SI9720057A - Paratiroidni hormonski analogi za zdravljenje osteoporoze - Google Patents
Paratiroidni hormonski analogi za zdravljenje osteoporoze Download PDFInfo
- Publication number
- SI9720057A SI9720057A SI9720057A SI9720057A SI9720057A SI 9720057 A SI9720057 A SI 9720057A SI 9720057 A SI9720057 A SI 9720057A SI 9720057 A SI9720057 A SI 9720057A SI 9720057 A SI9720057 A SI 9720057A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- lys
- leu
- seq
- hpth
- val
- Prior art date
Links
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 title description 47
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 title description 47
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 title description 47
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 title description 47
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 9
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 claims abstract description 24
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 93
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 claims description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N parathion-methyl Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims 1
- MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N His-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MAJYPBAJPNUFPV-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 51
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 abstract description 47
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 abstract description 47
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 44
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 37
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 abstract description 32
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 abstract description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 12
- 238000011552 rat model Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 2
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 83
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 82
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 51
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 39
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 25
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 24
- WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 22
- POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 22
- OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 19
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 18
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 18
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N Met-Glu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 15
- VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N Val-Ser-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N 0.000 description 13
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 12
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N Val-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 12
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- OXZNHYPGOAWYLT-FISSOZIDSA-N ostabolin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)OC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(C)C)C1C=NC=N1 OXZNHYPGOAWYLT-FISSOZIDSA-N 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- -1 sodium and ammonium Chemical class 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 9
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 9
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 9
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 8
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 8
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 8
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 7
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 6
- OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N Asn-Phe Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 OMSMPWHEGLNQOD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 6
- NIOYDASGXWLHEZ-CIUDSAMLSA-N Ser-Met-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O NIOYDASGXWLHEZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 5
- OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N Val-His-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical group CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-His Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)O XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 3
- SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N Glu-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N Glu-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 2
- JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDHURCQGUDNBMA-UBHSHLNASA-N Phe-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CDHURCQGUDNBMA-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 2
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 229940116901 diethyldithiocarbamate Drugs 0.000 description 2
- LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N diethyldithiocarbamic acid Chemical compound CCN(CC)C(S)=S LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical class 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C([C@@](N)(C(O)=O)C)=CC=CC2=C1 OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical class CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BKQQPCDQZZTLSE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-naphthalen-1-ylpropanoic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CC=CC2=C1 BKQQPCDQZZTLSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001572 5'-adenylyl group Chemical group C=12N=C([H])N=C(N([H])[H])C=1N=C([H])N2[C@@]1([H])[C@@](O[H])([H])[C@@](O[H])([H])[C@](C(OP(=O)(O[H])[*])([H])[H])([H])O1 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N Arg-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CLICCYPMVFGUOF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000538562 Banjos Species 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WVLZTXGTNGHPBO-SRVKXCTJSA-N Cys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WVLZTXGTNGHPBO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N Glu-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- JENKOCSDMSVWPY-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JENKOCSDMSVWPY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UMBKDWGQESDCTO-KKUMJFAQSA-N His-Lys-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UMBKDWGQESDCTO-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000002980 Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HASRFYOMVPJRPU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN APFJUBGRZGMQFF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C NTISAKGPIGTIJJ-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000027382 Mental deterioration Diseases 0.000 description 1
- 206010027374 Mental impairment Diseases 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 1
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 101100272807 Rattus norvegicus Btg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001116459 Sequoia Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005250 Spontaneous Fractures Diseases 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C([O-])=O)=CNC2=C1 LYMVXFSTACVOLP-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XKVXSCHXGJOQND-ZOBUZTSGSA-N Val-Asp-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N XKVXSCHXGJOQND-ZOBUZTSGSA-N 0.000 description 1
- DBMMKEHYWIZTPN-JYJNAYRXSA-N Val-Cys-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N DBMMKEHYWIZTPN-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PHZGFLFMGLXCFG-FHWLQOOXSA-N Val-Lys-Trp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N PHZGFLFMGLXCFG-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000123 anti-resoprtive effect Effects 0.000 description 1
- 108010036533 arginylvaline Proteins 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037176 bone building Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 210000002745 epiphysis Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000013210 evaluation model Methods 0.000 description 1
- 230000000367 exoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 1
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 108010091871 leucylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000001009 osteoporotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008060 renal absorption Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
- A61P5/20—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of PTH
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Measurement Of Radiation (AREA)
- Display Devices Of Pinball Game Machines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Predloženi izum opisuje analoge humanega paratiroidnega hormona, ki imajo povečane aktivnosti pri obnavljanju kosti in povečane biorazpoložljivosti. Opisani peptidi so derivati hPTH-(1-31), ki so ciklizirani npr. s tvorbo laktamov med bodisi Glu22 in Lys26 ali Lys26 in Asp30. Poleg tega lahko naravni Lys27 substituiramo bodisi z Leu ali drugimi hidrofobnimi ostanki, kot so Ile, norlevcin, Met, Val, Ala, Trp ali Phe. Tipično imajo ti analogi povečane sposobnosti za stimuliranje adenilil ciklaze v osteosarkomskih celicah podgan in kažejo povečane aktivnosti pri obnavljanju kosti ob uporabi modela ovariektomizirane podgane. Analogi tudi kažejo povečane aktivnosti in biorazpoložljivost, kot kažejo njihovi hipotenzivni učinki pri podgani. Opisan je tudi test, ki korelira hipotenzivno aktivnost z osteogenično aktivnostjo.ŕ
Description
National Research Council of Canada
Paratiroidni hormonski analogi za zdravljenje osteoporoze
Področje izuma
Predloženi izum se nanaša na analoge humanega paratiroidnega hormona, za katere smo ugotovili, da so učinkoviti pri zdravljenju osteoporoze.
Ozadje izuma
Osteoporoza je glavni vzrok invalidnosti pri starejših, zlasti pri starejših ženskah. Nedavno so ugotovili, da so humani paratiroidni hormon (hPTH) in določeni analogi stimulatorji kostne rasti, ki so koristni pri zdravljenju osteoporoze. Osteoporoza je progresivna bolezen, katere posledica je zmanjšanje celotne kostne mase in povečana krhkost kosti. Posledica tega so pogosto spontani zlomi kosti, ki nosijo breme, in karakteristika fizičnega in duševnega poslabšanja imobiliziranja poškodb. Postmenopavzno osteoporozo povzroči izginotje estrogenov, ki sprožajo desetletja dolgo pospeševanje pretvorbe kosti s povečanim neravnotežjem med resorpcijo stare kosti in nastankom nove kosti. Posledica tega je tanjšanje, povečana poroznost in trabekulama deplecija kosti, ki nosijo breme. Osteoporoza je tudi povezana s hipertiroidizmom, hiperparatiroidizmom, Cushingovim sindromom in z uporabo določenih steroidnih zdravil. Zdravljenje je v zgodovini zajemalo povečanje kalcija v hrani, estrogensko terapijo in povečane doze vitamina D, vendar v glavnem s sredstvi, kot so antiresorptivi, ki inhibirajo resorpcijo kosti z osteoklasti.
)
Paratiroidni hormon (PTH) proizvaja paratiroidna žleza in je glavni regulator nivojev krvnega kalcija. PTH je polipeptid in sintetične polipeptide lahko pripravimo po postopku, opisanem v Erickson in Merrifield, The Proteins, Neurath et al., Eds., Academic Press, Nev/ York, 1976, str. 257, in kot je modificirano po postopku Hodgesa et al (1988) Peptide Research 1, 19, ali v Atherton, E. and Sheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press, Oxford, 1989.
Kadar se serumski kalcij zmanjša pod normalen nivo, sprošča paratiroidna žleza PTH in nivo kalcija se poveča z resorpcijo kostnega kalcija, s povečano absorpcijo kalcija iz črevesa in s povečano renalno reabsorpcijo kalcija iz nascentnega urina v ledvičnih cevkah. Čeprav lahko kontinuimo infundirani nizki nivoji PTH odstranijo kalcij iz kosti, lahko iste nizke doze, kadar jih injiciramo v presledkih, dejansko pospešijo rast kosti.
Tregear je v US 4,086,196 opisal humane PTH analoge in v zahtevkih navedel, da so prve 27 do 34 amino kisline najbolj učinkovite, kar se tiče stimulacije adenilil ciklaze v in vitro celičnem testu. Rosenblatt je v US patentu 4,771,124 opisal lastnost hPTH analogov, kadar je Trp23 substituiran z amino kislinami fenilalaninom, levcinom, norlevcinom, valinom, tirozinom, β-naftilalaninom ali α-naftilalaninom kot PTH antagonistom. Ti modificirani hPTH analogi imajo tudi odstranjene 2 in 6 amino terminalne kisline, posledica pa je izguba večine agonistnih aktivnosti, kadar se uporabljajo za zdravljenje osteoporoze. Te analoge so označili kot inhibitorje PTH in PTH-sorodnega peptida. Ti analogi so bili predlagani za zaščito kot morebiti uporabni pri zdravljenju hiperkalcemije v zvezi z nekaterimi tumorji.
Pang et al je v WO93/06845, objavljeno 15. aprila 1993, opisal analoge hPTH, ki obsegajo substitucije Arg25, Lys26, Lys27 s številnimi amino kislinami, vključno alaninom, asparaginom. aspartinsko kislino, cisteinom, glutaminom, glutaminsko kislino, glicinom, histidinom, izolevcinom, levcinom, metioninom, fenilalaninom, prolinom, serinom, treoninom, triptofanom, tirozinom ali valinom. Zanje je v zahtevkih navedeno brez podlage podatkov iz živalskih ali humanih testov, da so učinkoviti pri zdravljenju osteoporoze z minimalnimi učinki na krvni tlak in gladko mišičje.
PTH deluje z aktivacijo dveh sistemov drugih nosilcev z Gs-proteinom aktivirane adenilil ciklaze (AC) in z Gq-proteinom aktivirane fosfolipaze Cp. Posledica slednjega je stimulacija membransko vezane protein kinazne Cs (PKC) aktivnosti. Pokazalo se je, da PKC aktivnost zahteva PTH ostanke 29 do 32 (Jouishomme et al (1994) J. Bone Mineral Res. 9, (1179-1189). Ugotovljeno je bilo, daje povečanje kostne rasti, t.j. tisti učinek, ki je koristen pri zdravljenju osteoporoze, zvezan s sposobnostjo peptidne sekvence, da poveča AC aktivnost. Pokazalo se je, da ima nativna PTH sekvenca vse izmed teh aktivnosti. hPTH-l(l-34) sekvenca je tipično prikazana kot (Α):
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu
Gin Asp Val His Asn Phe-OH
A
Sledeči linearni analog, hPTH-(l-31)-NH2, za katerega so podatki vključeni v tabeli 1 spodaj, ima le AC-stimulimo aktivnost in pokazalo se je, da je popolnoma aktiven pri obnovitvi kostne izgube pri modelu ovariektomizirane podgane (Rixon, R. H. et al (1994) J. Bone Miner. Res. 9, 1179-1189; Whitfield et al (1996), Calcified Tissue Int. 58, 81-87; Willick et al, US 5,556,940, izdan 17. sept 1996):
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu
Gin Asp Val-NH,
B
Gornja molekula B ima lahko prost karboksilni konec namesto prikazanega amidnega konca.
Predmet predloženega izuma je, da proizvedemo nove PTH analoge z večjo metabolično stabilnostjo, povečano aktivnostjo obnavljanja kosti, povečano AC aktivnostjo in minimalnimi kliničnimi stranskimi učinki.
