JP7254727B2 - ハーブ組成物 - Google Patents
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Description
本発明はハーブ組成物に関し、特に、2型糖尿病、肥満および脂質プロフィール管理などのメタボリックシンドロームに関連する疾患を管理するためのハーブ組成物、ならびにそのようなハーブ組成物の調製方法に関する。本発明はさらに、メタボリックシンドロームに関連する疾患の管理のための食品サプリメント、医薬品および栄養補助食品の調製におけるハーブ組成物の使用に関する。また、メタボリックシンドロームに関連する疾患の治療のためのハーブ組成物の使用も提供される。また、メタボリックシンドロームに関連する疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の本発明のハーブ組成物を投与することを含む方法も提供される。
代謝病は、食物を細胞レベルでエネルギーに変換するプロセスである正常な代謝を妨害する疾患である。代謝病は、細胞が、重要な生化学的処理を行い、我々が消費する食品に含まれるタンパク質、炭水化物および脂質を輸送する能力に影響を及ぼす。脳卒中、高血圧、高脂血症、高血糖などの心疾患のリスクを増加させる因子の組み合わせは、代謝異常症候群と呼ばれる。
本発明は一般に、メタボリックシンドロームに関連する疾患の管理に有効なハーブ組成物に関する。より詳細には、本発明はハーブ組成物に関し、2型糖尿病、肥満および脂質管理などのメタボリックシンドロームに関連する疾患の管理に有効なハーブ組成物、ならびにそのようなハーブ組成物の調製方法に関する。本発明はさらに、メタボリックシンドロームに関連する疾患の管理のための食品サプリメント、医薬品および栄養補助食品の調製におけるハーブ組成物の使用に関する。また、メタボリックシンドロームに関連する疾患の治療のためのハーブ組成物の使用も提供される。また、メタボリックシンドロームに関連する疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の本発明のハーブ組成物を投与することを含む方法も提供される。
a)第1のハーブブレンド抽出物と、
b)第2のハーブブレンド抽出物とを含む、
ハーブ組成物であって、
前記第1のハーブブレンド抽出物が、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、シジギウム・クミニから選択される少なくとも4つのハーブまたはそれらの組み合わせを含む第1のハーブブレンドから得られ、前記第2のハーブブレンド抽出物が、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを含む第2のハーブブレンドから得られ、前記第1のハーブブレンド抽出物と前記第2のハーブブレンド抽出物の比率が1:1である、ハーブ組成物が提供される。
a)ハーブを選択して、使用する原料ハーブの特定の植物部分を選択する工程と、
b)第1のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第1のハーブブレンドを調製する工程と、
c)第2のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第2のハーブブレンドを調製する工程と、
d)前記第1のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第1のハーブ抽出物を得る工程と、
e)前記第2のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第2のハーブ抽出物を得る工程と、
f)工程d)および工程e)で得られた前記第1のハーブ抽出物と前記第2のハーブ抽出物とを所定の比率で混合して、抽出物混合物を得る工程と、
g)工程f)の抽出物混合物を濃縮および/または乾燥などのさらなる処理に供してハーブ組成物を得る工程、とを含み、
前記第1のハーブブレンドは、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、シジギウム・クミニから選択される少なくとも4つのハーブまたはそれらの組み合わせを含み、前記第2のハーブブレンドは、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを含み、前記第1のハーブブレンド抽出物と前記第2のハーブブレンド抽出物との比率は、1:1である。
本発明は以下の図面に関して説明することができる。
以下に、本発明のいくつかの代表的な実施形態について説明する。本発明は、その広範な態様において、具体的な詳細および代表的な方法に限定されない。それどころか、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の思想および範囲内に含まれ得る代替例、変形例、および均等物を包含することが意図される。例示的な実施例は、提供される実施形態および方法に関連して、このセクションで説明される。その様々な態様による本発明は、本明細書を考慮して読まれる添付の特許請求の範囲において特に指摘され、明確に特許請求される。
クルクマ・ロンガ(Curcuma longa)
ターメリックとして一般に知られるクルクマ・ロンガは、ショウガ(Zingiberaceae)科に属する。その根茎の使用は、その薬理作用のために周知である。根茎は、いくつかのアーユルヴェーダ調製物において広く使用されている。クルクミンは、クルクマ・ロンガに存在する主な活性成分の1つである。クルクミンは最も研究された活性成分であり、0.3~5.4パーセントの生ターメリックを含む(Leung A, 1980)。クルクミンは、疼痛および炎症、関節炎(Funk, J.L. et al., 2009)、創傷治癒(Phan, T.T. et al., 2001)、心血管疾患、糖尿病、多発性硬化症、白内障、アルツハイマー病、胆石、炎症性腸症候群、抗酸化剤、抗菌剤などの多様な薬理学的活性で知られている。ハーブは東南アジア原産であり、インドとパキスタンに広く分布している。
エンブリカ・オフィシナリス(Emblica officinalis)は、アムラまたはインディアングーズベリーとしても知られ、コミカンソウ(Phyllanthaceae)科に属する落葉樹である。アーユルヴェーダ組成物におけるその薬理作用のためのその果皮の使用は周知である。伝統的なインド医学では、乾燥した新鮮な果実の外皮が一般に使用される。これは、寿命を促進するためのラサヤナ(Rasayana)薬(若返り薬(rejuvenative))として使用され、消化を促進し、便秘を治療し、発熱を軽減し、血液を浄化し、咳を軽減し、喘息を軽減し、心臓を強化し、眼に効果があり、発毛を刺激し、身体を生き生きとさせ、知性を高めるために伝統的に使用される。種々の研究により、アムラの果実が抗酸化作用(Bhattacharya, A.et al., 1999)、肝臓保護作用(jeena, K.J. et al., 1999)、コレステロール低下作用(Mishra, M. et al., 1981)および抗炎作用(Asmawi, M.Z. et al., 1993)を有することが示されている。インドで広く見られる。
ムラサキムカシヨモギまたはカリジェリ(Kaalijeeri)としても知られるベルノニア・アンテリミンティカは、キク(Asteraceae)科に属する。ハーブ製剤における果実の使用は周知である。果実は、苦味とえぐみがあり、産熱性、駆虫性、収斂性、抗炎症性、鎮痛性、去痰性、浄化性、解乳性、瀉下性、利尿性、健胃性、解熱性、催乳性および強直性がある。それらは、炎症、しゃっくり、咳、喘息、ハンセン病、皮膚病、掻痒、白皮症、消化不良、結腸、有痛性排尿困難、発熱、眼症、悪い状態のヴァータ(vata)に有用であり、そして回虫および糸状虫に対して非常に特異的である。ベルノニア・アンテリミンティカは、糖尿病を制御するために使用される(Rao, U.M. et al., 2010)。インドで広くみられる。
