CH657859A5 - Derives d'aminopropylaminobleomycine et procede pour leur fabrication. - Google Patents

Description

La présente invention concerne de nouveaux dérivés d'amino-propylaminobléomycine.

La bléomycine est une famille de substances antibiotiques antitu-meurs découvertes en 1966 par Umezawa, l'un des présents inventeurs et collaborateurs (J. of Antibiotics, 19A, p. 200 (1966)). Il est produit par le Streptomyces verticillus, un actinomycète, et il est un glycopeptide de base soluble dans l'eau capable de chélater un atome de cuivre bivalent. En culture ordinaire, 16 membres de fa famille de la bléomycine sont produits et sont chacun isolés (par ex. Umezawa et al., Journal of Antibiotics, 19A, p. 210 (1966)). Des bléomyeincs variées sont aussi mentionnées dans le bevet US 3,922,262 et le brevet US Re 30,451. En raison de leur activité antitumeur particulière et malgré quelques effets secondaires indésirables tels que la toxicité pulmonaire, les bléomycincs ont déjà été largement utilisées dans les domaines cliniques de la thérapie du cancer; en particulier elles sont utilisées avec succès pour le traitement de carcinome cellulaire squameux, le cancer de la peau, le cancer de la tête et du cou, le cancer du poumon et de la lymphoïde maligne. Il est toutefois nécessaire d'améliorer les bléomycincs dans leur qualité d'activité antitu-nieur et de diminuer leurs effets secondaires spécialement en ce qui concerne la toxicité pulmonaire.

Les inventeurs ont voué une attention particulière pour que raminopropyle-N-méthylaminopropylaminobléomycine (APMP) inhibe fortement la croissance de cellules HeLa et ils ont fait une étude extensive pour diminuer la toxicité pulmonaire de l'APMP. L'invention est basée sur la découverte qu'il est possible de réduire de manière remarquable la toxicité pulmonaire par modification chimique du groupe amino terminal de l'APMP par substitution de groupes alcoyies variés.

Les nouveaux dérivés d'aminopropylaminobléomycine selon l'invention comprennent la forme contenant du cuivre et la forme libre de cuivre et sont représentées par la formule générale

[BX]—NH — (CH2)3—A — (CH2)3 — B (I)

où [BX] est un reste formé par l'élimination du groupe hydroxyle du groupe carboxyle de l'acide bléomycinique et est représenté par la formule

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

657 859

4

CONH, NH,

| 2 , 2

CH, NH CH

\2/ \/ \

ch2 conh2

o n HO .CH N ,c Ç O ÇH ç ÇH NH

CH

CH, H I 3 |

O

II

C-

CH

CH CH-

3 .N C CH . v

/ \ \ ^ * H ÇH N ch3 HO ch3 CH2 s

HOCH-

K

I

/C.

/

0

1

1

^c

0

OH

I

c

•CH H

■k.

\ /i\ /i

C H C i

I

OH

H/

H

\

H

I

H

C.

c/|Xc

0

/

OH

I

HO | H

/\ O NH,

(le cuivre est omis dans le cas de la forme contenant du cuivre);

r.

I

A représente un groupe de la formule —N — ,

clohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, cyclodécanyle, cyclo-undéca-nyle, cyclododécanyle et cyclotridécanyle; pour les alkoxy inférieurs, les méthoxy, éthoxy, propoxy cl buloxy; et pour les halométhyics, les trifluorométhyle et trichlorométhylc.

5 Des exemples de r,

I

-N-

10 |

(r2)a dans le groupe A ci-dessus sont

'5 CH3 C2I-Is C2H5C6I-I5

I I I

-N-, -N-, et -N-

lorsque n=0 et

20

CH3 C,Hs C4H0 CH3 III I

-N-, -N-, -N- et -N

III I

25 CH3 C2Hs C4H9 CH2CeH5

lorsque n = I.

Des exemples de

30

(r2)„

r. r,

I I

—N N—, ou — N — R—N-

ri r,

I I

-N —R—N —

I I r2 r2

35

comprenant

CH3

H,

r,

r,

40

où R, est un alcoyle inférieur ou benzyle, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle, R est un alcoylidène inférieur, et n est 0 ou 1 ; et B représente un groupe de la formule

R4

I

-n-r3

où R3 et R4 sont chacun (1), un atome d'hydrogène ou (2) un groupe alcoyle qui est substitué ou non par un ou plusieurs groupes phényle, naphthyle, anthranyle, furyle, thiophène, norbornène, ou cycloalcoyle, ces groupes de substitution étant substitués ou non par un ou plusieurs atomes halogènes ou des groupes alcoyle inférieur, alcoxy inférieur, cyano, halométhyle, ou benzyloxy, le groupe benzyloxy est substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogènes ou des groupes alcoxy inférieur, benzyloxy ou cycloalcoylméthyloxy ou (3) benzyle substitué par des groupes cycloalcoyle méthoxy, pour autant qu'au moins un des groupes R3 et R4 soit un groupe autre que l'atome d'hydrogène.

Comme exemple pour les alcoyles inférieurs mention peut être faite de méthyle, éthylc, n-propyle, isopropyle, n-butyle et isobutyle; pour les halogènes, le fluor, le chlore et le brome; pour les alcoylidé-ncs inférieurs, l'éthylène, trimélhylène, tétraméthylène, pentaméthy-lène et hexaméthylène; pour les cycloalcoyles, les cyclopcntyle, cy-

—n—(ch2)3—n—.

I I

ch3 ch3

Comme exemple des composés représentés par la formule géné-45 raie (I) qui sont désirables du point de vue de l'activité pharmacolo-gique, mention peut être faite des composés dans lesquels A est ci-i3 ch3 r,

/—N 1 1 1

5° -N N—, —N—(CH2)3—N—, ou —N

N ' I I I

ch3 ch3 (r2)„

où R! est un alcoyle inférieur, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle 55 et n est 0 ou 1 ; R3 et R4 de B sont chacun (1) un atome d'hydrogène, (2) benzyle substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogènes ou les groupes benzyloxy, cyano, halométhyle, halobenzyloxy, les groupes (inférieurs)-alkoxybenzyloxy, benzyloxybenzyloxy, ou cycloalkylméthoxy, (3) naphthylméthyle, (4) un halophényléthylc, 60 ou (5) un alcoyle inférieur substitué par un cycloalcoyle (CS-CI3, pour autant qu'au moins un des R3 et R4 soit un groupe autre qu'un atome d'hydrogène.

Des exemples de composés représentatifs de l'invention sont indiqués dans la Table 1.

5 657 859

Table /

Composé N°

Nom du composé

Abréviation

1

3-{N-Mélhyle-N-[3'-(2"-p-chlorophényléthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCLPE

2

3-{N-Méthylc-N-[3'-(2"-phényléthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MPE

3

3-{N-Mèthylc-N-[3'-(benzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MBZ

4

3-{N-Méthylc-N-[3'-(p-chlorobenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCLBZ (p)

5

3-{N-Méthylc-N-[3'-(m-chlorobenzylamino)propylc]amino}propylaminoBLM

MCLBZ (m)

6

3-{N-MéthyIc-N-[3'-(o-chlorobcnzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCLBZ (o)

7

3-{N-Méthylc-N-[3'-(m,p-dichlorobenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MDCLBZ (m, p)

8

3-{N-Méthy1e-N-[3'-(o,p-dichlorobenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MDCLBZ (o, p)

9

3-{N-Méthyle-N-[3'-(p-fluorobenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MFBZ (p)

10

3-{N-Méthylc-N-[3'-(p-broniobenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MBRBZ (p)

11

3-{N-Méthyle-N-[3'-(pentafluorobenzyIamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MPFBZ

12

3-{N-Mcthylc-N-[3'-(p-méthoxybcnzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MMOBZ (p)

13

3-{N-Méthyle-N-[3'-(o, p-diméthoxybenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MDMOBZ (o, p)

14

3-{N-Mélhyle-N-[3'-(l"p-chlorophényléthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCLAPE (p)

15

3-{N-Mélhylc-N-[3'-(m,p-dibenzyloxybenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MDBZOBZ (ni, p)

16

3-{N-Mélhylc-N-[3'-(3"-phénylpropylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MPP

17

3-{N-Méthylc-N-[3'-(2",2"-diphényléthylamino)propylc]amino}propylaminoBLM

MDPE

18

3-{N-Méthyle-N-[3'-(p-cyanobenzylamino)propylc]amino}propylaminoBLM

MCNBZ

19

3-{N-Mclhyle-N-[3'-(iri-trinuoroinèlhylbcnzyIamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MTFBZ (m)

20

3-{N-Méthylc-N-[3'-(a-naphthylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MNAPH

21

3-{N-Mélhyle-N-[3'-(9-anthraméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MANTRA

22

3-{N-Méthyle-N-[3'-(cyclooctylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

M CO

23

3-{N-Mélhyle-N-[3'-(dibenzylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MDBZME

24

3-{N-Mcthylc-N-[3'-(l"phényléthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MAPE

25

3-{N-Méthyle-N-[3'-(2"-furylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MFUR

26

3-{N-Méthyle-N-[3/-(2"-thiénylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MTHIO

27

3-{N-Méthylc-N-[3'-(dibenzylamino)propyle]amino}propyIaminoBLM

MDBZ

28

3-{N-Méthyle-N-[3'-(cyclopentylméthyIamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCP

29

3-{N-Méthylc-N-[3'-(cyclohexylméthylamino)propylc]amino}propylaminoBLM

MCHM

30

3-{N-Méthyle-N-[3'-(cyclohexylcthylamino)propyle]amino}propyIaminoBLM

MCHE

31

3-{N-Méthylc-N-[3'-(cycloheptylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MCHEP

32

3-{N-Mclhyle-N-[3'-(cycloundccanylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

M CU

33

3-{N-Méthyle-N-[3'-(5"-norbornène-2-méthylamino)propyle]-amino}propylaminoBLM

MNB

34

3-{N-MéthyIe-N-[3'-(bis(m,p-dibenzyloxybcnzyl)amino)propyle]amino}propy!aminoBLM

MDDBZOBZ

35

3-{N.N-Dimclhylc-N-[3'-(dib'cnzylamino)propyIe]amino]propylaminoBLM

MMDBZ

36

3-{N,N-Dimcthyle-N-[3'-(cyclooctylméthylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

MMCO

37

3-{N,N-Diéthyle-N-[3'-(dibenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

EEDBZ

38

3-{N,N-Dibutylc-N-[3'-(dibcnzylamino)propyIc]amìno}propylaminoBLM

BBDBZ

39

3-{N-Mcthylc-N-benzyl-N-[3'-(dibcnzylamino)propylc]amino}propylaminoBLM

MZBZ

40

3-{N-Bcnzyle-N-[3'-(dibenzylamino)propyle]amino}propylaminoBLM

ATBZ

41

3-{N,N-Dirncthylo-N-[3'-(N,N-diméthylc-N-(3"-dibcnzylaminopropyl)ainino)propyle]aniino}pro-pylaminoBLM

PPDBZ

657 859 6

Table I (suite)

Composé N°

Nom du composé

Abréviation

42

3-{N,N-Diméthyle-N-[3'-(N,N-diméthyle-N-(3"-cyclooctyIméthylaminopropyle)amino)propy-le]amino}propylaminoBLM

