SE465034B - Aminopropylaminobleomycinderivat - Google Patents

Description

15 20 25 30 465 054 2 ïONH2 TH2 CH2 NH CH \/ \/ \ CH CH2 CONH2 (koppar är utelämnat i händelse av den kopparhaltiga 1§1 formen); A betecknar en grupp med formeln -N- n ~ (Il 10 15 20 25 30 35 3 465 054 I dessa formler betecknar A 'ïl Rl R1 . , i '_ C)", *N N" _.. |@__R__ ®__ : '- l \-e/ eller | | (R2)n R2 R2 R1 och R2 oberoende av varandra betecknar (Ci-G4)-alkyl eller bensyl, R betecknar (CZ-C4)-alkylen, n betecknar ett helt tal med värdet 0 eller 1 och betecknar B en grupp med formeln //R4 -N \\ Rs varvid (i) R3 betecknar väte och R4 betecknar (Cl-C4)-alkyl substi- tuerad med (C5-C13)-cykloalkyl eller antranyl, eller (ii) både R3 och R4 betecknar bensyl, som kan vara substitue- rad med en eller flera (a) bensyloxigrupper, i vilka ringsubsti- ~a1k- (b) ringsubstituerade bensyloxigrupper, tuenterna kan vara en eller flera halogenatomer, oxigrupper eller bensyloxigrupper, eller (c) cyklooktylmetoxi.

Såsom exempel pà (Cl-C4)-alkyl (làgalkyl) mà nämnas me- tyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl och isobutyl; pà halo- gener fluor, klor och brom; pà (C2-C4)-alkylen (làgalkylen) etylen, trimetylen, tetrametylen; pà (G5-C13)-cykloalkyl cyk- lopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, cyklooktyl, cyklodekanyl, cykloundekanyl, cyklododekanyl och cyklotridekanyl; pà (C1-G4)-alkoxigrupper (làgalkoxi) metoxi, etoxi, propoxi och butoxi. §1 CH3 §2Hs Exempel pà -N- i angiven A är -N- och -N- ( 2)n ffia fzfls §4H9 - $Ha när n är 0 och -¥- , -?- , -§- och -¥- när n = 1.

CH3 C2H5 C4H9 CH2C5H5 G1 10 15 20 30 35 40 465 034 Exempel pa -¥-R-§- §1 §1 $H3 QH3 innefattar -?-(CH2)3-N- Rz RZ CH3 JH3 Sàsom exempel pá sàdana föreningar som áskàdliggöres med den allmänna formeln (I), vilka är önskvärda med häns yn till farmakologisk aktivitet ma nämnas sàdana föreningar i vilka A är ffia ¶H3 fi -¥-(CH2)3-ï- eller -¥- varvid R1 beteck CH3 CH3 (R2)n när làgalkyl, R3 och R4 i B vardera betecknar bensyl, som kan vara substituerad med en eller flera bensyloxigrupper eller ring- substituerade bensyloxigrupper med här förut angivna ringsub~ stituenter eller cyklooktylmetoxi.

Exempel pa typiska föreningar enligt uppfinningen är de som visas i tabell 1.

Tabell 1 Förening Föreningens namn Förkort- nr ning 1 3-ÄN-Metyl-N-C3'-Cm,p~dibensyloxibensyl- MDBZOBZ amino)proDvl]amíno3-proDvlaminoBLM (m,p> 2 3-{N-Metyl~N-[3'-(cyklooktylmetylamino)- MCO DropvllaminoïDroDYlaminoBLM 3 3-{N~Metyl-N-[3'-dibensylamino)propylJami- MDBZ no}DroDVlaminoBLM 4 3-{N-Metyl-N-[3'-(cyklopentylmetylamino)- MCP propvllaminoï-proDVlaminoBLM 5 3-(N-Metyi-N-cs'-- MCHM DropvllaminoïpropvlaminoBLM 6 3-(N-Metyl-N-(3'-(cyklohexyletylamino)- MCHE propvllaminolpropvlaminoBLM 7 3-ÄN-Metyl-N-(3'-(cykloheptylmetylamino)- MCHEP DroDvl]amíno}-proDvlaminoBLM 8 3-{N-Metyl-N-[3'-(cykloundekanylmetyl- MCU amino)-propvllamínol-proDvlaminoBLM 9 3-ÄN-Metyl-N-[3'-(5"-norbornen-2-metyl- MNB amino)-DronvllaminolpropvlaminoBLM 10 20 30 35 4 465 034 Tabell 1 (forts.) 10 3~{N-Metyl-N-C3'- bensyl)amino)propyl]~amino}propyl- aminoBLM m 11 3~fN,N-dimetyl-N-{3'-(dibensylamino)pro~ MMDBZ pvl]amino}proDVlaminoBLM 12 3-{N,N-dimetyl-N~C3'-(cyklooktylmetyl- MMCO amino>propyl]amino}-propvlaminoBLM 13 3~{N,N~dietyl-N-E3'~(dibensylamino)pro~ EEDBZ DVlJamino}DroDvlaminoBLM ' 14 3-{N,N~dibutyl-N-[3'-(dibensylamino)pro- BBDBZ propyllaminofpropvlaminoBLM 15 3-{N-Metyl-N-bensyl-N-(3'-dibensylamino)~ MTBZ propvl]amino3propvlaminoBLM 16 3~{N~bensyl~N~E3'-(dibensylamino)propylJ- ATBZ amino3uroDvlaminoBLM 17 3-§N,N-dimetyl-N-E3'- dibensylaminopropyl)-amino)propyl]amino}- propvlaminoBLM 18 3-fN,N~dimetyl-N-E3'-(N,N-dimetyl-N-(3"~ PPCO cyklooktylmetylaminopropylJaminolpropyll- aminoÉproDVlaminoBLM 19 3~[4'-(3"~dibensylaq}nopropyl)piperidyll- PYDBZ propvlaminoBLM 20 3-(4'-3"-p-klorbensylaminopropyl)piperi- PYCLBZ dVl]DrøDVlaminoBLM 21 3-E4'~(3"cyklooktylmetylaminopropyl)pipe- PYCO ridvl]propvlaminøBLM 22 3-{N,N-dietyl~N-E3'-(2“-p~klorfenyletyl- EECLPE amino)propyl1-amino§proDVlaminoBLM 23 3-{N-Metyl-N-C3'-{cyklotridekanylmetyl- MCT amino)propyl]aminoÉ-propylaminoBLM 24 3-{N-Metyl~N-E3'-(bis(3",4"-di(p~klor- MDDCL bensyloxi)bensyl)~aminopropyl]amino}- DroPYlam1noBLM 25 3-{N-Metyl-N-E3'-(bis(3",4"-di(m,p-di- MDDCL klorbensyloxi)bensyl)-amino)propylJaminoj- propylaminoBLM 10 15 20 25 30 35 G3 465 034 Tabell 1 (forts.) 22 3-§N~Metyl-N-E3'~(bis(3",4"~di(p-metoxi- MDDMO bensyloxi)bensyl)-aminopropyllaminoïpro- pv1amin0BLM m 27 3-{N-Metyl-NE3'(bis(4"-(p-bensyloxi)ben- MDBHEQUBZ syloxi)bensyl)amino)-propyl[aminoÉ- s DroDvlaminoBLM 28 3-(N-Metyl-N-[3'-(bis(p-cyklooktylmetyl- MDCDBZ oxibensyl)amino)-propyl]amino§propyl- aminoBLM _ 28 3-{N~Metyl-N-E3'- oxibensyl)amino)~propyllaminojpropyl- aminoBLM Anm.: “BLM" betecknar "bleomycin".

Föreliggande förening med formeln (I) erhàlles genom att ett aminopropylaminobleomycin med formeln: [Ex]-NH-3-A-3-NH2 (11) vari [BX] har angiven betydelse och A" betecknar -NH- eller A med angiven betydelse, bringas att kondenseras reduktivt med , en karbonylförening med den allmänna formeln: R5-CO-R5 (III) vari R5 och R5 vardera betecknar väte eller alkyl som kan vara substituerad eller bensyloxi eller halogenbensyloxi, làgalk~ oxibensyloxi eller bensyloxibensyloxi.

Reducerande medel som användes vid kondensationen, inne- fattar borhydridföreningar, sàsom natriumcyanoborhydrid. Kon- densationen kan även utföras genom katalytisk hydrogenering under användning av sådana katalysastorer som palladium-kol.

Den använda mängden karbonylförening varierar beroende pà ty- pen av avsedd produkt och kan icke obetingat generaliseras, men ligger i stort sett i intervallet Û,5-25, vanligen 0,7-20 mol per mol förening med formeln (II). Ett derivat i vilket R4 betecknar väte, erhålles huvudsakligen genom användning av _ 1-1,5 mol karbonylförening, medan ett derivat i vilket R3 och R4 är samma grupp, erhålles när 10 mol därav användes. När ett derivat i vilket R1, R3 och R4 är samma grupp (t ex förening 15) är önskad, användes 15 mol av karbonylföreningen. Om 10 15 20 25 30 35 4 465 034 fallet med m,p-dibensyloxíbensaldehyd, såsom exempel, kan dess ~,_| mängd minskas genom förlängning av reaktionstiden. Kondensationen utföres i ett lösningsmedel, såsom metanol, vatten, dimetyl- formamid, acetonitril eller en blandning därav. Ehuru reaktions- temperaturen är beroende på typen av avsedd produkt, är den i allmänhet -s° till 7o°c, företrädesvis o-so°c. Den är 0-2s°c, när R4 i det avsedda derivatet är väte, medan en högre tempera- tur, såsom 35-SOOC, är lämpligast vid användning av en keton eller en aldehyd, i vilken R och R4 är lika och har högt steriskt hinden eller en aldehyd med låg löslighet. Reaktionstiden är 3-70 timmar. En längre reaktionstid är lämplig för kondensationen, när en aldehyd med högre steriskt hinder eller låg löslíghet an- vändes.

