CS241086B2 - New/amido/ n-substituted bleomycines production - Google Patents
New/amido/ n-substituted bleomycines production Download PDFInfo
- Publication number
- CS241086B2 CS241086B2 CS843468A CS346884A CS241086B2 CS 241086 B2 CS241086 B2 CS 241086B2 CS 843468 A CS843468 A CS 843468A CS 346884 A CS346884 A CS 346884A CS 241086 B2 CS241086 B2 CS 241086B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- propyl
- amino
- methyl
- amido
- substituted
- Prior art date
Links
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 30
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical class N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 claims abstract description 43
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 claims abstract description 26
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 9
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 claims abstract 2
- -1 dibenzyloxybenzyl group Chemical group 0.000 claims description 38
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 37
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 19
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 125000003854 p-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1Cl 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 7
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 7
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 4
- CYFQYXXVLSBMQJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(phenylmethoxy)cyclohexa-2,4-diene-1-carbaldehyde Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC1(C=O)CC=C(C=C1)OCC1=CC=CC=C1 CYFQYXXVLSBMQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AVPYQKSLYISFPO-UHFFFAOYSA-N 4-chlorobenzaldehyde Chemical compound ClC1=CC=C(C=O)C=C1 AVPYQKSLYISFPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- WZWIQYMTQZCSKI-UHFFFAOYSA-N 4-cyanobenzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=C(C#N)C=C1 WZWIQYMTQZCSKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000003395 phenylethylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- MWSNYBOKRSGWAN-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chlorophenyl)acetaldehyde Chemical compound ClC1=CC=C(CC=O)C=C1 MWSNYBOKRSGWAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RBNBFXRIYVDZBU-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(phenylmethoxy)benzaldehyde Chemical compound C=1C=CC=CC=1COC=1C(C=O)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 RBNBFXRIYVDZBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- ZKICXIITVXSTTO-UHFFFAOYSA-N 4-formyl-3-phenylbenzonitrile Chemical compound O=CC1=CC=C(C#N)C=C1C1=CC=CC=C1 ZKICXIITVXSTTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OCBFFGCSTGGPSQ-UHFFFAOYSA-N [CH2]CC Chemical compound [CH2]CC OCBFFGCSTGGPSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N acetaldehyde Chemical compound [14CH]([14CH3])=O IKHGUXGNUITLKF-XPULMUKRSA-N 0.000 claims 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims 1
- 125000000068 chlorophenyl group Chemical group 0.000 claims 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 abstract description 2
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 abstract 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical group [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 20
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 20
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 20
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 17
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 11
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 5
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 5
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 5
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 4
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 4
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- DTUQWGWMVIHBKE-UHFFFAOYSA-N phenylacetaldehyde Chemical group O=CCC1=CC=CC=C1 DTUQWGWMVIHBKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 description 3
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N O.OC=O.CC(O)=O Chemical compound O.OC=O.CC(O)=O FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000004699 copper complex Chemical class 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 2
- 229940100595 phenylacetaldehyde Drugs 0.000 description 2
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GWJOOVALXUJOPB-UHFFFAOYSA-N 1,4-dinitrocyclohexa-2,4-dien-1-ol Chemical compound [O-][N+](=O)C1(O)CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GWJOOVALXUJOPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 2,3,4,5,6-pentafluorophenol Chemical compound OC1=C(F)C(F)=C(F)C(F)=C1F XBNGYFFABRKICK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVTPWONEVZJCCS-UHFFFAOYSA-N 2-formylbenzonitrile Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C#N QVTPWONEVZJCCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBEJTRAJWCNHRS-UHFFFAOYSA-N 2-phenylmethoxybenzaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 PBEJTRAJWCNHRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 239000012448 Lithium borohydride Substances 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNPOFXIBHOVFFH-UHFFFAOYSA-N N-cyclohexyl-N'-(2-(4-morpholinyl)ethyl)carbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NCCN1CCOCC1 XNPOFXIBHOVFFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical group NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001147844 Streptomyces verticillus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 150000003935 benzaldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- NNIYFVYSVUWTOA-UHFFFAOYSA-N copper hydrochloride Chemical compound Cl.[Cu] NNIYFVYSVUWTOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- VELDYOPRLMJFIK-UHFFFAOYSA-N cyclopentanecarbaldehyde Chemical compound O=CC1CCCC1 VELDYOPRLMJFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- WHRIKZCFRVTHJH-UHFFFAOYSA-N ethylhydrazine Chemical compound CCNN WHRIKZCFRVTHJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- KYCGURZGBKFEQB-UHFFFAOYSA-N n',n'-dibutylpropane-1,3-diamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCN KYCGURZGBKFEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBMIETCUUSQZCG-UHFFFAOYSA-N n'-cyclohexylmethanediimine Chemical compound N=C=NC1CCCCC1 PBMIETCUUSQZCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- PYNUOAIJIQGACY-UHFFFAOYSA-N propylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCCN PYNUOAIJIQGACY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000004646 sulfenyl group Chemical group S(*)* 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;2-[2-[bis(carboxylatomethyl)amino]ethyl-(carboxylatomethyl)amino]acetate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CC([O-])=O UEUXEKPTXMALOB-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C21—METALLURGY OF IRON
- C21B—MANUFACTURE OF IRON OR STEEL
- C21B2100/00—Handling of exhaust gases produced during the manufacture of iron or steel
- C21B2100/40—Gas purification of exhaust gases to be recirculated or used in other metallurgical processes
- C21B2100/44—Removing particles, e.g. by scrubbing, dedusting
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P10/00—Technologies related to metal processing
- Y02P10/20—Recycling
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Abstract
Description
(94) Způsob výroby nových (aniido)N-substituovaných bleomycinů(94) A method for producing novel (anido) N-substituted bleomycins
Vynález se 'týká způsobu výroby nových (amido) N-suibstituovaných bleomycinů.The present invention relates to a process for the preparation of novel (amido) N -substituted bleomycins.
Zvláště se vynález týká nového způsobu výroby málo toxických nových (amido)N-substituovaných bleomycinů obecného vzorce IIn particular, the invention relates to a novel process for the preparation of low-toxic novel (amido) N-substituted bleomycins of formula I
l г l г
CH^CH 2
CO-MM-XCO-MM-X
(kde(where
BM znamená zbytek bleomycinového skeletu,BM means the remainder of the bleomycin skeleton,
X znamená alkylovou skupinu se 6 až 10 atomy uhlíku nebo alkylovou skuipinu se 2 až 6 atomy uhlíku substituovanou mono- nebo di(Ci-C5)alkylaminovou skupinou, fenylethylaminovou skupinou nebo N-methyl-N- [ 3- [ 2-/p-chlorf enyl/ ethyl jaminopropyl ] aminovou skupinou,X represents a C 6 -C 10 alkyl group or a C 2 -C 6 alkyl group substituted by a mono- or di (C 1 -C 5) alkylamino, phenylethylamino or N-methyl-N- [3- [2- / p- chlorophenyl / ethyl-aminopropyl] amino group,
СНъ CH.СНъ CH.
СО^Н-(СН^(СН^^-Рг СО Н- ^ (^ СН (СН ^^ - Р г
...·· (I)... ·· (I)
Ri znamená cykloalkylovou skupinu s až 13 atomy uhlíku, alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku mající fenylový substituent, který může být ..substituován atomy halogenu, nebo fenylovou skupinu, která může být substituována alespoň jedním substituentem vybraným ze skupiny zahrnující atomy halogenu, kyanoskuipinu a benzyloxyskupinu, aR 1 represents a cycloalkyl group having up to 13 carbon atoms, an alkyl group having 1 to 5 carbon atoms having a phenyl substituent which may be substituted by halogen atoms, or a phenyl group which may be substituted by at least one substituent selected from the group consisting of halogen atoms, cyanosuipine and benzyloxy, and
R2 znamená atom vodíku, benzytovou skupinu nebo úibenzyloxybenzylovou skupinu.R2 represents a hydrogen atom, a benzyl group or an benzyloxybenzyl group.
Bleomyciny j-sou karcinostatické látky, které byly objeveny v roce 1966' Umezawou, jedním z autorů předloženého vynálezu, a spolupracovníky (Umezawa a kol., Journal of Antibiotics, 19A, str. 200 /1966/). Jsou produkovány mikroorganismem Streptomyces verticillus (Aotinomycet) a jsou to bazické, ve vodě rozpustné glykopeptidy, které jsou schopny snadné komplexace s jedním atomem -dvojmocné mědi.Bleomycins are carcinostatic agents that were discovered in 1966 by Umezawa, one of the authors of the present invention, and collaborators (Umezawa et al., Journal of Antibiotics, 19A, p. 200 (1966)). They are produced by the microorganism Streptomyces verticillus (Aotinomycet) and are basic, water-soluble glycopeptides that are capable of easy complexation with a single-bivalent copper atom.
Obvyklou kulturou je produkováno 16 bleomycinů, které byly izolovány (například Umezawa a -spol., Journal of Antibiotics 19A, 210 /1966/).The usual culture produces 16 bleomycins that have been isolated (for example, Umezawa et al., Journal of Antibiotics 19A, 210 (1966)).
Z těchto bleomycinů bleamíciny Αι, A2, As, Bz a demethy--A2 ve formě, která neobsahuje atom mědi, jsou jako směs (odtud název bleomycinový komplex) široce používaný v oblasti .terapie rakoviny.Of these bleomycins, the λι, A2, As, Bz and demethy-A2 bleamicins in a form that does not contain a copper atom are widely used as a mixture (hence the name bleomycin complex) in the field of cancer therapy.
