota poklesla po ošetrení na 32,7 °C.
Zvieratá v skupine, ktorá boli ošetrené vysokou dávkou testovanej zlúčeniny, sa prejavovali začiatočným znížením rozptýlenia v klietke a zníženou pohybovou aktivitou, ale pred smrťou. ku ktorej došlo 1 hodinu po ošetrení, sa prejavovali zvýšeným rozptýlením a zvýšenou aktivitou. Po 30 minútach po ošetrení došlo k vážnym klinickým symetrickým kŕčom. Dýchanie sa na začiatku znížilo, ale zvýšilo sa pred smrťou. Reakcia na ušnici bola oneskorená, odpoveď na prst bola pozitívna a ukazovala bojazlivosť, ako bolo pozorovaná v prípade zvierat ošetrených nízkou dávkou. Telesná teplota poklesla po ošetrení na 30,7 OC. Bola pozorovaná zvýšená pozičná aktivita a takisto znížený tonus. Bola pozorovaná abnormálna rotácia končatiny, sila zovretia sa znížila. Žiadna bolestivá odpoveď a došlo k strate vzpr iainovacieho reflexu.
Diskusia
Pri porovnaní s kontrolnou vzorkou a DľlSt.1 ošetrenými zvieratami, zvieratá, ktoré boli ošetrené len nízkou dávkou <50 mg/kg) vykazujú znížené dýchanie a zvýšený stupeň ptózy. Zvieratá, ktorá obdržali vysokú dávku (300 mg/kg) testovanej vzorky reagovali veľmi intenzívne a táto reakcia sa prejavila kŕčmi a smrťou. Všetky ostatné pozorovania uskutočnené na týchto zvieratách sa pripisujú zvieratám, ktoré boli v kŕčoch a umierali. Signály naznačujúce ukľudňujúce a sedatívrie pôsobenie, ako značne znížené rozptýlenie v klietkach, zníženú pohyblivosť a apatiu v prípade testovaných skupín, ktoré by sa mohli pripísať testovanej vzorke, neboli, pozorované.
Na záver- sa môže uviesť, že testovaný vzorka je smrteľná pre myší v dávke 300 mg/kg a spôsobuje znížené dýchanie pre myši pri dávke 50 mg/kg, ak sa podá intraperitoneálne s DľlSO ako rozpúšťadlom.
b) Test na akútnu toxicitu
Úlohou tohoto testu bolo získanie informácií o toxicite vzorky.
Experimentálny postup
Rastlinný extrakt pripravený podľa vynálezu, ako je popísané vyššie, a spôsobujúci zníženie chuti do jedla sa čistí a jedna testovaná vzorka sa skúša pri zvýšenej dávke orálnym ošetrením myší. Pri skúške sa použili dve zvieratá v skupine, s tou výnimkou, že pri najvyššej dávke sa ošetrilo len jedno zviera. Zvieratá boli skúmané na dobrý zdravotný stav a ich telesné hmotnosti boli stanovené ten deň, kedy prebehlo ošetrenie.
Podané dávky ležali v rozsahu 100 mg/kg až 3028,5 mg/kg. Dávky boli stanovené a zmiešali sa so zemiakovým škrobom tak, že každé zviera dostalo celkovú dávku vo výške 0,2 ml. Zviera C. 13 dostalo 0,25 ml. Zemiakový škrob sa pripravil zmiešaním 20 g škrobu s malým množstvom studenej vody a pridala sa vriaca voda tak, aby objem bo]. 1 liter. Pred dávkovaním sa suspenzia nechala ochladiť na teplotu miestnosti.
Zvieratá v 1. a 2. skupine sa ošetrili rovnaký deň. Zvieratá bol.d pozorované 24 hodín a ak sa neobjavili žiadne príznaky toxicity, ošetrila sa ďalšia skupina. Rovnaký postup pokračoval, dokiaľ sa neošetrili všetky zvieratá. Týmto spôsobom sa dosiahlo, že zvieratá neboli nevyhnutne ošetrené, ak akútna toxická dávka bola dosiahnutá v predchádzajúcej skupine.
Zvieratá boli pozorovaná na klinické príznaky toxicity ihneď CI až 2 hodiny) po ošetrení a potom denne. Telesná hmotnosť sa merala raz týždenne a takisto sa merala pre každé zviera celková Kpubreba potravy a vody.
Žijúce zvieratá boli eutanazované iritraperitoneálnou injekciou pentobarbitónu sodného (komerčne dostupný pod obchodným menom Euthanaze, Centaur”) 14. deň pokusu. Potom sa uskutočnilo posmrtné vyšetrenie týchto zvierat, rovnako ako aj v prípade zvierat. ktoré zomreli počas pokusu. Zozbierali sa vzorky pre histopatológiu.
Výsledky
Skupina 1 (kontrolná skupina)
Počas 14-dennej periódy pozorovania neboli pozorované žiadne klinické príznaky toxicity. Spotreba potravy a vody bola v normále. Zmeny v telesnej hmotnosti boli takisto v normále. Žiadne histopatologické zmeny neboli zistené vo vzorkách pečene.
Skupina 2 (100 mg/kg)
Počas periódy pozorovania neboli pozorované žiadne klinické príznaky toxicity. Spotreba potravy a vody bola normálna, zmeny v telesnej hmotnosti boli. takisto normálne. Žiadna mikroskopická patológia nebola pozorovaná a žiadne histopatologlcké alebo makrofologické zmeny neboli zistené vo vzorke pečene.
Skupina 3 (200 mg/kg)
Zvieratá v tejto skupine nevykazovali žiadne klinické symptómy toxicity počas experimentu. Spotreba vody a potravy bola normálna, rovnako ako a i zmeny v telesne.i hmotnosti. Nebola pozorovaná žiadna makroskopická patológia, ale pečeň vykazovala pri vyšetrení histopatologlcké zmeny. Zakalené zdurenie hepatocytov bolo jemné v prípade zvieraťa Č. K, ale mierne v prípade zvieraťa č. 5. Mierna hydropická degenerácia sa tiež vyskytuje v hepatocytoch zvieraťa č. 5.
Skupina 4 (400 mg/kg)
Počas pozorovania neboli zistené žiadne klinické príznaky toxicity a žiadna makroskopická patológia nebola zistená pri posmrtnom vyšetrení. na histológii bolo zistené mierne zakalené zdurenie a jemné hydropická zmeny hepatocytov.
Príjem vody a potravy a zvýšenie telesnej hmotnosti v prípade zvieraťa č. 7 bolo normálne. Zviera č. 8 spotrebovalo takmer dvojnásobok celkového množstva potravy ako zviera č. 7 (144,6 g resp. 73,9 g), ale zvýšenie v telesnej hmotnosti bolo len o 0, 81 g v porovnaní s 2, 7 g.
Skupina 5 (800 mg/kg)
Jedno zviera (zviera č. 10) zomrelo tri hodiny po dávkovaní, bez toho, aby vykázalo ne.jaké špecifické príznaky. Ďalšie zviera (zviera č. 9) prežilo celú periódu pozorovania bez príznakov toxicity. Spotreba vody v prípade zvieraťa, ktoré prežilo, bola normálna ¢42,42 ml), zatiaľ ¢134,2 g). Telesná hmotnosť sa najvyššie zvýšenie zo zvierat, čo spotreba potravy bola vysoká zvýšila o 2, 85 g, čo predstavovalo ktoré sa zúčastnili pokusu.
Posmrtné vyšetrenie zvieraťa č. 10, ktoré zomrelo krátko po podaní, ukázalo na prekrvené pľúca. Žiadne cudzia telesná reakcia, ktorá by indikovala inhaláciu testovaného materiálu nebola zistená. Žiadna patológia nebola pozorovaná v prípade 9. Jemná cytoplazmatická vakuollzácia Chydroplcká sa nevyskytovala v prípade zvieraťa č. 10, ale mierna v prípade zvieraťa č. 9. Žľazový cytoplazmatický vzhľad pečene bol klasifikovaný v prípade obidvoch zvierat ako mierny.
zvieraťa č. degenerácia)
Skupina 6 ¢1600 mg/kg)
Žiadne z prítomných zvierat nevykazovalo akékoľvek príznaky toxicity počas trvania pokusu. Pri posmrtnom vyšetrení nebola pozorovaná žiadna degeneratívrie zmeny vyšetrení pozorované makroskopická patológia, ale mierne na pečeni boli pri hlstopatologickom v prípade zvieraťa č. 11. Zviera č. 12 vykázalo mierne zakalené zdurenie a mierne hydropické zmeny hepatocytov. Spotreba potravy a vody bola normálna, takisto zvýšenie telesnej hmotnosti.
Skupina 7 ¢3028,5 mg/kg)
Touto dávkou bolo ošetrené len jedno zviera. V prípade tohoto zvieraťa neboli zistené žiadne príznaky toxicity počas pokusu a takisto nebola pozorovaná žiadna makroskopická patológia. Pri hlstopatologickom vyšetrení bolo zistené mierne zakalené zdurenie a hydropriá degenerácia hepatocytov. Zviera vykazovali počas pozorovania stratu telesnej hmotnosti ¢-0,82 g), ale spotreba potravy a vody bola normálna.
Diskusia
Vzhľadom na to, že sa použilo v každej skupine len veľmi malé množstvo zvierat, je ťažké robiť akékoľvek závery. Skutočnosť, že zomrelo pri pokuse len jedno zviera pri. nízkej dávke bez akýchkoľvek symptómov môže indikovať, že k smrti, nedošlo v súvislosti s testovanou vzorkou, ale v dôsledku stresu počas a/alebo po ošetrení. Žiadne zviera vo vyšše.j dávkovej skupine nezomrelo alebo nevykázalo akékoľvek príznaky toxicity, čo opäť podporuje túto domnienku.
Zvýšená potreba potravy pozorovaná v prípade zvieraťa č. 8 by mohla byť prisudzovaná nadmernému rozliatiu potravy, ako vyplýva z malého zvýšenia telesnej hmotnosti. Je potrebné zobrať do úvahy, že všetky zvieratá v experimente boli ošetrené len raz a že je nepravdepodobné, že činidlo znižujúce chuĽ do jedla bude mať značný vplyv na spotrebu potravy alebo vody alebo telesnú hmotnosť počas 14-denne.j periódy, čo .je prípad tejto skúšky.
Z histopatologlckého vyšetrenia vzorky pečene je zrejmé, že patologické zmeny sú závislé od dávky; zvieratá, ktoré dostali vyššiu dávku vykazujú väčšie zmeny. Pozorovaná patológia nemala metabolickú povahu, ale pravdepodobne bola spôsobená testovanou vzorkou. Zmeny mali len degeneratívny charakter a preto boli vratné. Nebn.l.i pozorované žiadne ireverzibilné hepatocelulárne zmeny.
Môžeme zhrnúť, že zomrelo len .jedno zviera pri nižšej dávke C 800 mg/kg), ale jeho smrť nebola pravdepodobne spôsobená testovanou vzorkou. Žiadne ďalšie zviera v ktorejkoľvek dávkovej skupine nevykazovala akékoľvek príznaky počas 14-denného pozorovania po ošetrení alebo nezomrelo na následky ošetrenia. Jedna orálna dávka testovanej vzorky zaviedla reverzibilné hepatocelulárne zmeny závislé od dávky.
c) Anorektický test na orálnu dávku
Úlohou tohoto testu bolo určenie aktivity rastlinného extraktu pripraveného podľa vynálezu a minimálnej účinnej dávky a v rovnakom čase preskúmanie akýchkoľvek vedľajších účinkov, ak
o.ie znížené dýchanie. ako bolo pozorované v Iruinovom teste vyššie.
Experimentálny postup
ZvieraLá boli rozdelené do skupín náhodným spôsobom. Každá ošetrovaná skupina bola zložená z troch zvierat. v kontrolnej skupine bolo 6 zvierat. Testovaná vzorka bola dávkovaná mladým samičkám potkana s telesnou hmotnosťou 100 až 150 g pri. aklimatizácii, počas troch po sebe idúcich dni. Zvieratá boli o cielom jednoduchej identifikácie označené kovovými krúžkami a kože bola označená KľlnO.». Zvieratá boli umiestené individuálne v štandardných polykarbonátových klietkach a voda a práškové komerčné pelety pre živočíchy boli dostupné podľa vôle. Spotreba vody a potravín boli merané a počítané každý deň. S cielom minimálnej účinnej dávky testovanej vzorky sa testovalo päť dávok. (Išetr enie bolo orálne testovanou vzorkou suspendovanou v zemiakovom škrabe.
Testovanou substanciou bola zlúčenina 1, vo forme bieleho granulovéhu prášku pripravená z extraktu z rastlinného materiálu podľa vynálezu a odmerané množstvo testovanej vzorky sa zmiešalo s pripraveným zemiakovým škrobom a dávkovalo sa. Zmiešanie so zemiakovým škrobom sa uskutočnilo každý deň, tesne pred dávkovaním. Pred prípravou dávkového objemu pre každé zviera sa suspenzia dôkladne zmiešala pri použití Vortex-u.
Bol testovaný rozsah piatich dávok s kontrolnou skupinou, ktorá dostala len nosičovú substanciu. Dávky boli vybrané na základe účinkov zistených v prípade vyššie popísaného Iruinovho testu a boli takéto:
Skupina i: Skupina 2: Skupina 3: Skupina 4 > Skupina 5:
0,00 mg/kg (kontrolná skupina) 6, 25 mg/kg
12, 50 mg/kg
25, 00 mg/kg
37, 50 mg/kg
Skupina 6χ 50,00 mg/kg
Výsledky
Ušetrenie neovplyvnilo zdravotný stav zvierat počas študovanej periódy. Zvieratá ošetrené testovanou vzorkou vo všetkých dávkových skupinách vykázali podstatne zriiženú priemernú telesnú hmotnosť získanú počas celej študovanej periódy a zvieratá v troch z piatich ošetrených skupín skutočne stratili telesnú hmotnosť.
Priemerná spotreba potravín sa v prípade všetkých ošetrených skupín počas periódy znížila. Zvieratá vo vyšších dávkových skupinách mali zvýšenú spotrebu vody.
Rýchlosť dýchania žiadneho zvieraťa v ktorejkoľvek dávkové i skupine nebola ovplyvnená.
Zvieratá vo všetkých dávkových skupinách mali pri posmrtnom vyšetrení drobivé pečene, ale žiadna makroskopická patológia nebola pozorovaná.
Diskusia
DáLa zozbierané počas aklimatizačnej periódy potvrdili, že všetky zvieratá zahrnuté do pokusu boli zdravé a telesná hmotnosť bola medzi jednotlivými zvieratami porovnateľná.