Isoleringen av föreliggande derivat, som erhållits på be- skrivet sätt, utföres på följande sätt: När en borhydridförening användes såsom reducerande medel, inställes reaktionsblandningen på pH 1 med saltsyra, omröres under 5-10 minuter vid rumstemperatur för sönderdelning av över- skott reducerande medel, neutraliseras därefter, avlägsnas metanol genom destillatíon under förmínskat tryck och extraheras med eter eller butanol för avlägsnande av överskott aldehyd eller keton. Det vattenhaltiga skiktet avsaltas genom passage genom en kolonn fylld med ett adsorptívt harts, såsom exempelvis Amberlite ® XAD-2 (Rohm and Haas Co.) i dest. vatten för åstad- kommande av adsorption av avsedd produkt på hartset. Efter tvättning av kolonnen med dest. vatten för avtvättning av saltet elueras den adsorberade fasen med sur, vattenhaltig metanol, t ex en 1/50 N vattenhaltig saltsyra-metanol (1:4 vol/vol) för uppsamling av eluatfraktionen innehållande ett blått bleomycin- derivat. Den förenade fraktionen neutraliseras eventuellt med ® _ Dowex 44 (ett anjonbytarharts av OH-typ från Dow Chemical Co.), varefter koncentreras under förmínskat tryck och lyofilíserar för åstadkommande av ett blått, rått pulver av det avsedda d 1- vatet. För förbättring av renheten behandlas det råa pulvret på följande sätt: 10 15 20 25 30 35 465 034 En lösning av det råa pulvret i dest. vatten bringas att passera genom en kolonn fylld med CM-Sephadex® C-25 (Na+-typ; Pharmacia Fine Chemicals Co.), som har bringats i jämvikt med en 1/20 M lösning av ättiksyra och natriumacetatbuffert (pH 4,5) för åstadkommande av adsorptionen av avsedd produkt på_hartset.

Den adsorberade fasen elueras därefter genom linjär koncentrations- gradienttekník, som utföres genom kontinuerlig tillsats av natrium- klorid till angiven buffertlösning för gradvis ökning av natrium- kloridkoncentrationen till 1,0 M. Om eluatfraktionerna, som inne- håller den avsedda produkten, visar sig fortfarande vara förore- nade med föroreningar följes angiven kromatografi med en annan kromatografi under användning av ett adsorptivt harts, såsom eXemPe1Ví5 Ambeï1íte® XAD-2, vilken kromatografi_utföres genom passage av en lösning av rå substans i dest. vatten genom en kolonn fylld med hartset i en buffertlösning, såsom exempelvis en 4-procentig, vattenhaltig ammoniumacetatlösning, för åstad- kommande av adsorptionen av den avsedda produkten på hartset och eluering av den adsorberade fasen genom den linjära kon- centrationsgradientmetoden, vilken genomföres genom kontinuer- lig tillsats av metanol till buffertlösningen för gradvis ökning av metanolkoncentrationen. På detta sätt blir elueríngskänne- tecknet sådant, att oreagerade utgångsmaterial först elueras, varefter ett derivat, i vilket R4 är väte, följer och slutligen ett derivat, i vilket R3 och R4 är samma grupp. Separation av fraktionerna är möjlig genom användning av ultraviolett över- vakning. Om den avsedda fraktionen fortfarande innehåller föroreningar, bör angiven kromatografering upprepas för upp- nående av fullständigt avlägsnande.

Den förenade fraktion, som innehåller den avsedda produkten, befrias från metanol genom destillation under förminskat tryck, avsaltas genom användning av Amberlite® XAD-2 och lyofiliseras för åstadkommande av ett blått, amorft pulver av ett koppar- haltigt aminopropylamínobleomycinderivat. Den kopparfria formen erhålles genom avlägsnande av kopparn från den kopparhaltiga formen genom en känd metod, såsom metoden under användning av EDTA (Japanska patentpublikationen 31 875/77; US-PS 3 929 993). 10 15 20 ZS 35 40 9 .

Ett exempel på kopparavlägsningsförfarandet beskfhšëš iošêf följande.

Den kopparhaltiga produkten löses i dest. vatten och den erhållna lösningen bringas att passera genom en kolonn fylld med Amberlite® XAD-2 i dest. vatten för åstadkommande av adsorp- tionen av avsedd produkt. Hartskolonnen tvättas därefter med en vattenhaltig lösning innehållande natriumklorid och 5% dinatrium- salt av etylendiamintetraättiksyra (förkortat EDTA'2Na) för bortförande av kopparjonen genom EDTA.ZNa, som kvarlämnar koppar- fritt aminopropylaminobleomycin adsorberat på hartset. Hartset tvättas med en natriumkloridlösning för avlägsnande av EDTA.ZNa och därefter med dest. vatten; slutligen elueras med sur, vatten- haltig metanol, såsom exempelvis en blandning av 1/50 N vatten- haltig saltsyra och metanol (1:4 vol/vol) för uppsamlande av fraktioner, som visar ett adsorptionsmaximum vid 290 nm. Den förenade fraktionen inställes på pH 6,0 med DoweX® 44 (OH-typ; Dow Chemical Co.), koncentreras under förminskat tryck och lyofiliseras för åstadkommande av ett vitt, amorft pulver av ett aminopropylaminobleomycin i form av kopparfri hydroklorid.

Om vattenhaltig svavelsyra användes istället för vattenhaltig saltsyra, erhålles ett sulfat. Det är sålunda möjligt att er- hålla ett önskvärt salt genom val av syran som användes i eluerings- steget.

Vid hydrolys med 6 N vattenha“tig saltsyra vid 105 C under 20 timmar av det på beskrivet sätt framställda aminopropylamino- bleomycinderivatet sådana sönderdelningsprodukter som är gemen- samma för bleomyciner, inklusive Lntreonin, B-amino-B-(4-amino- 6-karboxi-5-metylpyrimidin-2-yl)propionsyra, 4-amino-3-hydroxi- 2-metvl-n-pentansyra, 6-hydroxi-L-histidin, B-amino-L-alanin och 2'-(2-aminoetyl)-2,4'-bitiazol-4-karboxylsyra jämte aminföreningar. Å andra sidan gav aminopropylaminobleomycínderivatet vid metanolys med Amberlist 15, såsom i händelse av bleomycin, L-gulos och metylglykosiden av 3-O-karbamoyl-D-mannos, såsom påvisas genom gaskromatografi. Dessa fakta stödf~ att den kemiska strukturen hos aminopropylaminobleomycinderi -t, som framställts genom förfarandet enligt uppfinningen, är den som visas med den an- givna állmänna formeln (I). _ Såsom föreningar med formeln (II), som är utgångsmaterial för syntesen av föreliggande bleomycinderivat, må nämnas (1) 3-[fi-(3-aminopropyl)aminojpropylaminobleomycin (APP), (2) 10 15 20 25 30 10 3f&?š%3Å%šÉ%opropyl)-N-metylaminofpropylaminobleomycin (APMP), (3) 3-[F-(3-aminopropyl)-N,N-dimetylaminqjpropylaminobleomycín (MMHH), (4) É-[fi-(3-aminopropyl)-N,N-dietylaminojpropylamino- bleomycin (EEHH), (5) 3-[fi-(3-aminopropyl)-N,N-dibutylamino] propylamínobleomycin (BBHH), (6) 3-{N-Åš'-(N'-(3-aminopropyl)- N',N'-dimetylamino)propyl]~N,N-dimetylamino}propylaminobleomycin (PP4M), (7) 3-ÅÃ-(3-aminopropyl)piperazin-1-yl]propylaminobleo- mycín (PY) och (8) 3-[fN-(3-aminopropyl)-N-metyl-N-bensylaminqy propylaminobleomycin (MBZHH) (bokstäverna inom parentes är förkortningar). Dessa föreningar syntetiseras genom att (1) bleomycinsyra kondenseras med en förening som åskådliggöres av den allmänna formeln (IV): ' NH2-(CH2)3~A-(CH2)3-NH2 (IV) vari A har angiven betydelse, på ett sätt liknande det i en känd metod Åf ex en metod beskriven i den japanska patentansökningen "Kokai" (Utlagd) nr 63 089/79; US-PS 4 195 018] eller genom (2) odling i närvaro av en amin med formeln (IV) av en bleomycin- producerande stam av Streptomyces verticillus, såsom exempelvis Streptomyces verticillus NK-68-144(ATCC 31307), såsom beskrives i US-PS Re 30 451. Exempel på föreningar som åskådliggöres av formeln (IV) innefattar (1) bis(3-aminopropyl)amin, (Z) bís(3- aminopropyl)metylamin, (3) bis(3-aminopropyl)dimetylammoniumsalt, (4) bis(3-aminopropyl)-dietylammoniumsalt, (5) bis(3-aminopropyl) díbutylammoniumsalt, (6) 1,3-[his(3-aminopropyl)dimetylaminof- propan, (7) 1,4-[his(3-aminopropyl)piperazin och (8) bis(3-aminoï propyl)(metyl)bensylammoniumsalt. i Bland föreningarna med formeln (IV) 'är de som âskådliggöres av den följande allmänna formeln (IVa) eller (IVb) nya föreningar, som först syntetiserats av'uppfinnarna till föreliggande uppfinning: fiz NHz'(CHz33"N'(CHz)3"NHz (Iva) Rz ä* a* NHZ-(cH2)3-T-R-T-cnz)3-NH2 (xvb) R2 R2 vari R1, R2 och R har angiven betydelse. Dessa föreningar fram- ställes exempelvis genom följande förfaranden: En förening med formeln (IVa), i vilken R1 och R2 är samma 10 15 20 25 30 11 465 034 grupp, framställes genom a“t en 3-aminopropyl-N,N-dialkylamin som åskådliggöres av den allmänna formeln: R1 NH2-(CHZJ3-N-RZ (V) ümri R1 och R2 är samma grupp och har angiven betydelse) bringas att reagera med 1,5 ekvivalenter bensoylklorid, att ett alkali sättes till reaktionsblandningen för att göra den alkalisk, att blandningen extraheras med ett organiskt lösningsmedel för er- hållande av en 3-bensamidopropyl-N,N-dialkylamin som åskådlig- göres av den allmänna formeln: R1 - C6H5-CO-NH-(CH2)3-N-R2 f"¿) (vari R1 och R2 är samma grupp och har angiven betydeš e), var- efter denna amin bringas att reagera med N-(3-brompropyl)-ftal- imid för överföring av aminen till ett kvaternärt ammoniumsalt med den allmänna formeln: R1 ¿ë6H5-coNH-(cH2)3-T*-(CHZJS-N=Phtn]Br' (V11) R2 (vari Phth betecknar en ftalylgrupp; R1 och R2 är samma grupp och har angiven betydelse), att det kvaternära saltet hydrolyseras genom uppvärmning med 6 N saltsyra vid 110OC under 8 timmar, att såsom biprodukter bildad ftalsyra och bensoesyra avlägsnas, att hydrolysatblandningen koncentreras för avlägsnande av salt- syra så långt som möjligt, att återstoden löses i dest. vatten, att lösningen bringas att passera genom en kolonn av ett anjon- bytarharts (Cl-typ) och att utflödet koncentreras, varvid hydro- klorider av föreningen med formeln (IVa) erhålles, i vilken R1 och RZ är samma grupp. Såsom exempel på föreningar som fram- ställts genom detta förfarande må nämnas bis(3-aminopropyl)di- metylammoniumsalt, bis(3-aminopropylkfietylammoniumsalt och bis(5-aminopropyl)dibutylammoniumsalt.