Kratek povzetek izuma
V skladu z enim vidikom izuma gre za humani paratiroidni hormon hPTH in njegove farmacevtsko sprejemljive soli, z naslednjo amino kislinsko sekvenco
R-NH-Rl-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-R2-His-Asn-Leu-Gly-Lys-R3-R4-R5-R6-R7-GluArg-Val-R8--T rp-Leu-R9--R 10—R11 -Leu-R 12-Asp-- Y kjer je
R vodik ali katerakoli ravna ali razvejena alkilna, acilna ali arilna skupina, Rl Ser, Ala ali Aib,
R2 Met ali naravno nastopajoča hidrofobna amino kislina,
R3 His ali vodotopna amino kislina,
R4 Leu ali vodotopna amino kislina,
R5 Asn ali vodotopna amino kislina,
R6 Ser ali vodotopna amino kislina,
R7 Met ali naravno nastopajoča hidrofobna amino kislina,
R8 Glu, Lys ali Asp,
R9 Cys, Glu ali Om,
RIO Arg, Lys, Om, Gin, Glu ali Asp,
Ril naravno nastopajoča hidrofobna ali polama amino kislina,
R12 Gin, Arg, Glu, Asp, Lys ali Om,
X OH, NH2 in
Υ X, Val-X, Val-His-X, Val-His-Asn-X, Val-His-Asn-Phe-X, Val-His-Asn-Phe-ValX, Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-X in Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-Leu-X, cikliziran kot med enim ali dvema aminokislinskima paroma 22 in 26, 26 in 30, 27 in 30 ter 25 in 29, kadar sta R3 in R6 Lys, Om, Glu ali Asp, ob izključitvi ciklo(Lys26-Asp30)[Leu27]hPTH-(l-34)-NH2, ciklo(Lys27 *-Asp30)-h-PTH-(l-34)-NH2 in ciklo(Lys26Asp30)[Leu27]-hPTH-(l-34)-OH.
Primeri soli so soli anorganskih kislin, soli organskih kislin, kot mravljinčne kisline, ocetne kisline, vinske kisline in citronske kisline, soli anorganskih baz, kot natrijeve in amonijeve, in soli organskih baz, kot trietilamina, etilamina in metilamina.
V skladu z drugim vidikom predloženega izuma izvedemo cikiizacijo s tvorbo laktamov, ki obsega pripajanje stranskih verig izbranih amino kislinskih parov, kot med naravnima ostankoma 22 in 26 ali 26 in 30. Mišljeni so tudi drugi tipi ciklizacij, kot tvorba disulfidnega mostu npr. med Cys vsebujočimi analogi Cys22- Cys26 in Cys26-Cys30.
Ugotovili smo, da so tudi učinkovite substitucije različnih amino kislin. Lys lahko nadomestimo z Leu ali z različnimi drugimi naravno nastopajočimi hidrofobnimi ali polarnimi ostanki. Drugi faktor je, kako dobro se ostanek prilega receptorju. Ala ni tako hidrofoben kot Leu. Za Lys in Tyr se na splošno smatra, da sta polama, kljub temu pa imata hidrofobne interakcije z receptorjem. Lys se lahko npr. tako zlaga, da hidrofobni del in drugi hidrofobni ostanki v receptorju vzajemno delujejo, NH2 pa je izpostavljen topilu. Take substitucije vključujejo omitin, citrulin, a-aminomasleno kislino, alanin, norlevcin, izolevcin in tirozin ali katerokoli ravno ali razvejeno aamino alifatsko kislino z 2 do 10 ogljiki v stranski verigi, pri čemer ima katerikoli tak analog polarno ali nabito skupino pri terminusu alifatske verige. Primeri polarnih ali nabitih skupin so amino. karboksil, acetamido, gvanido in ureido. Čeprav se zdi, daje Leu27 najboljša substitucija, se zdi tudi, da mnoge druge pos27 substitucije zadržijo skoraj popolno aktivnost in bi lahko imele tudi želene lastnosti, kot povečano b
proteolitsko stabilnost ali vodotopnost, pri čemer se pričakuje, da so najbolj aktivni Ile, norlevcin, Met in ornitin.
Posledica te substitucije je stabilizacija α-vijačnice v receptorski vezivni regiji hormona. To smo potrdili s preiskavo cirkulamega dikroizemskega spektra laktamskih analogov v primerjavi s cirkulamim dikroizemskim spektrom ravne molekule, [Leu27]hPTH-(l-31)-NH2. Cirkulami dikroizemski spektri so zelo občutljivi na prisotnost avijačne sekundarne strukture in uporabili so tehniko za prikaz prisotnosti α-vijačnice v hPTH fragmentih (Neugebauer et al (1991) Biochemistry 31, 2056-2063). Nadalje so prikazali stabilizacijo α-vijačnice pri tvorbi zgoraj navedenih laktamov v hPTH-(2034)-NH2 (Neugebauer et al (1994) Int. J. Protein Peptide Res. 43, 555-562). Je potencialna ampifilna α-vijačnica med ostankoma 21 in 31 hPTH-(l-31)-NH2 in predstavili so podatke, ki kažejo, da hidrofobno lice te vijačnice vzajemno učinkuje s PTH receptorjem (Neugebauer, W.(1995) et al Biochemistry 34, 8835-8842; Gardella,
T.J. et al (1993), Endocrinology 132, 2024-2030).
Ugotovili smo, da najbolj učinkovita ciklizacija zajema nastanek laktama, npr. med bodisi ostankoma Glu22 in Lys26 bodisi Lys26 in Asp30. Možne so tudi druge ciklizacije, kot med Lys27 in Asp30, čeprav smo ugotovili, da ima ta laktam nekoliko destabilizimi učinek na a-vijačnico.
Natančneje so receptorske vezavne študije PTH fragmentov pokazale glavno vezavno regijo znotraj ostankov 14-34.1 Predlagali smo, da se α-vijačnica ostankov 17-29 veže kot taka na PTH receptor in da se ampifilni delež te α-vijačnice veže s svojim hidrofobnim licem na receptor. Ta model je v skladu z rezultati študije receptorskih •J vezavnih regijskih analogov. .
NMR študije so pokazale, da celo modelni peptid, za katerega smo s CD tudi ugotovili, da je zelo vijačen, tudi naseljuje mnoge nevijačene konformacije. Tako strukture receptorsko vezanega peptidnega hormona, kot PTH, ne moremo zanesljivo povzeti iz njegove proste strukture v raztopini. Omejene analoge peptidnih hormonov
Λ smo uporabili za omejitev števila konformacijskih stanj, ki so na razpolago peptidu . Preiskava sekvence od hPTH razkrije 3 možne solne mostove znotraj ostankov 17-29, ki bi lahko bodisi stabilizirali ali destabilizirali α-vijačnico. Ti so med Glu22 in Lys26 ter Lys in Asp od obojih pa se pričakuje, da stabilizirajo α-vijačnico, in med Lys in Asp30, pričakuje pa se, da destabilizira α-vijačnico.4 Laktamska tvorba med temi pari ostankov bi omejila konformacije, razpoložljive za hPTH v tej vijačni regiji. Nadalje sta dva od teh laktamov, Glu - Lys in Lys - Asp , za katere se pričakuje, da stabilizirata α-vijačno strukturo, nameščena na polarnem licu ampifilnega deleža avijačnice. Za tretjega, Lys - Asp , se pričakuje, da vsaj delno destabilizira avijačnico in vključuje ostanek Lys27, ki je na hidrofobnem licu ampifilne vijačnice. Ciklizacija, kot med legama 25 in 29, se lahko tudi pojavi, če Lys ali Om nadomesti Arg v legi 25 in če Gin nadomestimo z Glu ali Asp.
Rezultat nadomestitve Lys27 z Leu je bolj hidrofoben ostanek na hidrofobnem licu ampifilne vijačnice. Posledica tega je povečana adenilil ciklazna stimulima aktivnost v ROS celični liniji. Strokovnjaki na tem področju bodo upoštevali, da bi bil rezultat drugih takih substitucij, obravnavanih zgoraj, po vsej verjetnosti analogi z isto aktivnostjo ali povečano aktivnostjo.
Pričakuje se, da kombiniran učinek substitucije in vsake laktamske tvorbe stabilizira α-vijačnico in poveča bioaktivnost ter zaščiti regijo molekule pred proteolitsko razgradnjo. Prisotnost amida pri C-terminusu je prednostna v tem smislu, da se nadalje pričakuje, da ščiti peptid proti eksoproteolitski razgradnji, čeprav jih lahko nekatere peptidaze hidrolizirajo (Leslie, F.M. and Goldstein, A. (1982) Neuropeptides 2, 185196).
Ugotovili smo tudi, da lahko s pridom izvedemo druge amino kislinske substitucije. Specifično smo za oksidacijo občutljiv Met ostanek pri legah 8,18 nadomestili z naravno nastopajočim hidrofobnim ostankom, Nle, v skladu z japonsko patentno objavo 61-24598. Pričakovati je tudi, da bi bili koristni tudi drugi taki hidrofobni ostanki, kot Leu, Ile, Val, Phe in Trp, kot v USP 5,393,869, Nakagawa et al.
Mišljeni so tudi reverzni laktami. Pokazali smo npr. učinkovitost Lys22-Glu26 preklopa. Zato je pričakovati, da lahko s pridom naredimo podobne preklope, kot med 26-30 in 27-30 laktami.
Naredili smo drugo substitucijo pri prednostnem 22-26 Iaktamskem mestu poleg preje omenjene Cys-Cys, t.j. Asp22-Om26, da smo pokazali, da lahko s pridom naredimo različne ciklizacijske/obročne velikosti.
V USP 5,393,869, Nakagawa et al in USP 5,434,246, Fukuda et al, so poročali, da imajo nekateri substituirani hPTH analogi znatno AC aktivnost in imajo lahko povečane stabilnosti za proteolitski napad, specifično
1. Ser-1 do Aib (α-aminoizomaslena kislina)
2. Lys-27 do Gin (poročajo, da ima 2,5 x AC aktivnost)
3. Ostanki 14, 15, 16, 17 do Lys, v celoti ali delno (za katere poročajo, da zelo povečajo aktivnost - do 8X. To je lahko zaradi povečanja vodotopnosti. Za le-te se pričakuje, da so in vivo bolj labilni za tripsinu podobne encime). Za zaščito predlagajo ta tetrapeptid (ostanki 14-17 vključno), tako daje vsaj ena vodotopna amino kislina. Npr. His-14 ali Lys-14; Leu-15, Lys-15 ali Arg-15; Asn-16, Om-16, Hci (homocitrulin)-16, Asp-16, Arg-16, Lys-16, DLys-16, Ser-16 ali Gly-16; in 17-Ser, 17-Lys, 17-Asp ali 17-Arg. Lahko bi tudi vljučeval npr. Glu.
4. Arg 25 do His za minimiziranje proteaznega napada. Ker lahko naši laktami, zlasti z Leu ali drugo hidrofobno amino kislino pri legi 27, postanejo nekako netopni in tudi težki za raztapljanje, bi bilo pričakovati, da bi bile iste substitucije koristne pri naših laktamih.
Strokovnjaki na tem področju bodo tudi upoštevali, da čeprav so lahko prednostni 131 h-PTH cikliki, je iz tukaj predstavljenih podatkov pričakovati, da bodo učinkoviti tudi ciklični fragmenti v območju od 1-30 do 1-37. V literaturi zlasti ni dokaza, da prisotnost dodatnih amino kislin do 37 prizadene biološke lastnosti hormona, zlasti če upoštevamo tukaj vključene potrditvene 1-34 podatke.
Laktame v smislu izuma lahko pripravimo z znanimi postopki, ki so opisani spodaj, in jih lahko uporabimo za stimuliranje rasti kosti, za obnavljanje kosti in za pospeševanje zdravljenja kosti v različnih okoliščinah, kot pri zdravljenju osteoporoze in normalnih zlomov.