ガドゥーチ(Guduchi)またはギロヤ(Giloya)として一般に知られるティノスポラ・コルディフォリアは、ツヅラフジ(Menispermaceae)科に属するつる性の草本類である。この植物は、アーユルヴェーダの「ラサヤナ(Rasayanas)」において、感染に対する免疫系および体の耐性を改善するために使用される。葉および茎を含むこの植物の様々な部分の抽出物は、種々の伝統的な医薬製剤において使用される。茎は苦味があり、収斂性、産熱性、鎮痛性、駆虫性、変色性、周期的発作予防性、鎮痙性、抗炎症性、解熱性、鎮吐性、消化性、駆風性、食欲増進、健胃性、止瀉性、強心性、浄化性、造血性、去痰性、催淫性、若返り、ガラクトピュリフィアー作用(galactopurifier)、強直性がある。ティノスポラ・コルディフォリアは、糖尿病治療のために、アーユルヴェーダ医学において広く使用されている(Stanely, M. et al., 2001; Prince, P.S. and Menon, V.P., 1999; Matthew, S. and Kuttan, G. 1999)。これは、悪い状態のヴァータ(vata)、熱灼感、高度口渇症、蠕虫症、消化不良、鼓腸、胃痛、間欠的な発熱、慢性発熱、炎症、痛風、嘔吐、心臓衰弱、皮膚病、ハンセン病、丹毒、貧血、咳、喘息、全身衰弱、黄疸、精巣衰弱、尿路障害および脾障害において有用である。インド、ミャンマー、スリランカで広く見られる。
フェヌグリークとして一般に知られるトリゴネラ・フォエナム・グラカム(Trigonella foenum-graecum)は、マメ(Fabaceae)科に属する。この植物の葉および種子は、医薬的価値が高いことが知られている。葉は解熱性があり、緩下剤であり、悪い状態のピータ(pitta)のために内服用として与えられる。葉の湿布剤を、腫脹および火傷のために貼る。フェヌグリークの種子には、このハーブの最も重要な成分である食物繊維が豊富に含まれている。フェヌグリークは、可溶性繊維および不溶性繊維が豊富であることから、メタボリックシンドロームの制御に重要な役割を果たしている。フェヌグリークの種子は、苦味があり、粘液性、芳香性、駆風性、強直性、産熱性、催乳性、収斂性、皮膚軟化性、催淫性がある。これらは、発熱、嘔吐、食欲不振、咳、気管支炎および結腸炎の治療に有用である。粉末種子は、獣医学に適用される。種子の水性抽出物は、抗菌特性を有する。ヒトにおいて、フェヌグリーク種子は膵臓β細胞からのグルコース依存性インスリン分泌を刺激する(Ajabnoor, M.A. and Tilmisany, A.K. 1988)とともに、炭水化物代謝に関与する2つの腸酵素であるα-アミラーゼおよびスクロースの活性を阻害する(Amin, R. et al., 1987)ことによって、血糖低下効果を発揮する。インド、バングラデシュ、ネパールなど世界中に広く分布している。
イクソラ・コッキネア(Ixora coccinea)またはジャングルゼラニウムは開花植物であり、アカネ(Rubiaceae)科に属する。この植物の根、葉および花は薬理作用を有し、そして種々の伝統的な薬学的製剤において使用される。根には、収斂性、えぐみがあり、解熱性、鎮静性、健胃性および消毒性がある。しゃっくり、発熱、淋病、食欲不振、下痢、赤痢、頭痛、ただれ、慢性潰瘍および皮膚病に有用である。葉は下痢に有用である。葉はその抗酸化特性のために心臓保護効果を示す(Firoz, N et al., 2012)。花は、収斂剤として有用であり、苦味があり、駆風性、消化性があり、便秘に有用である。花は抗下痢性である(Yasmeen, M. et al., 2010)。これらは、赤痢、月経困難症、白帯下、喀血、カタル性気管支炎、眼症、ただれおよび潰瘍に有用である。インドとスリランカで広く見られる。
ジャムン(Jamun)として一般に知られるシジギウム・クミニ(Syzygium cumini)は、フトモモ(Myrtaceae)科に属する常緑熱帯樹である。この植物の葉、樹皮、および種子を含む果実は、種々の治療用製剤に使用される。樹皮は、収斂性、刺激性、解熱性、駆風性、利尿性、消化性、駆虫性、解熱性、止瀉性、抗菌性および健胃性がある。これは、糖尿病、白帯下、胃痛、発熱、胃の不調、有痛性排尿困難および皮膚障害の治療に有用である。葉は抗菌性であり、歯および歯肉を強化するために使用される。柔らかい葉は嘔吐の治療に用いられる。果実および種子は甘味、えぐみ、酸味、強直性および清涼味があり、貴重な抗糖尿病栄養素として広く使用されている(Sagrawat, H. et al., 2006)。果実と種子は、下痢、咽頭炎、脾臓障害、尿道漏、白癬にも有用である。インド、バングラデシュ、ネパール、パキスタンの原産である。
a)ハーブを選択して、使用する原料ハーブの特定の植物部分を選択する工程と、
b)第1のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第1のハーブブレンドを調製する工程と、
c)第2のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第2のハーブブレンドを調製する工程と、
d)前記第1のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第1のハーブ抽出物を得る工程と、
e)前記第2のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第2のハーブ抽出物を得る工程と、
f)工程d)および工程e)で得られた前記第1のハーブ抽出物と前記第2のハーブ抽出物とを1:1の比率で混合して、抽出物混合物を得る工程と、
g)工程f)の抽出物混合物を濃縮および/または乾燥などのさらなる処理に供してハーブ組成物を得る工程、とを含み、
前記第1のハーブブレンドは、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、シジギウム・クミニから選択される少なくとも4つのハーブまたはそれらの組み合わせを含み、前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを含む。
実施例1
この実施例では、図1に示されるようなプロセスによって調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表1は、成分およびそれらの量を重量%で示す。
この実施例では、調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表2は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表2aは、分析した乾燥ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
この実施例では、調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:2の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表3は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表3aは、分析した乾燥ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
この実施例では、調製され、ペースト状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、およびイクソラ・コッキネアを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表4は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表4aは、分析した乾燥ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
