CZ34799A3 - Analogy paratyroidního hormonu pro léčení osteoporézy - Google Patents
Analogy paratyroidního hormonu pro léčení osteoporézy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ34799A3 CZ34799A3 CZ99347A CZ34799A CZ34799A3 CZ 34799 A3 CZ34799 A3 CZ 34799A3 CZ 99347 A CZ99347 A CZ 99347A CZ 34799 A CZ34799 A CZ 34799A CZ 34799 A3 CZ34799 A3 CZ 34799A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- lys
- analog
- leu
- hpth
- seq
- Prior art date
Links
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 title description 40
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 title description 40
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 title description 39
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 title description 39
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 title description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 101001135770 Homo sapiens Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 101001135995 Homo sapiens Probable peptidyl-tRNA hydrolase Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000058004 human PTH Human genes 0.000 claims abstract description 30
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 93
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 92
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 27
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 16
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 16
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 15
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims description 3
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims 2
- RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N 0.000 claims 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims 1
- JQSIGLHQNSZZRL-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)N JQSIGLHQNSZZRL-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 42
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract description 36
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 abstract description 30
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 abstract description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 12
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 abstract description 3
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 abstract description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 84
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 74
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 70
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 49
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 27
- JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N Ser-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O JGUWRQWULDWNCM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 101710095468 Cyclase Proteins 0.000 description 18
- POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N POMXSEDNUXYPGK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 18
- 108091002540 human parathyroid hormone (1-31)amide Proteins 0.000 description 18
- 102000032129 human parathyroid hormone (1-31)amide Human genes 0.000 description 18
- OXZNHYPGOAWYLT-FISSOZIDSA-N ostabolin Chemical class C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)OC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(C)C)C1C=NC=N1 OXZNHYPGOAWYLT-FISSOZIDSA-N 0.000 description 18
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 17
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 16
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 16
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 16
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 12
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 11
- RMLLCGYYVZKKRT-CIUDSAMLSA-N Met-Ser-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O RMLLCGYYVZKKRT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 11
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 11
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 11
- -1 amino, carboxyl Chemical group 0.000 description 10
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 9
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 9
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 8
- AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N Trp-Leu-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 AIISTODACBDQLW-WDSOQIARSA-N 0.000 description 8
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 7
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 7
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N Glu-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DYFJZDDQPNIPAB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 6
- HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N Glu-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HGJREIGJLUQBTJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 6
- JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N His-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JWTKVPMQCCRPQY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-His Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 IUKIDFVOUHZRAK-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N Val-His-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OACSGBOREVRSME-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 5
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 5
- DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O DWBBKNPKDHXIAC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 4
- XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N Asp-Val-His Chemical compound N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)O XQFLFQWOBXPMHW-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 3
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N Met-Glu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQBJYJXPZBNEIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N Val-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 RKIGNDAHUOOIMJ-BQFCYCMXSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 RNMNYMDTESKEAJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- 101000581940 Homo sapiens Napsin-A Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N Met-Leu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SODXFJOPSCXOHE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027343 Napsin-A Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001142 circular dichroism spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 229940116901 diethyldithiocarbamate Drugs 0.000 description 2
- LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N diethyldithiocarbamic acid Chemical compound CCN(CC)C(S)=S LMBWSYZSUOEYSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 2
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002990 parathyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 2
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical class CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N Arg-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NKBQZKVMKJJDLX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical group NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- QBQVKUNBCAFXSV-ULQDDVLXSA-N Arg-Lys-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QBQVKUNBCAFXSV-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000538562 Banjos Species 0.000 description 1
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 1
- 241001391944 Commicarpus scandens Species 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N Cys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS OELDIVRKHTYFNG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- IXFVOPOHSRKJNG-LAEOZQHASA-N Gln-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXFVOPOHSRKJNG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108091006068 Gq proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000052606 Gq-G11 GTP-Binding Protein alpha Subunits Human genes 0.000 description 1
- XJQDHFMUUBRCGA-KKUMJFAQSA-N His-Asn-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XJQDHFMUUBRCGA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CZVQSYNVUHAILZ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000037147 Hypercalcaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000002980 Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HQUXQAMSWFIRET-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000027382 Mental deterioration Diseases 0.000 description 1
- 206010027374 Mental impairment Diseases 0.000 description 1
- 101000904262 Mus musculus G patch domain and ankyrin repeat-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 1
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 208000005250 Spontaneous Fractures Diseases 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049264 Teriparatide Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N FEXILLGKGGTLRI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N Val-Ser-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VIKZGAUAKQZDOF-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000008416 bone turnover Effects 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003275 diaphysis Anatomy 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000367 exoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003668 hormone analog Substances 0.000 description 1
- 230000000148 hypercalcaemia Effects 0.000 description 1
- 208000030915 hypercalcemia disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 108010067557 parathyroid hormone (1-34)amide Proteins 0.000 description 1
- RRBCHMCWWOHRQL-UMXFMPSGSA-N parathyroid hormone (1-34)amide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C1=CN=CN1 RRBCHMCWWOHRQL-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000017363 positive regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 208000001685 postmenopausal osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N teriparatide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 OGBMKVWORPGQRR-UMXFMPSGSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/29—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
- A61P5/20—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones for decreasing, blocking or antagonising the activity of PTH
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/635—Parathyroid hormone, i.e. parathormone; Parathyroid hormone-related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Measurement Of Radiation (AREA)
- Display Devices Of Pinball Game Machines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Oblast techniky , Vynález se týká analogů lidského paratyroidního hormonu, o nichž se zjistilo, že jsou účinné při léčení osteoporózy.
Dosavadní stav techniky
Osteoporóza je vedoucí příčinou neschopnosti starých lidí, zejména starších žen. Nedávno se zjistilo, že lidský paratyroidní hormon (hPTH) a jeho jisté analogy jsou stimulátory růstu kostí, takže jsou užitečné při léčení osteoporózy. Osteoporóza je progresivní nemoc, která vede k redukci celkové hmoty kostí a zvýšené křehkosti kostí. To často vede ke spontánním zlomeninám kostí nesoucích zátěž a k fyzickému a mentálnímu zhoršení charakteristik žnehýbftujících poranění. Postmenopausálňí osteoporóza je způsobena vymizením estrogenů, které podněcují desetiletí trvající urychlení obměny kostí se zvýšenou nerovnováhou mezi resorbcí starých kostí a tvořením nové kosti. To vede k zřídnutí, zvýšené poróžitě a trabekulámí redukci kostí nesoucích zátěž. Osteoporóza je také spojena s hypertyroidismem, hyperparatyroidismem, Cushingovým syndromem a užíváním jistých steroídních léků. Léčení historicky zahrnovalo zvýšení vápníku v jídle, léčení estrogeny, zvýšené dávky vitaminu D, avšak hlavně léky jako antiresobtiva, která inhibují resorpci kostí osteoklasty.
Paratyroidní hormon (PTH) vzniká vpříštítné žláze a je hlavním regulátorem hladin vápníku v krvi PTH polypeptid a syntetický polypeptid lze připravit způsobem popsaným Erickson a Merrifield, The Proteins. Neurath aj., Eds., Academie Press, New York, 1976, strana 257, a modifikovaným způsobem Hodges aj., Peptide Research 1, 19 nebo Atherton, E. a Sheppard, R.C. Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press, Oxford, 1989.
Když se sérový vápník sníží pod normální hladinu, příštitná žláza uvolňuje PTH a ’ hladina vápníku se zvýší resorbcí kostního vápníku, zvýšenou absorpcí vápníku z vnitřností ,a. zvýšenou absorpcí vápníku v ledvinách ze vznikající moči v ledvinových kanálcích. Ačkoliv kontinuální inťuze nízkých hladin PTH mohou odstraňovat vápník z kostí, stejné nízké dávky, když se injikují přetržitě, mohou skutečně podporovat růst kostí.
Trager, US patent 4,086,196 popisuje analogy lidského PTH a tvrdí, že prvé 27 až 34 aminokyseliny jsou nejúěinnější s ohledem na stimulaci adenynylcyklázy v pokusu s buňkami in vitro. Rosenblatt, US patent 4,771,124 popisuje vlastnosti hPTH analogů, kde Trp--’ je substituován aminokyselinami fenylalaninem, leucinem, norleucinem, valinem, tyrosinem, β2 i, ····>····*· a»·*·····* • « « « · * »·*· · ··· «V» »·»·*« * * «··**· ♦* · ·* *· nafty lalaninem nebo <x-naftylalaninem, jako antagonistu PTH. Tyto modifikované analogy PTH také mají odstraněny 2 a 6 koncové aminokyseliny, což vede k ztrátě většiny aktivity antagonisty, když se použijí k léčení osteoporózy. Tyto analogy se navrhovaly jako inhibitory PTH a peptidu příbuzného PTH. Analogy se nárokovaly jako pravděpodobně užitečné při léčení hyperkalcemie spojené s některými tumory.
Pang aj., WO93/06845 publikované 15. dubna 1993, popisují hPTH analogy, kde jsou substituovány Arg--\ Lys^, Lys^ četnými aminokyselinami, včetně alaninu, asparaginu, asparagové kyseliny, cysteinu, glutaminu, glutamové kyseliny, glycinu, histidinu, isoleucinu, leucinu, methioninu, fenylalaninu, prolinu, šeřinu, threoninu, tryptofanu, tyrosinu nebo valinu. Ty se nárokují bez žádných podpůrných údajů ze zvířecích nebo lidských testů, že jsou účinné při léčení osteoporózy s minimálními účinky na krevní tlak a hladké svaly.
PTH působí aktivací dvou druhých mediátorových soustav?, adenynyl cykíázy aktivované G5-proteinem a fosfolipázy aktivované Gq-proteinem. Poslední vede ke stimulaci aktivity protein kinázy Cs (PKC) vázané na membránu. Ukázalo se, že aktivita PKC vyžaduje PTH zbytky 29 až 32 (Jouishomme aj. (1994) J. Bone Minerál Res. 9, 1197-1189). Zjistilo se, že zvýšený růst kostí, například účinek, který je užitečný při léčení osteoporózy, je spojen se schopností peptidového řetězce zvyšovat aktivitu AC. Zjistilo se, že nativní řetězec PTH má všechny tyto aktivity. Typický řetězec hPTH-(l-34) je ukázán jako (A);
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu
Gin AspVal His Asn Phe-OH A
Následující lineární analog hPTH-(l-31)-NH2, jehož údaje jsou zahrnuty v tabulce 1 níže, má pouze aktivitu stimulující AC a zjistilo se, že je zcela aktivní při obnově kostí v modelu krys s odstraněnými vaječníky (Rixon, R. H. aj.,r.(1994) J. Bone, Minerál Res. 9, 1197.-1189, Whitfield aj. (1996) Calcified Tissue Int. 58, 81-87, Willick aj., US patent 5,556,940 vydaný 17. září 1996)):
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu
Gin Asp Val-NH2 B
Molekula B výše může mít karboxylové zakončení místo ukázaného aminové zakončení.
F «φ Φ ·· ·· • » * 4 ·♦·· « · · φ ♦ · > · • · · * φφφφ φ ·φφ φφ-φ »φφ· · φ
Předmětem tohoto vynálezu je příprava novýcťanalogů s větší metabolíckou stabilitou, se zvýšenou aktivitou obměny kostí, se zvýšenou AC aktivitou a s minimálními postranními účinky.
