PL201487B1 - Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego - Google Patents

Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego

Info

Publication number
PL201487B1
PL201487B1 PL380957A PL38095798A PL201487B1 PL 201487 B1 PL201487 B1 PL 201487B1 PL 380957 A PL380957 A PL 380957A PL 38095798 A PL38095798 A PL 38095798A PL 201487 B1 PL201487 B1 PL 201487B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
extract
group
sample
appetite suppressant
plant
Prior art date
Application number
PL380957A
Other languages
English (en)
Inventor
Heerden Fanie Retief Van
Robert Vleggaar
Roelof Marthinus Horak
Robin Alec Learmonth
Vinesh Maharaj
Rory Desmond Whittal
Original Assignee
Csir
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Csir filed Critical Csir
Publication of PL201487B1 publication Critical patent/PL201487B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/33—Cactaceae (Cactus family), e.g. pricklypear or Cereus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A61K31/78—Polymers containing oxygen of acrylic acid or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/27—Asclepiadaceae (Milkweed family), e.g. hoya
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
    • C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
    • C07H13/08—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals directly attached to carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/04—Disaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
    • C07H5/08—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium
    • C07H5/10—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium to sulfur, selenium or tellurium to sulfur
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J15/00—Stereochemically pure steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen having a partially or totally inverted skeleton, e.g. retrosteroids, L-isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J17/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005—Glycosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/002—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa not substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/0025—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C07J7/0015—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa
    • C07J7/0025—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16
    • C07J7/0035—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group not substituted in position 17 alfa substituted in position 16 by a hydroxy group free esterified or etherified
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/0065—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by an OH group free esterified or etherified
    • C07J7/007—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by an OH group free esterified or etherified not substituted in position 17 alfa
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

Wynalazek dotyczy ekstraktu z ro sliny ro- dzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawie- rajacego skuteczn a do hamowania laknienia ilosc hamuj acego laknienie glikozydu steroido- wego o wzorze (1), a tak ze sposobu wytwarza- nia takiego ekstraktu, srodka zawieraj acego ekstrakt oraz zastosowania ekstraktu do wytwa- rzania leku do leczenia, zapobiegania lub zwal- czania oty lo sci. PL PL PL PL PL PL PL