Kratek opis risb
Sl. 1 kaže strukturo naravnega humanega PTH, ostanki 1-31 (SEQ ID NO:1);
Sl. 2 kaže strukturo [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO;3);
Sl. 3 kaže strukturo [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO:4);
Sl. 4 kaže aktivnosti analogov v smislu izuma pri adenilil ciklazni stimulaciji ROS 17/2 celic;
Sl. 5 kaže reprezentativne histološke sekcije kosti, preparirane pri koncu 8 tednov po OVX, in ilustrira različne sposobnosti hPTH-(l-31)NH2 in njegovih laktamskih derivatov za preprečevanje izgube kosti in za stimuliranje rasti kosti pri ovariektomiziranih (OVX) Sprague-Dawley podganah;
Sl. 6 kaže trabekulami kostni volumen kontrolnih živali in živali, obdelanih s hPTH analogom, za podgane, z resnim pomanjkanjem kostne mase na začetku. Zdravljenje živali seje začelo 9 tednov po OVX. [Leu27]ciklo[Glu22-Lys26]hPTH-(l-31)-NH2 je bil najbolj učinkovit od fragmentov in je obnovil kosti do vrednosti pri normalnih kontrolnih podganah; in
Sl. 7 kaže trabekulame debeline stegen podgan za normalne živali, ovariektomizirane (OVX) živali, simulacijo in živali, obdelane s hPTH-(l-31)-NH2, [Leu27]ciklo(Glu22Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 in [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2;
Sl. 8 kaže maksimalen padec krvnega tlaka (BP oz. bp) in čas do maksimalnega padca krvnega tlaka pri dodatku 0,8 nmol/100 g doze hPTH-(l-31)-NH2, [Leu27]ciklo(Glu22Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 ali [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2. Peptide smo dajali bodisi subkutano (bel stolpič) ali intravensko (šrafiran stolpič).
Sl. 9 kaže strukturo [Leu27]-hPTH-( 1-31)-NH2(SEQ ID NO:5).
Sl. 10 kaže strukturo ciklo (Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2(SEQ ID NO:6).
Sl. 11 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (SEQ ID NO:7).
Sl. 12 kaže adenil ciklazne stimulime aktivnosti različnih analogov v smislu izuma.
Sl. 13 kaže hipotenzivne učinke hPTH(l-31)NH2 in hPTH(l-30)NH2 in njihovih cikličnih analogov.
S. 14 je graf, ki prikazuje učinek različnih doziranj linearnega hPTH(l-31)-NH2 na rast kosti (BW = telesna teža).
Sl. 15 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-OH (Seq. ID No:8)
Sl. 16 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-34)-NH2 (Seq. ID No:9)
Sl. 17 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-34)-OH (Seq. ID No: 10)
Sl. 18 kaže strukturo [Ala27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 11)
Sl. 19 kaže strukturo [Nle27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 12)
Sl. 20 kaže strukturo [Nle818, Leu27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 13)
Sl. 21 kaže strukturo ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 14)
Sl. 22 kaže strukturo [Ile27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 15)
Sl. 23 kaže strukturo [Tyr27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 16)
Sl. 24 kaže strukturo a-actil-[Leii27] ciklo (Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 17)
Sl. 25 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Lys22-Glu26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 18)
Sl. 26 kaže strukturo [Leu27] ciklo (Asp22-Om26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No: 19)
Sl. 27 kaže strukturo [Cys22; Cys26; Leu27] ciklo (Cys22-Cys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. ID No:20)
Sl. 28 kaže strukturo [Cys26; Cys30; Leu27] ciklo (Cys26-Cys30)-hPTH-(l-31)-NH2 (Seq. IDNo:21).
Priprava hormonskih analogov
Tehnika sinteze peptidov v trdni fazi, ki jo je razvil R.B. Merrifield (Solid-Phase Peptide Synthesis, Advances in Enzymology 32, 221-296, 1969), tukaj vključeno kot referenca, se na široko in uspešno uporablja za sintezo polipetidov, kot paratiroidnega hormona. Strategija bazira na tem, da je amino kislina na karboksilnem terminusu peptida fiksirana na trdno podlago. Nato dodajamo zaporedne amino kisline v visokem dobitku. N-terminalna α-amino kislina je zaščitena tako, da lahko to zaščitno skupino odstranimo brez odstranitve peptida s trdne podlage. Tukaj uporabljena kemija obsega modifikacijo originalne Merrifieldove metode, poimenovane Fmoc pristop. Fmoc (fluorenilmetoksikarbonilno) skupino lahko odstranimo ob milih alkalnih pogojih, tako da so v alkalijah stabilne stransko-verižne skupine in vez do podlage nedotaknjene. Ta tehnika je opisana v E. Atherton in R.C. Sheppart, Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach, IRL Press, New York, Ν.Υ., kar je tukaj vključeno kot referenca.
PRIMER 1
Sinteza in čiščenje linearnih hPTH-(l-3 l)-amidnih analogov α-amino skupine amino kislin zaščitimo med pripajanjem z 9fluorenilmetoksikarbonilom (Fmoc). Pripajanja izvajamo z zmesjo hidroksibenzotriazola (HOBt), 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,l,3,3,-tetrametiluronijevega tetrafluoroborata (TBTU) in diizopropiletilamina (DIPEA). 4-kraten prebitek aktiviranih amino kislin uporabimo z dvojnim pripajanjem pri dodatku Asn, Gin, His, Val in Ile ostankov. Pripajalne čase za Arg in Gly adicije povečamo od 30 na 60 minut. Pripajanje prvega ostanka (Val ) na podlago (Tentagel R, Rapp Polymere, Tubingen, Nemčija izvedemo ročno. Vse druge stopnje izvedemo na avtomatiziranem sintetizatorju peptidov PerSeptive Biosystems* Model 9050 Plus. Stransko verižne zaščite so naslednje: Arg (2,2,5,7,8-pentametilkroman-6-sulfonil); Glu, Asp in Ser (tbutil); His, Gin in Asn (tritil); Trp (t-butiloksikarbonil).
Po Fmoc odstranitvi z N-terminalnega Ser izperemo peptidno smolo z DCM, nato cepimo od smole s stresanjem s 7,5 ml reagenta K (6,19 ml TFA, po 0,38 ml vode, 90% fenola/vode in tioanizola in 0,19 ml 1,2-etanditiola) 4 ure pri 20 °C. Odcepljeno peptidno zmes odstranimo s filtracijo in oborimo z dodatkom k t-butil-metiletru. Oborino zberemo s centrifugiranjem, 2-krat izperemo s t-butil-metiletrom, nato posušimo z vakuumskim centrifugiranjem.
Surovi produkt raztopimo v 14 ml 15% acetonitrila/vode, 0,1% TFA in kromatografiramo na Vydac Cig-koloni (10 μ, 1 x 25 cm). Produkt eluiramo z 1%/min gradienta acetonitrila (14-40%) v 0,l%TFA v vodi. Čistoto končnega produkta določimo z analitsko HPLC na Vydac* C]8 koloni (10 μ 0,4 x 25 cm) in s testom molekulske mase na elektrosprejnem masnem spektrometru (VG Quattro). Podatki za tako nastali hPTH-(l-31)-NH2 so podani v tabeli 1 spodaj.
PRIMER 2
Sinteza in čiščenje cikličnih analogov [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2. Ta peptid sintetiziramo, kot je opisano za primer 1, z Lys-Alloc in Glu-OAU, substituiranih pri legi 26 oz. 22. Po dodatku Fmoc-Ser odstranimo peptid-smolo s kolone v reakcijsko fiolo (Minivial, Applied Science), suspendiramo v 1,7 ml raztopine tetrakis(trifenilfosfm)paladija(0) (0,24 mmol), 5% ocetne kisline in 2,5% N-metilmorfolina (NMM) v diklorometanu (DCM) pod argonom, nato stresamo pri 20 °C 6 ur, da odstranimo alilne in alloc zaščitne skupine (Sole, N.A. et al (1993) In Peptides: Chemistry, Structure, and Biology, Smith, J. And Hodges, R. (Eds), ESCOM str.: 93-94), kar je tukaj vključeno kot referenca. Peptidno smolo nato izperemo z 0,5% dietilditiokarbamatom (DEDT), 0,5% NMM v DMF (50 ml), nato pa z DMF (50 ml) in DCM (50 ml). Peptid (0,06 mmol) cikliziramo s stresanjem z 0,06 mmol l-hidroksi-7-azabenzotriazola (HOAt) / 0,12 mmol NMM v 2 ml DMF 14 ur pri 20 °C (Carpino, L.A. (1993) J. Am. Chem. Soc. 115, 4397-4398). Peptid-smolo filtriramo, nato enkrat izperemo z DMF, ponovno pakiramo v kolono in spiramo z DMF, dokler se iz suspenzije ne odstranijo mehurčki. Preostalo sintezo izvedemo kot v primeru 1, razen da ne odstranimo N-terminalne Fmoc skupine. Fmoc-peptid odcepimo s smole z reagentom K, kot je opisano zgoraj. HPLC izvedemo kot v primeru 1, pri čemer Fmoc skupino odstranimo pred končno HPLC. Analog [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 pripravimo na analogen način.
PRIMER 3
Adenilil ciklazni testi
Sposobnost hPTH analogov, da se vežejo na receptorje in aktivirajo z adenilil ciklazo povezan signalni mehanizem, določimo na diferencicijsko kompetentni, osteoblastom podobni ROS 17/2 podganji osteosarkomski (ROS) celični liniji. Za to aktivnost je znano, da je tesno povezana s sposobnostjo analoga, da obnovi kostno maso pri ovariektomizirani podgani. Adenilil ciklazno stimulimo aktivnost določimo s predhodnim markiranjem celičnega ATP poola s [3H]-adeninom in nato z merjenjem količine [3H]-cikličnega AMP, proizvedenega iz [3H]-ATP v prvih 10 minutah izpostavljanja določenemu analogu. To bazira na postopku, kije opisan v Whitfield et al, J. Cellular Physiology 150, 299-303, 1992, vključeno tukaj kot referenca.
Adenilil ciklazni rezultati so izraženi v spodnji tabeli 2 kot koncentracija, ki je potrebna za ekspresijo polovično maksimalnega povečanja AC aktivnosti. Podatek je tudi prikazan na sl. 4. Na sl. 4 kažejo črni krožci adenilil ciklazno stimulimo aktivnost hPTH-(l-31)-NH2, aktivnosti [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 oz. [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 pa so prikazane z belimi oz. črnimi trikotniki.
PRIMER 4
Določitev anaboličnih aktivnosti hPTH analogov z modelom ovariektomizirane podgane
Doziranja:
Doze bazirajo na podatkih doza-odziv na hPTH(l-31)-NH2. Sposobnost hPTH-(l31)NH2 za gradnjo kosti testiramo ob uporabi več doz (0,8; 0,6, 0,4 in 0,2 nmol/100 g telesne teže) in regenerativnega modela ali modela za ocenitev obdelave, ne pa preventivnega modela. Ovariektomizirane podgane, stare 3 mesece, pustimo 9 tednov, da postane večinoma nelamelna femoralna trabekulama kost resno depletirana, preden začnemo s 6 tedni dnevnih injekcij. Na koncu devetega tedna so izgubile okoli 75% svoje femoralne trabekulame kostne mase. Slika 14 kaže od doze odvisno povečanje povprečnih trabekulamih debelin, povzročenih z lamelnim nalaganjem, ki ga je proizvedlo 36 injekcij 4 različnih doz fragmenta. Fragment bi lahko tudi stimuliral trabekulamo kostno rast pri mnogo starejših podganah. Tako je bilo s 36 injekcijami doze srednjega območja 0,6 nmol/100 g telesne teže hPTH-(l-31)NH2 mogoče znatno povečati povprečno trabekulamo debelino nad normalno začetno vrednostjo pri predhodno depletirani (9 tednov po OVX) femoralni trabekulami kosti enoletnih podgan in to je bilo narejeno tako učinkovito kot s hPTH-(l-84). Ustrezno smo uporabili v nadaljnjih testih doziranje 0,6 nmol/100 g telesne teže.
