KR100891756B1 - 식욕 억제 활성을 갖는 약학 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명의 약학 조성물은 하기 화학식 1의 식욕 억제제를 함유하는, 트리코카울론(Trichocaulon) 또는 후디아(Hoodia) 속의 식물로부터 수득되는 추출물을 함유한다. 본 발명은 또한 추출물을 수득하는 방법, 및 하기 화학식 1의 화합물 및 그의 유사체 및 유도체의 합성 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 식욕 억제 활성을 갖는 약제의 제조를 위한, 이런 추출물 및 하기 화학식 1의 화합물 및 그의 유사체의 용도로 확장된다. 본 발명은 또한 하기 화학식 1의 화합물의 합성을 위한 신규한 중간체를 제공한다.
화학식 1

Description

식욕 억제 활성을 갖는 약학 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS HAVING APPETITE SUPPRESSANT ACTIVITY}
본 발명은 스테로이드성 글리코사이드, 이 스테로이드성 글리코사이드를 함유한 조성물, 및 이 스테로이드성 글리코사이드 및 이를 함유하는 조성물의 신규한 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 식물 물질로부터 이 스테로이드성 글리코사이드를 추출하고 분리하는 방법, 이 스테로이드성 글리코사이드를 합성적으로 제조하는 방법, 및 이러한 추출 및 합성 방법의 생성물에 관한 것이다.
특정한 적용에서, 본 발명은 식욕 억제제, 식욕 억제제를 합성적으로 제조하는 방법, 식물 물질로부터 식욕 억제제를 추출하는 방법, 식욕 억제제를 함유하는 식욕 억제 조성물, 및 식욕 억제 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따라, 수거된 식물 물질을 용매로 처리하여 식욕 억제 활성을 갖는 분획을 추출하는 단계, 나머지 식물 물질로부터 추출 용액을 분리하는 단계, 추출 용액으로부터 용매를 제거하는 단계 및 추출물을 회수하는 단계를 포함하는, 트리코카울론(Trichocaulon) 속 또는 후디아(Hoodia) 속의 식물의 식욕 억제제를 함유하는 추출물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 이렇게 회수되는 추출물은 예를 들면 적합한 용매 추출 과정에 의해 추가로 정제될 수 있다.
본 발명은 또한 트리코카울론 속 및 후디아 속을 포함하는 군의 식물로 제조되고 식욕 억제 활성을 갖는 식물 추출물을 제공한다.
추출물은 트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물의 줄기 및 뿌리와 같은 식물 물질로부터 제조된다. 트리코카울론 속 및 후디아 속은 남아프리카에서 발견되는 건조 지역에서 자라는 다즙성 식물을 포함한다. 본 발명의 한 적용에서, 활성 식욕 억제 추출물은 트리코카울론 필리페룸(Trichocaulon piliferum) 종으로부터 수득된다. 트리코카울론 오피시날레(Trichocaulon officinale) 종은 또한 활성 식욕 억제 추출물을 제공하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 다른 적용에서, 활성 식욕 억제 추출물은 후디아 쿠로리(Hoodia currorii), 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 또는 후디아 루가디(Hoodia lugardii) 종으로부터 수득될 수 있다. 래트에 대해 출원인에 의해 수행된 생물학적 검정은 특정 추출물이 식욕 억제 활성을 갖는다는 것을 나타낸다.
식물 물질을 웨어링(Waring) 블렌더와 같은 장치에 의해 적합한 용매, 예를 들면 메탄올/염화 메틸렌 용매의 존재하에서 균질화시킬 수 있다. 이어서, 예를 들면 여과 또는 원심분리와 같은 적당한 분리 과정에 의해 잔여 식물 물질로부터 추출 용액을 분리할 수 있다. 용매는 바람직하게는 60℃의 온도에서 수욕중에서 회전 증발기에 의해 제거될 수 있다. 이어서, 분리된 조추출물을 염화 메틸렌 및 물로 추가로 추출한 후, 염화 메틸렌 추출물 및 물 추출물로 분리한다. 염화 메틸렌 추출물을 바람직하게는 회전 증발기로 증발시켜 용매를 제거하고, 생성된 추출물은 메탄올/헥산 추출에 의해 추가로 정제될 수 있다. 이어서, 메탄올/헥산 추출 생성물을 분리하여 메탄올 추출물 및 헥산 추출물을 수득한다. 메탄올 추출물을 증발시켜 용매를 제거하여 부분적으로 정제된 활성 추출물을 수득한다.
부분적으로 정제된 활성 추출물은 메탄올에 용해될 수 있고, 흡착 매질로서 실리카 겔 및 용출액으로서 클로로포름/30 % 메탄올 혼합물을 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 추가로 분별될 수 있다. 다수의 다른 분획이 수득될 수 있고, 각각은 그의 식욕 억제 활성을 측정하기 위해 적합한 생물학적 검정 과정에 의해 평가될 수 있다.
식욕 억제 활성을 갖는 분획을 바람직하게는, 예를 들면 흡착 매질로서 실리카 겔, 및 9:1 클로로포름:메탄올 용매를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 분별할 수 있고, 생성된 아분획(sub-fraction)이 이들의 식욕 억제 활성에 대해 생물학적으로 검정된다. 식욕 억제 활성을 나타내는 아분획을 경우에 따라 편리하게는 흡착 매질로서 실리카 겔, 및 9:1 에틸아세테이트:헥산 용매를 사용하는 컬럼 크로마토그래피 과정을 사용하여 분별하고 정제할 수 있다. 생성된 정제된 분획은 다시 이들의 식욕 억제 활성에 대해 적합한 생물학적 검정 과정에 의해 평가될 수 있다.
출원인은 1종 이상의 이런 정제된 분획이 우수한 식욕 억제 활성을 가짐을 확인하였으며, 분획중의 활성 주성분을 핵자기 공명을 비롯한 통상적인 화학적 기법에 의해 확인하였고, 이 활성 주성분이 하기 화학식 1의 화합물임을 밝혀냈다:
Figure 111999013049445-pct00001
S.I. 명명법에 따라, 화학식 1의 활성 주성분은 화합물 3-O-[-β-D-테베토피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실]-12β-O-티글로일옥시-14-하이드록시-14β-프레근-50-엔-20-온(C47H74O15 M+878)이다.
본 발명의 다른 양태에 따라, 수거한 식물 물질을 가압하여 고체 식물 물질로부터 수액을 분리하는 단계 및 고체 식물 물질이 없는 수액을 회수하여 추출물을 형성하는 단계를 포함하는, 트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물의 식욕 억제제를 포함하는 추출물을 제조하는 방법이 제공된다.
추출물을 예를 들면 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유-유동 분말을 형성할 수 있다.
본 발명은 상술한 바와 같은 추출물을 포함하는, 식욕 억제 활성을 갖는 조성물로 확장된다.
이 조성물은 약제학적 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합될 수 있고, 선택적으로는 단위 투여 형태로 제조된다.
본 발명은 또한 식욕 억제 활성을 갖는 약제의 제조에서 상술한 바와 같은 추출물의 용도, 식욕 억제 활성을 갖는 약제로서의 용도를 위한 상술한 바와 같은 추출물, 및 유효 투여량의 상술한 바와 같은 조성물을 인간 또는 동물에게 투여하여 식욕을 억제하는 방법으로 확장된다.
화학식 1의 화합물은 신규한 화합물이고, 본 발명은 식욕 억제성을 갖는, 화학식 1의 화합물 및 이 스테로이드성 트리사카라이드의 특정한 유사체 또는 유도체로 확장된다. 유사체 또는 유도체로서 선택되는 분자는 활성 성분의 활성을 증가시키기 위해 스테로이드성 트리사카라이드의 성질에 영향을 미친다. 다음의 영향이 유사체가 선택될 때 고려되는 사항이다:
(i) 소수성 상호작용 및 친유성
활성 분자의 작용기 개질은 분자의 소수성 및 친유성을 변화시키고자 함이다. 증가된 친유성은 증가된 생물학적 활성, 나빠진 수용성, 증가된 세정성/세포 용해, 증가된 조직에서의 저장성, 보다 빨라진 물질 대사 및 제거, 증가된 플라즈마 단백질 결합 및 더 빨라진 활동 개시 속도와의 상관 관계를 나타낸다.
(ii) 전기적 특성 및 이온화 상수
분자의 작용기 개질은 또한 화합물의 그의 작용 위치로의 이동을 조절하고 이 목적 위치에 결합시키는 주요 역할을 하는 산성 및 염기성을 변화시키고자 함이다.
(iii) 수소 결합
활성 분자에서 카복실 및 카보닐 기의 작용기 개질은 생물학적 시스템중의 단백질과 화학적으로 개질된 작용기 사이에서의 상호작용을 변화시키고자 함이다.
(iv) 입체 파라미터
분자의 입체적 특징을 변화시키는 목적은 그의 수용체에 결합을 증가시킴으로써 그의 생물학적 활성을 증가시키기 위함이다.
분자에 대한 다음의 화학적 개질은 분자의 소수성 및 친유성, 전기적 특성, 수소 결합 및 입체 파라미터에 대해 영향을 미치고자 함이다:
a) C-12 기 및 에스테르 작용기의 화학적 개질;
b) 5,6-이중 결합의 화학적 개질, 예를 들면 수소화 및 이동;
c) C-20 카보닐 및 C-17 아세틸 기의 화학적 개질;
d) 스테로이드 또는 아글리콘 고리의 "D" 고리의 화학적 개질; 및
e) 트리사카라이드 잔기의 탄수화물의 개질.
따라서, 본 발명은 하기 화학식 2의 화합물을 제공한다:
Figure 111999013049445-pct00002
상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5 또는 C5-C6 사이의 추가의 결합을 나타낸다.
본 발명은 또한 C5-C6사이에 추가의 결합이 있고, R이 메틸이고, R1이 티글로일이고, R2가 3-O-[-β-D-테베토피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실]인 하기 화학식 1의 화합물을 제공한다:
화학식 1
Figure 111999013049445-pct00180
본 발명에 따른 화학식 1의 식욕 억제 화합물의 추가의 활성 유사체 또는 유도체는 하기 화학식 3 내지 14의 화합물이다:
Figure 112003013297593-pct00004
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 벤조일, 티글로일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이다]
Figure 112003013297593-pct00005
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 벤조일, 티글로일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이다]
Figure 112003013297593-pct00006
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 벤조일, 티글로일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이다]
Figure 112003013297593-pct00007
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 벤조일, 티글로일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이다]
Figure 112003013297593-pct00008
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 벤조일, 티글로일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이다]
Figure 112008063226562-pct00009
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5 또는 C5-C6 사이의 추가의 결합을 나타낸다]
Figure 111999013049445-pct00010
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코 스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 존재하는 C4-C5 또는 C5-C6 사이의 추가의 결합을 나타낸다]
Figure 111999013049445-pct00011
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5 또는 C5-C6 사이의 추가의 결합을 나타낸다]
Figure 112003013297593-pct00012
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5, C5-C6 또는 C14-C15 사이의 추가의 결합을 나타낸다]
Figure 112003013297593-pct00013
[상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5, C5-C6 또는 C14-C15 사이의 추가의 결합을 나타낸다]
Figure 111999013049445-pct00014
상기 식에서,
R은 알킬이고;
R1은 H, 알킬, 티글로일, 벤조일 또는 임의의 다른 유기 에스테르 기이고;
R2는 H, 1종 이상의 6-데옥시 탄수화물, 1종 이상의 2,6-디데옥시 탄수화물, 글루코스 분자 또는 이들의 혼합물이고;
점선은 선택적으로 존재하는 C4-C5, C5-C6 또는 C14-C15 사이의 추가의 결합을 나타내고;
R3은 H, 알킬, 아릴, 아실 또는 글루콕시이다.
Figure 111999013049445-pct00015
상기 식에서,
R은 H, 알킬, 아릴, 또는 C14 베타 하이드록시 기, C12 베타 하이드록시 작용기, C17 아실 기, C5-C6 올레핀을 갖는 임의의 스테로이드 또는 이들의 혼합물이다.
본 발명은 또한 식욕 억제 활성을 갖는 화합물을 합성적으로 제조하는 방법으로 확장된다.
본 발명은 출발 물질로서 하기 화학식 15의 스테로이드(또는 중간체 또는 전구체)를 사용한다.
Figure 111999013049445-pct00016
화학식 15의 스테로이드는 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 하기 화학식 22의 화합물로부터 제조된다:
(i) 하기 화학식 16의 프로제스테론을 미생물 칼로넥트리아 데코라(Calonectria decora)로 처리하여 하기 화학식 17의 화합물 12β,15α-디하이드록시 프로제스테론을 제조하는 단계,
(ii) 화학식 17의 화합물을 염화 토실 및 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 18의 화합물 12β-하이드록시-15α-(p-톨루엔 설포닐)-프로제스테론을 제조하는 단계,
(iii) 화학식 18의 화합물을 150℃에서 콜리딘으로 처리하여 하기 화학식 19의 화합물 12β-하이드록시-△14-프로제스테론을 제조하는 단계,
(iv) 화학식 19의 화합물을 120℃에서 염화 아세틸 및 아세트산 무수물로 처리하여 하기 화학식 20의 화합물 3,12β-디아세톡시프레그나-3,5,14-트리엔-20-온을 제조하는 단계,
(v) 화학식 20의 화합물을 에틸렌 글리콜 및 촉매량의 p-톨루엔 설폰산으로 처리하여 하기 화학식 21의 화합물 3,12β-다아세톡시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-3,5,14-트리엔을 제조하는 단계, 및
(vi) 화학식 21의 화합물을 NaBH4로 처리하여 하기 화학식 22의 화합물 3β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-5,14-디엔-12-아세테이트를 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00017
Figure 111999013049445-pct00018
Figure 111999013049445-pct00019
Figure 111999013049445-pct00020
Figure 111999013049445-pct00021
Figure 111999013049445-pct00022
Figure 111999013049445-pct00023
제 1 변법에서, 본 발명에 따른 화학식 15의 스테로이드의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(a) 화학식 22의 화합물을 환원제, 예를 들면 LiAlH4로 처리하여 하기 화학식 23의 화합물 3β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-5,14-디엔을 제조하는 단계,
(b) 화학식 23의 화합물을 N-브로모아세트아미드(NBA) 및 염기, 예를 들면 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 24의 화합물 3β,12β-디하이드록시-14,15-에폭시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔을 제조하는 단계,
(c) 화학식 24의 화합물을, 예를 들어 환류하면서 환원제, 예를 들면 LiAlH4로 처리하여 하기 화학식 25의 화합물 3β,12β,14β-트리하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔을 제조하는 단계, 및
(d) 화학식 25의 화합물을 산, 예를 들면 아세트산 및 물로 처리하여 화학식 15의 스테로이드 중간체 화합물 3β,12β,14β-트리하이드록시-프레근-5-엔을 제조하는 단계.
Figure 111999013049445-pct00024
Figure 111999013049445-pct00025
Figure 111999013049445-pct00026
하기 반응식 A는 본 발명의 "제 1 변법"에 따라 화학식 22의 화합물로부터 화학식 15의 스테로이드 중간체의 제조 과정을 설명하며, 설명의 목적을 위해 화학식 16의 화합물로부터 화학식 22의 화합물의 제조를 포함한다:
Figure 111999013049445-pct00027
Figure 111999013049445-pct00181
제 2 변법에서, 본 발명에 따른 화학식 15의 스테로이드의 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(a) 화학식 22의 화합물(3β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레그 나-5,14-디엔-12-아세테이트)을 염화 p-톨루엔설포닐 및 염기, 예를 들면 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 26의 화합물 3β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-5,14-디엔-3-토실-12-아세테이트를 제조하는 단계,
(b) 화학식 26의 화합물을 용매, 예를 들면 아세톤중에서 칼륨 아세테이트로 처리하여 하기 화학식 27의 화합물 6β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시-3,5α-사이클로프레그난-14-엔-12-아세테이트를 제조하는 단계,
(c) 화학식 27의 화합물을 환원제, 예를 들면 LiAlH4 및, 예를 들면 테트라하이드로푸란으로 처리하여 하기 화학식 28의 화합물 6β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시-3,5α-사이클로프레그난-14-엔을 제조하는 단계,
(d) 화학식 28의 화합물을 N-브로모아세트아미드, 선택적으로 아세트산, 및 염기, 예를 들면 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 29의 화합물 6β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시-14,15-에폭시-3,5α-사이클로프레그난을 제조하는 단계,
(e) 화학식 29의 화합물을 환원제, 예를 들면 LiAlH4 및 예를 들면 테트라하이드로푸란으로 처리하여 하기 화학식 30의 화합물 6β,12β,14β-트리하이드록시-20,20-에틸렌디옥시-3,5α-사이클로프레그난을 제조하는 단계, 및
(f) 화학식 30의 화합물을 산, 예를 들면 염산 및 용매, 예를 들면 아세톤으로 처리하여 화학식 15의 화합물을 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00028
Figure 111999013049445-pct00029
Figure 111999013049445-pct00030
Figure 111999013049445-pct00031
Figure 111999013049445-pct00032
하기 반응식 B는 본 발명의 "제 2 변법"에 따라 화학식 22의 화합물로부터 화학식 15의 스테로이드 중간체의 제조 과정을 나타낸다:
Figure 111999013049445-pct00033
화학식 1의 화합물은 화학식 36의 화합물로부터 제조될 수 있는, 활성화된 모노사카라이드 시마로스 잔기의 형태의 제 1 탄수화물 중간체로부터 합성될 수 있 다. 화학식 36의 화합물은 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다:
(i) 하기 화학식 31의 메틸-α-D-글루코스를 벤즈알데하이드 및 염화 아연으로 처리하여 하기 화학식 32의 화합물 메틸-4,6-O-벤질리덴-α-D-글루코피라노사이드를 제조하는 단계,
(ii) 화학식 32의 화합물을 0℃에서 염화 토실 및 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 33의 화합물 메틸-4,6-O-벤질리덴-2-O-토실-α-D-글루코피라노사이드를 제조하는 단계,
(iii) 화학식 33의 화합물을 100℃에서 NaOMe로 처리하여 하기 화학식 34의 화합물 메틸 4,6-O-벤질리덴-3-O-메틸-α-D-알트로피라노사이드를 제조하는 단계,
(iv) 화학식 34의 화합물을 N-브로모숙신아미드(NBS)로 처리하여 하기 화학식 35의 화합물 메틸 6-브로모-4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-α-D-알트로피라노사이드를 제조하는 단계, 및
(v) 화학식 35의 화합물을 NaBH4 및 NiCl2로 처리하여 하기 화학식 36의 화합물 메틸 4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-α-D-알트로피라노사이드를 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00034
Figure 111999013049445-pct00035
Figure 111999013049445-pct00036
Figure 111999013049445-pct00037
Figure 111999013049445-pct00038
Figure 111999013049445-pct00039
본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 활성화된 모노사카라이드 시마로스 잔기의 형태의 탄수화물 중간체의 제조 방법으로 확장된다:
(i) 화학식 36의 화합물을 PhSSiMe3, ZnI2 및 Bu4+I-로 처리하여 하기 화학식 37의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-αβ-D-페닐티오알트로사이드를 제조하는 단계,