PPCO

43

3-[4'-(3"-Dibenzylaminopropyle)pipérazine-l-yl]propylaminoBLM

PYDBZ

44

3-[4'-(3"-p-ChlorobenzylamînopropyIc)pipcrazine-l-yl]propylaminoBLM

PYCLBZ

45

3-[4'-(3"-CyclooclyIméthylaminopropyle)pipérazine-l-yl]propyIaminoBLM

PYCO

46

3-{N,N-Diéthyle-N-[3'-(2"-p-chlorophényléthylamino)propyle]-amino}propylaminoBLM

EECLPE

47

3-{N-Méthyle-N-[3'-(cycIotridécanylméthylamino)propyle]amino}propyIaminoBLM

M CT

48

3-{N-Méthyle-N-[3'-(bis(3",4"-di(p-chIorobcnzyloxy)benzyle)-amino)propyle]amino}propylami-noBLM

MDDCL

49

3-{N-Mélhyle-N-[3'-(bis(3",4"-di(m,p-dichlorobenzyloxy)benzylc)-amino)propyle]amino}propyl-aminoBLM

MDDCL

50

3-{N-Méthyle-N-[3'-(bis(3",4"-di(p-méthoxybenzyloxy)bcnzyle)-amino)propyle]amino}propyl-aminoBLM

MDDMO

51

3-{N-Méthyle-N-[3'-(bis(4"-(p-benzyloxy)benzyloxy)benzyie)amino)-propyle]amino}propylami-noBLM

MDBZOBZOBZ

52

3-{N-Méthyle-N-[3'-(bis(p-cyclooctylméthyloxybcnzyle)amino)-propyle]amino}propylaminoBLM

MDCDBZ

53

3-{N-Méthyle-N-[3'-(bis(3",4",5"-tribenzyloxybcnzyle)amino)-propyle]amino}propyIaminoBLM

MDTBZOBZ

Noie: «BLM» signifie «bléomycine».

Parmi ces composés les plus désirables sont ceux portant les numéros 7, 15, 18, 19, 20, 22, 32, 34, 35,37, 38, 39, 41,42,43,44,45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 et 53, plus particulièrement 32, 34 et 43.

Les composés selon l'invention représentés par la formule générale (I) sont préparés comme indiqué ci-dessous.

Le composé de formule (I) est obtenu en permettant une condensation réductrice d'un aminopropylaminobléomycinc de formule

[BX] —NH—(CH2)3—A —(CH2)3 —NH2 (II)

où [BX] est comme défini plus haut et A est

H I

-N-

ou comme défini plus haut avec un composé carbonyle de formule

Rs-CO-R,; (III)

où R5 et R0 sont chacun (1) un atome d'hydrogène, (2) un cycloalcoyle, (3) un alcoyle substitué ou non par un ou plusieurs groupes cycloalcoyle ou phényle (le groupe phényle peut être remplacé par un atome halogène), (4) phényle qui peut être remplacé par un ou plusieurs atomes halogènes ou des groupes alcoyle inférieur, cycloalcoylméthyloxy, alcoxy inférieur, benzyloxy, cyano, halométhyle, ha-lobenzyloxy, alkoxybenzyloxy-(inférieur), ou benzyloxybenzyloxy, (5) naphthyle, (6) thiophène, (7) furyle, (8) anthranyle, ou norbornène; pour autant qu'au moins un des R5 et R6 soit un groupe autre que l'atome d'hydrogène.

Les agents de réduction utilisés dans la condensation comprennent des composés d'hydrure de bore tels que l'hydrure cyanoboré de sodium. La condensation peut aussi être exécutée par hydrogénation catalytique utilisant un catalyseur tel que le palladium-carbone. La quantité utilisée de composés carbonyles varie selon le type de produit désiré et ne peut pas être généralisée inconditionnellement mais, de manière générale, elle se situe dans le domaine de 0,5 à 25,

habituellement de 0,7 à 20 moles pour 1 mole de composé de formule (II). Un dérivé dans lequel R4 est un atome d'hydrogène est avant tout obtenu en utilisant 1 à 1,5 mole du composé carbonyle, 35 tandis qu'un dérivé dans lequel R3 et R4 sont de même groupe est obtenu lorsque 10 moles de ce produit est utilisé. Lorsque un dérivé csL désiré dans lequel R], R3 cl R4 sont de môme groupe (par ex. composé n° 40), 15 moles de composé carbonyle sont utilisés. Si le composé de formule (III) est difficilement soluble dans le mélhanol, 40 comme par ex. dans le cas où m,p-dibcnzyloxybenzaldéhyde est utilisé, sa quantité doit être diminuée en prolongeant le temps de réaction. La condensation est exécutée dans un solvant tel que mé-thanol, eau, diméthylformamide, acétonitrilc, ou un mélange de ceux-ci. La température de réaction, bien que dépendante du type de 45 produit désiré, est généralement comprise entre — S" et 70"' C, de préférence entre 0 et 50° C. Elle est de 0 à 25" C lorsque R4 du dérivé désiré est de l'hydrogène, tandis qu'une température plus haute telle que 35 à 50° C est préférée lorsque usage est fait d'une cétone ou d'un aldéhyde dans lequel R3 et R4 sont les mêmes et avec un fort 50 empêchement slérique, ou un aldéhyde de faible solubilité.

Le temps de réaction est de 3 à 70 heures. Un temps de réaction plus long est avantageux pour la condensation lorsque un aldéhyde de fort empêchement stérique ou de faible solubilité est utilisé.

L'isolation du présent dérivé obtenu comme décrit plus haut est 55 exécutée de la manière suivante.

Lorsqu'un compose d'hydrurc de bore est utilisé comme agent de réduction, le mélange de réaction est ajusté à pH t avec de l'acide chlorhydriquc, brassé pour 5 à 10 minutes à la température ambiante pour décomposer l'excès d'agent de réduction puis neutralisé, 60 libéré du méthanol par distillation sous pression réduite, est extrait avec un éther ou bulanol pour enlever l'excès d'aldéhyde ou de kétone. La couche aqueuse est désalinisce en passant à travers une colonne munie d'une résine adsorptive, telle que Amberlite" XAD-2 (Rohm and Haas Co.) dans de l'eau distillée pour effectuer l'adsorp-65 tion du produit désiré à la résine. Après rinçage de la colonne avec de l'eau distillée pour laver le sel, la phase adsorbéc est éluée avec un méthanol acide aqueux, tel qu'un mélange aqueux de méthanol et d'acide chlorhydrique à 1/50 N (1:4 v/v) pour collecter les parties

7

657 859

d'éluat contenant un dérivé de bléomycine bleu. La fraction combinée est neutralisée, si nécessaire, avec Dowex - 44 (une résine à échange d'anion de type OH de Dow Chemical Co.) puis concentré sous pression réduite et lyophilisé pour produire une poudre brute bleue du dérivé désiré. Pour améliorer la pureté, la poudre brute est traitée de la manière suivante.

Une solution de poudre brute dans l'eau distillée est passée à travers une colonne équipée avec CM-Sephadex ,1" C-25 (type Na+ ; Pharmacia Fine Chemicals Co.) qui a été équilibrée avec une solution tampon de I/20 M d'acide acctiquc-acétatc de sodium de pH 4,5 pour effectuer l'adsorption du produit désiré sur la résine. La phase adsorbée étant ensuite éluée par le gradient technique de concentration linéaire produit par addition continue de chlorure de sodium à la solution tampon ci-dessus, de manière à augmenter progressivement la concentration de chlorure de sodium à 1,0 M. Si les pallies éluées contenues dans le produit désiré sont trouvées comme étant toujours contaminées avec des impuretés, la Chromatographie mentionnée ci-dessus est suivie d'une autre Chromatographie utilisant une résine adsorptive, telle que Amberlite ® XAD-2 qui est exécutée en faisant passer une solution de substance brute dans l'eau distillée à travers une colonne équipée avec la résine dans une solution tampon telle qu'une solution à 4% d'acétate d'ammonium aqueux pour effectuer l'adsorption du produit désiré à la résine, et en éluanl la phase adsorbée par la méthode de gradient de concentration linéaire qui est exécutée par addition continue de méthanol à la solution tampon pour augmenter progressivement la concentration de méthanol. Dans ce cas, la caractéristique de l'élution est telle que les matériaux de départ qui n'ont pas participé à la réaction sont élues en premier, puis suivis par un dérivé dans lequel R4 est de l'hydrogène et finalement par un dérivé dans lequel R3 et R4 sont de même groupe. La séparation des parties est possible en utilisant un moniteur ultraviolet. Si la partie désirée contient toujours des impuretés, la Chromatographie ci-dessus devrait être répétée pour éliminer complètement ces impuretés.

La partie combinée contenant le produit désiré est libérée du méthanol par distillation sous pression réduite, désalinisée par Amberlite " XAD-2 et lyophilisée pour produire une poudre amorphe bleue d'un dérivé d'aminopropylaminobléomycine contenant du cuivre. La forme sans cuivre est obtenue en enlevant le cuivre de la forme contenant le cuivre par une méthode connue telle que la méthode utilisant EDTA (demande de brevet japonais publiée No. 31,875/77; brevet US 3,929,993). Un exemple du procédé pour enlever le cuivre est décrit ci-dessous.

Le produit contenant le cuivre est dissous dans l'eau distillée et la solution résultante est passée à travers une colonne équipée avec Amberlite B XAD-2 dans l'eau distillée pour effectuer l'adsorption du produit désiré. La colonne de résine est ensuite lavée avec une solution aqueuse contenant du chlorure de sodium et 5% de sel diso-dique de l'acide éthylènediaminetétraacélique (EDTA.2Na) pour éliminer l'ion de cuivre par EDTA.2Na, laissant l'aminopropylamino-bléomycine sans cuivre adsorbé à la résine. La résine est lavée avec une solution de chlorure de sodium pour enlever EDTA.2Na, puis avec de l'eau distillée et finalement éluée avec un méthanol acide aqueux, tel qu'un mélange d'acide chlorhydrique-méthanol aqueux à 1/50 N (1:4 v/v) pour collecter les parties qui montrent une absorption maximum à 290 mjt. La partie combinée est ajustée à un pH 6.0 avec Dowex 11 44 (type-OH; Dow Chemical Co.), concentrée sous pression réduite et lyophilisée pour produire une poudre amorphe blanche d'un chlorhydrate d'aminopropylaminobléomycine dans la forme sans cuivre. Si un acide sulfurique aqueux est utilisé à la place de l'acide ehlorhydrique aqueux, un sulfate est obtenu. Ainsi, il est possible d'obtenir un sel désiré par le choix de l'acide utilisé dans l'étape d'élution.

Après hydrolyse avec un acide ehlorhydrique aqueux à 6 N, à 105° C pendant 20 heures, le dérivé d'aminopropylaminobléomycine préparé comme décrit ci-dessus a donné les produits de décomposition qui sont communs aux bléomycines, comprenant L-thréonine, acide propionique ß-amino-ß-(4-amino-6-carboxy-5-m6thylpyrimidi-

ne-2-yl), acide pentanoïque 4-amino-3-hydroxy-2-méthyle-n, ß-hydroxy-L-histidine, ß-amino-L-alanine, et acide carboxylique 2'-(2-aminoéthylc)-2,4'-bithiazole-4, ainsi que des composés d'amine. D'autre part, après la mélhanolyse avec Amberlist 15, le dérivé d'aminopropylaminobléomycine a donné, comme dans le cas de bléomycine, L-glucosc et mélhylglucosidc de 3-0-carbamyl-D-mannose, tel que détecté par la Chromatographie gazeuse. Ce qui précède prouve que la structure chimique du dérivé d'aminopropylaminobléomycine préparé par le procédé selon l'invention est comme indiqué par la formule générale (1) mentionnée plus haut.