Popolen opis protokola je podan v Rixon et al, J. Bone & Mineral Research 9, 11791189, 1994, in Whitfield et al Calcif, Tissue Int. 58, 81-87, 1996, tukaj vključeno kot referenca. Normalne, simulacijske-OVX (ovariektomizirane) in OVX Sprague-Dawley podgane (stare 3 mesece; 255-260 g) smo dobili od Charles River laboratories (St.Constant, QC). Podgane smo naključno porazdelili v skupine 8 živali, ki so prejele Purina hrano za podgane in vodo ad libitum. Ni bilo nepredvidenih smrti. Živali so prejele 6, enkrat dnevno, subkutanih injekcij/teden, začenši pri koncu drugega tedna po OVX, končali pa smo pri koncu osmega tedna po OVX (t.j. 36 injekcij). Osem simulacij skih-OVX in 8 OVX kontrolnih podganje prejelo 36 injekcij vehikla (0,15 M NaCl, kije vseboval 0,00 IN HCI), 8 OVX podgan pa je prejelo 0,6 nmol fragmenta v vehiklu/100 g telesne teže. Po koncu 8 tednov po OVX smo stegno odstranili, izolirali, očistili in prerezali na pol pri srednji diafizi in zavrgli proksimalno polovico. Po odstranitvi epifize smo vsako pol stegno razcepili po dolžini v dva dela in kostni mozeg izplaknili.
Sposobnosti fragmentov za gradnjo kosti smo ocenili iz sprememb povprečnih debelin (površina/perimeter) trabekul v distalnih pol-stegnih od različno obdelanih živali. Za merjenje povprečne trabekulame debeline smo obe demineralizirani pol-stegni vsake podgane dehidratizirali in vdelali v parafin. Odrezali smo longitudinalne 10 pm sekcije od srednje ravnine vsake kosti in nato obarvali s Sandersonovo hitro kostno barvo (Surgipath Medical Industries, Inc., Winnipeg, MB, Canada). Povprečno trabekulamo debelino smo merili ob uporabi M4 slikovnega sistema in kostnega morfometričnega softvera od Imaging Research Inc., (St. Catherines, ON, Canada).
Reprezentativne histološke sekcije kosti, pripravljene na koncu osmih tednov po OVX, so prikazane na sl. 5. Rezultati so nadalje prikazani v obliki stolpičnega grafa na sl. 7. Stolpiči kažejo vrednosti za trabekulamo debelino normalnih, ovariektomiziranih (OVX), simulacijskih, hPTH-(l-31)-NH2, [Leu27]ciklo(Glu22Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 in [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2. [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 kaže posebno boljšo aktivnost v primerjavi z linearnim analogom hPTH-(l-31)-NH2, Pokazalo seje, daje ta linearni analog popolnoma aktiven pri obnavljanju kosti, uporablja pa le eno celično signalizacij sko (AC-aktivirano) pot. Tako pričakujemo, da imajo ti ciklični analogi, podobno kot njihovi linearni analog, manj neželenih kliničnih stranskih učinkov kot njihovi daljši ekvivalenti, kot hPTH-(l-34) ali hPTH-(l-84), ki aktivirajo oba celična signalizacij ska mehanizma.
PRIMER 5
Obnovitev kosti pri podganah z resno depletirano trabekulamo kostjo s hPTH analogi.
V tem drugem primeru obnavljanja kosti primerjamo sposobnosti laktamskih fragmentov za obnavljanje resno depletirane trabekulame kosti. Pri tem poskusu smo zadržali 6-tedenski program injekcij enkrat dnevno 0,6 nmol peptida/100 g telesne teže mladih, spolno zrelih podgan do konca devetega tedna po OVX. V tem času se je izgubilo 75% njihove trabekulame kosti. Kot lahko vidimo na sl. 6, je bil [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 najbolj učinkovit od fragmentov. Obnovil je trabekulami kostni volumen do vrednosti pri normalnih kontrolnih podganah.
PRIMER 6
Hipotenzivni učinki hPTH analogov
Samice podgan Sprague-Dawley (s težo nad 290 g) smo anestetizirali z intraperitonealno injekcijo natrijevega pentobarbitala (65 mg/kg telesne teže). Rektalno temperaturo smo kontrolirali z YSI402 termistorjem (Yellow Springs Instrument Co., Inc. Yellow Springs, OH) in vzdrževali med 36,0 in 38,5 °C med poskusom. Kontrolirali smo tudi temperaturo ušesnega uhlja ob uporabi YSI banjo termistorja. Repno arterijo smo eksponirali in kanulirali s katetrom Jelco 25-gIV (Johnson and Johnson Medical Inc., Arlington, TX) in priključili na Stathamov tlačni tranducer, signale iz njega pa smo snemali digitalno z Biopac Systems MP100 Monitor (Harvard Instruments, Saint Laurent, QC, Kanada). Za intravensko injekcijo PTH ali enega od njegovih fragmentov smo eksponirali tudi femoralno veno. Po operaciji smo pustili, da se je podgana stabilizirala 8 minut, nakar smo v femoralno veno ali pod kožo trebuha injicirali PTH ali enega od njegovih fragmentov (raztopljen v nakisani fiziološki raztopini kuhinjske soli, ki je vsebovala 0,001 N HCI). Podatke smo zbirali 12 minut po intravenski injekciji ali 22 minut po subkutani injekciji. Sl. 8 kaže maksimalen padec krvnega tlaka in čas do maksimalnega padca pri dodatku doze 0,8 nmol/100 g [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 ali [Leu27]ciklo(Lys26Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 za dajanje bodisi subkutano (bel stolpič) ali intravensko (šrafiran stolpič). [Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 analog kaže povečano biorazpoložljivost v primerjavi z [Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2. To je indicirano z mnogo krajšim časom, potrebnim za padec do minimalnega krvnega tlaka po subkutani injekciji. Oba ciklična analoga kažeta povečane hipotenzivne učinke, kadar ju injiciramo subkutano, v primerjavi s hPTH-(l-31)-NH2. Tako se pričakuje, da ima vsak cikličen laktamski analog, kadar ga injiciramo subkutano, več zaželenih lastnosti kot linearni ekvivalent. Te vključujejo večje biorazpoložljivosti, ki so posledica povečane odpornosti na proteaze, in/ali povečane sposobnosti za transportiranje iz lipidnih okolij. Slednje bi bilo lahko posledica stabilizacije ampifilne vijačnice blizu C-terminusa hormona.
Nadaljnji rezultati:
Za namen teh rezultatov identificiramo peptide, kot sledi:
hPTH-(l-31)-NH2 (1); [Leu27]-hPTH-(l-31)-NH2 (2) (sl. 9);
[Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (3) (sl. 2);
[Leu27]ciklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (4);
ciklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH25) (sl. 10);
hPTH-(l-30)-NH2 (6);
[Leu27]-hPTH-(l-30)-NH2 (7);
[Leu27]ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (8).
Adenilil ciklazne aktivnosti
Predhodno smo poročali, daje [Leu' ]-hPTH-(l-34)-NH2 bolj aktiven pri stimuliranju
AC aktivnosti v ROS celični liniji kot hPTH-(l-34)-NH<. Ugotovili smo tudi, daje peptid 2 (EC50, 11,5 ± 5,2 nM) bolj aktiven kot nativna sekvenca 1, (EC50, 19,9 ± 3,9 nM) (sl. 12). Prikazani so peptidi 1 (·); 2(D); 3(Δ) 4( A ) 5(0). Laktamska tvorba med Glu in Lys‘ (3) je inducirala še večjo AC-stimulimo aktivnost z vrednostmi EC50
3,3 ± 0,3 nM (sl. 12). Tako je čisti učinek te ciklizacije in nadomestitve Lys27 z Leu okoli 6-kratno povečanje aktivnosti. Nasprotno pa je bila posledica laktamske tvorbe med bodisi Lys in Asp (4) ali Lys in Asp (5) zmanjšanje adenilil ciklazne stimulacije glede na njihove starševske linearne sekvence. Tako ima 26-30 laktam (4) rahlo manjšo aktivnost kot njegova linearna oblika, z EC50 17,0 ± 3,3 nM proti 11,5 ± 5,2 nM za 2. 27-30 laktam (5) bolj opazno zmanjša aktivnost starševskega linearnega peptida, pri čemer ima EC50 40,3 ± 4,4 nM v primerjavi z 19 ± 3,9 nM za 1.
Preje smo poročali, da ima hPTH-(l-30)-NH2 (6) AC-stimulimo aktivnost (EC50, 20 nM), blizu tiste analoga 1. Sedaj smo ugotovili, da imata [Leu ]-hPTH-(l-30)-NH2 (7) in ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (8) (sl. 11) podobni AC-stimulimi aktivnosti kot peptid 6.
Hipotenzivni učinki:
Sl. 13 kaže hipotenzivni učinek linearnih (6 in 7) in cikličnih laktamskih analogov (3 in 8). Prikazani so maksimalni padci krvnega tlaka (zgoraj), dobljeni s tem, da damo podgani injekcijo 0,8 nmol/100 g telesne teže analoga, in čas, ki je potreben, da dosežemo maksimalni padec krvnega tlaka (spodaj). Analoge (od leve proti desni, peptidi 8, 7, 6, 3) injiciramo bodisi intravensko (zasenčen stolpič) ali subkutano (bel stolpič). Do odstranitve Val31 je prišlo v vseh analogih 6, 7 in 8 s signifikantno (p<0,05) zmanjšanimi hitrostmi transporta subkutano injiciranih peptidov v vaskulami sistem (sl. 13). Dejanski padci celotnega krvnega tlaka peptidov 6 in 8 pa vseeno niso bili signifikantno različni (p>0,05) od tistih drugih analogov, dajanih subkutano ali intravensko, z izjemo peptida 5.
TEST KORELACIJE HIPOTENZIVNEGA UČINKA Z OSTEOGENIČNO
AKTIVNOSTJO
Kot je opisano v Primeru 6 in prikazano na sl. 8, hiter hipotenziven učinek, ki smo ga opazili po subkutani injekciji hPTH analogov, korelira z osteogenično aktivnostjo. Torej je test koristen za skriniranje hPTH analogov kot kandidatov za osteogenični učinek in za izločitev ne-hipotenzivnih konstruktov, ne da bi bilo treba žrtvovati laboratorijske testne živali.
Kot ozadje smo uporabili edinstveno serijo osteogeničnih in neosteogeničnih AC-, AC/PLC-, ali PLC-aktivimih PTH fragmentov za definiteven dokaz, da le AC stimulacija zmanjša krvni tlak, in za primerjavo hipotenzivnih učinkov teh fragmentov, kadar jih injiciramo subkutano ali intravensko samicam podgan. Pokazali smo, da hipotenzivni odziv sprožijo le AC-ali AC/PLC-stimulimi fragmenti in da je relativno majhen hipotenzivni odziv na subkutano injekcijo in ne mnogo večji odziv na intravensko injekcijo, ki korelira z osteogeničnimi aktivnostmi hPTH-(l-31)-NH2, hPTH-(l-34) in hPTH-(l-84) pri OVX-podganah, ne pa hPTH-(l-30)-NH2, ki stimulira AC in zmanjša krvni tlak, ne stimulira pa tvorbe kosti.