(ii) 선택적으로, 화학식 37의 화합물을 예를 들면 0℃에서 삼불화 디에틸아미노황(DAST)으로 처리하여 하기 화학식 38의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-페닐티오-2,6-디데옥시-αβ-D-플루오로시마로피라노사이드를 제조하는 단계, 또는
(iii) 선택적으로, 화학식 37의 화합물을 용매, 예를 들면 피리딘중에서 염화 t-부틸디메틸실릴 및 이미다졸로 처리하여 하기 화학식 39의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-t-부틸디메틸실릴-αβ-D-페닐티오알트로사이드를 제조하는 단계, 및
(iv) 화학식 39의 화합물을 염기, 예를 들면 나트륨 메톡사이드로 처리하여 하기 화학식 40의 화합물 3-O-메틸-2-O-t-부틸디메틸실릴-αβ-D-페닐티오알트로사이드를 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00040
Figure 111999013049445-pct00041
Figure 111999013049445-pct00042
Figure 111999013049445-pct00043
상기 식들에서,
Z는 t-부틸디메틸실릴(TBDMS)이다.
하기 반응식 C는 본 발명에 따라 화학식 36의 화합물로부터 화학식 40의 활성화된 모노사카라이드 시마로스 잔기의 합성 과정을 나타내며, 설명의 목적을 위해 화학식 31의 화합물로부터 화학식 36의 화합물의 제조를 포함한다:
Figure 111999013049445-pct00044
화학식 1의 화합물의 합성은 또한 하기 화학식 47의 화합물로부터 제조될 수 있는, 활성화된 모노사카라이드 테베토스 잔기의 형태의 제 2 탄수화물 중간체를 포함한다. 하기 화학식 47의 화합물은 다음의 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다:
(i) 하기 화학식 41의 α-D-글루코스를 아세톤 및 황산으로 처리하여 하기 화학식 42의 화합물 1,2:5,6-디-O-이소프로필리덴-α-D-글루코푸라노스를 제조하는 단계,
(ii) 화학식 42의 화합물을 NaH 및 MeI로 처리하여 하기 화학식 43의 화합물 1,2:5,6-디-O-이소프로필리덴-3-O-메틸-α-D-글루코푸라노스를 제조하는 단계,
(iii) 화학식 43의 화합물을 아세트산으로 처리하여 하기 화학식 44의 화합물 3-O-메틸-αβ-D-글루코피라노스를 제조하는 단계,
(iv) 화학식 44의 화합물을 메탄올 및 염산으로 처리하여 하기 화학식 45의 화합물 메틸 3-O-메틸-αβ-D-글루코피라노사이드를 제조하는 단계,
(v) 화학식 45의 화합물을 벤즈알데하이드 및 염화 아연으로 처리하여 하기 화학식 46의 화합물 메틸 4,6-O-벤질리덴-3-O-메틸-αβ-D-글루코피라노사이드를 제조하는 단계, 및
(vi) 화학식 46의 화합물을 N-브로모숙신아미드, 염화 니켈 및 나트륨 보로하이드라이드로 처리하여 하기 화학식 47의 화합물 메틸 4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드를 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00045
Figure 111999013049445-pct00046
Figure 111999013049445-pct00047
Figure 111999013049445-pct00048
Figure 111999013049445-pct00049
Figure 111999013049445-pct00050
Figure 111999013049445-pct00051
본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 활성화된 모노사카라이드 테베토스 잔기의 제조 방법으로 확장된다:
(i) 화학식 47의 화합물을 페닐티오트리메틸실란 및 트리메틸실릴트리플루오로메탄설포네이트로 처리하여 하기 화학식 48의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-1-페닐티오-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드를 제조하는 단계,
(ii) 화학식 48의 화합물을 염화 피발로일 및 용매, 예를 들면 피리딘으로 처리하여 하기 화학식 49의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-피발로일-1-페닐티오-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드를 제조하는 단계, 및
(iii) 화학식 49의 화합물을 브롬화제, 예를 들면 N-브로모숙신이미드 및 삼불화 디에틸아미노황으로 처리하여, 입체이성질체로서의 하기 화학식 50A 및 50B의 화합물 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-피발로일-1-플루오로-6-데옥시-β-글루코피라노사이드를 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00052
Figure 111999013049445-pct00053
Figure 111999013049445-pct00054
Figure 111999013049445-pct00055
반응식 D는 본 발명에 따라 화학식 48의 화합물로부터 화학식 50A 및 50B의 활성화된 모노사카라이드 테베토스 잔기의 합성 과정을 나타내며, 설명의 목적을 위해 화학식 41의 화합물로부터 화학식 47의 화합물의 제조를 포함한다:
Figure 111999013049445-pct00056
본 발명의 추가의 양태에 따라, 적합한 스테로이드 중간체 또는 전구체를 합성하고 요구되는 수의 적합한 모노사카라이드를 스테로이드 중간체와 커플링시키는 단계를 포함하는, 화학식 1의 화합물, 그의 유사체 및 유도체를 합성적으로 제조하 는 방법이 제공된다.
본 발명은 또한 다음의 단계를 포함하는, 모노사카라이드 시마로스를 스테로이드 중간체와 커플링시키는 방법을 제공한다:
(i) 화학식 38의 시마로스 잔기를, 예를 들면 -15℃에서 용매, 예를 들면 에테르중에서 염화 주석의 존재하에서 화학식 15의 스테로이드 중간체와 반응시켜 하기 화학식 51의 화합물 3-O-[4-O-벤조일-2-페닐티오-β-D-시마로피라노실]-12,14-β-디하이드록시-프레근-5-엔-20-온을 제조하는 단계, 및
(ii) 화학식 51의 화합물을 피리딘중의 티글산 염화물, 이어서 염기, 예를 들면 NaOMe로 처리하여 하기 화학식 52의 화합물 3-O-[-2-페닐티오-β-D-시마로피라노실]-12β-티글로일옥시-14-하이드록시-14β-프레근-5-엔-20-온을 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00057
Figure 111999013049445-pct00058
본 발명은 모노사카라이드 시마로스 잔기를 모노사카라이드 테베토스 잔기 에 커플링시키고 생성된 디사카라이드를 화학식 52의 결합된 스테로이드 생성물과 커플링시켜 화학식 1의 화합물을 형성하는 것을 포함하는 방법으로 확장된다.
모노사카라이드 시마로스 잔기를 모노사카라이드 테베토스 잔기에 커플링시키고 생성된 디사카라이드를 화학식 52의 결합된 스테로이드 생성물에 커플링시키는 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 화학식 40의 선택적으로 보호된 시마로스 잔기 및 화학식 50A의 선택적으로 보호된 테베토스 잔기를, 예를 들면 -15℃에서 염화 주석(SnCl2) 및 은 트리플루오로메탄설포네이트를 사용하여 커플링시켜 하기 화학식 53의 화합물을 제조하는 단계,
(ii) 화학식 53의 화합물을 불화 테트라부틸암모늄으로 처리하여 하기 화학식 54의 화합물을 제조하는 단계,
(iii) 화학식 54의 화합물을, 예를 들면 0℃에서 삼불화 디에틸아미노황으로 처리하여 하기 화학식 55의 화합물을 제조하는 단계,
(iv) 화학식 55의 화합물을 화학식 52의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 56의 화합물을 제조하는 단계, 및
(v) 화학식 56의 화합물을 라니-니켈(Raney-Nickel) 반응에서 및 이후 염기, 예를 들면 NaOMe로 처리하여 상술한 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00059
Figure 111999013049445-pct00060
Figure 111999013049445-pct00061
Figure 111999013049445-pct00062
상기 식에서,
Z는 t-부틸디메틸실릴(TBDMS)이다.
하기 반응식 E는 화학식 52 및 55의 중간체의 합성 및 이들을 커플링시켜 화학식 56의 화합물을 형성하는 과정을 나타낸다:
Figure 111999013049445-pct00063
Figure 111999013049445-pct00064
본 발명에 따라, 시마로스 및 테베토스 잔기를 커플링시켜 트리사카라이드를 형성하고 트리사카라이드를 스테로이드 유도체상으로 커플링시켜 화학식 1의 화합물을 형성하는 변법이 제공된다.
트리사카라이드를 형성하고 생성된 트리사카라이드를 스테로이드 유도체에 커플링시키는 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(i) 화학식 40의 선택적으로 보호된 시마로스 잔기 및 화학식 45의 화합물을 염화 주석(II), AgOTf 및 Cp2ZrCl2를 사용하여 커플링시켜 하기 화학식 57의 화합물을 제조하는 단계,
(ii) 화학식 57의 화합물을 불화 테트라부틸암모늄 및 삼불화 디에틸아미노황으로 처리하여 하기 화학식 58의 트리사카라이드 화합물을 제조하는 단계, 및
(iii) 화학식 58의 트리사카라이드를 염화 주석(II), AgOTf 및 Cp2ZrCl2를 사용하여 하기 화학식 59의 스테로이드 중간체와 커플링시켜 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계:
Figure 111999013049445-pct00065
Figure 111999013049445-pct00066
Figure 111999013049445-pct00067
상기 식에서,
Z는 t-부틸디메틸실릴(TBDMS)이다.
화학식 59의 스테로이드 중간체는 화학식 15의 스테로이드를 티글산 염화물로 처리하여 제조될 수 있다.
하기 반응식 F는 화학식 58의 트리사카라이드의 합성 과정 및 화학식 58의 트리사카라이드를 화학식 59의 스테로이드 중간체와 커플링시키는 화학식 1의 합성 과정을 나타낸다:
Figure 111999013049445-pct00068
상술한 화학식 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 37, 38, 39, 40, 48, 49, 50, 51, 53, 54, 55, 56, 57 및 58의 중간체는 신규한 화합물이고, 본 발명은 자체로 이들 화합물로 확장된다.
화학식 1의 화합물 3-O-[-β-D-테베토피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실-(1→4)-β-D-시마로피라노실]-12β-O-티글로일옥시-14-하이드록시-14β-프레근-5-엔-20-온 및 그의 여러 유사체 및 유도체는 식욕 억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
본 발명은 또한 활성 성분이 트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물로부터 수득된 추출물인, 식욕 억제 활성을 갖는 조성물 또는 배합물로 확장된다.
활성 성분은 트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물로부터 추출된 화학식 1의 화합물 또는 그의 유도체일 수 있다. 식물은 트리코카울론 오피시날레 또는 트리코카우론 필리페룸 종 또는 후디아 쿠로리, 후디아 고도니 또는 후디아 루가디 종일 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 2 내지 14를 참고로 하여 이전에 개시된 바와 같은, 활성 성분이 화학식 1의 합성적으로 제조된 화합물 또는 그의 유도체 또는 유사체인, 식욕 억제 활성을 갖는 조성물 또는 배합물로 확장된다.
본 발명의 다른 양태에 따라, 트리코카울론 또는 후디아 속의 식물의 추출물을 포함하는, 적합한 투여량의 식욕 억제제를 인간 또는 동물에게 투여하여 식욕을 억제하는 방법이 제공된다. 추출물은 또한 약제학적으로 허용가능한 다른 성분을 포함하는 조성물 또는 배합물에 혼입될 수 있다.
식욕 억제제는 이전에 개시된 바와 같은, 하기 화학식 1의 분리된 천연 화학적 또는 합성 화학적 화합물 또는 그의 유도체 또는 유사체일 수 있다:
화학식 1
Figure 111999013049445-pct00182
식욕 억제 조성물 또는 배합물은 약제학적 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합된 식욕 억제제로 구성될 수 있다. 바람직하게는 안정화제 및 이런 다른 성분을 포함하는 다른 적합한 첨가제가 첨가될 수 있다.
본 발명은 식욕 억제 활성을 갖는 약제의 제조에서 화학식 1의 화합물 또는 그의 유도체 또는 유사체의 용도로 확장된다.
본 발명은 또한 식욕 억제 활성을 갖는 약제로서의 용도를 위한, 이전에 개시된 바와 같은 화학식 1의 화합물 또는 그의 유도체 또는 유사체로 확장된다.
인간 또는 동물에게 유효 투여량의 상술한 조성물을 투여하여 식욕을 억제하는 방법이 또한 제공된다.
트리코카울론 또는 후디아 속의 식물로부터 수득되는 식물 물질로부터 식욕 억제 활성을 갖는 스테로이드성 글리코사이드를 추출하는 방법은 본원에 기술되어 있다. 따라서, 본 발명은 트리코카울론 또는 후디아 속의 식물 물질로부터 수득되고 실질적으로 순수한 화학식 1의 스테로이드성 글리코사이드를 함유하는 추출물로 확장된다.
본 발명은 또한 섭취시 식욕 억제 효과를 갖기 위해 효과량의 이전에 개시된 화학식 1의 스테로이드성 글리코사이드 또는 그의 유도체 또는 유사체를 함유하는 식품 또는 음료로 확장된다.
분자 유전 연구는 식욕, 포만 및 체중의 조절의 이해에서 상당한 진척을 이루었다. 이들 연구는 많은 뉴로펩타이드에 의해 매개되는 다수의 중앙 조절 경로를 밝혀냈다. 정상적인 체중의 유지는 에너지 섭취, 식품 소비 및 에너지 소비 사이의 복잡한 균형에 의해 이루어진다. 에너지 항상성은 궁극적으로 뇌에 의해 조절되는 광범위한 영향에 따른다. 다른 신호는 후각 및 미각 및 위장 신호, 예를 들면 위장의 팽창, 위점막에 대한 화학적 신호 및 혈액 함유 대사산물, 예를 들면 지방산 및 글루코스를 포함한다.
중심적으로, 렙틴에 의해 음으로 조절되는 뉴로펩타이드 "Y"(NPY)는 먹는 행동의 양의 조절자중의 하나로서 정립되어 있다. 멜라노코틴 수용체에 대한 내생적인 길항물질의 발현은 또한 특별한 모델(ob/ob 마우스)에서 비만에 대한 기준으로 보여진다. 또한, MC4 멜라노코틴 수용체에서의 결핍은 비만 증후군을 완전하게 나타내는 것이다. 에너지 균형에서의 역할을 하는 다른 매개체는 봄베신, 갈로닌 및 글루카곤형 펩타이드-1을 포함한다.
이론에 제한되지 않고, 출원인은 상술한 화학식 1의 화합물 및 그의 유사체가 멜라코틴 4 수용체의 작동약물(agonist)로서 작용한다고 생각한다. 이것의 효과는 NPY를 조절하고 콜레사이스토키닌을 증가시키는 것이다. 이중에서 콜레사이스토키닌의 효과는 위의 공복감을 억제하는 것이다.
따라서, 본 발명은 멜라노코틴 4 수용체 작동약물을 포함하는, 식욕 억제 활성을 갖는 조성물로 확장된다.
작동약물은 이전에 기술한 추출물 또는 화합물, 특히 화학식 1의 화합물일 수 있다. 조성물은 약제학적 부형제, 희석제 또는 담체와 혼합될 수 있고, 선택적으로 단위 투여 형태로 제조될 수 있다.
본 발명은 또한 식욕 억제 활성을 갖는 약제의 제조에서 멜라노코틴 4 수용체 작동약물의 용도, 식욕 억제 활성을 갖는 약제로서 용도를 위한 멜라노코틴 4 수용체 작동약물, 상술한 멜라노코틴 4 작동약물을 포함하는 유효 투여량의 조성물을 인간 또는 동물에게 투여하여 식욕을 억제하는 방법 및 인간 또는 동물에서 식욕을 억제하고/하거나 비만에 대항하기 위한 멜라노코틴 4 수용체 작동약물의 용도로 확장된다.
본 발명 및 그의 효과는 또한 다음의 실시예 및 도면을 참고로 하여 본 발명의 범위를 제한하지 않고 기술될 것이다.
도 1은 트리코카울론 또는 후디아 속의 식물 물질로부터의 제 1 식욕 억제 조추출물 및 정제된 식욕 억제 추출물을 추출하는 일반적인 방법의 흐름도를 나타낸다.
도 2는 트리코카울론 필리페룸의 부분적으로 정제된 메탄올 추출물을 사용하여 래트에서 수행된 생물학적 검정의 그래프를 나타낸다.
도 3 및 4는 함께 트리코카울론 또는 후디아 속의 식물 물질의 추출물을 제조하는 본 발명의 방법의 바람직한 실시양태의 개략도를 나타낸다.
도 5 및 6은 후디아 고도니 종의 식물 물질의 수액 추출물 및 분무 건조된 수액 추출물을 사용하여 반복 투여 연구에서 각각 -7 내지 7일 및 0 내지 7일동안 상이한 그룹에 대한 래트의 체중 변화율의 그래프를 나타낸다.
실시예 1
트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물 물질로부터의 제 1 식욕 억제 조추출물 및 정제된 식욕 억제 추출물을 추출하는 일반적인 방법은 도 1의 흐름도에 의해 설명된다.
실시예 2
실시예 1에서 설명된 방법으로 수득되는 부분적으로 정제된 메탄올 추출물을 사용하는 래트에서 수행된 생물학적 검정은 추출물이 실제로 식욕 억제 활성을 나타냄을 시사한다. 활성 추출물의 식욕 억제 활성은 도 2의 그래프에 의해, 트리코카울론 필리페룸의 메탄올 추출물의 래트에 대한 영향의 전형적인 예에 의해 설명될 수 있다.
5일에 추출물이 투여된 래트의 시험군은 이후 2일동안 식품 섭취량이 실질적으로 감소됨을 나타내지만, 대조 그룹은 먹이 섭취량이 그에 상당하게 감소되지 않았음이 도 2로부터 명백하다. 시험군의 먹이 섭취량은 정상으로 돌아오고, 실제 8일째부터 증가된다.
실시예 3
식욕 억제 활성을 갖는 추출물을 제조하기 위한 본 발명에 따른 방법의 바람직한 양태는 도 3 및 4에서의 예에 의해 도식적으로 설명되고, 이들 2개의 도면이 함께 포괄적인 방법을 설명한다. 그러나, 당해 분야의 숙련자에게 이해되는 바와 같이 여러 다른 과정이 사용될 수 있다.
도 3을 참고하면, 트리코카울론 속 또는 후디아 속의 식물 물질을 공급라인(1)을 통해 블렌더(3), 예를 들면 웨어링 블렌더에 공급하고, 염화 메틸렌/메탄올 용액 형태의 용매를 공급라인(2)을 통해 도입한다. 균질화된 생성물을 라인(4)을 통해, 예를 들면 여과 또는 원심분리의 형태의 분리 단계(5)로 공급하고, 잔여 식물 물질을 라인(27)을 통해 제거한다.
용매/추출물 혼합물을 라인(6)을 통해 증발 단계(7)로 공급하고, 이때 예를 들면 로터 증발기에 의해 용매를 제거한다. 건조된 조추출물을 공급라인(8)을 통해 추가의 추출 단계(9)로 공급하고, 추가의 추출을 위해 염화 메틸렌/물 용액을 공급라인(29)을 통해 첨가하고, 이어서 라인(11)을 통해 분리 단계(13)에 도입하고, 이때 물 분획을 라인(31)을 통해 제거한다. 용해된 추출물 분획을 라인(15)을 통해 건조기 단계(17)로 공급하고, 이때 용매를, 예를 들면 로터 증발기에 의해 증발시킨다.
도 4를 참고하면, 건조된 추출물을 라인(10)을 통해 추출 단계(12)로 공급한다. 건조된 추출물의 추가의 정제 및 추출을 위해 메탄올/헥산 용액을 또한 라인(14)을 통해 추출 단계(12)로 공급한다. 추출물/메탄올/헥산 혼합물을 라인(16)을 통해 분리 단계(18)로 공급하고, 헥산 분획을 라인(20)을 통해 제거하고, 이어서 메탄올/추출물 혼합물을 라인(22)을 통해 건조 단계(24)로 공급한다. 건조 단계(24)에서는 용매를, 예를 들면 로터 증발기에서 증발시켜 제거한다.
건조된, 부분적으로 정제된 활성 추출물을 라인(26)을 통해 공급하고, 메탄올을 라인(28)을 통해 용액 단계(30)로 첨가하고, 용해된 분획을 라인(36)을 통해 크로마토그래피 컬럼(38)에 공급한다.
컬럼(38)에서, 메탄올 가용성 분획을 실리카 겔 및 클로로포름/30 % 메탄올 용매를 사용하여 분획 I 내지 V로서 도식적으로 나타낸 다른 분획으로 추가로 분별한다. 출원인에 의해 수행된 실제 분별 과정에 따르면, 분별 과정을 통해 다음 중량의 분획을 얻었다: I(3.9 g); II(2.6 g); III(2.1 g); IV(1.1 g) 및 V(2.0 g). 이들 분획을 적합한 생물학적 검정 과정(도시하지 않음)에 의해 개별적으로 평가하고, 분명한 식욕 억제 활성을 갖는 분획 I 내지 II로서 확인된 분획들을 공급라인(40) 및 (42)에 의해 각각 컬럼(44) 및 (46)으로 공급하고, 이때 이들을 추가로 분별하고 실리카 겔 및 9:1 클로로포름:메탄올 시스템을 사용하여 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제한다.
컬럼(44)으로부터 얻어진 아분획 II(A) 내지 II(C)는 분석시 두드러진 식욕 억제 활성을 나타내지 않고, 추가의 크로마토그래피를 위해 재순환될 수 있다.
컬럼(46)으로부터 얻어진 아분획 I(A) 내지 I(L)을 또한 평가하였고(이 분석 단계는 도시하지 않음), 아분획 I(C)가 현저한 식욕 억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
아분획 I(C)는 실리카 겔 및 9:1 에틸 아세테이트:헥산 용출액를 사용하여 추가의 분별 및 정제를 위해 라인(48)을 통해 컬럼(50)으로 공급된다. 생성된 정제된 분획중에서, 분획 I(C)(ii)가 검정후 현저한 식욕 억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
정제된 생성물은 하기 표 I 및 II에 나타낸 바와 같이 핵자기 공명 분광법에 의해 화학식 1의 화합물임이 확인된다:
Figure 111999013049445-pct00183
Figure 111999013049445-pct00071
화학식 1의 화합물
IR 자료: 3440 cm-1(OH), 2910 cm-1(CH), 1700 cm-1(C=O)
[αD]20 589 = 12.67°(C = 3, CHCl3)
융점: 147 내지 152℃
실시예 4 내지 13은 합성 과정을 설명하고, 이에 의해 화학식 15의 스테로이드 및 중간체 화합물이 "제 1 변법"에 따라 제조될 수 있다.
실시예 4
화학식 17의 12β,15α-디하이드록시 프로제스테론
칼로넥트리아 데코라(Calonectria decora)(ATCC 14767)를 수크로스(900 g), K2HPO4(30 g), 차펙(Czapek) 농축물(300 ml), 옥수수 침지액(300 ml) 및 증류수(30 l)로 이루어진 배양 배지(150 × 500 ml의 플라스크)에 접종하여 배양물을 제조한다. 26℃에서 5일동안 진탕한 후, 트윈(Tween) 80(0.1 %의 용액, 1.5 l)의 현탁액중의 화학식 16의 프로제스테론(150 g)을 플라스크에 첨가한다. 배양물을 추가의 5일동안 배양하고, 이어서 원심분리, 따라내기, 매질의 클로로포름으로의 추출 및 이어서 증발에 의해 후처리하여 화학식 17의 디하이드록시 프로제스테론(75 g, 45 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00072

