FR2505328A1 - N-(4-(3-aminopropyl) aminobutyl)-2,2-dihydroxyethanamide et procede pour sa preparation - Google Patents

Abstract

LA PRESENTE INVENTION EST RELATIVE AU N-4-(3-AMINOPROPYL)- AMINOBUTYL-2,2-DIHYDROXYETHANAMIDE DE FORMULE: (CF DESSIN DANS BOPI) CE COMPOSE EST UTILE NON SEULEMENT COMME INTERMEDIAIRE POUR LA SYNTHESE D'UNE NOUVELLE SUBSTANCE CARCINOSTATIQUE, A SAVOIR LE N-4-(3-AMINOPROPYL) AMINOBUTYL-2-(S)-7-GUANIDINO-3-HYDROXYHEPTANAMIDO-2-HYDROXYETHANAMIDE OU UN DE SES DERIVES, MAIS PRESENTE EGALEMENT UNE ACTIVITE IMMUNO STIMULANTE EN LUI-MEME.

Description

La présente invention est relative au N-E 4-( 3-amino-

propyl) aminobuty 17-2, 2-dihydroxyéthanamide de formule ( 1) HO 2 "l" 1 2 3 4 1 ' 2 ' 3 '

HCCONHC 2 CH 2 CH 2 CH 2 NHCH 2 CH 2 CH 2 NH 2 ()

et ses sels d'addition, ainsi qu'un procédé pour leur synthèse.

Ce nouveau composé est utile non seulement comme inter-

médiaire pour la synthèse d'une nouvelle substance carcinostatique,

à savoir le N l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyl -2 (S)-7-guanidino-3-

hydroxyheptanamidol-2-hydroxyéthanamide ou un de ses dérivés,

mais également comme immunostimulant en lui-même.

Etant donné sa stabilité, le nouveau composé selon la pré-

sente invention est préparé de préférence sous la forme d'un sel d'additon avec un acide Les acides que l'on peut utiliser comprennent

des acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide sulfu-

rique, l'acide phosphorique et l'acide borique et des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide citrique l'acide tartrique et l'acide glutarique Parmi ces acides, on préfère particulièrement l'acide

chlorhydrique, l'acide sulfurique et l'acide tartrique.

Les propriétés physico-chimiques et biologiques du compo-

sé de la présente invention sont présentées ci-après

( 1) Propriétés physico-chimiques.

Le chlorhydrate du présent composé est une poudre blanche qui ne fournit pas de point de fusion net L'analyse élémentaire co 1 icide avec les valeurs théoriques calculées pour C 9 H 21 N 303 2 HC 1 (C 36,99 %, H 7, 93 %, N 14,38 %, C O 24,27 %) La RM Ndes protons,

telle que mesurée dans l'eau lourde, présente les signaux caracté-

ristiques suivants: 6 = 2,1 ( 2-, 3-CH 2); 2,4 2,7 ( 2 '-CH 2);

3,5 3,8 ( 1-, 4-, 1 '-, 3 '-CH 2); 5,77 ( 2 " -CH, S).

( 2) Propriétés biologiques.

L'effet du présent composé (sous forme de son chlorhydrate) sur l'hypersensibilité retardée de globules rouges de sang de mouton est tel qu'indiqué au Tableau 1 L'essai a été réalisé suivant la méthode de Mackaness et al Lagrange, P H, Mackaness, G B et Miller 2.

T.E, J Exp Med, 139, 528 542 ( 1974),)e la manière suivante.

Des souris femelles CDF 1, agées de six semaines, sont immunisées par injection intraveineuse de chacune 105 globules rouges de sang de mouton, et, simultanément, reçoivent des quantités variables du composé de formule (I) (chlorhydrate) par injection péritonéale Après 4 jours, chaque souris reçoit 108 globules rouges

de sang de mouton par inj ection sous-cutanée pour induire la réaction.

Après 24 heures, on mesure le gonflement du coussinet de la patte de

chaque souris au moyen d'un pied à coulisse.

Tableau I

Immuni Composé de Accroissement de l'épais-

sation 3 formule ( 1) seur du coussinet de la T/C (ig/souris,i p) patte (x O,1 mm E T)

SRBC NE 8,0 + 0,7 100

SRBC 1 13,0 1,7 163

" 4 13,0 + 0,5 163

" 16 13,4 0,6 168

63 14, 9 0, 9 186

"n 250 11,8 + 0,6 148

1000 11,7 + 1,0 146

Il apparaft du Tableau 1 que la réaction est accrue par

l'administration de 1 J Ig à 1 mg du composé de formule (I).

Le présent composé, à savoir le N-ú 4-(aminopropyl) aminobutylj-2,2dihydroxyéthanamide de formule (I) HO(

11 CHCONH (CH) 4 NH(CH) NH 2 (I

est synthétisé de la manière suivante: Un composé répondant à la formule (II) 3. H 2 N (C Hi 2) 4 N (CH 2) 3 NHR I) R (dans laquelle R représente un groupe amino protecteur tel qu'un

groupe benzyloxycarbonyle, chloroacétyle ou un groupe alkyloxy-

carbonyle inférieur), est condensé avec un dialkylacétal d'acide glyoxylique répondant à la formule (III) R'O

CHCOOH (III)

R'O (dans laquelle R' représente un groupe alkyle ayant de 1 à 5 atomes

de carbone), ou un dérivé réactif du groupe carboxylique du dialkylacé-

tal, et le groupe amino protecteur et le groupe R' sont ensuite élimi-

nés pour donner le composé de formule (I).

La condensation du composé de formule (II) avec le composé de formule (III) ou son dérivé réactif est réalisée par une méthode

classique de formation d'une liaison amide,bien connue dans la syn-

thèse des peptides, en utilisant par exemple un halogénure d'acyle, un azide d'acide, un ester réactif ou un anhydride d'acide Ainsi, la condensation est réalisée en présence d'un agent activant du groupe carboxyle pour le composé de formule (III) Des exemples de tels réactifs appropriés utilisés pour l'activation du groupe

carboxyle ou la formation d'un dérivé réactif comprennent des réac-

tifs pour former des esters actifs tels que le 6-chloro-1-p-chloro-

benz ènesulfonyloxybenzotriazole (CCBT), le N-éthyl-5-phényliso-

oxazolium-3 ' -sulfonate (NEPIS), le N-tert-butyl-5-méthylisooxazo-

lium perchlorate, la N-éthoxycarbonyl-2-éthoxy-1, 2-dihydroquino-

léine, le sulfite de di-p-nitrophényle, le phosphite de tri-p-nitro-

phényle, le trichloroacétate de p-nitrophényle, le N-hydroxysucci-

nimide, le p-nitrophénol, le pentachlorophénol et l'alcool benzylique; des carboiimides tels que le dicyclohexylcarbodiimide (DDC), le

1-éthyl-3-( 3-diméthylaminopropyl)-carbodiimide, le 1-cyclohexyl-3-

( 2-morpholinoéthyl)-carbodiimide, le di-p-toluylcarbodiimide et le 4.

diisopropylcarbodiimide; et des réactifs pour la synthèse des azides.

La réaction de condensation est mise en oeuvre de préfé-

rence dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle et à une température allant généralement de 0 à 100 C et de préférence de 10 à 40 q C Bien que le temps de réaction varie avec la température

de réaction, il est d'environ 5 à 30 heures à la température ambiante.

La quantité d'acide carboxylique de formule (III) ou d'un de ses réac-

tifs utilisée est de 0, 5 à 10 moles, de préférence de 2 à 5 moles par

mole d'amine de formule (II).

L'élimination des groupes protecteurs du produit de con-

densation formé décrit ci-dessus peut être réalisée par hydrolyse ou réduction suivant le type de groupe protecteur, mais on préfère les groupes protecteurs qui sont éliminables par hydrolyse acide Par

exemple, lorsque le groupe amino protecteur est un groupe t -butoxy-

carbonyle et lorsque le groupe protecteur de l'aldéhyde est us acétal diéthylique, l'hydrolyse est réalisée dans une solution de dioxane aqueuse en ajoutant deux à trois équivalents d'acide chlorhydrique

dilué et on chauffant à 100 C, pendant deux à cinq heuresafin d'obte-

nir le chlorhydrate du composé de formule (I) Lorsque le groupe amino protecteur est un groupe benzyloxycarbonyle, l'élimination du groupe protecteur est réalisée de préférence par hydrogénolyse en

utilisant du palladium, de l'oxyde de platine, ou similaire.

Le produit de départ de formule (II)

H 2 N(CH 2) 4 N(CH 2)3 NHR (II)

R

dans laquelle R est un groupe amino protecteur, est difficile à obtenir avec un rendement élevé en introduisant deux groupes amino protecteur dans la spermidine En conséquence, il est préparé en condensant d'une manière classique une 1, 4-butanediamine mono amino protégée de formule (IV) suivante:

R"HN(CH 2)4 NH 2 (IV)

dans laquelle R" est un groupe amino protecteur différent du groupe R précédemment indiqué, avec une 3-halopropane amine amino protégée de formule (Y) 5.

X(CH 2)2 NHR (V)

dans laquelle R est identique au groupe amino protecteur indiqué ci-

dessus et X est un atome d'halogène, pour former un composé de formule (VI)

R"HN(CH 2)4 NH(CH 2)3 NHR (VI)

dans laquelle R et R" sont des groupes amino protecteurs différents l'un de l'autre, puis en protégeant le groupe imino restant avec le même groupe amino protecteur R, et en éliminant sélectivement l'autre groupe amino protecteur R" afin d'obtenir le composé de

formule (II).

En variante, le composé de formule (VI) est obtenu en condensant une 1, 3propanediamine mono amino protégée de formule (VII)

RHN(CH 2)2 NH 2 (VII)

dans laquelle R est tel que défini ci-dessus, avec une 4-halobutane-

amine amino protégée de formule (VIII)

X(CH 2)4 NHR" (VIII)

dans laquelle R" et X sont tels que définis ci-dessus, d'une manière

analogue à celle précédemment décrite.

Pour la protection des groupes amino, les groupes amino protecteurs qui sont usuellement utilisés dans la synthèse des peptides peuvent être employés, mais le groupe amino protecteur R" doit être sélectivement éliminable, sans que le groupe amino protecteur R soit

éliminé En conséquence, une combinaison d'un groupe benzyloxy-

carbonyle éliminable par hydrogénolyse et d'un groupe t-butoxy-

carbonyle éliminable par un traitement avec un acide faible est l'exemple le plus approprié L'un ou l'autre de ces deux groupes

peut être R ou R".

La condensation d'un composé de formule (IV) avec un composé de formule (V) ou la condensation d'un composé de formule (VII) avec un composé de formule (VIII) est facilement réalisée dans un solvant anhydre tel que le N, N-diméthylformamide, à température ambianteen présence de triéthylamine L'halogène du composé de 6. formule (VIII) est de préférence le brome Le dialkylacétal de l'acide glyoxylique de formule (III) est facilement formé en faisant réagir l'acide glyoxylique avec un alcanol en utilisant un catalyseur acide d'une manière classique Des alcanols appropriés sont le méthanol, l'éthanol, le propanol, le butanol et l'acool amylique. L'acétal dialkylique de formule (III) est également obtenu de façon appropriée par hydrolyse alcaline du 2, 2-diéthoxyacétate d'éthyle commercial. En partant du composé de formule (I), une substance carcinostatique intéressante, à savoir le N- 4-( 3-aminopropyl)

aminobuty 7 -2 LS)-7-guanidino 3 -hydroxyheptanamido/ -2-hydroxy-

éthanamide (en résumé GHA-GS) est synthétisée par la condensation

du composé de formule (I) avec le (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptana-

mide de formule

(S)

H 2 NCNH(CH 2)4 CHCH 2 CONH 2

H OH

par chauffage des deux composés en présence d'un acide minéral ou organique Comme indiqué ci-dessous, le GHA-GS présente une activité carcinostatique vis-à-vis de la leucémie L 1210 chez

la souris et est utile comme agent carcinostatique.

Effet carcinostatique de GHA-GS sur la leucémie L 1210 de la souris: Un groupe de 5 souris m Ales de souche BDF 1 (agées de six semaines) est inoculé par voie intra-péritonéale avec 105 cellules L 1210, et immédiatement après chaque souris reçoit par voie intra péritonéale une solution saline physiologique de l'échantillon une fois par jour pendant six jours consécutifs pour déterminer le taux de prolongation de la période de survie lT/C) x 100 j T/C = (temps de survie moyen du groupe traité)l(temps de survie moyen du groupe non traitéu L'invention est illustrée ci-dessous en

pie qui est donné à titre non limitatif.

référence à l'exem-

Taux de prolonga Nombre de Echan Dose tion de la période souris survivant tillon (mg/kg/jour) de survie pendant 30 jours (T/C) x 100 (%)

1,56 115 O

3,13 > 254 1

6,25 341 3

12,5 y 405 4

GHA-GS 25 7351 2

-365 2

EX El PLE

a) Synthèse ae la mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-

butane-diamine

Dans 30 ml de méthanol aqueux à 50 %, on dis-

sout 1,76 g ( 20 mmoles) de 1,4-butanediamine, puis

on ajoute 5,48 g ( 20 mmoles)de S-benzyloxycarbonyl-4,6-

diméthyl-2 mercaptopyrimidine ( produit par Ko-

kusan Kagaku Co) Après avoir agité pendant 3 heures, on filtre le mélange réactionnel pour séparer le

précipité (on sépare 2,08 g ( 28 %) du composé de di-

N-benzyloxycarbonyle) On évapore le filtrat à sec, on dissout dans 250 ml de chloroforme et on lave

cinq fois avec 100 ml d'eau On sèche la couche chlo-

roformique sur du sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec pour obtenir 1,0 g (rendement 23 %) de mono-N-benzyloxy-carbonyl-1,4butanediamine sous la

forme d'un sirop incolore.

b) Synthèse de l'O-tosyl-3-tert-butoxycarbonyl-

amino-1-propanol Dans 30 ml de méthanol, on dissout 1,5 g ( 20 mmoles) de 3-amino-propanol, puis on ajoute 4,8 g

( 20 mmoles) de S-tert-butoxycarbonyl 4,6-diméthyl-2-

mercaptopyrimidine (un produit de Kokusan Kagaku Co).

Après avoir agité pendant 6 heures, on évapore le mélange réactionnel à sec, on dissout dans 200 ml

de chloroforme et on lave avec 200 ml d'eau On con-

centre la couche chloroformique et on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 300 g de gel

de silice (Wako Gel C-200) et un mélange toluène-

acétate d'éthyle ( 1:1 en volume) comme solvant de développement On réunit les fractions 82 à 151 (ayant chacune un volume de 15 ml) et on évapore

pour obtenir 2,95 g (rendement 84 %) de 3-tert-

butoxycarbonylamino-1-propanol sous la forme d'une

huile incolore.

Dans 50 ml de pyridine, on dissout 2,95 g

( 16,9 moles) de 3-tert-butoxycarbonylamino-1-propanol.

A la solution, en refroidissant dans de la glace sous une atmosphère d'argon, on ajoute goutte à goutte en minutes une solution de pyridine contenant 3,36 g ( 17,7 moles) de chlorure'de p-toluènesulfonyle On laisse le mélange au repos pendant une nuit à 7 C, on mélange avec une faible quantité d'eau et on évapore à sec On dissout le résidu dans 200 ml de chloroforme, on lave successivement avec une solution aqueuse d'hydrogènosulfate de potassium à 5 %, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et de l'eau, on sèche sur du sulfate de sodium anhydre, on évapore à sec et on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 120 g de gel de silice (Wako Gel C-200) et un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 8:1 en volume)

comme solvant de développement On réunit les frac-

tions 35 à 68 (ayant chacune un volume de 15 ml) et on évapore à sec pour obtenir 3,06 g (rendement 55 %) d'O-tosyl-3-tert-butoxycarbonylamino-1propanol sous

la forme d'une huile incolore.

c) Synthèse de la N-tert-butoxycarbonyl-N-(tert-

butoxycarbonyl -aminopropyl)-1,4-butanediamine Dans 15 ml de diméthylformamide, on dissout

800 mg ( 2,43 mmoles) de l'O-tosyl-3-tert-butoxycarbo-

nylamino-1-propanol obtenu en b) ci-dessus Après avoir

ajouté 510 mg ( 4,8 moles) de bromure de lithium (Li Br.

H 20), on agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heures Au mélange réactionnel contenant le dérivé bromé, on ajoute 540 mg ( 2,43 mmoles) de la mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butanediamine obtenue en (a) ci-dessus et 0,34 ml de triéthylamine On agite le mélange résultant à la température ambiante pendant

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48 heures Au mélange réactionnel, on ajoute 699 mg

( 2,9 mmoles) de S-tert-butoxycarbonyl-4,6-diméthyl-2-

mercaptopyridine On agite le mélange pendant 13 heu-

res à la température ambiante On évapore le mélange réactionnel à sec, on dissout dans 100 ml de chloro-

forme, on lave avec 50 ml d'eau, on sèche sur du sul-

fate de sodium anhydre, on évapore à sec et on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 200 g de

gel de silice (Wako Gel) C-200) et un mélange toluène-

acétate d'éthyle ( 4:1 en volume) comme solvant de dé-

veloppement On réunit les fractions 134 à 165 (ayant chacune un volume de 12 ml) et on évapore à sec pour

obtenir 608 mg (rendement 52 %) de N-benzyloxycarbonyl-

N'-tert-butoxycarbonyl-N'(tert-butoxycarbonylamino-

propyl)-1,4-butanediamine sous la forme d'un sirop incolore. Dans 5 ml de méthanol, on dissout 144 mg ( 0,3 mmole de la substance analogue à un sirop, obtenue ci-dessus A la solution,on ajoute 100 mg de carbonate de baryum à 5 % de palladium On agite le mélange sous un courant d'hydrogène à la température ambiante

pendant 5 heures On sépare le catalyseur par filtra-

tion, et on évapore le filtrat à sec pour obtenir

103 mg (rendement 100 %) de N-tert-butoxycarbonyl-N-

(tert-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butanediamine.

d) Synthèse du N-Z ( 3-aminopropyl)aminobuty 17-

2,2-dihydroxy-éthanamide Dans 2 ml d'acétate d'éthyle, on dissout

mg ( 0,29 mole) de la N-tert-butoxycarbonyl-N-

(tert-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butanediamine obtenue en (c) cidessus et 148 mg ( 1 mmole) d'acide 2,2-diéthoxyacétique Après addition de 135 mg (lmmole) de

1-hydroxybenzotriazole et de 206 mg ( 1 mnmole) de dicyclo-

hexylcarbodiimide, on agite le mélange pendant 15 heures à la température ambiante On recueille le précipité par filtration et on lave avec de l'acétate d'éthyle froid On réunit le filtrat et le solvant de lavage et on lave successivement avec de l'ammoniac

aqueux 1 M et de l'eau On sèche la couche dans l'a-

cétate d'éthyle sur du sulfate de sodium anhydre, on évapore à sec et on soumet à une chromatographie sur colonne en utilisant 20 g de gel de silice (Wako-Gel C-200) et un mélange toluène-acétate d'éthyle ( 1:2 en volume) comme solvant de développement On réunit les fractions 14 à 21 (ayant chacune un volume de 3

ml) et on évapore à sec pour obtenir 109 mg (rende-

ment 79 %) de N ( 3-tert-butoxycarbonylaminopropyl)-

4-tert-butoxycarbonylamino butyl J-2,2-diéthoxyéthana-

mide sous la forme d'un sirop incolore.

On dissout 44 mg ( 0,13 mmole) de l'amide ci-

dessus dans 1 ml de dioxane Après avoir ajouté 2,5

ml d'acide chlorhydrique 0,1 N, on agite le mélange pen-

dant 4 heures dans un bain d'huile à 100 C On ajuste le mélange réactionnel à p H 6 en neutralisant avec une solution d 'hydroxyde de sodium 0,2 N, on évapore à sec, et on extrait avec 1,5 ml de méthanol On fait passer l'extrait dans le méthanol sur une colonne ( 16,5 mm de diamètre intérieur) garnie avec 100 ml de Sephade D LH-20 et on développe avec du méthanol On réunit les fractions 22 à 25 (ayant chacune 2 ml de volume) qui sont positives au test à la ninhydrine et on évapore

à sec pour obtenir 13 mg (rendement 46 %) de dichlo-

rhydrate de N ( 3-aminopropyl) aminobutylv-2,2-di-

hydroxyéthanamide sous la forme d'un sirop incolore.

EXEMPLE DE REFERENICE

Synthèse du GHA-GS On agite un mélange de 51 mg ( 0,214 mmole) de chlorhydrate de (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptanamide,

112 mg ( 0,385 mmole) de dichlorhydrate de N-ô-( 3-amino-

propyl) aminobutyl/-2,2-dihydroxyéthanamide, 70 mg ( 0,52 mmole) d'acide glutarique et 0,07 ml ( 3,9 mmoles) d'eau pendant 43 heures à 60 C On ajoute au mélange réactionnel 20 ml de solution de chlorure de sodium 0,4 M, on ajuste à p H 6,1 avec de l'ammoniac aqueux à 10 % et on passe sur une colonne ( 12 mm de diamètre intérieur) garnie avec 20 ml de CM Sephade 4

C-25 équilibrée avec une solution de chlorure de so-

dium 0,4 M On soumet alors la colonne à une élution

par gradient en utilisant chaque fois 80 ml de solu-

tions de chlorure de sodium 0,4 M et 1,OM On réunit les fractions 41 à 50 (ayant chacune un volume de 2 ml), on évapore à sec et on extrait trois fois avec ml de méthanol On fait passer l'extrait dans le méthanol sur une colonne (diamètre intérieur de 20 mm)

garnie avec 100 ml de Sephadex( LH-20, et on dévelop-

pe avec du méthanol On réunit les fractions 30 à 42 (ayant chacune un volume de 1 ml) et on évapore à

sec pour obtenir 38,4 mg (rendement 35 %) d'une pou-

dre blanche de trichlorhydrate de N-L 4-( 3-aminopro-

pyl) aminobuty 17-2-/(S)-7-guanidino-3-hydroxyhepta-

namido 7-2-hydroxyéthanamide (GHA-GS).

Le trichlorhydrate de GHA-GS ainsi obtenu est une poudre hygroscopique n'ayant pas de point de fusion distinctement déterminable Il présente une rotation optique _ 22 de -1 ( 20 (C 2, eau) L'analyse élémentaire coincide avec les valeurs théoriques calculées à partir de la formule C 17 H 37 N 704 3 HC 1 (C 39,81 %, H 7,86 %, N 9,12 %, Cl 20,73 %) L'analyse par RMN effectuée dans l'eau lourde présente les signaux caractéristiques à = 1,8 2,3 (CH 2 x 5), 2,57 ( 6 "-CH 2), 2,95 ( 2-CH 2) , 3,5 3,8 (NCH 2 x ), 4,55 ( 3-CH) et 5,98 ( 2 '-CH). Le (S)-7-Guanidino3-hydroxyheptanamide utilisé dans l'exemple de référence a été préparé de la façon suivante: Synthèse du (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptanamide a) Synthèse de l'acide (S)-3,7-diaminoheptanoique Dans 150 ml d'eau, on dissout successivement g ( 82,15 mmoles) de çhlorydrate de L-lysine, 8,7 g ( 82,15 mmoles) de carbonate de sodium et 43,2 g ( 200 mmoles)

de N-éthoxycarbonylphtalimide On agite le mélange pen-

dant 20 heures à la température ambiante et on lave le mélange réactionnel avec 50 ml d'acétate d'éthyle On

ajuste la couche aqueuse à p H 3,0 avec de l'acide chlorhy-

drique 6 N et on extrait trois fois avec 100 ml de toluène.

On lave deux fois l'extrait avec 100 ml d'eau dont on a ajusté le p H à 2, 0, on sèche sur du sulfate de sodium anhydré et on évapore à sec sous pression réduite de manière à obtenir 27,95 g (rendement 84 %) d'une poudre blanche de di-N-phtaloyl-L-lysine (Point de décomposition

71-72 C, 2-2 = -32 (Cl, méthanol).

A 27,0 g ( 66,4 mmoles) de di-N-phtaloyl-L-

lysine, on ajoute 40 ml de chlorure d'oxalyle Au mélange cnauffé dans un bain d'huile à 90 C, on ajoute 40 ml de 1,2-diméthoxyéthane On chauffe alors le mélange au reflux pendant 2 heures On évapore le mélange réactionnel à sec, on redissout dans 20 ml de 1,2-diméthoxyéthane et on ajoute goutte à goutte à 500 ml d'une solution de diazométhane dans l'éther ( 330 mmoles) en refroidissant dans de la glace On agite le mélange pendant une heure On évapore le mélange réactionnel à sec, on dissout dans 250 ml de méthanol anhydre, on mélange avec une solution de 3,4 g

( 14,8 mmoles) de benzoate d'argent dans 50 ml de trié-

thylamine, et on agite pendant 15 heures à la températu-

re ambiante On recueille le pricipité par filtration, on

dissout dans 100 ml de chloroforme, on sépare les inso-

lubles par filtration et on évapore à sec de manière à

obtenir 15,3 g (rendement 53 %) de(S)-3,7-diphtaloylami-

noheptanoate de méthyle Point de décomposition 118-

119 C;

c 2 =( 22, hloroforme)

ZD 7 D= 30 (C 2, chloroforme).

A 15,0 g ( 34,5 mmoles) de (S)-3,7 diphtaloy-

laminoheptanoate de méthyle, on ajoute 100 ml d'une so-

lution alcoolique d'hydrate d'hydrazine ( 1 M) et 100 ml

d'éthanol à 95 % On chauffe le mélange au reflux pen-

dant une heure ( à une température de bain d'huile de

C) On évapore le mélange réactionnel à sec, on dis-

sout dans 250 'ml d'acide chlorhydrique à 5 %, on chauffe à 80 C pendant une heure, on ajuste le p H à 7,1 avec de l'ammoniac aqueux à 17 % et on passe sur une colonne ( 27 mm de diamètre intérieur) garnie avec 300 ml d'Amberlite O CG-50 (type NH 4 70 %) On lave la colonne avec 900 ml d'eau et 900 ml d'ammoniac aqueux O,2 M et on élue avec de l'ammoniac aqueux 0, 5 M On recueille les fractions donnant une réaction positive au test à la ninhydrine et on évapore à sec pour recueillir

3,15 g (rendement 57 %) d'acide (S)-3,7-diaminohep-

tanoique (C 7 H 16 N 2021/4 H 2 C 03);-1 D 29 (Cl eau). B) Synthèse du (S) -7-guanidino-3-hydroxyheptanamide

Dans 30 ml d'un mélange pyridine-eau-triéthy-

lamine ( 10:10:1 en volume), on dissout 3,1 g ( 19,3 mmoles) d'acide (S)3,7-diaminoheptanoique obtenu en (a) ci-dessus A la solution résultante, on ajoute

progressivement 4, 81 g ( 19,3 mmoles) de N-benzyloxy-

carbonyloxysuccinimide On agite le mélange à la tem-

pératuré ambiante pendant 5 heures On évapore le mélange

réactionnel à sec, on dissout dans 30 ml d'eau, on ajus-

te à p H 6,4 avec de l'acide chlorhydrique 6 N, puis on fait passer sur une colonne ( 16 mm de diamètre intérieur) garnie avec 100 ml d'Amberlite CG-50 (type NH 4 80 %) et on élue avec 300 ml d'eau On recueille l'effluent et on fait passer sur une colonne ( 16 mm de diamètre intérieur) garnie avec 100 ml de Dowex 50 W-X 4 (type H) On lave la colonne avec 300 ml d'eau et 300 ml d'ammoniac aqueux 0,2 M et on élue avec de l'ammoniac

aqueux 0,5 M (fractions de 10 ml) On réunit les frac-

* tions 16 à 33 et on évapore à sec pour obtenir 2,73 g

( rendement 48 %) d'une poudre blanche d'acide (S)-3-

amino-7-benzyloxycarbonylamino-heptanoique (C 15 H 22 N 2 04.H 20) Point de décomposition 143-147 C; lc( 2 D =+ 14 ( Cl, méthanol) On élue la colonne d'Amberlite CG-50 ci-dessus avec de l'ammoniac aqueux 0,5 M pour récupérer 746 mg (récupération 24 %) d'acide (S)-3,7 diaminoheptanoique. Dans 50 ml d'une solution aqueuse d'acide acétique à 33 %, on dissout 2,7 g ( 9,17 mmoles) d'acide (S)-3-amino-7-benzyloxycarbonylaminoheptanoique A la solution, en refroidissant dans de la glace, on ajoute lentement en une heure une solution de 1,9 g ( 27, 51 mmoles) de nitrite de sodium dans 10 ml d'eau On agite

le mélange pendant 1 heure et on laisse au repos pen-

dant 24 heures à 5 C On dilue le mélange réaction-

nel avec 50 ml d'eau et on extrait deux fois avec 50 ml d'acétate d'éthyle On sèche l'extrait sur du sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec pour obtenir 2,16 g d'une poudre brute On soumet la poudre brute à une chromatographie sur une colonne en utilisant une colonne (diamètre intérieur 28 mm) garnie avec 200 g

de gel de silice (Wako-gel C-200) et un mélange chloro-

forme-méthanol-ammoniac concentré ( 30:10:1 en volume) comme solvant de développement On réunit les fractions

51 à 60 ( ayant chacune un volume de 20 ml) et on éva-

pore à sec pour obtenir 460 mg (rendement 17 %) d'une

poudre blanche d'acide (S) ( 7-benzyloxycarbonylamino-3-

hydroxy-heptanoique Point de décomposition 115-117 C;

23 = + 3 (C 2, méthanol).

Dans 4 ml de 1,2-diméthoxyéthane, on dissout

450 mg ( 1,52 mmoles) d'acide (S)-7-benzyloxycarbonylamino-

3-hydroxyheptanoique A la solution, en refroidissant dans de la glace, on ajoute goutte à goutte 7 ml ( 4,56 mmoles) d'une solution de diazométhane dans l'éther On _ 5 agite le mélange pendant 30 minutes, puis on évapote

à sec pour obtenir 461 mg (rendement 98 %) de (S)-7-

benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoate de méthyle;

21 1

E 21 D= + 1 (C 5,méthanol).

D Dans 50 ml de méthanol anhydre, on dissout 450 mg ( 1,45 mmoles) de (S)7-benzyloxycarbonylamino-3- hydroxyheptanoate de méthyle On sature la solution refroidie à-10 C avec de l'ammoniac gazeux et on laisse

au repos dans un tube scellé pendant 3 jours à la tem-

pérature ambiante On évapore le mélange réactionnel à sec et on soumet à une chromatographie en utilisant une colonne( diamètre intérieur 20 mm) garnie avec 50 g

de gel de silice (Wako Gel 5 C-200) et un mélange chlo-

roforme-méthanol ( 100:1 en volume) comme solvant de développement On réunit les fractions 82 à 106 (chacune d'un volume de 10 ml) et on évapore à sec pour obtenir

371 mg (rendement 87 %) d'une poudre blanche de (S)-7-

benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanamide Point de

décomposition, 126-127 "C; c C 7 22 _ 30 (C 5,méthanol).

Dans un mélange de 10 ml de méthanol aqueux à 90 % et de 0,01 ml d'acide acétique, on dissout 350 mg

( 1,19 mmole) de S-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydro-

xyheptanamide Après avoir ajouté 50 mg de carbone-

palladium à 5 %, on agite le mélange sous un courant d'hydrogène pendant 3 heures à la température ambiante.

Après avoir séparé le catalyseur par filtration, on évapore le filtrat à sec, on redissout dans un faible volume d'eau et on fait passer sur une colonne ( 12 mm de diamètre intérieur) garnie avec 30 ml de Dowex W-X 4 (type H) On lave ensuite la colonne avec 90 ml d'eau et on élue avec de l'ammoniac aqueux 0,5 M On réunit les fractions 28 à 34 (ayant chacune un volume de 3 ml) et on évapore à sec pour obtenir 201 ma (rendement

22 _ 2

96 %) de (S)-7-amino-3-hydroxyheptanamide /22 = -2

(C 2, eau).

Dans 3 ml d'eau, on dissout 190 mg ( 1,08 mmole) de (S)-7-amino-3hydroxyheptanamide, puis 0,54 ml d'une

solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 2 N A la solu-

tion, en refroidissant dans de la glace, on ajoute goutte à goutte en 30 minutes 1 ml d'une solution de

méthanol contenant 129 mg ( 1,08 mmole) de 2-méthyl-1-

nitrosourée On agite ensuite le mélange pendant 5 heu-

res On ajuste le mélange réactionnel à p H 6,0 avec de l'acide chlorydrique 6 N, puis on évapore à sec et on purifie par chromatographie en utilisant une colonne (diamètre intérieur 15 mm) garnie avec 30 g de gel

de silice ( Wako Gel C-200) et un mélange de chloro-

forme-méthanol-ammoniac aqueux concentré ( 60:10:1 en volume) comme solvant de développement On réunit les fractions 67 à 90 ( 6 ml de volume chacune) et on évapore à sec pour obtenir 187 mg (rendement 70 %) d'une poudre

blanche de ( S)-7-nitroguanidino-3-hydroxyheptanamide.

Point de décomposition 148-149 C -a 22 = -20 (C 2, métha-

nol).

Dans un mélange de 15 ml d'eau, 15 ml de métha-

nol et 7,5 ml d'acide acétique, on dissout 170 mg ( 0,69

mmole) de (S)-7-nitroguanidino-3-hydroxyheptanamide-

Après avoir ajouté 50 mg de palladium-carbone à 5 %, on agite le mélange sous un courant d'hydrogène pendant une heure à la température ambiante Apres avoir séparé le catalyseur par filtration, on évapore le filtrat à sec pour obtenir 165 mg d'une poudre brute On dissout cette poudre dans 10 ml d'eau, on fait passer sur une colonne

( 12 mm de diamètre intérieur) garnie avec 20 ml de CM-

Cephadex C-25 (type Na) et on élue avec une solu-

tion de chlorure de sodium 0,5 M On réunit les fractions 18 à 25 ( ayant chacune un volume de 2 ml) et on évapore à sec On extrait la substance séchée avec 3 fois 10 ml de méthanol On réunit les extraits au méthanol, on fait passer sur une colonne ( 20 mm de diamètre intérieur) garnie avec 100 ml de Sephadex LH-20 et on développe avec du méthanol On réunit les fractions 28 à 46 (ayant

chacune un volume de 1 ml) et on évapore à sec pour ob-

tenir 149 mg (rendement 91 %) d'une poudre blanche de chlorhydrate de (S)7-guanidino-3-hydroxyheptanamide

(C 8 H 1 N HC 1; 2 _ D= 20 (C 2,eau).

1 ,

Claims (5)

REVENDICATIONS -

1 N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/-2,2-

dihydroxyethanamide de formule (I) HO

/CHCONH(CH 2)4 NH(CH 2)3 NH 2 (I)

HO

et ses sels d'addition avec des acides.

2 Composé selon la revendication 1, ca-

ractérisé en ce que le sel est le chlorhydrate.

3 Procédé de préparation de N-/4-( 3-

aminopropyl)-aminobuty 17-2,2-dihydroxyethanamide de formule (I) HO

XCHCONH(CH 2)4 NH(CH 2)3 NH 2 (I),

HO qui consiste à faire réagir un composé de formule (II)

H 2 N(CH 2) 4 N(CH 2) NHR (II)

R dans laquelle R représente un groupe amino-protecteur avec un dialkylacetal d'acide glyoxylique de formule (III) R'O

CHCOOH (III)

dans laquelle R' représente un groupe alkyle ayant 1 à 5 atomes de carbone, en présence d'un réactif activant ou avec un dérivé réactif du groupe carboxyle

de l'acétal, puis à éliminer le groupe amino-

protecteur et R'.

4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le réactif activant est un réactif formant un halogénure d'acyle, un réactif formant un azide d'acide, un réactif formant un ester réactif ou un réactif formant un anhydride d'acide. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la réaction est conduite dans un solvant organique à une température de

0 à 1000 C, pendant 5 à 30 heures.

6 Médicament ayant notamment une activité immunostimulante, caractérisé en ce qu'il contient à titre de principe actif un composé de

formule (I) selon la revendication 1.