この実施例では、調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、およびトリゴネラ・フォエナム・グラカムを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表5は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表5aは、分析した乾燥ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
この実施例では、調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、およびティノスポラ・コルディフォリアを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表6は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表6aは、分析した乾燥ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
この実施例では、調製され、ペースト状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、第1のハーブブレンドが、ハーブであるクルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを等量で含み、第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、ハーブ組成物について説明する。表7は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表7aは、ペースト状のハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
実施例1で詳述したハーブ組成物は、以下に記載する方法によって製造することができる。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
第1のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが7.14%、エンブリカ・オフィシナリスが7.14%、ベルノニア・アンテリミンティカが7.14%、ティノスポラ・コルディフォリアが7.14%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが7.14%、イクソラ・コッキネアが7.14%、およびシジギウム・クミニが7.14%であった。
第2のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが12.50%、エンブリカ・オフィシナリスが37.50%であった。
-処理-
第1のハーブブレンドのハーブを粉砕し、ふるい分けした。次いで、第1のハーブブレンドの粉砕ハーブを、水アルコール抽出プロセスを使用して抽出した。ハーブを、溶媒を用いて、還流下または循環下で75℃で2時間抽出する。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第1の抽出溶液(930L~970L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。第2のハーブブレンドのハーブを別々に粉砕し、ふるい分けし、これらの第2のハーブブレンドのハーブを、溶媒を使用して、還流下または循環下で75℃で2時間抽出した。原料ハーブと使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第2の抽出溶液(780L~810L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。次いで、第1の抽出溶液および第2の抽出溶液を等量で混合し、60℃~65℃の温度で蒸留し、さらに、400mmHg~550mmHgの真空下で70℃~75℃の温度で濃縮して、総固形分含有量50%±2%の濃縮抽出混合物を得た。次いで、濃縮された抽出混合物を、セルロース粉末などの適当な希釈剤とブレンドし、次いで、それを、52℃~57℃の温度で2.5時間~3時間、流動乾燥機または箱型乾燥機中でさらに乾燥させて、粉末状のハーブ組成物を得た。次いで、この乾燥したハーブ組成物をさらに粉砕し、40#のふるいにかけ、ブレンダー中でブレンドして、均一な粉末(量75Kg±2Kg)を得た。粉末中に存在する活性物質は53.1%であり、46.9%の希釈剤が完成品中に存在した。
実施例7で詳述したハーブ組成物は、以下に記載する方法によって製造することができる。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
第1のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが7.14%、エンブリカ・オフィシナリスが7.14%、ベルノニア・アンテリミンティカが7.14%、ティノスポラ・コルディフォリアが7.14%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが7.14%、イクソラ・コッキネアが7.14%、およびシジギウム・クミニが7.14%であった。
第2のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが12.50%、エンブリカ・オフィシナリスが37.50%であった。
-処理-
第1のハーブブレンドのハーブを粉砕し、ふるい分けした。次いで、第1のハーブブレンドの粉砕ハーブを、水アルコール抽出プロセスを使用して抽出した。ハーブを、溶媒を用いて、還流下または循環下で75℃で2時間抽出する。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第1の抽出溶液(930L~970L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。第2のハーブブレンドのハーブを別々に粉砕し、ふるい分けし、これらの第2のハーブブレンドのハーブを、溶媒を使用して、還流下または循環下で75℃で2時間抽出した。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第2の抽出溶液(780L~810L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。次いで、第1の抽出溶液および第2の抽出溶液を等量で混合し、60℃~65℃の温度で蒸留し、さらに、400mmHg~550mmHgの真空下で70℃~75℃の温度で濃縮して、総固形分含有量70%±3%の濃縮抽出混合物を得た。次いで、濃縮された抽出混合物を、水および防腐剤などの適当な希釈剤とブレンドして、ペースト状のハーブ組成物を得た。水などの希釈剤を約27%~30%の量で添加し、防腐剤を約0.15%~0.25%の量で添加した。次いで、完成品のおおよその組成を分析した。表9は、ペースト状のハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸およびクルクミノイドの含有量はHPLCによって測定した。
実施例2で詳述したハーブ組成物は、以下に記載する方法によって製造することができる。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