실시예 5
화학식 18의 12β-하이드록시-15α-(p-톨루엔 설포닐)-프로제스테론
화학식 17의 디하이드록시 프로제스테론(75 g, 0.22 mol)을 무수 피리딘(300 ml)에 용해시키고, 0℃로 냉각시킨다. 무수 피리딘(200 ml)중의 염화 p-톨루엔설포닐(46 g, 0.24 mol)을 0℃에서 반응 혼합물에 적가한다. 반응물을 0℃에서 밤새 교반하고, H2O(500 ml)를 첨가하여 급냉시킨다. 수층을 에틸 아세테이트(1 l)로 추출하고, 유기 추출물을 염산(6 M, 3 × 1 l), 수성 포화 중탄산 나트륨(500 ml), 수성 포화 염화 나트륨(500 ml) 및 물(500 ml)로 세척한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 점성의 짙은 황색 오일로서 화학식 18의 p-톨루엔 설폰화 프로제스테론(98 g, 92 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00073

실시예 6
화학식 19의 12β-하이드록시-△ 14 -프로제스테론
2,4,6-트리메틸 콜리딘(500 ml)중의 화학식 18의 토실화 프로제스테론(98 g, 0.19 mol)의 용액을 3시간동안 150℃에서 환류시킨다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물(500 ml)에 붓는다. 수층을 에틸 아세테이트(1 l)로 추출한 후, 유기층을 염산(6 M, 3 × 1 l), 수성 포화 중탄산 나트륨(500 ml), 수성 포화 염화 나트륨(500 ml) 및 물(500 ml)로 세척한다. 건조시키고(MgSO4) 여과시킨 후, 에틸 아세테이트를 증발시키고, 조혼합물을 아세톤:클로로포름(1:10)으로 용출시키면서 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 짙은 적색 오일로서 화학식 19의 △14-프로제스테론(50 g, 78 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00074

실시예 7
화학식 20의 3,12β-디아세톡시프레그나-3,5,14-트리엔-20-온
염화 아세틸(1.5 l) 및 아세트산 무수물(750 ml)중의 화학식 19의 △14-프로제스테론(50 g, 0.15 mol)의 용액을 2시간동안 환류시킨다. 반응 혼합물을 찬 에틸 아세테이트(1 l)에 붓고, 발포가 중지될 때까지 수성 포화 중탄산 나트륨을 교반하면서 첨가한다. 에틸 아세테이트 층을 중탄산 나트륨 층으로부터 분리하고, 추가의 수성 중탄산 나트륨의 부(3 × 700 ml), 이후 수성 포화 염화 나트륨(700 ml) 및 최종적으로 물(700 ml)로 세척한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 주황색 오일로서 화학식 20의 3,12β-디아세톡시프레그나-3,5,14-트리엔-20-온(60 g, 93 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00075