CONH,, 2 I -...CONH ,, 2 I -...
CH2 -NH - CH - '* - ^CH ^ONH2 CH 2 -NH-CH 2 -CH 2 ONH 2
Podrobněji — bleomyciny jsou -s úspěchem používány především při 'léčení squamosního buněčného karcinomu, dále palk rakoviny kůže, hlavy -a krku, rakoviny plic a maligního lymphonu.More particularly, bleomycins are successfully used primarily in the treatment of squamous cell carcinoma, as well as skin, head and neck cancer, lung cancer and malignant lymphone.
Různé bleomyciny jsou popsány také v USA patentu -č. 3 922 262 -a v obnoveném USA patentu č. 30 451.Various bleomycins are also described in U.S. Pat. No. 3,922,262 -a in U.S. Renewed U.S. Patent No. 30,451.
Bleomyciny, které -obsahují atom mědi, se obvykle, vyrábějí fermentací. Bleomyciny, které neobsahují atom· mědi, se vyrábějí odstraněním atomu mědi z bleomycinů tento atom obsahujících. Termín „bleomycin“, jak je zde používán, znamená -obě formy, jak s atomem mědi, tak i bez tohoto atomu, bez další specifikace. ,The copper atom-containing bleomycins are usually produced by fermentation. Bleomycins that do not contain a copper atom are produced by removing the copper atom from bleomycins containing that atom. The term "bleomycin" as used herein means both forms with and without a copper atom, without further specification. ,
Bleomyciny jsou sloučeniny obecného vzorce IIBleomycins are compounds of formula II
kde R znamená koncový aminový zbytek bleornyícinu, v případě formy obsahující měď je atom mědi vynechán.where R is a terminal amine residue of bleorninyl, in the case of a copper-containing form, the copper atom is omitted.
Tyto výše ‘uvedené bleomydny vykazují výborné účinky, nicméně však způsobují i vedlejší účinky, jako je .pulmonární toxicita, které závisí na způsobu jejich aplikace. Z tohoto důvodu je nyní jejich aplikace omezena. je proto žádoucí vývoj bleomycinů, které by měly menší vedlejší účinky.These above mentioned bleomydns show excellent effects, but they also cause side effects, such as pulmonary toxicity, which depend on the mode of application. For this reason, their application is now limited. development of bleomycins having less side effects is therefore desirable.
S -cílem připravit tyto' látky na základě rozsáhlé studie, autoři vynálezu již dříve vynalezli amido(N)-substituované bleomyciny uvedeného obecného vzorce I.In order to prepare these compounds on the basis of an extensive study, the inventors have previously invented the amido (N) -substituted bleomycins of formula (I).
-Výsledkem dalších studií autorů je zjištění, že amiďo(N)-substituov.ané bleomyciny obecného vzorce I lze vyrobit ve velkém množství reduktivní kondenzací amidoi(N)-substituovaných derivátů 3-(N-methyl-N-/3-amin.oipr opyl/iaminoj proipylaminobleomycinů obecného vzorce IIIFurther studies by the authors have shown that amine (N) -substituted bleomycins of formula I can be produced in large quantities by reductive condensation of the amido (N) -substituted 3- (N-methyl-N- / 3-amino) derivatives. polyl / iaminoj proipylaminobleomycins of formula III
CONH&CONH &
7CH Z CH^ CO-HH-X 7 CH 2 CH 2 CO-HH-X
kdewhere
BM a X mají výše uvedený význam, s aldehydem obecného vzorce IVBM and X are as defined above, with the aldehyde IV
R1CHO (IV) kdeR1CHO (IV) wherein
Ri má výše uvedený význam a popřípadě se získaná sloučenina převede na jinou sloučeninu obecného vzorce I, kde substituenty Ri a Rz mají jiný výše uvedený význam.R 1 is as defined above, and optionally the compound obtained is converted to another compound of formula I wherein R 1 and R 2 are as defined above.
Zbytek bleomyclnového skeletu označený BM v obecném vzorci I předloženého vynálezu je část -označená přerušovanými čárami v· obecném vzorci II bleomycinů a zahrnuje jak formu obsahující měď, tak formu prostou mědi.The remainder of the BM-marked bleomycin skeleton in formula I of the present invention is the dotted line portion of the bleomycin formula II and includes both the copper-containing and copper-free forms.
Aldehydy obecného vzorce IV použité v tomto vynálezu zahrnují cykl-oalkýlal-dehydy s -až 13 atomy uhlíku a zejména cyklopentylaldehyd, cyklooktylaldehyd, cyklododekanoylaldehyd, cykloundekanoylaldehyd atd.The aldehydes of formula (IV) used in this invention include C 1 -C 13 -alkylallaldehydes and in particular cyclopentylaldehyde, cyclooctyl aldehyde, cyclododecanoyl aldehyde, cycloundecanoyl aldehyde, etc.
Fenylsubstituované nasycené alifatické aldehydy, jejichž samotný fenylcVý ' substituent může nést substituenty, zahrnují nasycené alifatické aldehydy s 1 až 5 atomy uhlíku, mající fenylový substltuent, jako -je fenylacetal-dehyd, fenylethylaldehyd a halogensubstituované fenyla-cetal-dehydy ' (.in^j^iříklad chlorf enylace-taldehyd).Phenyl-substituted saturated aliphatic aldehydes whose phenyl substituent itself may carry substituents include saturated aliphatic aldehydes having 1 to 5 carbon atoms having a phenyl substituent such as phenylacetaldehyde, phenylethylaldehyde and halogen-substituted phenylacetaldehyde. (for example, chlorophenylation-taldehyde).
Benzaldehydy zahrnu jí například ' benzaldehyd, halogenbenzaldehydy (například p-chlorbenzaldehyd, m-br-ombenzalde hyd), kyanobenzaldehyd a benzyloxybenzal-dehy-dy (například rnpj-dibenzyloxybenzaldehyd).Benzaldehydes include, for example, benzaldehyde, halobenzaldehydes (e.g. p-chlorobenzaldehyde, m-br-ombenzaldehyde), cyanobenzaldehyde, and benzyloxybenzaldehyde (e.g. n-p-dibenzyloxybenzaldehyde).
Sloučeniny obecného vzorce III použité v předloženém vynálezu jako výchozí materiál, mohou být připraveny hydrolýzou ' '3-(N-.methyl-N-/3-aminoipropyl/amiinn )p ropylaminobleomycinů (dále označován jako bleomycln APMP) použitím bleomycín inaktivačního enzymu (dále uváděn jako inaktivační enzym; Umezawa a kPl. Jouma-l of Antibiotios, 27, 419, /1974/) za vzniku 3-(N-m-ethyl-N-/3-amLnopropyl/aimino)propylaminodeamidobleomycinu (dále označován jako deamidobleomycin APMP) obecného vzorceThe compounds of formula (III) used as starting material in the present invention can be prepared by hydrolyzing 3- (N-methyl-N- (3-amino-propyl) amino) β ropine-aminobleomycins (hereinafter referred to as bleomycin APMP) using bleomycin inactivation enzyme (hereinafter: referred to as inactivating enzyme; Umezawa et al., Jouma-1 of Antibiotios, 27, 419, (1974)) to give 3- (Nm-ethyl-N- (3-aminopropyl) aimino) propylaminodeamidobleomycin (hereinafter referred to as deamidobleomycin APMP) of general formulas
BMBM
CH<CH <
l а рак kondenzací .deamidobleomycinu APMP s aminem obecného vzorce Vby condensation of deamidobleomycin APMP with an amine of formula V
NH2—X (V) kdeNH2-X (V) wherein
X má význam uvedený pod obecným vzorcem I.X is as defined in Formula I.
Ve významu X mohou být uvedeny například alkylové skupiny se 6 až 10 atomy uhlíku a alkylové skupiny se 2 až .6 atomy uhlíku línající primární amlnosubstituent.X may be, for example, C 6 -C 10 alkyl groups and C 2 -C 6 alkyl groups fused to the primary amino substituent.
Zvláště jsou výhodné n-oktylová, fenylethylaminopropylová, 3-[N-methyl-N- [ 3- (2-/p-chlorf enyl/ethyl jaminopropyljamlnojpropylová a di-n-butylaminopropylová skupina.Particularly preferred are n-octyl, phenylethylaminopropyl, 3- [N-methyl-N- [3- (2- / p-chlorophenyl) ethyl] aminopropyl] aminopropyl, and di-n-butylaminopropyl.
Sloučeniny obecného vzorce III mohou být připraveny například následujícím způsobem.The compounds of formula III can be prepared, for example, as follows.
Hovězí játra se zhomogenizují s roztokem fosfátového pufru. Vzniklý homogenizát se odstředí při 8 000 ot/min. Supernatant se dialyzuje proti roztoku fosfátového pufru za účelem získání surového roztoku enzymu.The bovine liver is homogenized with a phosphate buffer solution. The resulting homogenate is centrifuged at 8,000 rpm. The supernatant is dialyzed against a phosphate buffer solution to obtain a crude enzyme solution.
К surovému roztoku enzymu se přidá mědi prostá fonma bleomycinu APMP rozpuštěná v roztoku fosfátového pufru. Tato směs se nechá reagovat při teplotě 35 °C. Reakční směs se zbaví proteinů vhodnou metodou (například se přidává kyselina trichloroctová) dále označována jalko TCA (v množství asi 5 %, aby se vysrážely proteiny. Sraženina se odstraní odstředěním, promyje se pak 3 X 5% TCA, supernatan a promývací tekutiny se spojí).To the crude enzyme solution, copper-free bleomycin APMP dissolved in phosphate buffer solution is added. The mixture was allowed to react at 35 ° C. The reaction mixture is freed of proteins by a suitable method (for example trichloroacetic acid is added), hereinafter referred to as TCA (about 5% to precipitate the proteins. The precipitate is removed by centrifugation, washed with 3 X 5% TCA, supernatant and washings combined). ).
