SE432444B - Sett att utvinna renat riboflavin fran en riboflavinhaltig fermenteringsvetska - Google Patents

Description

20 25 7904349-3 2 späda den tidigare lösta,fasta substansen i fermenteringsvätskan och öka separering av fasta,suspenderade partiklar med en densi- tet understigande den hos det kristallina riboflavinet. Denna vattentillsats ligger lämpligen mellan cirka 25 och cirka 100 vo- lymprocent av fermenteringsvätskans volym och uppgår lämpligen till cirka 1/3 till cirka 1/2 av fermenteringsvätskans volym.

Ett proteolytiskt enzym kan vara närvarande under upphettningen eller tillsättas efter upphettningen. Enzymet får upplösa teinhaltigt material i flera timmar, i allmänhet i cirka 1 till cirka 5 timmar, lämpligen cirka 3 till cirka 4 timmar. Under en- zymbehandlingen inställes pH på en nivå, där enzymet verkar mest effektivt, i allmänhet på cirka 6,0 till cirka 9,0. Fermenterings- vätskan kyles sedan och, om pH är alkaliskt, inställes det på pro- cirka 7,0.

Den utspädda fermenteringsvätskan med eller utan enzymbehandling omvandlas sedan till ett slam genom centrifugering. Slammet sus- penderas sedan ånyo med en förutbestämd mängd vatten. Den valda vattenmängden är ej tillräcklig för att lösa suspenderad fast substans i det omsuspenderade slammet men tillräcklig för att optimera separering av fasta partiklar med lägre densitet än den hos kristallint riboflavin. Denna vattenmängd motsvarar cirka I till cirka 3 volymer per volym slam och företrädesvis cirka tvâ gånger slammets volym. Det omsuspenderade slammet innehåller cir- ka 15 till cirka 30 viktprocent fast substans. Det omsuspenderade slammet centrifugeras sedan under bildning av ett centrifugat, som kan användas som foderkomplement för djur.

Exempel på enzym, som är lämpliga att använda enligt föreliggan- de uppfinning, är alkaliska proteaser, t.ex. B.subtilis-proteas, B.ligninoformis-proteas och B.amylofaciens-proteas, eller neutra- la proteaser, såsom neutrala B.subtílis-proteaser. Dylika enzymer är tillgängliga inom handeln, ett lämpligt alkaliskt proteasen- zym är exempelvis Rhozyme P-62®, som saluföres av Rohm and Haas Co, och ett lämpligt neutralt proteasenzym är Enzeco Bacterial Protease®, som saluföres av Enzyme Development Corp.

Uppfinningen åskådliggöres närmare under hänvisning till följande exempel. Om ej annat anges uttryckes temperaturen i celsiusgrader. 10 15 20 25 7904309-3 3 Exemgel 1. 1 liter riboflavin-fermenteringsvätska upphettas till 600 i 30 min, då odlingen avslutats. Fermenteringsvätskan kyles sedan till 250 och utspädes till 1,4 liter med destíllerat vat- ten. Den utspädda fermenteringsvätskan centrifugeras och centri- fugatet suspenderas ånyo i en volym vatten, motsvarande dubbla volymen centrifugat och centrifugeras åter. Renheten hos det er- hållna centrifugatet är 3 gånger så stor som obehandlad fermen- teringsvätska och har tillräcklig renhet för att utan ytterliga- re behandling kunna användas som foderkomplement för djur.

Exemgel 2. 1 liter riboflavin-fermenteringsvätska upphettas till 600 sedan fermenteringen avslutats, 0,608 g alkalisk B.subtilis- proteas med en aktivitet av 3,65 kaseinenheter tillsättes sedan och får reagera i 3 h. En kaseinenhet betecknar förmågan hos 1 g enzym att lösliggöra 270 g azokasein på 1 h vid 400 och pH 8,0.

Efter upphettning kyles fermenteringsvätskan till 250, neutrali- seras till pH 7 och utspädes till 1,4 liter med destillerat vat- ten. Den utspädda fermenteringsvätskan centrifugcras och centri- fugatet suspenderas ånyo i två volymer vatten och centrifugeras ånyo. Renheten hos det erhållna centrifugatet är 20 % högre än i exempel 1.

Bxemgel 3. Ett prov av riboflavín-fermenteringsvätska behandlas exakt som i exempel 2 men under användning av 0,48 g alkalisk B.ligninoformis-proteas med en aktivitet av 3,0 Anson-enheter i stället för alkalisk B.subtilís-proteas. En Anson-enhet betecknar det antal gram hemoglobin som upplöses av 1 g enzym på 10 min vid 250 och pH 10,1 och som ej utfaller vid tillsats av tríklor- ättiksyra. Renheten hos det enzymbehandlade slammet är 27 å hög- re än hos slam, som ej behandlats med enzym. Det enzymbehandlade slammet är 3,4 gånger så rent som obehandlad, torkad fermente- ríngsvätska.