Description

(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 201487 (21) Numer zgłoszenia: 380957 (13) B1 (22) Data zgłoszenia: 15.04.1998 (62) Numer zgłoszenia, z którego nastąpiło wydzielenie:
336498 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
15.04.1998, PCT/GB98/01100 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
22.10.1998, WO98/46243 PCT Gazette nr 42/98 (51) Int.Cl.
A61K 36/27 (2006.01)
A61K 36/33 (2006.01)
A61K 31/704 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01) A61P 3/04 (2006.01)
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważone błędy
Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego
(73) Uprawniony z patentu: CSIR,Pretoria,ZA
(30) Pierwszeństwo: 15.04.1997,ZA,97/3201 (72) Twórca(y) wynalazku: Fanie Retief Van Heerden,Johannesburg,ZA
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 03.07.2000 BUP 14/00 Robert Vleggaar,Pretoria,ZA Roelof Marthinus Horak,Pretoria,ZA Robin Alec Learmonth,Pretoria,ZA Vinesh Maharaj,Pretoria,ZA Rory Desmond Whittal,Pretoria,ZA
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: 30.04.2009 WUP 04/09 (74) Pełnomocnik: Tykarski Wojciech, SULIMA-GRABOWSKA-SIERZPUTOWSKA,
Biuro Patentów i Znaków Towarowych Sp.J.
(57) Wynalazek dotyczy ekstraktu z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawierającego skuteczną do hamowania łaknienia ilość hamującego łaknienie glikozydu steroidowego o wzorze (1), a także sposobu wytwarzania takiego ekstraktu, środka zawierającego ekstrakt oraz zastosowania ekstraktu do wytwarzania leku do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
PL 201 487 B1
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstraktu roślinnego, środka o czynnoś ci hamowania ł aknienia i zastosowania ekstraktu roś linnego.
Ekstrakt można wytworzyć z materiału roślinnego, takiego jak łodygi i korzenie takich roślin rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia. Rodzaj Trichocaulon i rodzaj Hoodia obejmuje rośliny soczyste rosnące w jałowych regionach znajdujących się w Ameryce Południowej. Botanische jahrbUcher fur systematik pflanzengeschiete und pflanzengeographie, vol. 115, nr 2, str. 145-270 P. Bruynsa jest zasadniczo pracą przeglądową z dziedziny taksonomii i zawiera odniesienia do rodzajów Trichocaulon i Hoodia.
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania ekstraktu z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawierającego skuteczną do hamowania łaknienia ilość hamującego łaknienie glikozydu steroidowego o wzorze (1)
charakteryzującego się tym, że na materiał roślinny działa się rozpuszczalnikiem dla ekstrakcji frakcji o czynności hamowania łaknienia, oddziela się roztwór ekstrakcyjny od reszty materiału roślinnego, usuwa się rozpuszczalnik z roztworu ekstrakcyjnego i wyodrębnia się ekstrakt.
Korzystnie stosuje się roślinę rodzaju Trichocaulon wybraną z grupy obejmującej gatunek Trichocaulon piliferum i Trichocaulon officinale i roślinę rodzaju Hoodia wybraną z grupy obejmującej gatunek Hoodia currorii, Hoodia gordonii i Hoodia lugardii.
W szczególności ekstrakt ekstrahuje się z rośliny wybranej z grupy obejmującej gatunek Hoodia currorii, Hoodia gordonii i Hoodia lugardii.
W sposobie korzystnie zatęża się substancję czynną w wyekstrahowanym materiale drogą dalszej ekstrakcji rozpuszczalnikiem. Jako rozpuszczalnik w etapie ekstrakcji rozpuszczalnikiem lub etapach ekstrakcji rozpuszczalnikiem stosuje się jeden lub większą liczbę rozpuszczalników wybranych z grupy obejmującej chlorek metylenu, wodę, metanol, heksan, octan etylu i ich mieszaniny.
W korzystnej odmianie zatęża się substancję czynną w wyekstrahowanym materiale drogą rozdzielania chromatograficznego. Korzystnie w etapie rozdzielania chromatograficznego jako eluent stosuje się jeden lub większą liczbę rozpuszczalników wybranych z grupy obejmującej chloroform, metanol, octan etylu, heksan i ich mieszaniny. Także korzystnie przy rozdzielaniu chromatograficznym w kolumnie, zbiera się eluat we frakcjach z kolumny, ocenia się frakcje dla określenia ich czynności hamowania łaknienia i wybiera się co najmniej jedną frakcję zawierającą substancję hamującą łaknienie.
W korzystnej odmianie ekstrakt poddaje się obróbce z wytworzeniem sypkiego proszku.
Wynalazek dotyczy także ekstraktu roślinnego zawierającego środek hamujący łaknienie, wytworzonego sposobem określonym powyżej. Korzystnie ekstrakt nadaje się do stosowania jako lek o czynności hamowania łaknienia, lub jako lek do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
Wynalazek dotyczy również środka o czynności hamowania łaknienia, charakteryzującego się tym, że zawiera ekstrakt określony powyżej. Środek ten korzystnie jest zmieszany z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem, a także sformułowany w jednostkową postać dawkowaną.
Korzystnym środkiem jest produkt żywnościowy lub napój.
Wynalazek dotyczy też sposobu wytwarzania ekstraktu roślinnego z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawierającego skuteczną do hamowania łaknienia ilość hamującego łaknienie glikozydu steroidowego o wzorze (1)
PL 201 487 B1
charakteryzującego się tym, że prasuje się materiał roślinny, oddziela się sok od stałego materiału roślinnego i wyodrębnia się sok wolny od stałego materiału roślinnego z wytworzeniem ekstraktu. Korzystnie ekstrakt suszy się z wytworzeniem sypkiego proszku.
Wynalazek dotyczy ekstraktu roślinnego zawierającego środek hamujący łaknienie wytworzonego sposobem określonym powyżej. Ekstrakt korzystnie nadaje się do stosowania jako lek o czynności hamowania łaknienia, lub jako lek do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
Wynalazek dotyczy środka o czynności hamowania łaknienia charakteryzującego się tym, że zawiera powyższy ekstrakt. Środek ten korzystnie jest zmieszany z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem, a także sformułowany w jednostkową postać dawkowaną.
Korzystnym środkiem jest produkt żywnościowy lub napój.
Wynalazek dotyczy także zastosowania powyższego ekstraktu do wytwarzania leku do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
Próby biologiczne prowadzone przez zgłaszającego na szczurach wykazały, że ekstrakty mają czynność hamowania łaknienia.
Materiał roślinny może być homogenizowany w obecności odpowiedniego rozpuszczalnika, np. mieszaniny rozpuszczalników metanol/chlorek metylenu, z użyciem urządzenia, takiego jak mieszarka Waringa. Roztwór ekstrakcyjny można następnie oddzielić od pozostałego materiału roślinnego z zastosowaniem odpowiedniego sposobu rozdzielania, takiego jak, np. odsączenia lub odwirowania. Rozpuszczalnik ten można usunąć z użyciem wyparki rotacyjnej, korzystnie w łaźni wodnej w temperaturze wynoszącej 60°C. Oddzielony surowy ekstrakt można następnie poddać ekstrakcji chlorkiem metylenu i wody, po czym rozdzielić ekstrakty w chlorku metylenu i w wodzie. Ekstrakt w chlorku metylenu może zawierać rozpuszczalnik, który usuwa się korzystnie drogą odparowania w wyparce rotacyjnej i uzyskany ekstrakt może być dodatkowo oczyszczany drogą ekstrakcji z użyciem mieszaniny metanol/heksan. Produkt z ekstrakcji mieszaniną metanol/heksan można następnie oddzielić z uzyskaniem ekstraktu w metanolu i ekstraktu w heksanie. Ekstrakt w metanolu można następnie odparować w celu usunięcia rozpuszczalnika z uzyskaniem częściowo oczyszczonego czynnego ekstraktu.
Częściowo oczyszczony czynny ekstrakt można rozpuścić w metanolu i dodatkowo frakcjonować drogą chromatografii kolumnowej z zastosowaniem żelu krzemionkowego jako ośrodka adsorbującego i mieszaniny chloroform/30% metanol jako eluentu. Można otrzymać wiele różnych frakcji i każ d ą z nich moż na oceniać poprzez zastosowanie odpowiednich procedur prób biologicznych i określić ich czynność hamowania łaknienia.
Frakcję o czynności hamowania łaknienia można korzystnie dodatkowo frakcjonować drogą chromatografii kolumnowej z użyciem żelu krzemionkowego jako ośrodka adsorpcyjnego i mieszaniny chloroform:metanol w stosunku 9:1 jako rozpuszczalnika i uzyskane podfrakcje można poddawać próbom biologicznym odnośnie ich czynności hamowania łaknienia. Podfrakcje wykazującą czynność hamowania łaknienia, w razie potrzeby, można dodatkowo frakcjonować i oczyszczać, dogodnie z uż yciem metody chromatografii kolumnowej na ż elu krzemionkowym jako oś rodku adsorpcyjnym i z użyciem mieszaniny chloroform:metanol w stosunku 9:1 jako rozpuszczalnika. Uzyskane oczyszczone frakcje można ponownie oceniać drogą odpowiednich procedur prób biologicznych pod względem ich czynności hamowania łaknienia.
Zgłaszający stwierdził, że co najmniej jedna taka oczyszczona frakcja wykazuje dobrą czynność hamowania łaknienia i czynną zasadę we frakcji zidentyfikowano drogą konwencjonalnych technik
PL 201 487 B1 chemicznych w tym nuklearnego rezonansu magnetycznego i stwierdzono że jest nią związek o wzorze strukturalnym
Zgodnie z nomenklaturą S.I. czynną zasadą (1) jest związek 3-O-[-e-D-tewetopiranozylo(1 >4)-e-D-cymaropiranozylo-(1 >4)-e-D-cymaropiranozylo]-12e-O-tygloiloksy-14-hydroksy-14e-pregn-50-en-20-on (C47H74O15 M+878).
Ekstrakt można przetworzyć lub wysuszyć i usunąć wodę, np. drogą suszenia rozpyłowego, liofilizacji lub suszenia pod próżnią z wytworzeniem sypkiego proszku.
Wynalazek dotyczy zatem środka o czynności hamowania łaknienia zawierającą opisany powyżej ekstrakt.
Środek można mieszać z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem i ewentualnie formułować w jednostkową postać dawkowania. Środkiem może być produkt żywnościowy lub napój.
W dalszych postaciach wynalazek dotyczy zastosowania ekstraktu opisanego powyżej do wytwarzania leku do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości, ekstraktu opisanego powyżej do stosowania jako lek o czynności hamowania łaknienia lub do stosowania jako lek do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
Związek (1) jest nowym związkiem i ten trisacharyd steroidowy ma właściwości hamowania łaknienia. Wynalazek obejmuje również kompozycję oraz preparat mające czynność hamowania łaknienia, w których substancję czynną stanowi ekstrakt uzyskany z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, jak opisano powyżej.
Substancją czynną jest związek o wzorze (1), wyekstrahowany z rośliny rodzaju Trichocaulon lub Hoodia. Roślina może być z gatunku Trichocaulon officinale lub Trichocaulon piliferum, albo gatunku Hoodia currorii, Hoodia gordonii lub Hoodia lugardii.
Środkiem hamującym łaknienie może być, przykładowo, dowolny naturalny związek o wzorze:
Środek lub preparat hamujące łaknienie mogą składać się ze środka hamującego łaknienie zmieszanego z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem. W razie potrzeby można dodać innych odpowiednich substancji pomocniczych, w tym stabilizatora i takie inne składniki.
PL 201 487 B1
Wynalazek obejmuje zastosowanie związku (1) w wytwarzaniu leku mającego czynność hamowania łaknienia, jak opisano powyżej.
Wynalazek ponadto obejmuje związek (1) do zastosowania jako lek mający czynność hamowania łaknienia, jak opisano powyżej.
Opisano tu sposób ekstrahowania glikozydu steroidowego o czynności hamowania łaknienia z materiału roślinnego uzyskanego z roś liny rodzaju Trichocaulon lub Hoodia. Wynalazek swoim zakresem obejmuje więc ekstrakt uzyskany z materiału roślinnego rodzaju Trichocaulon lub Hoodia i zawierają cy zasadniczo czysty glikozyd steroidowy o wzorze (1), jak opisano powyż ej.
Wynalazek swoim zakresem obejmuje także artykuły żywnościowe oraz napój zawierające skuteczną ilość glikozydu steroidowego o wzorze (1), który po spożyciu ma działanie hamowania łaknienia.
Molekularne badania genetyczne są prowadzone w celu lepszego zrozumienia regulacji łaknienia, nasycenia i wagi ciała. Badania te ujawniły wiele centralnych szlaków regulatorowych, mediowanych przez wiele neuropeptydów. Normalną wagę ciała utrzymuje się w wyniku skomplikowanej równowagi pomiędzy dostarczana energią, przyjmowaniem pokarmu i zużyciem energii. Na homeostazę energii działa wiele czynników, ostatecznie kontrolowane przez mózg. Do takich różnych sygnałów należą zmysł węchu i smaku oraz sygnały układu żołądkowo-jelitowego, takie jak rozszerzenie przewodu żołądkowo-jelitowego, chemiczne sygnały do błony śluzowej żołądka i przenoszone przez krew metabolity, takie jak kwasy tłuszczowe i glukoza.
Dowiedziono, że w układzie ośrodkowym neuropeptyd ”Y (NPY) ujemnie regulowany przez leptynę, jest jednym z dodatnich regulatorów zachowania odżywiania się. Wykazano, że ekspresja endogenicznego antagonisty receptorów melanokortyny przyczynia się do otyłości w konkretnym modelu (myszy ob/ob). Rzeczywiście defekt receptora melanokortyny MC4 w pełni powtarza syndrom otyłości. Do innych mediatorów, w przypadku których wykazano, że odgrywają rolę w bilansie energii, należą bombesyna, galonina i glukagono-podobny peptyd-1.
Wynalazek oraz jego skuteczność dodatkowo będzie opisana poprzez poniższe przykłady i rysunki, bez ograniczenia zakresu ochrony wynalazku.
Na rysunkach:
Figura 1 obrazuje diagram przebiegu ogólnego sposobu ekstrahowania pierwszego surowego ekstraktu hamującego łaknienie i oczyszczonego ekstraktu hamującego łaknienie z materiału rośliny rodzaju Trichocaulon lub Hoodia;
Figura 2 jest graficznym przedstawieniem prób biologicznych prowadzonych na szczurach z uż yciem częściowo oczyszczonego ekstraktu Trichocaulon piliferum w metanolu;
Figury 3 i 4 łącznie są schematycznym przedstawieniem sposobu wytwarzania ekstraktu z materiału rośliny rodzaju Trichocaulon lub Hoodia; a
Figury 5 i 6 są graficznym przedstawieniem procentowej zmiany masy ciała szczurów dla różnych grup odpowiednio dla dni od -7 do 7 i dni 0 - 7, w badaniu z powtarzaniem dawki, z użyciem ekstraktu soku i suszonego rozpryskowo ekstraktu soku z Hoodia gordonii.
P r z y k ł a d 1
Ogólny sposób ekstrahowania pierwszego surowego ekstraktu hamującego łaknienie i oczyszczonego ekstraktu hamującego łaknienie z materiału rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia ilustruje diagram przebiegu na figurze 1.
P r z y k ł a d 2
Próby biologiczne prowadzone na szczurach z użyciem częściowo oczyszczonego ekstraktu w metanolu uzyskanego sposobem podanym w przykł adzie 1, wykazał y, ż e ekstrakt rzeczywiś cie wykazuje czynność hamowania łaknienia. Czynność hamowania łaknienia czynnego ekstraktu mogą ilustrować typowe przykłady działania ekstraktu Trichocaulon piliferum w metanolu na szczurach poprzez graficzne przedstawienie na figurze 2.
Jest oczywiste z figury 2, że grupa badana szczurów, którym podawano ekstrakt dnia 5, wykazywała zasadnicze zmniejszenie przyjmowania pokarmu w ciągu następnych dwóch dni, podczas gdy grupa kontrolna nie ujawniła porównywalnego zmniejszenia przyjmowania pokarmu. Przyjmowanie pokarmu przez grupę badaną powróciło do normy, a rzeczywiście zwiększyło się od dnia 8.
P r z y k ł a d 3
Korzystną postać sposobu według wynalazku wytwarzania ekstraktu mającego czynność hamowania łaknienia zilustrowano schematycznie przykładowo na figurach 3 i 4, które to dwie figury
PL 201 487 B1 razem ilustrują wyczerpująco sposób. Jednak można użyć różnych innych sposobów, co jest zrozumiałe dla fachowców.
Zgodnie z figurą 3 materiał rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia umieszcza się w mieszarce 3, np. mieszarce Waringa, z użyciem linii zasilania 1, z rozpuszczalnikiem w postaci roztworu chlorek metylenu/metanol dostarczonym poprzez linię zasilania 2. Homogenizowany produkt dostarcza się poprzez linię 4 do etapu rozdzielania 5, np. poprzez odsączenie lub odwirowanie, i pozostały materiał roślinny usuwa się z użyciem linii 27.
Mieszaninę rozpuszczalnik/ekstrakt dostarcza się z użyciem linii 6 do etapu odparowania 7, gdzie rozpuszczalnik usuwa się, np. z użyciem wyparki rotacyjnej. Wysuszony surowy ekstrakt doprowadza się z użyciem linii 8 do etapu dalszego ekstrahowania 9 z dodawaniem roztworu chlorek metylenu/woda wprowadzonego z użyciem linii zasilania 29 w celu przeprowadzenia dodatkowej ekstrakcji, po czym do etapu rozdzielania 13 z użyciem linii 11, gdzie frakcję wodną usuwa się z użyciem linii 31. Rozpuszczoną frakcję ekstraktu doprowadza się z użyciem linii 15 do etapu suszenia 17, gdzie rozpuszczalnik odparowuje się, np. z użyciem wyparki rotacyjnej.
Zgodnie z figurą 4 wysuszony ekstrakt dostarcza się z użyciem linii 10 do etapu ekstrahowania 12. Roztwór metanol/heksan także dostarcza się z użyciem linii 14 do etapu ekstrahowania 12 w celu przeprowadzenia dodatkowego oczyszczania i ekstrakcji wysuszonego ekstraktu. Mieszaninę ekstrakt/metanol/heksan doprowadza się z użyciem linii 16 do etapu rozdzielania 18, frakcję heksanową usuwa się z użyciem linii 20 i mieszaninę metanol/ekstrakt następnie doprowadza się z użyciem linii 22 do etapu suszenia 24. W etapie suszenia 24 usuwa się rozpuszczalnik, np. drogą odparowania z uż yciem wyparki rotacyjnej.
Wysuszony, częściowo oczyszczony czynny ekstrakt doprowadza się z użyciem linii 26 i z dodatkiem metanolu z linii 28 do etapu rozpuszczania 30, i rozpuszczoną frakcję doprowadza się z użyciem linii 36 do kolumny chromatograficznej 38.
W kolumnie 38 frakcję rozpuszczoną w metanolu frakcjonuje się dalej, z uż yciem ż elu krzemionkowego i mieszaniny rozpuszczalników chloroform/30% metanol, z uzyskaniem różnych frakcji wskazanych na schemacie jako frakcje I - V. Zgodnie z aktualną procedurą frakcjonowania prowadzoną przez zgłaszającego, w wyniku procedury frakcjonowania uzyskuje się poniższe frakcje o wadze: I (3,9 g); II (2,6 g); III (2,1 g); IV (1,1 g) i V (2,0 g). Frakcje te oddzielnie oceniono zgodnie z odpowiednią procedurą prób biologicznych (w etapie, którego nie pokazano) i zidentyfikowano jako frakcje I i II, wykazujące wyraźną czynność hamowania łaknienia, i dostarczono z użyciem linii zasilania 40 i 42 odpowiednio do kolumn 44 i 46, gdzie poddano je dodatkowemu frakcjonowaniu i oczyszczaniu metodą chromatografii kolumnowej, ponownie z użyciem żelu krzemionkowego i układu rozpuszczalników 9:1 chloroform:metanol.