Zníženie a v niektorých prípadoch dokonca strata telesnej hmotnosti v kombinácii so zníženým príjmom potravy je silne príznačná so znížením chuti do jedla.
Zníženie príjmu potravy a poznaná znížená telesná hmotnosť boli zistené dokonca aj v najnižšej dávkovej skupine <6,25 mg/kg). Aktuálna strata telesnej hmotnosti bola zistená v skupine s dávkou 12,50 mg/kg.
Je dôležité uviesť, že všetky ošetrené skupiny mali zvýšenú spotrebu vody a zníženú spotrebu potravy (obrázok 2). To by mohlo byĽ v dôsledku diuretického účinku testovanej vzorky alebo stimulácie tretieho centra v mozgu.
Pozitívnym aspektom je skutočnosť, že nedošlo k zníženiu dýchania, ako bolo pozorované, pri teste akútnej toxicity, uvedenom vyššie, intraperitoneálnou cestou. To by mohlo byĽ v dôsledku zníženej absorpcie z gastrointestinálneho traktu s následnou zníženou biologickou dostupnosťou. Biologická «dostupnosť pri orálnom dávkovaní však bola dostatočná ria to, aby testovaná vzorka bola účinná. Slabé zníženie rýchlosti dýchania i hodinu po ošetrení vo väčšine skupín by mohlo byĽ pripísané naplneniu žalúdka dávkovaným objemom a následnou pasivitou zvierat.
Drobivá pečeň pozorovaná v ošetrených skupinách by mohla byť spôsobená následkom zmien metabolizmu v závislosti od zníženého príjmu potravy, čo spôsobilo zvýšený metabolizmus tukov a preťaženie pečene. Ak tento predpoklad platí, tieto zmeny môžu byt považované za prechodné, ktoré prestanú časom po dosiahnutí stabilného stavu alebo po prerušení pokusu. Možný účinok na pečeň vyžaduje ďalší výskum.
Keďže bola táto štúdia pojatá primárne ako skúšobný test. boli použité malé skupiny testovaných zvierat. To robí štatistické vyhodnotenie dát obťažným, predovšetkým ak jednotlivé zvieratá reagujú úplne odlišne. Avšak dáta indikujú, že testované vzorky pôsobia ako činidlá znižujúce chuť do jedla, dokonca aj v najnižších dávkach <6,25 mg/kg). V rámci testu nedošlo k žiadnym klinickým príznakom zníženia dýchania.
Príklad 43
Zozbierané rastliny Hoodia získané buď prírody alebo kultivačným programom sú najprv uchované pri teplote 4 °C maximálne 48 hodín. Rastliny sa omyjú pod vodovodným kohútikom a narežú sa na rezy cca 1 cín. Rezy sa spoja a lisujú na hydraulickom lise pri tlaku 303 MPa minimálne 0,5 hodiny. Počas lisovania sa oddelene zozbiera Stava z rastlín. Šťava sa uchováva pri -18 °C do ďalšieho spracovania.
Šťava sa suší rozstrekovaním pri vhodných podmienkach a získa a tečúci prášok. Obsah vlhkosti v prášku je výhodne menší ako 5 % po sušení rozprašovaním a ak je to potrebné. ďalej sa suší vo vákuové j peci alebo pri použití sušiarne s fluidným lôžkom.
Ako šťava, tak aj materiálu sušený rozprašovaním sú účinné ako činidlá znižujúce chuť do jedla v biologických skúškach na potkanoch.
Experiment kg rastlín Hoodia qordanii sa omyje pod vodovodným kohútikom a nareže sa na rezy cca 1 cm. Rezy sa spoja a Lisujú na hydraulickom lise pri tlaku 303 MPa minimálne 0.5 hodiny. Šťava sa zozbiera a jej zistenú hmotnosť je v prípade použitia prírodných rastlín Hoodia gordoníi '10 kg a v prípade použitia rastlín Hoodia qardanii z. kultivačného programu 20 kg. Šťava <500 g) sa suší rozprašovaním pri nasledujúcich podmienkachs
Rýchlosť prúdu» 2, 85 inl/min
Vstupná teplota» 110 °C
Výstupná teplota» 70 °C
Teplota komory» 78 °C
Prášok získaný rozprašovaním bol volrie tečúci prášok <22 g) s obsahom vlhkosti 6, 9 %.
Prášok sušený rozprašovaním sa analyzoval na koncentráciu aktívnej zložky použitím techník HPLC. Zistilo sa, že koncentrácia aktívnej zložky je 13 g/kg prášku získaného sušením rozprašovaním.
Acetonitril:voda <7:35. izokratický
Reverzná fáza C-18
Metóda HPLC analýzy
Eluarit =
Kolóna s
Absorbancia: Prietoková rýchlosť: Injekčný ob.jein:
225 nm inl/inin ul
Metóda
Práčok získaný sušením rozprašovaním sa rozpustí vo vode <0,5 ml) a acetonitrile <0,5 ml). 10 ul tohoto roztoku sa injektuje do HPLC a stanoví sa koncentrácia aktívnej zlúčeniny pri použi.tí krivky, ktorá sa pripraví z čistej zlúčeniny 1.
Príklad 44
Výsledky štúdie navrhnutej na stanovenie možných anorektických účinkov zlúčeniny i na potkanov sú uvedené ďalej. V nasledujúcom sú uvedené testované vzorky ako čistá šťava (vzorka 1), vzorka získaná sušením rozprašovaním šťavy (vzorka 2) a aktívna časť (vzorka 3). Vzorky la 2 sú šťava a látka získaná sušením rozprašovaním, ako je popísané v príklade 43 vyššie. Vzorka 3 je zlúčenina extrahovaná rozpúšťadlom (ž 95% čistota).
Potkany Ulstar sa ošetrili jednou orálnou dávkou pri použití vzoriek 1 až 3. Dvom ďalším kontrolným skupinám sa dalo vehikulum < destilovaná voda alebo DMSO). Ako referenčný štandard sa podal orálne fenfluramín <7,5 mg/kg).
Vzorka 1 (čistá šťava), podávaná orálne, produkovala od dávky závislú redukciu spotreby potravy, ktorá bola. v porovnaní s kontrolou, kde dávkovala vehikulum. štatisticky podstatná pri dávkach 1600 mg/kg a vyšších. Sprievodné zníženie telesnej hmotnosti (alebo rýchlosti rastu) sa takisto zaznamenávali. Ten deň, kedy sa dávkovalo, sa zaznamenala Štatisticky podstatná spotreba vody 3 hodiny po dávkovaní. (6400 mg/kg a 10000 mg/kg) a 6 hodín po dávkovaní. Medzi 24 a 48 hodinou po dávke došlo k štatisticky významnému zníženiu spotreby vody pri dávkach 3200 mg/kg a vyšších.
Vzorka 2 (látka získaná rozprašovaním šťavy) podaná orálne v množstve 76 mg/kg takisto produkovala. pri porovnaní so zvieratami ošetrenými vehikulom. štatisticky významné zníženie v spotrebe potravy a telesnej hmotnosti. Žiadne štatisticky významné účinky na spotrebu vody neboli zaznamenané.
Vzorka 3 (aktívna časť) produkovala štatisticky významné zníženie spotreby potravy pri orálnej dávke 5.0 mg/kg. Žiadne štatisticky významné účinky na telesnú hmotnosť neboli aktívnou častou dosiahnuté, aj keď skúmanie dát odkrylo slabé oneskorenie rastu v porovnaní s kontrolnými zvieratami ošetrenými vehikulom. Takisto nebolo zaznamenané žiadne štatisticky významné účinky na spotrebu vody.
Referenčný štandard. fenfluramín (7.5 mg/kg) produkoval štatisticky významné zníženie potravy po 6 a 24 hodinách od dávky v porovnaní s kontrolou ošetrenou vehikulom. Žiadne štatisticky významné účinky na spotrebu vody alebo telesnú hmotnosť neboli zaznamenané.
Neboli zaznamenané žiadne účinky na pečeň spôsobené ošetrením.
Testovaná substancia
Identita Vzorka 1 C čistá šťava)
Vzorka 2 (látka získaná sušením rozprašovaním šťavy)
Vzorka 3 C ak tívria časť)
Vzhľad Hnedá kvapalina Prášok Biely prášok
Podmienky sklado- vania -20 °C v tme Teplota miestnosti v tme 4 C,C v tme
Čistota Čistá šťava Čistá látka získaná sušením rozprašovaním šťavy ž 95%
Vehikulum Destilovaná voda Destilovaná voda Dimetylsulf- oxid
Experimentálny postup
Pre štúdiu sa použilo 55 potkanov Wistar
Telesná hmotnosť, spotreba vody (hmotnosť zásobníka na potravu) a spotreba vody (hmotnosť nádoby) sa zapisujú denne rovnaký čas každý deň od začiatku do konca štúdie.
Prvý deň dostali potkany jednu orálnu dávku podľa nasledujúcej tabuľky:
Skupina n Orálne ošetrenie Dávka (mg/kg)
—
1 5 Vehikulum (destilovaná voda) -
2 4 Vzorka 1 (čistá šťava) 800
3 5 Vzorka 1 (čistá šťava) 1600
4 5 Vzorka 1 (čistá šťava) 3200
5 5 Vzorka 1 (čistá šťava) 6400
6 5 Vzorka 1 (čistá šťava) 10000
7 5 Vzorka 2 (látka získaná sušením rozprašovaním šťavy) 38
8 5 Vzorka 2 (látka získaná sušením rozprašovaním šťavy) 76
9 5 Vzorka 3 (aktívna časť) 2, 5
10 5 Vzorka 3 (aktívna časť) 5, 0
11 3 Fenfluramín 7, 5
12 3 Vehikulum (DMSO)
Skupinám 1 až 8 bola podaná dávka pri. použití konštantného dávkového objemu 10 ml/kg a skupinám 9 až 12 bola podaná dávka pri použití dávkového objemu 1 ml/kg.
Prvý deň bola meraná spotreba potravy a vody Liež 1.. 3. a 6. hodinu po dávkovaní.
Po uskutočnenom meraní 8. deň sa zvieratá usmrtili zadusením oxidom uhličitým a pečeň sa vyrezala a vložila sa pred histológiou do 10X pufrového formalínu. Boli pripravené rezy pečene zaliate do vosku s hrúbkou 4 až 5 um a ofarbené heinatoxylínom a eozínom. Ďalšie rezy boli narezané na kryostate na 12 um a ofarbené na prítomnosť tukov olejovou červenou 0 (0R0).
Analýza dát
Merala sa spotreba potravy a vody po skončenom dávkovaní a hmotnosť v každom časovom bode pre ošetrené zvieratá P57 sa porovnávala s podobne ošetrenou kontrolnou skupinou, kedy bolo použité vehikulum, pri použití analýzy rozdielov a nasledoval Williamsov test na porovnanie s kontrolou.
Dáta pre zvieratá ošetrené fenfluramínom sa porovnávali s dátami pre kontrolnú skupinu ošetrenú vehikulom pri použití Študentovho testu.
Výsledky
Výsledky sú zhrnuté v tabuľkách.
Vzorka 1 (čistá šťava) podaná orálne, produkovala značné, od dávky závislé denné zníženie potravy. Doba trvania a amplitúda týchto znížení v spotrebe potravy boli závislé od dávky. 24 hodín po dávke produkovala vzorka 1 (čistá šťava) štatisticky podstatné zníženie spotreby potravy, v porovnaní s kontrolou, kde bolo na ošetrenie použité vehikulum, pri dávkach 1600 mg/kg a vyšších. Najvyššia dávka vzorky 1 (šťava) (10000 mg/kg) produkovala štatisticky podstatné zníženie spotreby potravy do 5 dní po dávke.
Vzorka 2 (látka získaná sušením vzorka 3 (aktívna časť) produkovali podstatné zníženie spotreby potravy pri mg/kg. V obidvoch prípadoch trval účinok rozprašovaním šťavy) a značné a štatisticky orálnej dávke 76 a 5, 0 hodín po dávke.
Referenčný štandard, fenfluramín (7,5 mg/kg p.o.) štatisticky podstatné zníženie potravy, v porovnaní s skupinou, kedy bolo na ošetrenie použité vehikulum, 6 po dávke (skupina 12).
produkoval kontrolnou a 24 hodín
Vzorka 2 (látka získaná sušením rozprašovaním šťavy) a vzorka 3 (aktívna časť) neprodukovali značné, od dávky závislé, účinky ria spotrebu vody. Ten deň, kedy sa dávkovalo, produkovala čistá Šťava štatisticky podstatné zvýšenie spotreby vody 3 hodiny po dávke C 6400 a 10000 mg/kg) a 6 hodín po dávke C10000 mg/kg). Avšak dva dní po dávke bolo zaznamenané šLaLisLieky podsLatné zníženie spotreby vody u zvierat, ktorým bola podaná vzorka 1 C Stava) pri dávke 3200, 6400 a 10000 mg/kg. Tieto zníženia nie sú samozrejme závislé od dávky a dochádzalo k nim medzi 1. a 2. dňom po dávke. Biologická podstata týchto účinkov je nejasná.
Vzorka 1 (čistá šťava) produkovala od dávky závislé, štatisticky podstatné účinky na telesnú hmotnosť pri porovnaní s kontrolnou skupinou, kedy bolo použité na ošetrenie vehikulum (skupina 1). Pri. orálnej dávke 3200 mg/kg a vyššej, produkovala vzorka 1 (čistá SĽava), v porovnaní s kontrolou, kedy bolo použiLé na ošetrenie zvierat vehikulum, štatisticky podstatné zníženie telesnej hmotnosti alebo zníženie rýchlosti rastu. Tieto účinky boli štaListicky podstatné od 48 hodín po dávke do konca štúdie.
Vzorka 2 (látka získaná sušením rozprašovaním šťavy) podaná orálne v množstve 76 mg/kg tiež produkovala podstatné zníženie rasLu zvierat, v porovnaní s kontrolnou skupinou (skupina 1), kedy bolo použité na ošetrenie vehikulum. Tieto účinky boli štatisticky podstatné medzi 3. (48 hodín po dávke) a 5. dňom vrátane.
Vzorka 3 (aktívna časť), aj keď oneskorovala rast zvierat pri najvyššej dávke (5,0 mg/kg) v porovnaní s kontrolnou skupinou, kedy bolo na ošetrenie použité vehikulum (skupina 12), tento účinok nebol štatisticky podstatný.
Fenfluramín (7,5 mg/kg) neprodukoval, v porovnaní s kontrolou (skupina 12), kedy bolo na ošetrenie použité vehikulum, štatisticky podstatné účinky na oneskorenie spotreby vody alebo telesnej hmotnosti.