Enzymbchandlíngen av fermenteringsvätskan kan utföras samtidigt med ett värmesteriliseringssteg i fermenteringskärlet med liknan- de resultat. 10 15 _ ' 7904349":3"mm 4 Exempel 4. 555 ml pastöriserad riboflavín-fermenteringsvätska ym- pas med 10 ml av en näringskultur av B.subtilis (National Collec- tion Type Culture No 3610). Fermenteríngen får fortskrida 48 h vid 37°. Suspenderad fast substans minskar 72 % ringen. Den med B.subtilis fermenterade odlingsvätskan upphettas, utspädes med vatten till 750 ml och centrifugeras. Centrífugatet suspenderas med 200 ml vatten och centrífugeras ånyo. Centrifuga- tet är 53 % renare än ett med B.subtílis ej fermenteum kontroll- prov och 4,4 gånger renare än torkad odlingsvätska. under fermente- Exempel 5. Förfarandet enligt exempel 1 upprepas med undantag av att det återsuspenderade centrifugatet inställes på pH 8,0 och upphettas till 600 före centrífugering. 0.049 g alkaliskIB.sub- tilis-proteasenzym med en aktivitet av 3,65 kaseínenheter till- sättes och får reagera i 3 h. Slammet kyles, neutraliseras och renare än ett kontrollprov, 0 centrífugeras. Centrifugatet är 41 a som ej enzymbehandlats. En ekvivalet enzymbehandling, som utföres med samma fermenteringsvätska ur samma fermenteringssats, ger en- dast 20 % ökad renhet i förhållande till kontrollprov.

Claims (4)

790læ3le9ü$ 5 Patentkrav

1. Sätt att utvinna renat riboflavin från en riboflavinhaltig fermenteringsvätska, k'ä n n e t e c k n a t av, att när utby- tet vid fermenteringen är ungefär maximalt, fermenteringsvätskan upphettas till cirka 50 till cirka 65°C i cirka 15 till cirka 45 min, varpå fermenteringsvätskan försättes med en mängd vatten, som är otillräcklig för att lösa suspenderad fast substans i vätskan men tillräcklig för att optimera separering både genom utspädning av tidigare löst fast substans och genom centrifugalseparering av fasta suspenderade partiklar med lägre densitet än kristallint riboflavin, och fermenteringsvätskan, som innehåller den tillsat- ta mängden vatten, centrifugeras för bildning av ett slam, vilket ånyo suspenderas med en mängd vatten, som är otillräcklig för lösning av suspenderad fast substans men tillräcklig för att op- timera separering av fasta partiklar med en densitet understigan- de den hos kristallint riboflavin och centrifugering av det återsuspenderade slammet för bildning av ett renat riboflavin- centrifugat, som kan användas som komplement till djurfoder, el- ler att fermenteringsvätskan behandlas med ett proteolytiskt en- zym före centrifugeringen för bildning av ett slam, varvid enzy- met ej påverkar riboflavin men antingen lösliggör proteinhaltigt material eller omvandlar det till material med reducerad densi- tet, som kan separeras genom centrifugering, eller att det äter- suspenderado slammet behandlas med ett proteolytiskt enzym före centrifugcringen.

2. Sätt enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av, att den mängd vatten, som sättes till fermenteringsvätskan, uppgår till cirka 25 till cirka 100 volymprocent av fermenteringsvätskans ursprung- liga volym.

3. Sätt enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av, att den mängd vatten, som sättes till fermenteringsvätskan, uppgår till cirka 1/3 till cirka 1/2 av fermenteringsvätskans ursprungliga volym.

4. Sätt enligt krav 1, k ä n n c t e c k n a t av, att den mängd vatten, som användes för âtersuspension av slammet uppgår till cirka tre gånger slammets volym. 7904349-3 Sammandrag Riboflavin utvínnes ur fermenteríngsvätska genom utspädning av denna med en förutbestämd mängd vatten, centrifugering av den utspädda vätskan för bildning av ett slam, som ånyo suspende- ras med en förutbestämd mängd vatten och centrifugering av det återsuspenderade slammet för bildning av en produkt, som direkt kan användas som foderkomplement för djur eller som är lämpligt för ytterligare rening för farmaceutisk användning. Eventuellt kan fermenteríngsvätskan eller det återsuspenderade slammet be- handlas med ett enzym före centrifugeríng.