En annan förening med formeln (IVa) i vilken R1 och R2 betecknar olika grupper, framställes exempelvis genom att N-metylbensylamin bringas att reagera med 2 ekvivalenter 3-brompropylftalimid i närvaro av en bas och att det erhållna kvaternära ammoníumsaltet hydrolyseras, såsom beskrivits. Ett exempel på en förening, som framställts genom denna metod, 10 15 ZO 25 465 034 ” ' är bis(3-aminopropyl)(metyl)-bensylammoniumsalt.

En förening med formeln (IVB) framställes exempelvis genom att 1,3-bis(dimety1amino)propan bríngas att reagera med 3-brompropylftalimid för bildning av 1,3-[ßis(3-ftalimído- propyl)dimetylaminqjpropan, att erhållen förening hydrolyseras, såsom beskrivits, att ftalsyra, en biprodukt, avlägsnas från hydrolysatblandningen, att blandningen utsättes för jonbyte och koncentreras. Ett exempel på en förening som framställts genom detta förfarande är 1,3-[ßis(3-amínopropyl)dimetylaminqj- propantetrahydroklorid.

Föreningar med den allmänna formeln (III), som användes såsom ett annat utgångsmaterial, innefattar p-klorfenylacetl aldehyd, fenylacetaldehyd, bensaldehyd, p-klorbensaldehyd, m-klorbensaldehyd, o-klorbensaldehyd, m,p-diklorbensaldehyd, o,p-diklorbensaldehyd, o,p-diklorbensaldehyd, p-fluorbensaldehyd, p-brombensaldehyd, pentafluorbensaldehyd, p-metoxibensaldehyd, o,p-dimetoxibensaldehyd, p-klorfenylmetylketon, m,p-dibensyloxí- bensaldehyd, 3-fenylpropanol, difenylacetaldehyd, p-cyanobens- aldehyd, m-trifluormetylbensaldehyd, 1,3-difenylaceton, aceto- fenon, furfural, tiofen-2-karbaldehyd, cyklohexanon, Z-cyklo- hexylacetaldehyd, 5-norbornen-2-acetaldehyd, a-naftylaldehyd, antracen-9-aldehyd, cyklooktankarbaldehyd, 2-tiofenkarboxaldehyd, cyklopentankarbaldehyd, cyklohexankarbaldehyd, cykloheptan- karbaldehyd, cyklooktankarbaldehyd, cykloundekankarbaldehyd, m,p-dibensyloxibensaldehyd, cyklotridekankarbaldehyd, 3,4-di- (p-klorbensyloxi)bensaldehyd, 3,4-di(m,p-diklorbensyloxi)bens- aldehyd, 3,4-di(p-metoxibensyloxi)bensaldehyd, 4-(p-bensyloxi- bensyloXi)bensaldehyd, p-cyklooktylmetyloxibensaldehyd och 3,4,5-tribensyloxibensaldehyd. Av dessa föreningar är 3,4-di- (p-klorbensyloxi)-bensaldehyd, 3,4-di(3',4'-diklorbensyloxi) bensaldehyd, 3,4-di(p-metoxíbensyloxi)bensaldehyd, 4-(4'-bensyl- oxibensyloXi)bensa1dehyd och 4-cyklooktylmetyloxibensaldehyd_ nya föreningar. De framställdes på följande sätt: R7-X + HO CHO --% R-7-O' CHO (Hann n (VIII) (IX) (X) *E 465 034 tinfi avdrivæš lösfilugbmwdïë* luàfi teak 1: man blïónlng av ma%yïæfi:yàlatr1usk§n, anv *tar ~i~ 25 Ü: fyalkaíish-àenlëk: agen;Pa,Erne ins åygnsèa pšlïmlfiahlecfiyflfidëflvat enligå uppfxfinlfigufi v¿sa§ ; tabell E.

HUBE .__ __ ...__ al..

'LI in EJ E] sure* Fafäürt~ Haxlmufi får u1tf=~ TLCå1 ' Eïektfcffifeš EG nlfig .ning wlülëtt ab§@rp~ hf; FU- ~“§ §U» nr * §tion hoæ koppar- jhqltlg hqltlg LuLe~ ífrx förening, É - wings RW I _ šnm IE âïï cm* šnf Q = får sla- í f f . __._ i , I n1fi=1,-; 35 1 *MDBZOBZ (nypflfiss f .Law ënfiss f nffn : I ^ ' l l E H69 i¿?^ f öl §Ü,?' 1.Ü2 f ! 4 _NCP šÉ?' i 913 Ü,&1 1,13 É .

.E FCHH 2¿?1 = Wi) _Ü.TT 1.1? ; _ . »Ü ;u HCHE :E91 É ?Ü) Ü,?É 1.Ü4 2 ífnFts.) I_ë<_t:_-=-*_1_L.__ 465 054 . - -- _ . _ ___. _ G _ å. E i ...__ _ P ..._ n... 1.. :U .d .l .u ___... m 1... _ _ fi Ü.. h..

...? P3 Q__a :_ 9 ?..c 1 n. 5 3. §__1 é 1- E vf 1 A. ? .Q :_ E e Ü o.. 7 o.. n... .U nv n... n? ___... ..._ n... nu ..._ F.. ..._ nu. ...o __... C.. ___... ..._ .nu n... .u q __. w. i s 1 _.. .. __. 1 u. 1 _.. .__ s u. a. I s u. u. _: _.. _.. _: ___. L ..._ .Ü nu Ü nu ___... nu Ü .U ..._ ..._ nu. ..._ nu. __... ...__ .U Ü nu n.. nu fi. .m ...__ _... _.. E .E E. __... m. m __? .d fi... JU U S V .m .n ..._ i . . E .u ..._ _11. .u E .J E a. ..-fil 1. - - _-- ._ . .. . . ..._ _. .C __ F E .i .C n: ...___ u... :u G ..._ »___ 1 5 E. f. n. 0 ..._ n. k.. h. V ..._ v. .l . 5 .E .u 0 å. å. n... 7 ..._ Ü 5 5 .U n: __... v- Ü .___ ...___ 3 .._. ...l _... nu __... ..._ _.. .f ..._ fi i _... ..._ ..._ 7. F.. ...L .ü 7. .ü L. _..._ r... .w E.. .ü vc 1. 7. L.. Ü .U ..._ .U nu nu MH .i t. ...___ n.. .Ü V.. n.. u; u.. u: u.. u.. u: u: u.. u: 1. u: u: u.. u: u: un u.. u.. u.. u.. u: .u i... Ü "a m Vi.. H .U Ü nu .U nu Ü nu Ü Ü n... Ü nu. n... n. .U .U nu n. .U H. u Ü® V _ ...__ __... ä.