Po neutralizaci se přidá octan měďnatý к reakční směsi prosté proteinů tak, že octan iměďnatý je v přebytku vzhledem к bleomycinu, aby požadovaný produkt byl převeden do formy chelátu s mědí.After neutralization, copper acetate is added to the protein-free reaction mixture such that copper acetate is in excess of that of bleomycin to convert the desired product to the copper chelate form.
Roztok měďnatého chelátu se pak odsolí tak, že se vlije na kolonu plněnou adsorpční pryskyřicí DiaionR HP-40 s destilovanou vodou, kde se požadovaný produkt adsorbuje.The cuprous chelate solution is then desalted by pouring onto a column packed with Diaion R HP-40 adsorbed resin with distilled water to adsorb the desired product.
Po vymytí solí destilovanou vodou se provede eluce směsí 1/50N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a methanolu (1:4 obij./obj.).After washing the salts with distilled water, elution with 1 / 50N aqueous hydrochloric acid / methanol (1: 4 v / v) was performed.
Frakce mající absorpční maximum při vlnové délce asi 290 nm se shromáždí. Po neutralizaci anexem DowexR 44 (OH typ, vyrobeno Dow Chemical Go.) se spojené frakce zkoncentrují za sníženého tlaku a lyofilizují.Fractions having an absorption maximum at a wavelength of about 290 nm are collected. After neutralization with an anion exchange resin Dowex R 44 (OH type, manufactured by Dow Chemical Go.), The combined fractions were concentrated under reduced pressure and lyophilized.
Získaný prášek se rozpustí v destilované vodě.' Vzniklý roztok se vlije za účelem adsonpce na kolonu plněnou CM-SephadexemR C-25 (Na+ typ, vyrobeného Pharmacia Fine Chemicals Co.) předtím uvedeného do rovnovážného stavu 1/20 M roztokem pufru kyseliny octové s octanem sodným o pH 4,5.The powder obtained is dissolved in distilled water. The resulting solution is poured to adhere to a column packed with CM-Sephadex R C-25 (Na + type, manufactured by Pharmacia Fine Chemicals Co.) previously equilibrated with 1/20 M acetic acid buffer with sodium acetate pH 4.5 .
Eluce se provede metodou lineárního koncentračního gradientu, při .které se kontinuálně přidává chlorid sodný к výše uvedenému roztoku pufru к postupnému zvýšení koncentrace sodných iontů na 1,0 M. Modra8 vě fialové frakce požadovaného produktu se shromáždí.Elution was carried out by a linear concentration gradient method in which sodium chloride was continuously added to the above buffer solution to gradually increase the sodium ion concentration to 1.0 M. The blue purple fractions of the desired product were collected.
Spojené frakce se zbaví soli stejným odsolením pomocí DlaionuR HP-40 použitým dříve a pak se lyofilizují, čímž se získá modrý amorfní prášek formy deamidobleomyclnu APMP obsahující měď.The pooled fractions were dehydrated by the same desalting with Dlaion R HP-40 used previously and then lyophilized to give a blue amorphous powder of the copper-containing deamidobleomycline APMP form.
Takto získaný deamidobleomycin APMP se pak kondenzuje s aiminem obecného vzorce V použitím známých metod pro tvorbu amidového řetězce kyselin, jako je metoda popsaná v USA patentu č. 4195 018 a pak, je-li to nutné, odstraní se měď ik získání reakční směsi obsahující sloučeninu obecného vzorce III.The deamidobleomycin APMP thus obtained is then condensed with an amine of formula V using known methods for the formation of an acid amide chain such as that described in U.S. Patent No. 4,195,018 and then, if necessary, copper is removed to obtain a reaction mixture containing the compound. of formula III.
Ve výše uvedené kondenzační reakci se užívá kondenzačních činidel jako je cyklohexylkarbodiimid, l-ethyl-3-(3-dimethylaiminopropyl Jkarbodiimid, l-cyklohexyl-3-( 2-morfolinoethyl)karbodiimid, diisopropylkarbodlimld, dlfenylfosforazidát (DPPA), diethylfosforokyanidát (DEPC), 6-ch'lor-l-p-chlorbenzensulfonyloxybenztriazal (CCBT) a podobně.In the above condensation reaction, condensation agents such as cyclohexylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethylaiminopropyl) carbodiimide, 1-cyclohexyl-3- (2-morpholinoethyl) carbodiimide, diisopropylcarbodimide, diphenylphosphorazidate (DPPA), diethylphosphorocyanide (DPPA), are used. 6-chloro-1β-chlorobenzenesulfonyloxybenztriazal (CCBT) and the like.
Spolu s výše uvedenými kondenzačními činidly mohou být použity přídavné kondenzační látky jako je p-nitrofenol, o,p-dinitrofenol, pentachlorfenol, 2,4,5-triohlorfenol, pentafluorfenol, N-hydroxysukcinimid, N-.hydroxy-5-norboirnen-2,3-dikarboxyimid, 1-hydroxybenztriazol a podobně.Additional condensation agents such as p-nitrophenol, o, p-dinitrophenol, pentachlorophenol, 2,4,5-triohlorophenol, pentafluorophenol, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxy-5-norboirnene-2 may be used together with the above condensing agents. , 3-dicarboxyimide, 1-hydroxybenztriazole and the like.
Kondenzace se provádí v rozpouštědle jako je voda, dimethylformaldehyd, acetonitri'1 nebo jejich směs. Pracuje se při reakční teplotě od —20 do 50 °C, výhodně —10 až 30 °C. Doba reakce není omezena, postačuje doba 1 až 70 hodin.The condensation is carried out in a solvent such as water, dimethylformaldehyde, acetonitrile or a mixture thereof. The reaction is carried out at a reaction temperature of from -20 to 50 ° C, preferably from -10 to 30 ° C. The reaction time is not limited, a period of from 1 to 70 hours is sufficient.
Sloučenina obecného vzorce III se izoluje z reakční směsi následujícím způsobem. К výše získané reakční směsi se přidá organické rozpouštědlo, jako je aceton, ether a podobně к vysrážení požadovaného produktu. Pak se sraženina rozpustí v destilované vodě. pH roztoku se upraví na hodnotu 6 a zbaví se solí vlitím na kolonu naplněnou adsorptivní pryskyřicí, jako je AmberliteR XAD-2 (výrobce Rohm and Haas Co.) s destilovanou vodou, kde se požadovaný produkt adsorbuje.The compound of formula III is isolated from the reaction mixture as follows. To the reaction mixture obtained above, an organic solvent such as acetone, ether and the like is added to precipitate the desired product. The precipitate is then dissolved in distilled water. The pH of the solution is adjusted to 6 and desalted by pouring onto a column packed with an adsorptive resin such as Amberlite R XAD-2 (manufactured by Rohm and Haas Co.) with distilled water to adsorb the desired product.
Po vymytí solí destilovanou vodou se provede eluce okyseleným vodným methanolem, například směsí 1/50 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a methanolu (1:4 obj./obj.J. Frakce s absorpčním maximem okolo 290 nm se shromáždí. Po neutralizaci anexem, DowexR 44 (OH typ, vyrobený Dow Chemical Co.) se spojené frakce zahustí a lyofilizují. Získá se surový prášek sloučeniny obecného vzorce III.After washing the salts with distilled water, elution is carried out with acidified aqueous methanol, for example a 1/50 N aqueous solution of hydrochloric acid and methanol (1: 4 v / v). Fractions with an absorption maximum of about 290 nm are collected. The R 44 (OH type, manufactured by Dow Chemical Co.) was concentrated and lyophilized to give a crude powder of the compound of formula III.
ч Dále je popsán postup, při kterém je vypuštěn stupeň odsolení. V tomto případě se uvedená sraženina rozpustí v destilovarié vodě a dále zpracovává v následujícím stupni. ч The procedure for removing the desalination step is described below. In this case, the precipitate is dissolved in distilled water and further processed in the next step.
Výše získaný prášek se rozpustí v destilované vodě. Roztok se vlije na kolonu naplněnou CM-SephadexemR C-25 (Na+ typ, výrobce Pharmacia Fine Chernicals Co.), který byl dříve uveden do rovnovážného stavu roztokem 1/20 M kyseliny octové — octanu -sodného (pufr) o pH 4,5 za účelem adsonpce.The powder obtained above is dissolved in distilled water. The solution is poured onto a column packed with CM-Sephadex R C-25 (Na + type, manufactured by Pharmacia Fine Chernicals Co.), which was previously equilibrated with 1/20 M acetic acid-sodium acetate buffer (pH 4). , 5 for adsonption.
Eluce se provede metodou ‘lineárního koncentračního gradientu, .při které se konstantně přidává k výše uvedenému roztoku pufru chlorid sodný až k postupnému zvýšení koncentrace sodných iontů na 1,0 . M.The elution is carried out by the ‘linear concentration gradient method, constantly adding sodium chloride to the above buffer solution to gradually increase the sodium ion concentration to 1.0. M.
Protože nezreagované látky a vedlejší produkty se eluují dříve, lze je separovat a odstranit použitím ultrafialového absorpčního monitoru. Jestliže frakce požadovaného produktu obsahují nečistoty, opakuje se výše uvedená chromatografie, aby se úplně odstranily nečistoty.Since unreacted substances and by-products elute earlier, they can be separated and removed using an ultraviolet absorption monitor. If the fractions of the desired product contain impurities, the above chromatography is repeated to completely remove impurities.
Výše uvedená chroimatc-grafie může být nahrazena chromatografií za použití adsorptivní pryskyřice Jako je Amberlite* XAD-'2. Při této- chnomaitografii se vodný roztok surového produktu vlije na kolonu plněnou pryskyřicí, například s 1% vodným roztokem octanu amonného, za účelem adsorpce požadovaného- -produktu.The above chromatography can be replaced by chromatography using an adsorptive resin such as Amberlite® XAD-2. In this chromatography, an aqueous solution of the crude product is poured onto a resin-filled column, for example with a 1% aqueous ammonium acetate solution, to adsorb the desired product.
Eluce se provede pomocí metody lineárního koncentračního gradientu, při které se k výše uvedenému roztoku pufru přidává methanol k postupnému -zvýšení koncentrace metbianOlu. Protože se stává, že .nezreagované látky se eluují dříve a vedlejší produkty později, lze je odstranit použitím ultrafialového absorpčního monitoru.Elution is performed using a linear concentration gradient method in which methanol is added to the above buffer solution to gradually increase the concentration of metbianol. Since unreacted substances tend to elute earlier and by-products later, they can be removed using an ultraviolet absorption monitor.
Jestliže se u frakcí požadovaného produktu zjistí, že obsahují nečistoty, opakuje se uvedená chromatografie za účelem úplného odstranění nečistot.If the fractions of the desired product are found to contain impurities, repeat the chromatography to remove impurities completely.
Výše uvedené dva .přečišťovací postupy lze použít samostatně nebo ve vzájemné kombinaci.The above two purification procedures can be used alone or in combination.
Takto získané frakce požadovaného produktu se .zbaví soli odsolením za použití adsorptivní pryskyřice, jako je Amberlite* XAD-2, jak je popsáno výše a pak se lyoíilizují. Zí-ská -se forma sloučeniny obecného vzorce III obsahující měď jako modrý amorfní prášek.The thus-obtained fractions of the desired product are desalted using an adsorptive resin such as Amberlite® XAD-2 as described above and then lyophilized. A form of a compound of formula III containing copper as a blue amorphous powder is obtained.
Tuto formu obsahující měď lze převést na formu prostou mědi známým způsobem, jako je způsob .používající EDTA -popsaný v USA patentu č. 3 929 993.This copper-containing form can be converted to a copper-free form by a known method, such as the method using EDTA described in U.S. Patent No. 3,929,993.
Příklad konverze na formu prostou mědi je -popsán níže. Forma obsahující iměď se rozpustí v -destilované vodě. Tento roztok se vlije za účelem adsorpce -na kolonu naplněnou Amberli-temR XAD-2 s destilovanou vodou.An example of conversion to a copper-free form is described below. The copper-containing form is dissolved in distilled water. This solution is poured for adsorption onto a column packed with Amberlite R XAD-2 with distilled water.
. Pryskyřice se promyje vodným roztokem obsahujícím chlorid sodný a -5·% dvoj,sodnou sůl kyseliny ethylendiamintetraoctové (dále označována jako EDTA X 2 Na), proto, aby imě-ďnadý· -ion byl navázán pomocí EDTA a forma prostá mědi zůstala na měniči.. The resin is washed with an aqueous solution containing sodium chloride and -5% dibasic sodium ethylenediaminetetraacetic acid (hereinafter referred to as EDTA X 2 Na), so that the copper ion is bound by EDTA and the copper-free form remains on the transducer.
Pryskyřice - se promyje -chloridem sodným, aby se odstranila EDTA X 2 Na a dále se promyje -destilovanou vodou. Následující eluce se provede okyseleným vodným imethanolem, například směsí 1/50 N vodného roztoku -kyseliny chlorovodíkové a .methanolu (1:4 -obj./obj.) a shromáždí se frakce vykazující absorpční maximum při vlnové délce asi 290 nm. pH spojených frakcí se upraví na hodnotu 6 použitím Dowcxu?· 44 (OH typ, výrobce Dow Chemi-cal Co.) a -pak se zahustí za sníženého tlaku - a lyoflli.zuj.í - za vzniku bílého amorfního prášku hydrochloridu mědi prosté formy sloučeniny obecného vzorceThe resin was washed with sodium chloride to remove EDTA X 2 Na and further washed with distilled water. Subsequent elution is carried out with acidified aqueous imethanol, for example a 1/50 N aqueous solution of hydrochloric acid and methanol (1: 4 v / v), and the fractions having an absorption maximum at a wavelength of about 290 nm are collected. The pH of the pooled fractions was adjusted to pH 6 using Dowcx® 44 (OH type, manufactured by Dow Chemical Co.) and then concentrated under reduced pressure - and lyophilized to give a white, amorphous, free-form copper hydrochloride powder. compounds of formula
III.III.
Jestliže se ve výše uvedeném postupu místo vodného .rozteku kyseliny chlorovodíkové použije vodný roztok kyseliny sírové, získá se -sulfát. Z toho je zřejmé, že vhodným výběrem kyseliny ve výše uvedené eluci, .lze získat -sůl s požadovanou -kyselinou.If an aqueous solution of sulfuric acid is used in the above process instead of an aqueous hydrochloric acid solution, the sulfate is obtained. Thus, it is apparent that by selecting the appropriate acid in the above elution, a salt with the desired acid can be obtained.
Podle předloženého vynálezu se dále reduktivně kondenzuje takto získaná sloučenina obecného vzorce III s aldehydem obecného vzorce IV.According to the present invention, the compound of formula III thus obtained is reductively condensed with an aldehyde of formula IV.
Jako reduktivní činidla použitá v této kondenzaci lze uvést borohydrosloučeniny (například kyanoborohydrld sodný, borohydrid sodný, borohydrid lithný, borohydrid -draselný, bisftrifenylfosfinjtetrahydroboratoměď atd.).Reductive reagents used in this condensation include borohydride compounds (e.g., sodium cyanoborohydride, sodium borohydride, lithium borohydride, potassium borohydride, bisphosphiphenylphosphine tetrahydrofor copper etc.).
Katalytickou redukci lze provést za použití katalyzátoru, jako je paládium na uhlí. Použitím dvou nebo méně mol, výhodně 1 ažCatalytic reduction can be performed using a catalyst such as palladium on carbon. By using two or less moles, preferably 1 to 2
l. 5 mol. aldehydu obecného vzorce IV na 1 mol sloučeniny obecného vzorce III, vzniká sloučenina obecného vzorce I, kde R2 znamená hlavně vodík. Použitím 3 nebo více mol vzniká sloučenina obecného vzorce I, kde Rz znamená skupinu obecného- vzorce —-CHz—Ri. Požadovaný přídavek aldehydu pro přípravu -sloučenin obecného vz-orce I, kde R2 je vodík, je -1,2 mol a 5 až 15 mol, výhodně asi 10 mol, pro získání sloučeniny obecného vzorce I, kde Ri znamená skupinu obecného vzorce —CHz—Ri. V případě, že aldehyd -obecného vzorce IV, - je sloučeninou obtížně rozpustnou v methanolu, jako je1 mol. % of the aldehyde of the formula IV per 1 mol of the compound of the formula III yields a compound of the formula I wherein R2 is mainly hydrogen. The use of 3 or more moles gives a compound of formula I wherein R 2 is a group of the formula -CH 2 -R 1. The desired addition of an aldehyde for the preparation of compounds of formula I wherein R 2 is hydrogen is -1.2 mol and 5 to 15 mol, preferably about 10 mol, to obtain a compound of formula I wherein R 1 is -CH 2 —Ri. When the aldehyde of formula (IV) is a compound difficult to dissolve in methanol such as
m. p-dibenzylo-xybenzaldehyd, může být jeho množství sníženo s tím, že bude prodloužena reakční doba. .m. p-dibenzyloxybenzaldehyde, the amount thereof may be reduced, with a prolonged reaction time. .
Výše uvedené kondenzační reakce nemají nijak omezeno použití rozpouštědel, pokud se tato neúčastní reakce. Jako- rozpouštědla se užívají polární rozpouštědla jako voda, methanol, ethanol, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, tetrahydrofuran a acetonitril a jejich -směsi. Reakční teplota je —5 až 80 °C, běžně 0 až 50 °C. Zvláště je žádoucí, aby pro získání sloučeniny, kde R? znamená vodík, byla užita teplota 0 -až 35 °C a teplota 35 až 50 PC pro získání sloučeniny, kde R2 znamená skupinu obecného vzorce —CH2—Ri při použití -aldehydu velké stérické zábrany nebo nízké rozpustnosti. Vhodná reakční doba je 3 až 70 hodin. Při použití aldehydu velké -sférické zábrany nebo nízké rozpustnosti je vhodnější reakční doba (například 150 hodin).The above condensation reactions do not limit the use of solvents, unless they are involved in the reaction. Polar solvents such as water, methanol, ethanol, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, tetrahydrofuran and acetonitrile and mixtures thereof are used as solvents. The reaction temperature is -5 to 80 ° C, typically 0 to 50 ° C. In particular, it is desirable to obtain a compound wherein R? is hydrogen, a temperature of 0-35 ° C and a temperature of 35-50 ° C was used to obtain a compound wherein R 2 is a group of formula -CH 2 -R 1 using an aldehyde of high steric hindrance or low solubility. A suitable reaction time is 3 to 70 hours. When an aldehyde of large spherical hindrance or low solubility is used, a reaction time (e.g. 150 hours) is preferable.
Z -takto získané reakční směsi se izoluje sloučenina -obecného vzorce I následujícím způsobem. V případě použití borohydridové sloučeniny se -upraví hodnota pH reakční směsi na 1 kyselinou chlorovodíkovou a míchá při teplotě místnosti po dobu 5 až 10 minut tak, -aby se rozložilo reduktivní činidlo přidané v přebytku. Potom -se reakční směs zneutralizuje, zbaví -methanolu destilací za sníženého tlaku, pomocí extrakce etherem nebo butanolem -se .zbaví přebytku aldehydu a ketonu a odsolí se následujícím způsobem. Reakční směs se vlije na kolonu naplněnou adsorptivní pryskyřicí jako je AmberliteR XAD-2 (výrobce Rojhm and Haas Co.) s destilovanou vodou za účelem adso.rpce požadovaného produktu. Po vymytí soli destilovanou vodou se provede eluce kyselým vodným methanolem, například směsí 1/50 N vodného -roztoku ky-seliny -chlorovodíkové a methanolu (1:4 obj./obj.), shromáždí se frakce obsahující modrý bleomycinový derivát. Spojené frakce · se, je-li to nutné, neutralizují -anexem DowexR 44 (OH typ, výrobce Dow Chemical Co.), zahustí se za sníženého tlaku a lyofillzují za vzniku modrého prášku požadovaného surového produktu.The compound of formula I is isolated from the reaction mixture obtained as follows. If a borohydride compound is used, the pH of the reaction mixture is adjusted to 1 with hydrochloric acid and stirred at room temperature for 5 to 10 minutes to decompose the reductive agent added in excess. Thereafter, the reaction mixture is neutralized, freed from methanol by distillation under reduced pressure, by extraction with ether or butanol, and free of excess aldehyde and ketone, and desalted as follows. The reaction mixture is poured onto a column packed with an adsorptive resin such as Amberlite.RTM. XAD-2 (manufactured by Rojhm and Haas Co.) with distilled water to adsorb the desired product. After washing the salt with distilled water, eluting with acidic aqueous methanol, for example with a 1/50 N aqueous solution of a solution of hydrochloric acid and methanol (1: 4 v / v), collects the fractions containing the blue bleomycin derivative. The pooled fractions are neutralized with Dowex.RTM. 44 (OH type, manufactured by Dow Chemical Co.) if necessary, concentrated under reduced pressure and lyophilized to give a blue powder of the desired crude product.
Další přečištění se provede následujícím způsobem.Further purification is performed as follows.
Výše uvedený prášek se rozpustí v destilované vodě. Tento roztok se vlije na kolonu naplněnou CM-SephadexemR C-25 (Na* typ, výrobce Pharmacia Fine Chemicals Co.) předtím uvedeného do rovnovážného - stavu -.1/20 M roztokem pufru kyselina ootová-octan sodný o pH 4,5 za účelem adsorpce. E - luče se provede metodou lineárního koncentračního gradientu, při které se postupně přidává chlorid sodný k výše uvedenému .roztoku pufru, až -k postupnému zvýšení koncentrace - Na + iontů na 1,0 - M. Jestliže u frakcí požadovaného produktu se -zjistí nečistoty, lze -doplnit výše uvedenou chromatografii chromatografií za použití adsorptivní pryskyřice jako je AmberliteR XAD-2. Spojené -. frakce -se vlijí na kolonu naplněnou pryskyřicí, například se 4 % vodným roztokem octanu amoného, za účelem adsorpce - požadovaného produktu. Eluce se provede metodou lineárního koncentračního gradientu, při které se průběžně přidává k výše -uvedenému roztoku pufru methanol k postupnému zvýšení koncentrace methanolu. V tomto případě se nezreagované látky eluují nejprve, sloučenina, ve které R2 je vodík. se eluuje jako další a sloučenina, kde Ri a R2 mají stejný význam, se eluuje jako poslední. Oddělení těchto frakcí se spolehlivě provede použitím ultrafialového -absorpčního monitoru. Jestliže jsou ve frakcích požadovaného produktu zjištěny .nečistoty, opakuje se výše uvedená chromatografie za účelem úplného odstranění nečistot.The above powder was dissolved in distilled water. This solution is poured onto a column packed with CM-Sephadex.RTM. C-25 (Na * type, manufactured by Pharmacia Fine Chemicals Co.) previously equilibrated with a -1 / 20M ootic acid-sodium acetate buffer solution of pH 4.5 to adsorption. The elution is carried out by a linear concentration gradient method in which sodium chloride is gradually added to the above buffer solution until the concentration of - Na + ions is gradually increased to 1.0 - M. If impurities are detected in the fractions of the desired product, may be supplemented by the above chromatography using an adsorptive resin such as Amberlite.RTM. XAD-2. United -. the fractions are poured onto a resin-filled column, for example with a 4% aqueous ammonium acetate solution, to adsorb the desired product. Elution is carried out by a linear concentration gradient method in which methanol is continuously added to the above buffer solution to gradually increase the methanol concentration. In this case, the unreacted substances elute first, the compound in which R 2 is hydrogen. is eluted next and the compound where R 1 and R 2 are the same is eluted last. Separation of these fractions is reliably accomplished using an ultraviolet absorption monitor. If impurities are detected in the fractions of the desired product, the above chromatography is repeated to completely remove impurities.
V -tomto stupni lze kolonu CM SephadexuR C-25 nahradit kolonou CM SepharoseR CL-'6B (výrobce Pharmacia Fine Chemicals Co.) nebo ToyopearlR ·650 (výrobce TOYO SODA MFG CO.), nebo podobně naplněnou kolonou a promytou methanolem. V tomto případě lze vynechat odsolení po reakci. Reakční směs se přímo vlije' na kolonu za účelem adsorpce požadovaného produktu. Po vymytí činidel atd. methanolem se eluce provede vodným roztokem methanolu obsahujícím 0,1 M chlorid sodný. Spojené frakce se chromatografují na AmberlltuR XAD-2.In this step, the CM Sephadex.RTM. C-25 column can be replaced by a CM Sepharose.RTM. CL-6B column (manufactured by Pharmacia Fine Chemicals Co.) or Toyopearl.RTM. 650 (manufactured by TOYO SODA MFG CO.) Or similarly packed column and washed with methanol. In this case, desalination after the reaction can be omitted. The reaction mixture is poured directly onto the column to adsorb the desired product. After washing the reagents, etc. with methanol, elution is carried out with an aqueous methanol solution containing 0.1 M sodium chloride. The combined fractions are chromatographed on Amberll® XAD-2.
Spojené frakce požadovaného produktu připravené 'tímto způsobem se odsolí pomocí D-iaionuR HP-40 - použitého výše -a pak se lyofillzují -za -získání formy (amido)N-substituovaného bleomycinu obecného vzorce I obsahujícího měď ve formě modrého amorfního prášku.The combined product fractions prepared in this way are desalted using the HP-40 D-ion used above and then lyophilized to obtain the (amido) form of the N-substituted bleomycin of formula I containing copper as a blue amorphous powder.
Formu obsahující měď (amido)N-substituovaného bleomycinu takto získanou lze zbavit mědi výše popsaným způsobem za vzniku požadované -soli mědi prosté formy ve formě bílého prášku.The copper (amido) form of the N-substituted bleomycin thus obtained can be deprived of copper as described above to give the desired copper-free salt in the form of a white powder.
Typické příklady -sloučenin podle vynálezu jsou uvedeny v tabulce I a .jejich fyzikálně-chemtcké vlastnosti v tabulce 2.Typical examples of the compounds of the invention are shown in Table I and their physico-chemical properties in Table 2.
Tabulka 1Table 1
poznámka:note:
*l> SWikagel -60F SilanizedR (Merck Co.); methanol- 6% octan amonný (60:40 ob]./ /obj.) *2) Avicel SFR (FMC Co.); kyselina mravenčí —kyselina octová—vod-a (27 : 75 : 900 obj./ /obj.), 800 V, 15 minut* L> R Silanized SWikagel -60F (Merck Co.); methanol-6% ammonium acetate (60:40 v / v) * 2) Avicel SF R (FMC Co.); formic acid - acetic acid - water (27: 75: 900 v / v), 800 V, 15 minutes
Biologické vlastnosti, které byly testovány .na typických sloučeninách podle tohoto vynálezu, jsou uvedeny níže.The biological properties that have been tested on typical compounds of this invention are listed below.
1. Antimikrobiální účinnosti na Mycobacterium Smegmatis ATCC 607 a Bacillus subtilis.Antimicrobial activities on Mycobacterium Smegmatis ATCC 607 and Bacillus subtilis.
Antimikrobiální účinnosti byly testovány na uvedených mikroorganismech razítkovou technikou na agarových plotnách. Účinnost byla stanovována vzhledem k účinnosti standardního vzorku bleomycinu Az [ve formě, která neobsahuje měď), jehož účinnost je 10.00 pgging.Antimicrobial activities were tested on the above microorganisms by stamping on agar plates. Efficacy was determined by reference to the efficacy of a standard bleomycin Az sample (in a copper-free form) having an efficacy of 10.00 pgging.
2. Účinost inhibice rUstu kultury buněk HeLa S3.2. Effectiveness of inhibiting HeLa S3 cell culture growth.
Buňky HeLa S3 se naočkují na médium (MEM s 10% hovězího séra) v plastických Petriho miskách. Dva dny po naočkování se přidá k médiu testovaný bleomycin. V inkubaci se pokračuje další tři dny, pak se spo čítají buňky. Procentuální inhibice rUstu se vypočte podle následující rovnice;HeLa S3 cells are seeded onto medium (MEM with 10% bovine serum) in plastic Petri dishes. Two days after seeding, test bleomycin is added to the medium. Incubation is continued for another three days, then cells are counted. The percent inhibition of growth is calculated according to the following equation;
Procentuální inhibice rUstu [v %) = = 100 X /B—Л/) /B—C/, kde 'Percent inhibition of growth [%] = = 100 X (B-L) / B-C, where
A znamená konečný počet buněk třetí den po přidání testovaného vzorku,A means the final cell count on the third day after adding the test sample,
B znamená konečný počet buněk kontrolního vzorku (bez přidání testovaného vzorku) aB represents the final cell count of the control sample (without addition of test sample); and
C znamená počet buněk v době přidání testovaného vzorku.C represents the number of cells at the time of addition of the test sample.
ID50 (koncentrace zpUsobují 50% inhibici) se vyhodnotí z křivky koncentrace vzorku proti procentuální inhibicí.ID50 (concentrations causing 50% inhibition) is evaluated from the sample concentration versus percent inhibition curve.
Výsledky testu 1. a 2. jsou uvedeny v tabulce 3.Test results 1 and 2 are shown in Table 3.
3. Pulmonární toxicita (pulmonární fibrosa) u myší3. Pulmonary toxicity (pulmonary fibrosis) in mice
Pro testy byly použity ICR myši (samečci ve stáří 15 týdnů) ve -skupinách po 9 myších. Každá myš dostávala denní dávku 5 mg/kg testovaného vzorku intraperitoneální injekcí, jednou denně, po dobu 10 po sobě .následujících dnů. Od ukončení podávání testovaného vzorku byly myši po dobu 5 týdnů pozorovány, potom byly utraceny a pitvou byl sledován výskyt a .stupeň pulmonární fibrosy. Vyhodnocení bylo děláno na základě porovnání počtu testovaných myší trpících pulmonární flbrosou a na základě stupně onemocnění. Výsledky testu jsou uvedeny v .tabulce 4.ICR mice (15 weeks old male) in groups of 9 mice were used for the tests. Each mouse received a daily dose of 5 mg / kg of test sample by intraperitoneal injection, once daily, for 10 consecutive days. Mice were observed for 5 weeks from the end of test sample administration, then sacrificed, and the incidence and degree of pulmonary fibrosis were examined by autopsy. The evaluation was made by comparing the number of mice tested with pulmonary flora and the degree of disease. The test results are shown in Table 4.
Stupeň onemocnění je vyjádřen číselně podle následující stupnice:The degree of disease is expressed numerically according to the following scale:
Počet bodů žádná fibrosa akumulace exudátu v pulmonární alveoli a ' fibrose - podobná změna v alveolárním septu fibrosa v několika oblastech roztroušená fibrosa fibrosa na ví-ce .než dvou třetí- nách celkové -plochy.Number of points No fibrosis of exudate accumulation in pulmonary alveoli and fibrosis - a similar change in alveolar septum fibrosis in several areas scattered fibrosis fibrosis on more than two thirds of the total area.
„Poměr“ býl vypočten ze srovnání -s „bleomycinovým komplexem“.The "ratio" was calculated from a comparison with the "bleomycin complex".
Jak je zřejmé z uvedených výsledků, sloučeniny podle -tohoto vynálezu mají vysokou inhibici růstu kultury HeLa S3 buněk i významnou -antimikrobiální účinnost a mají velmi nízkou pulmonární toxicitu, což -jsou pozitivní fakta pro jejich použití v (tllnických oblastech.As can be seen from the results, the compounds of the present invention have high growth inhibition of HeLa S3 cell culture as well as significant antimicrobial efficacy and very low pulmonary toxicity, which are positive facts for their use in the field.
Vynález je dále ilustrován podrobněji v příkladech, není však jimi nikterak -omezen.The invention is illustrated in more detail in the examples, but is not limited thereto.
PříkladyExamples
Stupeň A .Grade A.
Osmset gramů čerstvých hovězích jater se homcgenizuje v 1/6 1 0,05 M fosforečnanového pufru o pH 7,2. Hornogenizcvaná směs se. odstře-fuje 30 minut při 8 000 ot/min. S-upernatant se dialyzuje proti 0,05 M roztoku fosforečnanového pufru za použití -celúlózové membrány.Eighty grams of fresh bovine liver was homogenized in 1/6 L of 0.05 M phosphate buffer pH 7.2. The hornogenised mixture was added. Centrifuge for 30 minutes at 8,000 rpm. The S-upernatant is dialyzed against a 0.05 M phosphate buffer solution using a cellulose membrane.
Připraví -se tak roztok surového enzymu. K 32,7 g bleoimycinu APMP -se přidá 1,5 1 roztoku -surového enzymu. Směs se nechá reagovat při 37 °C 24 hodin. K reakční směsi se- přidá 150 ml 55% kyseliny trichloroctové (dále uváděna jako- TCA), vysráží se protein.A crude enzyme solution is thus prepared. To 32.7 g of bleoimycin APMP was added 1.5 L of a crude enzyme solution. The mixture was allowed to react at 37 ° C for 24 hours. 150 ml of 55% trichloroacetic acid (hereinafter referred to as TCA) is added to the reaction mixture, and the protein precipitates.
Sraženina se odstředí a promyje se třikrát 5% TCA. Supecnatant a všechny promývací roztoky se spojí. Po- neutralizaci 4 M hydroxidem sodným, se spojené - roztoky smísí -s 5 g octanu měďnatého (1,2 ekvivalentu bleomycinu), vytvoří se komplex mědi s požadovaným produktem.The precipitate is centrifuged and washed three times with 5% TCA. The supernatant and all wash solutions were combined. After neutralization with 4 M sodium hydroxide, the combined solutions were mixed with 5 g of copper acetate (1.2 equivalents of bleomycin) to form a copper complex with the desired product.
Odsolení se provede vlitím měďnatého komplexu na kolonu o objemu 7 -litrů .plněnou adsorptivnl pryskyřicí DiaionR HP 40 (výrobce Mitsubishl Chemical Co.) ve vodě. Požadovaný produkt se na koloně adsorbuje. Sůl se vymyje 14 litry destilované vody.Desalting is performed by pouring the copper complex onto a 7 liter column packed with Diaion® HP 40 adsorptive resin (manufactured by Mitsubishl Chemical Co.) in water. The desired product is adsorbed on the column. The salt is washed with 14 liters of distilled water.
Eluce se provádí směsí 1/50 N vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové a m-ethanolu (1:4 -objj/obj.). Frakce s absorpčním maximem kolem vlnové délky 290 nm se shromáždí. Spojené frakce se neutralizujíElution was carried out with a 1/50 N aqueous hydrochloric acid / m-ethanol (1: 4 v / v) mixture. Fractions with an absorption maximum around 290 nm are collected. The combined fractions were neutralized
DowexemR 44 (OH typ, výrobce Dow Chemlcal Co.) a ipak se zahustí za sníženého tlalku.Dowex R 44 (OH type, manufactured by Dow Chemlcal Co.) and then concentrated under reduced pressure.
Získaný 'koncentrát se vlije :na ‘kolonu o objemu 3 litrů plněnou CM Sephadexem C-25 (Na+ typ, výrobce Pharmiacia Fine Ohemicals Co.), předtím uvedeného do rovnovážného stavu roztokem 1/20 M kyseliny octové a octanu sodného (pufr o pH 4,5), požadovaný produkt se adsorbuje.The concentrate obtained is poured onto a 3 liter column packed with CM Sephadex C-25 (Na + type, manufactured by Pharmiacia Fine Ohemicals Co.), previously equilibrated with 1/20 M acetic acid and sodium acetate buffer ( pH 4.5), the desired product is adsorbed.
Eluce se .provádí metodou lineárního koncentračního gradientu, při které se přidává к tlumivému roztoku postupně chlorid sodný až do zvýšení koncentrace sodíku na 1,0 M. Modré frakce, které se eluují při koncentraci sodíku asi 0,6 M se shromáždí a spojí. Spojené frakce se odsolí .pomocí DiaionuR HP 40 výše popsaným způsobem a pak se lyofilizují. Získá se 21,7 g modrého amorfního prášku měď obsahující formy deamidobleomycinu APMP. Výtěžek činí 66 %.The elution was carried out by a linear concentration gradient method, in which sodium chloride was gradually added to the buffer until the sodium concentration increased to 1.0 M. Blue fractions eluting at a sodium concentration of about 0.6 M were collected and combined. The pooled fractions were desalted using Diaion R HP 40 as described above and then lyophilized. 21.7 g of a blue amorphous copper powder containing forms of deamidobleomycin APMP are obtained. Yield 66%.
Modrý prášek vykazuje absorpční .maxima (E 1 %/lcm) při 24'1 nm (127) a 292 nm (104), měřeno v destilované vodě.The blue powder exhibits an absorption maximum (E 1% / lcm) at 24 nm (127) and 292 nm (104), measured in distilled water.
Prášek vykazuje absorpce v infračerveném světle (cm-1) měřeno metodou KBr-itablety při 3 350, 1 725, 1 650, 1 560, 1 460, 1 380, Ϊ 200, 1140, 1100, 1060, 1020, 990, 880 a 770.The powder exhibits infrared absorption (cm -1 ) measured by KBr-itablets at 3,350, 1,725, 1,650, 1,560, 1,460, 1,380, Ϊ 200, 1140, 1100, 1060, 1020, 990, 880 and 770.
Další fyzikálně-chemické vlastnosti jsou uvedeny v 'tabulce 5.Additional physicochemical properties are listed in Table 5.
Stupeň ВGrade В
Ve 100 iml dimethylformamidu se rozpustí 5 g mědi obsahující formy deamidobleomycinu APMP získaného ve stupni A a 8,3 g (10 ekvivalentů vzhledem к bleomycinu) hydrochloridu 3-(/S/-l‘-fenylethylamí.no)propylaminu (dále označován jako PEP-amin-hydr ochilorid).5 g of copper containing the deamidobleomycin APMP forms obtained in step A and 8.3 g (10 equivalents to bleomycin) of 3 - ((S) -1'-phenylethylamino) propylamine hydrochloride (hereinafter referred to as PEP) are dissolved in 100 .mu.l of dimethylformamide. -amino-hydr ochiloride).
К výslednému roztoku se po ochlazení na O °C za míchání přidá 13,4 g (30 ekvivalentů vztaženo na mol bleomycinu) 1-hydroxybenztriazolu a 3,63 ml N-methylmorfolinu a p.ak 6,8 g (10 ekvivalentů na mol bleomycinu) dicyklohexylkarbodlimidu. Směs se pak nechá reagovat při teplotě místnosti za míchání ’6 hodin.After cooling to 0 ° C with stirring, 13.4 g (30 equivalents per mole of bleomycin) of 1-hydroxybenzotriazole and 3.63 ml of N-methylmorpholine are added and 6.8 g (10 equivalents per mole of bleomycin) are added to the resulting solution. dicyclohexylcarbodimide. The mixture is then allowed to react at room temperature with stirring for 6 hours.
К reakční směsi se přidá desetinásobný roztok acetonu. Požadovaný .produkt se vy sráží. Po promytí acetonem se sraženina rozpustí v destilované vodě. Roztok se vlfje na kolonu objemu 500 ml naplněnou CM Sephadexem C-25 (Na+ typ, výrobce Pharmacla Fine Chemicals Co.), předtím 'uvedeným do· rovnovážného· stavu pufrovacím roztokem 1/20 M kyseliny octové — octanu sodného· o pH 4,5.Ten times acetone solution was added to the reaction mixture. The desired product precipitates. After washing with acetone, the precipitate is dissolved in distilled water. The solution is poured onto a 500 ml column packed with CM Sephadex C-25 (Na + type, manufactured by Pharmacla Fine Chemicals Co.), previously equilibrated with a 1/20 M acetic acid-sodium acetate buffer solution at pH 4 , 5.
Produkt se adsorbuje. Eluce se .provádí metodou lineárního koncentračního gradientu, při které se к roztoku pufru. přidává chlorid sodný do dosažení koncentrace sodíku na 1,0 M. Modré frakce eluované při koncentraci sodíku asi 0,7 M se shromáždí a spojí.The product is adsorbed. The elution is carried out by a linear concentration gradient method in which the buffer solution is added. add sodium chloride to a sodium concentration of 1.0 M. Blue fractions eluted at a sodium concentration of about 0.7 M are collected and combined.
Spojené frakce se odsolí pomocí Di.aionuR HP-40 (500 ml) výše popsaným způsobem a pak se lyofilizují. Získá se 3,3 g měď obsahující formy 3-(N-methylaminopropyl)-amino,pr opyl/amldo/N- [ 3- (/S/-l‘-f enylethylami•nojpropyl]bleomycinu (dále označován jako dAPMP-PEP) ve formě modrého amorfního prášku.The combined fractions were desalted using Di.aion R HP-40 (500 mL) as described above and then lyophilized. 3.3 g of copper containing the forms of 3- (N-methylaminopropyl) -amino, propyl / amino / N- [3- ((S) -1'-phenylethylaminopropyl) bleomycin (hereinafter referred to as dAPMP-PEP) are obtained. ) in the form of a blue amorphous powder.
Výtěžek činí 66 °/o. Tento .produkt vykazuje UV absorpční maxima (E 1 %/lcm) při měření v destilované vodě při 241 nm· (108) a 292 .nm (87). Produkt vykazuje IR absorpční maxima (vlnová délka, cm-1) při měření metodou KBr-tablety při 3 350, 1 725, 1 645, 1 560, 1 '460, 1 380, 1 250, 1140, 1100, 1 06Ю, 1015, 990, 880, 765 a 700.The yield is 66%. This product shows UV absorption maxima (E 1% / lcm) when measured in distilled water at 241 nm (108) and 292 nm (87). The product shows IR absorption maxima (wavelength, cm -1 ) as measured by KBr-tablet at 3,350, 1,725, 1,645, 1,560, 1,460, 1,380, 1,250, 1140, 1100, 10,6Ю, 1015 , 990, 880, 765, and 700.
Další fyzikálně-chemické vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 5.Additional physicochemical properties are given in Table 5.
Ve výše uvedeném stupni В se nahradí PEP-amin-tiydrochlorid a N-methylmorfolin n-okitylaminem, čímž se získá 3-(N-methylami.noipropyl)aminopropylamino-/amido/N-(n-oktyl)-bleomycin (dále označován jako dAPMP-OCT).In step V above, PEP-amine-thiydrochloride and N-methylmorpholine are replaced with n-ocitylamine to give 3- (N-methylamino-propyl) aminopropylamino- / amido / N- (n-octyl) -bleomycin (hereinafter referred to as dAPMP-OCT).
Tento produkt vykazuje UV absorpční maxima (E 1 °/o/i c.m) při měření v destilované vodě ,přl 241 nm (118) a 292 nm (95).This product shows UV absorption maxima (E 1 ° / o / m c) when measured in distilled water, at 241 nm (118) and 292 nm (95).
Produkt vykazuje IR absorpční maxima (vlnová délka cm-1) při měření metodou KBr-tablety při 3 350, 2 940, 1720, 1640, 1 555, 1 460, 1 370, 1 250, 1115, 1100, 1 060, 1010, 995, 9'30, 880 a 760..The product shows IR absorption maxima (wavelength cm -1 ) as measured by KBr-tablet at 3,350, 2940, 1720, 1640, 1,555, 1,460, 1,370, 1,250, 1115, 1100, 1,060, 1010, 995, 9'30, 880 and 760.
Další fyzikálně-chemické vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 5.Additional physicochemical properties are given in Table 5.
Tabulka 5Table 5
*2 Avicel SFR (FMC Co.), kyselina mravenčí — kyselina octová — voda (27 : 75 : 900 obj./obj.), 800 V, 15 minut.* 2 Avicel SF R (FMC Co.), formic acid - acetic acid - water (27: 75: 900 v / v), 800 V, 15 minutes.
X1 Sllica Gel 60 F 254 SilanizedR (Merck Co.), měřeno ve směsi methanol — 6% octan amonný (60 : 40 obj./obj.); X1 Gel Gel 60 F 254 Silanized R (Merck Co.), measured in methanol-6% ammonium acetate (60:40 v / v);
Jestliže se ve stupni В nahradí PEP-amin-hydrochlorid 3-(di-n-butylamino)propylaiminem .nebo N-[3-[N-methyl-N-(3-/2-/.p-chlorfenyl/ethylarmno jpropyl Jamino^propylaminem, získá se odpovídající derivát deamidobleomycinu APMP.If, in step V, PEP-amine hydrochloride is replaced by 3- (di-n-butylamino) propylamine, or N- [3- [N-methyl-N- (3- [2- (p-chlorophenyl) ethyl] propyl] amino with propylamine, the corresponding deamidobleomycin APMP derivative is obtained.
Stupeň CGrade C
Jeden gram měď obsahující formy dAPMP-PEP získané ve stupni В se rozpustí ve 100 mililitrech methanolu. Přidá se 700 mg (asi 4 ekvivalenty vzhledem к bleomycinů] m,p-dibenzyloxybenzaldehyd u.One gram of copper containing the forms of dAPMP-PEP obtained in step V is dissolved in 100 ml of methanol. 700 mg (about 4 equivalents to bleomycins) of m, p-dibenzyloxybenzaldehyde are added.
Pak se přidá 48 mg (asi 1,3 ekvivalentu bleomycinů) kyanoborohydridu. Směs se nechá reagovat při 40 °C 48 hodin. Reakční směs se pak vlije na kolonu objemu 100 ml plněnou CM-ToyOipearlR 650 (Na+ ty.p, výrobce TOYO SODA MFG) předem promytou methanolem.48 mg (about 1.3 equivalents of bleomycins) of cyanoborohydride are then added. The mixture was allowed to react at 40 ° C for 48 hours. The reaction mixture was then poured onto a 100 ml column packed with CM-ToyOipearl R 650 (Na + ty.p, manufactured by TOYO SODA MFG) previously washed with methanol.
Požadovaný produkt se adsorbuje. Kolona se .promyje 20Ό ml methanolu. Eluce se provede metodou lineárního koncentračního gradientu, při ikteré se přidává postupně 500 ml rozteku methanol—voda (7:3), který obsahuje 0,2 M chloridu sodného к 500 milimetrům roztoku methanol—voda (7 : 3).The desired product is adsorbed. Wash the column with 20 ml of methanol. Elution was performed by a linear concentration gradient method, in which 500 ml of methanol-water (7: 3) solution containing 0.2 M sodium chloride to 500 millimeters of methanol-water (7: 3) was added sequentially.
130 m'1 modrých frakcí, které se eluují při koncentraci soli asi 0,12 M, se vlije na kolonu objemu 160 ml plněnou AmberlltemR XAD-2 za účelem adsorpce. Eluce se provádí metodou lineárního koncentračního gradientu, při které se .přidává postupně 1 litr, methanolu к 1 litru 0,05 M tíumivého roztoku kyselina octová—octan sodný o pH 4,5 za lineárního růstu koncentrace methanolu.130 ml of blue fractions eluting at a salt concentration of about 0.12 M are poured onto a 160 ml column packed with Amberllt R XAD-2 for adsorption. The elution is carried out by a linear concentration gradient method, in which 1 liter of methanol is added successively to 1 liter of a 0.05 M acetic acid-sodium acetate buffer solution of pH 4.5, with a linear increase in the methanol concentration.
Modré frakce, které se eluují při koncentraci methanolu asi 00 %, se vlijí na kolonu objemu 1'00 m'l plněnou AmberlítemR XAD-2. Požadovaný produkt se 'adsorbuje. Po promytí 2Ό0 ml vody se eluce provede směsí 1/50 N kyseliny chlorovodíkové a methanolu . (1: 4 cbj./obj.j.The blue fractions which eluted at about 00% methanol were loaded onto a 1'00 ml column packed with Amberlite R XAD-2. The desired product is adsorbed. After washing with 2 - 0 ml of water, elution is carried out with a 1/50 N mixture of hydrochloric acid and methanol. (1: 4 cbj./obj.
Modré frakce se shromáždí, spojí, neutra lizují Dowexem” 44 (OH typ, výrobce Dor,v Chemical Co.) a zahustí do sucha. Získá se '670 mg modrého prášku. Tento prášek se rozpustí v 50 ml vody. Roztok se vlije na kolonu objemu 1Ό0 ml naplněnou Amberlitem” XAD-2.The blue fractions were collected, combined, neutralized with Dowex 44 (OH type, manufactured by Dor, Chemical Co.) and concentrated to dryness. 670 mg of a blue powder are obtained. This powder was dissolved in 50 ml of water. The solution is poured onto a 1-0 ml column packed with Amberlite ™ XAD-2.
Požadovaný produkt se adsorbuje. Kolena se promyje 300 ml 5% roztoku (.vodného) EDTA. 2 Na, 100 ml 2°/o vodného roztoku chloridu sodného a 200 ml vody v uvedeném pořadí. P,ak se provede eluce směsí 1/50 N vodného rozteku kyseliny chlorovodíkové a methanolu (1:4 obj./obj.).The desired product is adsorbed. The knees were washed with 300 ml of a 5% (aqueous) EDTA solution. 2 Na, 100 ml of 2% aqueous sodium chloride solution and 200 ml of water, respectively. P elution with 1/50 N aqueous hydrochloric acid / methanol (1: 4 v / v).
Frakce vykazující absorpční maximum při vlnové délce kolem 290 nm. Jejich pH se upraví na hodnotu -6,0 použitím DowexuR 44 (OH typ) a lyafilizují se. Získá se 640 mg mědi prosté formy hydrochloridu dDD-PEP jako bílého amorfního prášku. Výtěžek činí 64 %.Fractions showing an absorption maximum at a wavelength of about 290 nm. Their pH is adjusted to -6.0 using Dowex R 44 (OH type) and lyophilized. 640 mg of copper-free form of dDD-PEP hydrochloride was obtained as a white amorphous powder. Yield: 64%.
Tento produkt vykazuje absorpční maxima (UV) (El %/lcm) při měření v destilované vodě při 285 nm (74,4). Produkt vykazuje IR absorpční maxima (vlnová délka cm-1) při měření metodou КВг-tabletv ipři 3 400, 2 900, 1 710, 1 650, 1 545, 1 505, 1450, 1 380, 1 260, 1136, 1 060, 1 010, 800, 730 a '690.This product shows absorption maxima (UV) (E1% / lcm) when measured in distilled water at 285 nm (74.4). The product shows IR absorption maxima (wavelength cm -1 ) as measured by the Kg-tablet method at 3,400, 2,900, 1,710, 1,650, 1,545, 1,550, 1,450, 1,380, 1,260, 1136, 1,060, 1 010, 800, 730 and 690.
Další fyzikálně-chemické vlastnosti jsou uvedeny v tabulce 1.Other physicochemical properties are listed in Table 1.
Jestliže se ve stupni C použije jako výchozí bleomycin dAPMP-OCT a provede se výše uvedený postup, získá se dDD-OCT.When dAPMP-OCT is used as starting bleomycin in step C and the above procedure is performed, dDD-OCT is obtained.
Jestliže se ve stupni С1/ jako výchozí látka použijí deriváty deamidobleomycinu APMP získané ve stupni В odpovídající požadovaným produktům, 2/ použijí se látky jako jsou aldehyd, cyklooktylaldehyd, p-chlorbenzaldehyd· a p-kyanobenzaldehyd •odpovídající požadovaným produktům, 3/ tyto aldehydy se použijí v množství 1,2 mol na 1 mol deamidobleomycinového APMP derivátu, 4/ a reakce se provede výše popsaným způsobem, získají se produkty uvedené v· tabulce 1.If in step С1) the deamidobleomycin APMP derivatives obtained in step В corresponding to the desired products are used as the starting material, 2) substances such as aldehyde, cyclooctyl aldehyde, p-chlorobenzaldehyde and p-cyanobenzaldehyde corresponding to the desired products are used 3) are used in an amount of 1.2 moles per mole of deamidobleomycin APMP derivative, 4) and the reaction is carried out as described above to give the products listed in Table 1.
Claims (8)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58084605A JPS59210100A (en) | 1983-05-14 | 1983-05-14 | Preparation of novel amide-substituted bleomycin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS346884A2 CS346884A2 (en) | 1985-06-13 |
| CS241086B2 true CS241086B2 (en) | 1986-03-13 |
Family
ID=13835313
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS843468A CS241086B2 (en) | 1983-05-14 | 1984-05-10 | New/amido/ n-substituted bleomycines production |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59210100A (en) |
| KR (1) | KR910001725B1 (en) |
| AT (1) | AT380886B (en) |
| CA (1) | CA1276400C (en) |
| CS (1) | CS241086B2 (en) |
| DK (1) | DK237184A (en) |
| ES (1) | ES532369A0 (en) |
| HU (1) | HU189110B (en) |
| YU (1) | YU43845B (en) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58116496A (en) * | 1981-12-29 | 1983-07-11 | Nippon Kayaku Co Ltd | Amide n-substituted bleomycins |
| JPS636078A (en) * | 1986-06-27 | 1988-01-12 | Nippon Zeon Co Ltd | Member of container for semiconductor chemical |
-
1983
- 1983-05-14 JP JP58084605A patent/JPS59210100A/en active Granted
-
1984
- 1984-05-08 CA CA000453841A patent/CA1276400C/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-10 CS CS843468A patent/CS241086B2/en unknown
- 1984-05-10 ES ES532369A patent/ES532369A0/en active Granted
- 1984-05-11 HU HU841839A patent/HU189110B/en not_active IP Right Cessation
- 1984-05-11 DK DK237184A patent/DK237184A/en not_active Application Discontinuation
- 1984-05-12 KR KR1019840002574A patent/KR910001725B1/en not_active Expired
- 1984-05-14 YU YU837/84A patent/YU43845B/en unknown
- 1984-05-14 AT AT0157084A patent/AT380886B/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK237184A (en) | 1984-11-15 |
| AT380886B (en) | 1986-07-25 |
| ES8506308A1 (en) | 1985-07-01 |
| CA1276400C (en) | 1990-11-13 |
| HU189110B (en) | 1986-06-30 |
| ES532369A0 (en) | 1985-07-01 |
| KR840009304A (en) | 1984-12-26 |
| ATA157084A (en) | 1985-12-15 |
| CS346884A2 (en) | 1985-06-13 |
| HUT34223A (en) | 1985-02-28 |
| DK237184D0 (en) | 1984-05-11 |
| YU83784A (en) | 1987-02-28 |
| YU43845B (en) | 1989-12-31 |
| KR910001725B1 (en) | 1991-03-22 |
| JPS59210100A (en) | 1984-11-28 |
| JPH03879B2 (en) | 1991-01-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kondo et al. | The total synthesis of spergualin, an antitumor antibiotic | |
| JPS61227529A (en) | Basic monoamide derivatives of actagardine and addition salt | |
| WO1998052589A1 (en) | Alkylated hexapeptides | |
| CS241086B2 (en) | New/amido/ n-substituted bleomycines production | |
| JPS643879B2 (en) | ||
| KR880002610B1 (en) | Process for the preparation of aminoprop lamimobleomycin derivative | |
| EP0144750B1 (en) | Antibiotics, method for their preparation, their use as medicines and intermediates for their preparation | |
| US4500452A (en) | (Amido)N-substituted bleomycins, salts thereof and process for preparation thereof | |
| DE2458921B2 (en) | N- (2-HYDROXY-4-AMINOBUTYRYL) DERIVATIVES OF THE ANTIBIOTIC XK-62-2, THEIR SALT, METHOD FOR THEIR MANUFACTURING AND MEDICINAL PRODUCTS | |
| US4267102A (en) | Bleomycin group antibiotics | |
| HU198215B (en) | Process for production of compositions similar in construction with antibiotics tan-749 | |
| CA1081693A (en) | Kanamycin c derivatives | |
| US4808703A (en) | Novel 3-(4'-aminobutylamino) propylaminobleomycin derivatives | |
| JPH029897A (en) | Teicoplanin hydrazide | |
| JPS59184199A (en) | Novel amide n-substituted bleomycins | |
| FR2519637A1 (en) | N-amido substd. bleomycin derivs. - useful as anticancer agents with higher resistance to enzymatic degradation | |
| JPS615792A (en) | Antibiotic, its production and microorganism therefor | |
| GB2135312A (en) | (Amido)N-substituted bleomycins | |
| JPH0145480B2 (en) | ||
| JPH046716B2 (en) | ||
| JPS6260399B2 (en) |