실시예 8
화학식 21의 3,12β-디아세톡시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-3,5,14-트리엔
화학식 20의 디아세톡시 화합물(60 g, 0.14 mol)을 벤젠(1 l) 및 에틸렌 글리콜(60 ml)에 용해시키고, p-톨루엔 설폰산(1 g)을 첨가한다. 이 때 벤젠을 미리 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩으로 환류시킨다. 혼합물을 16시간동안 교반하고 물을 공비등 제거하면서 환류시킨다. 포화 중탄산 나트륨 수용액(500 ml)을 냉각된 용액에 첨가한다. 이어서, 이것을 염수(500 ml) 및 물(500 ml)로 세척하고, 건조시킨다(MgSO4). 용매를 증발시키고, 조혼합물을 에틸 아세테이트:헥산(2:8)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 21의 에틸렌디옥시프레그나-3,5,14-트리엔(35 g, 53 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00076


실시예 9
화학식 22의 3β-12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레그나-5,14-디엔-12-아세테이트
화학식 21의 디엔올아세테이트(35 g, 0.077 mol)를 에탄올(500 ml)에 현탁시키고, 나트륨 보로하이드라이드(2.8 g, 0.074 mol)를 0℃에서 첨가한다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 밤새 교반한다. 대부분의 용매를 진공하에서 제거하고, 혼합물을 물(500 ml)로 희석하고, 에틸 아세테이트(500 ml)로 추출한다. 후처리 후 아세톤/클로로포름(1:10)으로 실리카 겔상에서 크로마토그래피하여 화학식 22의 3β-알콜(25 g, 80 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00077

실시예 10
화학식 23의 3β,12β-디하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5,14-디엔
무수 테트라하이드로푸란(300 ml)중의 화학식 22의 3β-알콜(25 g, 60.2 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(500 ml)중의 리튬 알루미늄 하이드라이드(2.7 g, 72.2 mmol)의 현탁액에 적가한다. 반응 혼합물을 24시간동안 실온에서 교반한 후, 물(2.7 ml)을 조심스럽게 첨가하고, 추가의 10분동안 교반한다. 이어서, 수산화 나트륨(15 %의 용액, 2.7 ml)을 첨가하고, 현탁액을 교반한다. 10분 후, 물(8.1 ml)을 첨가하고, 현탁액을 10분동안 교반하고, 여과시키고, 건조시키고(MgSO4), 용매를 증발시켜 화학식 23의 3β,12β-디하이드록시프레그나-디엔(20 g, 90 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00078
3β,12β-디하이드록시-14,15-에폭시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔;
3β,12β-디하이드록시-5,6-에폭시-20,20-에틸렌디옥시프레근-14-엔
N-브로모아세트아미드(211 mg, 1.5 mmol)를 0℃에서 아세톤(100 ml), 아세트산(2.5 ml) 및 물(5 ml)중의 화학식 23의 5,14-디엔(500 mg, 1.34 mmol)의 교반된 용액에 첨가한다. 15분 후, 아황산 나트륨(5 % 용액, 50 ml)을 반응 혼합물에 첨가한다. 아세톤을 증발시키고, 수성층을 디클로로메탄(3 × 50 ml)으로 추출한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 피리딘(1 ml)을 생성물에 첨가하고, 0.5시간동안 교반한다. 이어서, 디클로로메탄(100 ml)를 반응 혼합물에 첨가하고, 디클로로메탄을 시트르산(5 % 용액, 3 × 100 ml), 포화 중탄산 나트륨(50 ml) 및 물(50 ml)로 세척한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 백색 발포체로서 14,15- 및 5,6-에폭사이드의 혼합물(360 mg, 69 %)을 수득한다. 에폭사이드의 혼합물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 분리 될 수 없다.
실시예 11
화학식 24의 3β,12β-디하이드록시-14,15-에폭시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔
무수 테트라하이드로푸란(200 ml)중의 14,15- 및 5,6-에폭사이드(14.4 g, 37.0 mmol)의 혼합물을 무수 테트라하이드로푸란(300 ml)중의 리튬 알루미늄 하이드라이드(1.69 g, 44.4 mmol)의 현탁액에 첨가한다. 반응 혼합물을 24시간동안 실온에서 교반한 후, 이것을 물(1.69 ml) 및 수산화 나트륨(15 % 용액, 1.69 ml)을 첨가하여 이전에 기술된 바와 같이 후처리한다. 용매의 여과 및 증발 후, 조생성물을 용매로서 메탄올/클로로포름(1:9)을 사용하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 24의 반응하지 않은 14,15-에폭시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔(300 mg, 2.1 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00079

실시예 12
화학식 25의 3β,12β,14β-트리하이드록시-20,20-에틸렌디옥시프레근-5-엔
무수 테트라하이드로푸란(10 ml)중의 화학식 24의 14,15-에폭사이드(300 mg, 0.77 mmol)를 테트라하이드로푸란중의 리튬 알루미늄 하이드라이드(300 mg, 7.89 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 반응물을 48시간동안 환류시킨다. 물(0.3 ml) 및 수산화 나트륨(15 % 용액, 0.3 ml)을 첨가하고 이전에 기술한 바와 같이 여과시킨 후, 혼합물을 용매로서 메탄올:클로로포름(1:9)을 사용하여 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 25의 트리하이드록시 프레그넨(250 mg, 83 %)을 수득한다.
Figure 111999013049445-pct00080

실시예 13
화학식 15의 3β,12β,14β-트리하이드록시프레근-5-엔
화학식 25의 에틸렌디옥시프레그넨(250 mg, 0.64 mmol)을 아세트산(13.4 ml) 및 물에 용해시킨 후, 냉동건조시켜 화학식 15의 트리하이드록시 스테로이드(200 mg, 89 %)를 수득한다. 융점: 228 내지 235℃(문헌: 225 내지 235℃), M+ 348, [αD]20 +35°(문헌: [αD]20 +29°)
삭제
Figure 112008063226562-pct00266

하기 실시예 14 내지 19는 화학식 15의 스테로이드 및 중간체 화합물을 "제 2 변법"에 따라 제조하는 합성 과정을 설명한다:
실시예 14
화학식 26의 20,20-에틸렌디옥시-3β-톨루엔-p-설포닐옥시프레근-5,14-디엔-12β-올 아세테이트
피리딘(10 ml)중의 염화 p-톨루엔설포닐(650 mg, 3.4 mmol)의 용액을 0℃에서 피리딘(15 ml)중의 화학식 22의 20,20-에틸렌디옥시프레그나-5,14-디엔-13β,12β-디올-12-아세테이트(1.3 g, 3.1 mmol)의 혼합물에 적가한다. 반응 혼합물을 24시간동안 실온에서 교반한 후, 물을 반응 혼합물에 첨가한다. 용액을 에틸 아세테이트(2 × 50 ml)로 추출하고, 에틸 아세테이트 층을 시트르산(5 × 50 ml), 포화 중탄산 나트륨 용액(100 ml), 포화 염화 나트륨 용액(100 ml) 및 물(100 ml)로 세척한다. 에틸 아세테이트를 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시키고, 용출액로서 헥산-에틸 아세테이트(8:2 v/v)를 사용하여 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 황색 오일로서 화학식 26의 β-O-토실 스테로이드(1.5 g, 84 %)를 수득한다.(실측치 M 570.271, C32H42O7S의 계산치: M 570.273)
Figure 111999013049445-pct00082

실시예 15
화학식 27의 20,20-에틸렌디옥시-3α,5-사이클로-5α-프레근-14-엔-6β,12β-디올-12-아세테이트
물(250 ml) 및 아세톤(500 ml)중의 화학식 26의 3β-톨루엔-p-설포닐옥시-프레근-5,14-디엔(1.2 g, 2.1 mmol) 및 칼륨 아세테이트(2.2 g, 22.4 mmol)의 용액을 16시간동안 60℃에서 환류시킨다. 아세톤을 증발시키고, 물을 에틸 아세테이트(200 ml)로 추출한다. 에틸 아세테이트를 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 용출액으로서 클로로포름-아세톤(9:1 v/v)을 사용하여 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 분리하여 황색 오일로서 화학식 27의 3α,5-사이클로 유도체(530 mg, 61 %)를 수득한다.(실측치 M 416.262, C25H36O5의 계산치: M 416.263)
Figure 111999013049445-pct00083

실시예 16
화학식 28의 20,20-에틸렌디옥시-3α,5-사이클로-5α-프레근-14-엔-6β,12β-디올
테트라하이드로푸란(20 ml)중의 화학식 27의 3α,5-사이클로 유도체(500 mg, 1.2 mmol)의 용액을 테트라하이드로푸란(10 ml)중의 리튬 알루미늄 하이드라이드(50 mg, 1.3 mmol)의 현탁액에 적가한다. 반응 혼합물을 4시간동안 교반하고, 물(50 μl)을 첨가하여 급냉시킨다. 30분 후, 수산화 나트륨(15 % 용액, 50 μl)을 첨가하고, 추가의 30분동안 교반을 계속한다. 물(150 μl)을 첨가 하고, 반응 혼합물을 여과시킨다. 테트라하이드로푸란을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시키고, 용출액으로서 클로로포름-아세톤(8:2 v/v)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피 정제하여 오일로서 화학식 28의 디올(370 mg, 83 %)을 수득한다.(실측치 M 374.250, C23H34O4의 계산치: M 374.252)
Figure 111999013049445-pct00084

실시예 17
화학식 29의 20,20-에틸렌디옥시-14,15β-에폭시-3α,5-사이클로-5α,14β-프레그난-6β,12β-디올
N-브로모아세트아미드(150 mg, 1.1 mmol)을 0℃에서 아세톤(20 ml), 물(0.25 ml) 및 아세트산(0.25 ml)중의 화학식 28의 20,20-에틸렌디옥시-3α,5-사이클로-5α-프레근-14-엔-6β,12β-디올(340 mg, 0.91 mmol)의 용액에 첨가한다. 15분 후, 아황산 나트륨(5 % 용액, 20 ml)을 반응 혼합물에 첨가한다. 아세톤을 감압하에서 증발시키고, 남은 용액을 디클로로메탄(3 × 30 ml)으로 추출한다. 디클로로메탄 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축 부피(50 ml)로 증발시킨다. 피리딘(0.5 ml)을 혼합물에 첨가하고, 추가의 1시간동안 교반한 후, 디클로로메탄 층을 시트르산(5 %, 3 × 30 ml), 포화 중탄산 나트륨 용액(30 ml) 및 물(30 ml)로 세척한다. 디클로로메탄 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시키고, 용출액으로서 클로로포름-메탄올(9.5:0.5 v/v)을 사용하여 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 발포체로서 화학식 29의 에폭사이드(180 mg, 51 %))를 수득한다.(실측치 M 390.245, C23H34O2의 계산치: M 390.247)
Figure 111999013049445-pct00085

실시예 18
화학식 30의 20,20-에틸렌디옥시-6β,12β,14-트리하이드록시-3α,5-사이클로-5 α,14β-프레그난
테트라하이드로푸란(10 ml)중의 화학식 29의 에폭사이드(170 mg, 0.44 mol)의 용액을 테트라하이드로푸란(5 ml)중의 리튬 알루미늄 하이드라이드(20 mg, 0.53 mmol)의 현탁액에 첨가한다. 반응 혼합물을 2시간동안 환류시킨 후, 물(20 μl)을 첨가하고, 0.5시간동안 교반을 계속한다. 수산화 나트륨 용액(15 %, 20 μl)을 첨가하고, 추가의 0.5시간동안 교반을 계속한다. 추가량(60 μl)의 물을 첨가하고, 현탁액을 1시간동안 교반한다. 여과 후, 현탁액을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 테트라하이드로푸란을 증발시킨다. 클로로포름-메탄올(9:1 v/v)로 용출시키면서 플래쉬 크로마토그래피 분리하여 등명한 오일로서 목적한 화학식 30의 트리올(90 mg, 53 %)을 수득한다.(실측치 M 392.261, C23H38O5의 계산치: M 392.263)
Figure 111999013049445-pct00086

실시예 19
화학식 15의 3β,12β,14-트리하이드록시-14β-프레근-5-엔-20-온
아세톤(20 ml)중의 화학식 30의 트리올(80 mg, 0.20 mmol)과 염산(1 M, 10 ml)의 혼합물을 2시간동안 60℃에서 환류시킨다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 포화 중탄산 나트륨 용액(20 ml)을 첨가한다. 아세톤을 증발시키고, 수성층을 클로로포 름(3 × 20 ml)으로 추출하고, 클로로포름 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 15a 및 15b 에피머성 트리하이드록시 스테로이드(42 mg, 61 %)를 수득한다. 화학식 15a 및 15b의 에피머성 혼합물을 용출액으로서 클로로포름:메탄올(9:1 v/v)을 사용하여 플래쉬 크로마토그래피에 의해 분리하여 화학식 15a의 순수한 17β-에피머(10 mg)[융점: 224 내지 229℃(아세톤)(문헌: 226 내지 223℃)(실측치 M 348.234, C; 72.32, H 9.21 %; C21H32O4의 계산치: C, 72.38; H 9.26 %, M 348.236)] 및 화학식 15b의 순수한 17α-에피머(3 mg)[융점: 183 내지 191℃(아세톤)(문헌: 184 내지 196℃)]를 수득한다.
화학식 15a의 3β,12β,14-트리하이드록시-14β-프레근-5-엔-20-온:
Figure 111999013049445-pct00087
화학식 15b의 3β,12β,14-트리하이드록시-14β-프레근-5-엔-20-온:
Figure 111999013049445-pct00088
실시예 20 내지 28은 화학식 40의 제 1 모노사카라이드를 형성하기 위해 중간체 화합물이 제조되는 과정을 예시하는 것이다.
실시예 20
화학식 32의 메틸-4,6-O-벤질리덴-α-D-글루코피라노사이드
메틸-α-D-글루코피라노사이드(30 g, 0.15 mol), 벤즈알데하이드(70 ml) 및 염화 아연(20 g)의 혼합물을 24시간동안 실온에서 교반한다. 반응 생성물을 얼음물에 붓고, 15분동안 교반을 계속한다. 백색 침전물을 여과시키고, 디에틸 에테르로 세척한다. 고체 물질을 15분동안 나트륨 메타비설파이트의 용액(10 % 용액)과 함께 교반하고, 여과시키고, 물로 세척한다. 고체 물질을 클로로포름 및 에테르로부터 결정화하여 화학식 32의 벤질리덴 생성물(31 g, 72 %)을 수득한다.
실시예 21
화학식 33의 메틸-4,6-O-벤질리덴-2-O-토실-α-D-글루코피라노사이드
피리딘(100 ml)중의 염화 p-톨루엔설포닐(25 g, 1.2당량)을 0℃에서 피리딘(100 ml)중의 화학식 32의 벤질리덴 글루코스(31 g, 0.12 mol)의 용액에 적가한다. 반응물을 48시간동안 실온에서 교반한다. 얼음을 반응 혼합물에 첨가한다. 생성된 백색 고체 물질을 물로 세척하고, 고온의 에탄올로부터 결정화하여 화학식 33의 토실화 글루코스(28 g, 60 %)를 수득한다.
실시예 22
화학식 34의 메틸-4,6-O-벤질리덴-3-O-메틸-α-D-알트로피라노사이드
메탄올(150 ml)중의 나트륨(7 g)의 용액중의 화학식 33의 토실레이트(28 g, 64 mmol)를 오토클레이브에서 48시간동안 110℃에서 가열한다. 반응 용기를 냉각시키고, 고체 이산화 탄소를 반응 혼합물에 첨가한다. 여과 후, 메탄올을 증발시키고, 이어서 고체 물질을 물에 용해시킨다. 수성층을 클로로포름(× 3)으로 추출한다. 수성층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 조혼합물을 클로로포름:아세톤(9:1)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 34의 알트로사이드(10 g, 52 %)를 수득한다.
실시예 23
화학식 35의 메틸-6-브로모-4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-α-D-알트로피라노사이드
화학식 34의 벤질리덴 알트로사이드(10 g, 33 mmol)를 사염화 탄소중의 N-브로모숙신이미드(7.6 g) 및 탄산 바륨(20 g)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간동안 75℃에서 환류시킨다. 반응 혼합물을 여과시키고, 사염화 탄소 층을 물로 세척한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 35의 6-브로모-알트로사이드(9 g, 69 %)를 수득한다.
실시예 24
화학식 36의 메틸-4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-α-D-알트로피라노사이드
물(30 ml)중의 나트륨 보로하이드라이드(18 g)을 0℃에서 에탄올(300 ml)중의 화학식 35의 브로모알트로사이드(9 g, 23 mmol) 및 염화 니켈(18 g)의 용액에 적가한다. 반응 혼합물을 1시간동안 75℃에서 환류시키고, 이어서 여과시킨다. 에탄올을 증발시키고, 남은 수성층을 클로로포름(× 3)으로 추출한다. 클로로포름을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 36의 6-데옥시-알트로사이드(5 g, 72 %)를 수득한다.
실시예 25
화학식 37의 4-O-벤조일-3-O-메틸-6-데옥시-αβ-D-페닐티오알트로피라노사이드
페닐티오트리메틸실란(5 ml) 및 트리메틸실릴트리플루오로메탄 설포네이트(2 ml)를 디클로로메탄(200 ml)중의 화학식 36의 6-데옥시-알트로사이드(5 g, 17 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가한다. 반응 혼합물을 6시간동안 실온에서 교반한다. 포화 중탄산 나트륨을 반응 혼합물에 첨가한다. 디클로로메탄 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 조혼합물을 클로로포름:아세톤(9:1)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 37의 αβ-페닐티오알트로사이드(4 g, 63 %)를 수득한다.
실시예 26
화학식 38의 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-페닐티오-2,6-디데옥시-αβ-D-플루오로시마로피라노사이드
삼불화 디에틸아미노황(0.65 g)을 0℃에서 디클로로메탄중의 화학식 37의 αβ-페닐티오알트로사이드(0.5 g, 1.33 mmol)의 용액에 빠르게 첨가한다. 반응물을 0℃에서 0.5시간동안 교반하고, 이어서 포화 중탄산 나트륨을 첨가한다. 디클로로메탄을 수성층으로부터 분리하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 38의 αβ-플루오로시마로스(450 mg, 90 %)를 수득한다.
실시예 27
화학식 39의 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-t-부틸디메틸실릴-αβ-D-페닐티오-알트로사이드
화학식 37의 6-데옥시알트로사이드(5 g)를 피리딘(3 g)중의 염화 t-부틸디메틸실릴(3 g) 및 이미다졸(3 g)을 사용하여 실릴화한다. 반응물을 에틸 아세테이트로 추출하고 에틸 아세테이트를 염산(6 N), 이어서 중탄산 나트륨, 및 최종적으로 물로 세척하여 후처리한다. 에틸 아세테이트 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 39의 실릴화 벤조일 페닐티오알트로사이드(80 %)를 수득한다.