B 5 L... n.. Ü F ..._ 5 __. .u V d ._ Y Ü _: m . i ___ .__ .___ a .n V E __.. n: Illii. .. i_-....|.l\.|.-.!.|-...... . - i _ - ...z . .___ nu. P u.. __... .E ..._ fi __.. ...___ v... ...__ .P .n 1 n. .u nu .n .H E ...__ ä nu ..._ __.. n... .I ...__ ..._ n... å 5 ..._ E .ü .u ...__ D i .nr h. ...__ U m. __. .l _. _.. n.. E ...__ ...__ ..J _... .... __... _.- _-.. __... _. ... ...__ ._ .. ...__ ä. .__ n.. .u _). .h fi .___ 5 nu 7. :u 7. .U .U v! ...___ ___.. ...f _... 3 n... n.. ...___ n... .i ___. __.. L. w... 4.. L. ...__ F... ...__ .___ E __... _... ..._ n... S”. .ä R. n... n.. .ö n". ...O nu å. nv n. i.. o.. nu å. n... nu .ö ...u ___... _ .u .n _u._ V U .G 1.... n.. 1.. n... u. m. .n i. 1.. n. . - . f f - _- .. _._ f .z .r _- ._ ._ - ._.._ w... .i ü.. i ...__ l V E. .___ F ..._ E .u k ..._ n. a.. a.-. 5 ...___ ..._ ___... ___... ___... 4... ..._ ___... q... 4.. ...L ___.. :Q å.. nu _. 7. A. nu .I .I .u .u å, .u P n... n... n.. c.. n.. __. n... n.. n.. n? D.. nv _ n.. n? å å 5 5 n.. .o E 1 V ___. ...__ a n.. _.. ...___ ...___ __... __... _... ...___ __... ...___ ...___ ...___ ...___ ___... ...__ _.. __... n... _... _.. __... ...___ ..._ .Fu ...._._ .I 1... nn. ..|..1øâ...._ ë. . .. _ . ._ . _. ...__ __... nu :__ Û.. 1. fi ___ m n... nu .__ n... E h. E ü. n. ü. n.. ü .l C ...__ Z 7. ___. ..._ ..._ _.. G .._ .u E n... Z ...b .h fi E f: ..._ ...w ü ...__ .ü 2 ...._ __.. w Z 0 1 .m v _.. n. ü. r __. i P 7. _.. _... ..._ v.. ...___ D. nr L P... Ü _/_ n; ..._ 1 F .l __. i ...__ b... nv v.

E B ___... O B E Z ..._ B .U B L Ü :_ C D H æ ___... i __.. 7 b ..._ i .__ i H U .U n... .ü .u n.. B ___... C r. C ___... C T n.. .ü D 7_ _ T. ..._ .___ .ä ...___ fi .m ..._ P. P. B H H E E T T P P .r V: _- nu __ n. H. n. % Ü Û =_ e .1 ü R .HN .un »Û mn H f.. nu ...H å.. n... nr n.- n... n.. F. ...___ .W En H ...n um. ...___ __..... D. ...__ C ___... __ _ ..._.._._..l....!-!......_..ií._..__._.!.__l._....;_..|..l_!..i.... ._ ._ _ __... ._ _ vw ___... n.. nu T .i ...u .A .fiñ 1 .ud .m ñ ..._ n... i _ ___... f.. r... z... v- nu. n... n... .i n.. 3 5 7. n.. .u i ___.. 7. .nu ...._.. ___... ...i _. ___... ..._._ ___... ___... :l 1... ___... w... _H___._ .H__._ .Hi .Ni _.. __ _H.____ ...H .H ___... ..._ .U :___ .U r _ .U 4.. f... ...__ ...__ _ v. _.. farm), sam användes sàssm stan- ivitet mot HeLa S3 celler. i ett medium (HEM innehållande parfri lväxtinhiberanda akt ydpades kup mg. .- l.

I I ßg calle den metod med agarplaåta-cylinder ufidær antagande att potefisefi hus bleømycin dard, var IGÜO HeLa äà »v 465 034 10% kalvserum) anbringat i Petri-skalar av plast. Två dygn 15 efter ympningen tillsattes bleomycinet, som skulle provas, till mediet och inkuberingen fortsattes i ytterligare 3 dygn, när antalet celler räknades. Den procentuella tillväxtinhibe- 5 ringen beräknades under användning av ekvationen: H Procentuell tillväxtinhibering (i %) = 100 x (B-A) / (B-C) vari A är primärantalet celler pa tredje dygnet fràn tillsat- sen av ett testprov, B är primärantalet celler i kontrollpro- 10 vet (utan tillsats av testprov) och C är antalet celler pà dygnet för tillsatsen av testprovet. ID50 (koncentrationen för 50% inhibering) uppskattades frán kurvan över provkoncentra- tion gentemot procentuell inhibering.

Provningsresultvten, som uppnàddes i (1) och (2), visas 15 i tabell 3.

Tabell 3 Förening Antimíkrobí 611 poten; hos Cu-fri Koncentration för . . .föreníng,l}_1g.potens per mg . 50% tíllväxtínhí- 20 bering (ID ) hos Nr Förkortning Mot Mycobacterium Mot Bacillus Cu-frí förening symegnwtís ATCC 607 subtílís mot odlad HeLa cell, _Pg/ml 25 1 0002002 (m,p) 4516 1772 0,36 2 MCO 22860 12300 0,45 3 MDBZ 14194 1138 0,89 4 MCP 13595 16180 1,00 5 MCHM 15414 12148 0,63 30 6 McHE 35030 14440 0,56 7 MCHEP 25924 20143 0,48 8 MCU 28308 8146 0,58 9 MNB 16219 13332 0,68 10 MDDBZÛBZ 164 49 0,38 35 11 MMDBZ 13784 1742 0,87 12 MMCO 21840 20000, 0,29 13 EEDBZ 10680 1047 0,70 14 BBDBZ 17910 530 2,00 15 MTBZ 7746 580 2,30 5465 034 16 A702 4450 479 1,90 17 PP00z 16000 7100 0,66 10 PPC0 26000 14600 0,51 7 19 PY00z 14420 1230 0,50 20 PY0L0z 11350 6000 0,31 21 PYC0 43000 15100 0,01 22 EECLPE 17400 13310 0,52 23 Mcï 3915 1760 4 0,10 ïü 24 M000L 14 0 0,050 25 MDDDCL 23 8 0,063 26 MDDMO 145 35 0,90 27 MBÄBÄBZ 163 46 0,12 28 MDCÛBZ 268 49 0,13 35 29 M010z00z 11 26 0,62 öst framgår av tabell 3 att föreningen enligt füre11g~ gsnés uppfinning har en stzrk tillväxtinhiberands aktivltet 7:: aášsd Heís-cell samt stark antimikrnbielš akt1»1tst.

EC íšš Fuïmanär tøxicits' ípulmünäc fibrssë has mus. íhsnmöss; 15 veckor gamla; 9 möss per Varje mus administrerades med en dygnsdos av genüm intraparitnnsal injektiün sn gång varandra följande dygn. Efter fullbor- Eš administrering hölls mässan Jndsr E ve:~ däd:dss därefter Gch übduüsradss fö? u«ás:sšäning av fail Jah grad av pulmsfiär fíbrms. UtvärdeP~nq~ sn sfiedae' ;enüf Jamfcrslss av antalet administrarade möss sun ísd av puåmünät šibras och ïraden av sjukdom. Rssultatsn från EC unjszsühnlrgsn lsds L tab=11 4 I åaïsïš 4 ;radsr:dEs graden numenzskt på ínlgands satt: Ü pocngz Ingefi fxhros i anang: ánsamlzng av sxudat i lungalvsnler ash íztrosllknands förändring i alvsmïart 33 septuw. 2 nüsng. Flbrns 1 flera amràdsn. 4 poäng: Spridd fibros Fibros i mer än 2/3 av totalümràdet. p» 'U Ü | | TJ |.l'.l 10 15 20 25 n' 465 054 beräknades genom jämförelse med 17 "Förhàllanda "bleomy- cinkomplex".

Det framgàr av tabell 4 att nagra av föreliggande före- ningar icke alls uppvisar nagot uppträdande av pulmonär fibros och att till och med i de fall da fibros iakttagits graden av pulmonär toxicitet är höggradigt minskad, varvid fallet är mindre än cirka 1/2 och graden mindre än cirka 1/7 av de som uppvisas av APMP-BLM. Eftersom det hittills har varit mycket svart att undanröja biverkningarna hos bleomyciner, soeciellt pulmonär fibros, är det mycket överraskande att föreliggande uppfinning ger en förening som icke uppvisar några biverkning- ar som leder till pulmonär fibros, även om detta sker vid provning pá djur.

Tabéll 4 Förening Frekvens Grad nr Antal r_1_1öss_som lider av Förhållande Total gradering av rörhållandd pulmonar fibros (%) pulmonar fibros/total- ; antal provade djur (%) 1 1/9 (11) 0,18 1/27 ( 4) 0,05 2 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 3 1/5 (20) 0,32 1/15 (7) 0,08 4 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 5 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 6 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 7 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 0 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 9 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 10 0/9 ( 0) 0,00 0/27 1 0) 0,00 11 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 1) 0,00 12 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0 0,00 13 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 14 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 15 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 16 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 17 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 10 f 0/9 ( 0) _ 0,00 0/27 ( 0) 0,00 G1 10 15 20 25 30 35 40 465 034 18 2 I Tabell 4 (forts.} š19 § 0/9 , ( 0) 0,00 É 0,27 i ( 0) 0,00 @20 ä 0/9 ( 0) 0,00 x 0,27 ( 0; 0,00 IZ1 ; 0/9 ( 0) 0,00 0/27 ( 0) 0,00 APMP f 9/9 (100) 1,6 48/27 (170) 2,15 å (4) Akut toxicitet LD5G bestämdes genom administrering av flera typiska fö- reningar enligt uppfinningen under 10 pà varandra följande _ dygn. 1. Försöksmetod.