Podstata vynálezu
Podle jednoho aspektu vynálezu se zabezpečuje lidský paratyroidm hormon hPTH a jeho farmaceuticky přijatelné soli mající řetězec aminokyselin:
R-NH-Rl-Val-Ser-Glu-Ile-Gln-Leu-R2-His-Asn-Leu-Gly-Lys-R3-R4-R5-R6-R7-Glu-ArgVal-R8-Trp-Leu-R9--R10-Rll-Leu-R12-Asp-Y kde
R = vodík riébo jakákoliv lineární nebo rozvětvená alkylová, acylová nebo arylová skupina,
R1 = Ser, Ala nebo Aib,
R2 = Met nebo přirozeně se vyskytující hydrofobní aminokyselina,
R3 = His nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,
R4 = Leu nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,
R5 = Asn nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,
R6 = Ser nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,
R7 = Met nebo přirozeně se vyskytující hydrofobní aminokyselina,
R8 - Glu, Lys nebo Asp,
R9 = Cys, Glu nebo Om,
R10 = Arg, Lys, Om, Gin, Glu nebo Asp, · '
R11 = přirozeně se vyskytující hydrofobní nebo polární aminokyselina,
R12 = Gin, Arg, Glu, Asp, Lys nebo Om,
X = OH,NH2a
Y = X, Val-X, Val-His-X, Val-His-Asn-X, Val-His-Asn-Phe-X, Val-His-Asn-Phe-ValX, Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-X, Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-Leu-X, cyklizované jako mezi jednímnebo dvěma páry aminokyselin 22 a 26j 26 a 30, 27 a 30 a 25 a 29, když R3 a R6 jsou «« ·· ♦· · ·· ♦* « · ♦ · i·· · «*· toto* I « * · «··· to* · to to to to··· · «·· ··· «•toto, * · · · ····· ·· to to· ·*
Lys, Om, Glu nebo Asp, s výjimkou cyklo(Lys-^-Asp^O) (Leu27)-hPTH-(l-34)-NH2.
cyklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-34)-NH2 acyklo(Lys26-Asp30)(Leu27)-hPTH-(l-34)-OH.
'ř
Příklady solí zahrnují anorganické soli, solí organických kyselin, například kyseliny mravenčí, kyseliny octové, kyseliny vinné a kyseliny citrónové, soli anorganických baží, jako sodné a amonné soli, a soli organických baží, jako triethylamin, ethylamín a methylamin.,
Podle jiného rysu vynálezu se cyklizace dosahuje tvorbou laktamů vznikajících spojením bočních řetězců vybraných párů zbytků aminokyselin, například mezi přirozenými zbytky 22 a 26 nebo 26 a 30. Berou se v úvahu i jiné typy cyklizace, jako tvorba disulfidického můstku například mezi analogy obsahujícími Cys Cys22-Cys2^ a Cys2ť>-Cys30
Také se zjistilo, že jsou účinné substituce různých aminokyselin, Lys27 se může nahradit Leu nebo různými hydrofobními nebo polárními zbytky. Jiným faktorem je to, jak dobře zbytek se hodí k receptoru. Ala není tak hydrofobní jako Leu. Lys a Tyr se obecně považují za polární, avšak přesto mají hydrofobní interakce s receptorem. Například Lys se může složit, tak že hydrofobní část reaguje s jinými hydrofobními zbytky receptoru, a NH2 je vystaveno rozpouštědlu. Takové substituce zahrnují omithin, citrullin, kyselinu a-aminomáselnou, norleucin, isoleucin a tyrosin, nebo jakákoliv lineární nebo rozvětvenou α-amino alifatickou kyselinu mající 2-10 uhlíků v postraním řetězci, jakýkoliv takový analog mající polární nebo nabitou skupinu na konci alifatického řetězce. Příklady polárních nebo nabitých skupin zahrnují amino, karboxyl, acetamido, quanido a ureido. Ačkoliv se zdá, že Leu27 je nejlepší substituce, také se zdá, že řada jiných substitucí v poloze 27 si zachovává téměř plnou aktivitu a také by mohla mít žádané vlastnosti, jako zvýšenou proteolytickou stabilitu nebo rozpustnost ve vodě. Očekává se, že nejaktivnější budou Ile, norleucin, Met a omithin.
*ť
Tato substituce vede ke stabilizaci α-šroubovnice v oblasti hormonu vázající receptor. To se potvrdilo studiem cirkulárního dichroismu spektra laktamových analogů-ve srovnání se spektry cirkulárního dichroismu lineární molekuly (Leu27)-hPTH-(l-34)-NH2. Spektra cirkulárního dichroismu jsou velmi citlivá k přítomnosti sekundární struktury α-šroubovnice a -technika- se použila- k‘ ukázání přítomnosti ct-šroubovnice- ve1 fragmentech hPTH'(Neugebauer aj (1991) Biochemistry, 31, 2056-2063). Mimoto byla ukázána stabilizace α-šroubovnice tvorbou shora zmíněných laktamů v hPTH-(20-34)-NH2 (Neugebauer aj., (1994) lnt. J. Protein Peptide
Res.,43, 555-562). Existuje možná amfifilní α-Šroubovnice mezi zbytky 21 a 31 hPTH-(l-34)NH2 a býly představeny údaje ukazující, že hydrofobní strana šroubovnice reaguje s PTH * » • φ φ φ φ ♦ h φ φ φ • ·« · φ·· φ φ
4»· Φ· «φ φφ φ · φ · φ φ φ φ · φφφ φφφφ φφ • ΦΦΦ φ receptorem (Neugebauer, W. (1995) Biochemistry, 34, 8835-8842, Gardella, T. J. aj., (1993)
Endocrinology 132, 2024-2030).
Zjistilo se, že nejúčinnější cyklizace vyžadují tvorbu laktamu, například mezi zbytky G1u22 a Ly$26 nebo Lys^6 a Asp^O Jiné cyklizace jsou rovněž možné, jako mezi Lys-7 a Asp-^O, ačkoliv se zjistilo, že tento laktam má nějaký destabilizující účinek na a-šroubovnici.
Studie fragmentů PTH vázajících se na receptor blíže naznačily hlavní vázající oblast mezi zbytky 14-34^, Navrhli jsme, že zbytky 17-29 α-šroubovnice se váží jako takové na PTH receptor a že amfifílní část této α-šroubovnice se váže svou hydrofobní stranou na receptor^. Tento model je shodný s výsledky studia analogů vázající oblasti receptoru^.
Studie NMR ukázaly, že i modelový peptid, o němž se zjistilo, že je vysoce helikální pomočí CD, také obsazuje řadu nehelikálních konformací. Tedy strukturu peptidického hormonu vázaného na receptor, například PTH, nelže spolehlivě odvodit z jeho volné struktury v roztoku. Stéricky bráněné analogy peptidického hormonu se použily k omezení počtu konformačních stavů dostupných pro peptid^. Výzkum řetězce hPTH ukazuje 3 možné solné můstky mezi zbytky 17-29, což by mohlo jak stabilizovat, tak destabilizovat α-šroubovnici. Ty jsou mezi Glu^2 a Lys^6 a Lys^ a Asp-^θ. Očekává se, že oba stabilizují a-šroubovnici. Očekává se, že mezi Lvs-^ a Asp^O destabilizují α-šroubovnici^. Tvorba laktamu mezi těmito páry zbytků by omezila konformace dostupné pro hPTH v této oblasti α-Šroubovnice. Mimoto dva z těchto laktamů, Glu^^-Lys^é a Lys^-Asp^O, o kterých se očekává, že stabilizují strukturu α-šroubovnice, jsou položeny na polární straně amfifílní části α-šroubovnice. Očekává se, že třetí Lys27-Asp30 aspoň částečně destabilizuje α-šroubovníci, a zahrnuje zbytek Lys^ který je na hydrofobní straně amfifílní šroubovnice. K cyklízaci mezi polohami 25 a 29 může také dojít, pokud Lys nebo Om nahradí Arg v poloze 25 a pokud se Gln29 nahradí Glu nebo Asp.
Substituce Leu za Lys^^ vede k hydrofobnějšímu zbytku na hydrofobní stráně amfifílní šroubovnice. To vede ke zvýšené stimulaci aktivity adenynyl cyklázy v buněčné linii ROS. Odborníci poznají, že jiné takové substituce diskutovanévýše by asi vedly k analogůmse stejnými zvýšenými aktivitami.
Očekává se, že kombinovaný účinek buď substituce, nebo tvorby laktamu bude stabilizovat α-šroubovnici a zvyšovat bioaktivitu a chránit tuto oblast molekuly proti proteolytické degradaci. Dává se přednost přítomnosti amidu na C-konci v tom smyslu, že se dále očekává, že to dále chrání peptid proti exoproteolytické degradaci, ačkoliv mohou být hydrolyzovány některými peptidázami (Leslie, F. M. a Goldstein, A. (1982), Neuropeptides, 2, 185-196).
Také se zjistilo, že lze užitečně provádět jiné substituce aminokyselin. Jmenovitě jsme nahradili zbytek Met citlivý k oxidaci v polohách 8, 18 přirozeně se vyskytujícím hydrofobním zbytkem, Nle, jako v japonské patentové publikace 61-24598. Také lze očekávat, že jiné hydrofobni zbytky, jako Leu, Ile, Val, Phe a Trp by byly užitečné jako podle USP 5,393.869 pro Nakagawa aj..
Také jsou brány v úvahu reversní laktamy. Ukázali jsme účinnost změny Lys^^-Glu^é. Lze tedy očekávat, že lze užitečně provádět podobné změny mezi laktamy 26-30 a 27-30.
Lze provádět, vedle dříve zmíněných Cys-Cys i jiné substituce na výhodném místě laktamů 22-26, například Asp22-Orm“^. aby se osvětlilo, že lze připravit různá místa cyklizace/ velikosti kruhu.
V USP 5,393,869 pro Nakagawa aj. a v USP 5,434,246 pro Fukuda aj. se uvádí, že některé substituované analogy hPTH mají podstatnou AC aktivitu a mohou mít zvýšenou stabilitu proti proteolytickému ataku, jmenovitě;
1. Ser-1 na Aib (kyselina a-aminomáselná),
2. Lýs-27 na Gin (uvádí se, že má 2,5 x AC aktivitu),
3. Zbytky 14, 15, 16, 17 na Lys vcelku nebo v části 9 (uvádí se, že má silně zvýšenou aktivitu - až 8 x). To může být způsobeno zvýšenou rozpustností ve vodě. Očekává se, že in vivo budou labilnější k enzymům podobným trypsinu. Nárokují tento tetrapeptid (zbytky 14-17 včetně) tak, aby v něm byla alespoň jedna aminokyselina rozpustná ve vodě. Například His-14 nebo Lys-14, Leu-15, Lys-15 nebo Arg-15, Asn-16, Om-16, Hci (homocitrullin)-16, Asp-16, Arg-16, Lys-16, DLys-16, Ser-16 nebo Gly-16, a 17-Ser, 17-Lys, 17-Asp nebo 17-Arg. Například také mohou zahrnovat Glu. 4. Arg 25 na His, aby se minimalizoval atak proteázou. Protože naše laktamy, zejména s Leu nebo jinou hydrofobni aminokyselinou v poloze 27, se mohou stát poněkud nerozpustnými a také nesnadno, rozpustnými, L mohkh.by se-očekávat,-že stejné - substituce1budou Užitečné v našich Iaktamech.
Odborníci také poznají, že i když se může dávat přednost cyklickým 1-31 hPTH, také se očekává podle zde ukázaných údajů, že cyklické fragmenty v rozsahu 1-30 až 1-37 také budou účinné. Zejména v literatuře neexistuje žádný důkaz, že přítomnost dalších aminokyselin až do
Ί ovlivňuje biologické vlastnosti hormonu, zejména podle zde zahrnutých potvrzujících údajů 1-34.
Laktamy podle tohoto vynálezu lze připravit známými způsoby popsanými níže a lze je použít k stimulaci růstu kostí, pro obměnu kostí, pro hojení kostí v různých situacích, jako je léčení osteoporózy a běžných zlomenin.