실시예 28
화학식 40의 3-O-메틸-2-O-t-부틸디메틸실릴-αβ-D-페닐티오알트로사이드
화학식 39의 실릴화 벤조일 페닐티오알트로사이드(6 g)를 4시간동안 나트륨 메톡사이드(100 ml)로 처리한다. 메탄올을 증발시키고, 물을 반응물에 첨가한다. 수층을 산성화시키고(pH 5, ACOH), 에틸 아세테이트로 추출한다. 에틸 아세테이트를 물로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 40의 실릴화 메틸 페닐티오알트로사이드(75 %)를 수득한다.
하기 실시예 29 내지 37은 화학식 50의 제 2 모노사카라이드를 형성하기 위해 중간체 화합물이 제조되는 합성 과정을 예시한다.
실시예 29
화학식 42의 1,2:5,6-디-O-이소프로필리덴-α-D-글루코푸라노스
황산(40 ml)을 0℃에서 아세톤(1 l)중의 화학식 41의 α-D-글루코스(50 g, 0.28 mmol)의 용액에 적가한다. 반응 혼합물을 24시간동안 교반하고, 이어서 수산화 나트륨(6 M)을 사용하여 중화시킨다. 아세톤을 증발시키고, 수성층을 클로로포름(× 2)으로 추출한다. 클로로포름을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 사이클로헥산으로부터 결정화하여 화학식 42의 디-이소프로필리덴 글루코스(41 g, 57 %)를 수득한다.
실시예 30
화학식 43의 1,2:5,6-디-O-이소프로필리덴-3-O-메틸-α-D-글루코푸라노스
테트라하이드로푸란(300 ml)중의 화학식 42의 α-D-글루코푸라노스(41 g, 0.16 mol)를 테트라하이드로푸란(200 ml)중의 수소화 나트륨(5 g)의 현탁액에 적가한다. 0.5시간 후, 테트라하이드로푸란(100 ml)중의 요오드화 메틸(25 g)을 반응 혼합물에 적가하고, 이어서 24시간동안 교반한다. 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 이어서 에테르(× 3)로 추출한다. 에테르 층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 43의 메틸 보호된 글루코스(38 g, 83 %)를 수득한다.
실시예 31
화학식 44의 3-O-메틸-αβ-D-글루코피라노사이드
화학식 43의 메틸 디이소프로필리덴 화합물(38 g, 0.14 mol)을 아세트산(50 %, 700 ml)에 용해시키고, 용액을 18시간동안 환류시킨다. 냉각시킨 후, 아세트산을 증발시킨다. 조생성물을 클로로포름:메탄올:아세톤:물(70:27:2:1)로 용출시키면서 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 44의 3-O-메틸-αβ-글루코피라노사이드(13 g, 50 %)를 수득한다.
실시예 32
화학식 45의 메틸 3-O-메틸-αβ-D-글루코피라노사이드
화학식 44의 3-O-메틸-αβ-글루코피라노사이드(10 g)를 메탄올(50 ml) 및 진한 HCl(1 ml)에 용해시키고, 밤새 환류시킨다. 고체 NaHCO3을 첨가하고, 반응물을 여과시킨다. 메탄올을 증발시켜 화학식 45의 1,3-디-O-메틸-αβ-D-글루코피라노사이드(95 %)를 수득한다.
실시예 33
화학식 46의 메틸 4,6-O-벤질리덴-3-O-메틸-αβ-글루코피라노사이드
화학식 45의 글루코피라노사이드(8 g)를 벤즈알데하이드(20 ml) 및 염화 아연(5 g)의 용액중에서 실온에서 교반한다. 24시간 후, 얼음을 첨가하고, 수성층을 클로로포름으로 추출한다. 클로로포름을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 벤즈알데하이드를 진공 증류에 의해 제거하고, 생성물을 아세톤:클로로포름(0.5:9.5)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 46의 벤질리덴-αβ-글루코피라노사이드(60 %)를 수득한다.
실시예 34
화학식 47의 메틸 4-O-벤조일-O-메틸-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드
화학식 46의 벤질리덴 화합물(5 g)을 사염화 탄소중의 N-브로모숙신이미드(3.7 g)와 탄산 바륨(4 g)의 혼합물에서 80℃에서 환류시킨다. 4시간 후, 반응물을 여과시키고, 사염화 탄소를 물로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 브로모 화합물(70 %)을 수득한다.
브로모 화합물(4.3 g)을 0℃에서 에탄올(300 ml) 및 염화 니켈(8.6 g)의 용액에 용해시킨다. 이 용액에, 물(50 ml)중의 나트륨 보로하이드라이드(8.6 g)를 15분동안 적가한다. 반응 혼합물을 45분동안 100℃에서 환류시키고, 냉각시키고, 여과시키고, 증발시킨다. 클로로포름을 첨가하고, 클로로포름층을 물로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 47의 6-데옥시 당(70 %)을 수득한다.
실시예 35
화학식 48의 4-O-벤조일-3-O-메틸-1-페닐티오-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드
화학식 47의 6-데옥시 글루코피라노사이드(3 g)를 디클로로메탄(50 ml)에 용해시킨다. 이 용액에, 페닐티오트리메틸실란(2 g) 및 트리메틸실릴트리플루오로메탄설포네이트(0.2 ml)를 첨가한다. 이 용액을 밤새 실온에서 교반한 후, 포화 중탄산 나트륨을 첨가한다. 디클로로메탄층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 생성물을 에틸 아세테이트:헥산(2:8)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 48의 화합물(50 %)을 수득한다.
실시예 36
화학식 49의 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-피발로일-1-페닐티오-6-데옥시-αβ-글루코피라노사이드
피리딘(20 ml)중의 화학식 48의 글루코피라노사이드(2 g)의 용액에 염화 피발로일(2 ml)을 첨가한다. 용액을 밤새 실온에서 교반한 후, 물을 첨가한다. 수성층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 HCl(6 N)로 세척한다. 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시켜 화학식 49의 피발로일 에스테르(80 %)를 수득한다.
실시예 37
화학식 50의 4-O-벤조일-3-O-메틸-2-O-피발로일-1-플루오로-6-데옥시-β-글루코피라노사이드
N-브로모숙신이미드(1.2 g) 및 삼불화 디에틸아미노황(1.2 g)을 0℃에서 디클로로메탄(100 ml)중의 화학식 49의 피발로일 에스테르(2 g)의 용액에 첨가한다. 1시간 후, 포화 중탄산 나트륨을 첨가한다. 디클로로메탄층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 화학식 50의 β-플루오로피라노사이드를 에틸 아세테이트:헥산(2:8)으로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제한다(수율 45 %).
실시예 38은 화학식 51의 3-O-[4-O-벤조일-2-페닐티오-β-시마로피라노실]-12,14β-디하이드록시-프레그난-5-엔-20-온이 제조되는 합성 과정을 예시하는 것이다.
실시예 38
화학식 51의 3-O-[4-O-벤조일-2-페닐티오-β-D-시마로피라노실]-12,14β-디하이드록시-프레근-5-엔-20-온
염화 주석(190 mg, 1 mmol)을 -15℃에서 무수 디에틸 에테르 및 4Å 분자체중의 화학식 15의 3,12,14β-트리하이드록시 프레그난-5-엔-20-온(100 mg, 0.28 mmol) 및 화학식 38의 플루오로시마로피라노사이드(210 mg, 0.56 mmol)의 용액에 첨가한다. 반응 혼합물을 3일동안 -15℃에서 유지한다. 포화 중탄산 나트륨을 반응 혼합물에 첨가한다. 에테르층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 생성물을 클로로포름:메탄올(9.5:0.5)로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 화학식 51의 글리코사이드(30 mg, 15 %)를 수득한다.
실시예 39 내지 41은 시마로스 및 테베토스 잔기가 커플링되는 합성 과정을 예시하는 것이다.
실시예 39
화학식 53의 테베토스-시마로스 디사카라이드
메탄올중의 화학식 50A의 테베토스(1.5 g), 화학식 40의 시마로스(1.3 g) 및 분자체 4Å의 용액을 1시간동안 실온에서 교반한다. 반응 혼합물을 -15℃로 냉각시키고, 염화 주석(II)(0.8 g) 및 은 트리플루오로메탄설포네이트(1.1 g)를 첨가한다. 혼합물을 16시간동안 -15℃에서 교반한 후, 트리에틸아민(0.5 ml)을 첨가한다. 반응 생성물을 여과시키고, 디클로로메탄을 증발시킨다. 화학식 53의 디사카라이드를 에틸 아세테이트:헥산(2:8)로 용출시키면서 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제한다(수율 15 %).
실시예 40
화학식 54의 테베토스-시마로스 디사카라이드
테트라하이드로푸란(20 ml)중의 화학식 53의 디사카라이드(200 mg)의 용액에 불화 테트라부틸암모늄(0.4 ml)을 첨가한다. 혼합물을 1시간동안 실온에서 교반한 후, 포화 중탄산 나트륨을 첨가한다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 에틸 아세테이트층을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 화학식 54의 디사카라이드를 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(아세톤:클로로포름, 0.5:9.5)에 의해 정제한다(수율 60 %).
실시예 41
화학식 55의 테베토스-시마로스 디사카라이드
디클로로메탄(10 ml)중의 화학식 54의 디사카라이드(80 mg)의 용액에 삼불화 디에틸아미노황(80 μl)을 0℃에서 첨가한다. 0.5시간동안 0℃에서 교반한 후, 포화 중탄산 나트륨 및 추가의 디클로로메탄을 첨가한다. 디클로로메탄을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 증발시킨다. 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트:헥산 1.:9)에 의해 정제하여 화학식 55의 디사카라이드(수율 65 %)를 수득한다.
실시예 42
식욕 억제제에 대한 다음의 3가지 생물학적 검정의 결과를 하기에 개시한다:
a) 어윈(Irwin) 시험;
b) 급성 독성 시험; 및
c) 경구 투여 식욕 감퇴 시험.
a) 어윈 시험
본 시험의 목적은 안정 및 진정 작용에 대한 축소된 동물 어윈 시험에 따라 이전에 기술한 바와 같이 식물 추출물로부터 제조된 본 발명의 식욕 억제제를 평가하는 것이다.
실험 과정
이전에 기술한 방법에 의해 식물 물질로부터 식욕 억제제를 추출하고 각각 3마리의 동물로 된 4개의 군, 즉 미처리 1개의 군, 용매 디메틸설폭사이드(DMSO)를 받은 1개의 군, 시험 샘플을 50 mg/kg으로 받은 1개의 군 및 시험 샘플을 300 mg/kg으로 받은 1개의 군 중 2개의 군에 투여한다. 처리를 복막내 주사에 의해 수행하고, 처리후 5시간동안의 특정한 시간 간격을 두고 관찰한다. 단지 DMSO 처리된 동물에서 관찰된 것과 다른 증상만을 결과의 해석에서 사용한다.
결과
용매, DMSO가 특히 열 조절 기작에서 동물에 대해 분명한 영향을 미친다는 것은 명백하다. 단독으로 용매로 처리되거나 시험 샘플과 함께 처리된 모든 동물의 체온은 분명한 하락을 나타낸다.
저투여량군의 동물은 대조군을 비롯한 모든 기타 군에서와 마찬가지로, 우리에서 감소된 산포(dispersion) 및 감소된 이동 활동성을 나타낸다. DMSO 처리된 군에서와 동일한 정도로 무관심을 보인다. 처리 15 내지 60분후 감소된 호흡이 관찰된다. 하수증(눈꺼풀이 닫힘)은 또한 DMSO 군에서보다 더 큰 정도로 관찰된다. 두려움을 나타내는, 양성 손가락 반응 뿐만 아니라 귓바퀴(귀) 반응이 보인다. 체온은 처리 후 32.7℃로 하락한다.
고투여량군에서 동물은 기타 군에서와 같이 우리에서 초기의 감소된 산포 및 감소된 이동 활동성을 나타내나, 처리후 약 1시간 후에 발생하는 사망하기 전까지는 증가된 산포 및 이동 활동성을 나타낸다. 심한 만성 대칭성 경련은 처리 후 30분동안 일어난다. 호흡은 초기에는 감소되나, 사망하기 전에는 증가된다. 두려움을 나타내는, 귓바퀴(귀) 반응은 지연되고, 양성 손가락 반응이 관찰되는데, 이러한 두 현상 모두 저투여량군에서 동물에서 관찰된 바와 같다. 체온은 처리 후 30.7℃로 하락한다. 감소된 신체 긴장 뿐만 아니라 증가된 위치 수동성이 관찰된다. 비정상 사지 회전이 관찰되고, 악강도(grip strength)가 감소되고, 통증 반응이 나타나지 않고, 직립 반사(righting reflex)의 손실이 일어난다.
논의
대조 및 DMSO 처리된 동물과 비교시, 저투여량(50 mg/kg)을 받은 동물만이 감소된 호흡 및 증가된 정도의 하수증을 나타낸다. 고투여량(300 mg/kg)의 시험 샘플을 받은 동물은 경련 및 사망을 나타내어 매우 강하게 반응한다. 이들 동물에서 보여주는 모든 기타 관찰 사항은 경련중 및 사망중의 동물에서 관찰되는 것들이다. 시험 샘플에 기인한 것일 수 있는 안정 및 진정 작용을 암시하는 신호, 예를 들면 우리에서 분명한 감소된 산포, 감소된 이동 활동성 및 시험군에서의 무관심은 나타나지 않는다.
따라서, 시험 샘플은 용매로서 DMSO와 복강내로 투여될 때 300 mg/kg에서 마우스에 치명적이고, 50 mg/kg에서 마우스에 호흡 억제 효과를 갖는다고 결론지을 수 있다.
b) 급성 독성 시험
이 시험의 목적은 시험 샘플의 독성에 대한 정보를 얻는 것이다.
실험 과정
이전에 기술한 바와 같이 본 발명에 따라 제조되고 식욕 억제 작용을 갖는 식물 추출물을 정제하고, 1개의 시험 샘플을 마우스에서 경구 처리에 의해 투여량을 증가시켜 시험한다. 투여량군당 2마리의 동물을 사용하고, 단 최고 투여량의 군에서는 단지 1마리만 처리되었다. 건강이 좋은 동물에 대해 조사되고, 이들의 처리일의 체중을 측정한다.
투여량은 100 mg/kg 내지 3028.5 mg/kg이다. 투여량을 계산하고, 제조된 감자 전분에 혼합하여 각각의 동물이 0.2 ml의 총 투여량을 투여받게 한다. 동물 13은 0.25 ml를 받는다. 감자 전분은 20 g의 전분을 소량의 냉수에 혼합하고 이것을 비등수에 첨가하여 1 l의 부피로 제조된다. 현탁액은 투여 전 실온으로 냉각된다.
군 1 및 군 2에서 동물은 동일한 날에 처리된다. 이들은 24시간동안 관찰되고, 독성의 신호가 나타나지 않으면 다음 군을 처리한다. 모든 동물이 처리될 때까지 동일한 방법이 수행된다. 이 계획은 급성 독성 투여량이 도달된 군 이후의 군에서 동물이 불필요하게 처리되지 않도록 하기 위한 것이다.
동물은 처리 후 즉시(1 내지 2시간) 및 이후 매일 독성의 임상 신호에 대해 관찰된다. 체중을 일주일에 한 번 측정하고, 각각의 동물의 총 먹이 및 물 섭취량을 측정한다.
생존한 동물을 실험 14일째에 펜토바비톤 나트륨(상표명 유타나즈(Euthanaze), 센토(Centaur, 등록상표)하에서 상업적으로 시판되고 있음)을 복강내 주사하여 안락사시킨다. 사후 조사는 실험동안 사망한 동물 뿐만 아니라 이들 동물에서 수행된다. 조직병리 검사를 위한 샘플을 수거한다.
결과
군 1(대조군)
14일의 관찰 기간동안 독성의 임상 신호가 관찰되지 않는다. 먹이 및 물 섭취량은 정상 범위내이다. 체중 변화 또한 정상 범위내이다. 조직병리 변화는 간 샘플에서 기록되지 않는다.
군 2(100 mg/kg)
관찰 기간동안 독성의 임상 신호가 관찰되지 않는다. 먹이 및 물 섭취량은 정상적이고, 관찰 기간동안의 체중 변화 또한 정상적이다. 거시 병리는 관찰되지 않고, 조직병리 또는 형태 변화는 간 샘플에서 기록되지 않는다.
군 3(200 mg/kg)
이 군에서 동물은 실험하는 동안 독성의 임상 증상을 나타내지 않는다. 먹이 및 물 섭취량은 정상적이고, 체중 변화도 정상적이다. 거시 병리는 관찰되지 않으나, 간은 조사시 조직병리 변화를 나타낸다. 간세포의 흐린 팽윤은 동물 6에서 가벼우나, 동물 5에서 중간 정도이다. 중간 정도의 수증성 퇴화는 또한 동물 5의 간세포에서 일어난다.
군 4(400 mg/kg)
독성의 임상 신호는 관찰 기간동안 관찰되지 않고, 거시 병리는 사후 조사에서 관찰되지 않는다. 간세포의 중간 정도의 흐린 팽윤 및 가벼운 수증성 변화는 조직에서 관찰된다.
동물 7에서 물 및 먹이 섭취량 및 체중의 증가는 정상적이다. 동물 8(144.6 g)은 동물 7(73.9 g)의 총 먹이 섭취량의 거의 2배를 소비하나, 체중의 증가는 2.7 g에 비해 단지 0.80 g이다.
군 5(800 mg/kg)
1마리의 동물(동물 10)은 특정한 신호 없이 투여 3시간 후 사망했다. 다른 동물(동물 9)은 임의의 독성 신호 없이 전체 관찰 기간동안 생존했다. 생존한 동물에서 물 섭취량은 정상적이지만(42.42 ml), 먹이 섭취량은 많다(134.2 g). 체중은 2.85 g으로 증가하고, 이것은 모든 실험 동물중 최고이다.
경구 투여 후 바로 사망한 동물 10의 사후 조사에서, 폐가 충혈되었다. 시 험 물질의 흡입을 나타내는 외부 체 반응은 존재하지 않는다. 거시 병리는 동물 9에서 관찰되지 않는다. 가벼운 세포질 액포화(수증성 퇴화)는 동물 10에서 존재하나, 동물 9에서 중간 정도이다. 간의 선 세포질 외형은 두 동물에서 모두 중간 정도로서 분류된다.
군 6(1600 mg/kg)
어느 동물도 시험 기간동안 임의의 독성 신호를 나타내지 않는다. 거시 병리는 사후 조사에서 관찰되지 않으나, 동물 11의 간에서의 중간 정도의 퇴화 변화가 조직병리 조사에서 관찰된다. 동물 12는 간세포의 중간 정도의 흐린 팽윤 및 가벼운 수증성 변화를 나타낸다. 먹이 및 물 섭취량은 정상적이고, 체중의 증가도 실험 기간동안 정상적이다.
군 7(3028.5 mg/kg)
단지 1마리의 동물이 이 투여량으로 처리된다. 이 동물은 관찰 기간동안 독성의 신호를 나타내지 않고, 거시 병리는 관찰되지 않는다. 조직병리 조사에서, 간세포의 중간 정도의 흐린 팽윤 및 수증성 퇴화가 관찰된다. 이 동물은 관찰 기간동안 체중의 감소(-0.82 g)를 나타내나, 먹이 및 물 섭취량은 정상적이다.
논의
매우 적은 수의 동물이 각각의 투여량군에 사용되었기 때문에, 어떠한 결론을 내리기는 어렵다. 단지 1마리의 동물이 어떤 증상을 나타내지 않으면서 저투여량에서 사망하다는 사실은 사망이 시험 샘플과 관련된 것이 아니라 처리하는 동안 및/또는 처리 후 스트레스로 인한 것이라는 것을 나타낼 수 있다. 고투여량군에서 동물은 사망하지 않거나 어떠한 독성의 신호를 나타내지 않았는 바, 이 사실은 또한 이 가정을 지지한다.
동물 8에서 관찰되는 증가된 먹이 섭취량은 가능하게는 체중의 작은 증가에서 알 수 있는 바와 같이 먹이의 과다한 흘림으로 인한 것일 수 있다. 이 실험에서 모든 동물은 단지 한 번 처리되었고 식욕 억제제는 이 실험에서의 경우와 같이 14일동안 먹이 또는 물 섭취량, 또는 체중에 분명한 영향을 미치지 않을 수도 있다는 점을 명심해야 한다.
간 샘플의 조직병리 조사로부터, 병리 변화는 투여량과 관련되고 고투여량을 받은 동물은 광범위한 변화를 나타낸다는 것은 명백하다. 관찰된 병리는 자연적인 물질 대사가 아니라 가능하게는 시험 샘플로부터 유도된 것이다. 변화는 단지 퇴화성일 뿐이고, 따라서 가역적이다. 비가역적 간세포 변화의 신호는 관찰되지 않는다.
따라서, 단지 1마리의 동물만이 저투여량(800 mg/kg)에서 사망했으나 사망은 시험 샘플에 관련된 것은 아니라는 것으로 귀결될 수 있다. 임의의 투여량군에서 기타 동물은 처리 후 14일의 관찰 기간동안 독성의 신호를 전혀 나타내지 않거나 처리의 결과로서 사망하지 않았다. 단일 경구 투여량의 시험 샘플은 가역적 투여 관련 간세포 변화를 유도했다.
(c) 경구 투여 식욕 감퇴 시험
이 시험의 목적은 본 발명에 따라 제조된 식물 추출물의 활성 및 최소 유효 투여량을 측정하고, 동시에 어윈 시험(상기 언급된)에서 경험한 바와 같은 호흡 억 제와 같은 임의의 가능한 부작용을 조사하는 것이다.
실험 과정
동물들은 무작위추출 표를 사용하여 각 처리군으로 할당되었다. 각각의 처리군은 3마리의 동물로 구성되고, 대조군은 6마리의 동물로 구성된다. 시험 샘플을 연속 3일동안 순응상태의 100 내지 150 g의 체중을 갖는 어린 암컷 래트에게 투여한다. 동물은 용이한 확인을 위한 금속 귀 꼬리표 및 KMnO4 표피 표지에 의해 확인된다. 동물을 표준 설치동물 폴리카보네이트 우리에서 개별적으로 사육하고, 물 및 분말화된 시판중인 설치동물용 펠렛을 임의로 이용할 수 있게 한다. 물 및 먹이 섭취량을 매일 측정하고 계산한다. 시험 샘플의 최소 유효 투여량을 알아내기 위해, 5개의 투여량에 대해 시험한다. 처리는 감자 전분에 현탁된 시험 샘플을 이용하여 경구 위관 영양법에 의해 수행된다.
시험 물질은 본 발명에 따른 식물 물질로부터의 추출물로부터 제조된 백색 과립 분말인 화학식 1의 화합물이고, 시험 샘플의 측정량을 제조된 감자 전분과 혼합하여 투여한다. 감자 전분과의 혼합은 매일 투여 전에 즉시 이루어진다. 각각의 동물에 대한 투여 부피를 투여 중지하기 전에, 현탁액을 볼텍스(Vortex)를 사용하여 완전하게 혼합시킨다.
5개의 투여량의 범위를 시험하고, 대조군은 단지 담체 물질을 받는다. 투여량은 전술한 어윈 시험에서 관찰된 효과를 기준으로 선택되고 다음과 같다:
군 1: 0.00 mg/kg(대조군)
군 2: 6.25 mg/kg
군 3: 12.50 mg/kg
군 4: 25.00 mg/kg
군 5: 37.50 mg/kg
군 6: 50.00 mg/kg
결과
처리는 연구 기간동안 동물의 건강에 영향을 미치지 않는다. 모든 투여량군에서 시험 샘플로 처리된 동물은 총 연구 기간동안 상당하게 감소된 평균 체중 증가를 나타내고, 5개의 처리군중에서 3개에서 동물은 실제로 체중이 감소된다.
모든 처리군에 대한 평균 먹이 섭취량은 연구 기간동안 감소된다. 고투여량군에서 동물은 증가된 물 소비량을 나타낸다.
임의의 투여량군에서 동물의 어느 것에서도 호흡 속도는 유의성있게 영향받지 않는다.
모든 투여량군에서 동물은 사후 조사에서 무른 간을 가지나, 거시적 병리 상태는 관찰되지 않는다.
논의
순응화 기간동안 수거된 자료는 시험에 포함되는 모든 동물은 건강하고 체중 증가는 동물 사이에서 동등하다는 것을 확인하였다.
체중 증가 정도의 감소, 및 몇몇 동물에서 체중의 자체의 감소는 감소된 먹이 섭취량과 함께 식욕 중추의 억제의 강력한 지표이다.
감소된 먹이 섭취량 및 감소된 체중 증가는 최소 투여량군(6.25 mg/kg)에서 도 일어난다. 체중의 실제적인 감소는 12.50 mg/kg 군에서 일어난다.
처리군에서 모두 먹이 소비량이 감소될 때 증가된 물 소비량을 갖는다는 것 또한 중요하게 주목해야 한다(도 2). 이것은 시험 샘플의 이뇨 효과 또는 뇌에서 갈증 중심의 자극으로 인한 것일 수 있다.
호흡 억제가 복강내 경로에서 상기 언급된 급성 독성 시험에서 관찰된 바와 같이 일어나지 않는다는 사실은 긍정적인 양태로서 보여진다. 이것은 위장관으로부터의 감소된 흡수, 따라서 감소된 생체 이용률로 인한 것일 수 있다. 그러나, 시험되는 경구 투여량에서의 생체 이용률은 충분하여 시험 샘플에서 효과적이다. 대개의 군에서 처리 1시간 후 호흡 속도에서의 약간의 감소는 투여량 및 이에 따른 동물의 피동성으로 인해 위가 채워지는 것에 기인할 수 있다.
처리군에서 관찰된 무른 간은 감소된 먹이 섭취량에 따른 에너지 물질 대사의 변화에 기인한 것일 수 있고, 이것은 간에서 증가된 지방 물질 대사 및 과부하를 일으킨다. 이것이 또한 이런 경우라면, 이들 변화는 가능하게는 정상 상태에 도달된 후 또는 시험 샘플의 투여 중지 후 시간에 따라 회복될 수 있는 일시적인 것으로 간주될 수 있다. 간에 대한 가능한 영향에 대해서는 또한 추가의 조사를 필요로 한다.
이 연구가 주로 스크리닝 시험으로서 의도되기 때문에, 작은 시험 동물군이 사용된다. 특히 개별적인 동물이 전체적으로 상이하게 반응하는 경우에는 자료의 통계적인 해석이 어렵다. 그러나, 이러한 자료는 시험 샘플이 시험된 최저 투여량(6.25 mg/kg)에서도 식욕 억제 작용을 갖는다는 것을 보여준다. 호흡 억제 의 임상 신호는 시험된 투여량에서 전혀 일어나지 않았다.
실시예 43
야생의 또는 경작 프로그램을 통해 제공된 수확된 후디아 식물을 우선 최대 48시간동안 4℃에서 저장한다. 식물을 수돗물로 세척하고, 이후 ±1 cm으로 잘라낸다. 잘라진 조각을 모두 혼합하고, 이어서 유압 프레스에서 가압당 최소 0.5시간동안 300바의 압력으로 가압한다. 가압하는 동안 식물의 수액을 따로 수거한다. 수액을 추가의 가공이 요구될 때까지 -18℃에서 저장한다.
수액을 적합한 조건하에서 분무 건조시켜 자유-유동 분말을 수득한다. 분말 중의 수분 함량은 바람직하게는 분무 건조 후 5 % 미만이고, 필요하다면 진공 오븐에서 또는 유동층 건조기를 사용하여 추가로 건조시킨다.
수액 및 분무 건조된 물질은 둘다 래트에서의 생물학적 검정에서 식욕 억제제로서 효과적인 것으로 나타난다.
실험
50 kg의 후디아 고도니 식물을 수돗물로 세척한 후, 1 cm의 조각으로 잘라낸다. 이어서, 잘라진 식물을 배치당 최소 0.5시간동안 300바의 압력에서 유압 프레스를 통해 가압한다. 야생의 후디아 고도니 식물이 사용될 때 수거된 수액의 중량은 10 kg이고, 경작 프로그램으로부터의 후디아 고도니 식물이 사용될 때 수거된 수액의 중량은 20 kg으로 확인된다. 수액(500 g)을 다음의 조건을 사용하여 분무 건조시킨다:
유속: 2.85 ml/분
유입구 온도: 110℃
배출구 온도: 70℃
챔버 온도: 78℃
수득된 분무 건조된 분말은 수분 함량이 6.9 %인 자유-유동 분말(22 g)이다.
분무 건조된 분말은 HPLC 기법을 사용하여 활성 성분 농도에 대해 분석된다. 활성 물질의 농도는 분무 건조된 분말의 13 g/kg으로 측정된다.
HPLC 분석 방법
용출액: 아세토니트릴:물(7:3), 균일
컬럼: 역상 C-18
UV 흡수: 225 nm
유속: 1 ml/분
주입 부피: 10 μl
방법
분무 건조된 분말(10 mg)을 물(0.5 ml) 및 아세토니트릴(0.5 ml)에 용해시킨다. 10 μl의 이 용액을 HPLC로 주입하고, 화학식 1의 활성 화합물의 농도를 순수한 화학식 1의 화합물로부터 제조된 표준 곡선을 사용하여 측정한다.
실시예 44
래트에서 화학식 1의 화합물의 가능한 식욕 감퇴 효과를 평가하기 위해 고안된 연구의 결과를 하기에 나타낸다. 다음에서, 시험된 샘플은 순수한 수액(샘플 1), 분무 건조된 수액(샘플 2) 및 활성 잔기(샘플 3)이다. 샘플 1 및 2는 각각 상기 실시예 43에서 기술한 바와 같은, 수액 및 분무 건조된 수액이다. 샘플 3은 95 % 이상의 순도의 용매 추출된 화학식 1의 화합물이다.
샘플 1 내지 3을 각각 수컷 위스타(Wistar) 래트에 단일 경구 투여로서 투여한다. 2개의 추가의 대조군은 비히클(증류수 또는 DMSO)을 투여받는다. 경구 투여된 펜플루르아민(7.5 mg/kg)을 참고 기준으로서 포함한다.
경구 투여된 샘플 1(순수한 수액)은 비히클 처리된 대조군과 비교시 1600 mg/kg 이상의 투여량에서 통계적으로 유의성있는 먹이 소비량의 투여량 의존성 감소 효과를 나타낸다. 체중(또는 성장 속도)의 부수적인 감소도 또한 기록된다. 투여일에는, 통계적으로 유의성있는 물 소비량의 증가가 투여후 3시간(6400 및 10000 mg/kg) 및 투여후 6시간(10000 mg/kg)에서 기록된다. 투여후 24 내지 48시간에서는, 물 소비량의 통계적으로 유의성있는 감소가 3200 mg/kg 이상의 투여량에서 기록된다.
76 mg/kg으로 경구 투여된 샘플 2(분무 건조된 수액)는 또한 비히클 처리된 동물과 비교시 먹이 소비량 및 체중이 통계적으로 유의성있게 감소했음을 보여준다. 물 소비량에 대한 통계적으로 유의성있는 효과는 기록되지 않는다.
샘플 3(활성 잔기)은 5.0 mg/kg의 경구 투여량에서 통계적으로 유의성있는 먹이 소비량의 감소를 나타낸다. 비히클 처리된 대조 동물과 비교시 자료의 조사로부터 성장에서 약간의 지연을 보이지만 체중에 대한 통계적으로 유의성있는 효과는 활성 잔기에 의해서는 나타나지 않는다. 물 소비량에 대한 통계적으로 유의성있는 효과도 또한 기록되지 않는다.
참고 기준, 펜플루르아민(7.5 mg/kg)은 관련된 비히클 처리된 대조군과 비교시 투여후 6 및 24시간에서 통계적으로 유의성있는 먹이 소비량의 감소를 나타낸다. 물 소비량 또는 체중에 대한 통계적으로 유의성있는 효과는 기록되지 않는다.
간에 대한 처리 관련된 효과는 기록되지 않는다.
시험 물질
샘플 샘플 1 (순수한 수액) 샘플 2 (분무 건조된 수액) 샘플 3 (활성 잔기)
외형 갈색 액체 분말 백색 분말
저장 조건 암실에서 -20℃ 암실에서 실온 암실에서 4℃
순도 순수한 수액 순수한 분무 건조된 수액 95 % 이상
비히클 증류수 증류수 디메틸설폭사이드 (DMSO)