Pokiaľ ide o vplyv na pečeň, neboli zistené žiadne účinky spOsobené ošetrením.
na spotrebu potravy potkana (pred dávkou, denne)
Priemerná spotreba potravy v skupine (g ± sd) meda* dňami 1 CMr- CO cs * ľ CJ -H ta BÄto tO > d-H Ul «ojz d* Xo CO d , r* » «** d-H r« uj2 d-H d βη*3 “ί UJ® CJ u>° <?2 d-H d Ή 10¾ Si
1 WCM a 1 o _UJ CJ * tS” n Ή T“ — IO d* ea“ cJ® d Ή O) ια™ ώ*'4 d-H α «5 sR O o“. SÍS co“ d-H OJ d® ea*“ d-H CO cnT d -H tn o“ α«* d-H v ea“ °2 CJ-n <o -4 8+i
^e-cj I 1 r. co“. ^~cj d -H (D N Ή CO _*C1 x. « d Ή d O1-! d * UJ fZT d* o «r* d-H O £3 d-H d -H OJ 0¾ oj7 d-H UJ _co ea** d-H n o^. d-H OJ d® d*
lOTŕ . 1 CJ d® Si d d Ή (S o*Z d-H co d* CJ «2« d- CJ ..d civ d-H OJ OJ CT7 d-H IO ui “ d* d *ŕ*Z co d-H co ea®? 10*7 d-H CJ , CJ° LÝ* d-H r* ea?} d-H
COUJ l2 a<°. Ε5Ϊ CO coT d-H O 0¾ d+< CJ d .d d-H ’C ..CO > - d-H O in« eff« d-H V-®* «*7 d-H 1-¾ S! cs d-H ďZ d-H <0 o?2 d-H OJ® d*7 d-H
I E 1 S 1 O O ea o o <3 o o d CJ O O v CO O O o o T— ea o CO d to c7 O to UJ d* 1
Orálne ošetrenie l j α 1 1 i 5 á § í £ α š V“ § S t $ « Έ E a ® CM s o i- -I -ss d s i CO rt a £ š n 10 rt a § £ E S Ž a E 1 Z $
i m d CJ ’C UJ CO 1 d e OJ o r· r- d T“
sd Štandardná deviáda
Účinky orálneho podania na spotrebu potravy potkana (po dávke, denne)
a 1 r- C3 O) X íí” S* O nŕ o-x V ή ss CO +1 . oA cí” O tí *%’c o coA cs“ S-H tn . eo\ PITÍ ·— _co S+í «oA ω-Η < -a* S+í 3±%0 CO plA C$” Pl-rí
n O cn cn * tn o
E 1 (O r-A «H r-“, sš S Ή • *s «H oA pj-H -4 eô-H «x S-H S-H -kW « v * CM° ω-Η . i-A «5 oA e?” PITÍ
€ C3 o CM . o Pl co cs (9 CO a
S E 8 ui Γ.«ϊ gs n®. S-H <’ O Ή *A -es «-Η A§ S-H <5 CM^J CM TI •S? O-H .CsA -es Pl-H . srA -e* n -H o*z p?” n-H Xx <?° CO ti •^2 pj-rí
<0
41
s m r- o CS * : - Pl e Ul CO M O
• m<S 03 -Pl Pl “H qA Cl” n +1 A5 oA cs +1 i esjí es+í .r-A ÍH 25 Pl -H . «'í S3 oA ct-H .isl 83 A<§ S-H cs1 S-H
> sr on in : r- ; r· : « co in 03 <0 o
9 CoX r-’í • aS \5 . 0*3 • CO ·. a° , p· A . coA IS.M? τ-Ί
n O ď” co +» «+» 83 es Ή SS cjn “H 83 S Ή -Pl Pl+Í Š3 cs** S-H n+i
1 CO m ca • S ; m e Ul _ Tf Pl r p- Sp CO
a o“ PlX enA oA 03 ’t \3 «3 esA *iA enA . IO^t
o es enTľ co« c?T re® w” 0*2
i cs Ή <S+í cs Ή T--H w-“H V--H CS TÍ CS -H es-H CS-H S* S-H
a cm O 03 : : rn : « : s Ul . Ul o íľ Cl . Cl CD
a o’Z -A \_co es*Z ra® csA 03 A X-X 03^2
T wH S* cs” es -H oX es tí 2? »3 uô” es Ή ,ΓΡΪ μΉ co” S-H es-H esA CS-H en” S-H
p S
a E i O § O O CO T— O o cs Pl O O * CO o o o o r- 03 Pl CO P. m a« Ol A. U3 in. fT
« D
w
1 u l ξ 1 g s g ' i g Ii 1“ s io a £ s c δ S a
o E w S s E E
I 1 € £ S £ £ e s 8- s B- O CO M CO E £
5 A 1 £ § l S S- §8 £ £ S e
> > > § 1 IL >
ľ r- cs Pl s- l£3 co 03 cn o r™ cs
(0 r- T·
S
Skupina 2-8 bola porovnávaná a vehikulom skupiny 1: p, < 0,05, p, < 0,01 Skupina 9 -11 bola porovnávaná a vehikulom skupiny 12: p < 0,05, p < 0,01 ao
I
Účinky orálneho podania na spotrebu potravy potkana (po dávke, denne)
g 1 CM τι • n (O o* CO “L” «α*° n-H CX _r* u?3 n + r* .«3 pf® n-H C3 d®. «Ή 39,0 ±17,27 cx o, -n n-H CX rt-H o .o® *«Ν <9 -H * _*> n-H
i CM Γ0 P* o fx O (O a IO CM
s • 1 IO* í?5 r-°l i— “-H ŠS . n*. rt-H 33 M+· . or- CM +» . N°. ŕs . eo®. ~d pj-H o® CD™ “H Pi®. d* S Ή . σι’Ί 85 n5. 85
H S u
n CO 10 a (0 o IO (0 (O O
1 1 «o®. -*3 . d“. . Wv. . dT . CX® rx® , CO r- v— r· * Ρ.Γ; n®.
t n Ή co* CJ Ή βδ-d n-H S~5 lí® S-H ?rs d O-H -SMM S-H ^® n* 'si d® n-H n*
>
I IO r— CM IO <x a IO o cn rs
s. 1 m m® n Ί p coQ rx® a«2 a“ o° cx® - IO ’í L9°l
io^ŕ a 1 PJ -n ' r?® «H in” o-H ω” n-H <5<n n -H O-H áS <9+i <tS p,-H d** n-H xT* n*
j n
g 1— (9 IO 03 Ρ» d C9 es O a r*
f 1 cow . 0.» S~5 . co®. ooTJ Γ,Ή . dd 55 5S . oa® $3 _.n <9-H . o” d* Vrt e®. w* M® d-H L 01 oj d + *3 d Ή L n®, d® d+i
a
£ O O o O o O o O o O CO IO O IO
i O 0 CO ex n v to o 1— Γ3 rx cT líT pr
a
C o • ii S s lo
£ ω 2 s s S 1 š f E a s g
8 □ s s £ J» ’S c a E s 5 o
A s te S 2 n S 8 g CM Q •B 2 * E E
o E v CX S a a E
£ 3 (B s S s s s ϋ Ss CO co £
s o i E S E S s c § § 1 8 h- 4 Ž e £ $
i s CM n d- in (0 r» ca cn o T— T— ex
CO
ad Štandardná deviácia
ÚCinky orálneho podania na spotrebu potravy potkana (po dávke, denne)
ad Štandardná deviácia
Skupina 2-8 bola porovnávaná s vehikulom skupiny 1: *p < 0,05 Skupina 9-11 bola porovnávaná s vehikulom akupiny 12 (nevýznamná)
Účinky orálneho podania na telesnú hmotnosť *witkana (po dávke, denne)
f 41 5 > 1 6 /i Íe F >a>. ? E •5, Q. T K d £ -H Ί2 p> J SS oK ΊΊ ČS _o “.r- Ss _u> -’Ί 55 o e®. S-H ®.S í--H Ίιη g o* S-h ®d £-h °° SS T“ «Ί ΓΪ® “H ®8 Í-H
CS Ί° C3O· ®S «oj “S ί” U>£» 2-h S2 s” v-* p^s J2« ^.S gd “H °a to · sS Ίο O)_S “H Rf? 55 o£ £®‘ £+i RS Sí
w 1 s“ »8 OJ £+i <0(3 S-H «S. °n Ίο s? N.a gd “H ®.s u>o «5 “3‘ «“ “d o 2 »03 gd “-H — OS °*Ί g® “H
nŕ Ίο Ob “H _«ŕ Ία O-ľ S* „en S®. So í-H Ί§ $r< í -H ί” “í S§. “5 a« »o ?d Í-H Ίο “d Λ-H Ίο “d Ξ-η “J? gd “H Ί§ es^j “h Ίο sí
Iŕ) 1 ®§ S d Í2-H coS »3 Ί« °<í Í2« o® e»' gd ti ®5 «rí 2-h «Κ gí Ί8 s? O.S °<d S-H ®S o^' »--H -3 S Ίο gd -H s'5
X* i o 1 O o a o a o T“ g CM CO O o o o o o o o n o po in es o •s m · If) ·«. r*
tt i í o i E 1 í t I Ž T· í T· f i 5 | m « S E *B *β N B 1 a i (B «9 í í 1 i n M . í í c É e i It. 1 i
í r· N n * US o P* a as o r“ CM T“
sd Štandardná deviáda
Účinky orálneho podania na telesnú hmotnosť potkana (po dávke, denne)
a r* o® d^ S* o§ Om .s” _.O S®. °O d Ή . « d +1 ’oS 5 : s *3 2^ d-H o — V β Ί ®T d-H d® cm_- r»2 d-H to o®. fCZ d-H 10 °3 ri® 0 „ d-H nS 5® d-H 10 g- d-H
CM . ° • O CM O 0 0
r* o“. gZ S-H «£ «á n Ή “►d «Ή o. d* °s n a d-H 8Ϊ -.o S-' «•rf O® cm_ d® CM-n ®2 d-H d, d2 wľ d-H ”-d’ *2 nT d Ή ’ť' 08 ”5 d-H
O • og S® r* ; s CJ 0 CM
a ď£ « A.S d—' nT CM-H qS «Κ» S-H ’“ľ· O*® d-H d°. s° 2-h “n gri S-H q5 2® d-H *® ®8 d Ή 0®, «ζΣ d -H *8 dľ d Ή n° n « «Τ «Ή
10 9 • : s 10 O 0 10
| 10 Α|Π §2’ d* toH *J0 ** S -H *.S 2« d-H «ϊη g« 2 -H -.O 2Ϊ « S- 2+ X<3 2® d-H Rv g® CM TI 0® «2 d* vA _*d S·“ d-H d®. d-H d° š;
> —
•f H «g ®o 0.8 • e* ®.g : g toa. o2 2-h ®s \g 0 <0*1 P* ow. fs.” d d
s i gd d* 5« CM TI gri 2* 8í c® «rf g d 2-h g 2 d-H d-H 8Í £2 CM-H
? > Γ3 r* °*5 ®d _.d *ϊχ- dg :«5 : g a®. «Ο •P* \K 10 0™. *§ CM o5
s E CM +i 2* r>e ®“ °d 2“ gri 2* s“ 2-h gď 2-h g d 2-h 8Ϊ S®' 2-h =5· d2 2«
f e 10 r% e
1 CM e° 2* °J2 d^i 2« •dt 8í „n ®e. ga 2-h e S «Γ3 gri 2-H XŕP 25 «n ®ld gri 2-K _.d Λ.Κ» g ď 8« ď. 2ΐ 0.0 gri 2-h o®, 0*2 2-h n, g° 8-h
g
s o. N «
_d °§ °E ®.8 ®.g CN. S- ®χ S *s §s ”0
l 2-h e>_; “5 g«á 2-h JľcÍ 2* gF 2-h «2 2Ϊ JJo 2-h g d 2* g® 2-h ®2 2-h sš
o o o o o o o o o a e 10 0 10
1 o o C0 . CM n e o 9» 0 P* CM 10* rC
S v S
f s S S s S ΐ ε 5 E ·' e ω
I š 1 & s i *S 3 ® 1 I e í
E r“ w* *“ e·™ n~S N 5 s e E
ž M fi 1 0 5 0 *s 028 0 0 -Š
Έ o > 1 1 1 1 5 & s! H n e S CO í s i q
í d n v 10 o d 0 cn 0 - CM »-
w
Histologická správa
Histologické vyšetrenie bolo obmedzené na pečeň. Žiadne, ošetrením spôsobené, zmeny neboli zistené v prípade vzorky 1 (kvapalina), vzorky 2 CšCava získaná sušením rozprašovaním), vzorky 3 C aktívna časť), Fenfluraminouej alebo DMSO kontrolnej skupiny.
Nálezy mali podobný výskyt v kontrolných aj ošetrených skupinách.