第1のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが7.14%、エンブリカ・オフィシナリスが7.14%、ベルノニア・アンテリミンティカが7.14%、ティノスポラ・コルディフォリアが7.14%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが7.14%、イクソラ・コッキネアが7.14%、およびシジギウム・クミニが7.14%であった。
第2のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが25.0%、エンブリカ・オフィシナリスが25.0%であった。
-処理-
第1のハーブブレンドのハーブを粉砕し、ふるい分けした。次いで、第1のハーブブレンドの粉砕ハーブを、水アルコール抽出プロセスを使用して抽出した。ハーブを、溶媒を用いて、還流下または循環下で75℃で2時間抽出する。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第1の抽出溶液(930L~970L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。第2のハーブブレンドのハーブを別々に粉砕し、ふるい分けし、これらの第2のハーブブレンドのハーブを、溶媒を使用して、還流下または循環下で75℃で2時間抽出した。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第2の抽出溶液(780L~810L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。次いで、第1の抽出溶液および第2の抽出溶液を混合し、60℃~65℃の温度で蒸留し、さらに、400mmHg~550mmHgの真空下で70℃~75℃の温度で濃縮して、総固形分含有量50%±2%の濃縮抽出混合物を得た。次いで、濃縮された抽出混合物を、セルロース粉末などの適当な希釈剤とブレンドし、次いで、それを、52℃~57℃の温度で2.5時間~3時間、流動乾燥機または箱型乾燥機中でさらに乾燥させて、粉末状のハーブ組成物を得た。次いで、この乾燥したハーブ組成物をさらに粉砕し、40#のふるいにかけ、ブレンダー中でブレンドして、均一な粉末(量75Kg±2Kg)を得た。粉末中に存在する活性物質は51.8%であり、48.2%の希釈剤が完成品中に存在した。
実施例3で詳述したハーブ組成物は、以下に記載する方法によって製造することができる。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
第1のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが7.14%、エンブリカ・オフィシナリスが7.14%、ベルノニア・アンテリミンティカが7.14%、ティノスポラ・コルディフォリアが7.14%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが7.14%、イクソラ・コッキネアが7.14%、およびシジギウム・クミニが7.14%であった。
第2のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが16.66%、エンブリカ・オフィシナリスが33.33%であった。
-処理-
第1のハーブブレンドのハーブを粉砕し、ふるい分けした。次いで、第1のハーブブレンドの粉砕ハーブを、水アルコール抽出プロセスを使用して抽出した。ハーブを、溶媒を用いて、還流下または循環下で75℃で2時間抽出する。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第1の抽出溶液(930L~970L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。第2のハーブブレンドのハーブを別々に粉砕し、ふるい分けし、これらの第2のハーブブレンドのハーブを、溶媒を使用して、還流下または循環下で75℃で2時間抽出した。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第2の抽出溶液(780L~810L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。次いで、第1の抽出溶液および第2の抽出溶液を混合し、60℃~65℃の温度で蒸留し、さらに、400mmHg~550mmHgの真空下で70℃~75℃の温度で濃縮して、総固形分含有量50%±2%の濃縮抽出混合物を得た。次いで、濃縮された抽出混合物を、セルロース粉末などの適当な希釈剤とブレンドし、次いで、それを、52℃~57℃の温度で2.5時間~3時間、流動乾燥機または箱型乾燥機中でさらに乾燥させて、粉末状のハーブ組成物を得た。次いで、この乾燥したハーブ組成物をさらに粉砕し、40#のふるいにかけ、ブレンダー中でブレンドして、均一な粉末(量75Kg±2Kg)を得た。粉末中に存在する活性物質は52.2%であり、47.8%の希釈剤が完成品中に存在した。
実施例4で詳述したハーブ組成物は、以下に記載する方法によって製造することができる。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
第1のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが8.33%、エンブリカ・オフィシナリスが8.33%、ベルノニア・アンテリミンティカが8.33%、ティノスポラ・コルディフォリアが8.33%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが8.33%、およびイクソラ・コッキネアが8.33%であった。
第2のハーブブレンドのために選択されたハーブは、クルクマ・ロンガが12.50%、エンブリカ・オフィシナリスが37.50%であった。
-処理-
第1のハーブブレンドのハーブを粉砕し、ふるいにかけた。次いで、第1のハーブブレンドの粉砕ハーブを、水アルコール抽出プロセスを使用して抽出した。ハーブを、溶媒を用いて、還流下または循環下で75℃で2時間抽出する。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第1の抽出溶液(930L~970L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。第2のハーブブレンドのハーブを別々に粉砕し、ふるいにかけ、これらの第2のハーブブレンドのハーブを、溶媒を使用して、還流下または循環下で75℃で2時間抽出した。原料ハーブと抽出に使用する溶媒との比率は1:10である。70:30の比率でアルコールおよび水を含む1000Lの溶媒を水アルコール抽出のために使用した。使用されるアルコールは、メチルアルコール、エチルアルコールおよびイソプロピルアルコールから選択することができるが、エチルアルコールが好ましい。次いで、抽出物を、適切な濾過媒体に通して重力圧力で濾過して、第2の抽出溶液(780L~810L)を得た。濾過媒体は、15ミクロンの濾布であってもよい。次いで、第1の抽出溶液および第2の抽出溶液を混合し、60℃~65℃の温度で蒸留し、さらに、400mmHg~550mmHgの真空下で70℃~75℃の温度で濃縮して、総固形分含有量70%±3%の濃縮抽出混合物を得た。次いで、濃縮された抽出混合物を、水および防腐剤などの適当な希釈剤とブレンドして、ペースト状のハーブ組成物を得た。水などの希釈剤を約27%~30%の量で添加し、防腐剤を約0.15%~0.25%の量で添加した。次いで、完成品のおおよその組成を分析した。