실험 과정
55마리의 수컷 위스타 래트를 연구용으로 사용한다.
체중, 먹이 소비량(먹이 투입기 중량) 및 물 소비량(병 중량)은 연구가 종료될 때까지 도착일로부터 매일 동일한 시간에 기록된다.
1일에서, 래트는 다음의 표에 따라 단일 경구 (위관 영양) 투여량을 받는다:
군 n 경구 처리 투여량(mg/kg)
1 5 비히클(증류수) -
2 4 샘플 1(순수한 수액) 800
3 5 샘플 1(순수한 수액) 1600
4 5 샘플 1(순수한 수액) 3200
5 5 샘플 1(순수한 수액) 6400
6 5 샘플 1(순수한 수액) 10000
7 5 샘플 2(분무 건조된 수액) 38
8 5 샘플 2(분무 건조된 수액) 76
9 5 샘플 3(활성 잔기) 2.5
10 5 샘플 3(활성 잔기) 5.0
11 3 펜플루르아민 7.5
12 3 비히클(DMSO) -
군 1 내지 8을 10 ml/kg의 일정한 투여량으로 투여하고, 군 9 내지 12를 1 ml/kg의 투여량으로 투여한다.
먹이 및 물 소비량을 또한 투여 첫날 1, 3 및 6시간에서 측정한다.
8일의 측정 후, 동물을 이산화 탄소 질식에 의해 사망시키고, 간을 잘라내고, 조직 연구 전에 10 %의 완충 포르말린에 넣는다.
각각의 간의 파라핀 왁스 단편을 4 내지 5 μm로 취하고, 하에마톡실린 및 에오신으로 염색한다. 추가의 단편을 12 μm로 저온 유지 장치에서 절단하고, 오일 레드 O(ORO)로 지방에 대해 염색한다.
자료 분석
P57 처리된 동물에 대한 각 시점에서의 투여후 먹이 및 물 소비량 측정값 및 체중을 대조군과의 비교를 위해 윌리암스 시험(Williams' test)에 따른 변량 분석을 사용하여 유사하게 처리된 관련 비히클 대조군에 대한 것과 비교한다.
펜플루르아민 처리된 동물에 대한 자료는 스튜던트 t 시험(Student's t test)을 사용하여 비히클 처리된 대조군에 대한 것과 비교된다.
결과
결과는 표에 요약된다.
경구 투여된 샘플 1(순수한 수액)은 일일 먹이 소비량에 대해 분명한 투여량 관련된 감소를 나타낸다. 먹이 소비량의 이들 감소의 기간 및 크기는 투여량 의존성이다. 투여후 24시간에서, 샘플 1(순수한 수액)은 비히클 처리된 대조군과 비교시 1600 mg/kg 이상의 투여량에서 통계적으로 유의성있는 먹이 소비량의 감소를 나타낸다. 최고 투여량의 샘플 1(수액)은 투여후 5일까지도 일일 기준으로 먹이 소비량에 대해 통계적으로 유의성있는 감소를 나타낸다.
샘플 2(분무 건조된 수액) 및 샘플 3(활성 잔기)는 각각 76 및 5.0 mg/kg의 경구 투여량에서 먹이 소비량에 대해 분명한 통계적으로 유의성있는 감소를 나타낸다. 두 경우 모두에서, 효과는 투여후 48시간동안 지속된다.
참고 기준, 펜플루르아민(7.5 mg/kg, 경구)은 비히클 처리된 관련 대조군(군 12)과 비교시 투여후 6 및 24시간에서 먹이 소비량에 대해 통계적으로 유의성있는 감소를 나타낸다.
샘플 2(분무 건조된 수액) 및 샘플 3(활성 잔기)은 물 소비량에 대해 분명한 투여량 관련된 효과를 나타내지 않는다. 투여일에, 순수한 수액은 투여후 3시간(6400 및 10000 mg/kg) 및 투여후 6시간(10000 mg/kg)에서 물 소비량에 대해 통계적으로 유의성있는 증가를 나타낸다. 그러나, 투여후 2일에는, 물 소비량에 대해 통계적으로 유의성있는 감소가 3200, 6400 및 10000 mg/kg으로 샘플 1(수액)을 투여받은 동물에서 기록된다. 그러나, 이들 감소는 명확하게 투여량 관련된 것은 아니고, 단지 투여후 1 내지 2일에서 일어난다. 따라서, 이들 효과의 생물학적 유의성은 명확하지 않다.
샘플 1(순수한 수액)은 비히클 처리된 대조군(군 1)과 비교시 체중에 대한 투여량 관련된, 통계적으로 유의성있는 효과를 나타낸다. 3200 mg/kg 이상의 투여량으로 경구 투여될 때, 샘플 1(순수한 수액)은 비히클 처리된 동물과 비교시 체중에 대해 통계적으로 유의성있는 감소 또는 감소된 성장 속도를 나타낸다. 이들 효과는 투여후 48시간으로부터 연구가 종료될 때까지 통계적으로 유의성이 있다.
76 mg/kg으로 경구 투여된 샘플 2(분무 건조된 수액)는 또한 비히클 처리된 대조군(군 1)과 비교시 동물의 성장에 대해 통계적으로 유의성있는 감소를 나타낸다. 이들 효과는 3일(투여후 48시간) 내지 5일 사이에서 통계적으로 유의성이 있다.
샘플 3(활성 잔기)이 관련된 비히클 처리된 대조군(군 12)과 비교시 최고 투여량(5.0 mg/kg)에서 동물의 성장을 지연시키는 것으로 보이지만, 이 효과는 통계적으로 유의성을 갖지 않는다.
펜플루르아민(7.5 mg/kg)은 비히클 처리된 대조군(군 12)과 비교시 물 소비량 또는 체중에 대해 분명한 또는 통계적으로 유의성있는 효과를 나타내지 않는다.
간에 대한 처리 관련된 효과는 기록되지 않는다.
Figure 112003013297593-pct00245
Figure 112003013297593-pct00246
Figure 112003013297593-pct00247
Figure 112003013297593-pct00248
Figure 112003013297593-pct00249
Figure 112003013297593-pct00250
조직병리 보고
조직 조사는 간으로 제한된다. 처리 관련된 변화는 샘플 1(액체), 샘플 2( 분무건조된 수액), 샘플 3(활성 잔기), 펜플루르아민 또는 DMSO 대조군에 대해 검출되지 않는다.
기록된 조사 결과는 대조군 및 처리군에서 동일하게 일어난다.
Figure 111999013049445-pct00197
Figure 111999013049445-pct00096
실시예 45
실시예 44에서 기술한 바와 동일한 시험 샘플을 사용하는 추가의 생물학적 검정을 하기에 기술한다. 이 연구에서 동물은 제한된 식사, 즉 동물은 단지 매일 12:00 내지 오후 3:00 사이에만 먹이를 공급받는다. 이것은 먹이가 래트에게 자유롭게 이용될 수 있었던 지금까지 수행된 모든 기타 생물학적 검정과는 다르다. 동물을 7일의 기간(-7 내지 -1일)동안 순응화시키고, 경구 위관 영양법에 의해 0일 내지 6일 오전 9:00에 투여한다. 회복 기간은 7일 내지 13일이다. 투여량군은 하기 표 5에 기술된다. 실제 대조군은 군 9로 표시된다는 것에 주의해야 한다. 군 5는 군 4와 동일한 식사를 받는 대조군이다. 이 군의 목적은 제한된 식사가 동물의 간에 미치는 영향을 평가하는 것이다.
결과
이 연구동안 생긴 결과는 순응화 기간이 너무 짧다는 것을 나타낸다. 래트는 주로 밤에 먹이를 먹고, 낮의 3시간동안의 먹이에 대해 제한된 접근에 대한 갑작스런 변화는 낮은 일일 섭취량을 일으킨다. 먹이의 일일 섭취량은 시험 항목의 투여가 개시되는 순응화 기간의 말기에서 대개의 군에서 여전히 증가한다. 이 결과로서, 시험 물질의 영향은 투여 기간동안 래트의 먹이 섭취량에 유의성있는 영향을 미치지 않음을 알 수 있다.
-7일 내지 -1일 및 0일 내지 6일동안의 상이한 군에 대한 평균 체중을 표 6a 내지 6c에 나타낸다. 수액 및 분무 건조된 수액의 상이한 투여량의 영향을 0일 내지 7일의 체중의 변화율(%)(도 5) 및 -7 내지 7일의 체중 변화율(%)(도 6)로서 첨부된 그래프에 나타낸다. 체중의 감소는 특히 투여량이 많아지면 명백하게 투여량과 관련된다.
간의 조직병리 조사는 시험 항목의 샘플을 투여받은 군에서 유의성있는 병리 상태가 전혀 나타나지 않음을 보여준다.
먹이
먹이 소비량을 순응화 및 연구하는 동안 매일 측정한다. 먹이는 매일 3시간(12:00에 시작하여 15:00에 종료됨)의 공급 시간동안 이용가능하다. 나머지 시간동안 동물을 금식시킨다. 군 5의 동물은 군 4의 0일째의 평균 먹이 소비량과 동일한 측정량의 먹이를 1일째에 받는다. 시험 이전의 날로부터 군 4의 평균 먹이 소비량에 대해 측정된, 군 5에 대한 이 제어된 먹이 공급 패턴은 1 내지 7일동안 이어진다.
물
물을 기준 용기에 넣는다. 물(마갈리스(Magalies) 수도국 수돗물, 사람이 마시기에 적합함)은 임의로 이용가능하다. 물 소비량은 먹이 소비량을 측정한 후 매일 동일한 시간에 매일 1번 측정된다.
순응화
동물을 연구를 시작하기 전에 7일동안 순응화시키고, 이동안 먹이 및 물 소비량을 상기 기술한 바와 같이 측정한다. 체중을 이 기간동안 일일 기준으로 측정한다.
연구 디자인 및 과정
연구 디자인
군 시험 동물 번호 투여량 시험 항목
1 6♂ 1-6 100 mg/kg 냉동 수액
2 6♂ 7-12 400 mg/kg 냉동 수액
3 6♂ 13-18 1600 mg/kg 냉동 수액
4 6♂ 19-24 3200 mg/kg 냉동 수액
5 6♂ 25-30 대조 엘가 옵션(Elga Option) 4 정제수
6 6♂ 31-36 2.2 mg/kg 분무 건조된 수액
7 6♂ 37-42 8.8 mg/kg 분무 건조된 수액
8 6♂ 43-48 35 mg/kg 분무 건조된 수액
9 6♂ 49-54 대조 엘가 옵션 4 정제수
투여 경로
시험 항목을 위내 바늘을 사용하여 7일동안 일일 기준으로 투여한다. 동물을 항목 투여(9:00에 시작) 전에 18시간동안 금식시킨다.
처리 기간
동물을 연속 7일(0일 내지 6일)동안 처리한다. 각 군의 3마리의 동물을 최후 투여 후 24시간(7일)에 사망시킨다. 잔여 3마리의 동물을 최후 처리후 7일(13일)에 사망시킨다. 군 5에서 3마리의 동물을 최후 제어된 먹이 공급후 24시간(8일)에 사망시키고, 잔여 3마리의 동물을 최후 처리후 7일(13일)에 사망시키는 것을 제외하고는, 모든 군은 이 과정을 따른다.
체중
체중을 순응화 기간을 포함하여 연구 기간동안 매일 거의 동일한 시간에 측정한다.
안락사
각 군의 3마리의 동물을 최후 투여 후 24시간(7일)에 사망시킨다.
잔여 3마리의 동물을 최후 처리후 7일에 사망시킨다. 군 5에서 3마리의 동물을 최후 제어된 먹이 공급후 24시간(8일)에 사망시키고, 잔여 3마리의 동물을 최후 처리 후 7일(13일)에 사망시키는 것을 제외하고는, 모든 군은 이 과정을 따른다. 동물을 CO2 기체로 연구 기간의 말기에 안락사시킨다.
검안경 조사
검안경을 사용하는 검안경 조사는 시험 항목의 제 1 투여 전 및 종료시 모든 군의 모든 동물에서 수행된다.
거시 병리
전체 사후 조사는 연구 기간의 말기에 안락사시킨 모든 동물에서 수행된다.
조직병리
조직병리 조사는 각 동물의 간에서 수행된다.
Figure 111999013049445-pct00188