Tabuľka
Súhrn výskytov mikroskopických patologických zmien
Sku- Sku- Sku- Sku- Sku- Sku-
plná plná plná plná plná pin;i
1 2 3 4 5 6
0 HDD 1600 3200 6400 10000
mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg
Pohlavie: samci
Samci v štúdii 5 4 5 5 5 5
Celkovo samcov 5 4 5 5 5 5
Pečeň
Skúmaná 5 4 5 5 5 5
Žiadne abnormality 0 D 1 2 3 3
Zápalové ložiská parenchy-
málnych buniek (celkovo) 0 1. 0 0 0 3
Minim. ľl 1 D 0 0 1
Hepatocytová hypertrofia -
- centrilobulárna (celk.) 0 D D 0 0 1
Minim. D D 0 0 0 0
Extramedulárna hemopoéza
(celková) 2 D D 0 0 0
Minim. 2 D D 0 0 0
Hepytocytová nekróza -
fokálna (celková) 1 D 0 0 0 0
Miním. 1 D D 0 0 0
Portálna lymfoidná inťil-
trácia (celková) 3 4 4 3 2 2
Minim. 3 4 4 3 2 2
Eozinofilné hepatocyty -
fokál. (celk.) 1 D 0 0 0 0
Minim. 1 D 0 0 0 0
Portálna fibróza (celk.) U D 1 0 0 0
Minim. 0 D 1 0 0 0
Pečeň (škvrna)
Skúmaná 5 4 5 5 5 5
Žiadne abnormality 2 3 2 4 3 3
Hepatocytový tuk - centri-
lobulárny (celk.) 3 1 2 1 2 2
Minim. 3 1 2 1 2 2
Hepatocytový tuk - peripor-
tálny (celk.) 0 0 1 0 0 0
Minim. a D 1 0 0 0
Tabuľka
C pokračovanie)
Sku- Sku- Sku- Sku- Sku- Sku-
pina pina pina pina pina pina
7 8 9 10 11 12
38 76 2. 5 5 7. 5 0
mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg
Pohlavie: samčí
Sanici v štúdii 5 4 5 5 5 5
Celkovo samcov 5 4 5 5 5 5
PeCeň Skúmaná 5 5 5 5 3 3
Žiadne abnormality 2 2 0 1 0 2
Zápalové ložiská parenchy-
málnych buniek (celkovo) 0 0 0 0 0 1
Miním. 0 0 0 0 0 1
Hepatocytová hypertrofia -
- centrilobulára (celková) Miním. 0 1.1 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0
Portálna lymfoidná infil-
trácia (celková) 3 3 5 4 3 1
Miním. 3 3 5 4 3 1
Portálna flbróza (celk.) n 0 1 0 0 0
Miním. 0 0 1 0 0 0
Pečeň (šk vrna) Skúmaná 5 5 5 5 3 3
Žiadne abnormality 5 3 3 3 2 2
Hepatocytový tuk - centri-
lobulárriy (celk.) 0 2 2 2 1 1
Miriim. 0 2 2 2 1 1
Príklad 45
Ďalšia bíoligická skúška, pri ktorej sa používali rovnaké skúšobné vzorky ako je popísané v príklade 44, je popísaná ďalej. Zvieratá v tejto štúdii dostávali obmedzenú potravu, to znamená, že zvieratá dostávali potravu medzi 12. a 15. hod. denne. Ίο sa odlišuje od všetkých biologických skúšok uskutočňovaných až doteraz, kde bola potrava potkanom dostupná podľa potreby. Zvieratá boli aklimatizované počas sedemderinej periódy (drii -7 až -1), dávkovanie bolo uskutočnené 0 až 6 deň o 9.00 hod. orálnou žalúdočnou sondou. Perióda na zotavenie prebiehala 7. až 13. deň. Dávkové skupiny sú popísané v tabuľke 1 ďalej. Je potrebné poznamenať, že skutočná kontrolná skupina je skupina 9. Skupina 5 je kontrolná skupina, ktorá obdržala rovnaké množstvo potravy ako skupina 4. Úlohou tejto skúšky bolo vyhodnotenie účinku obmedzenej potravy na životy zvierat.
Výsledky
Výsledky získané počas štúdie ukázali, že aklimatizačná perióda je veľmi krátka. Potkany sa kŕmili predovšetkým počas noci a náhla zmena na obmedzený prístup k potrave počas dennej doby viedla k nízkej dennej perióde. Denný príjem potravy sa zvýšil vo väčšine skupín ku koncu aklimatizačnej periódy, kedy začalo dávkovanie testovanou zlúčeninou. Výsledkom bolo, že účinok testovaných materiálov nemal podstatný účinok na príjem potravy potkanmi počas dávkovania.
Stredná telesná hmota pre rôzne skupiny pre drii -7. až -1. a dni 0. až 6. je uvedená v tabuľke Dl a v tabuľke D2. Účinok rôznych dávok šťavy a látky získanej sušením rozprašovaním je uvedený v sprievodných grafoch ako X zmeny telesnej hmotnosti 0. až 7. deň (obrázok 5) a X zmeny telesnej hmotnosti -7. až 7. deň (obrázok 6). Strata telesnej hmotnosti je závislá od dávky, predovšetkým pri vyšších dávkach.
Histopatologické skúmanie pečene rievykazálo podstatnú patológiu v skupinách, kLoré dostávali tesLovanú zlúčeninu.
Potrava
Spotreba potravy bola meraná denne počas aklimatizácie a počas SLúdie. Potrava bola k dispozícii počas 3 hodín denne, perióda začala 12.00 a končila 15.00. Zvyšný čas sa zvieratá postili. Zvieratá v 5. skupine dostali odmerané množstvo potravy 1. deň, ktoré bolo ekvivalentné priemernej spotrebe potravy ako v prípade skupiny 4 0. deň. Tento regulovaný model kŕmenia pre 5.
skupinu, ako bolo stanovené z priemernej spotreby 4. skupiny z predchádzajúceho dňa, pokračoval 1. až 7. deň.
Voda
Voda bola poskytovaná v štandardnom zásobníku. Voda (Magalles Mater Beard Tap Mater, vhodná pre potrebu ľudí), bola dostupná podľa potreby. Spotreba vody bola meraná raz denne, rovnaký čas každý deň, po stanovení spotreby potravy.
Aklima Lizácla
Zvieratá sa aklimatizovali sedem dní pred začiatkom štúdie, pričom počas tejto doby bola stanovená spotreba potravy a vody. Telesná hmotnosĽ bola stanovená na dennej báze počas tejto doby.
Návrh štúdie a postup
Tabuľka 1 Návrh Štúdie
skúpil ia skúška čísla dávka skúšal iá látka
— — — —
1 6u 001-006 100 mg/kg mrazená šťava
2 6u 007-012 400 mg/kg mrazená šťava
3 6 o 013-018 1600 mg/kg mrazená šťava
4 6 u 019-024 3200 mg/kg mrazená šťava
5 6u 025-030 kuntrula Elga Optiun 4 Čistená vuda
6 6 u 031-036 2, 2 mg/kg sušei íle vai ií m r uzpr ašu- šťavy
7 6u 037-042 Et 8 mg/kg sušenie vat ií m ruzprašu- šťavy
8 6u 043-048 35 mg/kg sušei íle vai ií m r uzpr ašu- šťavy
a 8 o 049-054 kuntrula Elga Optiun 4 Čistená vuda
Cesta podarila
Testovaná látka sa podávala na dennej báze 7 dní, pri použití Intragastrickej sondy. Zvieratá nedostávali potravu 18 hodín pred podaním zlúčeniny (začiatok o 9.00).
Doba trvania ušetrenia
Zvieratá boli uSetrované sedem za sebou idúcich dní (deň 0. až 6.). Tri zvieratá z každej skupiny boli usmrtené 24 hodín po poslednej dávke (deň 7.). ZvySné tri zvieratá boli usmrtené deň dávke (deň 13.). Tento postup sa uskutočnil pre okrem skupiny 5, kde boli zvieratá usmrtené 24 hodín po poslednom kontrolovanom kŕmení (deň 8.). Zvyšné tri zvieratá boli usmrtené 7 dni po poslednej dávke (deň 13.).
7. po poslednej všetky skupiny.
100
Telesná hmotnosť
Telesná hmotnosť bola stanovená denne, približne rovnaký čas každý deň počas trvania štúdie, vrátane aklimatizačnej periódy.
Eutanázia
Tri zvieratá z každej skupiny boli usmrtené 24 hodín po poslednej dávke C deň 7.).
Zvyšné tri zvieratá boli usmrtené deň 7. po poslednom ošetrení. Tento postup nasledoval pre všetky skupiny, okrem skupiny 5. kde boli tri zvieratá usmrtené 24 hodín po poslednom kontrolovanom kŕmení C deň 8.) a zvyšné tri zvieratá boli usmrtené deň 7. po poslednom ošetrení C deň 13.). Zvieratá boli eutanázovarié pri konci periódy štúdie plynným C0a.
Oftalmoskopické skúmanie
Oftalmoskopické skúmanie, pri použití oftalmoskopu, sa uskutočnilo pre všetky zvieratá vo všetkých skupinách pred prvým podaním testovanej látky a po skončení ošetrenia.
Makroskopická patológia
Plné skúmanie každého mŕtveho zvieraťa sa uskutočňovalo pri konci periódy štúdie.
Histopatológla
Histopatologické vyšetrenie sa uskutočňovalo na pečeni každého zvieraťa.
101
Tabulka D.1
Stredná telesná hmotnoartekuplna/ljždeA
102
telesne hmotnosíVškupina/týidert (pokračovanie)
g i 1 CB g 1 Φ E ί to c u a n g _>cŕ 5 £ -H 1^ 0* £ n r» -rΪΣ o £ -H _ tO S“ ca'S S n 2 -h o «3 s ,rt-ul g o “ -H 5?“ “ H ••(Q JT W 2 -H α 2 o x tfS 2 -H og O1 H. _τ*γχ 5“ <M Ή «2 rx *Z. jr r* o n 2 -H a ° CO «b 2Ϊ
Ul c 0) XI m ® O1 K t f* £ -H cn S 2 -H og o S <□*£ 2 -H Ul® o x 90 Ch ŠS Ul £2 S ®, cm“ £ΐ m g S ® 2 Ή rx a g n _Z*CM 5® CM Ή °g d «Η j*r» 2” S 5 u sl R -h|
v c 0) T3 S ° “i. co' K ” £ +1 S “'in 2* s F* s o*® 2 -H O1 rx in (fl'S 2 -H «8 £s -H K 8*5 2 « CM ® S“ CM ” g“ oí Ή S S «1 S™ si
n c 0) o g to £ -H S” ís o“ rx i. 2 -H u» JZ O ► ÍS ng Ul « rS 2 -H s s v ·. _ŕUl S o 2 -H og 03 r-“*M s“ RS CM-® 2” 8 S - CM S o í -H
rx c 0) n Í O r* -cn K < £ * R “ Γ* «b *s 2* _ o W M « ™ rľg 2 -H 8 8 Í5 m O 01 x -Ul ®” ea “ ’P* a “ 2 -H C s a10 <M Ή o n ui “L rT® 2? 2“ O to 2 -H
c S) Ό «g 03 - £ -H CO ια o lb *g 8?\ cn g 2 -H 03 Ξ O °t s” R +1 8? ^*IO ““ S“ -03 O “ 2 -H uig ui H. -03 5® CM Ή S 8 žs s K ®s í -H
O C ' o o r-g 03 - _>C1 5 03 2 -H “-S· ”S í -H S° 2 S o® <3 R -H *° Γ» rx k _ΓΙ>- X (0 R -H k“ S-g •s 03 £ w ” am S® rx Ή 2* S” 2 -H 8¾ 5*8 2 -H
il o O v O O Tf o o 13 O O rx n 1 σΓ 00 «b 00 Ifl O 1
í o ž í s ž H“ é ί CJJX Ij H f E 3 c N B íl e M «1 d CM £ H sl P šl
í m r· o CM O n o < o Ifl O to o P- o 03 O a o
103
I
telesná hmotnoeť/skupina/týždeň (pokračovanie)
CT T- C 0) o M U) 2 60 “ *» _SCJ a3 8® «Γ» ct T CT Ή O vrt oo * ’l _ Γ» 52 ia K u 8 +1 o? m s 'C? »3 o® m »8 2 -H RS § 2 Ή £S «8 2 -H 207,13 ±18,22
CM e™ oA M M 8. s° co «. s“ O) > m O 2 ® 8 S. S“
c a Ό 8« n Ή g 2 CT + §3 ŕ° ?“ mg 2 Ή g S 2 -H _TUJ c3 *2 8 +1
-s r· r- n XZ n o s 8 te 8 S r“ gffl 09 «· s 8« K. CM Γ* e CO X n Jľ oo_ľjL
1 1 c 0) o * OJ <a g ct S ct Ή m'D δ; e— TI ľ~ tn 2 -H °5 2 -H “OJ 2Ϊ 2 -H r‘S £-h oj“o 2 +i
Έ e Σ « o T“ σι o° m CO S « °S Γ* .s s“ og <0 Hk m o CT m g (0 m £j 2+í S S
S · (0 S c u Ό n “ CT ·Η S3 2 -K “ 5 2 -H •p^ CO IR IO ** “ Ή -f oj »3 o U) §3 ® CT 2 +i
i 5Í
i O) S r*· ·» «2 cm in o? OJ - o S ž“ :Λ S ô. £ §
% i 0) Ό •CM CO M S * CT Ή **ΙΛ m S 2Í m“ g 2 + <s 2 -M ť-rm S «ί 2 Ή —“CT *3 g'S 2 -h <O CT OJ 2 +i
E
JC 00 «5 P* M _ «Α s° og o « «Ο (0 ~ 01 . m R 5 8 0) te m rs
£ c u o e S « 2 ct « in J2 S -H og 2Ϊ g <ä 2 -H te ΛΙ PJ in £ 44 g‘£ 2 -H B'5 „•n S N 2 +i «CT 23
E í n. rs « o C*3 -s W 5 oo _ CT§ r·* UJ - - °> m™ 8 S 8« _ m ° CT UJ
c u o “CT S' 2 Ή ®ct S s £ Ή ” -H ooS 2 ”£ C -H §1 s- cm 41 2 u?« 25
3 o o
B E O O o o CM m UJ CT
Ž e O r o v CO CM W te m 1
O B T· CO
ž svt m
h s_ 5Í u sg *- rt h w e * i] Oj 1< h 1E e e 5 Ό
5 « ií y P P si® í SÍs SI® <s
o >s. §a la la Ih lis ih al
UJ iQ 5 Bo 5» Bo > Bo Q <8
i CT n e m (9 r>» m OJ
5 o o o o o O o o O
CO
104
Tabulka 1* Histologické hodnotenie pečene Vzorka 1 samcov potkana 400 mg/kg Vzorka 1
Skupina 1* 100 mg/kg Vzorka 1 Skupina 2 s
zvie - Hepatické zvie- Hepatické
ra č . lézie ra č. lézie
7. deň 01 NPL 07 FHS1+
02 NPL 00 NPL C.1+
03 NPL C1+ 09 NPL
13. deň 04 NPL MLC 13. deň 10 DHS1+
05 FHS1+ 11 NPL
06 NPL 12 DHS1+
—. — ... —— —. — — — —— --------—......... ---------- —— — —- --- ——--- .....----------------
Skupina 3* 1600 mg/kg Vzorka . 1 Skupina 4: 3200 i mg/kg Vzorka 1
zvie - Hepatické zvie- Hepatické
r a č . lézie ra č. lézie
----------------- — — — — — — — —
7. deň 13 NPL 19 NPL
14 NPL 20 NPL
15 NPL 21 NPL
13. deň 15 NPL 13. deň 22 DHS1+
16 DHS1+ 23 FHS1+
17 NPL 24 NPL
105
Skupina 5: Kontrola: Čistená voda Elga Optiori 4: obmedzená spotreba potravy
Skupina 5: Kontrola: Čistená voda Elga Option 4 zvie- Hepatické ra C. lézie
7. deň 25 NPL MLC
26 NPL
27 NPL
13. deň 28 DHS1+
29 DHS1+
30 NPL
legenda:
C = Prekrvenie
DHS - Difúzny hydropieký bunkový opuch l-HS = Fokálny hydropieký bunkový opuch
NPL = Žiadne parenchymálne lézie l*ILC » Minimálna lymfocytická manžeta
1+ = .jemné
2+ = mierne
3+ = vážne
106
Tabuľka 2s Histologické hodnotenie pečene samcov potkana Vzorka 2
Skupina 6: 2,2 mg/kg Vzorka 2 Skupina 7 s 0, 0 mg/kg Vzorka 2
zvie - 1 lepatické zvie i- Hepatické
ra č . lézie ra č :. lézie
7. deň 31 NPL 37 NPL
32 NPL l*ILC 30 NPL
33 ΠΙ51+ 39 NPL 01+
13. deň ' 34 NPL 13. deň 40 Dl 151+
35 Dl 151+ 41 NPL
36 NPL 42 ľlLC Dl 151+
Skupina 0: 35 mg/kg Vzorka 2
zvie- 1 lepatické
ra č. lézie
— -............... ---------------------------------------------------------------------------
7. deň 43 NPL
44 NPL
45 NPL
13. deň 46 NPL
47 NPL 01+
40 ľlLC FIIS1+
107
Skupina 9 s Kontr ola s Čistená voda Elga Option 4
Skupina 9: Kontrola: Čistená voda Elga Option 4
zvie- Hepatické
ra č. lézie
7. deň 49 NPL
50 NPL
51 FHS1+
13. «deň 52 DHS1+
53 NPL
54 FHS1+
legenda:
C = Prekrvenie
DHS == Difúzny hydropický bunkový opuch
FHS =: Fokálny hydropický bunkový opuch
NPL = Žiadne parenchyinálrie lézie ľILC » Minimálna lymfocytická manžeta
1+ = jemné
2+ = mierne
3+ = vážne
108
Žiadne špecifické lézie neboli zaznamenané na pečeni z experimentálnych potkanov, ktoré dostali zmrznutú šťavu, takisto látku získanú suchým rozprašovaním šťavy, ktoré by mohli byť prisudzované vyššie uvedeným chemickým látkam. Hydropický bunkový opuch, zaznamenaný ako v prípade kontrolných, tak aj experimentálnych potkanov, môže indikovať metabolický bunkový opuch a anoxické zmeny. V prípade niektorých zvierat boli zistené minimálne ložiska lymfotických perivaskulárnych zmien, čo je s najväčšou pravdepodobnosťou náhodné pozorovanie. U niektorých potkanov bola zistená mierna kongescia v hepatických sínusoidách. Dôležitou črtou vynálezu ukázanou výsledkami tejto štúdie je skutočnosť, že nedošlo k vývoji žiadnej tolerancie ku ktorejkoľvek zo vzoriek. Táto skutočnosť môže poskytovať značný prospech, predovšetkým vzhľadom na použitie zlúčenín a kompozícií podľa vynálezu pri liečení obezity.