この実施例では、調製され、乾燥粉末状のハーブ組成物に製剤化された本発明の代表的なハーブ組成物であって、単一のハーブブレンドが、ハーブであるティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを等量で含む、ハーブ組成物について説明する。表13は、成分およびそれらの量を重量%で示す。表13aは、ハーブ組成物のおおよその組成を示す。ハーブ組成物中に存在する活性物質を適切な方法を用いて測定した。例えば、総タンニン含有量および没食子酸としての全有機酸は、滴定によって測定し、全ポリフェノールは、UV-可視分光法によって測定し、没食子酸、エラグ酸の含有量はHPLCによって測定した。
-原料-
原料100Kgを以下の成分比率で採取した。
単一のハーブブレンドのために選択されたハーブは、ティノスポラ・コルディフォリアが25%、トリゴネラ・フォエナム・グラカムが25%、イクソラ・コッキネアが25%、およびシジギウム・クミニが25%であった。
原料ハーブに対するハーブ組成物の有効性を評価するための生体内でのグルコース取り込み試験
目的:本試験の目的は、生体内での被験物質のグルコース取り込み能を評価すること
試験系:L6細胞株(ラット、骨格筋細胞)
試験培養調製:10%不活性ウシ胎児血清(FBS)、ペニシリン(100IU/ml)、ストレプトマイシン(100∝g/ml)およびアムホテリシンB(5∝g/ml)を添加したDMEM媒体中で、5%CO2の加湿大気中、37℃で、細胞株を融合するまで培養した。細胞をTPVG水溶液(PBS中0.2%トリプシン、0.02%EDTA、0.05%グルコース)で解離させた。ストック培養物を25cm2培養フラスコ中で増殖させ、全ての実験を96マイクロタイタープレート中で行った。
-試験用量の調製-
試験のために、秤量した各試験薬物を別々に蒸留DMSOに溶解し、2%不活性FBSを補充したDMEMで体積を作り、1mg/ml濃度のストック溶液を得、濾過により滅菌した。これから連続2倍希釈を行い、細胞毒性試験を行った。市場で入手可能な参照標準製剤/薬物を、実験において参照製剤として使用した。
-グルコース取り込みアッセイ-
被験物質のグルコース取り込み活性を、分化L6細胞において測定した。手短に言えば、40mmペトリプレート中で70~80%コンフルエンシーを有する24時間の細胞培養物を、2%FBSを有するDMEM中で4~6日間維持することによって分化させた。分化の程度は、細胞の多核化を観察することによって確認した。分化した細胞を一晩血清枯渇させ、実験時に細胞をHEPESクレブス・リンゲルリン酸緩衝溶液(KRP緩衝液)で一度洗浄し、37℃で0.1%BSAを含むKRP緩衝液中で30分間インキュベートした。細胞は37℃でネガティブコントロールと一緒に30分間、様々な非毒性濃度の被験物質と試験基準で処理した。20μlのD-グルコース溶液を各ウェルに同時に添加し、37℃で30分間インキュベートした。インキュベーション後、ウェルから水溶液を吸引し、氷冷KRP緩衝溶液で3回洗浄することにより、グルコースの取り込みを停止させた。細胞を0.1MのNaOH溶液で溶解し、細胞溶解物のアリコートを使用して、細胞関連グルコースを測定した。細胞溶解物中のグルコースレベルを、グルコースアッセイキットを用いて測定した。3つの独立した実験値を重複して測定し、グルコース取り込みの増加量の対照に対する割合を算出した。
-観察-
対照群に対する処理細胞におけるグルコース取り込みに対する試験物質の調節作用効果を確認し、対照に対するグルコース取り込みパーセント値で表した。観察結果を表14および表14aに示す。
実施例1のハーブ組成物は、個々の成分と比較した場合、用量依存性グルコース取り込みおよび最高活性を示す。また、実施例1のハーブ組成物は、異なる濃度(1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、100μg/mlおよび10μg/ml)で試験した場合、個々のハーブよりも高いグルコース取り込みを示す相乗活性を示す。さらに、このハーブ組成物はまた、500μg/ml、250μg/mlおよび100μg/mlの濃度で試験した場合、市販のサンプルよりも高いグルコース取り込みを示す。
C57BL/6マウスモデルにおけるハーブ組成物の生体内での相乗作用
=モデル=
-高脂肪食餌試験-
栄養摂取は、肥満、メタボリックシンドローム、2型糖尿病、および心血管疾患を含む、代謝性疾患および慢性病の発症における危険因子を強く調節する。代謝ホメオスタシスの維持は、食物からのバランスのとれた栄養素の摂取に依存する。極めて栄養バランスの悪い食事製剤は、脂質と糖が顕著な役割を果たすことで、代謝性疾患を引き起こし得る。マウスは、適切な高脂肪食餌を与えられた場合にこれらの病状を容易に発症するので、ヒト代謝性疾患をより深く理解するために一般的に使用されるモデルである。高脂肪食餌は、C57BL/6マウスにおいて体重増加およびインスリン抵抗性を引き起こす。これらのマウスは、ヒト肥満に類似する食餌の作用に対して感受性が高い。高脂肪食餌を与えたこれらのマウスは、重度の肥満、高インスリン血症および高腸間膜脂肪細胞を発症する。後期段階の動物もまた、高血糖を発症する。従って、このモデルは、潜在的な抗肥満薬のスクリーニングに有用である。高脂肪食餌は34.3%の脂肪または60%Kcalの脂肪を含むが、通常食餌は6.2%の脂肪または18Kcalの脂肪を含む。
=目的=
本試験の目的は、34.3%の脂肪食餌を与えた雄性C57BL/6マウスにおいて、60日間の体重および摂餌量に対するハーブ組成物の効果を観察し、続いて30日間、薬物に起因する効果の逆作用を研究することであった。
=試験手順=
対照群のマウスに、6.2%の脂肪を含む等量の通常食餌を与えた。第2の対照群のマウスには、34.3%の脂肪を含む等量の高脂肪食餌を与えた。マウス治療群に、1日5.71mg/kgの用量(ヒト等価用量で400mg/70kg)の本発明のハーブ組成物を経口投与した。60日間の治療の最終日に薬物治療を中止し、さらに30日間同じ食餌をマウスに与え続けた。この期間中、体重を週2回測定した。経口ブドウ糖負荷試験を、薬物治療の最終日(60日目)と、治療の逆作用期間の最終日(90日目)に行った。
=結果=
1.体重増加に対する効果
結果は図2に示す通りであり、本発明のハーブ組成物は、継続的な治療において体重増加を予防すると結論付けることができる。
2.60日目の経口ブドウ糖負荷試験、空腹時血糖、および治療60日目の空腹時血糖および30日間のリカバリー
結果は、図3、4および5に示す通りである。本発明のハーブ組成物は、血清グルコース、空腹時血糖、および経口ブドウ糖負荷試験(OGTT)を減少させると結論付けることができる。
db/dbマウスモデルにおけるハーブ組成物の生体内での相乗作用
モデル:
-db/dbマウス試験-
db遺伝子は、C57BL/KsJ近交系における常染色体劣性突然変異である。レプチン遺伝子に欠損がある。これらの動物は6週齢までに摂食状態で極端な早期発症肥満症候群および高血糖(300mg/dlを超える)を示し、これは時間とともに増加する。制御されていないNIDDM(非インスリン依存性糖尿病)を有するヒト被験者と同様に、これらのdb/dbマウスもまた、それらの高血糖段階の間に、多飲、多尿、および糖尿を経験するが、それらは自由に給餌される場合、生後3ヶ月の間、体重が増加する。明白な糖尿病の発症前および発症後6~10週間、db/dbマウスは、一貫して、全体的な脂肪過多、体温調節欠損および機能性不妊の増加を示す。高リグリセリド血症および高コレステロール血症もより重症である。この株のホモ接合体は過食で、肥満であり、最初の軽度の高血糖後、500mg/dLを超える重度の高血糖を発症する。血漿インスリン濃度の上昇は10日齢という早い時期に観察され、2~3ヶ月齢までに6倍~10倍のピークに達し、次いで低下する。同時に、血中グルコース濃度は400mg/dL以上に急速に上昇し、5~8ヵ月の死亡するまで上昇したままである。血漿インスリン濃度の低下の前に、ランゲルハンス島の最も一貫した形態的特徴は、生理学的レベルで血糖濃度を制御するのに十分なインスリンを産生しようとするβ細胞の過形成および肥大である。グルカゴンおよび膵臓グルカゴン含量の血漿濃度は増加する。肥満、高血糖、高インスリン血症、およびトリグリセリド値および遊離脂肪酸(FFA)の量の増加は、この形態の糖尿病を特徴付ける。これらの知見は、2型糖尿病の多くの患者において遭遇するものと類似している。ヒトの対応物を少なくともある程度有するdb/dbマウスの別の特徴は、糖尿病状態の持続時間の増加に伴って起こるβ細胞機能の低下である。したがって、db/dbマウスは、肥満およびインスリン抵抗性に結びつくヒトNIDDMの型のための適切なモデルであり得る。