Hanmöss av stammen CDF1/SLC (vardera 6 veckor gamla, 7 medlemmar per grupp) administrerades subkutant med olika före- ningar enligt uppfinningen, varvid dosen var olika för varje förening. LD59 (dygnsdos) uppskattades från mortaliteten under administreringstiden enligt Behrens-Kärbers metod. 2. Försöksresultat.

Resultaten visas i tabell 5.

Tabell 5 Forening LDSO Nr Förkortning (mg/kg och dygn) 32 MCU 17 , 5 34 MDDBZOBZ 60,0 37, EEDBZ 50,0 43. ....PYDBZ 12,5* Bleomycínkomplex 0 20 Såsom framgår av de biologiska egenskaperna, som beskri- vits, har föreningarna enligt föreliggande uppfinning en anti- tumöraktivitet och höggradigt minska biverkningar, såsom pul- monär toxicitet. Föreliggande föreningar skulle följaktligen förväntas vara användbara som karcinostatika med minskade bi- verkningar. Vid användning såsom ett karcinostatikum kan före- ningen administreras i olika doseringsformer, såsom exempelvis fast preparat, salva och lösningar, men i allmänhet i form av 10 15 ZÜ 25 30 35 40 19 465 034 injektioner. Administreringen sker 1-5 gånger/vecka och dosen ar 5~2G0 mg/vecka.

Uppfinningen åskådliggöres närmare i det följande under hän- visning till exemplen, men är icke begränsad till dem. _ Exempel 1 Steg A: Till en lösning av 1,0 g 3-¿N-metyl-N-(3~aminopropyl)aminQ] propylaminobleomycintrihydroklorid (Cu-haltig form) i 30 ml metanol sattes 227 mg cykloundekankarboxaldehyd följt av 26 mg natrium- cyanoborhydrid. Blandningen bringades att reagera vid rumstempera- tur under 16 h. Reaktíonsblandningen inställdes på pH 1,0 med 6 N saltsyra och fick stå under 10 min för avslutande av reaktionen.

Reaktionsblandningen neutraliserades därefter med 1 N natriumhydroxid- lösning och befriades från metanolen genom destillatíon under för- minskat tryck. Återstoden bringades upp till 50 ml med dest vatten och extraherades med eter för avlägsnande av överskott aldehyd.

Det vattenhaltiga skiktet bringades att passera genom en kolonn med volymen 100 ml och fylld med Amberlite® XAD-Z (Rohm and Haas Co.) i 4-procentig, vattenhaltig ammoniumacetatlösning - Z-prccentig, vattenhaltig ättiksyralösning (121 vol/vol) för adsorption av av- sedd produkt. Den adsorberade fasen eluerades med linjär koncen- buffert- lösning, till vilken kontinuerligt sattes 500 ml metanol. Prak- trationsgradienttekník under användning av 500 ml tionerna, totalt 200 ml, som hade eluerats vid metanolkoncentra- tioner av cirka 65% och som visade“absorptionsmaxíma vid våg- längder av cirka 290 nm uppsamlades. Den vattenhaltiga lösning, som erhölls av dessa fraktioner efter avlägsnande av metanolen genom destillatíon under förminskat tryck, bringades att passera genom en kolonn med volymen 100 ml och fylld med Amberlite® XAD-2 (Rohm and Haas Co.) i dest. vatten för adsorption av avsedd pro- dukt. Kolonnen tvättades med 150 ml dest,vatten och den avsedda produkten eluerades med 1/S0 M vattenhaltíg saltsyra-metanol (1:4 vol/vol). Blå fraktioner av bleomycinderivat uppsamlades, neutraliserades med Dowex® 44 (ett anjonbytarharts, OH-typ, från Dow Chemical Co.), koncentrerades därefter under förminskat tryck och lyofiliserades. I '- Det erhållna lyofiliserade pulvret löstes i 10 ml dest. vatten och bringades att passera genom en kolonn med volymen 100 ml och fylld med CM-Sephadex® C-25 (Naf-typ, Pharmacia Fine Chemicals Co.), 10 15 20 25 30 35 20 465 034 som hade bringats i jämvikt med 1/20 M ättiksyra-natriumacetat- buffert med pH 4,5 för åstadkommande av adsorption på kolonnen. Den avsedda produkten eluerades genom linjär koncentrationsgradient- teknik, som genomfördes genom kontinuerlig tillsats av natrium- klorid till buffertlösningen för gradvis ökning av koncentrationen av natriumklorid till 1,0 M. Totalt 550 ml elueringsmedel tilläts flyta genom kolonnen och 120 ml totalt av blå fraktioner, som elue- rades vid natriumkloridkoncentrationer av cirka 0,65 M, uppsamla- des. De uppsamlade fraktionerna avsaltades med Amberlite® XAD-2, som användes i det föregående, och lyofiliserades, varvid erhölls 972 mg (79% utbyte) av kopparhaltigt 3-{N-metyl-N-7:3'-(cyklo- undekanylmetylamino)propylfamíno}propylaminobleomycin i form av blått, amorft pulver.

Steg B: Den i steg A erhållna, kopparhaltiga produkten (872 mg) lös- tes i 18 ml dest. vatten. I Syfte att avlägsna koppar bringades den erhållna lösningen att passera genom en kolonn med volymen 100 ml och fylld med Amberlite XAD-2 i dest. vatten för utförande av adsorption och hartset tvättades med 300 ml av en vattenhaltig lösning innehållande natriumklorid och 5% EDTA.2Na och därefter successhü:med 100 ml 2-procentig natriumkloridlösning och 150 ml dest. vatten och slutligen eluerades den adsorberade fasen med 1/50 N vattenhaltig saltsyra-metanol (1:4 vol/vol) för uppsamling av eluatfraktionerna, som visade adsorptionsmaxima vid våglängder av cirka 290 nm. De uppsamlade fraktionerna inställdes på pH 6,0 med Dowex 44 (OH-typ, Dow Chemical Co.), koncentrerades under för- minskat tryck och lyofiliserades därefter för åstadkommande av 758 mg (90% utbyte) av ett vitt, amorft pulver av 3-{N-metyl-N- ÄÉ'-(cykloundekanylmetylamino)propylzamino}propylamínob1eomycin (förening nr 32) i form av kopparfri trihydroklorid. Denna före- ning visade UV-absorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1cm)=87, mätt i dest. vatten. IR-absorptionsmaxima (i vågtal, cm_1), mätt i KBr-tablettlvar; 3425,- 29"so_,i16so", 1550., 1szo,1440, 1400, 1260, 1190, 1100, 1060, 1020, 980, 800. Andra fysikalisk-kemiska egen- skaper visas i tabell 2.

Vid angiven reaktion användes 988 mg m,p-dibensyloxibens- aldehyd såsom aldehydföreníng och reaktionen utfördes vid 27°C under 70 h. Reaktionsblandningen renades och befriades från koppar på ett sätt liknande det beskrivna för erhållande av 762 mg (57% utbyteï av ett färglöst, amorft pulver av 10 15 20 N UI (AJ G1 40 21 3-ÉN-metyl-N-E3'(bis(m,p-dibensyloxibensyl)amino-propylJami- no}-propylaminobleomycin (förening nr 10) i form av kopparfri Denna förening Visade UV-absorptionsmaximum mätt 1 dest. trihydroklorid. vid 285 nm och E(1%/1 cm)=86, vatten. IR-absorp- tionsmaxima (i vàgtal, cm"l), mätt i KBr-tablett, var: 3425, 2950, 1650, 1550, 1510, 1460, 1430, 1380, 1320, 1270, 1190, 1140, 1050, 1020, 960, 800, 730, 690, 650.

På liknande sätt användes 174 mg cyklooktankarboxaldehyd aldehyd och under 24 h, erhållande av 605 mg (58% utbyte) av ett färglöst, såsom bringades att reagera vid rumstemperatur renades därefter och befriades frán koppar för amorft pulver av 3~{N-metyl-N-[3'- no}propylaminobleomycin (förening nr 2) i form av kopparfri trihydroklorid. Denna förening visade UV~absorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1 vatten. cm)=86, mätt i dest.

IR-absorptionsmaxima (i vàgtal, cm"1), mätt i KBr-tablett, Var: 3425, 2925, 1550, 1550, 1520, 1440, 1400, 1330, 1260, 1190, 1140, 1100, 1050, 1020, 980, 800.

Pa liknande sätt framställdes föreningarna som visas i tabell 6.

Tabell 8 Avsedd Antal ekviï Reaktíons- Reak- föreníng Utgångsförening (formel III) _ valenter av tid, h tíons- Utbyte -nr _ förening III temp., % °c 1 m,p-dibensyloxibensalmfiwd 1,2 18 22 63 I 2 cyklooktankarbaldehyd 2,0 24 37 58 3 bensaldehyd 10,0 16 22 67 4 cyklopentankarbaldehyd 1,2 16 22 61 i 5 cyklohexankarbaldehyd 1,2 16 22 , 60 6 2-cyklohexylacetaldehyd 1,2 16 22 1 54 7 cykloheptylkarbaldehyd 1,2 16 Û 74 8 cykloundekankarbaldehyd 2,0 16 Zl 1 71 9 5-norbornen-2-karbaldehyd 1,2 § 16 22 52 10 m,p-dibensyloxibensaldehyd 5,0 70 27 57 11 cyklotridekankarbaldehyd 2,0 ' E 16 22 66 12 3,4-di(p-klorbensyloxi)- 1 bensaldehyd 4,0 1 96 27 54 13 3,4-di(m,p-diklorbensyl- oxi)-bensaldehyd 4,0 120 40 44 10 20 h) U1 30 35 465 054 22 Tabell 6 (förts.) 14 3,4-di(p-metoxibensyl- oxi)~bensaldehyd 4:Û 24 40 15 4-(p-bensyloxibensyl- oxi)-bensaldehyd 4,Û 24 4Ü 16 p-cyklooktylmetyloxí- bensaldehyd 4,9 48 4D 17 3,4,5~tribensyloxibens- aldehyd 4,0 24 40 49 41 33 44 Exempel 2 Steg à: Tll en lösning av 1,0 g 3-EN,N~dietyl-N-(3-aminopropyl)- -aminolpropylaminobleomycintriklorid (Cu-haltig form) i 30 ml metanol sattes 642 mg bensaldehyd, följt av 51 mg natriumcya- noborhydrid. Blandningen bringades att reagera vid rumstempe- ratur under 16 h. Pa ett sätt liknande det i exempel 1 behand- lades reaktionsblandningen med saltsyra, extraherades med eter, utsattes för kolonnkromatografi med Amberlite<® XAD-2, avsaltades därefter genom användning av Amberlite XAD-2, sàsom beskrivits, och lyofiliserades för bildning av 832 mg (75% ut- byte) kopparhaltigt 3-EN,N-dietyl-N-[3'-dibensylamino)-pro- pyllaminolpropylaminobleomycin i form av blàtt, amorft pulver.

Steg B: Den 1 steg A erhållna, kopparhaltiga produkten med vik- ten 832 mg löstes i 17 ml dest. vatten, varefter kopparn av- lägsnades såsom i exempel 1, steg B, koncentrerades under för- minskat tryck och lyofiliserades för bildning av 739 mg (92% utbyte) av ett kopparfritt, vitt, amörft pulver av trihydro- kloriden av 3-[N,N-dietyl-N-[3'~dibensylamino)propylJami- nolpropylaminobleomycin (förening nr 12). Den visade UV-ab- sorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1 cm)=90, mätt i dest. vatten. IR-absorptionsmaxima (i vàgtal, cm'1), mätt i KBr-tab- lett, var: 3425, 2975, 2925, 1640, 1550, 1520, 1490, 1450, 1400, 1320, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, 980, 910, 800, 740, 690. 10 15 20 25 30 35 4 23 465 034 /Då ett sätt liknande det beskrivna bringades 1,0 g 3-{N,N- dimetyl~N¿3'-(N,N-dimetyl-N-(3"aminopropyl)amino)propyl?amino} propylaxninobleomycintetrahydroklorid (Cu-haltig form- , som användes såsom utgångsmaterial, att reagera med 607 mg bensaldehyd och reaktionsblandningen renades och koppar avlägsnades för bildning av 587 mg (55% utbyte) av ett kopparfritt, färglöst, amorft pulver av tetrahydrokloriden av 3-{N,N-dimetyl-N=¿É'-¶N,N-dimetyl- N-(3"-dibensylaminopropyl)amino)-propylfaminoipropylaminobleo- mycin (förening nr 41). Den visar UV-absorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1 cm)=84, mätt i dest. vatten. IR-absorptíonsmaxima (i vågtai, cmq), mätt i Klar-tablett, var; 3425, 2950, 1659, 1560, 1490, 1460, 1400, 1330, 1260, 1190, 1160, 1100, 1060, 1020, 980, 800, 740, 600.

En reaktion utfördes på angivet sätt genom användning av 161 mg cyklooktankarbaldehyd istället för bensaldehyd och reak- tionsblandningen renades på liknande sätt och koppar avlägsnades för bildning av 539 mg (52% utbyte) av ett kopparfritt, färg~ löst, amorft pulver av tetrahydrokloriden av 3-{N,N-dimetyl- N-13'-(N,N-dimetyl-N-(3"~cvklooktylmetylaminopropyl)amino) propylzamino}propy1aminobleomycin (förening nr 42). Den visade UV-absorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1 cm)=87, mätt i dest. vatten. IR-absorptionsmaxima (i vågtal, cm_1), mätt i KBr-tablett, var: 3425, 2950, 1720, 1660, 1550, 1520, 1490, 1450, 1400, 1360, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, 980, 880, 800.

På liknande sätt bringades 1,0 g 3-¿Ä,_(3"_aminOprOpyl) piperidyljpropylaminobleomycintetrahydroklorid (Cu-haltig form), som användes såsom utgångsmaterial, att reagera med 623 mg bensaldehyd och reaktionsblandningen renades och koppar avlägs- nades för bildning av 695 mg (65% utbyte) av ett kopparfritt, färglöst, amorft pulver av tetrahydrokloridauav13j4'-(3"-dibensyl- aminopropyl)piperidyl]-propylaminobleomycin (förening nr 43).

Den visade UV-absorptionsmaximum vid 291 nm och E (1%/1 cm)=93.

IR-absorptionsmaxima (i vågtal, cm_1), mätt i KBr-tablett, var: 3425, 2950, 1660, 1560, 1520, 1500, 1460, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1030, 980, 880, 810, 740, 700.

På liknande sätt framställdes föreningar som visas i tabell 465 034 24 Tabell 7 Avsedd förening Förkortning Förening med Antal ekvi- Reaktions- Utpyte Nr Förkortning :Så šâïâgâggïï formeln III šâlâäšâš III tid, h a 35 MMDBZ MMH Bensaldehyd 10,0 16 72 36 MMCO MMHH Cyklooktan- 2,0 24 57 karbaldehyd 37 EEDBZ EEWH Bensaldehyd 10,0 16 69 38 BBDBZ BBHH Bensaldehyd 10,0 16 68 39 MTBZ MBZHH Bensaldehyd 15,0 16 _68 40 Arßz APP Bensaldehyd 15,0 20 ss 41 PPDBz PP4M Bensaidehyd 10,0 16 ss 42 Ppco PP4M cykiookran- z , 0 24 sz " karbaldehyd 43 PYDBZ PY Bensaldehyd 10,0 16 65 44 PYCLBZ PY p-kloroktan- 1,2 16 48 bensaldehyd '45 PYCO PY Cyklooktan- 2,0 24 43 karbaldehyd 46 EECLPE EEHH p-klorfenyl- 1,3 16 41 acetaldehyd' 1 g, Exempel 3 I 300 ml dest. vatten suspenderades 50 g 3-aminopropyl~ dimetylamin och 62 g natriumvätekarbonat. Till suspensionen sattes under kylning i is och häftig omröring droppvis 105 g (1,5 ekvivalenter) bensoylklorid. Efter 6 h reaktion till rums- temperatur surgjordes reaktionsblandningen till pH 4 med konc. saltsyra och extraherades med etyleter för avlägsnande av över- skott bensoylklorid. Det vattenhaltiga skiktet inställdes på pH 12 med 5 N vattenhaltig natriumhydroxidlösning och extrahera- des med kloroform. Kloroformextraktet torkades över natríum- sulfat och lösningsmedlet avdrevs genom destíllatíon under för- minskat tryck, varvid erhölls 91 g 3-bensamidopropyldimetylamin.

Till denna återstod sattes en lösning av 118 g (1 ekvivalent) N-3-brompropylftalimid i 300 ml tetrahydrofuran. vid rumstemperatur under 18 h uppsamlades de utfä kristallerna genom filtrering, och torkades, varvid erhölls 188 g (90% taller av det kvaternära ammoniumsaltet. Detta salt löstes i Efter omröring llda, färglösa tvättades med tetrahydrofuran utbyte) färglösa kris- 10 15 20 4 25 465 054 1000 ml 6 N saltsyra och uppvärmdes vid 110OC under 8 h för åstadkommande av hydrolys. Efter kylning avlägsnades utfälld ftalsyra och bensoesyra genom filtrering och filtratet índunsta- des till torrhet under förminskat tryck för avlägsnande av över- skott saltsyra. Återstoden löstes i dest. vatten och bringades Dowex®-1 (Cl-typ, volym 600 ml). Utflödet indunstades till torrhet under förminskat tryck, varvid erhöll: 96 g (90% utbyte) bis(3-amino- att passera genom en kolonn av ett jonbytarharts, propyl)dimetylammoniumtrihydroklorid. Denna förening var alltför hygroskop för bestämning av dess smältpunkt. PMR-spektrum mättes i tungt vatten och visade följande ö-värden : 2,1-2,8 ppm,_ 4H (m), 2,4 ppm, 6H (s), 3,1-3,9 ppm, 8H (m) (vari bokstäverna inom parentes visar signaltyper: m=multiplet; s=sínglet). Dessa värden står i överensstämmelse med angiven struktur. IR-absorp- tionsmaxima (i vågtal, cm_1), mätt i KBr-tablett, var: 3425, 2975, 2625, 2000, 1600, 1480, 1470, 1350, 1320, 1300, 1250, f 0, 1160, 1140, 1060, 1040, 1000, 930, 840, 760.