Popis obrázků
Obr. 1 ukazuje strukturu lidského paratyroidního hormonu PTH, zbytky 1-31 (SEQ ID
NO: 1).
Obr. 2 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO : 3).
Obr. 3 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-( 1-31)-14¾ (SEQ ID
NO: 4).
Obr. 4 ukazuje aktivity analogů podle vynálezu při stimulaci adenynyl cyklázy v buňkách ROS 17/2.
Obr. 5 ukazuje reprezentativní histologické řezy kostí připravených na konci 8 týdnů po OVX, což osvětluje různé schopnosti hPTH-( 1-31)-14¾ a jeho laktamových derivátů zabránit ztrátě kosti a stimulovat růst kostí u Sprague-Dawley krys s odstraněnými vaječníky (OVX).
Obr. 6 ukazuje trabekulámí objem kostí u kontrolních zvířat a u zvířat ošetřených hPTH analogem u krys původně silně zbavených kostí. Ošetření zvířat počalo 9 týdnů po OVX. Nejúčinnější z fragmentů byl (Leu27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-31)-NH2, který obnovil kosti na hodnoty normálních kontrolních krys.
Obr. 7 ukazuje trabekulámí tloušťka krysích femurů pro normální, s odstraněnými vaječníky (OVX), falešné a zvířata ošetřenými hPTH-( 1-31)-14¾ (Leu27)cyklo(Glu22Lys26)-hPTH-( 1 -31 )-NH2 a (Leu27)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-( 1 -31 )-14¾
Obr. 8 ukazuje maximální pokles tlaku krve a čas do maximálního poklesu tlaku krve po přidání dávky 0,8 nmol/ 100 g hPTH-( 1-31)-14¾ (Leu27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l31)-14¾ a (Leu27)cyklo(Lys26-Asp3G)-hPTH-( 1-31)-14¾. Peptidy se podávaly buď
....., Γ ’ť podkožně (prázdný sloupec), nebo intravenosně (plný sloupec).
'«Λ
Obr. 9 ukazuje strukturu (Leu27)-hPTH-(l-34)-NH2 (SEQ ID NO: 5).
Obr. 10 ukazuje strukturu cyklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO : 6). Obr. 11 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (SEQ ID
NO: 7).
•τ-1—
Obr. 12 ukazuje aktivity různých analogů podle tohoto vynálezu při stimulaci adenynylcyklázy.
Obr. 13 ukazuje hypotenzivní účinek hPTH-(l-31)-NH2 a hPTH-(l-30)-NH2 a jejich cyklických analogů.
Obr. 14 je graf ukazující účinek různých dávek lineárního hPTH-(l-31)-NH2 na růst kostí.
Obr. 15 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-OH (SEQ ID NO :8).
Obr. 16 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-34)-NH2 (SEQ ID
NO: 9).
Obr. 17 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-34)-OH2 (SEQ ID NO: 10).
Obr. 18 ukazuje strukturu (Ala27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-( 1-31)-14¾ (SEQ ID NO: 11).
Obr. 19 ukazuje strukturu (Nle27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO: 12).
Obr. 20 ukazuje strukturu (Ňle8>28 Leu27)cyklo(Ghi22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO: 13).
Obr. 21 ukazuje strukturu cykIo(Glu22-Lys2ý)-hPTH-(l.’31)-NH2.(SEQ.ID NO :_14).. Obr. 22 ukazuje strukturu (Ile27)cykIo(Glu22-Lys2^)-hPTH-( 1 -31 )-NH2 (SEQ ID NO :15).
Obr. 23 ukazuje strukturu ,(Tyr27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l -31)-NH2 (SEQ ID
NO: 16).
Obr. 24 ukazuje strukturu a-acetyI-(Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO: 17).
Obr. 25 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO: 18).
Obr. 26 ukazuje strukturu (Leu27)cyklo(Asp22-Om26)-hPTH-(l-31)-NH2 (SEQ ID NO: 19).
Obr. 27 ukazuje strukturu (Cys22, Cys26, Leu27)cyklo(Cys22-Cys26)-hPTH-(l-31)NH2 (SEQ ID NO: 20).
Obr. 28 ukazuje strukturu (Cys26, Cys 30, Leu27)cyklo(Cys22-Cys26)-hPTH-(l-31)NH2 (SEQ ID NO: 21).
Příklady provedení vynálezu
Příprava analogů hormonu
Technika syntézy peptidů v pevné fázi vyvinutá R. B. Merrifieldem (Solid Phase Synthesis, Advances ín Enzymology 32, 221-296, 1969), která je zahrnuta do popisu tímto odkazem, se široce a úspěšně používala při syntéze polypeptidů, jako je paratyroidní hormon. Strategie je založená na připojení karboxylového konce k pevnému nosiči. Pak se přidávají postupně aminokyseliny s vysokým výtěžkem. N-konec α-amino skupiny se tak chrání, takže tato ochranná skupina se může snadno odstranit bez odstranění peptidu z pevného nosiče. Zde použitá chemie vyžaduje modifikaci původního Merrifieldova způsobu, označovanou jako Fmoc přístup. Fmoc skupina (fluorenylmethoxykarbonyl) se může odstranit za mírných alkalických podmínek, což ponechává nedotčené ochranné skupiny bočního řetězce odolné alkálíím a připojení k nosiči. Technika je popsaná E. Atherton a R. C. Sheppard, Solid Phase Synthesis, a Practical Approach, IRL Press, New York, N. Y., což je sem zahrnuto tímto odkazem.
Příklad 1
Syntéza a čistění lineárních analogů hPTH-( 1-31 )-amidu α-Amino skupiny aminokyselin se chránily 9-fluorenylmethoxykarbonylem (Fmoc) . · ’ · .ta během spojem. Spojení se provedlo směsí hydroxybenzotriazolem (HOBt), 2-(lH-benzotnazol10 l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluronium tetrafluorborátu (TBTU) a diisopropylethy laminu (DIPEA). Použil se 4 násobný přebytek aktivovaných aminokyselin s dvojitým spojením na přidání zbytků Asn, Gin, His, Val a Ile. Doby spojení pro přidání Arg a Gly se zvýšily z 30 na 60 minut. Spojem prvého zbytku (Vapl) k nosiči (Tentagel* R, Rapp Polymere, Tubingen, Německo) se provádělo ručně. Všechny ostatní kroky se prováděly na automatickém syntetizátoru PerSeptive Biosystems* Model 9050 Plus. Ochrany pobočného řetězce byly postupně: Arg (2,2,5,7,8pentamethylchroman-6-sulfonyl), Glu, Asp a Ser (t-butyl), His, Gin a Asp (trityl), Trp (tbutyloxykarbonyl).
Po odstranění Fmoc z N-koncového Ser se peptidická pryskyřice promyla DCM, pak se štěpila od pryskyřice třepáním s 7,5 ml reagentu K (6,19 ml TFA, po 0,38 ml vody, 90% fenol/vody a thioanisolu, a 0,19 ml 1,2-ethandithiolu po 4 hodiny při 20 °C. Směs odštěpených peptidů se odstranila filtrací a srážela se přidáním t-butyl-methyl etheru. Sraženina se sebrala odstředěním, promyla se dvakrát t-butyl-methyl etherem a pak se sušila vakuovým odstřeďováním.
Surový produkt se rozpustil v 14 ml 15 % acetonitril/vody, 0,1% TFA a chromatografoval se na koloně Vydac* Cjg (0,010 ml, 1 x 25 cm). Produkt se eluoval minimálním 1% gradientem acetonitrilu (14-40%) v 0,1% TFA ve vodě. Čistota konečného produktu se určila analytickou HPLC na koloně Vydac* Cjg (0,010 ml, 0,4 x 25 cm) a molekulárním hmotnostním testem na hmotnostním spektrometru s elektrorozprašováním (VG Quattro). Údaje pro takto vzniklý hPTH-(l-31)-NH2 jsou uvedena v tabulce 1 níže.
Příklad 2
Syntéza a Čistění cyklických analogů (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2. Tento peptid se syntetizoval, jak se popisuje pro příklad 1 s Lys-Alloc a Glu-OAU substitucemi v poloze 26 a 22. Po přidání FmocSeú7 se peptidická pryskyřice odstranila z kolony do reakční zkumavky (Minivial*, Applied
Science), suspendovala se v 1,7 ml roztoku tetrakis(trifenylfosfin)paladia(0) (0,24 mmol), 5% kyseliny octové a 2,5% N-methylmorfolinu (NMM) v.dichlormethanu (DCM) pod argonem, pak o se třepala 6 hodin při 20 C, aby se odstranily allylové a alloc ochranné skupiny (Solé, N. A. aj. (1993) v Peptides: Chemistry, Structure and Biology, Smith, J. a Hodges, R (Eds), ESCOM, strany 93-94, což je zahrnuto do popisu tímto odkazem. Peptidická pryskyřice se pak promyla 0,5% diethyldithiokarbamátem.(DEDT), 0,5% NMM v DMF (50. ml), pak DMF (50 ml) a DCM (50 ml). Peptid se cyklizoval 0,06 mmol l-hydroxy-7-azabenzotriazolem (HOAt/ 0,12 •Λ
0 0 tl ·· ·*
0« · • «
0 0 00000 0
0 0
00
00
0 ·
0 »
000 000 0 0
00 mmol NMM v DMF (2 ml) 14 hodin při 20 °C (Carpino, L. A. (1993) J. Am. Chem. Soc., 115, 4397-4398. Peptidická pryskyřice se filtrovala, jednou se promyla DMF, znovu se naplnila do kolony a promyla se DMF, dokud se neodstranily bublinky ze suspenze. Zbylá syntéza se prováděla jako v příkladě 1, pouze N-koncová Fmoc skupina se neodstranila. Fmoc peptid se štěpil od pryskyřice reagentem K, jak se popisuje shora. HPLC se prováděla jako v příkladě 1 s Fmoc skupinou neodstraněnou před konečnou HPLC.
Analog (Leu22)cyklo(Lys2^-Asp^^)-hPTH-(l-31)-NH2 se připravil analogickým způsobem.
Příklad 3
Testy adenynylcyklázy
Schopnost analogů hPTH vázat receptory a aktivovat signální mechanismus spojený s adenynylcyklázou se stanovila na diferenciaci buněčné linie kompetentního osteoblastu podobného ROS 17/2 krysím osteosarkomem (ROS). Je známo, že tato aktivita je úzce spojená se schopností analogů obnovit hmotu kostí u krys s odstraněnými vaječníky. Stimulující aktivita na adenynylcyklázu se stanovila nejprve označením buněčné ATP kultury (^H)-adeninem a pak měřením množství (^Hj-cyklický AMP vzniklého z (^H)-ATP během prvých 10 minut expozice danému analogu. To je založeno na postupu, jak popisují Whitfield aj., J. Cellular Physiology, 150,299-303, 1992, což je zahrnuto do popisu tímto odkazem.
Výsledky s adenynylcyklázou jsou uvedeny v tabulce 2 níže jako koncentrace nutné k vyjádření poloviny maximálního zvýšení AC aktivity. Tyto údaje jsou také uvedeny na obr. 4. Plné kroužky ukazují aktivitu adenynylcyklázy hPTH-(l-31)-NH2· Aktivity (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 a (Leu27)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-(l-31)NH2 se ukazují prázdnými a plnými trojúhelníky.
Příklad 4
Stanovení anabolické aktivity hPTH analogů u krys s odstraněnými vaječníky
Dávkování: - - - - Dávky byly založeny na dávkové odpovědi na hPTH-(l-31)-NH2- Schopnost hPTH(1-31)-NH2 budovat kost se testovala s použitím více dávek (0,8, 0,6, 0,4 a 0,2 nmol/ 100 g tělesné hmotnosti) a regenerativním nebo léčení oceňujícím spíše než preventivním modelu^.