-目的-
本試験の目的は、6.2%の脂肪または18Kcalの脂肪の通常の食餌を与えられたdb/dbマウスにおける30日間の体重および血中グルコースに対する本発明のハーブ組成物の効果を観察することであった。
-試験手順-
それらの血糖値に基づいて、マウスを対照群および治療群に無作為に抽出した。マウス治療群に、本発明のハーブ組成物を1日50mg/kg経口投与した。体重およびグルコースレベルを週2回測定した。空腹時血糖および経口ブドウ糖負荷試験を、本試験の最終日(30日目)に行った。
-結果-
1.体重増加に対する効果
結果は図6に示す通りであり、本発明のハーブ組成物は体重増加を阻止すると結論付けることができる。
2.30日目の血糖、経口ブドウ糖負荷試験および空腹時血糖に対する効果
結果は、図7、8および9に示す通りである。本発明のハーブ組成物は、血清グルコース、経口ブドウ糖負荷試験(OGTT)および空腹時血糖を減少させると結論付けることができた。
ハムスターモデルにおけるハーブ組成物の生体内での相乗作用
モデル:
-ハムスター試験-
アテローム性動脈硬化症は重篤な良くない健康状態であり、脳卒中および心不全の臨床合併症の原因である。ゴールデンシリアンハムスターは、高脂肪コレステロール補給食餌に対して感受性が高い。ハムスターはLDLリポタンパク質分画中にその血漿コレステロールのかなりの部分を保有するため、げっ歯類よりもヒトに近い。ハムスターは、高脂肪コレステロール補給食餌を用いた脂質代謝の研究のための良好なモデルである。コレステロールを与えられたハムスターは、軽度のアテローム性動脈硬化症を発症する。非常に高い(60%)フルクトース食餌を与えられたハムスターはインスリン抵抗性になるので、インスリンシグナル伝達およびリポタンパク質代謝に対する効果を研究するために使用されてきた。ハムスターは目に見えて、内因性コレステロール合成の割合が低く、受容体が低密度のリポタンパク質コレステロールを媒介取り込み、コレステリルエステル転移タンパク質活性が存在し、肝臓からアポリポタンパク質(apo)B-100を、小腸からアポリポタンパク質B-48を分泌し、ならびにLDL受容体経路を介するLDL-Cの大部分の取り込みを行うという理由から、食餌誘発性アテローム性動脈硬化症研究に好ましい種である。アテローム性食餌を与えたハムスターにおける大動脈泡沫細胞および病変の形態は、ヒト病変と同様であることが報告された。
-目的-
この試験の目的は、トリグリセリドおよびグルコースに対する本発明のハーブ組成物の効果を研究することであった。
-試験手順-
シモンセン研究所(Simonsen Laboratories)から5週齢の雄性ゴールデンシリアンハムスターを入手した。それらを7日間隔離し、次いで、ハムスターをビヒクルからなるビヒクル群と、ヒト等価用量での本発明のハーブ組成物からなる治療群とに無作為に抽出した。治療群マウスは、0.5%コレステロール、11.5%トウモロコシ油、および11.5%ココナッツ油からなる食餌で治療した。この食餌は、試験を通して継続した。ハムスターに、治療製剤とビヒクルを毎日経口投与した。30日間の最終日および60日間の最終日に、ハムスターを一晩絶食させ、心臓穿刺によって血液を収集した。空腹時血糖および総血清トリグリセリドを測定した。
-結果-
図10(a)および10(b)はそれぞれ30日目および60日目の空腹時血糖の結果を示し、図11(a)および11(b)は、それぞれ30日目および60日目の総血清トリグリセリドの結果を示す。本発明のハーブ組成物は60日間の治療で総血清トリグリセリドが順当に低下したことを示すが、30日間および60日間の治療で空腹時血糖を維持すると結論付けることができた。
アポリポタンパク質E‐欠乏(Apo E(-/-))試験におけるハーブ組成の生体内での相乗作用
=モデル=
-アポリポタンパク質E‐欠乏(Apo E(-/-))試験-
アテローム性動脈硬化症は重篤な良くない健康状態であり、脳卒中および心不全の臨床合併症の原因である。アポリポタンパク質E(apoE)は、肝臓およびマクロファージにおいて合成される34kDA分泌タンパク質である。これは、細胞表面リポタンパク質受容体のためのリガンドであり、血漿からコレステロールに富むリポタンパク質を除去することによってアテローム性動脈硬化症を防止する。アテローム発生およびアポリポタンパク質Eに起因するアテローム性動脈硬化症の症状変化のメカニズムを調べるためには、アポリポタンパク質E‐欠乏(Apo E(-/-))マウスモデルを用いられる。これらには、食餌および薬剤の効果、炎症、酸化、免疫調節、凝固、およびプラーク組成物の役割、ならびにアテロームの進行および回復が含まれる。アポリポタンパク質Eノックアウトマウスは、ヒトアポリポタンパク質E欠損症の特徴の多くを再現し、高コレステロール食餌によって、動物が黄色腫を示す程度に重症化したアテローム性動脈硬化症を自然発症する。アテローム性動脈硬化症が発症する循環アポリポタンパク質Eの閾値の測定、ならびにリポ蛋白効果とアポリポタンパク質Eの他の抗アテローム性特性に関連する効果とを区別することが可能であるかどうかを確認するために、このモデルが使用された。
-目的-
本試験の目的は、アポリポタンパク質E‐欠乏(Apo E(-/-))マウスにおける本発明のハーブ組成物の効果を研究することであった。
-試験手順-
5週齢の雄性アポリポタンパク質E‐欠乏(Apo E(-/-))マウスを、タコニックファーム(Taconic Farms)から入手した。それらを7日間隔離し、次いで、ビヒクルからなる群と、ヒト等価用量での本発明のハーブ組成物からなる群とを無作為に抽出した。マウス治療群を、21.2%脂肪からなる食餌で治療した。この食餌は、試験を通して継続した。マウスに、治療製剤とビヒクルを毎日経口投与した。90日間の最終日および180日間の最終日に、マウスを一晩絶食させ、心臓穿刺によって血液を収集した。総血清コレステロールを測定した。
-結果-
図12(a)および12(b)は、それぞれ90日目および180日目の総血清コレステロールの結果を示す。本発明のハーブ組成物は、180日間で血清コレステロールが順当に低下したことを示すと結論付けることができた。
毒性試験
マウス急性毒性試験
-目的-
動物での急性毒性試験は、いかなる薬剤開発プログラムにも必要である。これらの試験から得られた情報は、反復投与試験の用量選択、標的臓器毒性の予備的同定、遅延毒性の解明に有用である。急性毒性試験はまた、第1期臨床試験の開始用量の選択に役立ち、急性過量投与に関連する情報を提供することができる。FDAガイドラインによると、急性毒性試験は、試験化合物または薬剤の漸増用量の単回投与で行われる。投与後、異常行動、体重の変動、罹患率および死亡率について14日間動物を観察する。本試験の目的は、ヒト等価用量の1倍、10倍、および100倍におけるハーブ組成物の急性毒性効果を調べることであった。
-動物-
6週齢の雄性および雌性スイスウェブスターマウスをカリフォルニア州ギルロイのシモンセン研究所(Simonsen Laboratories)から入手した。それらをげっ歯類施設に収容し、12時間の明暗周期で22℃~24℃の温度に維持し、食べ物および水分を自由に与えた。
-投与溶液の準備-