På ett sätt liknande det beskrivna erhölls under använd- ning av 3-aminopropyldíetylamín och 3-amínopropyldibutïlamin bis(3-aminopropyl)dietylammoniumtrihydrokknfidiesp.bis(3-amino- propyl)-dibutylammoniumtrihydroklorid. De fysikalisk-kemiska egenskaperna hos dessa föreningar visas i tabell 8.

Tabell 8 IR (cm'1),KBr~cab1ert b: Syntetiserad amin PMR*1 (ppm) R;2 Rf 60MHz, D20 bís(3-aminopropyl)- 342S,2975,Z625,2000, 2,1-2,8 4H (m) dimetylammonium- 1600,1480,1470,1350, 3,1-3,9 SH (m) trihydroklorid 1320J300J23OJ200, 2,4 6H üfl 2,63 0,08 1160,1140,1060,1040, ' 1000, 930, 840, 760 bis(3-aminopropyl) 3425,2975,2500,Z000, 1,6 6H dietylammoniumtri- 1600,1480,1400,1Z80, 2,0-2,7 4H 9 hydroklorid 1180,1060,1000, 950, 3,1-4,0 12H (m)2,43 0,14 900, 880, 800, 750 bís(3-aminopropyl)di- 3425,2975,2650,2000, 1,15 SH (t) butylammoniumtrihydro- 1600,1470,1400,1390, ' 1,3-2,2 SH (m) 1 89 0 44 klorid 1350,1Z80,1260,1180, 2,0-2,7 4H (m) ' ' 1070,1030, 990, 950, 3,1-4,0 13{(m) 900, 840, 800, 750 10 15 20 25 30 35 Anm: 1 26 465 054 * Bokstäver inom parentes: s betecknar singlet, t beteck- nar triplet och m betecknar multiplet. 2 Elektroforeshastigheten i förhållande till alanin (Rm=1,0) vid tunnskiktselektrofores ¿Ãvicel®SF (FMC C0); myrsyra-ättiksyra-vatten (2S:75:900 vol/vol): 800 V; 6 minf. 3 Rörlighet vid tunnskiktskromatografi (silikagel 60 F 254 (Merck Co.); metanol-10 procentigt, vattenhaltigt ammoniumacetat-10-procentig vattenhaltig ammoniak (1:1:1 vol/vol); färgreaktion med ninhydrin. - Exempel 4 Till en lösning av 53,6 g (2 ekvivalenter) N-(brompropyl) ftalimid i 300 ml acetonítril sattes 13 g N,N,N",N'-tetrametyl- 1,3-diaminopropan. Blandníngen omrördes vid rumstemperatur under 18 h för bildning av 1,3-[T(3-ftalimídopropyl)dimetylaminojpropan- dibromid såsom en vit fällning. Fällningen üppsamlades genom filtrering, tvättades med acetonitril och torkades. Utbytet var 90%. Detta kvaternära ammoniumsalt löstes i 200 ml 6 N saltsyra och uppvärmdes vid 110oC under 8 h för åstadkommande av hydrolys. Efter kylning avlägsnades utfälld ftalsyra genom filtrering. Filtratet bringades att passera genom en kolonn av ett anjonbytarharts, Dowex® -1 (Cl-typ; volym 1200 ml). Utflödet indunstades till torrhet under förminskat tryck, varvid erhölls 28,7 g 1,3-bislfš-aminopropyl]dimetylaminq]-propantetrahydroklorid.

Denna förening var alltför hygroskopisk för bestämning av smältpunkten. PMR-spektrum, mätt i tungt vatten, visade följande 6-värden (ppm): 2,0-2,9, 6H (m); 3,0-4,0, 12H (m); 3,45, 12H (s).

Bokstäverna inom parentes har den beskrivna betydelsen. 6-värdena visar att föreningens struktur är den givna. Värdena på Rf och Rm, bestämda under de betingelser som angives i fotnoten till tabell 7, var 0,02 resp. 2,56. IR-absorptionsmaxima (i vågtal, cm_1): 3425, 2975, 2600, 2000, 1720, 1600, 1480, 1470, 1400, 1300, 1230, 1200, 1150, 1060, 1000, 960, 920, 900, 850, 760.

Exempel 5 Till en lösning av 20 g N-metylbensylamin i 300 ml tetra- hydrofuran sattes 17 g trietylamin och 89 g N-(3-brompropyl)- ftalimid. Blandníngen omrördes vid rumstemperatur under 17 h.

Den färglösa fällning, som utskildes, uppsamlades genom filtre- ring och omkristalliserades ur vattenhaltig etanol, varvid er- 10 15 20 25 30 35 4 27 465 054 hölls 76 g (80% utbyte) färglösa kristaller. Kristallerna löstes i 380i däreft: koncentrerades under förminskat tryck för avlägsnande av över- 6 N saltsyra och uppvärmdes vid 110(C i 8 h samt kyldes avlägsnades från utfälld ftalsyra genom filtrering, skott väteklorid, löstes i dest. vatten och bringades att passe- ra genom en kolonn av jonbytarharts, Dowex®-1 (Cl-typ, volym 200 ml).

Utflödet indunstades till torrhet under förminskat tryck, varvid erhölls 41 g trihydroklorid. Denna förening var alltför hygroskop för bestämning (90% utbyte) bis(3-amizopropyl)metylbensylammonium- av dess smältpunkt. PMR-spektrum, mätt i tungt vatten, visade följande 6-värden (ppm): 1,9-2,8, 4H (m); 2,9-4,0, 8H (m); 5 3,2, 3H (s); 4,70-4,75, ZH (m); 7,7, SH (s); bokstäverna inom parentes har angiven definition. Värdena visar strukturen på angiven förening. Värdena för Rf och Rm, bestämda under de be- tingelser som angives i fotnoten till tabell 7, var 0,29 och resp. 2,14. IR-absorptionsmaxima (i vågtal, cm_1), mätt i KBr- tablett, var följande: 3425, 2975, 2650, 2000, 1600, 1470, 1400, 1310, 1220, 1200, 1180, 1140, 1070, 1030, 1000, 960, 890, 780, 750, 730, 700.

Jämförelseexempel 1 I 10 ml dimetylformamid löstes 1000 mg bleomycinsyra (Cu4kelat) och 2948 mg 1-hydroxibenstriazol (förkortat HOBT).

Till lösningen sattes medan den kyldes vid OOC och omrördes 1500 mr (10 ekvivalenter gentemot bleomycinsyra) dicyklohexyl- karbodj id (förkortat DCC). ningen en lösning av 1953 mg (10 ekvivalenter gentemot bleo- 10 min därefter sattes till bland- mycin) N-(3-aminopropyl)-N,N-dimetylaminopropylamintrihydro- klorid, som hade framställts separat, och 2206 mg (30 ekvi- valenter gentemot bleomycin) N-metylmorfolin i 5 ml dimetyl- formamid. Blandningen bringades att reagera under omröring vid rumstemperatur i 4 h. Till reaktionsblandningen sattes aceton (10 gånger reaktionsblandningens volym) för utfällning av av- sedd produkt. Fällningen tvättades noggrant med aceton, löstes i dest. vatten och bringades att passera genom en kolonn med volymen 100 ml och fylld med CM-Sephadex C-25 (Na+-typ, Pharmacia Fine Chemicals Co.), som hade bringats i jämvikt med en buffert- lösning av 1/20 M ättiksyra och natriumacetat (pH 4,5) för åstad- 465 034 kommande av adsorption. linjär koncentrationsgradient 28 Den adsorberade fasen eluerades genom som utfördes genom kontinuer- lig tillsats av natriumklorid till angiven buffertlösning för gradvis ökning av natriumkloridkoncentrationen till 1,0 M. De blå fraktionerna, som eluerades vid cirka 0,45 M, uppsamlades, avsaltades genom användning av Amberlíte® och lyofiliserades, 2975, 2925, 1720, 1640, 1560, 1460, 1400, 1370, 1330, 1300, 1200, 1140, 1100, 1060, 1010, 990, 930, san, 760.

Andra fysikalisk.kemiska egenskaper visas i tabell 9.

XAD-2, såsom beskrivits, varvid erhölls 624 mg Cu-haltigt 3-¿N-(3- aminopropyl)-N,N-dimetylaminqfpropylaminobleomycin i form av blått, amorft pulver. UV-absorptionsmaxima, var vid 292 nm och 243 nm och E(1%/1 cm)=124 resp. 155. sorptionsmaxima (i vågtal, cm_1) mätta i dest. vatten, IR-ab- , mätta i KBr-tablett, var 3425, 1250, På ett sätt liknande det beskrivna syntetiserades föreningarna som visas i tabell 9.