. ,,ζ, · . . · l·’
Krysy s odstraněnými vaječníky staré 3 měsíce se ponechaly 9 týdnů, aby jejich většinou »« ·* ·· * ·· *· **«·· · · · ··· · » I « · * · · · · ♦ · «, · a · ······ ··· ··· ······ * *
...... ·· · ·· *· nelamelárm, femolámí, trabekulární kost byla silně ochuzena před zahájením 6 týdnů denních injekcí. Ke konci 9 týdne ztratily asi 75 % hmotnosti femolámí, trabekulární kosti. Obr. 14 ukazuje zvýšení střední trabekulární tloušťky závislé na dávce způsobené lamelámím ukládáním vyvolaným 36 injekcemi 4 různých dávek fragmentu. Fragment by také mohl stimulovat růst trabekulární kosti u mnohem starších krys. Tak 36 injekcí střední dávky lineárního hPTH-(l31)'NH2 113 růst kostí 0,6 nmol hPTH-(l-31)-NH2/ 100 g tělesné hmotnosti mohlo významně zvýšit střední trabekulární tloušťku nad normální výchozí hodnotu u krys starých 1 rok a činily to stejně účinně jako hPTH-(l-84). Dávky 0,6 nmol/100 g tělesné hmotnosti se tedy použily v dalších testech.
Úplný popis protokolu dávají Rixon, R. H. aj., (1994) J. Bone Minerál Res. 9, 11971189 a Whitfield aj. (1996) Calcified Tissue Int. 58, 81-87, což je zahrnuto do popisu tímto odkazem. Normální Sham-OVX (s odstraněnými vaječníky) a OVX Sprague-Dawley krysy (staré 3 měsíce 255-260 g) se získaly z Charles River Laboratories (St. Constant, QC). Krysy se náhodně rozdělily do skupin po 8 zvířatech, které dostávaly krysí stravu Purina a vodu podle libosti. Nedošlo k žádným neplánovitým úmrtím. Zvířata dostala jednou denně 6 podkožních injekcí za týden počínaje od konce druhého týdnu po OVX a konče na konci osmého týdne po OVX (například 36 injekcí). Osm Sham-OVX a osm OVX kontrolních krys dostalo 36 injekcí vehikula (0,15MNaCl obsahující 0,001N HC1), zatímco osm OVX krys dostalo 0,6 nmol/100 g tělesné hmotnosti fragmentu ve vehikulu/ 100 g tělesné hmotnosti. Na konci osmého týdne po OVX se femury vyjmuly, isolovaly, Čistily a rozřízly na polovinu u střední diaphysis a proximální půle se vyhodila. Po odstranění epiíyzy se každá půle femuru podélně rozštěpila na dvě části a kostní morek se vypláchl.
Schopnosti fragmentů tvořit kost se hodnotily podle změn průměrné tloušťky (plocha/obvod) trabekulí v distální polovině femuru u různě ošetřených zvířat. Aby se změřila průměrná tloušťka trabekulí, dvě demineralizované poloviny femuru od každé krysy se dehydrovaly a zalily se do parafinu. Podélné 0,010 mm sekce ze střední roviny každé kosti se vyřízly a obarvily se Sandersonovým rychlým barvivém kostí (Surgipath Medical Industries, lne., Winnipeg, MB, Kanada). Průměrná tloušťka trabekulí se změřila s použitím zobrazovací soustavy. M4 a.kostního morfometrického software-od Imaging Research, lne., St. Catherines, On, Kanada).
Reprezentativní histologické řezy kostí připravené na konci osmého týdne po OVX se ukazují na obr. 5. Výsledky se dále ukazují ve formě sloupcového grafu na obr. 7. Sloupce ukazují hodnoty tloušťky trabekulí u normálních krys, křys s odstraněnými vaječníky (OVX), ·
0 · ·
000 0
0 0 *0 0« B 0 0 » 0 · 0 *00 00·
0 falešných, hPTH-(l-31)-NH2, (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 a (Leu27)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-( 1 -31 )-NH2. (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l -31 )NH2 ukazuje zvlášť výbornou aktivitu ve srovnání s lineárním analogem hPTH-( 1-31 )-NH2. Tento lineární analog se ukázal být zcela aktivní při obnově kosti, ale užívá jen cestu buněčné signalizace (AC-aktivace). Tedy se očekává, že cyklické analogy podobně jako jejich lineární analogy mají méně nežádoucích postranních klinických účinků než jejich delší vzory jako hPTH-(l-34) nebo hPTH-(l-84).
Příklad 5
0'
Obnova kosti analogy hPTH u krys se silně zbavenou trabekulámí kostí
V tomto druhém příkladu obnovy kosti se srovnávají schopnosti fragmentů obnovit silně zbavenou trabekulámí kost. V tomto pokusu se 6. týdenní program injekcí jednou denně 0,6 nmol peptidu/ 100 g tělesné hmotnosti u mladých sexuálně zralých krys se odložil až na konec 9. týdne po OVX. V této době se ztratilo 75 % jejich trabekulárních kostí, jak lze vidět na obr. 6, nejúčinnější z fragmentů byl (Leu27)cyklo(GIu22-Lys2^)-hPTH-(l-31)-NH2, který obnovil kosti na hodnoty normálních kontrolních krys.
Příklad 6
Hypotenzivní účinky analogů hPTH
Samičí Sprague-Dawley krysy (vážící přes 290 g) se anestetikovaly intraperitoneálně injikovaným pentobárbitalem sodným (65 mg/ kg tělesné hmotnosti). Monitorovala se rektální teplota termistorem YSI402 (Yellow Springs Instrument Co., Yellow Sprtngs, OH) a udržovala se mezi 36,0 a 38,5 °C během pokusu. Také se monitorovala teplota ušního boltce s použitím termistoru YSI banjo. Ocasní artérie se obnažila a kanulovala se Jelco 25-gIV katetrem (Johnson and Johnson Medical lne., Arlington, TX) a připojila se k Stanthamovu převodníku tlaku, jehož signály se digitálně zapisovaly monitorem Biopac Systems MP100 (Harvard Instruments, Saint Laurent, QC, Kanada). Také se obnažila femorální žíla pro íntravenosní injekci PTH nebo jednoho jeho fragmentů. Po operaci se krysy nechaly 8 minut stabilizovat. Potom se PTH nebo jeden z jeho’ fragmentů (rozpuštěný v okyselené solance obsahující 0,00'1'N HC1) se infikovaly do femorální žíly nebo pod kůži zadku. Údaje se sbíraly 12 minut po íntravenosní injekci nebo 22 minut po podkožní injekci. Obr. 8 ukazuje maximální pokles tlaku krve a čas do maximálního poklesu tlaku krve po přidání dávky 0,8 nmol hPTH-(l-31)-NH2/ 100 g tělesné hmotnosti, (Leu^7jcyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-31)-NH2 a (Leu27)cykfo(Lys2^-Asp3Q)14 hPTH-(l-31)-NH2· Podávalo se buď podkožně (prázdný sloupec), nebo intravenosně (plný sloupec). (Leu27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-31)-NH2 analog ukazuje zvýšenou biodostupnost ve srovnání s (Leu2 7)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-( 1-31)-14¾. To naznačuje mnohem kratší doba potřebná k poklesu tlaku krve na minimum po podkožní injekci. Oba cyklické analogy ukazují zvýšené hypotenzivní účinky, když se injikují podkožně ve srovnání s hPTH-(l-31)-NH2· Tedy se očekává, že každý cyklický laktamový analog, když se injikuje podkožně, bude mít více žádoucích vlastností než lineární obdoba. Ty zahrnují zvýšenou biodostupnost pro transport z lipidických okolí. Toto by mohlo být důsledkem stabilizace ašroubovníce blízko C-konce hormonu.
Další výsledky:
Pro účely těchto výsledků se peptidy identifikují následovně: hPTH'(l-31)-NH2 (1), (Leu27)-hPTH-( 1 -31 )-NH2 (2), (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-31)-NH2 (3) (obr. 2), (Leu27)cyklo(Lys26-Asp30)-hPTH-( 1 -31 )-NH2 (4), cyklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (5) (obr. 10), (Leu27)-hPTH-(l-30)-NH2 (7), (Leu27)cyklo(Glu22-Lys2^)-hPTH-(l-30)-NH2 (8).
Aktivity adenynylcyklázy. Dříve jsme uvedli, že (Leu27)-hPTH-(l-34)-NH2 je účinnější při stimulaci AC aktivity v ROS buněčné linii než,hPTH-( 1-34)-14¾.
Také jsme zjistili, že peptid (2) (EC50 11,5 +/- 5,2 nmol) je aktivnější než nativní sekvence (1), (EC5Q 19,9 +/- 3,9 nmol) (obr. 12). Jsou ukázané peptidy 1 (·), 2 (□), 3 (Δ), 4 (A), (O). Vzníř láictamu mezi Glu22 a Lys2^ indukovalo ještě větší AC- stimulující aktivitu s EC5Q hodnotami 3,3 +/- 0,3 nmol) (obr. 12). Tedy zesíťující vliv cyklizace a náhrada Lys27 23 Leu vede k asi 6-násobné zvýšení aktivity. Naproti tomu vznik laktamu jak mezi Lys2ť> a Asp^O (4) tak mezi Lvs2.?, a Asp^O (5) vedlo ke snížení stimulace aktivity adenynylcyklázy vzhledem k ‘ jejich výchozím lineárním sekvencím. Tak 26-30 laktam (4) má trochu menší aktivitu než jeho ·« ·· «· · ♦· »· «·» * · · · · · · • 41 · · · · · · · · • · « · ·· · ·»« ··· ··»·« « · lineární forma s EC50 17,0 +/- 3,3 nmol proti 11,5 +/-**5,2*nmol*pro (2). 27-30 laktam (5) snižuje aktivitu výchozího lineárního peptidu. Má ECjq 40,3 +/- 4,4 nmol ve srovnání s 19 +/3,9 nmol pro (1).
Dříve jsme uvedli, že hPTH-(l-30)-NH2 (6) má stimulační AC-aktivitu (EC50 20 nmol), blízkou analogu (1). Nyní jsme našli, že (Leu27)-hPTH-(l-30)-NH2 (7) a (Leu27)Cyklo(Glu2^Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2 (8) (obr. 11) mají stimulační AC-aktivity podobné peptidu (6),
Hypotenzivní účinky:
Obrázek 13 ukazuje hypotenzivní účinek lineárních (6 a 7) a cyklických analogů (3 a 8). Ukazují se maximální poklesy (horního) tlaku krve získané po injekcí krysám 0,8 nmol analogu/ 100 g tělesné hmotnosti a čas do dosažení maximálního poklesu tlaku krve (nižší). Analogy (od leva do prava peptidy 8, 7, 6, 3) se injikovaly buď intravenosně (stínovaný sloupec) nebo podkožně (prázdný sloupec). Odstranění VaP1 vedlo u všech analogů 6, 7 a 8 k významnému (p < 0,05) snížení rychlostí přenosu podkožně injikováných peptídů do vaskulámího systému (obr. 13). Skutečné celkové poklesy tlaku krve u peptidů 6 a 8 se nicméně významně (p > 0,05) nelišily od poklesů u jiných analogů, ať se podávaly podkožně nebo intravenosně, s výjimkou peptidu 5.