Parmi les composés de la formule (II) qui sont des matériaux de départ pour la synthèse des dérivés de bléomycine selon l'invention, mention peut être faite de (1) 3-[N-(aminopropyl)amino]propylami-noblêomycine (APP), (2) 3-[N-(3-aminopropyl)-N-mèlhylamino]-propylaminobléomycine (APMP), (3) 3-[N-(3-aminopropyl)-N,N-diméthylaminojpropylaminobléomycinc (MMHH), (4) 3-[N-(3-aminopropyl)-N,N-diéthylamino]propylaminobléomycine (EEHH), (5) 3-[N-(3-aminopropyl)-N,N-dibutylamino]propylaminobléo-mycine (BBHH), (6) 3-{N-[3'-(N'-(3-aminopropyl)-N',N'-diméthyl-amino)propyi]-N,N-diméthyiamino}propylaminobléomycine (PP4M), (7) 3-[4-(3-aminopropyl)pipérazin-l-yl]propylaminobléo-mycinc (PY) et (8) 3-[N-(3-aminopropyI)-N-méthyle-N-benzylami-no]propylaminobléomycine (MBZHH) (les lettres entre parenthèses sont des abréviations). Ces composés sont synthétisés par (1) condensation de l'acide bléomycinique avec un composé représenté par la formule générale (IV)

NH 2—(CH2)3 — A — (CH 2)3—NH 2 (IV)

où A est

H i

-N-

ou comme défini précédemment, d'une manière similaire à celle d'une méthode connue (par ex. une méthode décritc dans la demande de brevet japonais «Kokai» (Laid-Open) No. 63,089/79 ou le brevet US 4,195,018) ou par (2) une culture, en présence d'une amine de la formule (IV), d'une bléomycine produisant une race de Streptomyces verlicillus tel que Streptomyces verticillus NK-68-144 (ATCC 31307) comme décrit dans le brevet US Re 30,451. Des exemples des composés représentés par la formule (IV) comprennent (1) bis(3-aminopropyl)amine, (2) bis(3-aminopropyl)méthylamine, (3) sel de bis(3-aminopropyl)diméthylammonium, (4) sel de bis(3-aminopropyl)diéthylammonium, (5) sel de bis(3-aminopropyl)dibu-tylammonium, (6) 1,3- bis(3-aminopropyl)diméthylaminopropane, (7) 1,4- bis(3-aminopropyl)pipérazine, et (8) sel de bis(3-aminopro-pyl)(méthyl)benzylammonium.

Parmi les composés de formule (IV) ceux qui sont représentés par la formule générale (IVa) ou (IVb) sont de nouveaux composés synthétisés pour la première fois par les présents inventeurs:

r.

i

NH2-(CH2)3-N-(CH2)3-NH2 (IVa)

i r2

où R, et R2 sont un même groupe

R, R,

I I

NH2—(CH2)3—N—R—N—(CH2)3 - NH2 (IVb)

I I r2 R2

où Rls R2 et R sont tels que définis plus haut. Ces composés sont préparés par exemple selon les procédés suivants.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

657 859

8

Un composé de la formule (IVa) dans laquelle R, et R2 sont de même groupe est préparé par réaction de 3-aminopropyl-N,N-dial-kylaminc représente par la formule générale r-,

I

NH2-(CH2)3-N-R2 (V)

(où Rt et R2 sont de même groupe et sont tels que définis plus haut) avec 1,5 équivalent de chlorure de benzoyle, addition d'un alkali au mélange de réaction pour le rendre alcalin, extraction du mélange avec un solvant organique pour obtenir 3-benzamidopropyl-N,N-dialkylamine représenté par la formule générale

R,

I

C6H5-CO-NII-(CH2)3-N-R2 (VI)

(où Rj et R2 sont de même groupe et sont tels que définis plus haut), puis en faisant réagir cette amine avec N-(3-bromopropyl)phthaIi-mide pour convertir l'amine en un sel d'ammonium quaternaire de la formule générale r,

I

[CÖH 5 - CON H - (CH 2)3 - N + - (CH2)3 - N = Phth]Br" (VII)

I

R2

(où Phth représente le groupe phthalyl; R, et R2 sont de même groupe et tels que définis plus haut), en hydrolysant le sel quaternaire par chauffage avec 6 N d'acide ehlorhydrique à 110" C pour 8 heures, en enlevant l'acide phthalique et l'acide benzoïque formé comme sous-produit, en concentrant le mélange d'hydrolysat pour enlever autant que possible l'acide ehlorhydrique, en dissolvant le résidu dans l'eau distillée, en passant la solution à travers une colonne avec une résine à échange d'anions (type Cl) et en concentrant le coulant pour produire un chlorhydrate du composé de formule (IVa) dans laquelle R, et R2 sont de même groupe. Comme exemple de composé préparé par le procédé ci-dessus mention peut être faite de sel de bis(3-aminopropyl)diméthylammonium, sel de bis(3-aminoprópyl)diéthylammonium et sel de bis(3-amïnopropyl)-dibutylammonium.

Un autre composé de la formule (IVa) dans lequel R, et R2 sont des groupes différents est préparé par exemple par réaction de N-méthylbenzylamine avec 2 équivalents de 3-bromopropylphthali-mide en présence d'une base et en hydrolysant le sel d'ammonium quaternaire résultant comme décrit plus haut. Un exemple du composé préparé selon ce procédé est le sel de bis(3-aminopropyl)-(mêthyIe)benzylammonium.

Un composé de la formule (IVb) est préparé par exemple par réaction de 1,3-bis(diméthylamino)propane avec 3-bromopropyl-phthalimide pour former l,3[bis(3-phthaIimidopropyI)diméthylami-nojpropane, en hydrolisant le composé résultant comme décrit plus haut, en enlevant l'acide phthalique, un sous-produit, du mélange hydrolysé, en soumettant le mélange à un échange d'ions et en concentrant. Un exemple du composé préparé par ce procédé est 1,3-[bis(3-aminopropyl)diméthylamino]propanetétrachlorhydrate.

Les composés de formule générale (III) utilisés comme un autre matériel de départ comprennent p-chlorophényle-acétaldéhyde, phé-nylacétaldéhyde, benzaldéhyde, p-chlorobenzaldéhyde, m-chloro-benzaldéhyde, o-chlorobenzaldéhyde, m,p-dichlorobenzaldéhyde, o,p-dichIorobenzaldéhyde, p-fluorobenzaldêhyde, p-bromobenzaldê-hyde, pentafluorobenzaldéhyde, p-méthoxybenzaldêhyde, o,p-dimé-thoxybenzaldéhyde, p-chlorophényle méthyle kétone, m,p-dibenzy-loxybenzaldéhydc, 3-phényipropanol, diphénylacétaldéhydc, p-cyanobenzaldéhyde, m-trifluorométhylbenzaldêhyde, 1,3-diphényl-acétone, acétonephênone, furfural, thiophène-2-carboaldéhyde, cy-

clohexanone, 2-cyclohexyIacétaldéhyde, 5-norbornène-2-acêtaIdé-hyde, a-naphtylaldéhyde, anthracène-9-aldéhyde, cyclooctanecarbal-déhyde, 2-thiophène-carboxaldéhyde, cyclopentanecarbaldêhyde, cyclohexanecarbaldéhyde, cycloheptanecarbaldéhyde, cyclooctanc-carbaldéhydc, cycloundécanecarbaldéhyde, m,p-dibcnzylocybcnzal-déhyde, cyclotridécanecarbaldéhyde, 3,4-di(p-chlorobenzyloxy)bcn-zaldéhyde, 3,4-di(m,p-dichlorobenzyloxy)benzaldéhyde, 3,4-di(p-méthoxybenzyloxy)benzaldéhyde, 4-(p-benzyloxybenzyloxy)benzal-déhyde, p-cyclooctylmêthyloxybenzaldéhyde, et 3,4,5-tribenzyl-oxybcnzaldéhyde. Parmi ces derniers, les composés suivants sont nouveaux : 3,4-di(p-chlorobenzyloxy)-benzaldéhyde, 3,4-di(3',4'-dichlorobenzyloxy)benzaldéhyde, 3,4-di(p-méthoxybenzyloxy)ben-zaldêhyde, 4-(4'-benzyloxybenzyloxy)benzaldéhyde, et 4-cyclooctyl-méthyloxybenzaldéhyde. Ils sont préparés de la manière suivante.

HO-

CHO

(HO)

n

CHO

R7-0'

(VIII) (IX) (X)

où R, est un p-méthoxybcnzylc, 3,4-dichlorobcnzyle, p-chlorobcn-zylc, p-benzyloxybenzyle, ou un cyclooctylméthyle, X est un halogène, et n est 0 ou 1. Un composé de la formule (VIII) et un composé de la formule (IX) viennent en réaction dans un solvant tel que l'acétone à une température allant de la température ambiante au point d'ébullition du solvant. Après la fin de la réaction, le mélange de réaction est extrait du solvant par distillation et mélangé avec de l'eau et un solvant organique pour transférer l'aldéhyde dans la phase organique. Si nécessaire, le produit brut obtenu de la phase organique est purifié par rccristallisation ou par Chromatographie en colonne utilisant un gel de silice ou une résine adsorplive pour obtenir un produit pur.

Le cyclotridécanecarbaldéhyde mentionné plus haut est aussi un nouveau composé qui est préparé de la manière suivante: du tétrachlorure de titane est ajouté à un mélange de poussière de zinc, de létrahydrofuranc anhydre et de dibromométhane. Au mélange résultant est ajouté un cyclotridécanone pour produire du mélhylènccy-clotridécane qui est ensuite époxydisé avec de l'acide m-chloropcr-benzoïque. Après purification, le produit époxydisé est mis en réaction avec un complexe éther-trifluorure de bore dans un dichloromé-thane anhydre pour donner un cyclotridécanecarbaldéhyde.

Les propriétés physico-chimiques des dérivés représentatifs d'aminopropylaminobléomycine selon l'invention sont indiquées dans la Table 2.

( Voir page suivante)

Les propriétés biologiques d'exemples typiques des composés selon l'invention sont décrites ci-dessous.

(1) Activité antimicrobienne par rapport à Mycobacterium smeg-matics ATCC 697 et Bacillus subtilis.

L'activité a été examinée par rapport au micro-organisme de test ci-dessus par la méthode dite «agar plate-cylindcr», en admettant que le pouvoir de la bléomycine A2 (forme sans cuivre), utilisée comme standard et de 1,000 meg/mg.

(2) Activité inhibitrice de croissance par rapport aux cellules HeLa S3. Des cellules HeLa S3 ont été inoculées dans un milieu (MEM contenant 10% de sérum de veau) placées dans un plat Pétri en plastique. Deux jours après l'inoculation, la bléomycine à tester a été ajoutée au milieu et l'incubation a été continuée pour trois autres jours en comptant le nombre de cellules. Le pourcentage d'inhibition de croissance a été calculé en utilisant l'équation:

Pourcentage d'inhibition de croissance (en %) =

100 x (B—A) / (B —C)

où A est le nombre final de cellules le troisième jour à partir de l'adjonction d'un échantillon à tester, B est le nombre final de cellules dans le contrôle (sans l'adjonction de l'échantillon de test) et C le

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

9 657 859

Table 2

TLC'1 du composé contenant du cuivre Rr

Eleclrophorèse"

Composé N°

Abréviation

Absorption ultraviolette maximum du composé sans cuivre du composé contenant du cuivre

mu (E r/o/1 cm)

Rm

(Rm de l'alanine = 1,0)

1

MCLPE

291 ( 87)

0,75

1,01

2

MPE

291 (104)

0,81

1,08

3

MBZ

291 (106)

0,82

1,09

4

MCLBZ (p)

291 ( 91)

0,77

. . 1,09

5

MCLBZ (m)

291 ( 91)

0,78

1,09

6

MCLBZ (o)

291 ( 91)

0,81

1,09

7

MDCLBZ (m, p)

291 ( 89)

0,72

1,02

8

MDCLBZ (o, p)

291 ( 89)

0,75

0,99

9

MFBZ (p)

291 ( 89)

0,82

1,03

10

MBRBZ (p)

291 ( 86)

0,77

1,06

11

MPFBZ

291 ( 91)

0,79

1,10

12

MMOBZ (p)

291 (104)

0,83

1,07

13

MDMOBZ (o, p)

283 (100)

0,83

0,97

14

MCLAPE (p)

291 ( 88)

0,76

1,04

15

MDBZOBZ (m, p)

285 (. 65)

0,55

0,90

16

MPP

291 (102)

0,79

1,05

17

MDPE

291 ( 89)

0,72

1,07

18

MCNBZ (p)

291 ( 95)

0,33

1,08

19

MTFBZ (m)

291 ( 87)

0,74

0,99

20

MNAPH

283 (117)

0,75

0,98

21

MANTRA

352 ( 24) 290 ( 73) 254 (571)

0,68

0,85

22

MCO

291 ( 86)

0,72

1,02

23

MDBZME

291 ( 88)

0,63

1,01

24

MAPE

291 (104)

0,83

1,01

25

MFUR

291 ( 98)

0,84

1,06

26

MTHIO

291 ( 91)

0,81

1,02

27

MDBZ

291 ( 88)

0,65

1,00

28

MCP

291 ( 91)

0,81

1,13

29

MCHM

291 ( 91)

0,78

1,11

30

MCHE

291 ( 90)

0,72

1,04

31

MCHEP

291 ( 90)

0,74

1,01

32

MCU

291 ( 87)

0,54

0,99

33

MNB

291 ( 96)

0,78

1,04

34

MDDBZOBZ

285 ( 86)

0,12

0,75

35

MMDBZ

291 ( 87)

0,67

0,99

36

MMCO

291 ( 90)

0,71

0,98

37

EEDBZ

291 ( 90)

0,60

1,03

38

BBDBZ

291 ( 87)

0,45

0,99

39

MTBZ

291 ( 83)

0,55

0,97

40

ATBZ

291 ( 87)

0,50

0,96

41

PPDBZ

291 ( 84)

0,69

1,11

42

PPCO

291 ( 87)

0,52

1,12

43

PYDBZ

291 ( 93)

0,67

0,95

44

PYCLBZ

291 ( 99)

0,80

1,01

45

PYCO

291 ( 99)

0,74

0,98

46

EECLPE

291 ( 82)

0,72.

1,11

47

M CT

292 ( 99)

0,43

1,06

48

MDDCL

286 (101)

0,04

0,17

49

MDDDCL

284 ( 82)

0,01

0,02

50

MDDMO

280 ( 93)

0,15

0,87

51

MDBZOBZOBZ

282 ( 84)

0,08

0,21

52

MDCOBZ

287 ( 87)

0,02

0,51

53

MDTBZOBZ

294 ( 61)

0,01

0,19

Note: Gel de silice 60F 254 silanisc ® (Merck Co.); méthanol-6% solution d'acétate d'ammonium (60:40 v/v). '2 Avicel SF® (FMC Co.); acide formique-acide acétique-eau (27:75:900 v/v), 800 V, 15 minutes.

657 859

10

nombre de cellules le jour de l'adjonction de l'échantillon de test. courbe de concentration de l'échantillon en fonction du pourcentage

ID50 (concentration de 50% d'inhibition) a été estimé à partir de la d'inhibition.

Les résultats de tests obtenus en (1) et (2) ont été indiqués dans la Table 3.

Table 3

Composé N"

Abréviation

Pouvoir antimicrobicn du composé sans cuivre, pouvoir mcg par mg

Concentration de 50% d'inhibition de croissance du composé sans cuivre par rapport aux cellules HeLa cultivées, mcg/ml

Par rapport à Mycobacterium symegmatis ATCC 607

Par rapport à Bacillus subtilis

1

MCLPE

16800

13266

0,54

2

MPE

7282

7660

0,60

3

MBZ

6384

7230

0,20

4

MCLBZ (p)

11536

7142

0,57

5

MCLBZ (m)

7615

5490

0,80

6

MCLBZ (o)

6548

4545

1,10

7

MDCLBZ (m, p)

10601

4263

0,82

8

MDCLBZ (o, p)

13013

2940

1,05

9

MFBZ (p)

8116

8145

0,75

10

MBRBZ(p)

15446

• 6001

0,57

11

MPFBZ

7950

1509

1,60

12

MMOBZ (p)

5491

6607

0,75

13

MDMOBZ (o, p)

5351

5312

1,30

14

MCLAPE (p)

16959

5459

0,52

15

MDBZOBZ (m, p)

4516

1772

0,36

16

MPP

8453

10295

0,46

17

MDPE

21084

3554

1,00

18

MCNBZ

3163

4347

1,10

19

MTFBZ (m)

8504

6063

0,75

20

MNAPH

6581

4785

0,78

21

MANTRA

13250

4504

0,80

22

MCO

22860

12300

0,45

23

MDBZME

14920

2593

1,45

24

MAPE

7901

14089

1,00

25

MFUR

4790

9548

0,30

26

MTHIO

5595

10626

0,39

27

MDBZ

14194

1138

0,89

28

MCP

13595

16180

1,00

29

MCHM

15414

12148

0,63

30

MCHE

35030

14440

0,56

31

MCHEP

25924

20143

0,48

32

MCU

28308

8146

0,58

33

MNB

16219

13332

0,68

34

MDDBZOBZ

164

49

0,38

35

MMDBZ

13784

1742

0,87

36

MMCO

21840

20000

0,29

37

EEDBZ

10680 "

1047

0,70

38

BBDBZ

17910

530

2,00

39

MTBZ

7746

580

2,30

40

ATBZ

4450

479

1,90

41

PPDBZ

16000

7100

0,66

42

PPCO

26000

14600

0,51

43

PYDBZ

14420

1230

0,50

44

PYCLBZ

11350

6080

0,31

45

PYCO

43000

15100

0,81

46

EECLPE

17480

13310

0,52

47

MCT

3915

1760

0,18

48

MDDCL

14

8

0,058

49

MDDDCL

23

8

0,063

50

MDDMO

145

35

0,90

51

MDBZOBZOBZ

163

46

0,12

52

MDCOBZ

268

49

0,13

53

MDTBZOBZ

II

26

0.62

11

657 859

La Table 3 montre que le composé selon l'invention a une forte activité inhibitrice de croissance par rapport aux cellules HeLa cultivées ainsi qu'une forte activité antimicrobienne.

(3) Toxicité pulmonaire (pulmonary fibrosis) chez les souris. Des souris de race ICR (mâles; âgées de 15 semaines; 9 souris par groupe) ont été utilisées. Chaque souris a reçu une dose journalière de 5 mg/kg de l'échantillon à tester par injection intrapérito-néale, une fois par jour pendant 10 jours consécutifs. A la fin de cette série d'injections, les souris ont été maintenues pendant 5 semaines en observation, puis abattues cl autopsiées pour examiner l'incidence cl le degré de la fibromalose pulmonaire. L'évaluation a ctc faite en comparant le nombre de souris traitées souffrant de fi-bromatose pulmonaire et le degré de la maladie. Les résultats de l'examen ont été indiqués en Table 4.

En Table 4, le degré a été déterminé numériquement comme suit: 0 point: Pas de fibromatose.

1 point: Accumulation d'exsudat dans les alvéoles pulmonaires et modification semblable à la fibromatose dans le septum alvéolaire.

2 points: Fibromatose en plusieurs régions.

4 points: Fibromatose dispersée.

5 6 points: Fibromatose dans plus des deux tiers de la région totale.

Le «rapport» a été calculé par comparaison avec le «complexe bléomycine».

La Table 4 montre que quelques-uns des composés selon l'invention ne montrent aucune apparition de fibromatose pulmonaire et io que, même dans les cas où la fibromatose est observée, le degré de toxicité pulmonaire est fortement réduit, l'incidence étant inférieure à environ un demi et le degré inférieur à environ un septième de ceux donnés par APMP-BLM. Puisqu'il a été jusqu'à présent très difficile d'éliminer les effets secondaires des bléomycincs, en particulier la fi-15 bromatose pulmonaire, il est en fait surprenant que la présente invention réalise un composé qui ne présente aucun effet secondaire produisant la fibromatose pulmonaire, quoique dans un test animal.

île 4

Composé N»

Incidence

Degré

Nombre de souris souffrant de la fibromatose pulmonaire %

Rapport

Nombre total de la fibromatose pulmonaire/

nombre total tests animaux %

Rapport

1

2/9

( 22)

0,35

3/27

( H)

0,13

2

3/9

( 33)

0,53

7/27

( 26)

0,31

3

2/8

( 25)

0,40

2/24

( 8)

0,10

4

1/7

( 14)

0,22

. 1/21

( 5)

0,19

5

4/9

( 44)

0,70

7/27

( 26)

0,31

6

5/9

( 56)

0,90

6/27

( 22)

0,26

7

1/9

( 11)

0,18

1/27

( 4)

0,05

8

1/9

( H)

0,18

2/27

( 7)

0,08

9

2/9

( 22)

0,35

3/27

( 11)

0,13

10

2/9

( 22)

0,35

4/27

( 15)

0,18

11

2/9

( 22)

0,35

2/27

( 7)

0,08

12

2/7

( 29)

0,46

3/21

( 14)

0,17

13

2/6

( 33)

0,53

2/18

( H)

0,13

14

2/9

( 22)

0,35"

3/27

( H)

0,13

15

1/9

( 11)

0,18

1/27

( 4)

0,05

17

1/5

( 20)

0,32

1/15

( 7)

0,08

18

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

19

1/9

( H)

0,18

1/27

( 4)

0,05

20

1/9

( H)

0,18

1/27

( 4)

0,05

22

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

27

1/5

( 20)

0,32

1/15

( 7)

0,08

32

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

34

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

35

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

38

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

39

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

41

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

42

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

43

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

44

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

45

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

46

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

47

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

48

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

49

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

50

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

51

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

52

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

53

0/9

( 0)

0,00

0/27

( 0)

0,00

APMP

9/9

(100)

1,6

48/27

(178)

2,15

657 859

12

(4) Toxicité aiguë.

LD50 a été examinée par administration de plusieurs composés représentatifs selon l'invention, pendant 10 jours consécutifs.

1. Méthode d'expérimentation.

Des souris mâles de race CDF,/SLC (chacune âgée de 6 semaines, 7 membres par groupe) ont reçu par voie subcutanée différents composés selon l'invention, la dose étant différente avec chaque composé. LDÎ0 (dose journalière) a été estimée à partir de la mortalité pendant la période d'administration selon la méthode de Bch-rens-Kärber.

2. Résultats de l'expérience.

Les résultats sont indiqués dans la Table 5.

Table 5

Composé

Abréviation

LDS0

N"

(mg/kg/jour)

32

M CU

17,5

34

MDDBZOBZ

60,0

37

EEDBZ

50,0

43

PYDBZ

12,5

Complexe bléomycine

20 .

Il est apparent, à partir des propriétés biologiques décrites ci-dessus, que les composés selon l'invention ont une activité antitumeur et que leurs effets secondaires tels que la toxicité pulmonaire sont fortement réduits. En conséquence, on peut espérer que les présents composés soient utiles en temps que carcinostatique avec des effets secondaires diminués. Dans l'utilisation en carcinostatique, le composé peut être administré en dose varice, telle qu'en préparation solide, pommade et solution, mais généralement sous forme d'injection. La posologie est de 1 à 5 fois par semaine et la dose est de 5 à 200 mg par semaine.

L'invention est illustrée ci-dessous en détails avec référence à des exemples, mais elle n'est pas limitée par ces derniers.

Exemple 1:

Etape A: •

A une solution de 1,0 g de trichlorhydrate de 3- [N-méthyle-N-(3-aminopropyl)amino]propylaminobléomycine (forme contenant du cuivre) dans 30 ml de méthanol ont été ajoutés 227 mg de cyclo-undécanecarboxaldéhyde suivis par 26 mg de cyanoborohydrure de sodium. Le mélange a été mis en réaction à la température ambiante pendant 16 heures. Le mélange a été ajusté à un pH de 1,0 avec 6 N d'acide ehlorhydrique et on l'a laissé reposer pendant 10 minutes pour terminer la réaction. Le mélange de réaction a été ensuite neutralisé avec IN d'une solution d'hydroxyde de sodium et libéré du méthanol par distillation sous pression réduite. Le résidu a été porté à 50 ml avec de l'eau distillée et extrait avec un éther pour enlever l'aldéhyde en excès. La couche aqueuse a été passée à travers une colonne, 100 ml en volume, équipée avec Amberlite ® XAD-2 (Rohm and Haas Co.) dans une solution d'acétate d'ammonium aqueux à 4% et une solution d'acide acétique aqueux à 2% (1:1 V/V) pour adsorber le produit désiré. La phase adsorbée a été éluée par le gradient technique de concentration linéaire utilisant 500 ml de ladite solution tampon à laquelle ont été ajoutés de manière continue 500 ml de méthanol. Les parties, 200 ml au total, qui ont été éluées à des concentrations de méthanol d'environ 65% et montrant une absorption maximum à des longueurs d'onde d'environ 290 mji, ont été récoltées. La solution aqueuse obtenue à partir de ces parties après enlèvement du méthanol par distillation sous pression réduite a été passée à travers une colonne, 100 ml en volume, équipée avec Amberlite '* XAD-2 (Rohm and Haas Co.) dans de l'eau distillée, pour adsorber le produit désiré. La colonne a été lavée avec 150 ml d'eau distillée et le produit désiré a été élué avec 1/50 M d'acide ehlorhydrique aqueux-mêthanol (1:4 V/V). Les parties bleues de dérivés de bléomycine ont été collectées, neutralisées avec Dowex 11 44 (une résine à échange d'anions de type OH de Dow Chemical 5 Co.), puis concentrées sous pression réduite et lyophilisées.

La poudre lyophilisée obtenue ci-dessus a été dissoute dans 10 ml d'eau distillée et passée à travers une colonne, 100 ml en volume, équipée avec CM-Sephadex ,J C-25 (type Na+, Pharmacia Fine Chemical Co.) qui a été équilibré avec un tampon de 1/20 M d'acide acé-10 tique-acétate de sodium de pH 4,5 pour effectuer l'adsorption dans la colonne. Le produit désiré a été élué par le gradient technique de concentration linéaire par addition continue du chlorure de sodium à ladite solution tampon pour augmenter progressivement la concentration de chlorure de sodium à 1,0 M. Un total de 550 ml de 15 l'éluent a été passé à travers la colonne et 120 ml au total des parties bleues éluées à des concentrations de chlorure de sodium d'environ 0,65 M ont été récoltés. Les parties récoltées ont été désalinisées avec Amberlite - XAD-2, qui a été employé ci-dessus, et lyophilisées pour produire 872 mg (rendement 79%) de 3-{N-méthyle-N-[3-20 (cyclo-undécanylmèthylamino)propyl]amino]propylaminobléomycinc contenant du cuivre sous forme de poudre amorphe bleue.

Etape B:

Le produit contenant du cuivre, 872 mg, obtenu dans l'étape A a 25 été dissous dans 18 ml d'eau distillée. Afin d'éliminer le cuivre, la solution résultante a clé passée à travers une colonne, 100 ml en volume, équipée avec Amberlite " XAD-2 dans l'eau distillée pour effectuer une adsorption, et la résine a été lavée avec 300 ml d'une solution aqueuse contenant du chlorure de sodium et 5% de 30 EDTA.2Na, puis successivement avec 100 ml d'une solution de chlorure de sodium à 2% et 150 ml d'eau distillée et, finalement, la phase adsorbée a été éluée avec 1 /50 N d'acide ehlorhydrique aqueux-méthanol (1:4 V/V) pour récolter les fractions éluées qui montrent une absorption maximum aux longueurs d'onde d'environ 290 m|i. 35 Les parties récoltées ont été ajustées à un pH de 6,0 avec Dowex 44 (type OH, Dow Chemical Co.), concentrées sous pression réduite et ensuite lyophilisées pour donner 758 mg (rendement 90%) d'une poudre amorphe blanche de 3-{N-méthyle-N-[3'-(cycloundécanyl-méthylamino)propyl]amino}propylaminobléomycine (composé n° 32) 40 sous la forme d'un trichlorhydrate sans cuivre. Ce composé a montré une absorption UV maximum à 291 m|j. et E (1 %/l cm) = 87, comme mesuré dans l'eau distillée. Les maxima d'absorption IR .'"(en nombre d'ondes, cm-1), tels que mesurés dans «KBr-lablet» étaient: 3425, 2950,1650, 1550, 1520, 1440, 1400, 1260, 1190, 1140, 45 1100, 1060, 1020, 980, 800. D'autres propriétés physico-chimiques ont été indiquées dans la Table 2.

Dans la réaction ci-dessus, 988 mg de m,p-dibenzyloxybenzaldé-hyde ont été utilisés comme composant aldéhyde et la réaction a été exécutée à 27" C pendant 70 heures. Le mélange de réaction a été so purifié et libéré du cuivre de manière similaire à celle décrite plus haut pour obtenir 762 mg (rendement 57%) d'une poudre amorphe non colorée de 3-{N-méthyle-N-[3'-(bis(m,p-dibenzyloxybenzyl)-amino)-propyl]amino}propylaminoblêomycine (composé n° 34) dans la forme trichlorhydrate sans cuivre. Ce composé a montré une ab-55 Sorption UV maximum à 285 m|i et E (1 %/l cm) = 86, comme mesuré dans l'eau distillée. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm"') mesurés dans «KBr-tablet» ont été: 3425, 2950, 1650, 1550, 1510, 1460, 1430, 1380, 1320, 1270, 1190, 1140, 1060, 1020, 960, 800, 730, 690, 650.

60 De manière similaire, 174 mg de cyclooctanecarboxaldéhyde a été utilisé comme aldéhyde et a réagi à la température ambiante pendant 24 heures, puis il a été purifié et libéré du cuivre pour obtenir 605 mg (rendement 58%) d'une poudre amorphe non colorée de 3-{N-méthyle-N-[3'-(cyclooctylmêthyIamino)propyl]ami-65 no}propyIaminobléomycine (composé n° 22) dans la forme d'un trichlorhydrate sans cuivre. Ce composé a montré une absorption UV maximum à 291 mp. et E (1 %/l cm) = 86, comme mesuré dans l'eau distillée. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes,

13

657 859

cm ') mesurés dans «KBr-tablet» ont été: 3425, 2925, 1650, 1550, De manière similaire les composés indiqués dans la Table 6 ont été 1520, 1440, 1400, 1330, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020,980,800. préparés.

Table 6

Composé désiré N°

Composé de départ (formule III)

Nombre d'équivalents de composé (III)

Temps de réaction (heures)

Température de réaction fC)

Rendement (%)

1

p-Chlorophénylacétaldéhyde

1,2

16

22

66

2

Phénylacétaldéhyde

1,2

16

22

71

3

Benzaldéhyde

1,2

16

22

85

4

Benzaldéhyde

1,2

48

0

45

4

p-Chlorobenzaldéhyde

1,2

16

22

66

5

m-Chlorobenzaldéhyde

1,2

16

22

83

6

o-Chlorobenzaldéhydc

1,2

16

22

69

7

m,p-Dichlorobenzaldêhyde

1,2

16

22

77

8

o,p-Dichlorobenzaldéhyde

1,2

16

22

71

9

p-Fluorobenzaldéhyde

1,2

16

22

80

10

p-Bromobenzaldéhyde

1,2

16

22

75

11

Pcntafluorobcnzaldéhydc

1,2

16

22

56

12

p-Méthoxybcnzaldéhyde

1,2

16

22

80

13

o,p-Diméthoxybcnzaldéhyde

1,2

16

22

58

14

p-Chloroacétophénone

2,0

24

37

57

15

m,p-Dibenzyloxybenzaldchyde

1,2

18

22

63

16

3-Phénylpropanale

1,2

16

22

74

17

Diphénylacétaldéhyde

1,2

16

22

67

18

p-Cyanobenzaldéhyde

1,2

16

22

83

19

m-T rifluorométhylbenzaldéhyde

1,2

18

22

87

20

a-Naphthylaldéhyde

1,2

18

22

60

21

Anthracén-9-aldéhyde

1,2

18

22

61

22

Cyclooctanecarbaldéhyde

2,0

24

37

58

23

1,3-Diphénylacétone

5,0

30

37

71

24

Acétophénone

5,0

30

22

59

25

Furfural

1,2

16

22

71

26

2-Thiophènecarboxaldéhyde

1,2

16

22

59

27

Benzaldéhyde

10,0

16

22

67

28

Cyclopentanccarbaldéhyde

1,2

16

22

61

29

Cyclohexanecarbaldéhyde

1,2

16

22

60

30

2-Cyclohexylacétaldéhyde

1,2

16

22

54

31

Cycloheptylcarbaldéhyde

1,2

16

22

74

32

Cycloundécanecarbaldéhyde

2,0

16

22

71

33

5-Norbornènc-2-carbaldéhyde

1,2

16

22

52

34

m,p-Dibcnzyloxybcnzaldchydc

5,0

70

27

57

47

Cyclotridécanecarbaldéhyde

2,0

16

22

66

48

3,4-Di(p-chlorobenzyioxy)benzaldéhyde

4,0

96

27

54

49

3,4-Di(m,p-dichlorobenzyloxy)benzaldèhyde

4,0

120

40

44

50

3,4-Di(p-méthoxybenzyloxy)benzaldéhyde

4,0

24

40

49

51

4-(p-Benzyloxybenzyloxy)benzaldéhyde

4,0

24

40

41

52

p-Cyclooctylméthyloxybenzaldéhyde

4,0

48

40

33

53

3,4,5-Tribenzyloxybenzaldchyde

4.0

24

40

44

Exempte 2:

Etape A:

A une solution de 1,0 g de trichlorure de 3-[N,N-diéthyle-N-(3-aminopropyl)amino]propyIaminobléomycinc (forme contenant du cuivre) dans 30 ml de méthanol ont été ajoutés 642 mg de benzaldé-liyde suivi par 51 mg de cyanoborohydrure de sodium. Le mélange a été mis en réaction à la température ambiante pendant 16 heures. De manière similaire à celle de l'exemple 1, le mélange de réaction a été traité avec de l'acide ehlorhydrique, extrait avec un éther, soumis à la Chromatographie dans une colonne avec Amberlite" XAD-2, puis désalinisé en utilisant Amberlite" XAD-2 comme décrit précédemment et lyophilisé pour produire 832 mg (rendement 75%) de 3-

[N,N-diéthyle-N-[3'-dibenzyiamino)propyl]amino]propylaminobléo-mycine contenant du cuivre sous la forme d'une poudre amorphe bleue.

Le produit contenant du cuivre, 832 mg en poids, obtenu dans l'étape A a été dissous dans 17 ml d'eau distillée, puis libéré du cuivre comme dans l'étape B de l'exemple 1, concentré sous pression réduite et lyophilisé pour produire 739 mg (rendement 92%) d'une 65 poudre amorphe blanche sans cuivre de trichlorhydrate de 3-[N,N-diéthyle-N-[3'-dibenzylamino)propyl]amino]propylaminobléomycine (composé n° 37). Celui-ci a montré une absorption UV maximum à 291 ni|i et E (1 %/l cm) = 90, comme mesuré dans l'eau distillée.

co Etape B:

657 859

14

Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm ') tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2975, 2925, 1640, 1550, 1520, 1490, 1450, 1400, 1320, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, 980, 910, 800, 740, 690.

De manière similaire à celle décrite ci-dessus, 1,0 g de tétrachlor-hydrate de 3-{N,N-diméthyle-N-[3'-(N,N-diméthyl-N-(3"-amino-propyl)amino)propyl]amino}propylaminobléomycine (forme contenant du cuivre) utilisé comme matériel de départ a été mis en réaction avec 607 mg de benzaldéhyde et le mélange de réaction a été purifié et libéré du cuivre pour produire 587 mg (rendement 55%) d'une poudre amorphe non colorée et sans cuivre de tétrachlorhy-dratc de 3-{N,N-diméthylc-N-[3'-(N,N-dimclhyIe-N-(3"-dibcnzyl-aminopropyl)amino)propyl]amino}propylaminobléomycine (composé n° 41). Celui-ci a montré une absorption UV maximum à 291 m p. et E ( 1 %/1 cm) = 84, comme mesuré dans l'eau distillée. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm-1) tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2950, 1650, 1560, 1490, 1460, 1400, 1330, 1260, 1190, 1160, 1100,1060,1020, 980, 800, 740, 600.

Une réaction a été efifectuée de la même manière que plus haut en utilisant 161 mg de cyclooctanecarbaldéhyde au lieu de benzaldéhyde et le mélange de réaction a été purifié de manière similaire et libéré du cuivre pour produire 539 mg (rendement 52%) d'une poudre amorphe non colorée et sans cuivre de tétrachlorhydrate de 3-{N,N-dimcthyle-N-[3'-(N.N-dimcthyle-N-(3"-cyclooctyImélhyl-aminopropyl)arnino)propyI]amino]propyIaminobIêomycine (corn-s posé n° 42). Cclui-ci a montré une absorption UV maximum à 291 m|i et E (1 %/l cm) = 87, comme mesuré dans l'eau distillée. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm-1) tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2950, 1720, 1660, 1550, 1520, 1490, 1450, 1400, 1360, 1260, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020, io 980, 880, 800.

De manière similaire, 1,0 g de tétrachlorhydrate de 3-[4'-(3"-ami-nopropyl)pipérazinc-l-yl]aminopropyIbIêomycinc (forme contenant du cuivre) utilisé comme matériel de départ a été mis en réaction avec 623 mg de benzaldéhyde et le mélange de réaction a été purifié 15 et libéré du cuivre pour produire 695 mg (rendement 65% d'une poudre amorphe non colorée et sans cuivre de tétrachlorhydrate de 3-[4'-(3"-dibenzylaminopropyl)pipêrazine-l-yl]-propylaminoblêomy-cine (composé n° 43). Elle a montré une absorption UV maximum à 291 mjx et E ( 1 %/1 cm) = 93. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm-1) tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2950, 1660, 1560,1520, 1500,1460,1260,1190,1140,1100, 1060,1030, 980, 880, 810, 740, 700.

20

Table 7

Composé désiré N"

Abréviation

Abréviation pour composé de formule II

Composé de formule III

Nombre d'équivalents du composé III

Temps de réaction (heures)

Rendement (%)

35

MMDBZ

MMHH

Benzaldéhyde

10,0

16

72

36

MMCO

MMHH

Cyclooctanecarbaldéhyde

2,0

24

57

37

EEDBZ

EEHH

Benzaldéhyde

10,0

16

69

38

BBDBZ

BBHH

Benzaldéhyde

10,0

16

68

39

MTBZ

MBZHH

Benzaldéhyde

15,0

16

68

40

ATBZ

APP

Benzaldéhyde

15,0

20

65

41

PPDBZ

PP4M

Benzaldéhyde

10,0

16

55

42

PPCO

PP4M

Cyclooctanecarbaldéhyde

2,0

24

52

43

PYDBZ

PY

Benzaldéhyde

10,0

16

65

44

PYCLBZ

PY

p-Chlorobenzaldéhyde

1,2

16

48

45

PYCO

PY

Cyclooctanecarbaldéhyde

2,0

24

43

46

EECLPE

EEHH

p-Chlorophénylacétaldéhyde

1,3

16

41

De manière similaire, les composés indiqués dans la Table 7 ont été préparés.

Exemple 3:

Dans 300 ml d'eau distillée ont été suspendus 50 g de 3-amino-propyldimclhylaminc et 62 g d'hydrocarbonate de sodium. A la suspension, pendant son refroidissement dans la glace et brassage vigoureux, ont été ajoutés goutte à goutte 105 g (1,5 équivalent) de chlorure de benzoyle. Après 6 heures de réaction à la température ambiante, le mélange de réaction a été acidifié à un pH 4 avec de l'acide ehlorhydrique concentré et extrait avec un éther éthylique pour enlever l'excès de chlorure de benzoyle. La couche aqueuse a été ajustée à un pH 12 avec une solution de 5 ATd'hydroxyde de sodium aqueux et extraite avec du chloroforme. L'extrait de chloroforme a été séché sur du sulfate de sodium et extrait du solvant par distillation sous pression réduite pour donner 91 g de 3-benzamido-55 propyldiméthylamine. A ce résidu a été ajoutée une solution de 118 g (1 équivalent) de N-3-bromopropyIphthalimidc dans 300 ml de tétrahydrofurane.

Après brassage à la température ambiante pendant 18 heures, les cristaux non colorés précipités ont été récoltés par filtrage, lavés avec 60 tétrahydrofurane et séchés pour produire 188 g (rendement 90%) de cristaux non colorés de sel d'ammonium quaternaire. Ce sel a été dissous dans 1,000 ml de 6 N d'acide ehlorhydrique et chauffé à 110" C pendant 8 heures pour effectuer une hydrolyse. Après refroidissement, les acides phthaliques et benzoïques précipités ont été 65 enlevés par filtrage et le filtrat a été évaporé pour sécher sous pression réduite afin d'enlever l'acide ehlorhydrique en excès. Le résidu a ctc dissous dans l'eau distillée et passé à travers une colonne avec une résine à échange d'ion Dowex "-1 (type Cl, 600 ml en volume).

15

657 859

Le coulant a été évaporé pour sécher sous pression réduite pour produire 96 g (rendement 90%) de trichlorhydrate de bis(3-aminopro-pyl)diméthylammonium. Ce composé était trop hygroscopique pour déterminer son point de fusion. Le spectre PMR mesuré dans l'eau lourde a montré les valeurs 5 suivantes: 2,1-2,8 ppm, 4H (m), 5

2,4 ppm, 6H (s), 3,1-3,9 ppm, 8H (m) (où les lettres entre parenthèses indiquent les types de signaux: m: multiplet; s: singlet). Ces valeurs étaient conformes à la structure assignée. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm ') tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2975, 2625, 2000, 1600, 1480, 1470, 1350, 1320, 1300, 1230, 1200, 1160, 1140, 1060,1040, 1000, 930, 840, 760.

De manière similaire à celle décrite plus haut, en utilisant 3-ami-nopropyldiéthylamine et 3-aminopropyldibutylamine, il a été obtenu respectivement des trichlorhydrates de bis(3-aminopropyl)diéthyI-ammonium et bis(3-ammopropyl)dibutylammonium. Les propriétés physico-chimiques de ces composés sont indiquées dans la Table 8.

Table 8

Amine synthétisée

IR (cm '), «KBr-tablet»

PMR*1 (ppm) 60MHz, D20

Rm'2

Rr'3

Trichlorhydrate de bis(3-aminopropyl)diméthylammonium

3425, 2975, 2625, 2000, 1600, 1480, 1470, 1350, 1320, 1300, 1230, 1200, 1160, 1140, 1060, 1040, 1000, 930, 840, 760

2,1 -2,8 4H (m) 3,1 -3,9 8H (m) 2,4 6H (s)

2,63

0,08

Trichlorhydrate de bis(3-aminopropyl)diéthylammonium

3425, 2975, 2500, 2000, 1600, 1480, 1400, 1280, 1180, 1060, 1000, 950, 900, 880, 800, 750

1,6 6H (t)

2.0 -2,7 4H (m)

3.1 - 4,0 12H (m)

2,43

0,14

Trichlorhydrate de bis(3-aminopropyl)dibutylammonium

3425, 2975, 2650; 2000, 1600, 1470, 1400, 1390, 1350, 1280, 1260, 1180, 1070, 1030, 990, 950, 900, 840, 800, 750

1,15 3H (t) 1,3 -2,2 8H (m)

2.0 -2,7 4H (m)

3.1 - 4,0 12H (m)

1,89

0,44

Notes:

' Lettres entre parenthèses: s pour singlet, t pour triplct, m pour multiplet.

" Taux d'élcctrophorèse relativement à l'aniline (R,„ = 1,0) en couche mince d'électrophorèse [Avicel * SF (FMC Co.); acide formique - acide acétique - eau (25:75:900 v/v); 800 V; 6 minutes].

Mobilité en chroinatographic de couche milice [gel de silice 60 F 254 (Mcrck Co.)]; méthanol — 10% acétate d'ammonium aqueux — 10% ammoniaque aqueux (1:1:1 v/v); réaction de couleur à ninhydrinc.

Exemple 4:

A une solution de 53,6 g (2 équivalents) de N-(bromopropyl)-phthalimide dans 300 ml d'acétonitrile ont été ajoutés 13 g de 40

N,N,N',N'-létraméthylc-l,3-diaminopropane. Le mélange a été brassé à la température ambiante pendant 18 heures pour former un précipité blanc de l,3-(3-phthalimidopropyl)diméthylamino propane dibromide. Le précipité a étc récolté par filtrage, lavé avecacetoni-trile et séché. Le rendement était de 90%. Ce sel d'ammonium qua- 45 ternaire a été dissous dans 200 ml de 6 N d'acide ehlorhydrique et chauffé à 110'C pendant 8 heures pour effectuer l'hydrolyse. Après refroidissement, l'acide phthalique précipité a été enlevé par filtrage. Le filtrat a été passé à travers une colonne d'une résine à échange d'ions Dowex "-I (type CI; 1200 ml en volume). Le coulant a été so évaporé pour sécher sous pression réduite pour produire 28,7 g de tétrachlorhydrate de 1,3-bis[(3-aminopropyl)diméthylamino]pro-pane. Ce composé était trop hygroscopique pour déterminer le point de fusion. Le spectre PMR tel que mesuré dans l'eau lourde a indiqué les valeurs suivantes de 8 (ppm): 2,0-2,9, 6H (m), 3,0-4,0, 55 12H (m), 3,45, 12H (s). Les lettres entre parenthèses ont les mêmes significations que décrites précédemment. Les valeurs S indiquent la structure du composé donné plus haut. Les valeurs de Rf et Rm tels que déterminées dans les conditions indiquées dans la note de la Table 7 étaient 0,02 et 2,56 respectivement. Les maxima d'absorp- <so tion IR (en nombre d'ondes, cm-1) étaient: 3425, 2975, 2600, 2000, 1720, 1600, 1480, 1470, 1400, 1300,1230, 1200, 1150, 1060, 1000, 960, 920, 900, 850, 760.

Exemple 5: 65

A une solution de 20 g de N-méthylbenzylamine dans 300 ml de tétrahydrofuran ont été ajoutés 17 g de triêthylamine et 89 g de N-(3-bromopropyl)phthalimide. Le mélange a été brassé à la température ambiante pendant 17 heures. Le précipité non coloré qui a été séparé a été récolté par filtrage et recristallisé à partir d'éthanol aqueux pour produire 76 g (rendement 80%) de cristaux non 'colorés. Les cristaux ont été dissous dans 380 ml de 6 /V d'acide ehlorhydrique et chauffés à 110°C pendant 8 heures puis refroidis, libérés du précipité d'acide phthalique par filtrage, concentrés sous pression réduite pour enlever l'acide ehlorhydrique en excès, dissous dans l'eau distillée et passés à travers une colonne d'une résine à échange d'ions Dowex *-1 (type Cl; 200 ml en volume). Le coulant a été évaporé pour sécher sous pression réduite afin de produire 41 g (rendement 90%) de trichlorhydrate de bis(3-aminopropyl)méthyl-benzylammonium. Ce composé était trop hygroscopique pour déterminer son point de fusion. Le spectre PMR tel que mesuré dans l'eau lourde a montré les valeurs suivantes de 5 (ppm): 1,9-2,8, 4H (m), 2,9-4,0, 8H (m), 3,2, 3H (s); 4,70-4,75, 2H (m); 7,7, 5H (s); les lettres entre parenthèses sont telles que définies plus haut. Les valeurs indiquent la structure du composé mentionné plus haut. Les valeurs de Rf et Rm déterminées sous la condition donnée dans la note de la Table 7 étaient 0,29 et 2,14 respectivement. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm"') tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient les suivantes: 3425, 2975, 2650, 2000, 1600, 1470, 1400, 1310, 1220, 1200, 1180, 1140, 1070, 1030, 1000, 960, 890, 780, 750, 730, 700.

Exemple de référence 1 :

Dans 10 ml de diméthylformamide ont été dissous 1,000 mg d'acide bléomycinique (Cu-chelaté) et 2,948 mg de 1-hydroxybenz-triazole (brièvement HOBT). A la solution, pendant refroidissement à 0' C et brassage, ont été ajoutés 1,500 mg (10 équivalents de l'acide bléomycinique) de dicyclohexylcarbodiimide (brièvement DCC). A ce mélange, 10 minutes plus tard, ont été ajoutés une solution de

657 859

16

1,953 mg (10 équivalents de bléomycine) de trichlorhydrate de N-(3-aminopropyl)-N,N-diméthyIaminopropylamine, qui a été préparé séparément, et 2,206 mg (30 équivalents de bléomycine) de N-méthylmorpholine dans 5 ml de diméthylformamide. Le mélange a été mis en réaction avec brassage à la température ambiante pendant 4 heures. Au mélange de réaction a été ajouté de l'acétone (10 fois le volume du mélange de réaction) pour précipiter le produit désiré. Le précipitât a été lavé vigoureusement avec de l'acétone, dissous dans l'eau distillée et passé à travers une colonne, 100 ml en volume, équipée avec CM-Sephadex C-25 (type Na+, Pharmacia Fine Chemicals Co.) qui a été équilibré avec une solution tampon de 1 /20 M d'acide acétique-acétate de sodium (pH 4,5) pour effectuer l'adsorption. La phase adsorbée a été éluée par le gradient technique de concentration linéaire, qui a été produit par addition continue de chlorure de sodium dans la solution tampon ci-dessus, pour augmenter progressivement la concentration de chlorure de sodium à 1,0 M.

Les parties bleues éluées à environ 0,45 M ont été récoltées, désalini-sées en utilisant Amberlite® XAD-2 comme décrit précédemment et lyophilisées pour produire 624 mg de 3-[N-(3-aminopropyl)-N,N-diméthylaminojpropylaminoblêomycine sous la forme d'une poudre 5 amorphe bleue contenant du cuivre. L'absorption UV maximum telle que mesurée dans l'eau distillée était à 292 mp et 243 m|i et E (1%/1 cm) = 124 et 155 respectivement. Les maxima d'absorption IR (en nombre d'ondes, cm-1) tels que mesurés dans «KBr-tablet» étaient: 3425, 2975, 2925, 1720, 1640, 1560, 1460, 1400, io 1370, 1330, 1300, 1250, 1200, 1140, 1100, 1060, 1010, 990, 930, 880, 760.

D'autres propriétés physico-chimiqucs ont été indiquées dans la Table 9.

■s De manière similaire à celle décrite plus haut, les composants indiqués dans la Table 9 ont été synthétisés.

Table 9

Composé synthétisé de formule II (abréviation)

Amine utilisée comme matériau de départ, composé de formule IV

Absorption UV maximum du produit contenant CU

mji (E 1 %/l cm)

TLC du produit contenant Cu

Rf'1

Electrophorèse du produit contenant Cu Rm"

MMHH

Sel de bis(3-aminopropyl)diméthyle-ammonium

292 (124) 243 (155)

0,81

1,10

EEHH

Sel de bis(3-aminopropyl)diéthyle-ammonium

292 (116) 243 (145)

0,82

1,06

BBHH

Sel de bis(3-aminopropyl)dibutyle-ammonium

292 (112) 243 (139)

0,73

1,04

PP4M

Sel de bis(3-aminopropyl)méthyle-benzylammonium

292 (111) 243 (138)

0,42

1,15

MBZHH

l,3-[Bis(3-aminopropyl)-diméthylamino]propane

292 (123) 244 (152)

0,70

1,03

Notes:

1 Gel de silice 60F 254 silanisé'"' (Merck Co.); méthanol-6% acétate d'ammonium (45:55 v/v).

2 Avicel SFI! (FMC Co.); acide formique-acide acétique-eau (25:75:900); 800 V; 15 minutes.

Exemple de référence 2:

Synthèse de 3,4-di(3' ,4'-dichlorobenzyloxy)-benzaldéhyde.

A une solution de 2 g de 3,4-dihydroxybenzaldéhyde dans 40 ml d'acétone ont été ajoutés 4,40 g de carbonate de potassium anhydre et 6,24 g de bromure de 3,4-dichlorobenzyle. Le mélange a été reflué pendant 14 heures. Le mélange de réaction a ensuite été libéré de l'acétone par distillation sous pression réduite, mélangé avec 200 ml d'eau et le produit désiré a été extrait avec 200 ml de chloroforme. La couche de chloroforme a été séchée sur un sulfate de sodium anhydre et libérée du chloroforme par distillation sous pression réduite pour précipiter des cristaux blancs. Les cristaux bruts ont été

recristalliscs à partir d'alcool éthyiique pour donner 4,99 g de cristaux non colorés ayant un point de fusion de 181°-183°C. Le spectre 50 d'absorption IR du composé tel que mesuré dans «KBr-tablet» a montré les maxima d'absorption suivants (en nombre d'ondes, cm"'): 658, 693, 710, 760, 795, 805, 830, 875, 1030, 1135, 1168, 1200, 1245, 1280, 1370, 1403, 1437, 1460, 1470, 1510, 1585, 1600, 1690,2730,2830, 2870, 2910, 3070.

55 Le spectre NMR tel que mesuré dans deuterochloroformc a montré les signaux suivants: 5,20 (s) 2H; 6,93-7,67 (m) 9H; 5,23 (s) 2H; 9,87 (s) 1H.

D'une manière similaire à celle décrite plus haut, les composés indiqués dans la Table 10 ont été obtenus.

17 Table IO

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Composé de départ f Formule IX | Formule VIII

Produit désiré (formule X)

Nom

Point de fusion

"C

IR

NMR

3,4-DihydroxybenzaIdéhyde, bromure de p-Chlorobcnzyle

3,4-Di-(p-chloro-

bcnzyloxy)

benzaldéhyde

108-110

660, 680, 755, 800, 835, 848, 870,1013,, 1033, 1090, 1135, 1168, 1208, 1236, 1270, 1350, 1380, 1407, 1437, 1456, 1493, 1510, 1575, 1585, 1600, 1685, 1900, 2740, 2870, 2910, 3070

5,16 (s) 2H, 5,20 (s) 2H, 6,9-7,6 (m) 11H, 9,82 (s) 1H

3-4-Dihydroxybenzaldéhyde, chlorure de p-Mcthoxybenzylc

3,4-Di-(p-méthoxy benzyloxy) benzaldéhyde

Substance huileuse

750, 764, 790, 820, 860, 875, 935, 960, 985, 1000, 1028, 1118, 1170, 1187, 1235, 1255, 1270, 1310, 1340, 1390, 1430, 1465,1520, 1590, 1620, 1700, 2740, 2850, 2880, 2950, 3030

3,88 (s) 6H, 5,18 (s) 2H, 5,22 (s) 2H, 6,83-7,6 (m) UH, 9,84 (s) 1H

4-Hydroxybenzaldéhyde, chlorure de 4-Benzyloxybenzyle

4-(4-Benzyloxy-

benzyloxy)

benzaldéhyde

102-104

690, 725, 795, 810, 845, 875, 995, 1030, 1035,1115, 1165, 1180, 1215, 1245,1260, 1305, 1315,1385, 1425,1453, 1515, 1575,1603,1695, 1895, 2750, 2810, 2830, 2875, 2910, 2950, 3050, 3075

5,07 (s) 4H, 6,85-7,93 (m)

13H, 9,83 (s) 1H

4-Hydroxybcnzaldéhyde, bromure de Cyclooctylméthyle

4-(Cyclooctyl-

méthoxy)

benzaldéhyde

Substance huileuse

830, 860, 1010, 1033, 1110, 1160,1215, 1255, 1313, 1360,1393, 1425, 1445, 1465, 1710, 1787, 1600, 1692, 2740, 2855, 2920

1,6 (br.s) 15H, 3,78 (d J= 1,1 HZ) 2H, 6,96, 7,80 (A2B2, J= 1,4 HZ), 9,86 (s) 1H

Exemple de référence 3 :

Préparation de cyclotridécanecarbaldéhyde.

A un mélange brassé de 3 g de poussière de zinc, 50 ml de tétrahydrofurane anhydre et 2,66 g de dibromométhane a été ajoutée goutte à goutte une solution de 2,13 g de tétrachlorure de titane «o anhydre dans 5 ml de dichlorométhanc. Après 15 minutes, à la solution résultante a été ajoutée une solution de 2 g de cyclotridécanone dans 8 ml de tétrahydrofurane anhydre. Le mélange a été mis en réaction à la température ambiante pendant 12 heures. Le mélange de réaction a été dilué avec 50 ml de pentane, mélangé avec 100 ml 43 de 1-M d'acide ehlorhydrique et mélangé en secouant. La couche organique a été lavée successivement avec de l'eau, une solution d'hy-drocarbonate de sodium aqueuse et une solution de chlorure de sodium aqueuse saturée, puis séchée et concentrée pour produire du méthylènecyclotridécane. A une solution de cette substance dans 50 40 ml de dichloromélhane anhydre, après avoir été refroidie à — 15" C, a été ajoutée goutte à goutte sous agitation une solution de 2,64 g d'acide m-chloroperbenzoïque dans 40 ml de dichlorométhanc anhydre. Après 3 heures de réaction, la couche organique a été

lavée successivement avec une solution à 10% de sulfate de sodium, une solution à 7% d'hydrocarbonate de sodium et une solution saturée de chlorure de sodium, puis séchée et concentrée sous pression réduite. Le résidu a été purifié par Chromatographie à gel de silice développé avec un mélange d'éther de pétrole-acétate d'éthyle (20:1) pour produire 2,04 g (rendement 95% basé sur le composé kétone) d'un époxyde. A une solution de l'époxyde dans dichlorométhanc anhydre, après avoir été refroidie à — 18" C, a été ajouté goutte à goutte un complexe de trifluorure de bore-éther. Après cette adjonction, de l'eau a été ajoutée au mélange de réaction. La couche organique a été séparée puis concentrée et purifiée par Chromatographie à gel de silice pour produire un cyclotridécanecarbaldéhyde huileux dans un rendement de 60-70%. Le spectre IR d'absorption du composé tel que mesuré dans «KBr-tablet» a montre les maxima d'absorption suivants: 723, 735, 825, 970, 1070, 1110, 1128, 1196, 1220, 1225, 1285, 1350, 1420, 1450, 1465, 1590, 1710, 1735, 2700, 2870, 2920.

Le spectre NMR tel que mesuré dans deuterochloroforme a montré les signaux suivants : 1,39 (br.s) 24H ; (—CH2—x 12), 2,1 -2,5 (m) IH; (-CH) 9,58 (d, 3 = 1,8 Hz) IH (-CHO).

R

Claims (19)

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1. Aminopropylaminobléomycinc, ou un sel de celle-ci, représentée par la formule générale suivante

[BX]-NH-(CH2)3-A-(CH2)3-B

où BX représente un reste d'un acide bléomycinique formé par enlèvement d'un groupe hydroxyle du groupe carboxyle dudit acide; A représente un groupe de formule générale

Ri Ri Ri

I x I I

— N —, —n n —,ou —N—R—N—

I ' ' I I

(R2)n Rz R2

où R, est un alcoyle inférieur ou benzyle, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle, R est un alcoylidène inférieur et n est 0 ou 1 ; et B représente un groupe de la formule

I

-n-r3

où R3 et R4 sont chacun (I) un atome d'hydrogène ou (2) un groupe alcoyle substitué ou non par un ou plusieurs groupes phényle, naph-thyle, anthranyle, furyle, thiophène, norbornène ou cycloalcoyle, ces groupes de substitution étant eux-mêmes substitués ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes alcoyle inférieur, alkoxy inférieur, cyano, halométhyle, ou benzyloxy, le groupe ben-zyloxy étant substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes alkoxy inférieur, benzyloxy ou cycloalcoylméthyloxy ou (3) benzyle substitue par un groupe cyclooctylc méthyloxy, pour autant qu'au moins l'un des groupes R3 et R4 soit un groupe autre qu'un atome d'hydrogène.

2. Aminopropylaminobléomycinc, ou un sel de celle-ci, selon la revendication I, caractérisée en ce que A est —hT

CH3 CH3 R,

I I I

-N-(CH2)3-N-, ou -N-

I I I

CII3 CH3 (R2)n où R, est un alcoyle inférieur, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle et n est 0 ou 1 ; et R3 et R4 dans B sont chacun (1) de l'hydrogène, (2) un benzyle substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes benzyloxy cyano, halométhyle, halobenzyloxy, al-koxybenzyloxy inférieur, benzyloxybenzyloxy ou cycloalcoylmé-thoxy, (3) naphthylméthyle, (4) halophênyléthyle ou (5) un alcoyle inférieur substitué par un cycloalcoyle c8-c13.

2

revendications

3

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ch3 ch3 r,

I I I

-N N—, —N —(CH2)3—N—, ou —N—

X ' I I I

CH3 CH3 (R2)n où R, est un alcoylc inférieur, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle et n est 0 ou 1 ; et R5 et R6 du composé carbonyle sont chacun (1) un atome d'hydrogène, (2) un cycloalcoyle, (3) un alcoyle substitué par un halogénophényle, (4) phényle substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes benzyloxy, cyano, halométhyle, halobcnzyloxy, alkoxybenzyloxy inférieur, benzyloxybenzyloxy ou cycloalcoylméthyloxy ou (4) naphlhyle.

3. Aminopropylaminobléomycinc, ou un sel de celle-ci, selon la revendication 1, caractérisée en ce que A est ch3

-N- ou -n^ n—

R3 dans B est un groupe benzyle, un groupe benzyle substitué par un ou plusieurs groupes benzyloxy, un groupe méthyle substitué par un cycloalcoyle C, rCl3 et R4 dans B est un atome d'hydrogène, un groupe benzyle ou un groupe benzyle substitué par un ou plusieurs groupes benzyloxy.

4. 3-{N-Méthylc-N-[3'-(cycIo-undecanylméthyIamino)propy-le]amino}propylaminobléomycine selon la revendication 3.

5

5. 3-{N-Méthyle-N-[3'(bis(m,p-dibenzyloxybenzyle)amino)pro-pyle]amino}propylaminoblêomycine selon la revendication 3.

6. 3-[4'-(3"-dibenzyIaminopropyle)pipérazine-l-yl]-propylami-nobléomycinc selon la revendication 3.

7. 3-{N,N-diméthylc-N-[3'-(dibcnzylamino)propyle]amino}pro-pylaminobléomycine selon la revendication 2.

8. 3-{N,N-diméthyle-N-[3'-(N,N-diméthyle-N-(3"-dibenzyIami-nopropylc)amino)propylc]-amino}propylaminobléomycinc selon la revendication 2.

9. 3-{N,N-diméthyle-N-[3'-(N,N-diméthyle-N-(3"-cyclooctylmé-lhylcaminopropylc)amino)-propylc]amino}propylaminob!éomycine selon la revendication 2.

10

10. Procédé de fabrication d'un dérivé d'aminopropylamino-bléomycine scion la revendication 1 représenté par la formule générale suivante ou d'un sel dudit dérivé

[BX] - NH - (CH2)3 - A - (CH2), - B

où [BX] représente un reste d'un acide bléomycinique forme par enlèvement d'un groupe hydroxyle du groupe carboxyle dudit acide; A représente un groupe de la formule ri r, rj

I /_s I I

-N-,-N N—, ou —N—R—N—

I N ' I I

(R2)n R2 R2

où R, est un alcoyle inférieur ou benzyle, R2 est un alcoyle inférieur ou benzyle, R est un alcoylidène inférieur et n est 0 ou 1 ;

et B est un groupe de la formule r4 I

-N-R3

où R3 et R4 sont chacun (1) un atome d'hydrogène ou (2) un groupe alcoyle substitué par un ou plusieurs groupes phényle, naphthyle, anthranyle, furyle, thiophène, norbornène ou cycloalcoyle, ces groupes de substitution étant substitués ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes alcoylc inférieur, alkoxy inférieur, cyano, halométhyle ou benzyloxy, le groupe benzyloxy étant substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes alkoxy inférieur, benzyloxy ou cycloalcoylméthyloxy, pour autant qu'au moins l'un des groupes R3 et R4 soit un groupe autre qu'un atome d'hydrogène comprenant la condensation réductrice d'une aminopropylaminoblèomycine représentée par la formule générale

[BX] - NH - (CH2)3 - A - (CH2)3 - NH2

H

I

où [BX] est comme défini plus haut et A est — N— ou comme défini plus haut avec un composé carbonyle représenté par la formule générale

R5 —CO —R,;

où Rs et R6 sont chacun (1) un atome d'hydrogène, (2) un cycloalcoyle, (3) un alcoyle substitué ou non par un ou plusieurs groupes cycloalcoyle ou phényle, le groupe phényle étant substitué ou non par un atome halogène, (4) un phényle substitué ou non par un ou plusieurs atomes halogène ou des groupes alcoyle inférieur, cycloalcoylméthyloxy, alkoxy inférieur, benzyloxy, cyano, halométhyle, halobenzyloxy, alkoxybcnzyloxy inférieur ou benzyloxybenzyloxy, (5) naphtyle, (6) thiophène, (7) furyle, (8) anthranyle ou (9) norbornène ou (3) benzyle substitué par un groupe cyclooctyle méthyloxy; pour autant qu'au moins l'un des groupes Rs et R6 soit un groupe autre qu'un atome d'hydrogène.

11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que A

est:

12. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que A est

CH3

— N— ou —N —

R5 est un atome d'hydrogène et Rö est un groupe phényle substitué ou non par un ou plusieurs benzyloxy, ou un groupe cycloalcoyle.

13. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que A est ch3

I , s

-N- ou -Nn N-

et R5 —CO —Rö

est un cyclo-undecanecarbaldéhyde ou benzaldéhyde, ce dernier étant substitué ou non par un ou plusieurs groupes benzyloxy.

14. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le rapport molaire de l'aminopropylaminobléomycine au composé carbonyle est 1:0,5-25.

15. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la condensation est exécutée dans un solvant et en présence d'un agent de réduction entre — 5'' C et 70" C pendant 3 à 70 heures.

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le solvant est du méthanol, de l'eau, du diméthylformamide, de l'acêto-nitrilc ou un mélange de ccux-ci.

17. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'agent de réduction est un composé d'hydrure de bore ou de palladium-carbone.

18. Procédé pour la préparation d'une aminopropylaminobléomycinc selon la revendication I, caractérisé en ce qu'on condense l'acide bléomycinique avec l'amine de la formule générale nh2 - (ch2)3 - a' - (ch2)3 - nh2

où A' est r.

I

-n-

I

Rz où R, et R2 sont un même groupe, ou

R, Ri

I I

-n-r-n-

I I r2 rî

où R,, R2 et R sont tels que définis plus haut, puis qu'on condense les composés obtenus avec les composés carbonyles de la formule

R5 —CO Rf>

R5 et R6 ayant la signification donnée dans la revendication 10.

19. Amine de formule

NH2 - (CH2)3 - A' - (CH2)3 - NH2 où A' représente un groupe de la formule r.

I

-N-I

R2

où R, et R2 sont un même groupe, ou R. R,

I I

-N-R-N-

I I r2 r2

où R, et R2 sont chacun un alcoyle inférieur ou benzyle et R est un alcoylidène inférieur, comme moyen pour la mise en œuvre du procédé selon la revendication 18.