Figure 111999013049445-pct00098
Figure 111999013049445-pct00099
Figure 111999013049445-pct00100
Figure 111999013049445-pct00101
Figure 112003013297593-pct00251
Figure 111999013049445-pct00199
상기 언급한 화학물질의 경구 투여에 기인할 수 있는 특정한 손상은 분무 건조된 수액 뿐만 아니라 냉동 수액을 받은 실험 래트로부터의 간 단편에서 기록되지 않는다. 대조 및 실험 래트에서 모두 기록된 수증성 세포 팽윤은 일반 물질대사 세포 팽윤 및 산소 결핍성 변화를 나타낼 수 있다. 림프구성 혈관주위 수구양연형성의 최소 병소는 몇몇 동물에서 발견되고, 가장 일어나기 쉬운 흔한 관찰이다. 몇몇 래트에서, 가벼운 정도의 충혈은 간 동양혈관에서 존재하고, 흔한 관찰로서 간주되어야 한다.
이 연구의 결과에 의해 나타난 본 발명의 중요한 특징은 샘플에 대한 내성이 시험 기간동안 전혀 발생하지 않는다는 것이다. 이것은 특히 비만 치료에서 본 발명의 화합물 및 조성물의 용도에 관련하여 상당한 잇점을 제공할 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물이 주로 식욕 억제제로서 이들의 특성에 관련하여 기술되었지만, "식욕 억제제"란 표현은 식욕을 제한하고/하거나 포만감을 증가시키는 경향이 있고 따라서 총 칼로리 섭취량을 감소시키는 경향이 있는 활성을 나타내는데 본원에 사용되고, 따라서 이것은 비만을 방지하는 경향이 있다는 것에 주의해야 한다. 따라서, 본 발명은 비만 치료량, 예방량 또는 대항량의 화학식 2의 화합물을 인간 또는 비인간 동물에게 투여함을 포함하는, 인간 또는 비인간에서 비만을 치료, 예방 또는 대항하는 방법으로 확장된다. 본 발명의 이 양태의 바람직한 실시양태는 화학식 1의 화합물의 화합물을 함유하는 조성물 또는 추출물을 사용한다.
본원에 사용되는 "동물"이란 용어는 같이 사는 동물, 예를 들면 집안 애완동 물 및 길들인 동물로 연장되나 이에 제한되지 않고; 이런 동물의 비제한적인 예는 소, 양, 흰족제비, 돼지, 낙타, 말, 가금, 물고기, 토끼, 염소, 개 및 고양이를 포함한다.
식욕감퇴제로서 또는 인간에서 비만 치료 또는 예방에서, 화학식 2의 화합물, 바람직하게는 화학식 1의 화합물 또는 이후 제 9 항 및 제 25 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에서 정의되는 조성물은 유리하게는 약 0.01 mg/kg/일 내지 약 10 mg/kg/일의 투여량으로 인간에게 투여된다. 바람직한 투여량의 범위는 0.05 mg/kg/일 내지 0.5 mg/kg/일이다. 본 발명의 추출물의 분무 건조된 형태를 사용하면, 바람직한 투여량 범위는 0.1 mg/kg/일 내지 20 mg/kg/일이고; 0.5 mg/kg/일 내지 5 mg/kg/일이 특히 바람직하다.

Claims (182)

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  122. 트리코카울론 필리페룸(Trichocaulon piliferum), 트리코카울론 오피시날레(Trichocaulon officinale), 후디아 쿠로리(Hoodia currorii), 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 및 후디아 루가디(Hoodia lugardii)로 구성된 군에서 선택된 종의 식물로부터 수득된 추출물을 포함하며, 상기 추출물이 상기 식물로부터 수득된 하기 화학식 1의 식욕 억제 스테로이드성 글리코사이드를 함유하는, 인간 또는 동물에서 식욕을 억제하거나 또는 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물:
    화학식 1
    Figure 112008063226562-pct00254
    상기 식에서, Me는 메틸이다.
  123. 제 122 항에 있어서,
    인간 또는 동물에서 식욕을 억제하기 위한 약학 조성물.
  124. 삭제
  125. 제 122 항에 있어서,
    추출물이
    식물을 용매로 처리하여 식욕 억제 활성을 갖는 분획을 추출하는 단계,
    식물의 나머지로부터 추출 용액을 분리하는 단계,
    추출 용액으로부터 용매를 제거하는 단계 및
    추출물을 회수하는 단계
    를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  126. 제 122 항에 있어서,
    추출물이
    식물을 가압하여 고체 식물로부터 수액을 분리하는 단계 및
    고체 식물이 없는 수액을 회수하여 추출물을 형성하는 단계
    를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  127. 제 125 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 용매로 추가로 추출하여 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  128. 제 125 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 크로마토그래피 분리로 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  129. 제 128 항에 있어서,
    컬럼상에서 크로마토그래피 분리를 수행하고,
    컬럼으로부터 분획중의 용출물을 수거하고,
    분획을 평가하여 분획의 식욕 억제 활성을 측정하고,
    식욕 억제 활성을 갖는 1개 이상의 분획을 선택하는 단계
    를 수행함을 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  130. 삭제
  131. 삭제
  132. 하기 화학식 1의 화합물:
    화학식 1
    Figure 112008015361446-pct00255
    상기 식에서, Me는 메틸이다.
  133. 삭제
  134. 삭제
  135. 삭제
  136. 삭제
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  138. 삭제
  139. 삭제
  140. 삭제
  141. 삭제
  142. 삭제
  143. 삭제
  144. 삭제
  145. 삭제
  146. 삭제
  147. 삭제
  148. 삭제
  149. 하기 단계를 포함하는, 모노사카라이드 시마로스 잔기를 모노사카라이드 테베토스 잔기에 커플링시키고 생성된 디사카라이드를 하기 화학식 52의 화합물에 커플링시켜 제 132 항의 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법:
    (i) 하기 화학식 40의 선택적으로 보호된 시마로스 잔기 및 하기 화학식 50A의 모노사카라이드 테베토스 잔기를 염화 주석(SnCl2) 및 은 트리플루오로메탄설포네이트를 사용하여 커플링시켜 하기 화학식 53의 화합물을 제조하는 단계,
    (ii) 화학식 53의 화합물을 불화 테트라부틸암모늄으로 처리하여 하기 화학식 54의 화합물을 제조하는 단계,
    (iii) 화학식 54의 화합물을 삼불화 디에틸아미노황으로 처리하여 하기 화학식 55의 화합물을 제조하는 단계,
    (iv) 화학식 55의 화합물을 화학식 52의 화합물과 반응시켜 하기 화학식 56의 화합물을 제조하는 단계, 및
    (v) 화학식 56의 화합물을 라니-니켈(Raney-Nickel) 반응 및 이어서 염기로 처리하여 상기 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계:
    화학식 40
    Figure 112008015361446-pct00256
    화학식 50A
    Figure 112008015361446-pct00257
    화학식 52
    Figure 112008015361446-pct00258
    화학식 53
    Figure 112008015361446-pct00259
    화학식 54
    Figure 112008015361446-pct00260
    화학식 55
    Figure 112008015361446-pct00261
    화학식 56
    Figure 112008015361446-pct00262
    상기 식들에서,
    Me는 메틸이고;
    Ph는 페닐이고;
    Pv는 피발로일이고;
    Z는 t-부틸디메틸실릴(TBDMS)이다.
  150. 하기 단계를 포함하는, 트리사카라이드를 형성하고 생성된 트리사카라이드를 스테로이드 중간체에 커플링시켜 제 132 항의 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법:
    (i) 제 149 항의 화학식 40의 선택적으로 보호된 시마로스 잔기 및 제 149 항의 화학식 55의 화합물을 염화 주석(II), AgOTf 및 Cp2ZrCl2를 사용하여 커플링시켜 하기 화학식 57의 화합물을 제조하는 단계,
    (ii) 화학식 57의 화합물을 불화 테트라부틸암모늄 및 삼불화 디에틸아미노황으로 처리하여 하기 화학식 58의 트리사카라이드 화합물을 제조하는 단계, 및
    (iii) 화학식 58의 트리사카라이드를 염화 주석(II), AgOTf 및 Cp2ZrCl2를 사용하여 하기 화학식 59의 스테로이드 중간체와 커플링시켜 상기 화학식 1의 화합물을 제조하는 단계:
    화학식 57
    Figure 112008015361446-pct00263
    화학식 58
    Figure 112008015361446-pct00264
    화학식 59
    Figure 112008015361446-pct00265
    상기 식들에서,
    Me는 메틸이고;
    Ph는 페닐이고;
    Pv는 피발로일이고;
    Z는 t-부틸디메틸실릴(TBDMS)이다.
  151. 제 125 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  152. 제 122 항에 있어서,
    단위 투여 형태인 약학 조성물.
  153. 삭제
  154. 삭제
  155. 삭제
  156. 트리코카울론 필리페룸(Trichocaulon piliferum), 트리코카울론 오피시날레(Trichocaulon officinale), 후디아 쿠로리(Hoodia currorii), 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 및 후디아 루가디(Hoodia lugardii)로 구성된 군에서 선택된 종의 식물로부터 수득된 추출물을 포함하며, 상기 추출물이 상기 식물로부터 수득된 하기 화학식 1의 식욕 억제 스테로이드성 글리코사이드를 함유하는, 식품:
    화학식 1
    Figure 112008063226562-pct00267
    상기 식에서, Me는 메틸이다.
  157. 삭제
  158. 제 122 항에 있어서,
    인간 또는 동물에서 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물.
  159. 제 127 항에 있어서,
    용매 추출 단계에서의 용매가 염화 메틸렌, 물, 메탄올, 헥산, 에틸 아세테이트 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학 조성물.
  160. 제 128 항에 있어서,
    크로마토그래피 분리가 용출액으로서 클로로포름, 메탄올, 에틸 아세테이트, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상을 사용하는, 약학 조성물.
  161. 제 122 항에 있어서,
    화학식 1의 화합물이 식물로부터 단리 또는 정제되는, 약학 조성물.
  162. 제 122 항에 있어서,
    화학식 1의 화합물이 식물로부터 유래된 추출물로부터 단리 또는 정제되는, 약학 조성물.
  163. 제 122 항에 있어서,
    식물이 후디아 쿠로리(Hoodia currorii), 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 및 후디아 루가디(Hoodia lugardii)로 구성된 군에서 선택되는, 약학 조성물.
  164. 제 163 항에 있어서,
    식물이 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 및 후디아 루가디(Hoodia lugardii)로 구성된 군에서 선택되는, 약학 조성물.
  165. 제 164 항에 있어서,
    식물이 후디아 고도니(Hoodia gordonii)인, 약학 조성물.
  166. 삭제
  167. 제 122 항에 있어서,
    트리코카울론 필리페룸(Trichocaulon piliferum), 트리코카울론 오피시날레(Trichocaulon officinale), 후디아 쿠로리(Hoodia currorii), 후디아 고도니(Hoodia gordonii) 및 후디아 루가디(Hoodia lugardii)로 구성된 군에서 선택된 종의 식물로부터 수득된 추출물, 및 약학적 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
  168. 제 156 항에 있어서,
    음료인 식품.
  169. 제 122 항에 있어서,
    인간에서 식욕을 억제하거나 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물.
  170. 제 126 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 용매로 추가로 추출하여 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  171. 제 126 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 크로마토그래피 분리로 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  172. 제 126 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  173. 제 125 항에 있어서,
    용매 추출 단계에서의 용매가 염화 메틸렌, 물, 메탄올, 헥산, 에틸 아세테이트 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학 조성물.
  174. 제 127 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 크로마토그래피 분리로 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  175. 제 170 항에 있어서,
    추출물중의 활성 성분을 크로마토그래피 분리로 농축시키는 단계를 포함하는 방법으로 수득된, 약학 조성물.
  176. 제 127 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  177. 제 128 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  178. 제 170 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  179. 제 171 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  180. 제 174 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  181. 제 175 항에 있어서,
    방법중에 추출물을 분무 건조, 냉동 건조 또는 진공 건조에 의해 건조시켜 수분을 제거하여 자유 유동 분말을 형성하는, 약학 조성물.
  182. 제 122 항, 제 123 항, 제 125 항 내지 제 129 항, 제 151 항, 제 152 항, 제 158 항 내지 제 165 항, 제 167 항 및 제 169 항 내지 제 181 항중 어느 한 항의 약학 조성물을 인간을 제외한 동물에게 투여함을 포함하는, 인간을 제외한 동물에서 비만의 제거, 치료 또는 예방 방법.
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