Pokus srovnávající hypotenzivní účinek s osteogenní aktivitou
Jak se popisuje v příkladě 6 a ukazuje se na obr. 8, rychlý hypotenzivní účinek pozorovaný po podkožní injekci hPTH analogů koreluje s osteogenní aktivitou. Proto je užitečný pokus pro screening kandidátních hPTH analogů pro osteogenní účinek a aby se vyloučily nehypotenzivní konstrukty, aniž by se musela obětovat laboratorní testovací zvířata.
, Pro pozadí, použili jsme jediný soubor osteogenních a neosteogenních AC-, AC/PLCnebo PLC-aktivujících fragmentů, aby se definitivně dokázalo, že je to pouze AC-stimulace, která snižuje tlak krve, a porovnaly se hypotenzivní účinky těchto fragmentů, když se injikují podkožně nebo intravenosně krysím samicím. Ukázali jsme, že hypotenzivní odpověď se spouští pouze fragmenty stimulujícími AC-, ÁČ/PLC- nebo PLC- a že je to relativně slabá odpověď na podkožní injekci a nikoliv mnohem větší odpověď na intravenosní injekci, která koreluje s osteogenními aktivitami hPTH-(l-31)-NH2, hPTH-(l-34) a hPTH-(l-84) u OVX krys, nikoliv však k hPTH-(l-30)-NH2, která stimuluje AC a snižuje tlak krve, ale nestimuluje růst kostí.
IV ·· 99 ·· 9 ♦ · 9· • « ♦ 9 9 · 9 * · « 9 * · * · · · 9 · 9 » • 9 9 9» 9 99«J · 9·« ·«·
9 9 9 9 9 * 9
Podrobněji, hPTH-(l-84) a její fragmenty hPŤtí-(l-34), hPŤH-íl-ílj-SjHya hPTH(l-30)-NH2 snižovaly tlak krve v ocasní artérii samičích Sprague-Dawley krys o 42,7-67,1 % asi během 1 minuty po injekci do femorální žíly, ale snižovaly tlak krve jen o 8,5-36,2 % 2-19 minut po podkožní injekci. hPTH-(l-84) a hPTH-(l-34) stimulují v cílových buňkách jak adenynylcyklázu, tak fosfolipázu-C, avšak hypotenzivní účinky musely být stimulovány specificky aktivací adenynylcyklázy, protože hPTH-( 1-3 0)-15¾ a hPTH-( 1-31)-14¾ které mohou stimulovat pouze_adenynylcyklázu,^byly^sílně^hypotenzivní, .když. , sek injikovaly intravenosně, zatímco hPTH-(l-84), která stimuluje pouze fosfolipázu-C, nebyla silně hypotenzivní, když se injikovala intravenosně. Poněvadž osteogenní účinek PTH je také zprostředkován stimulací adenynylcyklázy, očekávalo se, že hypotenzivní odpověď by se mohla využít pro screening nových ΡΊΉ konstruktů na možnou osteogenicitu. Osteogenní aktivity podkožně injiko váných hPTH-(l-31)-NH2, hPTH-(l-34) a hPTH-(l-84) blízko korelovaly s jejich hypotenzivními aktivitami. hPTH-(l-34) byl o hodně více hypotenzivní a významně více než ostatní dvě molekuly. hPTH-( 1-31)-14¾ a hPTH-(l-84) byly stejně osteogenní a hypotenzivní. Avšak tato korelace selhala u hPTH-( 1-3 0)-14¾ která stimuluje AC skoro tak silně jako hPTH-(l-31)-NH2 a hPTH-(l-34) a snižuje tlak krve jako hPTH-(l-31)-NH2, ale nestimuluje růst kostí. Nicméně schopnost významně snižovat tepenný tlak je obecnou vlastností osteogenní PTH a PTH fragmentů a je tedy rychle stanovitelným předběžným ukazatelem bioaktivity in vivo PTH fragmentů.
Podrobněji, jak hPTH-(l-34) tak hPTH-( 1-31)-15¾ byly maximálně hypotenzivní při
0,8 nmol/ 100 g tělesné hmotnosti. Tato hypotenzivní odpověď byla doprovázena přechodným (20-30 minut) zčervenáním krysích uší a tlapek, což lze považovat za užitečný vizuální kvalitativní znak.
Ačkoliv AC- nebo AC/PLC- stimulující fragmenty byly silně hypotenzivní, když se injikovaly intravenosně, intřávenosní injekce 0,8 nmol hPTH-(7:84) / 100 g tělesné hmotnosti1, která může stimulovat pouze PLC velmi pomalu (9,8 +/- 2,0 minut) a pouze velmi lehce, snižovala tlak v ocasní tepně o 0,44 +/- 0,13 kPa v porovnání s rychlým (0,9 +/- 0,08 minut) snížením 5,76 +/- 0,77 kPa způsobeným^ AC/PLC; stimulující hPTH-(l-84) nebo stejně rychlým poklesem 6,88 +/- 0,44 způsobeným AC stimulující hPTH-( 1-30)-14¾
Jedna podkožní injekce AC- nebo AC/PLC- stimulujícího fragmentu způsobila mnohem pomalejší a menší snížení tlaku v ocasní tepně než intřávenosní injekce stejné dávky. Například 0,8 nmol hPTH-(l-34) / 100 g tělesné hmotnosti snižovala tlak v ocasní tepně o 3,72 • · 9 · · 4 4 W · * * • · · · 4 * *··· 4 ··· ··· • i i 4 * · · ♦ •444*4 4* « ·* ** +/- 0,48 kPa, když se injikovala podkožně v porovnání s 6,79 +/- 0,75 kPa, když se injikovala intravenosně. Stejná dávka hPTH-( 1-30)-14¾ snižovala tlak krve jen o 1,48 +/- 0,21 kPa, když se injikovala podkožně, v porovnání s 6,88 +/- 0,44 kPa, když se injikovala intravenosně.
Neexistoval významný rozdíl mezi rychlým a velkým poklesem tlaku v ocasní tepně způsobeného intravenosní injekcí hPTH-(l-84), hPTH-(l-34) a hPTH-( 1-31)-14¾ avšak hPTH-(l-34) byl alespoň dvakrát tak účinný (p < 0,001) jako ostatní dvě molekuly, když se injikovaly„ podkožně., , - ,. . . ---Jedním z faktorů ovlivňujících hypotenzivní aktivitu a osteogenicitu podkožně injikovaných PTH nebo PTH fragmentů je schopnost se pohybovat bez dezaktivace z místa injekce ke svému cíli nejprve do svalstva a pak do kostí. Tato schopnost se odráží v době potřebné pro tlak v ocasní tepně klesnout na minimální hodnotu po injekci. Zkrácení PTH molekuly na C-konci z 84 na 31 zbytků odstranilo schopnost stimulovat PLC bez snížení schopnosti stimulovat AC a snížilo devětkrát množství času potřebného pro tlak v ocasní tepně, aby dosáhl svého minima. Odstranění jednoho zbytku, aby vznikl hPTH-(l-30)-NH2, dramaticky zvýšilo množství času potřebného pro tlak v ocasní tepně, aby spadl na své minimum z 2,0 +/- 0,31 minut v případě hPTH-( 1-31)-14¾ na 13,8 +/- 2,3 minut. Je však důležité poznamenat, že hPTH-( 1-31)-14¾ trvalo déle snížit tlak krve než hPTH-(l-84).
Použití v této studii hPTH-(l-31)-NH2, prvého PTH konstruktu schopného stimulovat
AC stejně silně jako hPTH-(l-31) bez aktivace PLC a stimulujícího aktivitu PKC spojenou s membránou, nyní dalo nejpřímější důkaz, že hypotenzivní účinek PTH je způsoben úplně AC aktivací. Tedy ačkoliv intravenosní injekce 0,8 nmol hPTH-(7-84) / 100 g tělesné hmotnosti, která může pouze stimulovat PLC/PKC, neovlivnila významně tlak v ocasní tepně, intravenosní injekce stejné dávky hPTH-( 1-3 0)-14¾ snížila tlak stejně jako hPTH-(l-34).
Protože AC také zprostředkovává PTH indukovanou stimulaci kortikální a trabekulámí tvorby kostí u OVX krys, spuštění hypotenzivní odpovědi u nedotčených krysích samic se zdá být jednoduchým, snadno měřitelným ukazatelem možné osteogenicity PTH konstruktů. Na druhé straně selhání při snižování arteriálního tlaku by vyloučilo fragment z dalšího - vyhodnocování, tedy vyřazujícím zbytečné, nákladné dlouhodobé testy osteogenicity OVX krys. Hypotenzivní odpovědi na intravenosní injekce PTH by nebyly korelovány s osteogenicitami. Avšak mnohem menší hypotenzivní odpovědi na podkožní injekce hPTH-( 1-31)-14¾ hPTH(1-34) a hPTH-(l-84) byly paralelní k osteogenicitám těchto molekul s hPTH-(l-34) majícím nejsilnější hypotenzivní a osteogenní aktivitu a druhé dvě molekuly vzájemně stejně účinné, *♦ · · · · * . . - ·· · · · ·.
i I · · · '·* ♦ » “ · • ι ♦>·’·.·♦·*·♦ *·· ·*· • I e> 4 » ί * » »t ·.· · *· ·* ale méně účinné než hPTH-( 1-34) při snižování tlaku krve a stimulaci tvorby kostí. Avšak tato korelace selhala u hPTH-(l-30)-NH2, která stimuluje AC skoro tak silně jako hPTH-( 1-31)-14¾ a hPTH-(l-34) a snižuje tlak krve jako hPTH-(l-31)-NH2, ale nestimuluje růst kostí 1 k Důvod tohoto nedostatku osteogenicity není znám. Nemůže být působen pouze podkožně injikovaným hPTH-(l-30)-NH2, potřebujícím více času na snížení tlaku krve, protože podkožně injikovaný hPTH-(l-84) potřebuje stejné množství času na snížení tlaku krve, avšak je silně osteogenní. Osteogenní odpověď jasně závisí na řadě různých faktorů, které se kombinují, aby umožnil přístup z místa injekce dosti aktivního hormonu nebo fragmentu hormonu na cílové zralé osteoblasty exprimují PTH receptor. Neschopnost hPTH-(l-30)-NH2, AC- stimulujícího a snižujícího tlak krve, stimulovat tvorbu kostí by mohla být výsledkem větší nestability, poněkud vyšší EC50 pro AC stimulaci, například 20 nmol místo 16 nmol pro hPTH-(l-31)-NH2 a hPTH-(l-34), a dlouhé doby pro vstup do cirkulace z místa injekce.
Přes neschopnost hPTH-(l-3O)-NH2 být osteogenní, schopnost významně snižovat tepenný tlak je stále obecnou vlastností osteogenních PTH a je tedy rychle stanovitelným ukazatelem možné bioaktivity in vivo PTH fragmentů. Z toho plyne, že hypotenzívní odpověď by také měla sloužit jako účinný ukazatel schopnosti osteogenního PTH konstruktu dosáhnout své cíle po podám orální nebo jinou neinjekční cestou.
Nepohodlí a jiné možné nepříjemnosti hypotenzivní reakce na každou injekci by mohly snížit vůli pacientů s osteoporózou přijímat dlouhodobé léčení s PTH a PTH fragmenty. Naštěstí se přerušované podkožní injekce se běžně užívají k stimulaci tvorby kostí a tyto molekuly jsou mnohem méně hypotenzivní, když se injikují podkožně, než když se injikují intravenosně. Jak jsme'také argumentovali dříve 6 7 hP-TH-(l-30)-NH2 by také měl další výhodu stimulace AC bez stimulace PLC a kterýchkoliv možných postranních účinků působených Ca^4 a PKC, které by mohl spustit.