Specifično so hPTH-(l-84) in njegovi hPTH-(l-34), hPTH-(l-31)-NH2 in hPTH-(l30)-NH2 fragmenti reducirali tlak v repni veni pri anestetiziranih samicah podgan Sprague-Dawley za 42,4-67,1% v okoli 1 minuti po injekciji v femoralno veno, vendar so zmanjšali tlak le za 8,5-36,2% 2-19 minut po subkutani injekciji. hPTH-(l-84) in hPTH-(l-34) stimulirata tako adenilil ciklazo kot tudi fosfolipazo-C v njihovih ciljnih celicah, hipotenzivni učinek pa je moral biti stimuliran specifično z adenilil ciklazno aktivacijo, ker sta bila hPTH-(l-30)-NH2 in hPTH-(l-31)-NH2, ki lahko stimulirata le adenilil ciklazo, močno hipotenzivna, ko smo ju injicirali intravensko, medtem ko hPTH-(7-84), ki lahko stimulira le fosfolipazo C, ni bil signifikantno hipotenziven, ko smo ga injicirali intravensko. Ker adenilil ciklazna stimulacija tudi mediira osteogenični učinek od PTH, smo pričakovali, da bi lahko hipotenzivni odziv uporabili za skriniranje novih PTH konstruktov za možno osteogeničnost. Dejansko so osteogenične aktivnosti subkutano injiciranih hPTH-(l-31)-NH2, hPTH-(l-34) in hPTH-(l-84) tesno korelirale z njihovimi hipotenzivnimi aktivnostmi, pri čemer je bil hPTH-(l-34) močno bolj hipotenziven in drugi dve molekuli znatno bolj. hPTH-(l20
31)NH2 in hPTH-(l-84) sta bila enako osteogenična in hipotenzivna. Vendar seje ta korelacija porušila s hPTH-(l-30)-NH2, ki stimulira AC skoraj tako močno kot hPTH(1-31)-NH2 in hPTH-(l-34) in zmanjšuje krvni tlak tako močno kot hPTH-(l-31)NH2, vendar ne stimulira tvorbe kosti. Kljub temu pa je sposobnost za signifikantno zmanjšanje arterijskega tlaka skupna lastnost osteogeničnih PTH in PTH fragmentov in je tako hitro določljiv preliminarni indikator in vivo bioaktivnosti PTH fragmentov.
Natančneje sta bila oba hPTH-(l-34) in hPTH-(l-31)-NH2 maksimalno hipotenzivna pri 0,8 nmol/100 g telesne teže.
Ta hipotenzivni odziv je spremljala prehodna (20-30 minut) pordelost ušes in tačk podgan, kar se lahko smatra kot koristen vizualni kvalitativni marker.
Čeprav so bili AC- ali AC/PLC-stimulimi fragmenti močno hipotenzivni, kadar smo jih injicirali intravensko, je intravenska injekcija 0,8 nmol/100 g telesne teže hPTH-(784), ki lahko stimulira le PLC, zelo počasi (9,8 ± 2,0 minut) in le zelo rahlo, zmanjšala tlak v repni arteriji za 3,28 ± 1,0 mm Hg v primerjavi s takojšnjim (0,9 ± 0,08 minut) zmanjšanjem 43,2 ± 5,8 mm Hg, ki gaje povzročil AC/PLC-stimulimi hPTH-(l-84) ali enako takojšen padec 51,6 ± 3,3 mm Hg, ki gaje povzročil AC stimulimi hPTH-(l31)NH2.
Ena subkutana injekcija AC- ali AC/PLC stimulimega fragmenta je povzročila mnogo počasnejše in manjše zmanjšanje tlaka v repni arteriji kot intravenska injekcija enake doze. Npr. 0,8 nmol/100 g telesne teže hPTH-(l-34) je zmanjšalo tlak le za 27,9 ± 3,6 mm Hg, kadar smo ga injicirali subkutano, v primerjavi s 50,9 ± 5,6 mm Hg, kadar smo ga injicirali intravensko. Ista doza hPTH-(l-31)NH2 je zmanjšala krvni tlak le za
11,1 ± 1,6 mm Hg, kadar smo injicirali subkutano, v primerjavi z 51,6 ± 3,3 mm Hg, kadar smo injicirali intravensko.
Ni bilo znatne razlike med hitrimi in velikimi zmanjšanji tlaka v repni arteriji, ki gaje povzročila intravenska injekcija hPTH-(l-84), hPTH-(l-34) in hPTH-(l-31)-NH2, vendar je bil hPTH-(l-34) vsaj dvakrat tako učinkovit (P<0,01) kot drugi dve molekuli, kadar smo injicirali subkutano.
Eden od faktorjev, ki vpliva na hipotenzivni učinek in osteogeničnost subkutano injiciranega PTH ali PTH fragmenta je njegova sposobnost, da se premakne, ne da tn se deaktiviral, z mesta injekcije na njegove cilje najprej v vaskulaturi in nato v kosti. Ta sposobnost se odraža v Času, ki je potreben, da pade tlak v repni arteriji na svojo minimalno vrednost po injekciji. Skrajšanje PTH molekule C-terminalno od 84 na 31 ostankov je eliminiralo sposobnosti mutiranja PLC brez zmanjšanja sposobnosti stimulirane AC in je devetkrat skrajšalo čas, potreben za to, da je tlak v repni arteriji dosegel svoj minimum. Odstranitev še enega ostanka, da smo dobili hPTH-(l-30)NH2, je dramatično podaljšala čas, potreben za to, da je krvni tlak padel na svoj minimum od 2,0 ± 0,31 minut v primeru hPTH-(l-31)NH2 do 13,8 ± 2,3 minute. Vendar je pomembno omeniti, da hPTH-(l-31)NH2 ni potreboval nič več časa za zmanjšanje krvnega tlaka kot hPTH-( 1-84).
Uporaba hPTH-(l-31)NH2 v predloženi študiji, prvega PTH konstrukta, ki je sposoben stimulirati AC ravno tako močno kot hPTH-(l-34) brez aktiviranja PLC in stimuliranja membransko povezane PKC aktivnosti, je sedaj zagotovila najbolj direkten dokaz, da je hipotenzivni učinek PTH v celoti zaradi AC aktivacije. Tako, čeprav intravenska injekcija 0,8 nmol/100 g telesne teže hPTH-(7-84), ki lahko stimulira samo PLC/PKC, ni znatno vplivala na tlak v repni arteriji, je intravenska injekcija iste doze hPTH-(l31)NH2 znižala tlak prav toliko kot hPTH-(l-34).
Ker AC tudi mediira PTH-inducirano stimulacijo kortikalne in trabekulame kostne tvorbe pri OVX podganah, je videti, da je sproženje hipotenzivnega odziva pri intaktnih samicah podgan preprost, hitro merljiv indikator možne osteogeničnosti PTH konstrukta. Po drugi strani bi nesposobnost zmanjšanja arterijskega tlaka eliminirala fragment za nadaljnje ocenjevanje in bi se s tem izognili nepotrebnim, dragim, dolgotrajnim testom osteogeničnosti pri OVX podganah. Hipotenzivni odzivi na intravensko injekcijo PTH niso bili korelirani z osteogeničnostmi. Vendar so se mnogo manjši hipotenzivni odzivi na subkutano injicirane hPTH-(l-31)NH2, hPTH(1-34) in hPTH-(l-84) ujemali z osteogeničnostmi teh molekul, pri čemer ima hPTH(1-34) najmočnejši hipotenzivni in osteogenični učinek, drugi dve molekuli pa sta vsaka enako učinkoviti, vendar manj učinkoviti kot hPTH-(l-34), pri zmanjšanju krvnega tlaka in stimuliranju tvorbe kosti. Toda ta korelacija se je porušila s hPTH(l-30)NH2, ki stimulira AC skoraj tako močno kot hPTH-(l-31)NH2 in hPTH-(l-34) in zmanjša krvni tlak prav toliko kot hPTH-(l-31)NH2, vendar ne stimulira tvorbe kosti11. Razlog za to pomanjkanje osteogeničnosti ni znan. Ne more biti le zaradi subkutano injiciranega hPTH-(l-30)NH2, ki potrebuje več časa za zmanjšanje krvnega tlaka, ker subkutano injiciran hPTH-(l-84) potrebuje enak čas za zmanjšanje krvnega tlaka, vendar je močno osteogenicen. Očitno je osteogenični odziv odvisen od mnogih različnih faktorjev, ki se kombinirajo, da omogočajo prihod z mesta injekcije zadosti aktivnega hormona ali hormonskega fragmenta pri ciljnih PTH receptoreksprimirajočih zrelih osteoblastih. Nesposobnost AC-stimulimega, krvni tlak zmanjšujočega hPTH-(l-30)NH2 za stimuliranje tvorbe kosti bi lahko bila rezultat kombinacije večje nestabilnosti, rahlo višje EC50 za AC stimulacijo, t.j. 20 nM namesto 16 nM za hPTH-(l-31)NH2 in hPTH-(l-34), in dolga doba za vstop v cirkulacijo z mesta injekcije.
Kljub nesposobnosti hPTH-(l-30)NH2, da bi bil osteogeničen, je sposobnost, da znatno zmanjšajo arterijski tlak, še vedno skupna lastnost osteogeničnih PTH in je zato hitro določljiv indikator možne in vivo bioaktivnosti PTH fragmentov. Iz tega sledi, da bi moral hipotenzivni odziv tudi služiti kot učinkovit indikator sposobnosti osteogeničnega PTH konstrukta, da doseže svoje cilje po dajanju oralno ali na druge načine brez injekcij,
Neugodje in druge možne posledice hipotenzivne reakcije na vsako injekcijo bi lahko omejile pripravljenost osteoporotičnih pacientov, da bi sprejeli dolgotrajno zdravljenje s PTH ali PTH fragmentom. Na srečo se trenutno za stimuliranje tvorbe kosti uporabljajo intermitentne subkutane injekcije PTH in te molekule so vse mnogo manj hipotenzivne, če jih injiciramo subkutano, kot če jih injiciramo intravensko. Kot smo že tudi predhodno argumentirali6’7, bi imel hPTH-(l-31)NH2 dodatno prednost stimuliranja AC brez stimuliranja PLC in katerihkoli potencialnih, s Ca2+ in PKC mediiranih stranskih učinkov, ki bi jih lahko sprožil.
PRIMER 7
Ciklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (5). Sintezo smo izvedli na način, ki je analogen načinu za [Leu27]-ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2. Produkt ima ocenjeno čistoto >95%, z molekulsko maso 3700,64 (±0,38) (pričakovana M+l = 3700,14). Peptid je bil sekvenciran za potrditev laktamskega položaja.
[Leu27]-ciklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (8). Ta peptid smo sintetizirali kot peptid 3 brez manualnega dodatka Val podlagi. Produkt je imel ocenjeno čistoto >97%, z molekulsko maso 3586,14 (±0,19) (pričakovana M+l = 3685,99).
Analoge v smislu predloženega izuma lahko dajemo toplokrvnemu sesalcu, ki jih potrebuje, zlasti človeku, parenteralno, lokalno ali rektalno ali z inhalacijo ali z oralnim dajanjem. Analoge lahko običajno formuliramo v parenteralni dozirni obliki, pri čemer pomešamo okoli 1 do okoli 300 mg na enoto doziranja z običajnim vehiklom, nosilcem, vezivom, konzervimim sredstvom, stabilizatorjem, barvilom ipd., kot zahteva sprejeta farmacevtska praksa.