Tabell 9 Syntetiserad Amin använd såsom utgångs- UV-absorptions- TLC för Elektro- förening med material, förening med maximum för Cu- CU-hal- fores av formeln II formeln IV haltig produkt tig pro- Cu-haltig (förkortning) nm i duk? , produkt ._1,. (E 1%/1 cm) Rf *1 Rm *2 MMHH Bis-(3-aminopropyl)dimetylj_ 292 (124) 0,81 1,10 ._ . amoniumsalt 243 (155) EEHH bis(3-aminopropyl)dietyl- 292 (116) 0,82 1,06 ammoniumsalt 243 (145) BBEH bis(3-aminopropyl)dibutyl- 292 (112) 0,73 1,04 ammoniumsalt 243 (139) PPMM bis(3-aminopropyl)metyl- 292 (111) 0,42 ' 1,15 bensylammoniumsalt 243 (138) Mmzfl 1,3-¿fb1s(3-a@in6pr6py1)- 292 (123) 0,70 1,03 dimetylaminq/propan 244 (152) Anm. *1 Silikagel 60F 254 silanísed ® 0Werck Co.); metanol-6% ammonium- acetat (45:55) vol/vol) *2 800 V; 15 min.

Jämförelseexempel 2 Avicei sF® (FMC co. ); myrsyra-ättiksyra-vatten (25:75:900); Syntes av 3,4-di(3',4'-diklorbensyloxi)-bensaldehyd.

Till en lösning av Z g 3,4-dihydroxibensaldehyd i 40 ml aceton f 465 034 sattes 4,40 g vattenfritt kaliumkarbonat och 6,24 g 3,4-diklor- bensylbrorfd. Blandningen återflödeskokades under24 h. Reaktions- blandningen avlägsnades därefter från acetonet genom destillation under förmínskat tryck, blandades med 200 ml vatten och den av- sedda produkten extraherades med 200 ml kloroform. Kloroformskik- tet torkades över vattenfritt natriumsulfat och kloroformen av- drevs genom destillation under förminskat tryck för utfällning av vita kristaller. De råa kristallerna ómkristalliserades ur etyl- acetat, varvid erhölls 4,99 g färglösa kristaller med en smält- punkt av 181-183°C. IR-absorptionsspektrum för föreningen, mätt i KBr-tablett, visade följande absorptíonsmaximaz (i vågtal, cm vid ess, 693, 710, 760, 795, 005, 830, s75,1030,113s,116s, 1200, 1245, 1280, 1370, 1403, 1437, 1460, 1470, 1510, 1585, 1600, 1690, 2730, 2030, 2870, 2910, 3070. I NMR-spektrum, mätt i deuterokloroform, visade följande sig- naler: 5,20 (s) ZH; 6,93~7,67 (m) 9H; 5,23 (5) 2H; 9,87 (5) 1H.

På ett sätt liknande det beskrivna erhölls föreningarna som visas i tabell 10; ...'|) 465 034 3" Tabell 10 Utgångsföreníng I Avsedd produkt (formel X) (formel IX fonnel VIII Namn Smält- IR NR punkt, °c 3,4-díhydroxíbens- 3,4-dí-(p- 108-110 660. 680, 755, 800, 5,16 (5) ZH, aldehyd klor- 855,848,870,1013,1033,.5,20 (s) ZH, P-klorbensylbromíd bensy1oxí)- 1090,1135,1168,1208, 6,9-7,6 (m) bensaldehyd 1236,1270,1350,1380, 11H, 1407,1437,1456,1493, 9,82 (S) 1H 1510,1575,1585,1600, 1685,1900,2740,2870, = 2910,3070 3,4-díhydroxíbens- 3,4-dí-(p- oljíg 750, 764, 790, 820, 3,88 (s) 6H, aldehyd metoxí- substans 860, 875, 935, 960, 5,18 (5) ZH, p-metoxibensyl- bensyloxi)- 985,100,1028,1118, 5,22 (s) ZH, klorid bensaldehyd 1170,1187,1235,12S5,~- 6,83-7,6 1270,1310,1340,1390, (m) 11H, 1430,1465,1520,1590, 9,84 (S) 1K 16Z0,1700,Z740,2850, 2880,2950,3030 4-hydroxíbensaldehyd 4-(4-bensyloxi- 102-104 690, 725, 795, 810, 5,07 (0) 4H, 4-bensyloxíbensyl- bensyloxiâ- 845, 875, 995,1030, 6,85-7,93 klorid bensaldehyd 1035,1115,1165,1180, Un) 13H, 1215,1245,1260,1305, 9,83 (s) 1H 1315,1385,1425,1453, 1515,1575,16o3,1695, 1895,2750,2810,2830, 2875,2910,2950,3050, 3075 4-hydroxibensaldehyd 4-(cyklooktyl- oljig cyklooktylmetyl- metoxí)- substans 830, 860,1010,1033, 1,6 (br.s) bromíd bensaldehyd 1110,1160,1Z15,1Z55, 15H, 1313,1360,1393,1425, 3,78 (d J= 144s,146s,1710,17s7, 1,1 Hz) zH, 1600,1692,Z740,2855, 6,96, 7,80 2920 (A2B2,J= 1,4 Hz) 9,86 (5) 1H .v 465 034 _31 Referensexemp l 3 Framställning av cyklotridekankarbaldehyd.

Till en omrörd blandning av 3 g zinkstoft, 50 ml vattenfritt tetrahydrofuran och 2,66 g dibrommetan sattes droppvis en lös- ning av 2,13 g vattenfri titantetraklorid i 5 ml diklormetan.

Efter 15 min sattes droppvis till den erhållna lösningen en lösning av 2 g cyklotridekanon i 8 ml vattenfritt tetrahydro- furan. Blandningen bringades att reagera vid rumstemperatur under 12 h. Reaktionsblandningen späddes med 50 ml pentan, blandad med 100 ml 1 M saltsyra, och blandades genom skakning.

Det organiska skiktet tvättades SUCCeSSivt med vatten, Utspädd natriumvätekarbonatlösning och mättad, vattenhaltig natriumklorid- lösning, torkades därefter och koncentrerades, varvid metylen- cyklotridekan erhölls. Till lösningen av denn. substans i 40 ml vattenfri diklormetan sattes droppvis, sedan den hade kylts till -1500, och under omröring en lösning rv 2,64 g m-klorperbensoe- syra i 40 ml vattenfri diklormetan. Efter 3 h reaktion tvättades det organiska skiktetsumxmsivt. med 10-procentig natriumsulfit- lösning, 7-procentig natriumvätekarbonatlösning och mättad natriumkloridlösning, torkades därefter och koncentrerades under förminskat tryck. Återstoden renades genom silikagelkromatografi Åframkallad med en blandning av petroleumeter och etylacetat (20:11], varvid erhölls 2,04 g (95% utbyte räknat på keton- í ieningen) av en epoxid. Till en lösning av epoxiden i vatten- fri díklormetan sattes droppvis efter kylning till -1SOC ett bortrifluorid-eterkomplex. Efter fullbordad tillsats tillsattes vatten till reaktionsblandningen. Det organiska skiktet avskil- des, koncentrerades därefter och renades genom silikagelkromato- grafi, varvid erhölls oljig cyklotridekankarbaldehyd i ett utbyte av 60-70%. Föreningens IR-absorptionsspektrum, mätt i KBr-tablett, visade följande absorptionsmaxima: vid 723, 735, 825, 970, 1070, 1110, 1128, 1196, 1220, 1225, 1285, 1350, 1420, 1450, 1465, 1590, 1710, 1735, 2700, 2870, 2920.

NMR-spektrum, mätt i deuterokloroform, visade följande- signaler: 1,39 (br.s) Z4H; (-CH2-x12), 2,1-2,5 (m) 1H; (-CH) 9,58 (d,3 = 1,8 Hz) 1H (-CHO).

Claims (2)

465 034 32 Patentkrav

1. Aminopropylaminobleomycin eller ett salt därav med den allmänna formeln: (llONHz lïïlíz' cH2/NH\/cH\ O \ H cH cHz coNH2 l - L* .CHB I? ß? _ f H Ho N C \ ¿0 \ / \ / \ / \ fl | HZN/-l\T/l\\:f W I E ïfl _ ïfi ___J/\ï;/«\H CH3 /N\ /c\ /\ o /cH\ C32 l i H cíH III CHB CH 2 S H cH H / H o N 1 1 l , HocH \0/C\ H H "NH'(CH2)3 -A-(CHÄÉ _B- 2 H H oH ' l c \ / 1 V! I: H i I c c oH H/ \o/_ \cH2oH H H i i _ H c oH \C/|\C/ I o I Ho I H c / \ o NHZ vari A betecknar *fl m Rl *Fl I- @~, -N N- -.1!1® R- NGD- = I \_e/ eller I I (R2)n R2 R2 R1 och R2 oberoende av varandra betecknar (Cl-C4)~alkyl eller bensyl, R betecknar (C2~C4)~alkylen, n betecknar ett helt tal med värdet 0 eller 1, och vari B betecknar en grupp med for- meln H4 varvid (i) R3 betecknar väte och R4 betecknar (Cl-G4)-alkyl substi- tuerad med (C5~C13)-cykloalkyl eller antranyl, eller (ii) bàde R3 och R4 betecknar bensyl, som kan vara substitue- rad med en eller flera (a) bensyloxigrupper, (b) ringsubstituerade bensyloxigrupper, i vilka ringsubsti~ tuenterna kan vara en eller flera halogenatomer, (C1-C4)-alk- oxigrupper eller bensyloxigrupper, eller (c) cyklooktylmetoxi.

2. Aminopropylaminobleomxcin eller ett salt därav med den allmänna formeln enligt patentkravet 1, k ä n n e- t e c k n a t därav, att det utgöres av 3-{N-metyl-N-E3'(bis~ C-m,p-dibensyloxibensyl7~amino)propyl]aminoåpropylaminobleomy- cln.