Příklad 7
Cyklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-31)-NH2 (5). Syntéza se provedla analogickým ' žpůšóbémrk (Leu2'^)cykίo(Glu2--L·ys2^)-hPTH-(l'-3Ί)-NH2. Produkt měl odhadnutou -čistotu přes 95 % s molekulovou hmotností 3700,64 (+/-0,38) (očekávaná Μ + 1 = 3700,14). Peptid se sekvenoval, aby se potvrdila poloha laktamu.
« « · w V >> * τ • 0 ··· ««···· ··· ··· t *·> · · a 0 fc ·»··· ·' · · t ·$ »0 (Leu27)cyklo(Glu22-Lys26)-hPTH-(l-30)-NH2· Tento peptid se připravil jako peptid (3) bez ručního přidávání Val na nosič. Produkt měl odhadnutou čistotu přes 97 % s molekulovou hmotností 3586,14 (+/-0,19) (očekávaná Μ + 1 = 3685,99).
Analogy podle vynálezu se mohou podávat teplokrevnému savci, který to potřebuje, zejména lidem, parenterálně, topicky, rektálně, inhalací nebo ústně. Analogy se mohou konvenčně upravit do parenterální dávkové formy, smícháním asi 1 do asi 300 mg na jednotkovou dávkovou formu s konvenčním vehikulem, excipientem, pojivém, konzervačním činidlem, stabilizátorem, barvivém, a podobně, jak je běžné u přijaté farmaceutické praxe.
Pro parenterální podávám by bylo potřeba dávat 1 až 2 ml bezbolestné podkožní injekce velmi jemnou injekční jehlou 30-guage více než jednou denně po jeden až dva roky, v závislosti na závažnosti choroby. Injikovaný materiál by obsahoval jednu sloučeninu podle vynálezu ve vodném, isotonickém sterilním roztoku nebo suspenzi (případně s konzervačním činidlem, jako je fenol, a solubilizátorem, jako je ethyleňdiamin tetraoctová kyselina (EDTA). Mezi přijatelnými vehikuly a rozpouštědly, které se mohou použít jsou voda, mírně okyselená voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Mimoto se konvenčně používají jako rozpouštědla nebo suspendující media sterilní fixované oleje. Při přípravě injekcí jako fixované oleje nacházejí použití syntetické monoglyceridy, diglycerídy, mastné kyseliny (jako kyselina olejová).
Pro rektální podávání lze analogy podle vynálezu připravit ve formě čípků smícháním s vhodným nedráždivým excipientem, jako je kakaové máslo nebo polyethylenglykoly. .
Pro topické použití lze analogy podle vynálezu připravit ve formě mastí, gelů, roztoků, suspenzí nebo kožních adhesivních náplastí.
Inhalace lze například dosáhnout prostředky popsanými v PCT publikované přihlášce WO 94/07514. Denní dávka by neměla překročit 0,05 mg/ kg tělesné hmotnosti, nebo asi 3,5 mg/ 70 kg člověka v závislosti na aktivitě dané sloučeniny, věku, hmotnosti, pohlaví a podmínkách léčeného subjektu. Jak je dobře známo, množství aktivní složky, která se může kombinovat s nosiči, aby se doslaJa jednotková dávka, se bude měnit v závislosti na hostiteli a daném způsobu ·--=- - podávání? -.....--------- Následující tabelo váný soupis analogů připravených podle postupů popsaných shora.
· · • ? · > · 3 · * fc ·0 »
\.b i
·· £·
0 0 ' » 0
0 -00 0 • 0 «9 er
Tabulka 1: Molekulové hmotnosti PTH analogů
sekv. ID | analog | hmotnost (stanovená) | hmotnost (očekávaná) ΜΊ |
1 | hPTH-(1-31>NHí | 3717,77(+0,13) | 3717,14 |
3 | [Leu^cydotGlu^-Lys^bhPTH-íl-SD-NH, | 3685,46 (±0,46) | 3685,12 |
7 | [Leuí7lcyclo{Glu22-Lys“)-hPTH-(1-30)-NH2 | 3586,14(10,19) | 3585,99 |
4 | [Leuí7lcyc!o(Lys2e-Asp30)-hPTH-( 1 -31 HH | 3685,61 (±0,36) | 3685,12 |
6 | cydotLys^-Asp^HiPTH.d^D-NHj | 3700,64 (±0,38) | 3700,14 |
a | [LeuJ7]cyclo(GIa22-Lys2s)-hPTH-(1-31)-OH | 3685,96 (±0,07) | 3686,12 |
9 | (leuZ7]cyclo(Glua-LysM)-hPTH-(1-34)-NH2 | 4083,62(±0,33) | 4083,52 |
10 | (Leu^cycIofGlu^Lys^HiPTH-tl-Saj-OH | 4084,14(10,87) | 4084.52 |
11 | tAla^cyclofGfu^-Lys^HiPTH-tl-aD-NH, | 3642,70(10,76) | 3643,04 |
12 | [Nle27lcyclo(Gfu2Z-Lys2e}-hPTH-(1-31)-NH2 | 3684,57(10,99) | 3685,12 |
13 | [Nle^^Leu^IcycIotGlu^Lys^PTH-íl-aiJ-NH, | 3649,50(0,59) | 3649,04 |
14 | cyclo(Glua-Lys*WiPTH-{1-31>.NH2 | 3699,66 (±0,49) | 3700,14 |
15 | (Ile^lcycIoíGlu^-Lys^hPTH-íl-aiJ-NHj | 3684,76(10,74) | 3685,12 |
i.!
• i í ♦ ♦ b ·« · · ·
M *· « · · Φ £ « * » «·« ··· » * ·· ··
Tabulka 1 Molekulové hmotnosti PTH analogů
sekv. ID | analog | hmotnost (stanovená) | hmotnost (očekávaná)M+l |
16 | rTyr^]cydo(Glus-Lysw>hRTH-{1 -31 >NH, | 3734.47 (±0,80) | 3735,14 |
17 | a-acetyl-[Leu27]cyclo(Glu22-Lys26}-íiPTH-{1-31)-NH7 | 3726,25 (±0,42) | 3727,12 |
18 | (Leurlcyclo(lysa-Glua)-hPTH-{1-31)-NH} | 3684,67 (±0,52) | 3685,12 |
19 | [LeuOTIcydo(Asp“<>na>hPTH-(1-31)-NH, | 3656,90(10,87) | 3657,12 |
20 | [Cys2:Cys2e;Leu27lcyclo(Cys22-Cys!6)hPTH(1-31)NH, | 3651,2610,31 | 3650,1 |
21 | 3663,61 ±0,16 | 3664,13 |
Tabulka 2 Adenynylcyklázové aktivity peptidových analogů
sekv. ID | analog | adenylylcykláza (Ε(Ζ<.θ) |
1 | hPTH-(1-31}-NH, | 20 |
3 | [Leu^lcyclofGlu^Lys^J-hPTHfl-ŠIJ-NHj | 3 |
7 | [Leu^lcycIoíGlu^ys^J-hPTH-tl-SOl-NH, | 20 |
4 | [Leu27]cycio(LysM-AspM)-hPTH-(1-31>-NH, | 3*, 17° |
6 | cydo(Lys-Asp®)-hPTH-(1 -31 )-NH2 | 40 |
8 | LeuÍTlcydo(Glua-LysÍB)-hPTH-(1-31)-OH | 7 |
9 | fLeu2T]cyclo(Glua-Lysie)-hPTH-(1-34)-NHj | 8 |
10 | f Leu27lcyclo(Glu22-Lys“)-hPTH-( 1 -34 )-OH | 6 |
11 | |Alaírlcydo(Gtua-Lysa)-hPTH-(1-31)-NH, | 9 |
12 | |Nlealcyclo{Glua-LysseHiPTH-(1-31).NH, | 9 |
13 | tNlee’e;LeuÍTlcyc1o(Glua-Lys”)-hPTH.(1-31>NH, | 6 |
Í4 ' | cýclo(Gíua-LysMřliPTH-(Í-31 )-NH;7 ---------- ’ ~ ----- | ' ' 17 ......~ |
15 | fllenlcydo(Glua Lys*>hPTH-(1 -31 >NH, | 9 |
·'· ·/
722 i
Tabulka 2 Adenynylcyklázové aktivity peptidových analogů
4* ·· · « 4 • 4 4 to 4 · «' · 4 »44 4 ·· • ·. » • 4 to *
k · · « « 4 4 »
« • · * ♦·· to
4 >4 • « • t «4 4
4»
sekv. ID | analog | adenylylcykláza (EC„) |
16 | (Tyč^clolGIu“ tys^PTK-ll-SIJ-NHí | 9 |
17 | a -acetyl-ILeun]cydo(GluH-Lysa)-hPTH-(1-31 >NH3 | 24 |
18 | ILeu^cyctofLys^Gl^hhPTH-d-SI >NH, | 4 |
19 | [Leus]cydo(Aspa-Omw}-fiPTH-{1-3 1 >NH3 | >200 |
20 | (Cy^Cys^-.Leu^IcycteíCya^-Cys^PTHd-SnNHí | 16 |
21 | [Cys^Cys^Leu^lcycIoíCys^-Cys^hPTHd-SDNHj | 24 |
•obr. 4 **obr,12
Literatura
Obsah následujících publikací je sem zahrnut tímto odkazem.
(1) Cauffield, Μ. P.; McKee, R. L.; Goldman, Μ. E.; Duong, L. T.; Fisher, J. E.; Gay, C. T.; DoHaven, P. A.; Levý, J. J.; Roubini, Nutt, R. F.; Chorev,
M.; Rosenblatt, M. The Bovine Renal Parathyroid Hormone(PTH) Receptor Has Equal Affinity for 2 Different Amino Acid Sequences - The Receptor Binding Domains of PTH and PTH-Related Protein Are Located Withín the 14-34 Region. Endocrinology 1990, 727, 83-87.
(2) Neugebauer. W.; Barbier, J.-R.;Sung, W.L.; Whitfield, J.F.; Willick, G.E. Solution Structure and Adenylyl Cyclase Stimulating Activities of C-Terminal Truncated Human Parathyroid Hormone Analogues Biochemistry 1995, 34, 8835-8842.
(3) Gardella, T. J.; Wilson, A. K.; Keutmann, Η. T.; Oberstein, R.; Potts, J. T.; Kronenberg, H.M., and Nussbaum, S. R. Analysis of Parathyroid Hormone's Principal Receptor-Btnding Region by Site-Directed Mutagenesisand Analog Design. Endocrinology 1993, 732, 2024-2030.
(4) Marqusee, S.; Baldwin, R.L. Helix Stabilization by Glu ...Lys+ Salt
Bridges in Short Peptides of De Novo Design. Proč. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 1987, 84,8898-8902. '
I < rt v ο·;· c< , * Μρ 4' »« b· * -W f ;q ¢1, * <TA <5?
c<e» «j íf f<
4>
t\ T < Ϊ t e : t 1 f t
t. >; II I r.
< ť Γ ! t č r«
(5) Surewiczi W.K.; Neugebauer, W.; Gagnon, L; MacLean, S.; Whitfield, J,F.; Willicít, G.E. Strocture-Function Relationships in Human Parathyroid Hormone: The Essential Role of Amphiphilio-Helix. In Peptides: Chemistry,
Structure, and Biology 1993; Smith, J.; Hodges, R., Eds.; ESCOM Leiden, f!'
The Netheriands, 1993, pp. 556-558 'Ρ (6) Whitfield, J. F.; Morley, P.; Willick, G, E.; Ross, V.; Barbier, J. R.; isaacs, R. J.; Ohannessianbany, L. Stimutation of the Growth of Femoral Trabecular Bone in Ovariectomized Rats by the Novel Parathyroid Hormone Fragment, hPTH-(1-31)NH2 (Ostabolín) Calcif. Tissue Int. 1996, 58,81-87.
t (7) Whitfield, J. F.; Morley, P, Smáli Bone-Biiilding Fragments of, i ti·
Parathyroid Hormone: New Therapeutic Agents for Osteoporosis Trends Pharmacol. Sci. 1995 16,382-386.