Za parenteralno dajanje bi bilo potrebno dajati ne več kot 1-krat dnevno od 1 do 2 let, odvisno od resnosti bolezni, 1 do 2 ml neboleče subkutane injekcije skozi ultra-fmo brizgalno iglo kalibra 30. Injiciran material bi vseboval eno substanco v smislu predloženega izuma v vodni, izotonični, sterilni raztopini ali suspenziji (po želji s konzervimim sredstvom, kot fenolom, ali solubilizimim sredstvom, kot etilendiamin tetraocetno kislino (EDTA)). Izmed sprejemljivih vehiklov in topil, ki jih lahko uporabimo, so voda, rahlo nakisana voda, Ringerjeva raztopina in izotonična raztopina natrijevega klorida. Poleg tega običajno uporabimo sterilna utrjena olja kot topilni ali suspendimi medij. Sintetične monogliceride, digliceride, maščobne kisline (kot oleinsko kislino) uporabimo kot utrjena olja pri pripravi injekcij.
Za rektalno dajanje lahko analoge v smislu predloženega izuma pripravimo v obliki supozitorijev z njihovim pomešanjem s primernim, nedražečim nosilcem, kot so kakavovo maslo ali polietilen glikoli.
Za lokalno uporabo lahko analoge v smislu predloženega izuma pripravimo v obliki mazil, gelov, raztopin, suspenzij ali kožnih lepljivih obližev.
Za inhalacijo lahko to dosežemo npr. na tak način, kot je opisano v PCT objavljeni prijavi št. WO94/07514.
Dnevna doza ne bi smela preseči 0,05 mg/kg telesne teže ali okoli 3,5 mg/70 kg za človeka, v odvisnosti od aktivnosti specifične spojine, starosti, teže, spola in stanj osebka, ki ga zdravimo. Kot je dobro znano, bo količina aktivne sestavine, ki jo lahko kombiniramo z nosilci, da dobimo posamezno doziranje, variirala glede na gostitelja, ki ga zdravimo, in na posamezen način dajanja.
Analoge v naslednjem tabelnem seznamu smo vse pripravili v skladu z zgoraj opisanimi postopki.
rt
C rt >
O rt >o
Έ, s rs r-4 rs m
oo
SO rc os
O\ «n oo »n rc rs
F“H «s >n oo
SO rc
O
O
ΓγΟ rs «s
SO
SO rc rs in r, rc oo
O 'st rs »n rs st o
st st
O rs rc st
SO rc rs iri oo so rc st o
rs
OS 't
SO rc
O
O
Γγο rs in oo so rc rt
CZ) rt rt w
rt rt
C <u >o
JO *o
Ό rC rs
O +1 rrΓ- r-H
Γγο so st rs
O
4d
SO st^ sri oo
SO rc
Os
r.
O +1 in oo •n rc so rc r>
o +1 s_'
SO <n
SO rc oo rc r>
O +1 s_'
St
SO •s o
o γγο r— o
rs
O +1, so
OS.
iri oo so rc rc rc <O +1, rs
SO rc oo
O st
ΓΟΟ θ' +1 st
O t
SO
Γ— <o +1, o
rrs rs 't so rc
Os
OS θ' +1
Γm st so rC
OS m
O in
Os' •St
SO rc os
St θ' +(
SO so rs os
OS
SO rc st
Γ- θ' +1,
SO
Γ- st so ro rc
I
CM
E t
ΓΩ
O rt
C
E
H
E
Molekulske mase PTH analogov
E !2 rc
E
H
Ph σ
E Q
C/5 S
CM
M >s
E
I
CM cm
J3 δ
O ‘o rc
E
H
ΓΊ
Cu
CZ) <
I
Ό
CM
M >s
E 'o
CM <U
E
E 2 s—H rc rc
I
E sp rc
I
E
O
I m
I rc
I
E r-H m
E
H
E i
cn
E w
c so
I
E
H
Ph
M3
Π
CZ) >s i
CM j3 δ
'o
I—
CM ω
E oo
CZ)
E
I
CM
O
E
OS
E
H
S
I s©
CM
CZ)
E
I
M <N δ
'o'
E
H
E
E
H
E £>
CM
CZ)
E
E rc rc
I
M
X
E
I
CM
CM δ
o •
O
I—I Γ1 rt w
>s
E
I
CM
CM
J3 δ
θ' o
r»
CM
O θ' •
O cCM υ
E >c
CM w
>s
E
I <υ c
'o' o
E
E
E
I 'OS <N cz)
J
I rs rs
O o
« fH
O rrs <D rs rc m
Molekulske mase PTH analogov
| Masa (pričakovana) (M+l) | 3735,14 | 3727,12 | 3685,12 | 3657,12 | 3650,1 | 3664,13 |
| Masa (določena) | 3734,47 (±0,80) | 3726,25 (±0,42) | 3684,67 (±0,52) | 3656,90 (±0,67) | 3651,26 ±0,31 | 3663,61 (±0,16) |
| Analog | CS z X— m t—< 1 H S 1 Ό CS ca tJ CS CS 3 'o' 3 o r~ H | cs ffi z Z-*\ m t 1 ffi H S 1 x—\ so CS ca J 1 CS cs J3 3 s 3 • o 1-1 r- CM 3 ω J • S-J υ o «3 1 d | CS ffi z x—\ m 1 r—4 K H £ Ό ^3 3 CS CS ca J s-z o 3 • rH O (—1 r- cs 3 O J U__J | CS ffi z T·^ m 1 J— <-✓ ffl H 52 1 so CS E O 1 cs cs CL W < O 3 o r- (N 3 υ J | cs ffi z /'“‘s T-H ec t T—H S—✓ ffl H S /—*\ SO cs CA O 1 cs cs CA u o T™·* Λί υ r-* cs S J. so CS ca >> u • cs CS CA >> u l—J | cs K z r“H ec 1 r-H E H S x-\ o m CA >% U 1 sO CS CA U 'o 3 o r-~i Γ» cs 3 1) J. o m CA u • <\ sO CS CA >% u |
| SEQ ID | Ό r—i | r~ | 00 r-H | 20 | (N |
Adenilil ciklazne (AC) aktivnosti peptičnih analogov
Adenilil ciklazne (AC) aktivnosti peptičnih analogov
REFERENCE
Opisi v naslednji literaturi so tukaj vključeni kot referenca.
(1E) Caulfield, M. P.; McKee, R. L.; Goldman, M. E.; Duong, L. T.; Fisher, J. E.; Gay, C.T.; DeHaven, P. A; Levy, J. J.; Roubini, E.; Nutt, R. F.; Chorev, M.; Rosenblatt, M. The Bovine Renal Parathyroid Hormone(PTH) Receptor Has Equal Affmity for 2 Different Amino Acid Sequences - The Receptor Binding Domains of PTH and PTH-Related Protein Are Located Within the 14-34 Region. Endocrinology 1990, 127, 83-87.
(2) Neugebauer, W.; Barbier, J.-R.;Sung, W.L.; Whitfield, J.F.; Willick,G.E,. Solution Structure and Adenylyl Cyclase Stimulating Activities of C-Terminal Truncated Human Parathyroid Hormone Analogues Biochemistry 1995, 34, 8835-8842.
(3) Gardella, T. J.; Wilson, A K.; Keutmann, H. T.; Oberstein, R.; Potts, J. T.; Kronenberg, H.M., and Nussbaum, S.R. Analysis of Parathyroid Hormone's Principal Receptor-Binding Region by Site-Directed Mutagenesis and Analog Design. Endocrinology 1993, 132, 2024-2030.
(4) Marqusee, S.; Baldwin, R.L. Helix Stabilization by Glu ...Lys+ Salt Bridges in Short Peptides of De Novo Design. Proč. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1987, 84,8898-8902.
(5) Surewicz, W.K.; Neugebauer, W.; Gagnon, L.; MacLean, S.; Whitfield, J.F.; Willick, G.E. Structure-Function Relationships in Human Parathyroid Hormone: The Essential Role of Amphiphilic-Helix. In Peptides: Chemistry, Structure, and Biology 1993; Smith, J.; Hodges, R., Eds.; ESCOM Leiden, The Netherlands, 1993, str. 5^6 558 (6) Whitfield, J. F.; Morley, P.; Willick, G. E.; Ross, V.; Barbier, J. R.; Isaacs, R. J.; Ohannessianbarry, L. Stimulation of the Growth of Femoral Trabecular Bone in Ovariectomized Rats by the Novel Parathyroid Hormone Fragment, hPTH-(l-31 )NH2 (Ostabolin) Calcif. Tissue Int. 1996, 58, 81-87.
(7) Whitfield, J. F.; Morley, P. Small Bone-Building Fragments of Parathyroid Hormone: New Therapeutic Agents for Osteoporosis Trends Pharmacol. Sci. 1995 16, 382-386.
- 31 Seznam sekverte (D Splošne informacije:
(i) Prijavitelj:
(A) Ime: National Research Council of Canada (B) Ulica: Intellectual Property Services
Montreal Road, Bldg. M-58, Room EG-12 (C) Mesto:ottawa (D) Zvezna država: Ontario (e) Država: Kanada (F) Poštna številka: K1A 0R6 (ii) Naziv izuma: Paratiroidni hormonski analogi-za-zdravljenje osteoporoze (iii) Število sekvenc: 33 (iv) Računalniško bralna Oblika:
(A) Tip medija: disketa (B) Računalnik: kompatibilen z IBM PC (C) ODeracijski sistem: PC-DOS/MS-DOS (D) Softver: Patentln Release #1.0, verzija #1.30 (v) Trenutni podatki o prijavi:
(A) Št. prijave: PCT/GA97/00547 (B) Datum vložitve: 1. avg. 1997 (vi) Podatki o prioritetni prijavi:
(A) Št. prijave: 08/691,647 (B) Datum vložitve: 2. avg. 1996 (2) Informacije za seq id no:1:
(i) Sefevesasaf» karakteristike;
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: protein (xi) Opis sekvence seq id no:1:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 1 5 10 15
- 32 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val
| 20 | 25 | ||
| Informacije za: seq id no:2: | |||
| (i) | Sekvenčne karakteristike: | ||
| (A) | Dolžina: 31 | amino kislin | |
| (B) | Tip:^amino | kislinski | |
| (C) | Verižnost: | ||
| (D) | Topologija: | : linearna | |
| (ii) | Tip molekule: | protein |
| (xi) | Opis s | ;ekve | ;nce: | SEQ ID NO | :2 : | |||||||
| Ser | Val Ser | Glu | Ile | Gin | Leu | Met | His | As n | Leu Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
| Ser | Met Glu | Arg | Val | Glu | Trp | Leu | Arg | Lys | Leu Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za:seq id no:3
| Sekvenčn< | e karakteristike: |
| (A) | Dolžina: 31 amino kislin |
| (B) | Tip: amino kislinski |
| (C) | Verižnost: |
| (D) | Topologija: cirkularna |
Tip molekule: protein
| xi) | Opis | sekvence: | SEQ ID NO | :3 : | |||||||||
| Ser | val Ser | Glu | Ile | Gin | Leu | Met | His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||
| Ser | Met Glu | Arg | Val | Glu | Trp | Leu | Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
- 33 (2) Informacije za: seq id no:4:
(i) Sekvenčne karakteristike:
<A5 Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip:vamino kislinski (C) Verižnost:
Tipologija: cirkularna di) Tip molekule: protein (xi) Opis sekvence: seq id no:4:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val 20 25 30 (2) Informacije za: seq id no:5:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (c) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekvei | nce: | SEQ ID NO; | : 5: | ||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu Met Kis | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||
| Ser | Met Glu Arg | val | Glu | Trp Leu Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id no:6:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip:^amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna
- 34 Tip molekule: protein
| (XX) | Opis sekven | ce: | SEQ ID NO | :S: | ||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu | Met His | Asn | Leu | Gly | Lys His | Leu Asn |
| i | 5 | 10 | 15 | |||||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Glu | Trp | Leu Arg | Lys | Lys | Leu | Gin Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id N0:7:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 30 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (C) Verižnost:
(D> Topologija: cirkularna (ii) Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekvence: | SEQ ID NO | :7 : | |||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin Leu Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Glu Trp Leu Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: SEQ ID NO:8:
(il Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip:vamino kislinski (O Verižnost:
,D) Topologija: cirkularna (ii)
Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekven | ce: | SEQ ID NO | :8: | ||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Glu | Trp Leu Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id no:9:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 34 amino kislin (B) Tip:vamino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna (ii) ''·Τΐρ molekule: protein (xi) .Opis/sekvence: SEQ ID NO:9:
| Ser Val 1 | Ser | Glu | Ile 5 | Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn | |||||||||
| 10 | 15 | ||||||||||||
| Ser | Met | Glu | Arg | Val | Glu Trp | Leu Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val | His |
| 20 | 25 | 30 |
Asn Phe (2) informacije za: SEQ ID NO:lO:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 3/ amino kislin (B) Tip:^amino Kislinski (c) Verižnost:
(D) -Topologija: cirkularna (ii) TiP molekule: protein (xi) Opis sekvence:
SEQ ID NO:10:
| Ser | Val | Ser | Glu | Ile | Gin | Leu | Met | His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu | Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Ser | Met | Glu | Arg | Val | Glu | Trp | Leu | Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val | His |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Asn | Phe |
| Informacije za: seq ID NO:ii: | |
| (i) Sekvenčne karakteristike: | |
| (a: | Dolžina: 31 amino kislin |
| (B) | Tip:^amino kislinski |
| (C) | Verižnost: |
| (D) | Topologija: cirkularna |
Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekvence: | SEQ ID NO: | : 11: | |||||
| Ser | Val Ser Glu Ile | Gin Leu Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu |
| I | 5 | 10 | 15 | |||||
| Ser | Met Glu Arg Val | Glu Trp Leu Arg | Lys | Ala | Leu | Gin | Asp | Val |
25 30 (2) Informacije za: seq id nO:12·.
| (i) | Sekvenčne karakteristike: | |
| (A) (b; (C) (D) | Dolžina: 31 amino kislin Tip: amino kislinski Verižnost: Topologija: cirkularna | |
| ii) | Tip molekule: protein |
| (xi5 | Opis sekvence: | SEQ ID NO:12: | |
| Ser | Val Ser Glu Ile | Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys | His Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 |
Ser Met Glu Arg Val Glu Tr? Leu Arg Lys Xaa Leu Gin Asp Val 20 25 J.0
- 37 (2) Informacije za:. seq id N0:i3:
(i) -Sekvenčne karakteristike:
(A, Dolžina: 31 amino kislin (B, Tip:vamino kislinski (c' -Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna (ii) ’ Tip-molekule: peptid
| (xi) | Opis se | kven | ce: | SEQ ID NO | : 13 : | |||||||
| Ser | Val Ser | Glu | Ile | Gin | Leu | Xaa His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
| Ser | Xaa Glu | Arg | Val | Glu | Trp | Leu Arg | Lys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije, za: seq id no:14:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(a) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip.: amino kislinski (c) .Verižnost:
(D) ./Topologija:---cirkularna (ii) ..cJTip molekule:, protein
| (xi) | Opis sekvence: | SEQ ID NO; | : 14 : | |||||||||
| Ser | val | Ser Glu | Ile | Gin | Leu | Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | |||||||||
| Ser | Met | Glu Arg | Val | Glu | Trp | Leu Arg | Lys | Lys | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
- 38 (2) Informacije za: SEQ ID NO:1S:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna (ii) Tip molekule: protein (xi) Opis sekvence: seq id NO:iS:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn
5 10 is
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Ile Leu Gin Asp Val
25 30 (2) Informacije za:. seq ID NO:1S:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(a) Dolžina: 31 amino kislin
O) Tip: amino kislinski (c) Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna (ϋ) Tip molekule: protein (xi) Opis sekvence: seq ID NO:1S:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Tyr Leu Gin Asp Val
| 20 25 | |
| Informacije | za: SEQ ID NO:17: |
| (i) Sekvenčne karakteristike: | |
| (A) | Dolžina: 31 amino kislin |
| (B) | Tip: amino kislinski |
| (C) | Verižnost: |
| (D) | Topologija: cirkularna |
Tip molekule: protein
- 39 (xi, Opis sekvence: seq ID NO:17:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His. Leu Asn 15 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu Gin Asp Val 20 25 30 (2) Informacije za: seq id NO:18:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (C) Verižnost:
Topologija: linearna (ii) -Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekven | ce: | SEQ ID NO: | : 18 : | |||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu | Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu Asn |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Lys | Trp | Leu Arg | Glu | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id NO:19:
(i)Sekvenčne karakteristike:
(AjDolžina: 31 amino kislin (B) Tip: jamino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: cirkularna (ii) Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekvence: | SEQ ID NO | :19: | ||||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu | Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu |
| 1 | 3 | 10 | 15 | ||||||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Asp | Trp | Leu Arg | Xaa | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id no:20:
(i j Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 31 amino kislin (B) Tip:^amino kislinski (C) Verižnost:
(□) Topologija: cirkularna (ii) Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekven | ce: | SEQ ID NO | :2Q: | |||||||
| Ser | Val Ser Glu | Ile | Gin | Leu | Met His | Asn | Leu | Gly | Lys | His | Leu |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||
| Ser | Met Glu Arg | Val | Cys | Trp | Leu Arg | Cys | Leu | Leu | Gin | Asp | Val |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id NO:2i:
(i) Sekvenčne karakteristike:
| (A) | Dolžina: 31 | amino kislin |
| (3) | Tip: amino | kislinski |
| (C) | Verižnost: | |
| (D) | Topologija | : cirkularna |
| Tip molekule: | protein |
(xi) Opis sekvence: seq ID NO:2i:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Cys Leu Leu G.^n Cys Val 20 25 '>0
- 41 (2) Informacije za: seq id no:22:
(i)Sekvenčne karakteristike:
(APolžina: 34·, amino kislin (Bffip: amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: seq id no:22:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn 15 10 15
Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His 20 25 30
Asn Phe (2) Informacije za: seq id NO:23:
(ijSekvenčne karakteristike:
(APolžina: 31 amino kislin (Blipi ^amino kislinski (cjVerižnost:
(d)Topologija: 1inearna (ii) Tip molekule: protein
| (xi) | Opis sekvence: | SEQ ID NO:23: | ||||||
| Xaa | Val Ser Glu | Ile | Gin Leu Xaa His Asn | Leu | Gly | Lys | Xaa | Xaa |
| i | 5 | 10 | 15 | |||||
| Xaa | Xaa Glu Arg | Val | Xaa Trp Leu Xaa Xaa | Xaa | Leu | Xaa | Asp | Xaa |
| 20 | 25 | 30 |
(2) Informacije za: seq id no:24:
(i) Sekvencne karakteristike:
(A) Dolžina: 4 amino kisline (B) TipT amino kislinski
- 42 (C) Verižnost:
(0! Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: SEQ ID NO.24:
Val His Asn Xaa 1 (2) Informacije za: SEQ ID NO;25: (i) . Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 5 amino kislin (B) Tip:^amino kislinski (O Verižnost:
(D) . Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: SEq id
Val His Asn Phe Xaa 1 5 (2) Informacije za: SEQ ID NO.26; (i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 6 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence:
SEQ ID N0:2S:
- 43 Val His Asn Phe Val Xaa 1 5 (2) Informacije za: seq id no.-27:
(i)Sekvenčne karakteristike:
(A)Dolžina: 7 amino kislin (3 )Tip: vamino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (iij Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: seq id NO:27
Val His Asn Phe Val Ala Xaa 1 5 (2) Informacije za: seq id no.-28:
(i)Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 8 amino kislin (B) Tip: amino kislinski (OVerižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: seq ID NO:28
Val His Asn Phe Val Ala Leu Xaa 1 5 (2) Informacije za: seq id no:29:
(i)Sekvenčne karakteristike:
(Aftolžina: 4 amino kisline (3)Tip: vamino kislinski (C)Verižnost:
Topologija: linearna
- 44 (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence:
SEQ ID NO:29
His Lys Lys Lys 1 (2) Informacije za: SEQ ID NO;30: (i, Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 4 amino kisline (B) Tip:vamino kislinski (c) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: SEQ ID NO;30
His Leu Lys Lys (2) Informacije za: ssq id NO:3i:
(i) . Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 4 amino kisline (B) Tip:^amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (ii) Tip molekule: peptid (xi, Opis sekvence:' seq id N0:3i:
Lys Lys Lys Lys 1 (2) Informacije za: SEQ ID NO:32.
- 45 (i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 4 amino kisline (B) Tip:vamino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: SEQ ID NO:32.
His Leu Lys Ser 1 (2) Informacije za: SSQ ID NO:33:
(i) Sekvenčne karakteristike:
(A) Dolžina: 5 amino kislin (B) Tip:^amino kislinski (C) Verižnost:
(D) Topologija: linearna (££) Tip molekule: peptid (xi) Opis sekvence: SEQ ID NO:33.
Val Leu Asn Phe Xaa 1 ' 5
Za
National Research Council of Canada:
MTENTNA PISARNA, 4.ox. Ljubljana, Čopova u
Claims (21)
- PATENTNI ZAHTEVKI1. Humani paratiroidni hormonski hPTH analog in njegove farmacevtsko sprejemljive soli, ki ima amino kislinsko sekvencoR-NH-Rl-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-R2-His-Asn-Leu-GlyLys-R3-R4-R5-R6-R7-Glu-Arg-Val-R8-Trp-Leu-R9-Rl 0-R11 Leu-R12-R13-Y kjer jeR vodik ali katerakoli ravna ali razvejena alkilna, acilna ali arilna skupina,RI Ser, Ala ali Aib,R2 Met ali naravno nastopajoča hidrofobna amino kislina,R3 His ali vodotopna amino kislina,R4 Leu ali vodotopna amino kislina,R5 Asn ali vodotopna amino kislina,R6 Ser ali vodotopna amino kislina,R7 Met ali naravno nastopajoča hidrofobna amino kislina,R8 Glu, Lys, Cys, Om ali Asp,R9 Arg, Lys, Om, His Cys ali Glu,RIO Lys, Om, Cys, Glu ali Asp,RI 1 naravno nastopajoča hidrofobna ali polama amino kislina,R12 Cys, Glu, Asp, Lys ali Om,R13 Asp, Cys ali Lys,X OH, NH2 inΥ X, Val-X, Val-His-X, Val-His-Asn-X, Val-His-Asn-Phe-X, Val-His-Asn-Phe-ValX, Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-X in Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-Leu-X, cikliziran kot med enim ali dvema aminokislinskima paroma 22 in 26, 26 in 30, 27 in 30 ter 25 in 29, kadar je R9 Lys ali Om in je R12 Glu ali Asp, kjer je ena od ciklizacij kot med amino kislinama 22 in 26 ali kot med amino kislinama 25 in 29.
- 2. Analog po zahtevku 1, označen s tem, da ga cikliziramo v obliki laktama med amino kislinskimi pari 22/26, 26/30, 25/29, kadar je R9 Lys ali Om in je R12 Glu ali Asp, ali 27/30, kadar sta RI 1 in R13 Lys ali Asp; ali cikliziramo v obliki disulfidnega mostu med Cys pari 22/26, 26/30 ali 25/29.
- 3. Analog po zahtevku 1, označen s tem, da je ciklizacija v'obliki laktama ali disulfidnega mostu.
- 4. Analog po kateremkoli od zahtevkov 1 do 3, označen s tem, da je laktam 22-26 laktam, Glu22-Lys26 laktam ali 25-29 laktam.
- 5. Analog po kateremkoli od zahtevkov 1 do 4, označen s tem, da je R H in je X NH2.
- 6. Analog po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5, označen s tem, daje RI 1 Lys ali Leu.
- 7. Analog po zahtevku 6, označen s tem, da sta R2 in R7 Met ali Nle.
- 8. Analog po zahtevku 7, označen s tem, da je RI Ser, R2 Met, R7 Met, R8 Glu, R9 Arg, RIO Lys, R12 Gin in R13 Asp.
- 9. Analog po zahtevku 8, označen s tem, daje R3 His ali Lys, R4 Leu, Lys ali Arg, R5 Asn, Om, Hci, Asp, Arg, Lys, D-Lys, Ser ali Gly in R6 Ser, Lys, Asp ali Arg.
- 10. Analog po zahtevku 8, označen s tem, da je R3-R6 His-Lys-Lys-Lys, His-LeuLys-Lys, Lys- Lys- Lys- Lys- ali His-Leu- Lys-Ser.
- 11. Analog po zahtevku 8, označen s tem, da je Υ = X, Y = Val-X ali Y = Val-HisAsn-Phe-X.
- 12. Analog po zahtevku 1, označen s tem, da ima SEQ ID NO.6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ IDNO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO:18ali SEQIDNO:19.
- 13. Analog po zahtevku 1, označen s tem, daje Ril Lys, Leu, Asp, Gin, Ala, Nle, Ile ali Tyr.
- 14. Humani paratiroidni hormonski hPTH (1-31) analog, označen s tem, daje v njem lega 27 Lys ali je bila nadomeščena s primernim hidrofobnim ostankom in ki je bil cikliziran kot med Glu22 in Lys26, da tvori laktam.
- 15. Analog po zahtevku 14, označen s tem, da je hidrofoben ostanek Leu in ima analog bodisi C-terminalni amidni konec ali C-terminalni karboksilni konec.
- 16. Analog po zahtevku 14, označen s tem, da hidrofoben ostanek izberemo iz skupine, v kateri so Ile, norlevcin, Met in α-aminomaslena kislina.
- 17. Analog po zahtevku 14, označen s tem, da ima SEQ ID NO:3.
- 18. Sestavek za dajanje toplokrvni živali, ki ga potrebuje, označen s tem, da obsega humani paratiroidni hormonski (hPTH)-(l-31) analog po zahtevku 14, skupaj s farmacevtsko sprejemljivim nosilcem ali ekscipientom.
- 19. Sestavek po zahtevku 18, označen s tem, daje v analogu hidrofobni ostanek Leu.
- 20. Sestavek po zahtevku 18, označen s tem, da v analogu izberemo hidrofobni ostanek iz skupine, v kateri so Ile, norlevcin, Met in α-aminomaslena kislina.
- 21. Sestavek po zahtevku 18, označen s tem, da ima analog SEQ ID NO:3.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/691,647 US5955425A (en) | 1996-08-02 | 1996-08-02 | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
| US4056097P | 1997-03-14 | 1997-03-14 | |
| PCT/CA1997/000547 WO1998005683A1 (en) | 1996-08-02 | 1997-08-01 | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI9720057A true SI9720057A (sl) | 1999-12-31 |
Family
ID=26717175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI9720057A SI9720057A (sl) | 1996-08-02 | 1997-08-01 | Paratiroidni hormonski analogi za zdravljenje osteoporoze |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0915911B1 (sl) |
| JP (3) | JP4122061B2 (sl) |
| KR (1) | KR100500859B1 (sl) |
| CN (1) | CN1176947C (sl) |
| AT (1) | ATE253078T1 (sl) |
| AU (1) | AU723728B2 (sl) |
| BG (1) | BG103128A (sl) |
| BR (1) | BR9711002B1 (sl) |
| CA (1) | CA2261564C (sl) |
| CZ (1) | CZ34799A3 (sl) |
| DE (1) | DE69725850T2 (sl) |
| DK (1) | DK0915911T3 (sl) |
| EE (1) | EE9900039A (sl) |
| ES (1) | ES2207740T3 (sl) |
| FI (1) | FI990126A (sl) |
| GE (1) | GEP20033095B (sl) |
| IS (1) | IS4962A (sl) |
| LV (1) | LV12293B (sl) |
| NZ (1) | NZ333809A (sl) |
| PT (1) | PT915911E (sl) |
| RU (1) | RU2203286C2 (sl) |
| SI (1) | SI9720057A (sl) |
| SK (1) | SK287397B6 (sl) |
| WO (1) | WO1998005683A1 (sl) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0986395A4 (en) * | 1997-05-14 | 2004-12-01 | Aventis Pharm Prod Inc | PEPTIDE ANALOGS OF THE PARATHYROID HORMONE |
| US6495662B1 (en) | 1998-10-22 | 2002-12-17 | The General Hospital Corporation | Bioactive peptides and peptide derivatives of parathyroid hormone (PTH) and parathyroid hormone-related peptide (PTHrP) |
| JP4486258B2 (ja) | 1998-11-25 | 2010-06-23 | ザ・ジェネラル・ホスピタル・コーポレイション | ヒト副甲状腺ホルモンの改変、調製および使用 |
| EP1141237B1 (en) | 1998-12-31 | 2005-11-02 | The General Hospital Corporation | Pth receptor and screening assay utilizing the same |
| EP1221963A4 (en) * | 1999-07-28 | 2006-03-22 | Univ Pennsylvania | METHODS OF INHIBITING OSTEOCLASTOGENESIS |
| US6316410B1 (en) * | 1999-09-22 | 2001-11-13 | National Research Council Of Canada | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
| US7572765B2 (en) | 2001-07-23 | 2009-08-11 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parathyroid hormone (PTH) analogs |
| WO2003059291A2 (en) | 2002-01-10 | 2003-07-24 | Osteotrophin Llc | Treatment of bone disorders with skeletal anabolic drugs |
| EP1567178A4 (en) * | 2002-11-01 | 2009-07-15 | Amgen Inc | MODULATORS OF RECEPTORS FOR NEUTRAL THERAPY HORMONE AND SIDE-HORSE HORMONE-RELATED PROTEINS |
| US8088734B2 (en) * | 2003-01-21 | 2012-01-03 | Unigene Laboratories Inc. | Oral delivery of peptides |
| WO2007130113A2 (en) * | 2005-09-06 | 2007-11-15 | Zelos Therapeutics, Inc. | Parathyroid hormone analogues and methods of use |
| EP2056862A2 (en) * | 2006-07-31 | 2009-05-13 | Zelos Therapeutics, Inc. | Parathyroid hormone analogues and uses thereof |
| EA014696B1 (ru) | 2006-10-13 | 2010-12-30 | Эли Лилли Энд Компани | Пэгилированный паратиреоидный гормон в качестве модулятора рецептора паратиреоидного гормона и его применение |
| MX353986B (es) | 2007-08-01 | 2017-11-06 | Massachusetts Gen Hospital | Metodos de analisis y seleccion usando receptores acoplados a proteina g y composiciones relacionadas. |
| MX358161B (es) | 2010-05-13 | 2018-08-06 | The General Hospital Corp Star | Analogos de hormona paratiroidea y usos para los mismos. |
| CN105440126B (zh) * | 2015-12-31 | 2019-10-25 | 南京工业大学 | 治疗骨质疏松的α-螺旋多肽及其制备方法与应用 |
| EP3655104A4 (en) | 2017-07-15 | 2021-03-17 | The Regents of the University of California | OSTEOADSORPTIVE FLUOROGENIC SUBSTRATE FROM CATHEPSIN K FOR IMAGING OSTEOCLAST ACTIVITY AND MIGRATION |
| WO2020064190A1 (en) | 2018-09-26 | 2020-04-02 | Borealis Ag | Propylene copolymer composition with excellent optical and mechanical properties |
| JP7342310B2 (ja) | 2019-05-28 | 2023-09-12 | 国立大学法人東北大学 | 電源装置、超伝導装置、超伝導デバイス、及び超伝導デバイスの製造方法 |
| CN113549144A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-10-26 | 华南理工大学 | 一种特立帕肽hPTH(1-34)的生产和纯化方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5317010A (en) * | 1991-10-10 | 1994-05-31 | Peter K. T. Pang | Parathyroid hormone analogues substituted at AA 25, 26, 27, and use in osteoporosis treatment |
| US5814603A (en) * | 1992-06-12 | 1998-09-29 | Affymax Technologies N.V. | Compounds with PTH activity |
| AU672790B2 (en) * | 1992-07-15 | 1996-10-17 | Novartis Ag | Variants of parathyroid hormone and its fragments |
| CA2126299C (en) * | 1994-06-20 | 2000-12-12 | Gordon E. Willick | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
-
1997
- 1997-08-01 ES ES97933603T patent/ES2207740T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 KR KR10-1999-7000903A patent/KR100500859B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 NZ NZ333809A patent/NZ333809A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 EE EEP199900039A patent/EE9900039A/xx unknown
- 1997-08-01 CA CA002261564A patent/CA2261564C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 CN CNB971981612A patent/CN1176947C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 EP EP97933603A patent/EP0915911B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 AU AU36905/97A patent/AU723728B2/en not_active Ceased
- 1997-08-01 WO PCT/CA1997/000547 patent/WO1998005683A1/en active IP Right Grant
- 1997-08-01 SI SI9720057A patent/SI9720057A/sl not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 SK SK132-99A patent/SK287397B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 RU RU99104132/14A patent/RU2203286C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 DE DE69725850T patent/DE69725850T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 CZ CZ99347A patent/CZ34799A3/cs unknown
- 1997-08-01 GE GEAP19974655A patent/GEP20033095B/en unknown
- 1997-08-01 PT PT97933603T patent/PT915911E/pt unknown
- 1997-08-01 BR BRPI9711002-7A patent/BR9711002B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 JP JP50741398A patent/JP4122061B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 DK DK97933603T patent/DK0915911T3/da active
- 1997-08-01 AT AT97933603T patent/ATE253078T1/de active
-
1999
- 1999-01-22 FI FI990126A patent/FI990126A/fi unknown
- 1999-01-28 BG BG103128A patent/BG103128A/xx unknown
- 1999-01-29 IS IS4962A patent/IS4962A/is unknown
- 1999-02-01 LV LVP-99-15A patent/LV12293B/en unknown
-
2007
- 2007-05-01 JP JP2007121289A patent/JP4224111B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-09-25 JP JP2008246839A patent/JP2009057386A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4224111B2 (ja) | 骨粗鬆症の治療のための副甲状腺ホルモン類似体 | |
| US6316410B1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| US6541450B1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| US5955425A (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| US5556940A (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| US7632811B2 (en) | Analogs of parathyroid hormone | |
| US7410948B2 (en) | Analogs of parathyroid hormone | |
| RU2198182C2 (ru) | Аналоги гормона паращитовидной железы | |
| US5717062A (en) | Cyclic analogs of PTH and PTHrP | |
| US20090226477A1 (en) | Pth2 receptor selective compounds | |
| JP2000505105A (ja) | ペプチドｙｙのアナログおよびその使用 | |
| EP1352912A1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| CA2599885A1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
| CZ20003999A3 (cs) | Analog PTH, způsob selektivního navázání na receptor, způsob vyvolání agonistické a antagonistické odezvy, farmaceutický prostředek a způsob léčby |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF | Valid on the event date | ||
| KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20050602 |