Zlúčeniny a kompozície podľa vynálezu boli predovšetkým popísané vzhľadom na ich vlastnosti ako činidiel znižujúcich chuť do jedla. Je potrebné uviesť, že výraz činidlo znižujúce chuť do jedla sa tu používa na určenie aktivity, ktorá vedie k obmedzenej chuti a/alebo k zvýšeniu pocitu sýtosti a tak vedie k zníženiu celkovej kalorickej spotreby potravy, čo pôsobí proti obezite. Vynález sa ďalej rozširuje na spôsob ošetrenia, prevencie alebo boja proti obezite u človeka alebo zvieraťa, ktorý zahrnuje podanie človekovi alebo zvieraťu množstva zlúčeniny vzorca 2, ktoré lieči a je účinné pri prevencii alebo boji proti obezite. Výhodná realizácia tohoto aspektu využíva kompozíciu alebo extrakt obsahujúci zlúčeninu vzorca 1.
Výraz zviera, ako sa tu používa, zahrnuje, nie však s obmedzením, druh zvieraťa, napríklad domáce skrotené zvieratá; neobmedzujúce príklady takýchto zvierat zahrnujú hovädzí dobytok, ovce, fretky, ošípané, slony, kone, hydinu, ryby, králiky, kozy, psy a mačky.
Zlúčenina vzorca 2, výhodne vzorca 1, alebo kompozícia definovaná v ktoromkoľvek z nárokov 9 a 25 až 31
109 vyššie, ako anorektické činidlo, alebo činidlo užité pri liečení alebo prevencii obezity u človeka sa výhodne podáva uvedenému človekovi v množstve približne od 0,01 mg/kg/deň do približne 10 mg/kg/deň. Výhodná dávka leži v rozmedzí 0,05 mg/kg/deň až 0,5 mg/kg/deň. Ak sa použije prášok získaný sušením rozprašovaním alebo extrakt podľa vynálezu, výhodná dávka leží v rozmedzí 0,1 mg/kg/deň až 20 mg/kg/deň; mimoriadne výhodná je dávka 0,5 mg/kg/deň až 5 mg/kg/deň.

Claims (118)

  1. L. Spôsob prípravy extraktu rastliny rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, pričom extrakt zahrnuje činidla' znižujúce chuť do jedla, vyznačujúci sa t ý m, že postup zahrnuje stupne spracovania zozbieraného rastlinného materiálu rozpúšťadlom s cieľom extrakcie frakcií majúcich aktivitu znižujúcu chuť do jedla, separácie extrakčného roztoku od zvyšku rastlinného materiálu, odstránenia rozpúšťadla z extrakčného roztoku a získania extraktu.
  2. 2. Spôsob prípravy, ako načujúci sa tým. vybraná z druhu Trichocaulon je nárokovaný v nároku 1, v y z že rastlina rodu Trichocaulon je piliferum a Trichocaulon officinale a rastlina rodu Hoodia je vybraná z druhu Hoodia currorii, Hoodia gordoníi a Hoodia lugardii.
  3. 3. Spôsob, ako je nárokový v nároku 1 alebo nároku 2. vyznačujúci sa t ý m, že stupeň zahrnuje koncentráciu aktívneho činidla v extrahovanom materiáli ďalšou extrakciou rozpúšťadlom.
  4. 4. Spôsob, ako je nárokovaný v nároku 1, nároku 2 alebo nároku 3, vyznačujúci sa tý m, že rozpúšťadlo v rozpúšťadlom extrakčriom stupni alebo stupňoch je jedno alebo viac rozpúšťadiel vybraných zo súboru, ktorý zahrnuje metylénchlorid, vodu, metanol, hexán, etylacetát alebo ich zmesi.
  5. 5. Spôsob, ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 4 vrátane, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje stupeň koncentrácie aktívneho činidla v extrahovanom materiáli chromatografickou separáciou.
  6. 6. Spôsob, ako je nárokovaný v nároku 5, vyznačujúci sa t ý m. že chromatografický separácia zahrnuje jeden
    111 alebo viac rozpúšťadiel vybraných zo súboru, ktorý zahrnuje chloroform, metanol, etylacetát, hexán alebo ich zmesi ako eluant.
  7. 7. Spôsob, ako je nárokovaný v nároku 5 alebo nároku 6, vyznačujúci sa t ý m, že sa uskutoční chromatografická separácia na kolóne, zozbieranie eluátu vo frakciách z kolóny, hodnotenie frakcii s cieľom stanovenia aktivity činidla znižujúcej chuť do jedla a výber aspoň jednej frakcie obsahujúcej činidlo znižujúce chuť do jedla.
  8. 8. Spôsob. ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa t ý m, že extrakt sa spracuje na formu voľne tečúceho prášku.
  9. 9. Extrakt, vyznačujú c i. sa tým, že zahrnuje činidlo znižujúce chuť do jedla, ktorý sa produkuje podľa postupu nárokovaného v ktoromkoľvek z predchádzajúcich nárokov.
  10. 10. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje extrakt nárokovaný v nároku 9.
  11. 11. Kompozícia ako je nárokovaná v nároku 10, vyznačujúca sa t ý m, že sa zmieša s farmaceutickým excipientoín, riedidlom alebo nosičom.
  12. 12. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 10 alebo 11, vyznačujúca sa tým, že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  13. 13. Použitie extraktu, ako je nárokovaný v nároku 9, pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  14. 14. Extrakt, ako je nárokovaný v nároku 9, vyznačujúci sa tým. že liečivo má aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
    112
  15. 15. Spôsob zníženia chuti do jedla, vyznačujúci sa t ý m, že sa človekovi alebo zvieraťu podá účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v nároku 10, nároku 11 alebo nároku 12.
  16. 16. Spôsob prípravy extraktu rastliny rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, pričom extrakt zahrnuje činidlo znižujúce chuť do jedla, vyznačujúci sa t ý m, že postup zahrnuje stupne lisovania zozbieraného rastlinného materiálu s cieľom oddelenia šťavy z pevného rastlinného materiálu a získania šťavy, neobsahujúcej pevný rastlinný materiál, za vzniku extraktu.
  17. 17. Spôsob, ako je nárokovaný v nároku 16, vyznačujúci sa t ý m, že sa extrakt suší na formu voľne tečúceho prášku.
  18. 18. Extrakt zahrnujúci činidlo znižujúce chuť do jedla, vyznačujúci sa t ý m, že sa pripraví postupom, ako je nárokovaný v nároku 16 alebo nároku 17.
  19. 19. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, v y z n a č u j ú c a sa tým, že zahrnuje extrakt, ako je nárokovaný v nároku 18.
  20. 20. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 19, vyznačujúca sa tý m, že sa zmieša s farmaceutickým excipientom, riedidlom alebo nosičom.
  21. 21. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 19 alebo nároku
    20. vyznačujúca sa t ý m. že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  22. 22. Použitie extraktu, ako je nárokovaný v nároku 19, pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  23. 23. Extrakt, ako je nárokovaný v nároku 18. vyznaču113 j ú c 1 sa t ý m, že sa použije ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  24. 24. Spôsob zníženia chuti do jedla, vyznačujúci sa t ý m, že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v nároku 19, nároku 20 alebo nároku
    21.
  25. 25. Extrakt, ktorý je možné získať z rastliny rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, vyznačujúci sa t ý m, že zahrnuje činidlo znižujúce chuť do jedla majúce vzorec
  26. 26. Extrakt, ako je nárokovaný v nároku 25, vyznačujúci sa tým, že rastlina rodu Trichocaulon Je vybraná z druhu Trichocaulon piliŕerum a Trichocaulon oŕfícinale a rastlina rodu Hoodia je vybraná z druhu Hoodia currorií. Hoodia sordonii a Hoodia lugardii.
  27. 27. Extrakt, ako je nárokovaný v nároku 26. vyznačujúci sa t ý m, že sa všetky neaktívne nečistoty odstránia.
  28. 28. Extrakt, ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z nárokov 25 až 27 vrátane, vyznačujúci sa tým, že sa spracuje
    114 na voľne.tečúci prášok.
    23. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje extrakt, ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z nárokov 25 až 28 vrátane.
  29. 30. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 29, vyznačujúca sa t ý m, že sa zmieša s farmaceutickým excipieritom, riedidlom alebo nosičom.
  30. 31. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 29 alebo v nároku
    30, vyznačujúca sa tým, že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  31. 32. Použitie extraktu, ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z nárokov 25 až 28 vrátane, pre prípravu liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  32. 33. Extrakt, ako je nárokovaný v nárokoch 25 až 28 vrátane, na použitie ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  33. 34. Spôsob zníženia chuti do jedla, vyznačujúci sa t ý m. že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v nároku 29, nároku 30 alebo nároku
    31.
  34. 35. Zlúčenina všeobecného vzorca (2)
    115 kde
    R je alkyls
    Ri je H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    Ra je H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2,6-dideoxysacharidov. alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
  35. 36. Zlúčenina, ako je nárokovaná v nároku 35, kde je väzba medzi C5-C6. R = metyl, Ri = tigloyl. R® = 3-0-Ľ-a-D-thevetopyranozyl-Cl->4)-e-D-cyrnaropyranozyl-Cl->4)-e-D-cymaropyranozyl] a kde zlúčenina má všeobecný vzorec (D
    116
  36. 37. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec (3) kde R = alkyl; a
    Ri - H, alkyl. tigloyl. benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
  37. 38. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec (4)
    117 kde R = alkyl; a
    Rx = H, alkyl. tlgloyl. benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
  38. 39. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    OH (5) kde R = alkyl; a
    Ri = H, alkyl, tlgloyl. benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
  39. 40. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    OMe (6)
    118 kde R = alkyl; a
    Ri = H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
  40. 41. Zlúčenina kde R Ri alkyl; a
    H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo akákoľvek iná organická esterová skupina.
  41. 42. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    Ri = H, alkyl. tigloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    R® = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2,6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby
    119 medzi C4-C5 alebo C5-C6.
  42. 43. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    0.
    (9) kde R = alkyl; a
    Rt = H. alkyl. tigloyl. benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    Ra — H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov. alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená prípadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
  43. 44. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    OH (10)
    120 kde R = alkyl; a
    Ri H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    R2 = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená prípadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5 alebo C5-C6.
  44. 45. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    R (ii) kde R = alkyl; a
    Ri = H, alkyl, tigloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    Ra = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená prípadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5, C5-C6 alebo C14-C15.
  45. 46. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec
    121 (12) kde R = alkyl; a
    Ri = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    Ra = H alebo jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5. C5-C6 alebo C14-C15.
  46. 47. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec (13) kde R = alkyl: a
    Ri = H, alkyl, tlgloyl, benzoyl alebo iná organická esterová skupina;
    122
    Rs. = H alebo .jeden alebo viac 6-deoxysacharidov alebo jeden alebo viac 2, 6-dideoxysacharidov, alebo molekuly glukózy alebo ich kombinácie;
    a kde prerušovaná čiara znamená pripadne prítomnosť ďalšej väzby medzi C4-C5, C5-C6 alebo C14-C15; a
    Rs = H, alkyl, aryl, acyl alebo glukoxy.
  47. 48. Zlúčenina majúca všeobecný vzorec (14} kde R = H, alkyl, aryl alebo akýkoľvek sterold majúci C14 beta hydroxylovú skupinu, C12 beta hydroxylovú skupinu a C17 acylovú skupinu, C5-C6 olefin alebo ich kombinácie.
    Spôsob prípravy steroidriého medziproduktu vzorca vyznač (15) úci tým, že zahrnuje stupne» (a) spracovanie zlúčeniny
    123 s redukCným Činidlom za vzniku zlúCeriiny 3a. 12a-dihydroxy-20, 20 -etyléndioxypregna-5,14-diénu so vzorcom (23) (b) spracovanie zlúCeriiny 23 s N-brómacetamidom (NBA) bázou za vzniku zlúCeriiny 3a, 12a-dihydroxy-14,15-epoxy-20,20 -etyléndioxypregnen-5-énu vzorca
    HO (24)
    124 (c) spracovanie zlúčeniny 24 s redukčným činidlom za vzniku zlúčeniny 3a, 12b, 14a-trihydroxy-20, 20-etyléridioxypregn-5-énu vzorca (d) spracovanie zlúčeniny 25 s kyselinou a vodou za vzniku zlúčeniny 15.
  48. 50. Spôsob prípravy zlúčeniny 15, vyznačujúci sa t ý m, že zahrnuje stupne (a) spracovanie zlúčeniny 22 s p-toluénsulfonylchloridom a bázou za vzniku zlúčeniny 3a, 12a-dlhydroxy-20, 20-etyléndioxypregna-5, 14-dién-3-tosyl-12-acetátu vzorca
    125 dioxy-3, 5oŕ-cyklopregnan-14-én-12-acetátu vzorca
    OH (27)
    Cc)· spracovanie zlúčeniny 27 s redukčným činidlom za vzniku zlúčeniny Gb, 12a-dihydroxy-20, 20-etyléndioxy-3, 5o«-cyklopregnan-14-énu vzorca
    OH (28) <d) spracovanie zlúčeniny 28 s N-brómacetamidom a bázou za vzniku zlúčeniny 6b, 12a-dihydroxy-20, 20-etyléridioxy-14,15-epoxy-3, 5oŕ-cyklopregnáriu vzorca
    OH (29)
    126 (e) spracovanie zlúčeniny 29 s redukčným činidlom za vzniku zlúčeniny 6b, 12b, 14B-trihydroxy-20. 20-etylénd±oxy-3, 5oŕ-cyklopregnánu vzorca
    OH (30) a
    (f) spracovanie zlúčeniny 30 s kyselinou a rozpúšťadlom za vzniku zlúčeniny 15.
  49. 51. Spôsob prípravy sacharidového medziproduktu vo forme monosacharidcymarúzovej časti, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje stupne:
    (i) spracovanie zlúčeniny majúcej vzorec (36)
    127 s PhSSíl*le3, Znla a Bu'l'I- za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0 -me ty 1-6-deoxy-oŕe-D-f enyltioaltrozidu vzorca
    SPh (37) (ii) prípadne spracovanie zlúčeniny 37 s dietylamiriosulfur trifluoridom (DAST) za vzniku zlúčeniny 4-0-berizoyl-3-0-metyl -2-fenyltio-2, 6-dideoxy-oŕB-D-f luórcymaropyrariozidu vzorca alebo (iii) pripadne spracovanie zlúčeniny 37 s terc.butyldimetyl silylchlorídom a linldazolom v rozpúšťadle za vzniku 4-0-benzoyl -3-0-metyl-2-0-terc. butyldimetylsilyl-oía-D-f enyltioaltrozidu
    128 vzorca
    SPh (39) kde Z = TBDMS < = terc.butyldimetylsilyl);
    a (iv) spracovanie zlúčeniny 39 s bázou za vzniku monosacharidu 3-0-metyl-2-0-terc. butyldimetylsilyl-cŕ&-D-f enylaltrozidu vzorca (40) kde Z = TBDMS <= terc.butyldimetylsilyl).
  50. 52. Spôsob prípravy sacharídového medziproduktu vo forme aktivovanej thevetozovej časti. vyznačujúci sa tým, že zahrnuje stupne:
    Cl) spracovanie zlúčeniny
    129 (47, s fenyltiotrimetylsilánom a trimetylsilyltrifluúrmetánsulfonátom za vzniku zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl-l-fenyltio-6-deoxy-cŕB-
    SPh (48) (ii) spracovanie zlúčeniny a rozpúšťadlom za vzniku zlúčeniny
    48 s pivaloylchloridoin 4-0-benzoyl-3-0-metyl-2-0-pivaloyl-l-fenyltio--6-deoxy-cŕB-glukopyranozidu vzorca
    SPh (49) (iii) spracovanie zlúčeniny 49 s a dietylamlnosulfurtrioxidom za vzniku bromafiným činidlom monosacharidovej
    130 zlúčeniny 4-0-benzoyl-3-0-metyl-2-0-pivaloyl-l-fluór-6-deoxy-a-glukopyranozidu, ktorý sa vyskytuje ako stereoizoméry majúce vzorce
    OPv (50 A)
  51. 53. Steroidný medziprodukt vzorca 15, vyznačujúci sa t ý m, že sa pripraví postupom, ako je nárokovaný v nároku 49 alebo v nároku 50.
  52. 54. Sacharidový medziprodukt vzorca 40, vyznačujúci sa t ý m, že sa pripraví postupom, ako je nárokovaný v nároku 51.
  53. 55. Sacharidový medziprodukt vyznačujúci sa tým, je nárokovaný v nároku 52.
    vzorca 50 A alebo vzorca 50 B, že sa pripraví postupom, ako
  54. 56. Spôsob kopulácie monosacharidovej cymarózy na steroidný
    medziprodukt, vyznaču stupne.· j ú c i sa tým. že zahrnuje C i) reakciu cymarózovej časti vzorca 38 so steroidovým medziproduktom vzorca 15, ako je nárokované v nároku 53 v
    prítomnosti chloridu cínatého v rozpúšťadle za vzniku zlúčeniny 3-0-C 4-0-benzoyl-2--f=enyltio-a-D-cymaropyranozyl] -12, 14-a-dihydroxypregnan-5-en-20-únu vzorca
    131 (ii) spracovanie zlúčeniny 51 s chloridom tiglovej kyseliny v pyridíne a potom s bázou za vzniku zlúčeniny 3-0-Ľ4-0-benzoyl-2-fenyltio-a-D-cymaropyranozyl3-12a-tigloyl-14a-hydroxy-pregnan-5-en-20-ónu vzorca (52)
  55. 57. Zlúčenina vzorca 52, vyznačujúca sa tým, že sa pripraví postupom, ako je nárokovaný v nároku 56.
  56. 58. Spôsob kopulácie monosacharidovej cymarózovej častí na monosacharídthevetozovú časť a kopulácie vzniknutého disacharidu
    132 na zlúčeninu vzorca 52, ako je nárokované v nároku 57, vyznačujúci sa tým. že zahrnuje stupne* (i) kopulácia selektívne 40. ako je nárokované v thevetozovej časti vzorca 50, použití chloridu ciriatého strieborného za vzniku zlúčeniny chránenej cymarúzovej časti vzorca nároku 54. a inonosacharidovej ako je nárokované v nároku 55 pri
    C SnCla) a trifluórmetánsulfonátu vzorca (53) kde Z = TBDľlS <- terc.butyldimetylsilyl) (ii) spracovanie zlúčeniny 53 s tetrabutylamóniumfluoridom za vzniku zlúčeniny vzorca
    OPv (54) (111) spracovanie zlúčeniny 54 trífluoridom za vzniku zlúčeniny vzorca s dietylamiriosulfur133 (iv) nárokované reakciu v nároku
    ΟΡν (55) zlúčeniny 55 so zlúčeninou 57, za vzniku zlúčeniny vzorca
    52, ako je
    OPv
    OH (56) a
    (V) spracovanie zlúčeniny 56 Raney-niklovou reakciou a potom s bázou za vzniku zlúčeniny 1, ako je nárokované v nároku 36.
  57. 59. Spôsob prípravy trisacharidu a kopulácie vzniknutého trisacharidu na steroidný medziprodukt, vyznačujúci sa t ý m. že zahrnuje stupne
    134 ¢1) 40. ako chloridu kopulácia selektívne chránenej cymarózovej časti vzorca je nárokované v nároku 55. a zlúčeniny 45 pri použití cínatého, AgOTf. Cp2ZrCla za vzniku zlúčeniny vzorca
    OPv (57, kde Z = TBDMS ( = terc.butyldimetylsilyl)
    Cii) spracovanie zlúčeniny 57 s tetrabutylamóriiumfluoridom a dietylaminosulfurtrifluoridom za vzniku trisacharidovej zlúčeniny vzorca
    OPv (58) a
    Ciii) kopuláciu trisacharldu vzorca 58 so steroidovým medziproduktom vzorca
    135
    Ο pri použití chloridu cínatého, AgOTf, Cp-aZrCla za vzniku zlúčeniny 1, ako je nárokované v nároku 36.
  58. 60. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, vyznačujúca sa tým. že zahrnuje zlúčeninu, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane.
  59. 61. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 60, vyznačujúca sa tým. že zlúčeninou je zlúčenina vzorca 1. ako je nárokovaná v nároku 36.
  60. 62. Kompozícia. ako je nárokovaná v nároku 60 alebo nároku 61. vyznačujúca sa tým, že sa zmieša s farmaceutickým excipientom. riedidlom alebo nosičom.
  61. 63. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 60, nároku 61 alebo nároku 62, vyznačujúca sa tým, že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  62. 64. Použitie zlúčeniny, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane, pri príprave liečiva majúceho aktivitu
    136 znižujúcu chuť do jedla.
  63. 65. Použitie. ako je nárokované v nároku 64. zlúčeniny vzorca t. ako je nárokovaná v nároku 36.
  64. 66. Zlúčenina, ak oje nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane, na použitie ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  65. 67. Zlúčenina, ako je nárokovaná v nároku 66, ktorá je zlúčeninou vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36.
  66. 68. Spôsob zníženia chuti do jedla, v y z n a č u j ú c i sa t ý m. že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 60 až 63 vrátane.
  67. 69. Potravina alebo nápoj, vyznačujúce sa t ý m, že zahrnujú účinné množstvo zlúčeniny, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane, ktoré majú pri požití účinok znižujúci chuť do jedla.
  68. 70. Potravina alebo nápoj, ako sú nárokované v nároku 69, vyznačujúce sa tý m, že zlúčenina je zlúčeninou vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36.
  69. 71. Použitie zlúčeniny vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36, izolovanej z rastliny rodu Trichocaulon alebo z rodu Hoodia pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  70. 72. Použitie podľa nároku 71, vyznačujúce sa tým, že zlúčenina je Izolovaná z druhu Trichocaulon piliferum alebo Trichocaulon officinale alebo z druhu Hoodia eurrorii. Hoodia gordonii alebo Hoodia lugardii.
  71. 73. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, vyznač ujúcasatý m, že zahrnuje zlúčeninu vzorca 1
    137 izolovanú z rodu Trichocaulon alebo z rodu Hoodia.
  72. 74. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 73, vyznačujúca sa t ý m, že zlúčenina sa izoluje a/alebo čistí z rastliny druhu Trichocaulon piliferum alebo Trichocaulon officinale alebo z druhu Hoodia currorií, Hoodia gordaníi alebo Hoodia lugardii.
  73. 75. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 73, vyznačujúca sa t ý m, že zlúčenina sa izoluje a/alebo čistí z extraktu odvodeného od rastliny druhu Trichocaulon piliferum alebo Trichocaulon officinale alebo od rastliny druhu Hoodia currorií, Hoodia gordonii alebo Hoodia lugardii.
  74. 76. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 73, nároku 74 alebo nároku 75, vyznač u j ú c a s a tým, že sa zmieša s? Farmaceutickým excipientom, riedidlom alebo nosičom.
  75. 77. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 76, vyznáč u j ú c a sa t ý m, že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  76. 78. Zlúčenina vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 35, izolovaná z rastliny rodu Trichocaulon alebo rodu Hoodia, na použitie ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  77. 79. Zlúčenina, ako je nárokovaná v nároku 78, vyznačujúca sa t ý m, že sa zlúčenina izoluje z rastliny druhu Trichocaulon piliferum alebo Trichocaulon officinale alebo z rastliny druhu Hoodia currorií, Hoodia gordonii alebo Hoodia lugardii.
  78. 80. Spôsob zníženia chuti do jedla, vyznačujúci sa tým, že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 73 až 77 vrátane.
    138
  79. 81. Kompozícia majúca aktivitu znižujúcu chuť do jedla, vyznačujúca sa t ý m, že zahrnuje agonistu receptora melanokortínu 4.
  80. 82. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 81, vyznačujúca sa t ý m, že agonistom je extrakt, ako je nárokovaný v nároku 9, nároku 18 alebo nároku 25, alebo zlúčenina, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane.
  81. 83. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 81 alebo nároku 82, vyznačujúca sa t ý m, že zlúčeninou je zlúčenina vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36.
  82. 84. Kompozícia, ako je nárokovaná v nároku 81, nároku 82 alebo nároku 83. v y z n a č u j úca sa t ý m, že sa zmieSa s farmaceutickým exclplentom. riedidlom alebo nosičom.
  83. 85. Kompozícia, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 81 až 84 vrátane, vyznačujúca sa t ý m, že sa pripraví v jednotkovej dávkovej forme.
  84. 86. Použitie agonistu receptora melanokortínu 4 pri príprave liečiva majúceho aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  85. 87. Použitie, ako je nárokovaná v nároku 86, extraktu, ako je nárokované v nároku 9, nároku 18 alebo nároku 25, alebo zlúčeniny, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane.
  86. 88. Použitie. ako je nárokovaná v nároku 87, zlúčeniny vzorca 1. ako je nárokované v nároku 36.
  87. 89. Agonista receptora melanokortínu 4 na použitie ako liečivo majúce aktivitu znižujúcu chuť do jedla.
  88. 90. Agonista receptora melanokortínu 4, ako je nárokovaný v nároku 89, ktorý je extrakt, ako je nárokovaný v nároku 9, nároku
    139
    18 alebo nároku 25. alebo zlúčenina, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane.
  89. 91. Agoriista receptora melanokortínu 4, ako je nárokovaný v nároku 90, ktorý je zlúčenina vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36.
  90. 92. Spôsob zníženia chuti do jedla, v y z n a č u j ú c i sa t ý m, že sa podá človekovi alebo zvieraťu účinná dávka kompozície, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 81 až 85 vrátane.
  91. 93. Použitie agonistu receptora s cieľom zníženie chuti do jedla a/alebo boja proti obezite u človeka alebo zvieraťa.
  92. 94. Použitie, ako je nárokované v nároku 93, extraktu, ako je nárokovaný v nároku 9. v nároku 18 alebo nároku 25, alebo zlúčeniny, ako je nárokovaná v ktoromkoľvek z nárokov 35 až 48 vrátane.
  93. 95. Použitie, ako je nárokované v nároku 94, zlúčeniny vzorca 1, ako je nárokovaná v nároku 36.
  94. 96. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    OH (23)
    140
  95. 97.
    Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec (24)
  96. 98.
    Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
  97. 99.
    Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec (27,
    141
  98. 100. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    OH . (28)
  99. 101. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec (29)
  100. 102. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    J
    OH (30)
    142
  101. 103
    Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
  102. 104
    Zlúčenina
  103. 105
    Zlúčenina
    SPh
    Í37i majúca štruktúrny vzorec majúca štruktúrny vzorec
    SPh (39)
  104. 106. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    SPh
    OMe (40)
    143
  105. 107. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    SPh (48}
  106. 108. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
  107. 109
    Zlúčenina vyskytujúca sa ako stereoizomér majúci štruktúrny vzorec (50 B, (50 A,
    144
  108. 110.
    Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    112.
  109. 111.
    Zlúčenina majúca (52) štruktúrny vzorec
    OPv (53) .145 kde Z = TBDMS <= terc.butyldimetylsilyl).
  110. 113. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    OPv (54)
  111. 114. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    Γ55»
  112. 115. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    146
    ΟΡν (56,
  113. 116. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    OPv (57,
    147
  114. 117. Zlúčenina majúca štruktúrny vzorec
    OPv (58}
  115. 118. Spôsob boja proti obezite u Človeka alebo zvieraťa, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie uvedenému človekovi alebo zvieraťu potrebného množstva extraktu, ako je nárokovaný v ktoromkoľvek z nárokov 9, 25, 26, 27 alebo 28.
  116. 119. Spôsob boja proti obezite u človeka alebo zvieraťa, vyznačujúci sa tým. že zahrnuje podanie uvedenému človekovi alebo zvieraťu potrebného množstva kompozície, ako je nárokovaná v nároku 10.
  117. 120. Spôsob boja proti obezite u človeka alebo zvieraťa, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje podanie uvedenému človekovi alebo zvieraťu potrebného množstva zlúčeniny, ako je nárokovaná v nároku 35 alebo 36.
  118. 121. Štruktúra vzorca 3-0-e-D-theverozyl-(l->4)-B-D-cymaropyranozyl-C'l->4)-B-D-cymaropyranoz±d-12B-0-tigloyl-14-hydroxy-14B pregn-5-eri-20-ón.
SK1418-99A 1997-04-15 1998-04-15 Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity SK141899A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ZA973201 1997-04-15
PCT/GB1998/001100 WO1998046243A2 (en) 1997-04-15 1998-04-15 Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK141899A3 true SK141899A3 (en) 2000-09-12

Family

ID=25586362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1418-99A SK141899A3 (en) 1997-04-15 1998-04-15 Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity

Country Status (40)

Country Link
US (6) US6376657B1 (sk)
EP (5) EP0973534B1 (sk)
JP (3) JP3553086B2 (sk)
KR (2) KR100891756B1 (sk)
CN (3) CN101239090A (sk)
AP (3) AP2003002730A0 (sk)
AT (3) ATE502041T1 (sk)
AU (1) AU746414B2 (sk)
BG (1) BG103795A (sk)
BR (1) BR9808593A (sk)
CA (2) CA2584411A1 (sk)
DE (3) DE69842189D1 (sk)
DK (1) DK0973534T3 (sk)
EA (2) EA002885B1 (sk)
EE (1) EE9900497A (sk)
ES (3) ES2363230T3 (sk)
GB (3) GB2360520B (sk)
GE (2) GEP20022788B (sk)
GT (3) GT199800076BA (sk)
HK (1) HK1026373A1 (sk)
HU (1) HUP0000838A3 (sk)
ID (1) ID22888A (sk)
IL (3) IL131659A (sk)
IS (1) IS5196A (sk)
MY (1) MY141674A (sk)
NO (1) NO994992L (sk)
NZ (5) NZ525021A (sk)
OA (1) OA11166A (sk)
PE (1) PE85699A1 (sk)
PL (3) PL196015B1 (sk)
PT (2) PT1213020E (sk)
SA (1) SA98190501B1 (sk)
SG (1) SG120054A1 (sk)
SK (1) SK141899A3 (sk)
TR (2) TR199902540T2 (sk)
TW (3) TW539551B (sk)
UA (1) UA72439C2 (sk)
WO (1) WO1998046243A2 (sk)
YU (1) YU52199A (sk)
ZA (1) ZA983170B (sk)

Families Citing this family (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA002885B1 (ru) * 1997-04-15 2002-10-31 Ссир Средства растительного происхождения для подавления аппетита
MXPA02001160A (es) * 1999-08-04 2002-07-02 Millennium Pharm Inc Compuestos que se unen a los receptores para melanocortina-4, y metodo de uso de estos.
GB2355657B (en) * 1999-10-27 2004-07-28 Phytopharm Plc Inhibitors Of Gastric Acid Secretion
GB2363985B (en) 2000-06-30 2004-09-29 Phytopharm Plc Extracts,compounds & pharmaceutical compositions having anti-diabetic activity and their use
KR20040015670A (ko) * 2001-01-24 2004-02-19 트리콘 호울딩즈 리미티드 탄탈륨 필름 침착방법
BR0214216A (pt) 2001-11-16 2004-09-21 Novartis Nutrition Ag Material de origem vegetal derivado ou derivável com atividade supressora de apetite
US20040265398A1 (en) * 2002-04-25 2004-12-30 Fleischner Albert M. Herbal composition for weight control
WO2004071399A2 (en) * 2003-02-14 2004-08-26 Phytopharm Plc Modulation of atp production or content in the hypothalamus
US7060308B2 (en) * 2003-06-04 2006-06-13 Ramaswamy Rajendran Caralluma extract products and processes for making the same
US7976880B2 (en) * 2003-06-04 2011-07-12 Ramaswamy Rajendran Pregnane glycoside compositions and Caralluma extract products and uses thereof
US7265101B2 (en) * 2004-04-07 2007-09-04 Rutgers, The State University Of New Jersey Appetite-suppressing compositions and methods
GB0411703D0 (en) * 2004-05-25 2004-06-30 Phytopharm Plc Selective separation or extraction of steroidal glycosides
US20050276839A1 (en) * 2004-06-10 2005-12-15 Rifkin Calman H Appetite satiation and hydration beverage
US20050276869A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-15 Century Systems Appetite-suppressing, lipase-inhibiting herbal composition
US7500679B2 (en) * 2004-10-08 2009-03-10 Wade James T Board for supporting front of snow vehicle
US20060083795A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-20 Lima Shatkina Meal replacement products having appetite suppressing qualities
GB0425172D0 (en) * 2004-11-15 2004-12-15 Phyto Res Ltd Plant cells and uses thereof
WO2006079056A1 (en) * 2005-01-20 2006-07-27 Stephen Holt Herbal compositions containing hoodia
US7247323B2 (en) * 2005-08-17 2007-07-24 Elc Management Llc Delivery system for appetite suppressant
US20070082114A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for reducing weight
US20070082028A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Compositions and methods for inducing satiety and reducing caloric intake
US20070082025A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for achieving and maintaining weight loss
US20070082085A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Compositions and methods for reducing food intake and controlling weight
US20070082084A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for weight management
US20070082030A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Fiber satiety compositions
US20070082115A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William Ronald Jr Methods for inducing satiety, reducing food intake and reducing weight
US20070082108A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Methods for reducing calorie intake
US20070082029A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Fiber satiety compositions
US20070082026A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Compositions and methods for reducing food intake and controlling weight
US20070104805A1 (en) * 2005-11-01 2007-05-10 Udell Ronald G Compositions of Hoodia Gordonii and Pinolenic Acid Derivatives
US8945652B2 (en) 2005-11-23 2015-02-03 The Coca-Cola Company High-potency sweetener for weight management and compositions sweetened therewith
US20070196436A1 (en) * 2006-02-23 2007-08-23 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Process for preparing an edible composition comprising steroidal glycosides
US20070207227A1 (en) * 2006-02-23 2007-09-06 Conopco, Inc., D/B/A Unilever, A Corporation Of New York Appetite suppressant compositions
RU2009100892A (ru) * 2006-06-13 2010-07-20 Юнилевер Н.В. (Nl) Порционные композиции для подавления аппетита со стероидными гликозидами
JP5281234B2 (ja) * 2006-06-27 2013-09-04 ポーラ化成工業株式会社 毛様体過緊張による疲れ目の改善・予防のための経口投与組成物
CN101505771A (zh) 2006-08-17 2009-08-12 荷兰联合利华有限公司 含有甾体糖苷的hoodia植物萃取物的制造方法
AU2007287668A1 (en) * 2006-08-24 2008-02-28 Unilever Plc Process for preparing a composition comprising steroidal glycosides
US20080085354A1 (en) * 2006-10-06 2008-04-10 Teresa Marie Paeschke Controlled hydration of hydrocolloids
US20080138447A1 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Erin John Riggins Method for administering appetite suppressant and composition thereof
AU2007336412A1 (en) * 2006-12-21 2008-06-26 Unilever Plc Process for harvesting plants of the Apocynaceae family
US20080188447A1 (en) * 2007-02-02 2008-08-07 Svyatoslav Komarnytsky Glucocorticoid-lowering composition
US8580236B2 (en) * 2007-03-19 2013-11-12 Richard P. De Maria Hair sustaining formulation
EP2052727A3 (en) * 2007-10-02 2010-06-02 Unilever N.V. Hoodia extract oil compositions comprising unsaturated monoacylglycerides
US20100316736A1 (en) * 2007-10-24 2010-12-16 Desert Labs Agriculture Cooperative Association Ltd. Appetite suppressant
US20110135786A1 (en) * 2007-10-26 2011-06-09 The Hershey Company Cocoa-based exercise recovery beverages
US20090110774A1 (en) * 2007-10-26 2009-04-30 The Hershey Company High antioxidant levels in cocoa-based beverages
EP2060251B1 (de) 2007-11-17 2011-03-23 Cognis IP Management GmbH Verfahren zur Herstellung von Wirkstoffkonzentraten
EP2080517A1 (en) * 2008-01-18 2009-07-22 Unilever N.V. Process for obtaining dried plant material
US20090324757A1 (en) * 2008-03-31 2009-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions and Methods for Modulating Visceral Sensation and/or Gastrointestinal Reflex Activity
JP5276885B2 (ja) * 2008-04-11 2013-08-28 株式会社耐熱性酵素研究所 キチン又はキトサンを含む分解性複合材料
US7923435B2 (en) 2008-04-21 2011-04-12 Phytopharm Plc Hoodia plant extract with improved flavor
US20090263510A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-22 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Process of making Hoodia plant extract with improved flavor
US20110236438A1 (en) 2008-12-08 2011-09-29 Hadasit Medical Research Services & Development Limited Method of treatment of diseases using hoodia extracts
US20110003021A1 (en) 2009-07-01 2011-01-06 Jason Christian Grovenor Halford Composition and method for reducing food intake
EP2329836A1 (en) 2009-12-03 2011-06-08 I.R.B. Istituto Di Ricerche Biotecnologiche S.r.l. Extracts obtained from hoodia gordonii cells lines, their preparation and use
WO2012022880A2 (fr) 2010-07-29 2012-02-23 Universite De Strasbourg Procede de synthese de steroïdes
CN102462690B (zh) * 2010-11-11 2013-04-17 中国科学院上海药物研究所 3，8，12，14，17，20位氧取代孕甾烯糖苷类化合物在制备抑制食欲的药物中的用途
EP3036999B1 (en) 2010-12-20 2019-04-24 Hill's Pet Nutrition, Inc. Pet food compositions for inducing a satiety response
WO2013103919A2 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Elcelyx Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating metabolic disorders
PT2661266T (pt) 2011-01-07 2020-11-30 Anji Pharma Us Llc Terapias com base em ligandos do recetor quimiossensorial
US9795792B2 (en) 2011-02-25 2017-10-24 Medtronic, Inc. Emergency mode switching for non-pacing modes
ES2832773T3 (es) 2012-01-06 2021-06-11 Anji Pharma Us Llc Composiciones de biguanida y métodos de tratamiento de trastornos metabólicos
US9456916B2 (en) 2013-03-12 2016-10-04 Medibotics Llc Device for selectively reducing absorption of unhealthy food
JP2015522080A (ja) 2012-07-11 2015-08-03 エルセリクス セラピューティクス インコーポレイテッド スタチン、ビグアナイド、およびさらなる薬剤を含む心血管代謝性リスクを減少させるための組成物
SG10201705437SA (en) 2013-01-05 2017-07-28 Elcelyx Therapeutics Inc Delayed-release composition comprising biguanide
US9067070B2 (en) 2013-03-12 2015-06-30 Medibotics Llc Dysgeusia-inducing neurostimulation for modifying consumption of a selected nutrient type
US9011365B2 (en) 2013-03-12 2015-04-21 Medibotics Llc Adjustable gastrointestinal bifurcation (AGB) for reduced absorption of unhealthy food
WO2014194068A1 (en) * 2013-05-29 2014-12-04 Northeastern University Glycosylated cardiotonic steroids
CN103755762B (zh) * 2014-01-30 2016-06-01 中国科学院上海有机化学研究所 果同尼皂苷f及其衍生物的中间体、制备方法和用途及果同尼皂苷f衍生物
GB2544416B (en) * 2015-11-13 2017-11-01 Lykke Res Ltd A method for producing a medium containing steroidal glycosides from plant cells of the genus Hoodia

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4062950A (en) * 1973-09-22 1977-12-13 Bayer Aktiengesellschaft Amino sugar derivatives
FR2348655A1 (fr) 1976-04-20 1977-11-18 Sopharga Lab Nouvelle substance alimentaire ou dietetique ayant une structure alveolaire et son procede de preparation
US4185116A (en) 1976-09-28 1980-01-22 Pfizer Inc. L- and DL- Phenylglycines to treat diseases or conditions attributable to reduced carbohydrate metabolism
USPP4199P (en) 1977-01-18 1978-01-24 B. L. Cobia, Inc. Milkweed plant family
DE2719912C3 (de) * 1977-05-04 1979-12-06 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Verfahren zur Isolierung von 0- |4,6-Dideoxy-4- [JJl S-O,4,6/5)-4,5,6-trihydroxy-3-hydroxymethyl-2cyclohexen-1-yl] -amino] - a -D-glucopyranosyl} -(I Pfeil nach rechts 4)-0- a D-glucopyranosyl-(l Pfeil nach rechts 4)-D-glucopyranose aus Kulturbrühen
US4130714A (en) * 1977-05-23 1978-12-19 Pfizer Inc. Hydantoin therapeutic agents
NO154918C (no) * 1977-08-27 1987-01-14 Bayer Ag Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk aktive derivater av 3,4,5-trihydroksypiperidin.
JPS5953920B2 (ja) * 1977-12-28 1984-12-27 東洋醸造株式会社 新規なアミノ糖化合物およびその製法
IE47592B1 (en) * 1977-12-29 1984-05-02 Ici Ltd Enzyme inhibitory phthalazin-4-ylacetic acid derivatives, pharmaceutical compositions thereof,and process for their manufacture
US4273763A (en) 1978-01-23 1981-06-16 Efamol Limited Pharmaceutical and dietary compositions
JPS5745185A (en) * 1980-07-21 1982-03-13 Eisai Co Ltd Hydantoin derivative and its preparation
US4791126A (en) * 1980-08-22 1988-12-13 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Rhodanine derivatives, process for their preparation, and aldose reductase inhibitor containing the rhodanine derivatives as active ingredients
JPS5740478A (en) * 1980-08-22 1982-03-06 Ono Pharmaceut Co Ltd Rhodanine derivative, its preparation and aldose reductase inhibitor containing rhodanine derivative
EP0056194B1 (en) * 1981-01-05 1984-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. N-substituted pseudo-aminosugars, their production and use
CA1176269A (en) * 1981-03-02 1984-10-16 Kazimir Sestanj N-naphthoylglycine derivatives
US4377500A (en) 1981-07-08 1983-03-22 The Standard Oil Co. Catalysts
US4436745A (en) * 1982-04-15 1984-03-13 Alcon Laboratories, Inc. Method of inhibiting aldose reductase activity
US4438272A (en) * 1982-04-15 1984-03-20 Alcon Laboratories, Inc. Spiro-(fluoren-9,4'-imidazolidine)-2',5'-diones
JPS58194818A (ja) 1982-05-10 1983-11-12 Iwasaki Shuzo サボテン中の水溶性多糖及び繊維の取得方法
ES8404693A1 (es) * 1982-08-12 1984-05-01 Nativelle Sa Ets Procedimiento de preparacion de nuevos amino-14 esteroides.
AU570439B2 (en) 1983-03-28 1988-03-17 Compression Labs, Inc. A combined intraframe and interframe transform coding system
HU201675B (en) 1983-08-26 1990-12-28 Ivan Balkanyi Process for producing oral pharmaceutical compositions with unappetizing effect
US5066659A (en) * 1984-10-30 1991-11-19 Pfizer Inc. Spiro-heteroazalones for treatment of diabetic complications
US4634765A (en) * 1984-12-18 1987-01-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Homodisaccharide hypoglycemic agents
CA1270837A (en) 1984-12-21 1990-06-26 Hoffmann-La Roche Limited Oxetanones
US5246960A (en) 1984-12-21 1993-09-21 Hoffmann-La Roche Inc. Oxetanones
IT1207504B (it) 1985-09-26 1989-05-25 Crinos Industria Farmaco Composizione moderatrice dell'appetito ed antigastrica.
IT1190400B (it) 1985-10-04 1988-02-16 Istituto Biochimico Italiano Derivati dell'acido 19,20-bis,nor-prostanoico ad attivita' antiulcera e anoressivca,procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche
GB8524663D0 (en) * 1985-10-07 1985-11-13 Fujisawa Pharmaceutical Co Quinazoline derivatives
US4939140A (en) * 1985-11-07 1990-07-03 Pfizer Inc. Heterocyclic oxophthalazinyl acetic acids
US4757151A (en) 1985-11-14 1988-07-12 Warner-Lambert Company 2-substituted-[2-substituted-amino]-N-arylalkyl-3-[indol-3-yl]
US4652553A (en) * 1985-11-25 1987-03-24 Merck & Co., Inc. Steroidal glycolipids as host resistance stimulators
GB8600489D0 (en) 1986-01-09 1986-02-12 Erba Farmitalia Aminoglycoside steroids
AU602641B2 (en) * 1986-04-17 1990-10-18 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Thiolactam-N-acetic acid derivatives, their production and use
EP0264586B1 (en) * 1986-08-28 1991-04-03 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Hydantoin derivatives for treating complications of diabetes
ZA883929B (en) 1987-06-22 1990-02-28 Hoffmann La Roche Cholecystokinin analogs for controlling appetite
US5175154A (en) * 1987-11-25 1992-12-29 Research Corporation Technologies, Inc. 5 α-pregnan-20-ones and 5-pregnen-20-ones and related compounds
US5192772A (en) * 1987-12-09 1993-03-09 Nippon Shinyaku Co. Ltd. Therapeutic agents
GB8801037D0 (en) * 1988-01-18 1988-02-17 Plessey Co Ltd Improvements relating to fuel supply systems
US5252572A (en) * 1988-02-03 1993-10-12 Chinoin Gyogyszer- Es Vegyeszeti Termekek Gyara Rt. Pyridopyrimidine derivatives, pharmaceutical compositions containing them and process for preparing same
EP0344383A1 (en) * 1988-06-02 1989-12-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel alpha-Glucosidase inhibitors
DE3836675A1 (de) * 1988-10-28 1990-05-03 Hoechst Ag Glykosidase-inhibitor salbostatin, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung
US4978669A (en) 1989-06-08 1990-12-18 Neurex Corporation Method of suppressing appetite by administration of tetrahydro-beta-carboline derivatives
JPH03120227A (ja) 1989-10-02 1991-05-22 Shigeo Ochi 飲食物消化分解産物吸収抑制剤
US4980357A (en) * 1990-03-01 1990-12-25 Pfizer Inc. Azolidinedione derivatives
US5037831A (en) * 1990-05-21 1991-08-06 American Home Products Corporation Spiro-isoquinoline-pyrrolidines and analogs thereof useful as aldose reductase inhibitors
US5504078A (en) * 1990-06-08 1996-04-02 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. α-glucosidase inhibitors
GB9016978D0 (en) * 1990-08-02 1990-09-19 Ici Plc Acetamide derivatives
US5091418A (en) * 1990-09-28 1992-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Novel alpha-glucosidase inhibitor, pradimicin Q
US5217877A (en) * 1990-09-28 1993-06-08 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of α-glucosidase inhibitor, pradimicin Q
US6100048A (en) 1992-04-10 2000-08-08 Oregon Health Sciences University Methods and reagents for discovering and using mammalian melanocortin receptor agonists and antagonists to modulate feeding behavior in animals
JP2789134B2 (ja) * 1992-09-28 1998-08-20 ファイザー・インク． 糖尿病の合併症を制御する置換ピリミジン類
CZ285021B6 (cs) 1992-09-30 1999-05-12 Motorola, Inc. Způsob a systém pro spolehlivé doručování zpráv
GB9307833D0 (en) 1993-04-15 1993-06-02 Glaxo Inc Modulators of cholecystokinin and gastrin
FR2706255B1 (fr) 1993-06-17 1995-10-27 Univ Rennes Composition à usage alimentaire et/ou pharmaceutique pauvre en polyamines et applications thérapeutiques.
WO1995000161A1 (en) 1993-06-18 1995-01-05 University Of Cincinnati Neuropeptide y antagonists and agonists
US5516516A (en) 1993-10-19 1996-05-14 Cherksey; Bruce D. Method of preparing muira puama extract and its use for decreasing body fat percentage and increasing lean muscle mass
JPH07184548A (ja) * 1993-12-28 1995-07-25 Meiji Seito Kk 口腔用組成物
US6309853B1 (en) * 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US5698199A (en) 1995-03-10 1997-12-16 Kao Corporation Lipolysis acceleration method
EP0832065B1 (en) 1995-06-06 2001-10-10 Pfizer Inc. Substituted n-(indole-2-carbonyl)-glycinamides and derivatives as glycogen phosphorylase inhibitors
DE69522718T2 (de) 1995-06-06 2002-02-07 Pfizer Substituierte n-(indol-2-carbonyl)-amide und derivate als glycogen phosphorylase inhibitoren
JPH08332028A (ja) 1995-06-12 1996-12-17 Takashi Mizuno サボテン成分入り冷菓とその製法
US5693327A (en) 1995-07-12 1997-12-02 Shah; Eladevi Herbal compositions
WO1997015671A1 (en) 1995-10-26 1997-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Luminal cholecystokinin-releasing factor
US5824668A (en) 1996-11-07 1998-10-20 Supergen, Inc. Formulation for administration of steroid compounds
TW432073B (en) 1995-12-28 2001-05-01 Pfizer Pyrazolopyridine compounds
US5908609A (en) 1996-06-10 1999-06-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight
US5932779A (en) * 1996-06-10 1999-08-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight
WO1998020121A1 (en) 1996-11-06 1998-05-14 Children's Medical Center Corporation Transgenic animal expressing a syndecan in the regions of hypothalamus
AU5348098A (en) 1996-12-17 1998-07-15 Quadrant Holdings Cambridge Limited Melanocortins
CA2217698A1 (en) 1996-12-20 1998-06-20 Eli Lilly And Company Anti-obesity proteins
US5798101A (en) 1997-01-22 1998-08-25 Hpf, L.L.C. Herbal appetite suppressant and weight loss composition
JP2002538757A (ja) 1997-03-26 2002-11-12 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 食欲制御活性を有するポリペプチド
EA002885B1 (ru) * 1997-04-15 2002-10-31 Ссир Средства растительного происхождения для подавления аппетита
FR2771105A1 (fr) 1997-11-20 1999-05-21 Vitasterol Utilisation du fusarium monoliforme pour la preparation des derives 7alpha-hydroxyles de la dehydroepiandrosterone et de la pregnenolone
GB2355657B (en) 1999-10-27 2004-07-28 Phytopharm Plc Inhibitors Of Gastric Acid Secretion
GB2363985B (en) * 2000-06-30 2004-09-29 Phytopharm Plc Extracts,compounds & pharmaceutical compositions having anti-diabetic activity and their use

Also Published As

Publication number Publication date
US20040234634A1 (en) 2004-11-25
DE69836321D1 (de) 2006-12-14
CA2584411A1 (en) 1998-10-22
ES2276460T3 (es) 2007-06-16
AP1291A (en) 2004-08-02
GT199800076AA (es) 1999-12-01
KR20040004407A (ko) 2004-01-13
NZ525022A (en) 2004-05-28
GT199800076BA (es) 1999-12-01
US7166611B2 (en) 2007-01-23
CA2283564C (en) 2007-07-10
JP2003026591A (ja) 2003-01-29
EP1222927B1 (en) 2013-11-20
HUP0000838A2 (hu) 2000-10-28
BR9808593A (pt) 2000-05-23
ID22888A (id) 1999-12-16
JP3553086B2 (ja) 2004-08-11
ATE502041T1 (de) 2011-04-15
ATE422359T1 (de) 2009-02-15
GB2360520B (en) 2001-11-07
PT973534E (pt) 2007-02-28
WO1998046243A2 (en) 1998-10-22
IS5196A (is) 1999-09-24
EA200200392A1 (ru) 2002-08-29
TW589187B (en) 2004-06-01
IL131659A0 (en) 2001-01-28
GB0117039D0 (en) 2001-09-05
JP2000510482A (ja) 2000-08-15
NZ516696A (en) 2003-08-29
GB2360519A (en) 2001-09-26
NZ525021A (en) 2004-05-28
DK0973534T3 (da) 2007-03-12
EP0973534B1 (en) 2006-11-02
US20060205931A1 (en) 2006-09-14
NO994992D0 (no) 1999-10-14
GEP20022709B (en) 2002-06-25
IL158465A0 (en) 2004-05-12
EP0973534A1 (en) 2000-01-26
CA2283564A1 (en) 1998-10-22
YU52199A (sh) 2003-02-28
ATE344046T1 (de) 2006-11-15
KR100891756B1 (ko) 2009-04-07
GB0117041D0 (en) 2001-09-05
US20040228935A1 (en) 2004-11-18
PT1213020E (pt) 2009-04-24
JP2002205997A (ja) 2002-07-23
PL196015B1 (pl) 2007-11-30
GB2360520A (en) 2001-09-26
DE69836321T2 (de) 2007-06-28
NZ337422A (en) 2002-05-31
CN100378118C (zh) 2008-04-02
ES2321162T3 (es) 2009-06-03
EP1438965A1 (en) 2004-07-21
TW539551B (en) 2003-07-01
OA11166A (en) 2003-04-28
IL131659A (en) 2005-07-25
EP1222927A2 (en) 2002-07-17
KR100510614B1 (ko) 2005-08-30
US20020168427A1 (en) 2002-11-14
PL197783B1 (pl) 2008-04-30
ES2363230T3 (es) 2011-07-27
EA002885B1 (ru) 2002-10-31
NO994992L (no) 1999-12-14
PL201487B1 (pl) 2009-04-30
TW200300093A (en) 2003-05-16
TWI253932B (en) 2006-05-01
GB2338235B (en) 2001-11-14
TR199902540T2 (xx) 2000-01-21
EA199900932A1 (ru) 2000-04-24
MY141674A (en) 2010-05-31
CN101239089A (zh) 2008-08-13
TR200001846T2 (tr) 2000-11-21
EE9900497A (et) 2000-06-15
GB2338235A (en) 1999-12-15
AP9901673A0 (en) 1999-12-31
DE69842189D1 (de) 2011-04-28
EP1598054B1 (en) 2011-03-16
EP1213020A2 (en) 2002-06-12
UA72439C2 (en) 2005-03-15
BG103795A (en) 2000-05-31
AP2003002730A0 (en) 2003-06-30
EP1213020B1 (en) 2009-02-11
US6376657B1 (en) 2002-04-23
US20030086984A1 (en) 2003-05-08
PE85699A1 (es) 1999-09-15
GEP20022788B (en) 2002-09-25
SA98190501B1 (ar) 2006-07-30
TW200300094A (en) 2003-05-16
EP1598054A3 (en) 2009-06-10
KR20010006424A (ko) 2001-01-26
NZ516695A (en) 2003-08-29
GT199800076A (es) 1999-12-01
IL158466A0 (en) 2004-05-12
EP1213020A3 (en) 2005-03-09
AU7061398A (en) 1998-11-11
CN1252000A (zh) 2000-05-03
HK1026373A1 (en) 2000-12-15
ZA983170B (en) 1999-10-15
DE69840552D1 (de) 2009-03-26
CN101239090A (zh) 2008-08-13
EP1213020A8 (en) 2003-12-17
WO1998046243A3 (en) 1999-02-25
EP1222927A3 (en) 2002-10-30
GB9919797D0 (en) 1999-10-27
HUP0000838A3 (en) 2001-04-28
AU746414B2 (en) 2002-05-02
EP1598054A2 (en) 2005-11-23
SG120054A1 (en) 2006-03-28
GB2360519B (en) 2001-11-28
AP2003002729A0 (en) 2003-06-30
PL336498A1 (en) 2000-07-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK141899A3 (en) Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity
AU780886B2 (en) Appetite suppresant steroidal glycosides
CZ359999A3 (cs) Farmaceutická kompozice snižující chuť k jídlu
MXPA99009443A (en) Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity
HRP980456A2 (en) Pharmaceutical compositions having appetite suppressant activity