II
5Í i'
Τ' .,>'·$
Γ——ι^Μ~ι·-II -Λίγτιιι-----------·_ — - ., - - - ----_ . — . . ' II MÍMiiáiftrÍ
í.
Seznam sekvencí (2) Informace o řetězci SEQ ID NO : 1:
Charakteristika řetězce:
(i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
ή.
D) Topologie: lineární, •t (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 1: ‘
V »
Ser Val Ser Glu Iíě Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His í 5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Ařg Lys Lys Leu
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 2:
« * ♦ ♦ « · · · • · »··· t ·· *·· • · a · · ·« Ϊ <1 «·
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO:2:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO: 3:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie; cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 3 :
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO: 4;
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, ř’ · · * ·'
4« φ · ·« · * '» (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 4:
Ser Val Ser Glu lle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu 15 20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO : 5:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: protein, (xí) Popis řetězce: SEQ ID NO: 5:
Ser Val Ser Glu lle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu 15 20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO: 6:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulárm, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 6:
Ser Val Ser Glu lle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 ·· φ'φ ·<..&' ·· ·Φ b Φ » « φ « « « Φ Φ : · , Φ φ · · · Φ ιφ * Φ · Φ
Φ φ Φ · Φ *····· ΦΦΦ Φ Φ Φ
Φ*« Φ « * φ Φ
Φ Φ · Φ ί · « Φ '· ·Φ> ΦΦ
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 7:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 30 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 7:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 8:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 8:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 9:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 34 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 9:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val His Asn Phe
Informace o řetězci SEQ ID NO : 10:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 34 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xí) Popis řetězce : SEQ ID NO: 10:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val His Asn Phe
Informace o řetězci SEQ ID NO : 11:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina, a1 ♦
MM ‘•aaaa a aaa a
a a
0 *
«••0 «0 ««
0· *·
0 0 ♦ 0 ·
0« 0 0 0 0
0 000 0. 000 000
0 0 0 »· >0
D) Topologie: cirkulámí, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 11:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Ala Leu
20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO: 12:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulámí, (íi) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 12:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Xaa Leu
20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO : 13 :
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulámí, (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 13:
φφ φ
• φ φ ΦΦΦ· ·Φ
Ser Val Ser Glu íle Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Xaa Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val
ΦΦ Φ φφφφ φφφ φφφφ
Φ Φ' Φ. Φ ί· φ φ Φ φ φφφφφφ φφφ φφφ φ φ * * φ φφ φ φφ φφ
Informace ο řetězci SEQ ID NO: 14:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulárm, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce ; SEQ ID NO: 14:
Ser Val Ser Glu lle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu 15 20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 15:
Charakteristika řetězce: 15
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 15:
Ser Val Ser Glu íle Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His 1 5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys lle Leu líirfíV.ϋ,.ζ· '1i ·αΛι.
·· to b · · • · · * b * • · » ·« ·· • «to · • · to to >b i ····· « · • to toto
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO: 16:
Charakteristika řetězce: i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 16:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Tyr Leu
20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO : 17:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 17:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val
Informace o řetězci SEQ ID NO : 18:
Charakteristika řetězce:
44 44 4 44 44
44 4 4 44. 4 4 4 4
4 4 444 4 4 4 4
444 4 4444 4> 444 444
4 * 4 4 * * ·
444444 44 * 4 4 44
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie; lineární, (ií) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 18:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Glu Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO: 19:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulámí, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 19:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Xaa Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 20:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, aa aa aa » ·· ·· • aaa aaa. · * · * • a a a · · · a ·· · • > · · · a ···· · «a· *·· • · a a a « ·' . · aaaaaa aa a aa aa (xí) Popis řetězce : SEQ ID NO: 20:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Cys Leu Leu
20 25
Gin Asp Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO: 21:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: cirkulární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce: SEQ ID NO: 21:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His
5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Cys Leu Leu
20 25
Gin Cys Val 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 22:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 34 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 22:
Ser Val Ser Glu Ile Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His l 5 10
Leu Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu·
20 25 • 4 44 44 4 44. 44 • 4 4 * 444 4444
444 4*44 4444
444 4 4444 4 444 444 «44444 « 4
4444*4 44 4 44 44
Gin Asp Val His Asn Phe 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 23:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 31 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: protein, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 23:
Xaa Val Ser Glu Ile Gin Leu Xaa His Asn Leu Gly Lys Xaa
5 10
Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Arg Val Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Leu
20 25
Xaa Asp Xaa 30
Informace o řetězci SEQ ID NO : 24:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 4 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární,
I(ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 24:
Val His Asn Xaa
Informace o řetězci SEQ ID NO : 25:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 5 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární,
0 0 « 0 0 0 0 0·· 000 0000 0000
0 «00 0000« 0 000 000 000««· 0 0
0000*0 0 0 · «· ·· (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 25:
Val His Asn Phe Xaa
5
Informace o řetězci SEQ ID NO: 26:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 6 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 26:
Val His Asn Phe Val Xaa
5
Informace o řetězci SEQ ID NO : 27:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 7 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ií) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 27:
Val His Asn Phe Val Ala Xaa
5
Informace o řetězči SEQ ID NO: 28:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 8 aminokyselin,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární,
ΦΦ φφ φφ · * * » · φ · φ ♦ · · · φ · φ φ · φ · φ ·· · φ • · * * · φ φφφ φ φφφ φφφ φφφφφφ φ φ φφφφ*· φφ φ φφ φ· (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 28:
Val His Asn Phe Val Ala Leu Xaa
5
Informace o řetězci SEQ ID NO: 29:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 4 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xí) Popis řetězce : SEQ ID NO: 29:
His Lys Lys Lys
Informace o řetězci SEQ ID NO: 30:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 4 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 30:
His Leu Lys Lys
Informace o řetězci SEQ ID NO : 31:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 4 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid,
9*99 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 · 9 9 9
9 999 9 99«9 9 ·»9 «99
999999 · 9
9 9 9 99 9 9· 99 (xi) Popis řetězce : SEQ ID NO: 31:
Lys Lys Lys Lys
Informace o řetězci SEQ ID NO: 32:
Charakteristika řetězce: i) A) Délka: 4 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xi) Popis řetězce: SEQ ID NO: 32:
His Leu Lys Ser
Informace o řetězci SEQ ID NO : 33:
Charakteristika řetězce:
i) A) Délka: 5 aminokyseliny,
B) Typ: aminokyselina,
D) Topologie: lineární, (ii) Typ molekuly: peptid, (xí) Popis řetězce : SEQ ID NO: 33:
Val Leu Asn Phe Xaa
Claims (53)
- PATENTOVÉ NÁROKYt)1. Analog lidského paratyroidního hormonu hPTH-( 1-31) v jehož poloze 27 je Lys nebo byl substituován vhodným hydrofobním zbytkem a který byl cyklizován, aby vznikl laktam.
- 2. Analog podle nároku 1, kde cyklizace je buď mezi Glu22 a Lys2^ nebo mezi Lys2^ a Asp^O
- 3. Analog podle nároku 1, kde hydrofobní zbytek je Leu.
- 4. Analog podle nároku 1, kde hydrofobní zbytek je vybrán ze skupiny sestávající z omithinu, citrulinu, kyseliny α-aminomáselné, nebo jakékoliv lineární nebo rozvětvené a-amino alifatické kyseliny mající 2 až 10 uhlíků v postranním řetězci, jakéhokoliv takového analogu majícího polární nebo nabitou skupinu na konci alifatického řetězce.
- 5. Analog podle nároku 4, kde hydrofobní zbytek je vybrán ze skupiny sestávající z Ile, norleucinem, Met a omithinem.
- 6. Analog podle nároku 1, kde má buď C-koncové amidové zakončení, nebo Ckoncové karboxylové zakončení.
- 7. Analog podle nároku 1, kde je to SEQ ID NO: 3. i
- 8. Analog podle nároku 1, kde je to SEQ ID NO: 4. 1
- 9. Kompozice pro podávání teplokrevnému zvířeti, které to potřebuje, obsahující analog lidského paratyroidního hormonu hPTH-(l-31) podle nároku 1 ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo excipientem.
- 10. Kompozice podle nároku 9, kde hydrofobní zbytek v analogu je Leu.
- 11. Kompozice podle nároku 9, kde hydrofobní zbytek v analogu je vybrán ze skupiny sestávající z Ile, norleucinu, Met a omithinu.í
- 12. Kompozice podle nároku 9, kde analogem je SEQ ID NO: 3.
- 13. Kompozice podle nároku 9, kde analogem je SEQ ID NO: 4.
- 14. Způsob lečem teplokrevného zvířete, které takové lečem potřebuje, zahrnující j podávání takovému teplokrevnému zvířeti terapeuticky účinné množství analogu lidského paratyroidního hormonu hPTH-(l-31) podle nároku 1.i • · · · • · · · ·1 · « · ·#1· · ·« ·· • · · • · • * • · MM ·· • · · · »·· ·♦· ·· ··
- 15. Způsob podle nároku 14, kde hydrofobní zbytek v analogu je Leu.
- 16. Způsob podle nároku 14, kde hydrofobní zbytek v analogu je vybrán ze skupiny sestávající z Ile, norleucinu, Met a omithinu.
- 17. Způsob podle nároku 14, kde analogem je SEQ ID NO: 3.
- 18. Způsob podle nároku 14, kde že analogem je SEQ ID NO: 4.
- 19. Lidský paratyroidní hormon hPTH a jeho farmaceuticky přijatelné soli mající řetězec aminokyselin:R-NH-Rl-Val-Ser-Glu-IIe-Gln-Leu-R2-His Asn-Leu-Gly-Lys-R3-R4-R5-R6-R7-Glu-ArgV al-R8-Trp-Leu-R9-Rl O-Rl 1 -Leu-Rl 2-Asp-Y kdeR = vodík nebo jakákoliv lineární nebo rozvětvená alkylová, acylová nebo arylová , skupina,R1 = Ser, Ala nebo Aib,R2 = Met nebo přirozeně se vyskytující hydrofobní aminokyselina,R3 = His nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,R4 = Leu nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,R5 = Asn nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,R6 - Ser nebo ve vodě rozpustná aminokyselina,R7 = Met nebo přirozeně se vyskytující hydrofobní aminokyselina,R8 = Glu, Lys nebo Asp,R9 - Cys, Glu nebo Om,R10 = Arg, Lys, Om, Gin, Glu nebo Asp,R11 = přirozeně.se vyskytující.hydrofobní nebo polární aminokyselina,.R12 = Gin, Arg, Glu, Asp, Lys nebo Om,X = OH, NH2 aY = X, Val-X, Val-His-X, Val-His-Asn-X, Val-Hís-Asn-Phe-X, Val-His-Asn-Phe-ValX, Val-His-Asn-Phe-Val-AIa-X, Val-His-Asn-Phe-Val-Ala-Leu-X, cyklizované jako mezi jedním nebo dvěma páry aminokyselin 22 a 26, 26 a 30, 27 a 30 a 25 a 29, když R3 a R6 jsou-Jrt «* · · · · · · · ·JV ···»··» »··· •t« · * · · ·««« • | 9 9· · ···· * ··· ··· >·»·*· · * *··>·· ·· · ·· ·*Lys, Om, Glu nebo Asp, s výjimkou cyklo(Lys26-Asp30)(Leu27)-hPTH-(l-34)-NH2, cyklo(Lys27-Asp30)-hPTH-(l-34)-NH2 acyklo(Lys26-Asp30)(Leu27)-hPTH-(l-34)-OH.