400mgのヒト用量に基づいて、140mgの実施例1のハーブ組成物を秤量し、2mLの飲用水をそれに添加した。この用量を用量100Xと標識した。II群のスイスウェブスターマウスに投与した200μL容量の用量100Xは、ヒト等価用量の100倍に等しかった。用量100Xを含むチューブを10秒間ボルテックスし、200μLのアリコートを別のチューブに移し、1800μLの飲用水を加えた。この用量を用量10Xと標識した。III群のスイスウェブスターマウスに投与した200μL用量の用量10Xは、ヒト等価用量の10倍に等しかった。用量10Xを含むチューブを10秒間ボルテックスし、200μLのアリコートを別のチューブに移し、1800μLの飲用水を加えた。この用量を用量1Xと標識した。IV群のスイスウェブスターマウスに投与した200μLの用量1Xは、ヒト等価用量の1倍に等しかった。I群のマウスに200μLの飲料水を投与した。
-行動観察-
水および実施例1のハーブ組成物を経口投与後、マウスを、震え、鎮静、痙攣、緊張、覚醒、筋痙攣、チアノーゼ、苦痛、過敏、下垂、下痢について、30分、1時間、2時間、および4時間経過後に観察し、その後は15日目まで1日1回観察した。
-終了-
15日目に、マウスの体重を測定し、二酸化炭素窒息により安楽死させた。血液を心臓穿刺によって収集し、EDTAおよびヘパリンナトリウムを含有する別個のチューブに移し、氷上で維持した。ヘパリン処理したチューブの血液を、冷蔵マイクロ遠心分離機で5000rpm、5分間、2℃~4℃の温度で遠心分離し、血液チューブの臨床化学作用(超化学作用)、全血球数、分画数を分析した。主要な器官である心臓、肝臓、腎臓、脾臓、精巣、卵巣および脳を切除し、秤量した。心臓、肝臓および腎臓を10%ホルマリン中に保存し、組織学的評価のためにヘマトキシリンおよびエオシン染色によって固定した。
-結果-
非GLP急性毒性試験において、ヒト等価用量(HED)の3種類の異なる用量(1倍、10倍、および100倍)で、実施例1のハーブ組成物を雄性および雌性スイスウェブスターマウスに経口投与して、以下の結論を得た。
1.体重測定
マウスの対照群と比較して、実施例1のハーブ組成物を経口送達した場合、体重の変化は観察されなかった。
2.行動パラメータ
雄性マウスおよび雌性マウスの対照群と比較した場合、行動パラメータの変化は観察されなかった。
3.器官重量測定
雄性マウスおよび雌性マウスの治療群と未治療群との間で、脳、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、精巣および卵巣の重量の差は観察されなかった。
4.臨床化学作用
実施例1のハーブ組成物の急性用量治療によって、対照標準(正確な特定株に対してNRLによって別々に生成された)と比較して、22のパラメータについての臨床化学作用に変化がなかった。
5.完全血球数(CBC)
対照群および標準(正確な特定株に対してNRLによって別々に生成された)と比較して、13の異なる完全血球数に有意な変化は観察されなかった。
6.組織学的結果
ビヒクル群と治療群との間で組織学的評価に有意差は認められなかった。
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Claims (30)
- a)第1のハーブブレンド抽出物と、
b)第2のハーブブレンド抽出物とを含む、ハーブ組成物であって、
前記第1のハーブブレンド抽出物が、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、シジギウム・クミニから選択される少なくとも4つのハーブまたはそれらの組み合わせを含み、前記ハーブが等量で存在する第1のハーブブレンドから得られ、前記第2のハーブブレンド抽出物が、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む第2のハーブブレンドから得られ、前記第1のハーブブレンド抽出物と前記第2のハーブブレンド抽出物の比率が1:1である、ハーブ組成物。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニまたはそれらの組み合わせを含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項1に記載のハーブ組成物。 - 前記第1のハーブブレンドが、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、およびイクソラ・コッキネアから選択されるハーブまたはそれらの組み合わせを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項1に記載のハーブ組成物。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、およびトリゴネラ・フォエナム・グラカムから選択されるハーブまたはそれらの組み合わせを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項1に記載のハーブ組成物。 - 前記第1のハーブブレンドが、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、およびティノスポラ・コルディフォリアから選択されるハーブまたはそれらの組み合わせを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項1に記載のハーブ組成物。 - 以下の特徴のうち1つを有する:
(a)前記第2のハーブブレンドを構成する前記ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスの比率が1:1である;
(b)前記第2のハーブブレンドを構成する前記ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスの比率が1:2である;
(c)前記第2のハーブブレンドを構成する前記ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスの比率が1:3である;
請求項1~5の何れか1項に記載のハーブ組成物。 - ハーブである、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを含む単一のハーブブレンドから得られる単一のハーブブレンド抽出物を含むハーブ組成物であって、前記ハーブが等量で存在する、ハーブ組成物。
- 前記ハーブ組成物は、薬学的組成物を提供するために、添加剤、ガム、甘味料、コーティング剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、造粒剤、溶媒、着色剤、流動促進剤、粘着防止剤、帯電防止剤、界面活性剤、可塑剤、乳化剤、矯味矯臭剤、粘度増強剤および酸化防止剤を含む群から選択される薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含む、請求項1~7の何れか1項に記載のハーブ組成物。
- 前記ハーブ組成物は、粉末、ペースト、顆粒、カプセル、錠剤、液体、トローチ剤、エマルジョン、懸濁液、シロップ、エリキシル剤、経口ドロップ、ゼリー、植物医薬品、食品サプリメントおよび栄養補助食品を含む群から選択される適切な剤形に調製するために製剤化されている、請求項1~8の何れか1項に記載のハーブ組成物。
- 前記組成物が食品サプリメントとして製剤化されている、請求項1~9の何れか1項に記載のハーブ組成物。
- 前記食品サプリメントが、茶、煎じ出し、飲料、水などの飲み物、小麦粉、スープ、クッキー、ビスケット、乳食品および他の加工食品に使用される、請求項10に記載のハーブ組成物。
- 前記組成物が、メタボリックシンドローム関連疾患の管理において相乗効果を示し、
前記組成物が、血中グルコースを制御することによって、2型糖尿病などのメタボリックシンドロームに関連する疾患の管理に有効であり、
前記組成物が、個人の脂質管理に有効であり、
前記組成物が、体重増加を阻止すること、および継続的な治療において体重増加を予防することに有効である、
請求項1~11の何れか1項に記載のハーブ組成物。 - 2型糖尿病、肥満および脂質管理を含む代謝性疾患の管理に有効な、請求項1~6、8~12の何れか1項に記載のハーブ組成物の調製方法であって、前記ハーブ組成物の調製方法が、
a)ハーブを選択して、使用する原料ハーブの特定の植物部分を選択する工程と、
b)第1のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第1のハーブブレンドを調製する工程と、
c)第2のハーブブレンド用に選択されたハーブの量を決定することによって、前記第2のハーブブレンドを調製する工程と、
d)前記第1のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第1のハーブ抽出物を得る工程と、
e)前記第2のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、第2のハーブ抽出物を得る工程と、
f)工程d)および工程e)で得られた前記第1のハーブ抽出物と前記第2のハーブ抽出物とを1:1の比率で混合して、抽出物混合物を得る工程と、
g)工程f)の抽出物混合物を濃縮および/または乾燥などのさらなる処理に供してハーブ組成物を得る工程、とを含み、
前記第1のハーブブレンドは、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニから選択される少なくとも4つのハーブまたはそれらの組み合わせを含み、前記ハーブが等量で存在し、前記第2のハーブブレンドは、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含み、
前記抽出プロセスが、第1のハーブ抽出物および第2のハーブ抽出物を得るために、水性抽出または水アルコール抽出から選択される、
ハーブ組成物の調製方法。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、イクソラ・コッキネア、およびシジギウム・クミニを含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項13に記載の方法。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、トリゴネラ・フォエナム・グラカム、およびイクソラ・コッキネアを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項13に記載の方法。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、ティノスポラ・コルディフォリア、およびトリゴネラ・フォエナム・グラカムを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項13に記載の方法。 - 前記第1のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガ、エンブリカ・オフィシナリス、ベルノニア・アンテリミンティカ、およびティノスポラ・コルディフォリアを必要に応じて含み、前記ハーブが等量で存在し、
前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1~1:3の比率で含む、
請求項13に記載の方法。 - 以下の特徴のうち少なくとも1つを有する:
(a)前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:3の比率で含む、
(b)前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:2の比率で含む、
(c)前記第2のハーブブレンドが、ハーブである、クルクマ・ロンガおよびエンブリカ・オフィシナリスを1:1の比率で含む、
請求項13~17の何れか1項に記載の方法。 - 前記第1および第2のハーブブレンド中の原料ハーブの特定植物部分が、クルクマ・ロンガの乾燥根茎、ティノスポラ・コルディフォリアの茎、エンブリカ・オフィシナリスの乾燥果皮、イクソラ・コッキネアの根、シジギウム・クミニの樹皮、トリゴネラ・フォエナム・グラカムの種子、およびベルノニア・アンテリミンティカの果実を含む、請求項13~18に記載の方法。
- 前記水アルコール抽出プロセスにおける溶媒には水アルコール混合溶媒が含まれ、前記水アルコール混合溶媒が、アルコールと水との混合物を含み、前記アルコールが、メチルアルコール、エチルアルコール、およびイソプロピルアルコールから選択され、好ましくはエチルアルコールである、請求項13~19に記載の方法。
- 前記水アルコール混合溶媒におけるアルコールと水の比率が、80:20~20:80であり、好ましくは50:50または70:30である、請求項20に記載の方法。
- 前記第1のハーブ抽出物および前記第2のハーブ抽出物を1:1の比率で混合して抽出混合物を得て、前記抽出混合物を濃縮などのさらなる処理に供して、飲み物などの食品製品の調製に使用されるペースト状のハーブ組成物を得る、請求項13~21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第1のハーブ抽出物および前記第2のハーブ抽出物を1:1の比率で混合して抽出混合物を得て、前記抽出混合物を濃縮および乾燥などのさらなる処理に供して、ハーブ組成物を得る、請求項13~21のいずれか1項に記載の方法。
- 以下の条件のうち少なくとも1つにおける使用のための:
(a)患者の血漿中のグルコースを減少させる;
(b)患者の肥満を治療するため;
(c)患者のメタボリックオーダー症候群疾患を治療するため;
(d)患者の血漿中のトリグリセリド値を低下させるため;
(e)患者の血清コレステロール値を低下させるため;
請求項1~12の何れか1項に記載のハーブ組成物。 - 2型糖尿病、肥満および脂質管理を含む代謝性疾患の管理に有効な、請求項7に記載されたハーブ組成物を、調製する方法であって、
a)ハーブを選択して、使用する原料ハーブの特定の植物部分を選択する工程と、
b)前記選択されたハーブの量を決定することによって、単一のハーブブレンドを調製する工程と、
c)前記単一のハーブブレンドを、時間と温度の特定の組み合わせの下で適切な溶媒を用いた抽出プロセスに供して、ハーブ抽出物を得る工程であって、前記抽出プロセスが、単一のハーブ抽出物を得るために、水性抽出または水アルコール抽出から選択される、工程と、
d)前記ハーブ抽出物を濃縮および/または乾燥などのさらなる処理に供して前記ハーブ組成物を得る工程とを含む、ハーブ組成物の調製方法。 - 前記単一のハーブブレンド中の原料ハーブの特定植物部分が、ティノスポラ・コルディフォリアの茎、イクソラ・コッキネアの根、シジギウム・クミニの樹皮、およびトリゴネラ・フォエナム・グラカムの種子を含む、請求項25に記載の方法。
- 前記水アルコール抽出プロセスにおける溶媒には水アルコール混合溶媒が含まれ、前記水アルコール混合溶媒が、アルコールと水との混合物を含み、前記アルコールが、メチルアルコール、エチルアルコール、およびイソプロピルアルコールから選択され、好ましくはエチルアルコールである、
請求項25および26に記載の方法。 - 前記水アルコール混合溶媒におけるアルコールと水の比率が、80:20~20:80であり、好ましくは50:50または70:30である、請求項27に記載の方法。
- 前記単一のハーブ抽出物を濃縮などのさらなる処理に供して、飲み物などの食品製品の調製に使用されるペースト状のハーブ組成物を得る、請求項25~28に記載の方法。
- 前記単一のハーブ抽出物を濃縮および乾燥などのさらなる処理に供して、前記ハーブ組成物を得る、請求項25~28に記載の方法。
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