Podfrakcje II(A) - (C) uzyskane z kolumny 44 nie wykazywały, podczas badania, godnej uwagi czynności hamowania łaknienia, i można je poddawać dalszej chromatografii.
Podfrakcje I(A) - (L) uzyskane z kolumny 46 również oceniono (w etapie prób, którego nie pokazano), i stwierdzono, że podfrakcja I(C) ma wyraźną czynność hamowania łaknienia.
Podfrakcje I(C) dostarcza się z użyciem linii 48 do kolumny 50 w celu przeprowadzenia dodatkowego frakcjonowania i oczyszczania, z użyciem żelu krzemionkowego i mieszaniny rozpuszczalników 9:1 octan etylu:heksan. Stwierdzono, że spośród pozostałych oczyszczonych frakcji, frakcja I (C) (ii) po badaniu, posiada wyraźną czynność hamowania łaknienia.
Oczyszczony produkt zidentyfikowano z użyciem spektroskopii nuklearnego rezonansu magnetycznego (jak wskazano w poniższych tabelach 1 i 2, jako związek (1).
T a b e l a 1: Dane 1H (300,13 MHz) NMR dla związku (1) CDCl3 Związek (1)
Atom wodoru J(HH) /Hz ÓH/p.p.m.
1 2 3
Aglikon-3 - 3,522 m
6 - 5,381 m
12 11,5, 4,1 4,607 dd
17 9,3, 9,3 3,157 dd
PL 201 487 B1 cd. tabeli 1
1 2 3
18 - 1,029 s
19 - 0,951 s
21 - 2,164 s
3* 7,1, 1,5 6,888 qq
4* 7,1, 1,2 1,806 dg
5* 1,6, 1,2 1,853 dg
Cym-1' 9,4, 2,1 4,816 dd
2' 13,8, 3,7, 2,1 2,055 ddd
2' aq 13,8, 9,4, 2,6 1,552 ddd
3' ax 3,7, 2,9, 2,6 3,776 ddd
4' 9,4, 2,9 3,179 dd
5' 6,3, 9,4 3,821 dd
6' 6,3 1,279 da
3'-OMe - 3,408 sd
1 9,4, 2,1 4,730 dd
2 13,8, 3,7, 2,1 2,108 ddd
2 aq 13,8, 9,4, 2,6 1,601 ddd
3 ax 3,7, 2,9, 2,6 3,755 ddd
4 9,4, 2,9 3,239 dd
5 6,3, 9,4 3,898 dd
6 6,3 1,243 db
3-OMe - 3,392 se
Tew-1' 7,7 4,273 d
2' 7,7, 8,0 3,469 dd
3' 8,0, 2,9 3,099 dd
4''' 9,3, 2,9 3,179 dd
5' 6,3, 9,3 3,351 dd
6' 6,3 1,183 d'c
3''' -OMe 3,622 s
a, b, c w każdej kolumnie mogą być zamienne d, e w każdej kolumnie mogą być zamienne odnosi się do atomów grupy tyglinianu
PL 201 487 B1
T a b e l a 2: Odpowiednie dane 13C (75,25 MHz) NMR dla związku (1) w CDCl3 grupa aglikonu grupa cukrowa
Węgiel 8c/p.p.m. Węgiel 8c/p. p. m.
1 37,04 T cym-1' 95,84 D
2 29,44 T 2' 35,57 T
3 77,24 D 3' 77,05 D
4 38,62 T 4' 82,57 D
5 138,95 S 5' 68,48 D
6 131,90 D 6' 18,14 Q
7 27,30 T 3'-OMe 57,93 Q
8 35,30 D 1 99,54 D
9 43,04 D 2 35,17 T
10 37,22 S 3 76,99 D
11 26,04 T 4 82,52 D
12 75,88 D 5 68,30 D
13 53,71 S 6 18,36 Q
14 85,69 S 3”-OMe 57,09 Q
15 34,36 T Tew-1' 104,28 D
16 24,31 T 2' 74,62 D
17 57,18 D 3' 85,30 D
18 9,85 Q 4'” 74,62 D
19 19,27 Q 5' 71,62 D
20 216,85 S 6' 17,75 Q
21 33,01 Q 3'-OMe 60,60 Q
1* 167,60 S
2* 128,69 D
3* 137,66 D
4* 14,41 Q
5* 12,08 Q
* odnosi się do atomów grupy tyglinianu Związek (1)
Dane IR: 3440 cm-1 (OH), 2910 cm-1 (CH), 1700 cm-1 (C=O) [αο]2%89 = 12,67° (C=3, CHCfe) T.t.: 147°C - 152°C
P r z y k ł a d 4
Poniżej podano wyniki poniższych trzech prób biologicznych odnośnie hamowania łaknienia.
a) Próba Irwina;
PL 201 487 B1
b) Próba ostrej toksyczności; i
c) Próba anorektyczna dawki doustnej
a) Próba Irwina
Celem tej próby była ocena hamowania łaknienia związków według wynalazku uzyskanych z ekstraktu roślinnego jak opisano wcześniej na podstawie uspokojenia się zwierząt w próbie Irwina i działania uspokajającego.
Procedura doświadczalna
Związek hamujący łaknienie został wyekstrahowany z materiału roślinnego przez Zgłaszającego opisanym tu sposobem i podany dwóm z czterech grup, po 3 zwierzęta w każdej: jedna grupa nie otrzymała leku, druga grupa otrzymała rozpuszczalnik, dimetylosulfotlenek (DMSO), trzecia grupa otrzymała badaną próbkę w ilości 50 mg/kg, a czwarta grupa otrzymała badaną próbkę w ilości 300 mg/kg. Podawanie odbyło się drogą iniekcji wewnątrzotrzewnowo i dokonywano obserwacji w określonych odstępach czasu do 5 godzin po podaniu. W interpretacji wyników posłużono się tylko objawami innymi niż te zaobserwowane u zwierząt, którym podawano DMSO.
Wyniki
Było oczywiste, że rozpuszczalnik DMSO działał w określony sposób na zwierzęta, zwłaszcza na mechanizm regulujący pracę serca. Zauważono znaczący spadek temperatury ciała u wszystkich zwierząt, którym podawano rozpuszczalnik, sam lub razem z badaną próbką.
Zwierzęta w grupie z niską dawką wykazywały zmniejszone rozproszenie w klatce i osłabienie czynności lokomotorycznej jak we wszystkich innych grupach, łącznie z grupą kontrolną. Zaobserwowano apatię w takim samym stopniu jak w grupie, której podawano DMSO. Po 15-60 minutach po podaniu zauważono spowolnienie oddychania. Opadanie (zamykanie się powiek) również zaobserwowano w większym stopniu niż w grupie DMSO. Zauważono reakcję małżowiny usznej (ucha) jak również pozytywną reakcję palca, wskazującą na przestraszenie. Po podaniu nastąpił spadek temperatury ciała do 32,7°C.
Zwierzęta w grupie z wysoką dawką wykazywały jak w innych grupach na początku zmniejszenie rozproszenia w klatce i zmniejszenie czynności lokomotorycznej, lecz wykazywały przed śmiercią zwiększone rozproszenie i czynność lokomotoryczną, występującą po około 1 godzinie po podaniu. 30 minut po podaniu wystąpiły ostre symetryczne drgawki kloniczne. Początkowo miało miejsce spowolnienie oddychania, lecz przed śmiercią nastąpiło przyspieszenie. Wystąpiło opóźnienie reakcji małżowiny usznej (ucha) i zaobserwowano pozytywną odpowiedź palca, wskazującą na przestraszenie, obserwowane także u zwierząt w grupie z niską dawką. Po podaniu nastąpił spadek temperatury ciała do 30,7°C. Zaobserwowano zwiększoną inercję pozycyjną, jak również zmniejszone napięcie ciała. Zaobserwowano nieprawidłowy obrót kończyny, zmniejszenie siły uścisku, brak reakcji na ból i brak odruchów postawy i ułożenia.
Dyskusja
W porównaniu z kontrolną grupą zwierząt i zwierzętami poddanymi działaniu DMSO zwierzęta otrzymujące niską dawkę (50 mg/kg) wykazywały tylko spowolnienie oddychania i zwiększony stopień opadania powiek. Zwierzęta otrzymujące wysoką dawkę (300 mg/kg) badanej próbki reagowały bardzo silnie z nastąpieniem drgawek i śmierci. Wszystkie inne obserwacje dokonane u tych zwierząt można przypisać zwierzętom znajdującym się w drgawkach i umierającym. Nie zauważono żadnych oznak świadczących o działaniu trankwilizującym i uspokajającym, takie jak zauważalne zmniejszenie rozproszenia w klatkach, zmniejszenie czynności lokomotorycznej i apatia w grupach badanych, które można przypisać badanej próbce.
Zatem można wywnioskować, że badana próbka jest śmiertelna dla myszy w ilości 300 mg/kg i ma działanie hamowania czynności oddychania u myszy przy 50 mg/kg, podając dootrzewnowo z DMSO jako rozpuszczalnikiem.
b) Próba ostrej toksyczności
Celem tej próby było uzyskanie informacji o toksyczności badanej próbki.
Procedura doświadczalna
Ekstrakt z roślin wytworzony zgodnie z opisanym tu sposobem według wynalazku i o czynności hamowania łaknienia, oczyszczono i myszom podawano doustnie jedną próbkę badaną ze zwiększeniem dawek. Użyto po dwa zwierzęta w grupie dawkowania, z wyjątkiem grupy o najwyższej dawce, gdzie tylko jedno zwierzę poddano próbie. Zwierzęta badano pod kątem dobrego zdrowia i ich masy ciała w dniu podawania.
PL 201 487 B1
Zakres dawek wynosił od 100 mg/kg do 3028,5 mg/kg. Dawkę obliczono i zmieszano z przygotowaną skrobią ziemniaczaną, tak, że każde zwierzę otrzymało całkowitą dawkę 0,2 ml. Trzynaste zwierzę otrzymało 0,25 ml. Skrobię ziemniaczaną przygotowano poprzez zmieszanie 20 g skrobi w niewielkiej objętości zimnej wody, dodano ją do wrzącej wody i uzupełniono do objętości 1 litra. Pozwolono by zawiesiną ochłodziła się do temperatury pokojowej przed podaniem.
Zwierzęta w grupach 1 i 2 potraktowano dawką tego samego dnia. Obserwowano je przez 24 godziny i jeśli nie pojawiały się objawy toksyczności, traktowano dawką następną grupę. W ten sam sposób badano następne grupy. Zastosowano tę procedurę w celu zapewnienia, że nie nastąpiło niepotrzebne badanie tych zwierząt w przypadku, gdy osiągnięto dawkę wywołującą ostrą toksyczność w poprzedniej grupie.
U zwierząt poszukiwano objawów klinicznych toksyczności niezwłocznie po podaniu (1-2 godziny) i każdego następnego dnia. Masę ciała określano raz na tydzień i mierzono całkowite przyjmowanie pokarmu i wody przez każdego zwierzęcia.
Zwierzęta, które przeżyły, usypiano poprzez iniekcję dootrzewnową pentobarbitonu sodu (dostępny w handlu jako produkt o znaku towarowym Euthanaze, Centaur®) czternastego dnia eksperymentu. Badanie po śmierci przeprowadzano na tych zwierzętach, jak również na zwierzętach, które zdechły w trakcie eksperymentu. Pobrano próbki w celu badania histopatologicznego.
Wyniki
Grupa 1 (grupa kontrolna)
Nie zaobserwowano żadnych objawów klinicznych toksyczności podczas 14-dniowego okresu obserwacji. Przyjmowanie pokarmu i wody było w normie. Wahania masy ciała były także w normie. W próbkach wą troby nie odnotowano ż adnych zmian histopatologicznych.
Grupa 2 (100 mg/kg)
Nie zaobserwowano żadnych objawów klinicznych toksyczności podczas okresu obserwacji. Przyjmowanie pokarmu i wody było w normie. Nie zaobserwowano żadnej patologii makroskopowej oraz nie odnotowano w próbkach wątroby żadnych zmian histopatologicznych oraz morfologicznych.
Grupa 3 (200 mg/kg)
Zwierzęta w tej grupie nie wykazywały żadnych klinicznych objawów toksyczności podczas eksperymentu. Przyjmowanie pokarmu i wody było normalne jak również zmiany masy ciała. Nie zaobserwowano żadnej patologii makroskopowej, lecz wątroby wykazywały zmiany histopatologiczne podczas badania. U 6 zwierząt było słabe mętne obrzmienie hepatocytów, lecz średnie u 5 zwierząt. U pię ciu zwierzą t również zaszło umiarkowane zwyrodnienie wodniczkowe w hepatocytach.
Grupa 4 (400 mg/kg)
Nie zaobserwowano żadnych objawów klinicznych toksyczności podczas okresu obserwacji oraz żadnej patologii makroskopowej podczas badania po śmierci. Zaobserwowano umiarkowane mętne obrzmienie i łagodne zmiany obrzękowe po histologii.
Przyjmowanie pokarmu i wody oraz zwiększenie masy ciała u zwierzęcia 7 było w normie. Zwierzę 8 spożyło prawie dwukrotnie więcej od zwierzęcia 7 (odpowiednio 144,6 g i 73,9 g), lecz zwiększenie masy ciała było tylko 0,81 g w porównaniu do 2,7 g.
Grupa 5 (800 mg/kg)
Jedno zwierzę (zwierzę 10) zdechło po 3 godzinach po podaniu bez wykazywania żadnych specyficznych objawów. Drugie zwierzę (zwierzę 9) przeżyło początkowy okres obserwacji bez żadnych oznak toksyczności. Przyjmowanie wody u zwierzęcia, które przeżyło, było normalne (42,42 ml), podczas gdy przyjmowanie pokarmu było wysokie (134,2 g). Masa ciała wzrosła do 2,85 g i była największa w przypadku wszystkich zwierząt eksperymentu.
W badaniu pośmiertnym u zwierzęcia 10, które zdechło krótko po podaniu doustnym, płuca były przekrwione. Nie występowała reakcja na ciało obce, która wskazywałaby na inhalację badanego związku. U zwierzęcia 9 nie zaobserwowano żadnej patologii makroskopowej. U zwierzęcia 10 była obecna łagodna cytoplazmatyczna wakuolizacja (zwyrodnienie wodniczkowe), a średnia u zwierzęcia 9. Gruczołowy cytoplazmatyczny wygląd wątroby zaklasyfikowano jako umiarkowany u obu zwierząt.
Grupa 6 (1600 mg/kg)
Żadne ze zwierząt nie miało objawów klinicznych toksyczności podczas trwania eksperymentu. Nie zaobserwowano patologii makroskopowej podczas badania pośmiertnego, lecz podczas badania histopatologicznego zaobserwowano umiarkowane zmiany zwyrodnieniowe w wątrobie zwierzęcia 11. Zwierzę 12 wykazywało umiarkowane mętne obrzmienie i łagodne zmiany obrzękowe hepatocytów.
PL 201 487 B1
Przyjmowanie pokarmu i wody było normalne, jak również zwiększenie masy ciała w czasie trwania eksperymentu.
Grupa 7 (3028,5 mg/kg)
Tylko jednemu zwierzęciu podano taką dawkę. Zwierzę to nie wykazywało oznak toksyczności podczas okresu obserwacji i nie zauważono żadnych zmian makroskopowych. Podczas badania histopatologicznego zaobserwowano umiarkowane mętne obrzmienie i zwyrodnienie wodniczkowe hepatocytów. Zwierzę wykazało ubytek masy ciała podczas okresu obserwacji (-0,82 g), lecz przyjmowanie pokarmu i wody było normalne.
Omówienie
Ponieważ bardzo niewielkie liczby zwierząt użyto w każdej grupie dawek, trudno jest wyciągnąć jakiekolwiek wnioski. Fakt, że tylko jedno zwierzę zdechło po podaniu niskiej dawki bez wykazywania jakichkolwiek objawów, może wskazywać, że śmierć nie była związana z próbką badaną, lecz na skutek stresu podczas i/lub po podaniu. Żadne ze zwierząt w grupach o wyższych dawkach nie zdechło lub nie wykazywało żadnych objawów toksyczności, co dodatkowo potwierdziło to przypuszczenie.
Obserwowane zwiększenie przyjmowania pokarmu przez zwierzę 8 mogłoby ewentualnie być przypisane nadmiernemu rozsypywaniu się pokarmu, co miało wyraz w małym wzroście masy ciała. Należy pamiętać, że w tym eksperymencie zwierzętom podano raz dawkę i jest mało prawdopodobne, że środek hamujący łaknienie będzie miał znaczący wpływ na przyjmowanie pokarmu lub wody albo na masę ciała w ciągu czternastodniowego okresu, jak w przypadku tego eksperymentu.
Z badania histopatologicznego próbek z wą troby był o oczywiste, ż e zmiany patologiczne był y zależne od dawek, i zwierzęta otrzymujące wyższe dawki wykazywały rozległe zmiany. Obserwowana patologia nie miała charakteru metabolicznego, lecz była prawdopodobnie wywołana próbką badaną. Zmiany były tylko zwyrodnieniowe, a zatem odwracalne. Nie zaobserwowano żadnych objawów nieodwracalnych zmian komórek wątroby.
Zatem można wnioskować, że tylko jedno zwierzę zdechło przy niskiej dawce (800 mg/kg), lecz śmierć być może nie była związana z próbką badaną. Żadne z innych zwierząt w dowolnej grupie dawek nie wykazywało żadnych objawów toksyczności podczas czternastodniowej obserwacji po podaniu ani nie zdechło w wyniku podania. Pojedyncza dawka doustna próbki badanej wzbudziła odwracalne zależne od dawki zmiany komórek wątroby.
c) Próba anorektyczna dawki doustnej
Celem tej próby było określenie czynności ekstraktu z rośliny wytworzonego sposobem według wynalazku i minimalnej skutecznej dawki, a jednocześnie zbadanie możliwych działań ubocznych, takich jak hamowanie oddychania, jak stwierdzono w próbie Irwina (powyżej).
Procedura eksperymentalna
Zwierzęta rozdzielono do grup, którym podawano środek, z użyciem tabel doboru losowego. Każda grupa, której podawano środek, składała się z trzech zwierząt, a grupa kontrolna z sześciu. Próbkę badaną podawano młodym samicom szczurów ważącym 100-150 g w czasie aklimatyzacji, przez trzy dni z rzędu. Zwierzęta oznaczono z użyciem metalowych znaczników na uszy i znakowania skóry KMnO4 w celu łatwiejszej identyfikacji. Zwierzęta trzymano oddzielnie w standardowych klatkach poliwęglanowych dla gryzoni ze swobodnym dostępem do wody i rozdrobnionych handlowych granulek dla gryzoni. Przyjmowanie wody i pokarmu mierzono i obliczano każdego dnia. W celu określenia minimalnej dawki skutecznej próbki badanej badano 5 dawek. Próbkę badaną w zawiesinie w skrobi ziemniaczanej podawano doustnie poprzez zgłębnik.
Badaną substancją był związek (1), biały, granulowany proszek wytworzony z ekstraktu z materiału roślinnego sposobem według wynalazku, i odmierzoną ilość badanej próbki zmieszano ze skrobią ziemniaczaną i podawano. Zmieszanie ze skrobią ziemniaczaną miało miejsce niezwłocznie przed podaniem każdego dnia. Przed pobraniem objętości dawkowanej dla każdego zwierzęcia zawiesiny mieszano dokładnie z użyciem urządzenia Vortex.
Badano 5 dawek, przy czym grupa kontrolna otrzymała tylko nośnik. Dawki dobierano na podstawie skutków zaobserwowanych we wcześniejszej próbie Irwina i wynosiły one:
Grupa 1: 0,00 mg/kg (grupa kontrolna)
Grupa 2: 6,25 mg/kg
Grupa 3: 12,50 mg/kg
Grupa 4: 25,00 mg/kg
Grupa 5: 37,50 mg/kg
Grupa 6: 50,00 mg/kg
PL 201 487 B1
Wyniki
Podawanie nie wpłynęło na zdrowie zwierząt w ciągu okresu badań. Zwierzęta, którym podawano próbkę badaną we wszystkich grupach dawek, wykazywały znaczące zmniejszenie przyrostu średniej masy ciała w ciągu całkowitego okresu badań i zwierzęta w trzech, z pięciu grup, którym podawano środek, rzeczywiście straciły na wadze.
Średnie przyjmowanie pokarmu dla wszystkich grup, którym podawano środek, zmniejszyło się w czasie trwania badań. Zwierzęta z grup o wyższych dawkach wykazywały zwiększone spożycie wody.
Nie zmieniła się znacząco częstość oddechów u żadnego ze zwierząt w żadnej z grup dawek.
Zwierzęta we wszystkich grupach dawek wykazywały kruchość wątroby podczas badania pośmiertnego, lecz nie zaobserwowano u nich żadnej patologii w skali makroskopowej.
Omówienie
Dane uzyskane w trakcie trwania okresu aklimatyzacji potwierdziły, że wszystkie zwierzęta objęte eksperymentem były zdrowe i przyrost masy ciał był porównywalny pomiędzy zwierzętami.
Zmniejszenie przyrostu, a u niektórych zwierząt ubytek masy ciała w połączeniu ze zmniejszonym przyjmowaniem pokarmu wyraźnie wskazuje na hamowanie ośrodka łaknienia.
Zmniejszenie przyjmowania pokarmu i zmniejszenie przyrostu masy ciała występowało nawet w przypadku grupy o najniższej dawce (6,25 mg/kg). Rzeczywisty ubytek masy ciała miał miejsce w grupie 12,50 mg/kg.
Istotne jest to, że w przypadku wszystkich grup, którym podawano środek, nastąpiło zwiększone spożycie wody, podczas gdy spożycie pokarmu zmalało (fig. 2). Może to być skutkiem działania moczopędnego próbki badanej lub stymulowania ośrodka pragnienia w mózgu.
Pozytywnym aspektem jest fakt, że nie wystąpiło spowolnienie oddychania, co zaobserwowano w próbie ostrej toksyczności, opisanej powyżej, przy podawaniu dootrzewnowym. Mogło to być wywołane zmniejszeniem absorpcji z przewodu pokarmowego, a w konsekwencji zmniejszeniem biodostępności. Biodostępność przy testowanych dawkach doustnych, była jednak wystarczająca dla zapewnienia skuteczności próbki badanej. Nieznaczne zmniejszenie częstości oddychania po 1 godzinie od podania w większości grup można przypisać napełnianiu żołądka objętością dawki i wynikłą pasywnością zwierząt.
Kruchość wątroby zaobserwowana w grupach, którym podawano środek, mogła być spowodowana zmianami w metabolizmie energii w wyniku zmniejszenia przyjmowania pokarmu, powodując zwiększenie metabolizmu tłuszczu i przeciążenie wątroby. Gdyby rzeczywiście miało to miejsce, zmiany takie można by ewentualnie uznać za zmiany przejściowe, które mogłyby ustępować z czasem po osiągnięciu stanu ustalonego lub po wycofaniu badanej próbki. Możliwy wpływ na wątrobę również wymaga dalszych badań.
Ponieważ z założenia badanie to stanowiło jedynie próbę przesiewową, użyto małych grup badanych zwierząt. W związku z tym trudno było o interpretację statystyczną, zwłaszcza gdy poszczególne zwierzęta reagowały całkowicie różnie. Jednak dane wskazują, że próbka badana ma działanie hamowania łaknienia, nawet przy podaniu najniższej dawki (6,25 mg/kg). W przypadku badanych dawek nie zaszły żadne kliniczne objawy zmniejszenia częstości oddychania.
P r z y k ł a d 5
Zebrane rośliny Hoodia uzyskane z naturalnego środowiska lub z hodowli najpierw przechowywano w 4°C przez maksymalnie 48 godzin. Rośliny przemyto wodą wodociągową, po czym pokrojono na fragmenty o rozmiarach ±1 cm. Pokrojone kawałki zebrano i sprasowano z użyciem prasy hydraulicznej pod ciśnieniem 30000 kPa przez minimum 0,5 godziny. Sok uzyskany z roślin zbierano oddzielnie. Sok przechowywano w temperaturze -18°C aż do przeprowadzenia dalszej obróbki.
Sok suszono rozpyłowo w odpowiednich warunkach z wytworzeniem sypkiego proszku. Zawartość wilgoci w proszku wyniosła korzystnie mniej niż 5%, po suszeniu rozpyłowym, a w razie konieczności proszek, dalej suszono w piecu próżniowym lub z użyciem suszarki ze złożem fluidalnym.
Wykazano w próbach biologicznych, że zarówno sok jak i wysuszony próżniowo materiał były skuteczne jako środki hamujące łaknienie u szczurów.
Doświadczenie kg roślin Hoodia gordonii przemyto wodą wodociągową, po czym pokrojono na kawałki o rozmiarach 1 cm. Pokrojone roś liny następnie sprasowano z użyciem prasy hydraulicznej pod ciśnieniem 30000 kPa przez minimum 0,5 godziny/partię. Sok zebrano i stwierdzono masę 10 kg
PL 201 487 B1 w przypadku gdy uż yto roślin Hoodia gordonii ze środowiska naturalnego, zaś 20 kg gdy użyto roślin Hoodia gordonii z hodowli. Sok (500 g) suszono rozpyłowo stosując poniższe warunki:
Szybkość przepływu: Temperatura na wlocie: Temperatura na wylocie: Temperatura komory:
2,85 ml/min 110°C 70°C 78°C
Uzyskany w wyniku suszenia rozpyłowego proszek stanowił sypki proszek (22 g) o zawartości wilgoci 6,9%.
Wysuszony rozpyłowo proszek poddano analizie na stężenie składnika czynnego z użyciem technik HPLC. Określono stężenie substancji czynnej w wysuszonym rozpyłowo proszku na 13 g/kg.
Analiza metodą HPLC
Eluent: Acetonitryl:woda (7:3), izokratycznie
Kolumna: układ faz odwróconych C-18
Absorbancja UV: 225 nm
Szybkość przepływu: 1 ml/min.
Objętość iniekcji: 10 μΐ
Sposób
Wysuszony rozpyłowo proszek (10 mg) rozpuszczono w wodzie (0,5 ml) i w acetonitrylu (0,5 ml). 10 μΐ tego roztworu wstrzyknięto do HPLC i określono stężenie związku czynnego (1) z użyciem standardowej krzywej uzyskanej dla czystego związku (1).
P r z y k ł a d 6
Podano poniżej wyniki badań oszacowania możliwego działania anorektycznego związku (1) u szczura. Poniższe badane próbki stanowią czysty sok (próbka 1), wysuszony rozpyłowo sok (próbka 2) i związek czynny (próbka 3). Próbki 1 i 2 stanowią odpowiednio sok i wysuszony rozpyłowo sok, jak opisano w przykładzie 43 powyżej. Próbkę 3 stanowi wyekstrahowany rozpuszczalnikiem związek (1) o czystości >95%.
Każdą z próbek 1-3 podawano w postaci pojedynczej dawki doustnej samcom szczurów Wistar. Dwie dodatkowe grupy kontrolne otrzymały nośnik (woda destylowana lub DMSO). Doustnie podawaną fenfluraminę (7,5 mg/kg) dołączono jako standardowy wzorzec.
W wyniku podania doustnie próbki 1 (czysty sok) uzyskano zależne od dawki zmniejszenie spożycia pokarmu, które było statystycznie znaczące przy dawkach 1600 mg/kg i wyższych, w porównaniu z grupami kontrolnymi, którym podawano nośnik. Odnotowano również towarzyszące zmniejszenie wagi ciała (lub szybkości wzrostu). W dniu podawania odnotowano statystycznie znaczące zwiększenie spożycia wody w 3 godzinie od podania (6400 i 10000 mg/kg) i 6 godzinie od podania (10000 mg/kg). Pomiędzy 24 i 48 godzinami od podania odnotowano statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia wody przy dawkach 3200 mg/kg i wyższych.
W wyniku podania doustnie dawki 2 (suszony rozpyłowo sok) w ilości 76 mg/kg także uzyskano statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia pokarmu i zmniejszenie wagi ciała w porównaniu ze zwierzętami, którym podawano nośnik. Nie odnotowano żadnego znaczącego statystycznie wpływu na spożycie wody.
Próbka 3 (związek czynny) dała statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia pokarmu przy dawce doustnej wynoszącej 5,0 mg/kg. Związek czynny nie wywołał żadnego statystycznie znaczącego wpływu na wagę ciała chociaż rozpatrywane dane z badań ujawniły nieznaczne opóźnienie we wzroście w porównaniu z grupami kontrolnymi zwierząt, którym podawano nośnik. Nie odnotowano żadnego znaczącego statystycznie wpływu na spożycie wody.
Wzorzec fenfluramina (7,5 mg/kg), dawała statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia pokarmu w 6 i 24 godziny po podaniu w porównaniu ze stosowną grupą kontrolną, której podawano nośnik. Nie odnotowano żadnego statystycznie znaczącego wpływu na spożycie wody lub wagę ciała.
Nie odnotowano żadnego zależnego od podawania wpływu na wątrobę.
PL 201 487 B1
Badana substancja
Tożsamość Próbka 1 (czysty sok) Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) Próbka 3 (substancja czynna)
Wygląd Brązowa ciecz Proszek Biały proszek
Warunki przechowywania -20°C w ciemności Temperatura pokojowa w ciemności 4°C w ciemności
Czystość Czysty sok Czysty suszony rozpyłowo sok >95%
Nośnik Woda destylowana Woda destylowana Dimetylosulfotlenek (DMSO)
Procedura eksperymentalna W badaniu użyto 55 samców szczurów Wistar.
Codziennie w tym samym czasie, od momentu przybycia do zakończenia badań, zapisywano ciężar ciała, spożycie pokarmu (ciężar skrzyni z pokarmem) i spożycie wody (ciężar butelki).
Zgodnie z poniższą tabelą 1 dnia szczury otrzymały pojedynczą dawkę doustnie (przez zgłębnik):
Grupa n Podawanie doustnie Dawka (mg/kg)
1 5 Nośnik (woda destylowana) -
2 4 Próbka 1 (czysty sok) 800,0
3 5 Próbka 1 (czysty sok) 1600,0
4 5 Próbka 1 (czysty sok) 3200,0
5 5 Próbka 1 (czysty sok) 6400,0
6 5 Próbka 1 (czysty sok) 10000,0
7 5 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 38,0
8 5 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 76,0
9 5 Próbka 3 (substancja czynna) 2,5
10 5 Próbka 3 (substancja czynna) 5,0
11 3 Fenfluramina 7,5
12 3 Nośnik -
Grupom 1 - 8 podawano dawkę z użyciem stałej objętości dawki wynoszącej 10 ml/kg, a grupom 9 - 12 podawano dawkę w objętości 1 ml/kg.
Mierzono również spożycie pokarmu i wody w 1, 3 i 6 godzinie po podaniu dnia 1.
Po przeprowadzeniu pomiaru w dniu 8 zwierzęta uśmiercono poprzez uduszenie z użyciem ditlenku węgla i wątroby wycięto i umieszczono w 10% buforowanej formalinie, przed histologią.
Wycinki 4 - 5 μm każdej wątroby w twardej parafinie zabarwiono z użyciem hematoksyliny i eozyny. Dodatkowe fragmenty pocięto na aparacie Cryostat na 12 μm i zabarwiono Oil Red O (ORO) umożliwiającym wykrywanie tłuszczu.
Analiza danych
Pomiary spożycia pokarmu i wody oraz ciężaru ciała po podawaniu w każdym punkcie czasowym u zwierząt, którym podawano P57, porównano z wynikami dla odpowiedniej grupy kontrolnej, której podawano w podobny sposób nośnik, z użyciem analizy wariancji, testu Williamsa dla porównania z kontrolami.
Dane odnośnie zwierząt, którym podawano fenfluraminę porównano z danymi odnośnie grupy kontrolnej, której podawano nośnik, z użyciem testu t Studenta.
PL 201 487 B1
Wyniki
Wyniki badań podano w tabelach.
Próbka 1 (czysty sok) podawana doustnie, dawała widoczne związane z dawką zmniejszenie spożycia pokarmu dziennie. Czas i amplituda tego zmniejszenia spożycia pokarmu były zależne od dawki. W 24 godziny po podaniu próbka 1 (czysty sok) dała znaczące statystycznie zmniejszenie spożycia pokarmu przy dawkach 1600 mg/kg i wyższych w porównaniu z grupami kontrolnymi, którym podawano nośnik. Najwyższa dawka próbki 1 (sok) (10000 mg/kg) dała statystycznie znaczące zmniejszenie dziennego spożycia pokarmu do 5 dni po podaniu.
Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) i próbka 3 (związek czynny) dały widoczne i statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia pokarmu przy dawkach podawanych doustnie odpowiednio 76 i 5,0 mg/kg. W obu przypadkach działania te trwały 48 godzin po podaniu.
Wzorzec, fenfluramina (7,5 mg/kg, doustnie) dała statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia pokarmu w 6 i 24 godzinie po podaniu w porównaniu do odpowiedniej grupy kontrolnej, której podawano nośnik (Grupa 12).
Próbka 2 (suszony rozpyłowy sok) i próbka 3 (substancja czynna) nie wykazały widocznego związanego z dawką wpływu na spożycie wody. W dniu podawania czysty sok dawał statystycznie znaczące zwiększenie spożycia wody w 3 godzinie po podaniu (6400 i 10000 mg/kg) i 6 godzinie po podaniu (10000 mg/kg). W dwa dni po podaniu odnotowano jednak statystycznie znaczące zmniejszenie spożycia wody u zwierząt otrzymujących próbkę 1 (sok) w ilości 3200, 6400 i 10000 mg/kg. Te zmniejszenia jednak nie były ściśle zależne od dawki i występowały tylko pomiędzy 1 i 2 dniem po podaniu. Biologiczne znaczenie tych wpływów zatem pozostaje niejasne.
Próbka 1 (czysty sok) ma związane z dawką statystycznie znaczące działanie na ciężar ciała w porównaniu do grupy kontrolnej, której podawano nośnik (Grupa 1). W przypadku podawania doustnie dawek w ilości 3200 mg/kg i większych, próbka 1 (czysty sok) dawała znaczące statystycznie zmniejszenie wagi ciała lub zmniejszenie szybkości wzrostu w porównaniu ze zwierzętami, którym podawano nośnik. Te wpływy były statystycznie znaczące od 48 godzin po podaniu, aż do zakończenia badań.
Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) podawana doustnie w ilości 76 mg/kg także dawała statystycznie znaczące zmniejszenie wzrostu zwierząt w porównaniu z grupą kontrolną, której podawano nośnik (Grupa 1). Te wpływy były statystycznie znaczące pomiędzy dniami 3 i 5, włącznie (48 godzin po podaniu).
Aczkolwiek okazało się, że próbka 3 (związek czynny) opóźnia wzrost zwierząt przy najwyższej dawce (5,0 mg/kg) w porównaniu z odpowiednią grupą kontrolną, której podawano nośnik, Grupą 12, ten wpływ nie miał statystycznego znaczenia.
Fenfluramina (7,5 mg/kg) nie dawała żadnych widocznych lub statystycznie znaczących wpływów odnośnie spożycia wody lub ciężarów ciał w porównaniu z grupą kontrolną, której podano nośnik (Grupa 12).
Nie odnotowano żadnego zależnego od podawania wpływu na wątrobę.
T a b e l a 1a
Wpływ podawania doustnego na spożycie pokarmu u szczurów (dane przed podaniem dawki, codziennie)
Grupa Podawanie doustnie Dawka (mg/kg) Średnie spożycie pokarmu w grupie (g±sd) pomiędzy dniami:
- 6 -5 - 5 -4 - 4 -3 - 3 -2 - 2 -1
1 2 3 4 5 6 7 8
1 Nośnik (woda) - 27,8±1,54 24,2±1,83 27,6±3,67 28,3±3,50 29,4±2,66
2 Próbka 1 sok 800,0 28,3±1,43 24,9±0,82 27,7±0,76 28,4±1,51 30,1±0,27
3 Próbka 1 sok 1600,0 29,0±1,39 25,0±2,16 27,4±1,96 28,8±0,61 29,5±1,55
4 Próbka 1 sok 3200,0 27,2±2,33 25,1±2,46 26,0±2,52 28,5±2,29 27,6±1,15
5 Próbka 1 sok 6400,0 28,7±1,64 25,3±1,73 27,3±1,45 29,2±1,09 30,3±0,90
6 Próbka 1 sok 10000,0 28,5±2,38 23,7±2,73 26,0±2,31 27,0±3,50 28,7±2,26
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 28,1 ±1,24 23,9±1,79 24,5±2,30 27,6±1,61 28,5±1,87
PL 201 487 B1 cd. tabeli 1a
1 2 3 4 5 6 7 8
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 28,7±0,91 26,541,55 27,1±1,01 28,7±1,99 28,9±1,37
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 28,8±1,49 26,4±3,12 29,0±1,99 29,4± 1,76 29,5±2,81
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 28,3±2,1 25,8±1,86 28,1 ±2,65 28,0±2,65 28,5±3,03
11 Fenfluramina 7,5 29,1 ±0,66 25,3±4,03 27,0±1,53 30,8±0,54 29,7±2,84
12 Nośnik (DMSO) - 27,9±1,8 26,7+2,11 28,7±1,99 28,1±4,06 30,5±2,54
sd - odchylenie standardowe
T a b e l a 1b
Wpływ podawania doustnego na spożycie pokarmu u szczurów (dane po podaniu dawki, codziennie)
Gru- pa Podawanie doustnie Dawka (mg/kg) Średnie spożycie pokarmu w grupie (g±sd) pomiędzy dniami:
1 - 2 2 - 3 3 - 4 4 - 5 5 - 6 6 - 7 7 - 8
1 Nośnik (woda) - 29,5±3,15 29,6±2,84 30,6±3,49 31,8±3,21 30,7±2,24 31,7±3,03 32,9±3,18
2 Próbka 1 sok 800,0 26,1±0,98 29,3±1,49 30,7±1,15 30,9±0,60 33,3±1,69 32,7±0,80 40,1±13,40
3 Próbka 1 sok 1600,0 22,6**±3,17 26,9±2,06 30,9±2,54 30,9± 1,22 34,1±1,36 33,7±1,69 33,8±1,61
4 Próbka 1 sok 3200,0 20,1 **±1,39 19,0**±1,88 22,8**±1,77 28,0±3,14 31,4±2,82 32,3±2,91 33,0±3,01
5 Próbka 1 sok 6400,0 18,2**±4,18 14,8**±1,75 18,4**±0,97 22,4**±3,01 26,9±2,81 31,0±2,31 32,0±2,34
6 Próbka 1 sok 10000,0 15,1 **±2,98 12,4**±2,61 16,0**±3,15 19,7**±4,31 22,6*±5,70 30,1±4,79 32,6±5,90
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 25,6±2,85 27,3±0,95 30,3±2,06 31,0±2,13 31,8±1,63 31,1±1,94 31,8±2,45
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 24,2*±3,25 25,2*±3,24 29,9±1,85 30,2±2,28 31,2±2,26 32,3±1,44 33,1±0,61
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 26,8±3,33 29,1±3,43 31,7±3,08 34,0±2,95 34,4±4,32 33,1±4,11 34,8±3,71
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 22,1 ±2,19 21,0±3,07 27,6±5,26 30,5±3,33 33,0±3,16 32,4±3,25 33,0±3,84
11 Fenflura- mina 7,5 22,4^+3,19 31,9±0,84 32,7±2,50 33,0±2,55 30,4±0,23 32,7±1,90 32,4±1,60
12 Nośnik (DMSO) - 29,9±3,36 30,6±4,43 30,1 ±4,17 32,4±5,26 31,8±3,08 32,8±3,98 33,3±3,76
sd - odchylenie standardowe,
Grupy 2 - 8 porównano z grupą 1 z nośnikiem: *p<0,05, **p<0,01
Grupy 9 - 11 porównano z grupą 12 z nośnikiem: łp<0,05, łp<0,01
PL 201 487 B1
T a b e l a 2a
Wpływ podawania doustnego na spożycie wody u szczurów (dane przed podaniem dawki, codziennie)
Gru- pa Podawanie doustne Dawka (mg/kg) Średnie spożycie wody w grupie (g±sd) pomiędzy dniami:
- 6 -5 - 5 -4 - 4 -3 - 3 -2 - 2 -1
1 Nośnik (woda) - 40,9±4,61 34,8±4,15 37,6±5,63 33,5±7,42 32,2±6,32
2 Próbka 1 sok 800,0 38,6±1,96 37,1±9,74 36,4±4,81 28,1±1,83 30,4±4,75
3 Próbka 1 sok 1600,0 43,4±10,53 35,9±3,84 38,4±4,56 31,1±4,47 36,5±5,39
4 Próbka 1 sok 3200,0 40,1±5,58 33,3±3,01 37,3±4,46 31,3±3,48 31,7±3,18
5 Próbka 1 sok 6400,0 43,8±8,57 36,3±9,02 35,4±8,18 34,0±6,62 35,1±5,72
6 Próbka 1 sok 10000,0 37,4±5,34 32,7±3,35 33,2±4,86 29,0±5,11 32,2±3,27
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 40,0±4,36 35,8±4,92 34,7±3,20 30,2±1,88 31,4±2,98
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 38,6±1,98 37,0±1,96 48,8±21,5 31,6±4,56 39,0±17,27
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 42,0±6,70 37,0±5,05 34,1 ±3,16 28,0±2,58 31,6±3,12
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 40,9±4,48 34,2±3,00 32,7±1,26 28,2± 1,65 33,1±4,82
11 Fenfluramina 7,5 47,0±5,3 35,5±7,49 34,7±3,73 30,9±2,12 31,6±2,80
12 Nośnik (DMSO) - 43,3±5,67 34,5±4,97 35,2±4,34 28,3±4,64 31,4±6,44
sd - odchylenie standardowe
T a b e l a 2b
Wpływ podawania doustnego na spożycie wody u szczurów (dane po podaniu dawki, codziennie)
Gru- pa Podawanie doustne Dawka (mg/kg) Średnie spożycie wody w grupie (g±sd) pomiędzy dniami:
1 - 2 2 - 3 3 - 4 4 - 5 5 - 6 6 - 7 7 - 8
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 Nośnik (woda) - 34,9±5,45 36,9±6,06 38,0±7,59 37,2±6,18 37,7±5,54 35,3±2,86 36,5±5,85
2 Próbka 1 sok 800,0 30,9±3,77 34,4±8,12 38,2±13,71 35,9±13,51 39,5±11,20 28,8± 1,22 31,8±5,58
3 Próbka 1 sok 1600,0 29,2±1,66 31,7±5,35 41,3±11,21 34,6±4,10 48,1±12,27 37,8±7,28 36,9±9,28
4 Próbka 1 sok 3200,0 35,9±5,88 26,2*±2,66 30,5±2,44 34,1±4,80 45,8±18,54 51,0±35,21 42,6±13,88
5 Próbka 1 sok 6400,0 33,4±12,04 27,4*±8,13 32,6±10,67 35,4±10,78 45,2±8,72 36,2±6,72 35,9±9,58
6 Próbka 1 sok 10000,0 31,7±12,74 28,5*±8,85 32,4±8,87 36,6±6,50 40,7±11,51 38,0±6,66 37,5±6,21
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 36,0±6,02 34,5±1,79 38,2±7,16 39,6±7,09 42,7±9,74 45,6±17,15 46,1±9,49
PL 201 487 B1 cd. tabeli 2b
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 45,0±19,03 39,1±16,59 46,9±18,34 35,9±3,40 41,9±12,37 36,9±8,47 38,1±8,93
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 32,2±4,01 36,1±12,42 38,3±11,71 41,5±16,60 34,7±7,57 33,0±4,20 35,3±8,70
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 33,9±2,40 31,5±8,12 35,1±3,82 37,7±5,99 39,5±7,78 37,4±11,07 37,8±6,42
11 Fenflurami- na 7,5 34,1 ±3,60 37,2±1,48 36,7±3,92 33,8±2,89 33,7±5,43 32,1±1,93 33,6±2,50
12 Nośnik (DMSO) - 40,7±9,10 33,8±9,37 32,9±7,07 35,2±11,49 33,8±9,82 32,3±7,44 32,0±7,22
sd - odchylenie standardowe
Grupy 2 - 8 porównano z grupą 1 z nośnikiem: * p<0,05 Grupy 9 - 11 porównano z grupą 12 z nośnikiem (bez istotności)
T a b e l a 3a
Wpływ podawania doustnego na masę ciała u szczurów (dane przed podaniem dawki, codziennie)
Grupa Podawanie doustne Dawka (mg/kg) Średnia masa ciała w grupie (g±sd) w dniu:
-5 -4 -3 -2 -1
1 Nośnik (woda) - 130,9±5,56 150,7±5,37 157,3±5,29 168,1 ±6,20 177,5±6,70
2 Próbka 1 sok 800,0 131,6±4,34 150,1±4,84 158,5±4,35 169,6±4,99 177,7±4,10
3 Próbka 1 sok 1600,0 130,1±4,3 148,6±6,59 156,7±6,38 167,5±6,04 176,6±6,37
4 Próbka 1 sok 3200,0 130,8±6,19 147,7±7,56 154,4±8,06 165,2±8,43 175,8±9,10
5 Próbka 1 sok 6400,0 132,6±7,01 151,3±7,23 158,4±8,50 169,0±8,79 178,1±7,75
6 Próbka 1 sok 10000,0 132,3±6,75 151,8±9,08 157,3±9,37 167,1±10,41 175,4±10,90
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 131,7±8,28 149,0±5,85 156,2±5,81 166,7±5,54 175,6±8,42
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 130,0±6,99 146,1 ±6,00 155,9±6,59 166,0±6,87 175,1±6,55
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 132,6±7,63 148,9±8,51 157,3±8,91 169,8±8,96 179,4±8,71
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 133,5±6,46 150,5±9,55 158,8±8,48 171,0±7,72 179,0±9,20
11 Fenfluramina 7,5 133,2±9,21 152,7±9,09 160,0±9,82 170,0±9,15 182,8±10,21
12 Nośnik (DMSO) - 129,1±3,17 147,3±4,37 155,0±6,29 166,0±5,91 174,8±8,26
sd - odchylenie standardowe
PL 201 487 B1
T a b e l a 3b
Wpływ podawania doustnego na wagę ciała u szczurów (dane po podaniu dawki, codziennie)
Grupa Poda- wanie doustne Dawka (mg/kg) Średnia masa ciała w grupie (g±sd) w dniu:
przed dawką (1) 2 3 4 5 6 7 8
1 Nośnik (woda) - 185,4±7,77 192,6±7,16 202,0±10,17 211,2±7,98 220,2±10,35 227,2±10,26 235,8±11,82 242,8±11,97
2 Próbka 1 sok 800,0 186,0±4,90 187,0±4,55 198,5±4,20 206,8±5,91 214,8±4,65 222,8±4,99 231,5±3,70 240,0±3,65
3 Próbka 1 sok 1600,0 185,0±6,67 186,0±8,28 193,2±6,42 204,0±6,40 212,4±5,81 223,0±6,33 232,6±7,70 240,4±6,66
4 Próbka 1 sok 3200,0 181,8±9,18 184,6±8,88 186,2*±8,67 189,8**±9,99 199,2**±9,34 210,6**±10,21 219,0*±11,29 228,4*±12,18
5 Próbka 1 sok 6400,0 186,6±7,96 185,6±6,39 183,8**±6,87 185,2**±9,18 191,2**±7,89 201,0±6,89 213,0**±6,96 222,0**±7,94
6 Próbka 1 sok 10000,0 182,8±12,22 181,4±14,06 179,8**±15,85 180,6**±13,85 185,6**±11,28 192,2**± 10,99 203,4±11,68 212,4**±11,35
7 Próbka 2 suszona rozpyłowo 38,0 183,4±8,11 185,8±9,23 195,8±7,79 205,6±9,79 214,4±9,61 222,6±9,34 231,4±10,62 239,6±11,46
8 Próbka 2 suszona rozpyłowo 76,0 180,6±6,47 183,4±7,57 188,6*±6,73 198,2*±8,50 206,0*±9,43 214,0±9,51 222,0±9,49 232,2±9,68
9 Próbka 3 związek czynny 2,5 188,2±9,42 191,2±11,15 200,0±11,25 209,6±12,28 219,6±12,95 229,4±13,69 238,4±14,50 247,0±14,35
10 Próbka 3 związek czynny 5,0 186,4±10,02 192,0±9,93 192,4±9,84 201,0±11,27 209,4±12,70 219,8±11,86 228,2±12,28 236,0±13,95
11 Fenflura- mina 7,5 190,3±9,71 190,3±10,9 197,7±7,37 207,7±7,23 217,7±10,69 224,3±10,12 234,3±12,70 243,3±9,24
12 Nośnik DMSO) - 183,3±8,33 190,3±10,26 199,0±10,82 207,7±12,66 215,7±14,05 222,3±14,84 230,7±15,95 239,0±17,35
sd - odchylenie standardowe
Grupy 2 - 8 porównano z grupą 1 z nośnikiem: * p<0,05, ** p<0,01 Grupy 9 - 11 porównano z grupą 12 z nośnikiem (bez istotności)
Raport histopatologiczny
Badanie histologiczne ograniczono do wątroby. Nie wykryto żadnych związanych z podawaniem zmian dla grup otrzymujących próbkę 1 (ciecz), próbkę 2 (suszony rozpyłowo sok), próbkę 3 (substancja czynna), fenfluraminę lub grupy kontrolnej z DMSO.
Odnotowane protokoły były podobne w grupie kontrolnej i grupach, którym podawano próbki.
T a b e l a
Zestawienie przypadków patologii w skali mikroskopowej
Płeć: samce Liczba badanych samców Zwierzęta, które przeżyły próby Grupa 1 0 mg/kg 5 5 Grupa 2 800 mg/kg 4 4 Grupa 3 1600 mg/kg 5 5 Grupa 4 3200 mg/kg 5 5 Grupa 5 6400 mg/kg 5 5 Grupa 6 1000 mg/kg 5 5
1 2 3 4 5 6 7
Wątroba Badano 5 4 5 5 5 5 0
PL 201 487 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5 6 7
Nie stwierdzono żadnych zmian 0 0 1 2 3 3
Miąższowe ogniska komórek zapaleniowych (ogólnie) 0 1 0 0 0 3
Minimalnie 0 1 0 0 0 1
Przerost hepatocytów - leżący w środkowej części zrazika (ogólnie) 0 0 0 0 0 1
Minimalnie 0 0 0 0 0 0
Hemopoeza pozaszpikowa (ogólnie) 2 0 0 0 0 0
Minimalnie 2 0 0 0 0 0
Martwica hepatocytów - ogniskowe (ogólnie) 1 0 0 0 0 0
Minimalnie 1 0 0 0 0 0
Wrotny limfoidalny naciek (ogólnie) 3 4 4 3 2 2
Minimalnie 3 4 4 3 2 2
Hepatocyty eozynochłonne ogniskowe (ogólnie) 1 0 0 0 0 0
Minimalnie 1 0 0 0 0 0
Zwłóknienie wrotne (ogólnie) 0 0 1 0 0 0
Minimalnie 0 0 1 0 0 0
Wątroba (wybarwianie ORO)
Badane 5 4 5 5 5 5
Nie stwierdzono żadnych zmian 2 3 2 4 3 3
Tłuszcz w komórkach wątroby leżący w środkowej części zrazika (ogólnie) 3 1 2 1 2 2
Minimalnie 3 1 2 1 2 2
Tłuszcz w komórkach wątroby pozawrotne 0 0 1 0 0 0
Minimalnie 0 0 1 0 0 0
Grupa 7 Grupa 8 Grupa 9 Grupa 10 Grupa 11 Grupa 12
Płeć: samce 0 mg/kg 800 mg/kg 1600 mg/kg 3200 mg/kg 6400 mg/kg 1000 mg/kg
Liczba badanych samców 5 4 5 5 3 3
Zwierzęta, które przeżyły próby 5 4 5 5 3 3
Wątroba
Badano 5 5 5 5 3 3
Nie stwierdzono żadnych zmian 2 2 0 1 0 2
Miąższowe ogniska komórek zapaleniowych (ogólnie) 0 0 0 0 0 1
Minimalnie 0 0 0 0 0 1
PL 201 487 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5 6 7
Martwica hepatocytów - ogniskowe (ogólnie) Minimalnie Wrotny limfoidalny naciek (ogólnie) Minimalnie Wrotne leukocyty (ogólnie) Minimalnie Wątroba (wybarwianie ORO) Badanie Nie stwierdzono żadnych zmian Tłuszcz w komórkach wątroby leżący w środkowej części zrazika (ogólnie) Minimalnie 0 0 3 3 0 0 5 5 0 0 0 0 3 3 0 0 5 3 2 2 1 1 5 5 1 1 5 3 2 2 0 0 4 4 0 0 5 3 2 2 0 0 3 3 0 0 3 2 1 1 0 0 1 1 0 0 3 2 1 0
P r z y k ł a d 7
Poniżej opisano dalsze próby biologiczne, w których użyto tych samych próbek badanych jak opisano w przykładzie 6. Zwierzęta w tym badaniu poddano ograniczonej diecie, to znaczy zwierzęta otrzymywały pokarm tylko pomiędzy 12:00 a 15:00 każdego dnia. Odróżnia to tę próbę od innych prób biologicznych, w których szczury miały swobodny dostęp do pożywienia. Zwierzęta aklimatyzowano w ciągu okresu 7 dni (dni -7 do -1), dozowanie miało miejsce od dnia 0 do dnia 6 o godzinie 9:00 doustnie poprzez zgłębnik. Okres powrotu do zdrowia był od dnia 7 do dnia 13. Grupy dawek opisano w tabeli 1 poniżej. Należy zwrócić uwagę, że aktualną grupę kontrolną zaznaczono w tabeli jako grupę 09. Grupa 5 jest grupą kontrolną, która otrzymała dietę równoważną tej dla grupy 4. Celem w przypadku tej grupy było oszacowanie, jaki wpływ ma ograniczona dieta na wątroby zwierząt.
Wyniki
Uzyskane w trakcie badania wyniki pokazały, że okres aklimatyzacji był za krótki. Szczury żywiły się przede wszystkim w ciągu nocy i nagła zmiana w ograniczeniu dostępu pokarmu do 3 godzin w ciągu dnia spowodowała zmniejszenie przyjmowanej dziennie ilości. Przyjmowanie dzienne pokarmu wciąż się zwiększało w większości grup pod koniec okresu aklimatyzacji, gdy rozpoczęto podawanie badanych próbek. Z tego powodu działanie badanych związków nie miało znaczącego wpływu na przyjmowanie pokarmu przez szczury podczas okresu podawania.
W tabeli D1 i tabeli D2 podano średnie masy ciał dla różnych grup dla dni od -7 do -1 i dni 0 - 6. Działanie różnych dawek soku i suszonego rozpyłowo soku pokazano na dołączonym wykresie jako % zmianę w masie ciała dla dni 0 - 7 (fig. 5) i % zmiana w masie ciała dla dni od -7 do 7 (fig. 6). Spadek masy ciała jest wyraźnie związany z dawką, zwłaszcza z wyższymi dawkami.
Badanie histopatologiczne wątrób nie wykazało żadnej znaczącej patologii w grupach otrzymujących badane próbki.
Pokarm
Spożycie pokarmu mierzono codziennie podczas aklimatyzacji i w trakcie trwania badania. Pokarm był dostępny przez 3 godziny w ciągu dnia, od 12:00 do 15:00. Zwierzęta głodzono przez resztę czasu. Zwierzęta w 5 grupie otrzymały obliczoną ilość pokarmu pierwszego dnia 1, równoważną średniemu spożyciu pokarmu przez 4 grupę dnia 0. Ten model kontrolowanej ilości pokarmu dla 5 grupy, określony jako średnie spożycie pokarmu przez 4 grupę z poprzedniego dnia, stosowano przez dni 1 - 7.
Woda
Wodę dostarczono w standardowych pojemnikach. Woda była dostępna bez ograniczeń (Magalies Water Board Tap Water, odpowiednia do spożycia przez ludzi). Spożycie wody mierzono raz dziennie, o tej samej godzinie każdego dnia po określeniu spożycia pokarmu.
PL 201 487 B1
Aklimatyzacja
Zwierzęta aklimatyzowano przez 7 dni zanim rozpoczęto badania, jak opisano powyżej, z określeniem spożycia pokarmu i wody. Masy ciała określano w tym czasie codziennie.
Projekt badania i procedury
T a b e l a 1 Projekt badania
Grupa Próba Numery Dawka Badana próbka
01 6 samców 001 - 006 100 mg/kg Sok zamrożony
02 6 samców 007 - 012 400 mg/kg Sok zamrożony
03 6 samców 013 - 018 1600 mg/kg Sok zamrożony
04 6 samców 019 - 024 3200 mg/kg Sok zamrożony
05 6 samców 025 - 030 kontrola Elga Option 4 Woda destylowana
06 6 samców 031 - 036 2,2 mg/kg Suszony rozpyłowo sok
07 6 samców 037 - 042 8,8 mg/kg Suszony rozpyłowo sok
08 6 samców 043 - 048 35 mg/kg Suszony rozpyłowo sok
09 6 samców 049 - 054 kontrola Elga Option 4 Woda oczyszczona
Sposób podawania
Badane próbki podawano codziennie przez 7 dni z użyciem igły dożołądkowo. Zwierzęta głodzono przez 18 godzin zanim podano badane próbki (podawanie rozpoczęto o 09:00).
Czas podawania
Zwierzęta traktowano przez 7 kolejnych dni (od dnia 0 do dnia 6). Po trzy zwierzęta z każdej grupy uśmiercano po 24 godzinach od ostatniej dawki (dzień 7). Pozostałe 3 zwierzęta uśmiercono po 7 dniach od ostatniego podania (dzień 13). Procedurę tę zastosowano dla wszystkich grup z wyjątkiem grupy 5, w której 3 zwierzęta uśmiercono 24 godziny po ostatnim kontrolowanym podawaniu pożywienia (dzień 8), pozostałe 3 zwierzęta uśmiercono po 7 dniach od ostatniego podawania (dzień 13).
Masa ciała
Masy ciała określano codziennie, w przybliżeniu w tym samym czasie każdego dnia w trakcie badania, w tym w ciągu okresu aklimatyzacji.
Eutanazja zwierzęta z każdej grupy uśmiercono po 24 godzinach od podania ostatniej dawki (dzień 7).
Pozostałe 3 zwierzęta uśmiercono po 7 dniach od ostatniego podania. Procedurę tę zastosowano dla wszystkich grup z wyjątkiem grupy 5, w której 3 zwierzęta uśmiercono 24 godziny po ostatnim kontrolowanym podawaniu pożywienia (dzień 8), pozostałe 3 zwierzęta uśmiercono po 7 dniach od ostatniego podawania (dzień 13). Zwierzęta uśmiercano pod koniec okresu badań z użyciem gazu, CO2.
Badania z użyciem oftalmoskopu
Badania oftalmoskopowe z użyciem oftalmoskopu przeprowadzono przed pierwszym podaniem badanej próbki i na koniec, u wszystkich zwierząt z każdej grupy.
Patologia makroskopowa
Całkowite badania po uśmierceniu wykonano na każdym zwierzęciu, które uśmiercono pod koniec okresu badania.
Histopatologia
Badania histopatologiczne wykonano na wątrobie każdego zwierzęcia.
PL 201 487 B1
T a b e l a D.1
Średnia masa ciała/grupę/tydzień
Gru- pa Podawanie doustnie Dawka (mg/kg) Średnia masa ciała (g) & odchylenie standardowe
Dzień -7 Dzień -6 Dzień -5 Dzień-4 Dzień -3 Dzień -2 Dzień -1
01 Próbka 1 (Sok) 100,0 203,38±95,39 197,13±90,63 192,75±89,49 188,62±86,75 184,95±84,80 182,48±83,47 182,25±82,57
02 Próbka 1 (Sok) 400,0 192,53±65,60 183,92±61,20 178,25±59,37 173,17±58,10 170,82±57,42 168,25±58,40 169,37±59,25
03 Próbka 1 (Sok) 1600,0 149,25±54,80 142,87±51,89 136,85±52,17 132,37±49,64 131,50±49,50 129,67±48,89 131,12±48,22
04 Próbka 1 (Sok) 3200,0 224,15±80,70 214,45±77,25 207,10±76,38 201,82±75,42 198,25±74,82 194,83±75,34 196,77±74,56
05 Elga Option woda oczyszczona (kontrola) - 214,55±74,90 204,85±72,41 198,57±71,79 193,48±68,49 192,40±67,48 190,87±67,39 190,15±65,24
06 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 2,2 208,65±65,74 199,37±62,49 193,18±61,18 188,25±60,89 186,22±59,98 184,55±58,86 185,97±58,76
07 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 8,8 256,95±77,55 246,02±73,67 237,47±73,53 232,62±71,73 229,78±71,76 228,07±69,88 228,45±68,81
08 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 35,0 194,37±43,74 185,83±42,70 177,53±41,10 172,05±40,13 170,10±39,49 167,25±37,61 168,00±38,81
09 Elga Option woda oczyszczona (kontrola) - 171,52±69,81 162,67±62,68 154,95±61,83 151,38±59,48 149,63±57,66 148,30±57,12 149,01±56,01
T a b e l a D.2
Średnia masa ciał/grupa/tydzień (ciąg dalszy)
Gru- pa Podawa- nie doustnie Dawka (mg/kg) Średnia masa ciała (g) & odchylenie standardowe
Dzień 0 Dzień 1 Dzień 2 Dzień 3 Dzień 4 Dzień 5 Dzień 6
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
01 Próbka 1 (Sok) 100,0 183,87±83,33 175,83±81,82 175,72±79,05 175,48±77,54 175,53±76,20 177,95±73,99 178,43±72,68
02 Próbka 1 (Sok) 400,0 173,45±60,73 164,58±58,52 164,75±58,37 166,22±57,69 166,55±57,79 169,93±57,47 171,77±57,29
03 Próbka (Sok) 1600, 0 134,38±46,01 129,20±44,74 127,53±43,20 127,20±41,36 126,70±39,19 128,00±39,22 128,07±38,66
04 Próbka (Sok) 3200, 0 199,60±75,16 196,38±73,96 192,20±71,20 189,05±69,11 186,57±66,29 186,05±67,45 185,68±65,73
PL 201 487 B1 cd. tabeli D2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
05 Elga Option 4 woda oczyszczona (kontrola) - 194,27±67,46 187,93±65,48 181,97±65,01 177,53±64,73 174,73±61,08 172,85±58,63 171,45±56,79
06 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 2,2 189,07±60,15 181,52±58,99 181,48±57,79 184,42±55,64 185,75±55,29 189,35±54,66 189,68±53,70
07 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 8,8 230,28±69,32 221,55±68,02 220,17±66,63 221,80±63,88 222,82±63,56 224,82±62,38 224,90±62,05
08 Próbka 2 (suszony rozpyłowo sok) 35,0 169,10±38,40 164,42±38,03 162,50±36,81 162,75±36,36 162,52±36,93 164,30±37,69 164,22±37,18
09 Elga Option 4 woda oczyszczona (kontrola) - 151,02±55,45 146,55±53,77 148,10±52,67 149,70±52,05 152,58±50,37 155,82±49,91 157,85±49,70
T a b e l a D.3
Średnia masa ciała/grupę/tydzień (ciąg dalszy)
Gru- pa Podawanie doustnie Dawka (mg/kg) Średnia masa ciała (g) & odchylenie standardowe
Dzień 7 Dzień 8 Dzień 9 Dzień 10 Dzień 1 1 Dzień 12 Dzień 13
01 Próbka 1 (Sok) (GHA I 35A) 100,0 185,38±72,64 234,73±62,44 236,73±62,39 234,07±62,09 236,33±62,31 239,07±60,24 238,43±59,85
02 Próbka 1 (Sok) (GHA I 35A) 400,0 178,83±58,24 225,63±13,05 277,13±14,18 227,10±14,03 229,43±16,97 234,93±18,35 236,20±15,97
03 Próbka 1 (Sok) (GHA I 3 5 A) 1600,0 132,22±37,08 133,80±55,17 135,23±455,74 134,53±54,96 138,30±53,03 139,30±51,10 142,80±49,51
04 Próbka 1 (Sok) (GHA 9 35A) 3200,0 188,57±66,14 199,63±61,07 198,90±57,48 198,70±54,55 194,73±52,78 194,93±50,78 197,93±51,57
05 Elga Option 4 woda oczyszczona (kontrola) - 173,97±54,29 172,98±52,06 157,80±58,62 158,87±57,76 160,80±57,67 163,40±56,27 167,80±58,49
06 Próbka 2 (Suszony rozpyłowo sok) (GHA I 59) 2,2 196,00±53,09 190,27±27,78 190,27±29,54 192,60±29,09 194,73±29,68 196,97±29,04 198,60±30,18
07 Próbka 2 (Suszony rozpyłowo sok) (GHA I 59) 8,8 231,30±61,91 177,27±24,48 178,17±23,79 180,67±25,04 182,03±25,31 185,10±24,60 189,73±23,58
08 Suszony rozpyłowo sok (GHA I 59) 35,0 167,48±36,75 164,90±22,54 166,63±23,08 168,43±22,66 171,67±24,42 174,90±25,70 178,57±23,58
09 Elga Option 4 woda oczyszczona (kontrola) - 165,50±49,27 193,73±22,37 196,87±21,86 198,07±21,02 199,83±20,21 204,93±18,65 207,13±18,22
PL 201 487 B1
T a b e l a 1: Histologiczna ocena sekcji wątroby szczurów (samce) Próbka 1
Grupa 1: 100 mg/kg Próbka 1 Grupa 2: 400 mg/kg Próbka 1
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
Dzień 7 01 NPL 07 FHS1 +
02 NPL 08 NPL C1 +
03 NPL C1 + 09 NPL
Dzień 13 04 NPL MLC Dzień 13 10 DHS1 +
05 FHS1 + 11 NPL
06 NPL 12 DHS1 +
Grupa 3: 1600 mg/kg Próbka 1 Grupa 4: 3200 mg/kg Próbka 1
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
Dzień 7 13 NPL 19 NPL
14 NPL 20 NPL
15 NPL 21 NPL
Dzień 13 16 NPL Dzień 13 22 DHS1 +
17 DHS1 + 23 FHS1 +
18 NPL 24 NPL
Grupa 5: Kontrola: Elga option 4, woda oczyszczona; ograniczone przyjmowanie pokarmu Legenda:
Grupa 5: Kontrola: Elga option 4, woda oczyszczona
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
Dzień 7 25 NPL MLC
26 NPL
27 NPL
Dzień 13 28 DHS1 +
29 DHS1 +
30 NPL
C = przekrwienie
DHS = rozsiane puchlinowe pęcznienie komórek
FHS = ogniskowe puchlinowe pęcznienie komórek
NPL = brak zmian miąższowych MLC = min. obrost limfocytowy 1+ = łagodnie
2+ = średnie 3+ = ciężkie
T a b e l a 2: Histologiczna ocena sekcji wątroby szczurów (samce) Próbka 2
Grupa 6: 2,2 mg/kg Próbka 2 Grupa 7: 8,8 mg/kg Próbka 2
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
1 2 3 4 5 6
Dzień 7 31 NPL 37 NPL
32 NPL MLC 38 NPL
33 FHS1 + 39 NPL C1 +
PL 201 487 B1 cd. tabeli 2
1 2 3 4 5 6
Dzień 13 34 NPL Dzień 13 40 DHS1 +
35 DHS1 + 41 NPL
36 NPL 42 MLC DHS1 +
Grupa 8:35 mg/kg Próbka 2
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
Dzień 7 43 NPL
44 NPL
45 NPL
Dzień 13 46 NPL
47 NPL C1 +
48 MLC FHS1 +
Grupa 9: Kontrola: Elga option 4, woda oczyszczona Legenda:
C = przekrwienie
Grupa 9: Kontrola: Elga option 4, woda oczyszczona
Zwierzę nr Zmiany w wątrobie
Dzień 7 49 NPL
50 NPL
51 FHS1 +
Dzień 13 52 DHS1 +
53 NPL
54 FHS1 +
DHS = rozsiane puchlinowe pęcznienie komórek
FHS = ogniskowe puchlinowe pęcznienie komórek
NPL = brak zmian miąższowych MLC = min. obrost limfocytowy 1+ = łagodne
2+ = średnie
3+ = ciężkie
Nie odnotowano żadnych konkretnych zmian we fragmentach wątrób u poddanych doświadczeniu szczurów, które otrzymały zamrożony sok jak również suszony rozpyłowo sok, które można byłoby przypisać podawaniu doustnemu wyżej wymienionych substancji chemicznych. Puchlinowe obrzmienie komórek zauważone zarówno w przypadku próby kontrolnej jak i u szczurów poddanych doświadczeniu może wskazywać na normalne metaboliczne obrzmienie komórek i zmiany na skutek niedotlenienia. Minimalne ogniska obrostu limfocytowego okołonaczyniowe wykryto u niektórych zwierząt i stanowią najprawdopodobniej przypadkowe spostrzeżenie. U kilku szczurów w zatokach wątrobowych nastąpiły przekrwienia o łagodnym stopniu i należy je traktować jako przypadkowe spostrzeżenie.
Istotną cechą tego wynalazku, którą obrazują wyniki tego badania jest to, że w czasie badania nie rozwinęła się żadna tolerancja na żadną z próbek. Może to stanowić znaczącą korzyść, zwłaszcza w zwią zku z leczeniem otył o ś ci.
Chociaż wcześniej opisano środki według wynalazku w powiązaniu z ich właściwościami jako środków hamujących łaknienie, to należy zauważyć że określenie ”środek hamujący łaknienie - stosuje się w niniejszym opisie w celu wskazania czynności zmierzającej do ograniczenia łaknienia i/lub
PL 201 487 B1 zwiększenia uczucia nasycenia, zatem w celu zmniejszenia całkowitej kaloryczności przyjmowanego pożywienia, co z kolei przeciwdziała otyłości. Zatem niniejszy wynalazek umożliwia leczenie, zapobieganie lub zwalczanie otyłości u człowieka lub zwierzęcia przez podawanie temu człowiekowi lub zwierzęciu leczącej, zapobiegającej lub zwalczającej otyłość ilości środka lub ekstraktu zawierającego związek o wzorze (1).
Stosowane w niniejszym opisie określenie ”zwierzę obejmuje, lecz nie ogranicza się do zwierząt towarzyszących, np. zwierząt domowych i zwierząt oswojonych; bez ograniczenia się do tych przykładów obejmuje bydło, owce, fretki, świnie, wielbłądy, konie, drób, ryby, króliki, kozy, psy i koty.
Środek anorektyczny lub do leczenia otyłości lub jej zapobiegania u człowieka, środek według wynalazku, korzystnie podaje się takiemu człowiekowi w dawce w ilości od około 0,01 mg/kg/dzień do około 10 mg/kg/dzień. Korzystny zakres dawek wynosi 0,05 mg/kg/dzień do 0,5 mg/kg/dzień. W przypadku użycia ekstraktu w postaci suszonego rozpyłowo proszku korzystny zakres dawek wynosi od 0,1 mg/kg/dzień do 20 mg/kg/dzień; a zwłaszcza wynosi od 0,5 mg/kg/dzień do 5 mg/kg/dzień.

Claims (26)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób wytwarzania ekstraktu z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawierającego skuteczną do hamowania łaknienia ilość hamującego łaknienie glikozydu steroidowego o wzorze (1) znamienny tym, że na materiał roślinny działa się rozpuszczalnikiem dla ekstrakcji frakcji o czynności hamowania łaknienia, oddziela się roztwór ekstrakcyjny od reszty materiału roślinnego, usuwa się rozpuszczalnik z roztworu ekstrakcyjnego i wyodrębnia się ekstrakt.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się roślinę rodzaju Trichocaulon wybraną z grupy obejmującej gatunek Trichocaulon piliferum i Trichocaulon officinale i roślinę rodzaju Hoodia wybraną z grupy obejmującej gatunek Hoodia currorii, Hoodia gordonii i Hoodia lugardii.
  3. 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że ekstrakt ekstrahuje się z rośliny wybranej z grupy obejmującej gatunek Hoodia currorii, Hoodia gordonii i Hoodia lugardii.
  4. 4. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, znamienny tym, że zatęża się substancję czynną w wyekstrahowanym materiale drogą dalszej ekstrakcji rozpuszczalnikiem.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienny tym, że jako rozpuszczalnik w etapie ekstrakcji rozpuszczalnikiem lub w etapach ekstrakcji rozpuszczalnikiem stosuje się jeden lub większą liczbę rozpuszczalników wybranych z grupy obejmującej chlorek metylenu, wodę, metanol, heksan, octan etylu i ich mieszaniny.
  6. 6. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienny tym, że zatęża się substancję czynną w wyekstrahowanym materiale drogą rozdzielania chromatograficznego.
  7. 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że w etapie rozdzielania chromatograficznego jako eluent stosuje się jeden lub większą liczbę rozpuszczalników wybranych z grupy obejmującej chloroform, metanol, octan etylu, heksan i ich mieszaniny.
  8. 8. Sposób według zastrz. 6 albo 7, znamienny tym, że prowadzi się rozdzielanie chromatograficzne w kolumnie, zbiera się eluat we frakcjach z kolumny, ocenia się frakcje dla określenia ich czynności hamowania łaknienia i wybiera się co najmniej jedną frakcję zawierającą substancję hamującą łaknienie.
    PL 201 487 B1
  9. 9. Sposób według zastrz. 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, albo 6, albo 7, albo 8, znamienny tym, że ekstrakt poddaje się obróbce z wytworzeniem sypkiego proszku.
  10. 10. Ekstrakt roślinny zawierający środek hamujący łaknienie, znamienny tym, że jest wytworzony sposobem określonym w zastrz. 1-9.
  11. 11. Ekstrakt według zastrz. 10, do stosowania jako lek o czynności hamowania łaknienia.
  12. 12. Ekstrakt według zastrz. 10, do stosowania jako lek do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
  13. 13. Środek o czynności hamowania łaknienia, znamienny tym, że zawiera ekstrakt określony w zastrz. 10.
  14. 14. Środek według zastrz. 13, znamienny tym, że jest zmieszany z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem.
  15. 15. Środek według zastrz. 13 albo 14, znamienny tym, że jest sformułowany w jednostkową postać dawkowaną.
  16. 16. Środek według zastrz. 13, znamienny tym, że środkiem jest produkt żywnościowy lub napój.
  17. 17. Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego z rośliny rodzaju Trichocaulon lub rodzaju Hoodia, zawierającego skuteczną do hamowania łaknienia ilość hamującego łaknienie glikozydu steroidowego o wzorze (1) znamienny tym, że prasuje się materiał roślinny, oddziela się sok od stałego materiału roślinnego i wyodrębnia się sok wolny od stałego materiału roślinnego z wytworzeniem ekstraktu.
  18. 18. Sposób według zastrz. 17, znamienny tym, że ekstrakt suszy się z wytworzeniem sypkiego proszku.
  19. 19. Ekstrakt roślinny zawierający środek hamujący łaknienie, znamienny tym, że jest wytworzony sposobem określonym w zastrz. 17 albo 18.
  20. 20. Ekstrakt według zastrz. 19, do stosowania jako lek o czynności hamowania łaknienia.
  21. 21. Ekstrakt według zastrz. 19, do stosowania jako lek do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
  22. 22. Środek o czynności hamowania łaknienia, znamienny tym, że zawiera ekstrakt według zastrz. 19.
  23. 23. Środek według zastrz. 22, znamienny tym, że jest zmieszany z farmaceutyczną zaróbką, rozcieńczalnikiem lub nośnikiem.
  24. 24. Środek według zastrz. 22 albo 23, znamienny tym, że jest sformułowany w jednostkową postać dawkowaną.
  25. 25. Środek według zastrz. 22, znamienny tym, że środkiem jest produkt żywnościowy lub napój.
  26. 26. Zastosowanie ekstraktu według zastrz. 19, do wytwarzania leku do leczenia, zapobiegania lub zwalczania otyłości.
PL380957A 1997-04-15 1998-04-15 Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego PL201487B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ZA973201 1997-04-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
PL201487B1 true PL201487B1 (pl) 2009-04-30

Family

ID=25586362

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL380957A PL201487B1 (pl) 1997-04-15 1998-04-15 Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego
PL98336498A PL196015B1 (pl) 1997-04-15 1998-04-15 Zastosowanie ekstraktu roślinnego i nieterapeutyczny sposób hamowania łaknienia
PL374521A PL197783B1 (pl) 1997-04-15 1998-04-15 Glikozyd steroidowy, środek o czynności hamowania łaknienia, produkt żywnościowy lub napój, zastosowanie glikozydu steroidowego, nieterapeutyczny sposób hamowania łaknienia oraz ekstrakt roślinny

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL98336498A PL196015B1 (pl) 1997-04-15 1998-04-15 Zastosowanie ekstraktu roślinnego i nieterapeutyczny sposób hamowania łaknienia
PL374521A PL197783B1 (pl) 1997-04-15 1998-04-15 Glikozyd steroidowy, środek o czynności hamowania łaknienia, produkt żywnościowy lub napój, zastosowanie glikozydu steroidowego, nieterapeutyczny sposób hamowania łaknienia oraz ekstrakt roślinny

Country Status (39)

Country Link
US (6) US6376657B1 (pl)
EP (5) EP1598054B1 (pl)
JP (3) JP3553086B2 (pl)
KR (2) KR100510614B1 (pl)
CN (3) CN101239090A (pl)
AP (3) AP2003002729A0 (pl)
AT (3) ATE502041T1 (pl)
AU (1) AU746414B2 (pl)
BG (1) BG103795A (pl)
BR (1) BR9808593A (pl)
CA (2) CA2283564C (pl)
DE (3) DE69842189D1 (pl)
DK (1) DK0973534T3 (pl)
EA (2) EA200200392A1 (pl)
EE (1) EE9900497A (pl)
ES (3) ES2363230T3 (pl)
GB (3) GB2360520B (pl)
GE (2) GEP20022709B (pl)
GT (3) GT199800076AA (pl)
HU (1) HUP0000838A3 (pl)
ID (1) ID22888A (pl)
IL (3) IL131659A (pl)
IS (1) IS5196A (pl)
MY (1) MY141674A (pl)
NO (1) NO994992L (pl)
NZ (5) NZ516696A (pl)
OA (1) OA11166A (pl)
PE (1) PE85699A1 (pl)
PL (3) PL201487B1 (pl)
PT (2) PT973534E (pl)
SA (1) SA98190501B1 (pl)
SG (1) SG120054A1 (pl)
SK (1) SK141899A3 (pl)
TR (2) TR200001846T2 (pl)
TW (3) TWI253932B (pl)
UA (1) UA72439C2 (pl)
WO (1) WO1998046243A2 (pl)
YU (1) YU52199A (pl)
ZA (1) ZA983170B (pl)

Families Citing this family (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL201487B1 (pl) 1997-04-15 2009-04-30 Csir Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego
WO2001010842A2 (en) * 1999-08-04 2001-02-15 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Melanocortin-4 receptor binding compounds and methods of use thereof
GB2355657B (en) * 1999-10-27 2004-07-28 Phytopharm Plc Inhibitors Of Gastric Acid Secretion
GB2363985B (en) 2000-06-30 2004-09-29 Phytopharm Plc Extracts,compounds & pharmaceutical compositions having anti-diabetic activity and their use
US7129161B2 (en) * 2001-07-19 2006-10-31 Trikon Holdings Limited Depositing a tantalum film
WO2003041727A2 (en) * 2001-11-16 2003-05-22 Novartis Nutrition Ag Plant derived or derivable material with appetite suppressing activity
US20040265398A1 (en) * 2002-04-25 2004-12-30 Fleischner Albert M. Herbal composition for weight control
US20060233861A1 (en) * 2003-02-14 2006-10-19 Maclean David B Modulation of atp production or content in the hypothalamus
US7060308B2 (en) * 2003-06-04 2006-06-13 Ramaswamy Rajendran Caralluma extract products and processes for making the same
US7976880B2 (en) * 2003-06-04 2011-07-12 Ramaswamy Rajendran Pregnane glycoside compositions and Caralluma extract products and uses thereof
EP1763358A4 (en) * 2004-04-07 2010-03-24 Univ Rutgers COMPOSITIONS AND METHODS FOR SUPPRESSING THE APPETITE
GB0411703D0 (en) * 2004-05-25 2004-06-30 Phytopharm Plc Selective separation or extraction of steroidal glycosides
US20050276839A1 (en) * 2004-06-10 2005-12-15 Rifkin Calman H Appetite satiation and hydration beverage
US20050276869A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-15 Century Systems Appetite-suppressing, lipase-inhibiting herbal composition
US7500679B2 (en) * 2004-10-08 2009-03-10 Wade James T Board for supporting front of snow vehicle
US20060083795A1 (en) * 2004-10-19 2006-04-20 Lima Shatkina Meal replacement products having appetite suppressing qualities
GB0425172D0 (en) * 2004-11-15 2004-12-15 Phyto Res Ltd Plant cells and uses thereof
WO2006079056A1 (en) * 2005-01-20 2006-07-27 Stephen Holt Herbal compositions containing hoodia
AU2006279602B2 (en) * 2005-08-17 2009-06-04 Elc Management Llc Delivery system for appetite suppressant
US20070082028A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Compositions and methods for inducing satiety and reducing caloric intake
US20070082025A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for achieving and maintaining weight loss
US20070082114A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for reducing weight
US20070082084A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Methods for weight management
US20070082030A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Fiber satiety compositions
US20070082085A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Catani Steven J Compositions and methods for reducing food intake and controlling weight
US20070082026A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Compositions and methods for reducing food intake and controlling weight
US20070082029A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Fiber satiety compositions
US20070082115A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William Ronald Jr Methods for inducing satiety, reducing food intake and reducing weight
US20070082108A1 (en) * 2005-10-07 2007-04-12 Aimutis William R Jr Methods for reducing calorie intake
US20070104805A1 (en) * 2005-11-01 2007-05-10 Udell Ronald G Compositions of Hoodia Gordonii and Pinolenic Acid Derivatives
US8945652B2 (en) 2005-11-23 2015-02-03 The Coca-Cola Company High-potency sweetener for weight management and compositions sweetened therewith
US20070207227A1 (en) * 2006-02-23 2007-09-06 Conopco, Inc., D/B/A Unilever, A Corporation Of New York Appetite suppressant compositions
US20070196436A1 (en) * 2006-02-23 2007-08-23 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Process for preparing an edible composition comprising steroidal glycosides
EP2026666B1 (en) * 2006-06-13 2015-06-10 Csir Unit serving appetite suppressant compositions with steroidal glycosides
JP5281234B2 (ja) * 2006-06-27 2013-09-04 ポーラ化成工業株式会社 毛様体過緊張による疲れ目の改善・予防のための経口投与組成物
CA2660464A1 (en) * 2006-08-17 2008-02-21 Unilever Plc Processes for production of hoodia plant extracts containing steroidal glycosides
WO2008022875A1 (en) * 2006-08-24 2008-02-28 Unilever N.V. Process for preparing a composition comprising steroidal glycosides
US20080085354A1 (en) * 2006-10-06 2008-04-10 Teresa Marie Paeschke Controlled hydration of hydrocolloids
US20080138447A1 (en) * 2006-12-06 2008-06-12 Erin John Riggins Method for administering appetite suppressant and composition thereof
AP2009004860A0 (en) * 2006-12-21 2009-06-30 Unilever Plc Process for harvesting plants of the APOCYNACEAE family
US20080188447A1 (en) * 2007-02-02 2008-08-07 Svyatoslav Komarnytsky Glucocorticoid-lowering composition
US8580236B2 (en) * 2007-03-19 2013-11-12 Richard P. De Maria Hair sustaining formulation
EP2052727A3 (en) * 2007-10-02 2010-06-02 Unilever N.V. Hoodia extract oil compositions comprising unsaturated monoacylglycerides
US20100316736A1 (en) * 2007-10-24 2010-12-16 Desert Labs Agriculture Cooperative Association Ltd. Appetite suppressant
US20090110774A1 (en) * 2007-10-26 2009-04-30 The Hershey Company High antioxidant levels in cocoa-based beverages
EP2060251B1 (de) 2007-11-17 2011-03-23 Cognis IP Management GmbH Verfahren zur Herstellung von Wirkstoffkonzentraten
EP2080517A1 (en) * 2008-01-18 2009-07-22 Unilever N.V. Process for obtaining dried plant material
US20090324757A1 (en) * 2008-03-31 2009-12-31 Rutgers, The State University Of New Jersey Compositions and Methods for Modulating Visceral Sensation and/or Gastrointestinal Reflex Activity
JP5276885B2 (ja) * 2008-04-11 2013-08-28 株式会社耐熱性酵素研究所 キチン又はキトサンを含む分解性複合材料
US7923435B2 (en) * 2008-04-21 2011-04-12 Phytopharm Plc Hoodia plant extract with improved flavor
US20090263510A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-22 Conopco, Inc., D/B/A Unilever Process of making Hoodia plant extract with improved flavor
AU2009325842A1 (en) 2008-12-08 2011-07-14 Bio-Mass Ltd. Method of treatment of diseases using Hoodia extracts
EP2448591B1 (en) 2009-07-01 2017-10-25 Natures Remedies Ltd. Composition and method for reducing food intake
EP2329836A1 (en) 2009-12-03 2011-06-08 I.R.B. Istituto Di Ricerche Biotecnologiche S.r.l. Extracts obtained from hoodia gordonii cells lines, their preparation and use
MX2012009539A (es) * 2010-02-18 2012-10-01 Hershey Co Bebidas para la recuperacion del ejercicio a base de cacao.
WO2012022880A2 (fr) 2010-07-29 2012-02-23 Universite De Strasbourg Procede de synthese de steroïdes
CN102462690B (zh) * 2010-11-11 2013-04-17 中国科学院上海药物研究所 3，8，12，14，17，20位氧取代孕甾烯糖苷类化合物在制备抑制食欲的药物中的用途
US9861116B2 (en) 2010-12-20 2018-01-09 Hill's Pet Nutrition, Inc. Pet food compositions for inducing a satiety response
CN103597071A (zh) 2011-01-07 2014-02-19 埃尔舍利克斯治疗公司 基于化学感应受体配体的治疗
US9795792B2 (en) 2011-02-25 2017-10-24 Medtronic, Inc. Emergency mode switching for non-pacing modes
NZ626578A (en) 2012-01-06 2016-11-25 Elcelyx Therapeutics Inc Compositions and methods for treating metabolic disorders
BR112014016808B1 (pt) 2012-01-06 2022-01-11 Anji Pharma (Us) Llc Uso de um composto de biguanida para a fabricação de um medicamento para baixar os níveis de glicose no sangue e para o tratamento de um distúrbio do metabolismo de glicose
US9456916B2 (en) 2013-03-12 2016-10-04 Medibotics Llc Device for selectively reducing absorption of unhealthy food
EP2872127A1 (en) 2012-07-11 2015-05-20 Elcelyx Therapeutics, Inc. Compositions comprising statins, biguanides and further agents for reducing cardiometabolic risk
SG11201505240QA (en) 2013-01-05 2015-08-28 Elcelyx Therapeutics Inc Delayed-release composition comprising biguanide
US9011365B2 (en) 2013-03-12 2015-04-21 Medibotics Llc Adjustable gastrointestinal bifurcation (AGB) for reduced absorption of unhealthy food
US9067070B2 (en) 2013-03-12 2015-06-30 Medibotics Llc Dysgeusia-inducing neurostimulation for modifying consumption of a selected nutrient type
WO2014194068A1 (en) * 2013-05-29 2014-12-04 Northeastern University Glycosylated cardiotonic steroids
CN103755762B (zh) * 2014-01-30 2016-06-01 中国科学院上海有机化学研究所 果同尼皂苷f及其衍生物的中间体、制备方法和用途及果同尼皂苷f衍生物
GB2544416B (en) * 2015-11-13 2017-11-01 Lykke Res Ltd A method for producing a medium containing steroidal glycosides from plant cells of the genus Hoodia

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4062950A (en) * 1973-09-22 1977-12-13 Bayer Aktiengesellschaft Amino sugar derivatives
FR2348655A1 (fr) 1976-04-20 1977-11-18 Sopharga Lab Nouvelle substance alimentaire ou dietetique ayant une structure alveolaire et son procede de preparation
US4185116A (en) 1976-09-28 1980-01-22 Pfizer Inc. L- and DL- Phenylglycines to treat diseases or conditions attributable to reduced carbohydrate metabolism
USPP4199P (en) 1977-01-18 1978-01-24 B. L. Cobia, Inc. Milkweed plant family
DE2719912C3 (de) * 1977-05-04 1979-12-06 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Verfahren zur Isolierung von 0- |4,6-Dideoxy-4- [JJl S-O,4,6/5)-4,5,6-trihydroxy-3-hydroxymethyl-2cyclohexen-1-yl] -amino] - a -D-glucopyranosyl} -(I Pfeil nach rechts 4)-0- a D-glucopyranosyl-(l Pfeil nach rechts 4)-D-glucopyranose aus Kulturbrühen
US4130714A (en) * 1977-05-23 1978-12-19 Pfizer Inc. Hydantoin therapeutic agents
NO154918C (no) * 1977-08-27 1987-01-14 Bayer Ag Analogifremgangsmaate til fremstilling av terapeutisk aktive derivater av 3,4,5-trihydroksypiperidin.
JPS5953920B2 (ja) * 1977-12-28 1984-12-27 東洋醸造株式会社 新規なアミノ糖化合物およびその製法
IE47592B1 (en) * 1977-12-29 1984-05-02 Ici Ltd Enzyme inhibitory phthalazin-4-ylacetic acid derivatives, pharmaceutical compositions thereof,and process for their manufacture
US4273763A (en) 1978-01-23 1981-06-16 Efamol Limited Pharmaceutical and dietary compositions
JPS5745185A (en) * 1980-07-21 1982-03-13 Eisai Co Ltd Hydantoin derivative and its preparation
JPS5740478A (en) * 1980-08-22 1982-03-06 Ono Pharmaceut Co Ltd Rhodanine derivative, its preparation and aldose reductase inhibitor containing rhodanine derivative
US4791126A (en) * 1980-08-22 1988-12-13 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Rhodanine derivatives, process for their preparation, and aldose reductase inhibitor containing the rhodanine derivatives as active ingredients
EP0056194B1 (en) * 1981-01-05 1984-09-12 Takeda Chemical Industries, Ltd. N-substituted pseudo-aminosugars, their production and use
CA1176269A (en) * 1981-03-02 1984-10-16 Kazimir Sestanj N-naphthoylglycine derivatives
US4377500A (en) 1981-07-08 1983-03-22 The Standard Oil Co. Catalysts
US4438272A (en) * 1982-04-15 1984-03-20 Alcon Laboratories, Inc. Spiro-(fluoren-9,4'-imidazolidine)-2',5'-diones
US4436745A (en) * 1982-04-15 1984-03-13 Alcon Laboratories, Inc. Method of inhibiting aldose reductase activity
JPS58194818A (ja) 1982-05-10 1983-11-12 Iwasaki Shuzo サボテン中の水溶性多糖及び繊維の取得方法
ES524614A0 (es) * 1982-08-12 1984-05-01 Nativelle Sa Ets Procedimiento de preparacion de nuevos amino-14 esteroides.
AU570439B2 (en) 1983-03-28 1988-03-17 Compression Labs, Inc. A combined intraframe and interframe transform coding system
HU201675B (en) 1983-08-26 1990-12-28 Ivan Balkanyi Process for producing oral pharmaceutical compositions with unappetizing effect
US5066659A (en) * 1984-10-30 1991-11-19 Pfizer Inc. Spiro-heteroazalones for treatment of diabetic complications
US4634765A (en) * 1984-12-18 1987-01-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Homodisaccharide hypoglycemic agents
CA1270837A (en) 1984-12-21 1990-06-26 Hoffmann-La Roche Limited Oxetanones
US5246960A (en) 1984-12-21 1993-09-21 Hoffmann-La Roche Inc. Oxetanones
IT1207504B (it) 1985-09-26 1989-05-25 Crinos Industria Farmaco Composizione moderatrice dell'appetito ed antigastrica.
IT1190400B (it) 1985-10-04 1988-02-16 Istituto Biochimico Italiano Derivati dell'acido 19,20-bis,nor-prostanoico ad attivita' antiulcera e anoressivca,procedimento per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche
GB8524663D0 (en) * 1985-10-07 1985-11-13 Fujisawa Pharmaceutical Co Quinazoline derivatives
US4939140A (en) * 1985-11-07 1990-07-03 Pfizer Inc. Heterocyclic oxophthalazinyl acetic acids
US4757151A (en) 1985-11-14 1988-07-12 Warner-Lambert Company 2-substituted-[2-substituted-amino]-N-arylalkyl-3-[indol-3-yl]
US4652553A (en) * 1985-11-25 1987-03-24 Merck & Co., Inc. Steroidal glycolipids as host resistance stimulators
GB8600489D0 (en) 1986-01-09 1986-02-12 Erba Farmitalia Aminoglycoside steroids
AU602641B2 (en) * 1986-04-17 1990-10-18 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Thiolactam-N-acetic acid derivatives, their production and use
EP0264586B1 (en) 1986-08-28 1991-04-03 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co., Ltd. Hydantoin derivatives for treating complications of diabetes
ZA883929B (en) 1987-06-22 1990-02-28 Hoffmann La Roche Cholecystokinin analogs for controlling appetite
US5175154A (en) * 1987-11-25 1992-12-29 Research Corporation Technologies, Inc. 5 α-pregnan-20-ones and 5-pregnen-20-ones and related compounds
US5192772A (en) * 1987-12-09 1993-03-09 Nippon Shinyaku Co. Ltd. Therapeutic agents
GB8801037D0 (en) * 1988-01-18 1988-02-17 Plessey Co Ltd Improvements relating to fuel supply systems
US5252572A (en) * 1988-02-03 1993-10-12 Chinoin Gyogyszer- Es Vegyeszeti Termekek Gyara Rt. Pyridopyrimidine derivatives, pharmaceutical compositions containing them and process for preparing same
EP0344383A1 (en) * 1988-06-02 1989-12-06 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Novel alpha-Glucosidase inhibitors
DE3836675A1 (de) * 1988-10-28 1990-05-03 Hoechst Ag Glykosidase-inhibitor salbostatin, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung
US4978669A (en) 1989-06-08 1990-12-18 Neurex Corporation Method of suppressing appetite by administration of tetrahydro-beta-carboline derivatives
JPH03120227A (ja) 1989-10-02 1991-05-22 Shigeo Ochi 飲食物消化分解産物吸収抑制剤
US4980357A (en) * 1990-03-01 1990-12-25 Pfizer Inc. Azolidinedione derivatives
US5037831A (en) * 1990-05-21 1991-08-06 American Home Products Corporation Spiro-isoquinoline-pyrrolidines and analogs thereof useful as aldose reductase inhibitors
US5504078A (en) * 1990-06-08 1996-04-02 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. α-glucosidase inhibitors
GB9016978D0 (en) * 1990-08-02 1990-09-19 Ici Plc Acetamide derivatives
US5217877A (en) * 1990-09-28 1993-06-08 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of α-glucosidase inhibitor, pradimicin Q
US5091418A (en) * 1990-09-28 1992-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Novel alpha-glucosidase inhibitor, pradimicin Q
US6100048A (en) 1992-04-10 2000-08-08 Oregon Health Sciences University Methods and reagents for discovering and using mammalian melanocortin receptor agonists and antagonists to modulate feeding behavior in animals
NZ254550A (en) * 1992-09-28 1997-08-22 Pfizer Use of nitrogen-substituted pyrimidines to prepare medicaments useful for treatment or prevention of diabetic complications
PL172775B1 (pl) 1992-09-30 1997-11-28 Motorola Inc Sposób i system dostarczania komunikatów w lacznosci telekomunikacyjnej PL PL PL
GB9307833D0 (en) 1993-04-15 1993-06-02 Glaxo Inc Modulators of cholecystokinin and gastrin
FR2706255B1 (fr) 1993-06-17 1995-10-27 Univ Rennes Composition à usage alimentaire et/ou pharmaceutique pauvre en polyamines et applications thérapeutiques.
AU7174494A (en) 1993-06-18 1995-01-17 University Of Cincinnati, The Neuropeptide y antagonists and agonists
US5516516A (en) 1993-10-19 1996-05-14 Cherksey; Bruce D. Method of preparing muira puama extract and its use for decreasing body fat percentage and increasing lean muscle mass
JPH07184548A (ja) 1993-12-28 1995-07-25 Meiji Seito Kk 口腔用組成物
US6309853B1 (en) * 1994-08-17 2001-10-30 The Rockfeller University Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof
US5698199A (en) 1995-03-10 1997-12-16 Kao Corporation Lipolysis acceleration method
FI974436A7 (fi) 1995-06-06 1998-01-27 Pfizer Substituoituja N-(indoli-2-karbonyyli)-glysiiniamideja ja -johdannaisi a glykogeenifosforylaasi-inhibiittoreina
ATE205477T1 (de) 1995-06-06 2001-09-15 Pfizer Substituierte n-(indol-2-carbonyl)-amide und derivate als glycogen phosphorylase inhibitoren
JPH08332028A (ja) 1995-06-12 1996-12-17 Takashi Mizuno サボテン成分入り冷菓とその製法
US5693327A (en) 1995-07-12 1997-12-02 Shah; Eladevi Herbal compositions
WO1997015671A1 (en) 1995-10-26 1997-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Luminal cholecystokinin-releasing factor
US5824668A (en) 1996-11-07 1998-10-20 Supergen, Inc. Formulation for administration of steroid compounds
TW432073B (en) 1995-12-28 2001-05-01 Pfizer Pyrazolopyridine compounds
US5908609A (en) 1996-06-10 1999-06-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight
US5932779A (en) 1996-06-10 1999-08-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Screening methods for compounds useful in the regulation of body weight
WO1998020121A1 (en) 1996-11-06 1998-05-14 Children's Medical Center Corporation Transgenic animal expressing a syndecan in the regions of hypothalamus
CA2275442A1 (en) 1996-12-17 1998-06-25 Quadrant Holdings Cambridge Limited Melanocortin derivatives for specific binding of melanocortin receptor 3, 4 or 5
CA2217698A1 (en) 1996-12-20 1998-06-20 Eli Lilly And Company Anti-obesity proteins
US5798101A (en) 1997-01-22 1998-08-25 Hpf, L.L.C. Herbal appetite suppressant and weight loss composition
AU6393498A (en) 1997-03-26 1998-10-20 Novo Nordisk A/S Polypeptide with appetite regulating activity
PL201487B1 (pl) 1997-04-15 2009-04-30 Csir Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego
FR2771105A1 (fr) 1997-11-20 1999-05-21 Vitasterol Utilisation du fusarium monoliforme pour la preparation des derives 7alpha-hydroxyles de la dehydroepiandrosterone et de la pregnenolone
GB2355657B (en) 1999-10-27 2004-07-28 Phytopharm Plc Inhibitors Of Gastric Acid Secretion
GB2363985B (en) * 2000-06-30 2004-09-29 Phytopharm Plc Extracts,compounds & pharmaceutical compositions having anti-diabetic activity and their use

Also Published As

Publication number Publication date
EP1598054B1 (en) 2011-03-16
TWI253932B (en) 2006-05-01
ES2363230T3 (es) 2011-07-27
US20060205931A1 (en) 2006-09-14
AU7061398A (en) 1998-11-11
AP2003002730A0 (en) 2003-06-30
AP9901673A0 (en) 1999-12-31
EP0973534A1 (en) 2000-01-26
GB0117041D0 (en) 2001-09-05
CN100378118C (zh) 2008-04-02
NZ516696A (en) 2003-08-29
HUP0000838A3 (en) 2001-04-28
GEP20022709B (en) 2002-06-25
AU746414B2 (en) 2002-05-02
EP1598054A3 (en) 2009-06-10
DE69836321T2 (de) 2007-06-28
PT973534E (pt) 2007-02-28
GB9919797D0 (en) 1999-10-27
GT199800076AA (es) 1999-12-01
EP1598054A2 (en) 2005-11-23
CA2283564C (en) 2007-07-10
TW200300093A (en) 2003-05-16
PE85699A1 (es) 1999-09-15
SG120054A1 (en) 2006-03-28
BG103795A (en) 2000-05-31
GB2360520B (en) 2001-11-07
EP1222927A3 (en) 2002-10-30
GEP20022788B (en) 2002-09-25
IL158465A0 (en) 2004-05-12
US6376657B1 (en) 2002-04-23
CN101239090A (zh) 2008-08-13
GB2338235B (en) 2001-11-14
EP1213020A3 (en) 2005-03-09
NO994992L (no) 1999-12-14
CA2283564A1 (en) 1998-10-22
PL336498A1 (en) 2000-07-03
ATE502041T1 (de) 2011-04-15
NZ516695A (en) 2003-08-29
IL131659A (en) 2005-07-25
EP1222927A2 (en) 2002-07-17
GB0117039D0 (en) 2001-09-05
EP1438965A1 (en) 2004-07-21
AP1291A (en) 2004-08-02
DK0973534T3 (da) 2007-03-12
GB2360519A (en) 2001-09-26
EP0973534B1 (en) 2006-11-02
SK141899A3 (en) 2000-09-12
ATE344046T1 (de) 2006-11-15
US20030086984A1 (en) 2003-05-08
TR199902540T2 (xx) 2000-01-21
EA199900932A1 (ru) 2000-04-24
DE69836321D1 (de) 2006-12-14
OA11166A (en) 2003-04-28
KR20010006424A (ko) 2001-01-26
WO1998046243A2 (en) 1998-10-22
KR100891756B1 (ko) 2009-04-07
NZ337422A (en) 2002-05-31
US20020168427A1 (en) 2002-11-14
KR20040004407A (ko) 2004-01-13
KR100510614B1 (ko) 2005-08-30
BR9808593A (pt) 2000-05-23
JP3553086B2 (ja) 2004-08-11
NZ525022A (en) 2004-05-28
DE69842189D1 (de) 2011-04-28
SA98190501B1 (ar) 2006-07-30
TW200300094A (en) 2003-05-16
ATE422359T1 (de) 2009-02-15
NO994992D0 (no) 1999-10-14
TW539551B (en) 2003-07-01
PL196015B1 (pl) 2007-11-30
DE69840552D1 (de) 2009-03-26
PL197783B1 (pl) 2008-04-30
HUP0000838A2 (hu) 2000-10-28
MY141674A (en) 2010-05-31
ZA983170B (en) 1999-10-15
GB2360519B (en) 2001-11-28
UA72439C2 (en) 2005-03-15
WO1998046243A3 (en) 1999-02-25
AP2003002729A0 (en) 2003-06-30
IL158466A0 (en) 2004-05-12
PT1213020E (pt) 2009-04-24
EE9900497A (et) 2000-06-15
IL131659A0 (en) 2001-01-28
EA002885B1 (ru) 2002-10-31
EP1213020A8 (en) 2003-12-17
ES2276460T3 (es) 2007-06-16
US20040228935A1 (en) 2004-11-18
EP1213020B1 (en) 2009-02-11
ES2321162T3 (es) 2009-06-03
CA2584411A1 (en) 1998-10-22
GB2360520A (en) 2001-09-26
NZ525021A (en) 2004-05-28
IS5196A (is) 1999-09-24
US20040234634A1 (en) 2004-11-25
EA200200392A1 (ru) 2002-08-29
GB2338235A (en) 1999-12-15
TR200001846T2 (tr) 2000-11-21
GT199800076BA (es) 1999-12-01
JP2003026591A (ja) 2003-01-29
EP1222927B1 (en) 2013-11-20
ID22888A (id) 1999-12-16
JP2000510482A (ja) 2000-08-15
TW589187B (en) 2004-06-01
CN101239089A (zh) 2008-08-13
JP2002205997A (ja) 2002-07-23
CN1252000A (zh) 2000-05-03
HK1026373A1 (zh) 2000-12-15
GT199800076A (es) 1999-12-01
EP1213020A2 (en) 2002-06-12
US7166611B2 (en) 2007-01-23
YU52199A (sh) 2003-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL201487B1 (pl) Sposób wytwarzania ekstraktu roślinnego, ekstrakt roślinny, środek o czynności hamowania łaknienia i zastosowanie ekstraktu roślinnego
Mahi-Birjand et al. Protective effects of pharmacological agents against aminoglycoside-induced nephrotoxicity: A systematic review
Behling et al. Comparative study of multiple dosage of quercetin against cisplatin-induced nephrotoxicity and oxidative stress in rat kidneys
Gandhi et al. Antihyperglycemic activity and antidiabetic effect of methyl caffeate isolated from Solanum torvum Swartz. fruit in streptozotocin induced diabetic rats
US20110236510A1 (en) Pregnane glycoside compositions and caralluma extract products and uses thereof
WO2007119837A1 (ja) リパーゼ阻害剤
JP2020100657A (ja) 肝臓の治療および肝臓の健康維持のための組成物、方法および医薬組成物
CN104736147A (zh) 用于控制体重的组合物和方法
CN105452269A (zh) 用于关节健康的组合物和方法
JP7254727B2 (ja) ハーブ組成物
CN110167571A (zh) 5型磷酸二酯酶活性抑制用组合物
AU2016322956B2 (en) Composition and methods thereof
EP2934561B1 (en) Composition comprising raphanus, theobroma and passiflora for treating opioid and alcohol abuse
KR101628853B1 (ko) 자가면역 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법
Silawat et al. The mechanism of hypoglycemic and antidiabetic action of hydroalcholic extract of Cassia fistula Linn. in rats
KR101542774B1 (ko) 리그난 유도체를 함유하는 세라마이드 대사관련 효소에 의해 매개되는 질환의 예방 또는 치료용 조성물
Wadood et al. Effect of Ficus relegiosa on blood glucose and total lipid levels of normal and alloxan diabetic rabbits
KR100390766B1 (ko) 필발로부터 얻은 지방산 생합성 효소 저해용 활성분획조성물
JP7361903B2 (ja) 芫花、威霊仙、及び天麻の複合生薬抽出物を含む神経変性疾患の予防または治療用組成物
López-Carreras et al. Endothelium-dependent vascular relaxing effects of different citrus and olive extracts in aorta rings from spontaneously hypertensive rats
WO2015019334A1 (en) Pharmaceutical composition combining diosmin and hesperidin and its use in neuropathic pain
Mohamed et al. Kola Nut (Cola nitida (Vent.) Schott & Endl.) Use in Diabetes: Molecular, Cellular, and Metabolic Effects
KR20060110968A (ko) 신규 리그난 화합물, 이를 제조하는 방법 및 이를 함유하는조성물
Sarfraz Diabetes mellitus and protective approaches of medicinal plants: Present status and future prospects
US9138448B1 (en) Supplement composition

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20110415