- 20. Analog podle nároku 19, kde cyklizace má formu laktamu.
- 21. Analog podle nároku 20, kde laktam je i, i + 4 laktam.
- 22. Analog podle nároku 21, kde laktam je Glu22-Lys26 laktam.
- 23. Analog podle nároku 21, kde laktam je Lys26-Asp3^ laktam.
- 24. Analog podle nároku 20, kdeR je HaXjeNH225. Analog podle nároku 24, kde Rl 1 je Lys nebo Leu.
- 26. Analog podle nároku 25, kde R2 a R7 jsou Met nebo Nle.
- 27. Analog podle nároku 26, kde Rl je Ser, R2 je Met, R7 je Met, R8 je Glu, R9 je Arg, R10 je Lys a R12 je Gin.
- 28. Analog podle nároku 27, kde R3 je His nebo Lys, R4 je Leu, Lys nebo Arg, R5 je Asn, Om, Hci, Asp, Arg, Lys, D-Lys, Ser nebo Gly a R6 je Ser, Lys Asp nebo Arg.
- 29. Analog podle nároku 27, kde R3-R6 jsou His-Lys-Lys-Lys, His-Leu-Lys-Lys, Lys-Lys-Lys-Lys nebo His-Leu-Lys-Ser.
- 30. Analog podle nároku 27, kde Y = X.
- 31. Analog podle nároku 27, kde Y = Val-X.
- 32. Analog podle nároku 27, kde Y = Val-Leu-Asn-Phe-X.
- 33. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 6.
- 34. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 7.
- 35. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 8.
- 36. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 9.
- 37. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 10.
- 38. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: II.
- 39. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 12.
- 40. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 13.
- 41. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 14.·« *0 000. ·0 ·>• 000 0 · Ů 00000 0 0 0 00« 0 00 ·00 000 0 0000 0 000 00« 000 ··· · 0 • 00 0 00 0· · 0· ··
- 42. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 15.
- 43. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 16.
- 44. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 17.
- 45. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 18.
- 46. Analog podle nároku 19, kde má SEQ ID NO: 19.
- 47. Způsob screeningu peptidových konstruktů na osteogenicitu vyznačený tím, že (a) testovaná zvířata se anestetikují, (b) testovanému zvířeti se dá podkožní injekce účinná dávka kandidátního peptidu nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli rozpuštěného ve farmaceuticky přijatelném rozpouštědle, (c) měření tepenného tlaku krve zvířete, kde malý pokles tlaku krve po krátké době ukazuje osteogenicitu peptidu.
- 48. Způsob podle nároku 47 vyznačený tím, že rozpouštědlem je okyselená solanka.
- 49. Způsob podle nároku 48 vyznačený tím, že rozpouštědlo obsahuje 0,0001 M HC1.
- 50. Způsob podle nároku 49 vyznačený tím, že testovaným zvířetem je krysa a pokles tlaku krve je 8,5 až 36,2 % při 2 až 19 minutách po injekci.
- 51. Způsob podle nároku 50 vyznačený tím, že peptidem je hPTH fragment, podle nároku 19.
- 52. Způsob podle nároku 51 vyznačený tím, že dávka hPTH je asi 0,8 nmol / 100 g tělesné hmotnosti.
- 53. Způsob podle nároku 52 vyznačený tím, že hPTH má SEQ ID NO: 3.
- 54. Způsob podle nároku 52 vyznačený tím, že hPTH má SEQ ID NO: 4.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/691,647 US5955425A (en) | 1996-08-02 | 1996-08-02 | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
US4056097P | 1997-03-14 | 1997-03-14 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ34799A3 true CZ34799A3 (cs) | 1999-07-14 |
Family
ID=26717175
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ99347A CZ34799A3 (cs) | 1996-08-02 | 1997-08-01 | Analogy paratyroidního hormonu pro léčení osteoporézy |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0915911B1 (cs) |
JP (3) | JP4122061B2 (cs) |
KR (1) | KR100500859B1 (cs) |
CN (1) | CN1176947C (cs) |
AT (1) | ATE253078T1 (cs) |
AU (1) | AU723728B2 (cs) |
BG (1) | BG103128A (cs) |
BR (1) | BR9711002B1 (cs) |
CA (1) | CA2261564C (cs) |
CZ (1) | CZ34799A3 (cs) |
DE (1) | DE69725850T2 (cs) |
DK (1) | DK0915911T3 (cs) |
EE (1) | EE9900039A (cs) |
ES (1) | ES2207740T3 (cs) |
FI (1) | FI990126A (cs) |
GE (1) | GEP20033095B (cs) |
IS (1) | IS4962A (cs) |
LV (1) | LV12293B (cs) |
NZ (1) | NZ333809A (cs) |
PT (1) | PT915911E (cs) |
RU (1) | RU2203286C2 (cs) |
SI (1) | SI9720057A (cs) |
SK (1) | SK287397B6 (cs) |
WO (1) | WO1998005683A1 (cs) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0986395A4 (en) * | 1997-05-14 | 2004-12-01 | Aventis Pharm Prod Inc | PEPTIDE ANALOGS OF THE PARATHYROID HORMONE |
US6495662B1 (en) | 1998-10-22 | 2002-12-17 | The General Hospital Corporation | Bioactive peptides and peptide derivatives of parathyroid hormone (PTH) and parathyroid hormone-related peptide (PTHrP) |
JP4486258B2 (ja) | 1998-11-25 | 2010-06-23 | ザ・ジェネラル・ホスピタル・コーポレイション | ヒト副甲状腺ホルモンの改変、調製および使用 |
EP1141237B1 (en) | 1998-12-31 | 2005-11-02 | The General Hospital Corporation | Pth receptor and screening assay utilizing the same |
EP1221963A4 (en) * | 1999-07-28 | 2006-03-22 | Univ Pennsylvania | METHODS OF INHIBITING OSTEOCLASTOGENESIS |
US6316410B1 (en) * | 1999-09-22 | 2001-11-13 | National Research Council Of Canada | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
US7572765B2 (en) | 2001-07-23 | 2009-08-11 | The General Hospital Corporation | Conformationally constrained parathyroid hormone (PTH) analogs |
WO2003059291A2 (en) | 2002-01-10 | 2003-07-24 | Osteotrophin Llc | Treatment of bone disorders with skeletal anabolic drugs |
EP1567178A4 (en) * | 2002-11-01 | 2009-07-15 | Amgen Inc | MODULATORS OF RECEPTORS FOR NEUTRAL THERAPY HORMONE AND SIDE-HORSE HORMONE-RELATED PROTEINS |
US8088734B2 (en) * | 2003-01-21 | 2012-01-03 | Unigene Laboratories Inc. | Oral delivery of peptides |
WO2007130113A2 (en) * | 2005-09-06 | 2007-11-15 | Zelos Therapeutics, Inc. | Parathyroid hormone analogues and methods of use |
EP2056862A2 (en) * | 2006-07-31 | 2009-05-13 | Zelos Therapeutics, Inc. | Parathyroid hormone analogues and uses thereof |
EA014696B1 (ru) | 2006-10-13 | 2010-12-30 | Эли Лилли Энд Компани | Пэгилированный паратиреоидный гормон в качестве модулятора рецептора паратиреоидного гормона и его применение |
MX353986B (es) | 2007-08-01 | 2017-11-06 | Massachusetts Gen Hospital | Metodos de analisis y seleccion usando receptores acoplados a proteina g y composiciones relacionadas. |
MX358161B (es) | 2010-05-13 | 2018-08-06 | The General Hospital Corp Star | Analogos de hormona paratiroidea y usos para los mismos. |
CN105440126B (zh) * | 2015-12-31 | 2019-10-25 | 南京工业大学 | 治疗骨质疏松的α-螺旋多肽及其制备方法与应用 |
EP3655104A4 (en) | 2017-07-15 | 2021-03-17 | The Regents of the University of California | OSTEOADSORPTIVE FLUOROGENIC SUBSTRATE FROM CATHEPSIN K FOR IMAGING OSTEOCLAST ACTIVITY AND MIGRATION |
WO2020064190A1 (en) | 2018-09-26 | 2020-04-02 | Borealis Ag | Propylene copolymer composition with excellent optical and mechanical properties |
JP7342310B2 (ja) | 2019-05-28 | 2023-09-12 | 国立大学法人東北大学 | 電源装置、超伝導装置、超伝導デバイス、及び超伝導デバイスの製造方法 |
CN113549144A (zh) * | 2021-06-30 | 2021-10-26 | 华南理工大学 | 一种特立帕肽hPTH(1-34)的生产和纯化方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5317010A (en) * | 1991-10-10 | 1994-05-31 | Peter K. T. Pang | Parathyroid hormone analogues substituted at AA 25, 26, 27, and use in osteoporosis treatment |
US5814603A (en) * | 1992-06-12 | 1998-09-29 | Affymax Technologies N.V. | Compounds with PTH activity |
AU672790B2 (en) * | 1992-07-15 | 1996-10-17 | Novartis Ag | Variants of parathyroid hormone and its fragments |
CA2126299C (en) * | 1994-06-20 | 2000-12-12 | Gordon E. Willick | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
-
1997
- 1997-08-01 ES ES97933603T patent/ES2207740T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 KR KR10-1999-7000903A patent/KR100500859B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 NZ NZ333809A patent/NZ333809A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 EE EEP199900039A patent/EE9900039A/xx unknown
- 1997-08-01 CA CA002261564A patent/CA2261564C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 CN CNB971981612A patent/CN1176947C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 EP EP97933603A patent/EP0915911B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 AU AU36905/97A patent/AU723728B2/en not_active Ceased
- 1997-08-01 WO PCT/CA1997/000547 patent/WO1998005683A1/en active IP Right Grant
- 1997-08-01 SI SI9720057A patent/SI9720057A/sl not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 SK SK132-99A patent/SK287397B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 RU RU99104132/14A patent/RU2203286C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 DE DE69725850T patent/DE69725850T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-01 CZ CZ99347A patent/CZ34799A3/cs unknown
- 1997-08-01 GE GEAP19974655A patent/GEP20033095B/en unknown
- 1997-08-01 PT PT97933603T patent/PT915911E/pt unknown
- 1997-08-01 BR BRPI9711002-7A patent/BR9711002B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-08-01 JP JP50741398A patent/JP4122061B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-01 DK DK97933603T patent/DK0915911T3/da active
- 1997-08-01 AT AT97933603T patent/ATE253078T1/de active
-
1999
- 1999-01-22 FI FI990126A patent/FI990126A/fi unknown
- 1999-01-28 BG BG103128A patent/BG103128A/xx unknown
- 1999-01-29 IS IS4962A patent/IS4962A/is unknown
- 1999-02-01 LV LVP-99-15A patent/LV12293B/en unknown
-
2007
- 2007-05-01 JP JP2007121289A patent/JP4224111B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-09-25 JP JP2008246839A patent/JP2009057386A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5955425A (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
JP4224111B2 (ja) | 骨粗鬆症の治療のための副甲状腺ホルモン類似体 | |
US6316410B1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
US6541450B1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
CA2126299C (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
EP0672055B1 (en) | Neuropeptide y antagonists | |
US20090226477A1 (en) | Pth2 receptor selective compounds | |
KR20010101079A (ko) | Igf-ⅰ 및 -ⅱ를 억제하는 gh-rh의 길항 유사체 | |
EP0842193B1 (en) | Somatostatin-analogous cyclic peptides with inhibitory activity on growth hormone | |
EP1352912A1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis | |
CA2599885A1 (en) | Parathyroid hormone analogues for the treatment of osteoporosis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |