SA98190877B1 - بروتينات اندماج تتضمن على بروتينات tat hiv-1 nef hiv-1 comprising fusion proteine and /or nef proteins - Google Patents
بروتينات اندماج تتضمن على بروتينات tat hiv-1 nef hiv-1 comprising fusion proteine and /or nef proteins Download PDFInfo
- Publication number
- SA98190877B1 SA98190877B1 SA98190877A SA98190877A SA98190877B1 SA 98190877 B1 SA98190877 B1 SA 98190877B1 SA 98190877 A SA98190877 A SA 98190877A SA 98190877 A SA98190877 A SA 98190877A SA 98190877 B1 SA98190877 B1 SA 98190877B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- protein
- nef
- tat
- hiv
- mentioned
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 111
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 90
- 230000004927 fusion Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 title description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims abstract description 15
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108010084873 Human Immunodeficiency Virus nef Gene Products Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 claims description 46
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 19
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 15
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 101710192141 Protein Nef Proteins 0.000 claims description 11
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 11
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 7
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 6
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 claims description 6
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 claims description 6
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 claims description 6
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims description 5
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 3
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 3
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 2
- 108700024841 HIV-TAT-survivin (T34A) Proteins 0.000 claims 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 67
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 38
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 26
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 13
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 7
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 7
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 6
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 description 6
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 5
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 4
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 108700004027 tat Genes Proteins 0.000 description 4
- 101150098170 tat gene Proteins 0.000 description 4
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- SLCVBVWXLSEKPL-UHFFFAOYSA-N neopentyl glycol Chemical compound OCC(C)(C)CO SLCVBVWXLSEKPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 nucleoside triphosphate Chemical class 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N (2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoic acid;(2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid Chemical group OC[C@H](N)C(O)=O.C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O YUXKOWPNKJSTPQ-AXWWPMSFSA-N 0.000 description 2
- TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 2-cyanobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1C#N TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025188 Alcohol oxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 108700020134 Human immunodeficiency virus 1 nef Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001103596 Lelia Species 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 description 2
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000236480 Podophyllum peltatum Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000005243 fluidization Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 108700004028 nef Genes Proteins 0.000 description 2
- 101150023385 nef gene Proteins 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M Cetrimide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C CXRFDZFCGOPDTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101000951871 Drosophila melanogaster Division abnormally delayed protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 244000182691 Echinochloa frumentacea Species 0.000 description 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000598436 Human T-cell lymphotropic virus Species 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 101000985498 Mus musculus Hermansky-Pudlak syndrome 4 protein homolog Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 101150081509 SLC16A10 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001807 Urea-formaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000329 aluminium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000028557 immunoglobulin binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091009323 immunoglobulin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001589 lymphoproliferative effect Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010089520 pol Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011867 re-evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- ZJHHPAUQMCHPRB-UHFFFAOYSA-N urea urea Chemical compound NC(N)=O.NC(N)=O ZJHHPAUQMCHPRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
- C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
الملخص: يعمل هذا الاختراع على إعداد (أ) بروتينHIVTat أو مشتق من هذا البروتين مرتبط بواحدمما يلي: (1) جزء مشارك للاندماج أو (٢) بروتببنHIVTat أو مشتق منه، أو (ب) بروتين HIVNefأو مشتق منه مرتبط مع واحد مما يلي: (١) مشاركللاندماج أو (٢) بروتين HIVTat أو مشتق منه، أو(ج) بروتين HIVNef أو مشتق منه مرتبط معبروتين HIVTat أو مشتق منه ومشارك للاندماج،يعمل هذا الاختراع أيضا على إعداد حمض نوويnucleic acid يشفر لمثل هذا البروتين وخلية عائل،مثل بيشيا باستوريس Pichia pastoris، ينقل إليهاهذا الحمض النووي المذكور سابقا.،
Description
-١- 1117-1 NEF s/s 1117-1 TAT بروتينات اندماج تتضمن على بروتينات
Fusion Proteins Comprising HIV-1 TAT and/or NEF Proteins الوصف الكامل خلفية الاختراع:- وإستخدامها في العلاج وبتركيبات HIV يتعلق الاختراع الحالي بمخلفات بروتين صيدلية تحتوي عليها وطرق لتصنيعها. إندماج تتضمن على بروتينات proteins وبصفة خاصة. يتعلق الاختراع ببروتينات
HIV-1NeF 4 [5 HIV-1 TaT (AIDS المكتسبة (الايدز de lid) و 1117-1 هو السبب الاولي لعرض نقص يشار لها كأحد المشاكل الصحية الرئيسية في العالم. وبالرغم من أنه قد تم عمل بحث واسع في فإن هذه الجهود المبذولة لم تنجح. ca vaccine كل أنحاء العالم لانتاج لقاح
Jd غير مغلفة من 1117-1 وتشتمل على سبيل proteins وقد تم وصف بروتينات proteins وبروتينات «pol بنائية داخلية مثل نواتج الجينات 8 و proteins على بروتينات
Tat و Vif «Nef (Rev غير بنائية متل (Greene et al., New England J. Med, 324, 5, 308 et seq (1991) and Bryant et al. (Ed. Pizzo), Pediatr. Infect. Dis. J., 11, 5, 390 et seq (1992). مبكرة؛ أي يتم التعبير عنها proteins هي بروتينات Tat و HIV-1 NeF والبروتينات مبكراً في العدوى وفي غياب البروتينات البنائية. يتضمن على protein وطبقاً للاختراع الحالي يتم إعداد بروتين بروتين (i) شريك إندماج أو (i) أو مشتق منه مرتبط إما مع HIV. Nef أ) بروتين أو مشتق منه؛ أو HIV Tat بروتين (ii) شريك إندماج أو (i) أو مشتق منه مرتبط إما مع HIV Tat ب) بروتين أو مشتق منه؛ أو HIV Nef
اس
ج) بروتين HIV Nef أو مشتق منه مرتبط مع بروتين HIV Tat أو مشتق منه وشريك إندماج .
ويعني "بشريك إندماج" أي تتابع بروتين protein والذي لا يكون Tat أو Nef ويفضل أن يكون شريك الاندماج هو بروتين D أو مشتقه المحتوي على دهون ليبوبروتين Lipoprotein D من .Haemophilius influenzae B وبصفة خاصة يفضل أن يتم إستخدام SB من الطرف oN أي حوالي أول ١١١ -٠٠١ حمض أميني .amino ويمثل هذا هنا بالليبو Lipo D 3. وفي تجسيم مفضل في الاختراع؛ قد يتم ربط البروتين Nef protein أو مشتق منه بالبروتين Tat protein أو مشتق منه. وقد يتم ربط هذه الاندماجات 186 Nef- إختيارياً بشريك الاندماج؛ مثل بروتين protein D
ويتم باسلوب طبيعي ربط شريك الاندماج بالطرف 17 من البروتين Nef او Tat
وتشتمل المشتقات الموجودة داخل الاختراع الحالي على جزيئات بها ذيل من الهستدين Histidine الطرف © والذي يفضل أن يتضمن بين *- ٠١ مجموعات هستيدين Histidine
وبصفة عامة؛ ويمثل ذيل الهستيدين Histidine المحتوي على عدد © من المجموعات هنا His (n) ويساعد وجود ذيل الهستيدين (His) على التنقية. وتحديداً؛ يعطي الاختراع بروتينات لها البناء التالي
erm | © | اد
ويعطي شكل ١ تتابع الحمض amino ud) (بيان تتابع رقم (V و DNA (بيان تتابع رقم 1( لشريك الاندماج لهذه المخلفات.
وفي تجسيم مفضل؛ يتم التعبير عن البروتينات بذيل هستيدين Histidine يتضمن بين * إلى ٠ ويفضل ١ مجموعات هستيدين. وهذا مميز في أنه يساعد على التنقية. وقد ذكرت بالفعل
بعض الأبحاث التعبير المنفصسل؛ في الخميرة (Saccharomyces cerevisiae) عن Yeast 9 (6) 565-573) and Tat (Braddock M et ,1993 ملة Nef (Macreadie I.
G. et al, 1989, Cell 58 (2) 269-79). ويتم إضافة ميريستيل myristilated إلى البروتين Nef ويعطي الاختراع الحالي للمرة الاولسى ميزة التعبير عن Nef و Tat باسلوب منفصل في نظام التعبير Pichia (مخلفات Nef-His و ((Tat-His والتعبير الناجح لمخلف الاندماج Nef-Tat-His ويتم توضيح تتابعات DNA والحمض الاميني amino لبروتينات Nef-His (بيان تتابع A و 1)؛ Tat-His (بيان تتابع ٠١ و )١ و Nef-Tat-His (بيان تتابع ١١ و (VY في شكل ؟. وتشتمل المشتقات الموجودة في الاختراع الحالي على بروتينات proteins محورة (بها طفرة)؛ ويتم إستخدام المصطلح "محور”" هنا ليعني جزئ والذي يخضع لحذف؛ إضافة أو إستبدال لواحد أو أكثر من الأحماض الامينية amino باستخدام تفنيات معروفة جيداً لاحداث طفرة موجية للموضع أو أي طريقة أخرى مألوفة. ويتم توضيح Tat المحور في شكل ؟ (بيان تتابع YY و Tat- His Lady (YF محور Nef (بيان تتابع رقم YE و (Yo Cia oY العام للاختر اع:- ويعد الاختراع الحالي DNA مكون لبروتينات proteins الاختراع الحالي. وقد يتم إدخال هذه التتابعات في حامل تعبير مناسب والتعبير عنه في عائل مناسب. وقد يتم تخليق تتابع DNA مكون لبروتينات proteins الاختراع الحالي باستخدام تقنيات تخليق DNA عيارية؛ على سبيل المثال بالربط الانزيمي enzymatic كما ذكر بواسطة D.
M.
Roberts et al. in Biochemistry 1985, 24, 5090-5098 بالتخليق الكيميائي؛ بالبلمرة الاتزيمية polymerization فسي المعمل؛ أو بتكنولوجيا PCR باستخدام على سبيل المثال بوليمريز polymerase ثابت في الحرارة الشديدة؛ أو باتحاد من هذه التقنيات.
م وقد يتم إجراء بلمرة إنزيمية للحمض 555( DNA في المعمل باستخدام DNA بوليمريز polymerase مثل DNA بوليمريز polymerase I (جزء (Klenow في محلول منظم مناسب يحتوي على النيوكليوسيد nucleoside ثالث فوسفات «dCTP «dATP triphosphates dGTP و dTTP كما يتطلب عند درجة حرارة OF -9٠١ وبصسفة عامة في حجم Or ميكرولتر أو أقل. وقد يتم إجراء الربط الانزيمي Enzymatic لأجزاء DNA باستخدام DNA لايجيز DNA Jie ligase 14 لايجيز ligase في محلول منظم مناسب؛ مثل 605 مول Tris pH) = 4.)؛ ١.01 مول كلوريد ماغنسيوم 8.60٠ MgCly مول ثاني تيوتريتول ١ «dithiothreitol ملي مول سبرميدين 8062010106؛ ١ ملي مول ATP و )+ مجم/ ملي البيومين مصل serum albumin بقري؛ عند درجة حرارة ؟ "م إلى الحرارة المحيطة؛ وبصفة عامة في حجم ov ملي أو أقل. وقد يتم إجراء التخليق الكيميائي للبوليمر polymer أو أجزاء DNA بالكيمياء المألوفة لفوسفو ثالث إستر phosphotriester فوسفيت phosphite أو فوسفوراميديت «phosphoramidite باستخدام تقنيات الطور الصلب مثل هذه المذكورة في ‘Chemical and Enzymatic Synthesis of Gene Fragments-A Laboratory Manual (ed. 11. G.
Gassen and A.
Lang), Verlag Chemie, Weinheim (1982), أو في إستخدامات عملية أخرى؛ على سبيل JE M.
J.
Gait, H W.
D.
Matthes, M.
Singh, B. 5. Sproat, and R.
C.
Titmas, Nucleic Acids Research, 1982, 10, 6243 ; B.
S.
Sproat, and W.Bannwarth, Tetrahedron Letters, 1983, 24, 5771 ; M.
D.
Matteucci and M.
H.
Caruthers, Tetrahedron Letters, 1980, 21, 719 ; M.
D.
Matteucci and M.
H.
Caruthers, Journal of the American Chemical Society, 1981, 103, 3185 ; S.
P.
Adams et al, Journal of the American Chemical Society, 1983, 105, 661 ; N.
D.
Sinha, J.
Biernat, J. McMannus, and 11. Koester, Nucleic Acids Research, 1984, 12, 4539 ;and H W. D.
Matthes et al., EMBO Journal, 1984, 3, 801. ويعطي الاختراع أيضاً عملية لتحضير بروتين protein الاختراع؛ وتتضمن العملية على الخطوات التالية: ١١ ١
-١- تحضير حامل تعبير قادر على التخليق أو متكامل قادرء في خلية عائل؛ على التعبير i والذي يكون البروتين nucleotide متضمن على تتابع نيوكليوتيد DNA polymer عن بوليمر أو مشتق منه protein تحويل أو إدخال الحامل المذكور في خلية عائل (ii
DNA زرع خلية العائل المحولة المذكورة تحت ظروف تسمح بالتعبير عن بوليمر (iit المذكور؛ و protein المذكور لانتاج البروتين polymer المذكور. protein إستخلاص البروتين (iv وقد يتم إجراء عملية الاختراع بتقنيات إعادة الاتحاد الجيني المألوفة كالمذكورة في
Maniatis et al., Molecular Cloning-A Laboratory Manual ; Cold Spring Harbor, 1982-1989. غريب في خلية عائل. وقد يتم تحقيق هذا DNA ويتم إستخدام المصطلح 'تحويل” ليعني إدخال على سبيل المثال بالتحويل؛ الاصابة أو العدوى بواسطة بلازميد مناسب أو حامل فيروسي باستخدام على سبيل المثال تقنيات مألوفة كالمذكورة في
Genetic Engineering ; Eds. 5 M. Kingsman and A. J. Kingsman ; Blackwell
Scientific Publications ; Oxford, England, 1988. ويستخدم المصطلح "محول" أو "متحول" هنا فيما يلي لخلية العائل الناتجة المحتوية على والمعبرة عن الجين الغريب المستهدف. وحاملات التعبير تعتبر جديدة وتكون أيضاً جزء من الاختراع. وقد تم تحضير حاملات
DNA التعبير قابلة للتخليق طبقاً للاختراع؛ بتقسيم حامل متوافق مع خلية العائل لاعطاء جزء والتي؛ DNA خطي له مخلق سليم؛ وربط الجزء الخطي المذكور مع واحد أو أكثر من جزيئات المكون DNA polymer سوياً مع الجزء الخطي المذكور يكونوا الناتج المرغوب؛ مثل البوليمر الاختراع؛ أو مشتق منه؛ تحت ظروف الربط. protein لبروتين خلال تكوين الحامل»؛ حسب DNA polymer وبذلك؛ قد يتم إجراء أو تكوين البوليمر الرغبة.
لا
ويتم تعيين إختيار الحامل جزئياً بخلية العائل؛ والتي قد تكون بدائية أو حقيقة النواة لكي يفضل أن تكون coli .5 أو خميرة. وتشتمل الحاملات المناسبة على بلازميدات plasmids بكتريوفاج «bacteriophages كوزميدات cosmids وفيروسات viruses معادة الاتحاد الجيني.
وقد يتم إجراء تحضير حامل التعبير القابل للتخليق باسلوب مناسب بإنزيمات مناسبة للقطع المحدد؛ البلمرة polymerisation وربط (DNA بالطرق المذكورة؛ على سبيل المثال؛ في Maniatis وزملائه المذكور سابقاً.
ويتم تحضير خلية العائل المعادة الاتحاد الجيني؛ طبقاً للاختراع؛ بتحويل خلية عائل بحامل تعبير قابل للتخليق في الاختراع تحت ظروف التحويل. وتعتبر ظروف التحويل المناسبة مألوفة ويتم وصفهاء على سبيل المثال؛ في Maniatis وزملائه المذكور سابقاًء أو "DNA Cloning" جزء (II المؤلف (IRL Press Ltd 0. M.
Glover دم1 ١
ويتم تعيين إختيار ظروف التحويل بواسطة خلية العائل. وبذلك؛ قد يتم معالجة عائل بكتيري coli Jin .12 بمحلول من كلوريد كالسيوم CaCly
(Cohen et al, Proc.
Nat.
Acad.
Sci., 1973, 69, 1 0) أو بمحلول يتضمن على خليط من (RbCl 110012 أسيتات بوتاسيوم potassium acetate وجليسرول glycerol وبعد ذلك بحمض +- [[11- مورفولينو]- بروبان- سلفونيك [N-morpholino]- propane-sulphonic -3 وقد يتم تحويل الخلايا الثديية في المزرعة بالترسيب المساعد للكالسيوم calcium لحامل DNA على الخلايا. ويمتد الاختراع أيضاً لخلية عائل محولة بحامل تعبير قابل للتخليق في الاختراع.
ويتم إجراء زرع خلية العائل المحولة تحت ظروف تسمح بالتعبير عن البوليمر DNA polymer باسلوب مناسب؛ كما ذكر؛ على سبيل المثال؛ في "DNA 5 «43k 35 Maniatis Cloning” المذكور سابقاً. وبذلك؛ يفضل أن يتم إمداد الخلية بالغذاء وزرعها عند درجة حرارة Jil من 2°00
ويتم إستخلاص الناتج بطرق مألوفة طبقاً لخلية العائل. وبذلك؛ عندما تكون خلية العائل بكتبرية؛ مثل coli ..5©- أو خميرة مثل Pichia قد يتم تحللها فيزئياً physically كيميائياً chemically 0 إنزيمياً enzymatically وعزل الناتج البروتيني protein من الجزء المحلل
A
الناتج. وعندما تكون خلية العائل خلية ثديية؛ قد يتم بصفة عامة عزل الناتج من الوسط الغذائي أو من مستخلصات الخلية. وتشتمل تقنيات عزل البروتين protein المألوفة على الترسيب الانتقائي؛ كروماتوجرافيا إمتزاز؛ وكروماتوجرافيا القابلية مشتمل على عمود قابلية لجسم مضاد أحادي الاستنساخ. ولبروتينات proteins الاختراع الحالي المعطاة التي لها ذيل همستيدين (Histidine قد يتم تحقيق التنقية بسهولة باستخدام عمود قابلية لايون معدني. وفي تجسيم مفضل؛ يتم أيضاً تثقية البروتين protein بتعريضه لكروماتوجرافيا إستبدال أيون/ كاتيون cation و/ أو كروماتوجرافيا لترشيح الجيل Gel ويتم بعد ذلك تعقيم البروتين protein بإمراره خلال غشاء ٠,7١ ميكرومتر. وبعد ذلك قد يتم تكوين بروتينات الاختراع كمصل؛ أو يتم Jatin] مجموعات الهستيدين Histidine إنزيمياً. ويفضل أن يتم إعطاء بروتينات الاختراع الحالي نقية %A على الأقل ويفضل أكثر أن تكون نقية 969٠0 كما يوضح بواسطة PAGE 505. ويفضل أن تظهر البروتينات كشريط مفرد بواسطة .SDS PAGE ويعد الاختراع الحالي La تركيب صيدلي يتضمن على بروتين protein الاختسراع الحالي في مادة سواغة مقبولة صيدلانياً. وبصفة dale يتم وصف تحضير لقاح a vaccine في New Trends and Developments in Vaccines, Voller et al. (eds), University Park
Press, Baltimore, Maryland, 1978. ويتم وصف التخليق داخل الليبوسومات liposomes بواسطة (Fullerton البراءة الامريكية 4775/9/7 . ويفضل أن يتم وضع مواد مساعدة لبروتينات proteins الاختراع الحالي في تكوين اللقاح ia vaccine الاختراع. وتشتمل المواد المساعدة المناسبة على ملح الومينيوم aluminium مثل جيل هيدر وكسيد الومينيوم aluminium hydroxide gel (alum) أو فوسفات الومينيوم «aluminium phosphate لكن قد تشتمل أيضاً على ملح الكالسيوم calcium الحديد iron أو الزنك zine أو قد تكون عبارة عن معلق غير قابل للذوبان من تيروسين tyrosine
محتوي على أسيل؛ أو سكريات محتوية على أسيل « بولي سكاريد polysaccharides مشتقة كاتيونياً cationically 0 أنيونياً اله تصماصة» أو بولي فوسفارين .polyphosphazenes
وفي تكوين الاختراع يفضل أن يحفز التركيب المساعد إستجابة THI المفضلة. وتشتمل أنظمة المواد المساعدة المناسبة؛ على سبيل (JE على إتحاد من مونوفوسفوريل ليبيد monophosphoryl lipid A محتوي على أسيل في 7- دي أوكسي (3D-MPL) سوياً مع ملح ل -aluminium
وتشتمل نظام محفز على إتحاد من مونوفوسفوريل ليبيد monophosphoryl lipid A ومشتق صابونين بصفة خاصة إتحاد من 0521 و 3D-MPL كما نشر في طلب البراءة الدولية [vor 14؛ أو تركيب أقل تفاعل حيث يتم إخماد أو إيقاف 0521 بكوليسترول cholesterol كما ذكر في طلب البراءة الدولية 4؟97؟7/ 456.
ويتم وصف تكوين مساعد قوي بصفة خاصسة مشتمل على 3D-MPL «QS21 وتوكوفيرول tocopherol في مستحلب زيت في ماء في طلب البراءة الدولية 15/1771٠١ ويعتبر تكوين مفضل.
وطبقاً لذلك في تجسيم الاختراع الحالي يتم إعداد لفاح a vaccine يتضمن على بروتين مطابق للاختراع مساعد بموفوسفوريل ليبيد monophosphory! lipid A أو مشتق منه؛ وبصفة خاصة 3D-MPL
ويفضل أن يتضمن اللفاح a vaccine إضافياً على صابونين 5800010؛ ويفضصل أكثر 0521.
ويفضل أن يتضمن التكوين إضافياً على مستحلب يت في ماء وتوكوفيرول tocopherol ويعد الاختراع الحالي أيضاً طريقة لانتاج تكوين لقاح vaccine 8 وتتضمن على خلط بروتين الاختراع الحالي سوياً مع مادة سواغة مقبولة صيدلانياً؛ مثل 3D-MPL
وقد يتضمن لفاح a vaccine الاختراع الحالي إضافياً على بروتينات HIV proteins أخرى؛ Jia جليكوبروتين glycoprotein الغلاف gpl60 أو مشتقة 120 .gp
وفي صورة 580 os يتعلق الاختراع ببروتينات HIV Nef أو HIV Tat أو مشتق منه معبر عنه في Pichia pastoris
١.
ويتم أيضاً وصف الاختراع بالاشارة للامثلة التالية: PAH le
تم إنتاج بروتينات Nef و (Tat إثنين من البروتينات المنظمة المكونة بفيروس نقص المناعة في الانسان HIV-1 في E.Coli وفي الخميرة Pichia Pastoris الغذائية المثيل.
وتم إختيار الجين 066 من الجزء المعزول (Cell) Bru/Lai 40: 4- اااء (YaAe لهذه المخلفات حيث يكون هذا الجين بين هذه التي تعتبر متعلقة أكثر بالجزء Consensns من Nef
وكانت المادة البادئة للجين Bru/Lai nef عبارة عن جزء DNA به ١١0 قاعدة نيتروجينية مستنسخ على حامل التعبير الثديي (pcDNA3/Mme) peDNA3 وينشاً الجين Tat من المستنسخ الجزيئي 81110. وتم إستقبال هذا الجين كمستنسخ 0002 ]11 HTLV يسمى 0171م ومذكور في (Science 774 صفحة 19= AAC VY
.10. Coli في 1117-1 tat و HIV-1 nef التعبير عن تتابعات -١
تم وضع تتابعات مكونة للبروتين Las Nef إندماج تتابعات nef 188 في حاملات البلازميد: pRIT14586 و pRIT14589 (إنظر شكل .)١
وتم إنتاج إندماج Nef و Nef-TaT كبروتينات إندماج باستخدام شريك إندماج جزء من البروتين protein D والبروتين protein D هو بروتين إرتباط الجلوبيولين المناعي (1 المعرض عند سطح البكتريا السالبة ‘Haemophilus influenzae a jad
ويحتوي 0111114586 تحت تحكم البروموتر (APL promoter تتابع DNA المشستق من البكتيريا Haemophilus influenzae والذي يكون أول ١١١ حمض أميني amino في البروتين FEY 1735 4 (Infect.
Immun) D 137١)؛ فوراً متبوعاً بمنطقة موضع إستنساخ متعدد زائد تتابع DNA مكون لمجموعة جليسين glycine واحدة؛ ١ هفستيدين histidines وكودون codon وقف (شكل ١أ).
ويصمم هذا الحامل للتعبير عن بروتين إندماج معالج محتوي على دهون مذيل بهستيدين و1010 (بروتين إندماج (LipoD ويتم تخليق بروتين الاندماج كبادئ بتتابع إشارة طويل به
١١ ١
-١١-
VA عند الموضع cysteine مجموعة حمض أميني 0 وبعد المعالجة؛ يصبح السيستين VA الطرفية والتي يتم تعديلها بعد ذلك amino في جزئ البادئ هو مجموعة الحمض الاميني .)ب١ بأحماض دهنية مرتبطة تساهمياً (شكل protD متماثل تقريباً مع 081114586 باستنثاء أن التتابع المشتق من pRIT14589 و NA يبدأ فوراً بعد كودون السيستين وينتج التعبير عن هذا الحامل في بروتين إندماج مذيل بهستيدين غير محتوي على (Prot دهون (بروتين إندماج و «ProtD-nef-His «LipoD-nef-tat-His «LipoD-nef-His وتم عمل اربع مخلقات: .ProtD-nef-tat-His وإستخدام أخر (pRIT14586 وتم عمل أول إثنين من المخلقات باستخدام حامل التعبير pRIT14589 أثنين من المخلقات الحامل لانتاج بروتين الاندماج ECLD-NI تخليق الفصيلة المعادة الاتحاد الجيني ١-١ .LIPOD-Nef-HIS تم تكبير أعداد الجين pRIT14595 lipoD-nef-His تخليق بلازميد التعبير ١-١-١ بالبادشات 01 و pcDNA3/Nef من البلادزرميد PCR بواسطة (Bru/Lai (الجزء المعزول 5 .02
Ncol :)١ بادئ 01 (بيان تتابع رقم
SATCGTCCATG. GGT. 660 AAG. 166. 13
Spel بادئ 02 (بيان تتابع رقم ؟):
S'CGGCTACTAGTGCAGTTCTTGAA 3' وتنتهي عند النيوكليوتيد AYOV nucleotide عند النيوكليوتيد nefDNA وتبدأ المنطقة .)١٠18ف AY -4 6 «Cell) 491 nucleotide
لج وتم إدخال موضع قطع محدد 21601 (والذي يحمل الكودون ATG على الجين nef (gene عند الطرف ©' في جزء PCR بينما تم إدخال الموضع Spel عند الطرف MY وتم قطع جزء PCR الناتج وبلازميد التعبير 0181114586 بواسطة JS من Neol و Spel وتنقيته على جيل أجاروز cagarose gel وربطة وتحويله في خلية العائل E. coli المناسبة؛ فصيلة 8. وهذه الفصيلة هي ليسوجين A lysogen مشفر المشتقة من 1199 والتي تكون and cI857 ,"ل A-8 (chiD-pgl), A-HI (cro-chlA), ,0لد1 : : galE وأستقبل البلازميد الناتج المعاد الاتحاد الجيني؛ بعد تأكيد الجزء المكبر من nef بمعرفة التتابع (Lila (إنظر مقطع )= )= La (Y يلي؛ الاسم PRITI4595 -١ -١ ؟ إختيار المحولات من Coli .2 فصيلة ARS بها pRIT14595 عندما تحول في صيلة عائل (ARS E.coli يوجه البلازميد المعاد الاتحاد الجيني الانتاج المحفز بالحرارة للبروتين المخلط. تم تحليل إنتاج البروتين LE) protein للتحفيز بالحرارة من محولات عديدة من lipoD-Nef-His معادة الاتحاد الجيني بواسطة SDS-PAGE المصبوغ بواسطة Coomassie Blue وأوضحت جميع المحولات المحللة إنتاج بروتين متباين قابل للتحفز بالحرارة. وتم تفييم وفرة بروتين الاندماج المعاد الاتحاد الجيني Lipo D-Nef-Tat-His عند 96٠١ من البروتين protein الكلي. وتم إختيار واحد من المحولات وإعطاءه العدد accession المعملي ECLD-N1 وتم إعادة عزل البلازميد المعاد الاتحاد الجيني من الفصيلة (ECLD-NT وتم تأكيد تتابع المنطقة المكونة nef-His بمعرفة التتابع أتوماتيكياً. واستقبل هذا البلازميد الاسم الرسمي 0-5 ويتكون بروتين الاندماج Lipo Denef-Hi المعالج تماماً والمعاد الاتحاد الجيني والمحتوي على أسيل والمنتج بفصيلة ECLD-N1 من: “"أحماض دهنية ١١ 5١ yee © 4 حمض أميني AMINO من بروتين D (بداية من الحمض الاميني ١9 وامتداداً إلى ١١١ حمض أميني). © مثيونين methionine ل؛ مكون باستخدام موضع إستنساخ 14601 في pRIT14586 (شكل .)١ 8 حمض أميني amino من البروتين Nef (بداية عند الحمض الاميني ؟ وإمتداداً إلى الحمض الاميني .)7١6 threonine (sy f° ل وسرين serine مكون بطريقة الاستنساخ (مستنسخ عند الوضع Spel في (pPRIT14586 *"مجموعة جليسين glycine واحدة و 7- هستيدين histidines PROT D- لانتاج بروتين إندماج ECD-NT تخليق فصيلة معاد الاتحاد الجيني ¥ -١ .Nef-HIS كان تخليق بلازميد التعبير pRIT14600 المكون لبروتين الاندماج Prot D-Nef-His مماثل لتخليق البلازميد المذكور في مثال ١ -١ -١ باستثناء أنه تم إستخدام PRIT14589 كبلازميد مستقبل للجزء nef المكبر بواسطة PCR ويتم تحويل الفصسيلة E. coli ARS8 بواسطة 081114600 وتم تحليل الخلايا المحولة كما ذكرت في مثال -١ -١ ؟. وأخذت الخلايا المحور عدد accession معملي ECD-N1 -١ ¥ تخليق الفصيلة ECLD-NT6 المعادة الاتحاد الجيني لانتاج بروتين الاندماج D-Nef-Tat-HIS 1100 ١ =F =) تخليق بلازميد التعبير lipo D-Nef-Tat-His 0181114596 تم تكبير أعداد الجين tat (الجزء المعزول 31110) بواسطة PCR من مشتق من البلازميد 0971م ببادئات 03 و 4. وتم إدخال مواضع قطع Spel عند OS من طرفي جزء PCR Spel :)3 بادئ 03 (بيان تتابع رقم:
SATCGTACTAGT. GAG. CCA. GTA. GAT. 03
Spel ١١ 5١ yo :)4 بادئ 04 (بيان تتابع رقم:
S'CGGCTACTAGTTTCCTTCGGGCCT 3 ويتم توضيح تتابع النيوكليوتيد nucleotide للجين tat المكبر في المستنسخ 0371م (YAS (YY <4 4 Science) وتغطى النيوكليوتيد 4٠ 4 nucleotide © إلى النيوكليوتيد -Y44A nucleotide وتم قطع IS من الجزء الناتج من PCR. والبلازميد PRIT14595 (المعبر عن البروتين (lipoD-Nef-His protein بانزيم القطع «Spel وتنقيته على جيل أجاروز agarose gel وربطه وتحويله في خلايا ARSE مختصة. واستقبل البلازميد الناتج المعاد الاتحاد الجيني؛ بعد تأكيد تتابع tat المكبر بمعرفة التتابع أوتوماتيكياً (إنظر مقطع -١ *- 7 فيما يلي)؛ الاسم 6 م. —F -١ ؟ إختيار الخلايا المحولة من الفصيلة ARSS بالبلازميد 081114596 تم إنماء الخلايا المحولة؛ وتحفيزها بالحرارة وتحليل هذه البروتينات dally proteins المصبوغ بواسطة Coomassie Blue وتم تقييم مستوى إنتاج البروتين المعاد الاتحاد الجيني عند 961١ مسن البروتين protein الكلي. وتم إختيار فصيلة واحدة معادة الاتحاد الجيني وأخذت الاسم المعملي -ECLD-NT6 وتم sale) عزل البلازميد المعاد الاتحاد الجينسي lipoD-nef-tat-His من الفصيلة 5010-66 ومعرفة تتابعه وإعطائه الاسم الرسمي PRIT14596 ويتكون بروتين الاندماج Lipo D-Nef-Tat-His المعالج تماماً والمعاد الاتحاد الجيني المحتوي على أسيل المنتج بالفصيلة ECLD-N6 من: “أحماض دهنية ١١ (بداية من الحمض الاميني protein D من بروتين amino حمض أميني ٠١5 حمض أميني). ١١١7 وامتداداً إلى *"مثيونين «A methionine مكون باستخدام موضع إستنساخ 11601 في pRIT14586 (شكل .)١
“Noo
aan 8 أميني amino من البروتين Nef (بداية عند الحمض الاميني ؟ وإمتداداً إلى الحمض الاميني (YT
“ثريونين A threonine وسرين serine مكون بطريقة الاستنساخ.
8 حمض أميني amino من البروتين Tat (بداية عند الحمض الاميني ؟ وإمتداداً إلى الحمض الاميني (AT
*ثريونين A threonine وسرين a serine مدخل بطريقة الاستنساخ
“"مجموعة جليسين glycine واحدة و ١ هستيدين 119001068.
-١ ؛ تخليق الفصيلة 200-271 المعادة الاتحاد الجيني لانتاج بروتين الاندماج PROT D-Nef-Tat-HIS
كان تخليق بلازميد التعبير pRIT14601 المكون لبروتين الاندماج Prot D-Nef-Tat- (Blas His لتخليق البلازميد المذكور في المثال )= = ١ باستثناء أنه تم إستخدام PRIT14600 كبلازميد مستقبل للجزء nef المكبر بواسطة PCR
وتم تحويل الفصيلة 21858 E. coli بواسطة 0181714601 وتحليل الخلايا المحولة كما ذكر سابقاً. وأخذت الخلايا المحولة المختارة العدد المعملي 1 50-77.
"- التعبير عن تتابعات HIV-1 nef و tat 1117-1 في PICHIA PASTORIS تم التعبير عن البروتين (Nef البروتين Tat والاندماج Nef-Tat في الخميرة Pichia pastoris الغذائية المثيل تحت تحكم البروموتر promoter أوكسيديز oxidase الكحول القابل للتحفز (AOX1) وللتعبير عن هذه الجينات التي تخص 1117-1 تم إستخدام نسخة معدلة من الحامل المتكامل (INVITROGEN) PHIL-D2 وتم تعديل هذا الحامل باسلوب يبدأ فيه التعبير عن البروتين protein المتباين فوراً بعد الكودون ATG codon الاصلي في الجين gene 4071 وينتج بروتين معاد الاتحاد الجيني بذيل من مجموعة جليسين glycine واحدة و ١ مجموعات هستيدين
© تعوتةنوئط. وتم تخليق هذا الحامل PHIL-D2-MOD باستنساخ رابط الاوليجونيوكليوتيد oligonucleotide بين المواضع المتجاورة Asull و EcoRI في الحامل PHIL-D2 (إنظر
EN
Xbal و Spel (Ncol الهستيدين» يحمل هذا الرابط مواضع قطع LA وبالاضافة (YF شكل nef-tat والإندماج tat nef تم إدخال agin pRIT14598 «(Nef-His (المتكونة للبروتين pRIT14597 تخليق الحاملات المتكاملة ١-7 .(Nef-Tat-His و 081114599 (المكونة للإندماج (Tat-His (المكونة للبروتين ° تم تعديل الجين nef بواسطة PCR من البلازميد pcDNA3/Nef بواسطة lay 01 و 02 (أنظر مقطع ١-١-١ تخليق (PRIT14595 وتم قطع IS من الجزء الناتج من PCR والحامل المتكامل PHIL-D2-MOD بواسطة 11601 و «Spel وتنقيتهم على جيل أجاروز وربطهم لتكوين البلازميد المتكامل pRIT14597 (أنظر شكل Ar وتم تكبير الجين tat بواسطة PCR من مشتق من البلازميد 1 pCV بواسطة بادئات 05 ٠ و 04 (أنظر مقطع ١-2-١ تخليق»؛ 2181114596): بادئ 05 (بيان تتابع رقم 0( .S'ATCGTCCATGGAGCCAGTAGATC 3' وتم إدخال موضع القطع Neol عند الطرف ©' في الجزء PCR بينما تم إدخال موضع Spel عند الطرف © بواسطة بادئ 04. وتم قطع JIS من الجزء PCR الناتج والحامل PHIL D2-MOD بواسطة 11601 و «Spel وتنقيتهم على جيل أجاروز وربطهم لتكوين البلازميد ١ المتكامل pRIT14598 ولتخليق 011114599 تم ربط جزء 9٠١ DNA قاعدة نيتروجينية مناظر لتتابع يكون nef-tat-His بين مواضع EcoRI المقطوعة (14 بوليمريز) و 11601 في الحامل PHIL-D2- .MOD وتم الحصول على الجزء الذي يكون nef-tat-His بواسطة قطع Xbal المقطوعة T4) بوليمريز) و 11601 في .PRIT14596 .(his4) 55115 Pichia pastoris 7-؟ تحويل الفصيلة Y. والإندماج Tat-His «Nef-His المعبرة عن Pichia pastoris للحصول على الفصائل الحاملة لتسجيلات التعبير NotI تم تحويل الفصيلة 65115 بالأجزاء الخطية «(Nef-Tat- His الخاصة زائد الجين 11154 لتكملة 154 في جينوم العائل. ويفضل تحويل 65115 بالأجزاء الخطية sale) (Notl الإتحاد الجيني عند الجزء AOXI
١ وتم تعيين نوع dot blot وتم إختيار مستنسخات مكملة متعددة النسخ بالتحليل الكمي (Mut أو الإستبدال (نوع ظاهري (Mutt التكامل؛ الإدخال (نوع ظاهري ومن كل تحويل؛ تم إختيار متحول واحد يوضح مستوي إنتاج عالي للبروتين المعاد الاتحاد الجيني. المعاد الإتحاد Nef-His لإنتاج البروتين (Mutt الفصيلة 71738 (نوع ظاهري 0 محتوي على ميريشيل والذي يتكون من: amino acid حمض أميني 7٠١ الجيني؛ بروتين به
Myristic acid حمض ميريستيك *
PHIL- مكون بإستخدام موضع الإستنساخ 14601 في الحامل methionine مثيونين © .D2-MOD (بدايسة من الحمض الأمينسي Nef في البروتين amino acid أميني aan Yeo © ٠١ )٠١١ amino acid أو إمتداداً إلى الحمض الأميني amino acid مكون بطريقة الاستنساخ (إستنساخ عند موضع serine وسرين threonine ثريونين © .11111-02-2403 في الحامل Spel -histidines واحدة و 6 هستيدين glycine جليسين dc gana © لإنتاج البروتين 181-118؛ بروتين به (Mutt الفصيلة 71739 (نوع ظاهري Yo والذي يتكون من: amino acid حمض أميني 11601 مكون بإستخدام موضع الاستنساخ methionine (ys sie © ١ (بداية عند الحمض الأميني Tat البروتين (amino acid حمض أميني Ao ؟ (AT وإمتداداً إلى الحمض الأميني مدخلين بطريقة الاستنساخ serine وسرين threonine ف © ثريونين histidines واحدة و 7 هستيدين glycine مجموعة جليسين © لإنتاج بروتين الاندماج المعاد الاتحاد الجيني (Mut- (نوع ظاهري Y1737 الفصيلة حمض أميني محتوية على مبريستيل والذي يتكون من: YoY و1217 بروتين به
Myristic acid حمض ميريستيك © 11601 مكون بإستخدام موضع الاستنساخ «methionine مثيونين ° Yo
-١ من الحمسض الأميني Alay) Nef من البروتين amino acid حمض أميني Yeo © (Y +7 وإمتداداً إلى الحمض الأميني ¥ amino acid مكون بطريقة الاستنساخ serine وسرين threonine ثريونين ° amino (بداية من الحمض الأميني Tat من البروتين amino acid حمض أميني AS ° (AV amino acid لنعة ؟ وإمتداداً للحمض الأميني © مدخلين بطريقة الاستنساخ serine وسرين threonine ثريونين ° histidines واحد و 1 هستيدين glycine مجموعة جليسين ©
Pichia pastoris في HIV-1 Tat التعبير عن المحور —¥ محور معاد Tat قد تم أيضاً التعبير عن بروتين (Nef-Tat كبروتين الإندماج المحور المحور غير نشط بيولوجياً مع الحفاظ على Tat الإتحاد الجيني . ويجب أن يكون البروتين - ٠ الإبيتوبات المناعية الخاصة به. (Tulane (جامعة D. Clements وتم إختيار جين )18 محور مضاعف؛ مخلق بواسطة لهذه المخلقات. طفرات في منطقة الموضع (BHIO (الناشئ من مستنسخ جزيئي tat ويحمل هذا الجين (Glu +- Asp80 5 Lys +- Arg78) RGD روفي جزء (Ala « Lysdls) الفعال ٠١ (Y23Y فك كت 17٠0 (Virology) و ECORI المستنسخ فرعياً بين المواضع cDNA المحور كجزء tat وتم إستقبال الجين (PCMVLys41/KGE) CMV داخل بلازميد تعبير 1 (His محور- Tat تخليق الحاملات المتكاملات 082114912 (المكون للبروتين ١-# (His = محور Nef-Tat (المكون للإندماج pRIT14913 و ٠ pCMVLys41/KGE من البلازميد PCR بواسطة tat تم تكبير أعداد الجين المحور (PRIT14598 تخليق ١-7 بالبادئات 05 و 04 (أنظر مقطع بينما تم إدخال موضع PCR عند الطرف ©' في الجزء Neol وتم إدخال موضع القطع
PHIL-D2- الناتج والحامل PCR وتم قطع كلاً من الجزء .04 (sadly فرطلا عند Spel ya وتنقيتهم على جيل أجاروز وربطهم بالبلازميد المتكامل «Spel بواسطة 11601 و MOD pRIT14912 من البلازميد PCR بواسطة tat تم تكبير أعداد الجين المحور (pRIT14913 ولتخليق (PRIT14596 تخليق ١-7-١ بالبادئات 03 و 04 (أنظر مقطع pCMVLys41/KGE (Nef-His الناتج والبلازميد 081114597 (المعبر عن البروتين PCR هه وتم قطع الجزء
PRIT14913 وتنقيته على جيل أجاروز وربطه لتكوين البلازميد المتكامل «Spel بإنزيم قطع 55115 Pichia pastoris *-؟ تحويل الفصيلة
His - المحور Tat المعبرة عن البروتين Pichia pastoris تم الحصول على الفصائل بإستخدام طرف التكامل وإختيار فصيلة معادة الاتحاد الجيني (His محور- Nef-Tat والإندماج YY المذكورة سابقاً في المقطع ٠ - المحور Tat وتم إختيار إثنين من الفصائل المعادة الاتحاد الجيني لإنتاج البروتين
Y1776 و (Mutt (نوع ظاهري Y1775 amino acids بروتين به 95 حمض أميني «His (نوع ظاهري -1ن2).
Nef-Tat وتم إختيار فصيلة واحدة معادة الاتحاد الجيني معبرة عن بروتين الإندماج (نوع ظاهري -1ن11). Y1774 :amino acids بروتين به 07 حمض أميني His المحور- V0 (Pichia pastoris) Nef-Tat-His ؛؟- تنفية بروتين الإندماج معادة الإتحاد Pichia pastoris جم من خلايا VE قد تم تطوير مخطط التنقية من ويتم إجراء خطوات 20 Dyno-mill OD 55 الجيني (وزن مرطب أو مائي) أو جزء متجانس
Nef-Tat الكروماتوجرافي عند حرارة الغرفة. وبين الخطوات؛ الحفاظ على الأجزاء الموجبة طول الليل في حجرة باردة (+4*م)؛ ولفترة أطول؛ يتم تجميد العينات عند -؛ أتم. ٠
سول £71 جم من خاايا Pichia pastoris سُِ تجانس محلول منظم: ؟ لتر 56 ملي مول POs OD ¢V =pH نهائي: .© © إضطراب Dyno-mill )€ مرات) 1 الطرد المركزي دوار 1810/ 100٠0 لفة في الدقيفة/ ٠١ دقيقة/ عند حرارة الغرفة 1 ٠ جزء مقرب Dyno-mill 1 الغسل محلول منظم Y لتر ٠١ ملي مول POs (ساعة- عند 4تم) Vou -,5 =pH ملي مول- NaCl 960.5 إمبيجين I ١١ الطرد المركزي دوار 18-10/ 0٠ لفة في الدقيفة/ 3٠ دقيقة/ عند حرارة الغرفة 1 الجزء المترسب Y. 1 إذابة NiO) يم) محلول منظم: +130 ملي ٠١ ملي مول =pH PO, مدرلا Ve. ملي مول -NaCl ¢ مول GuHCl Yo ل
إختزال Oi) مول حمض ”؟- ميركابتو ١,7 + درجة حرارة الغرفة- في الظلام) —4H) 2-mercaptoethanesulfonic سلفونيك (إضافة sodium salt ملح صوديوم cacid (بواسطة Vio مضبوط إلى pH بودرة)/ 0 قبل التحضين (NaOH مول ١,5 محلول \ Carboxymethyl Jie إضافة كربوكسي (نصف ساعة- حرارة الغرفة- في الظلام) + ,+ مول يودو أسيتاميد (إضافة (بواسطة Ve مضبوط إلى pH بودرة)/ Va مول) قبل التحضين +,0 NaOH محلول 1 ملي مول ٠١ كروماتوجرافي قابلية لأيون معدن مثبت محلول منظم_للإتزان: ؛ NaCl ملي مول ٠٠١ =V,0 0ط ٠١ Qiagen) لل -NTA - أجاروز Gu HCl من راتينج) مول Vo محلول الإتزان )١ محلول منظم:
POs ملي مول ٠ (Y مول ١ -14801 ملي مول ٠٠١ =V,0 pH
Urea يوريا POs ملي مول ٠ )" ل مول ١ ~NaCl ملي مول ٠٠١ -V,0 pH ملي مول إيميدازول Yo - Urea يوريا Imidazol POs ملي مول ٠١ محلول منظم للفصل: مول ١ -11801 ملي مول ٠٠١ -V,0 pH Yo
الال يوريا Urea ©,+ مسول إيميدازول Imidazol { تخفيف أقل إلى درجة قوة أيونية fms VA سما o محلول منظم للتخفيف: ٠١ ملي مول POs ١ —V,2 pH مول يوريا Urea ! كروماتوجرافي لاستبدال الكاثيون على محلول منظم للإتزان: ٠١ ملي مول Yor 7,5 0+ ٠١ —Pharmacia) SP Sepharese FF ملي مول 2٠ -NaCl ٠ .ملي من راتينج) مول يوريا Urea محلول منظم للغسل: )١ محلول منظم للإتزان ؟) ٠١ ملي مول POs Yoo ~V,o pH ملي مول ١ ~NaCl مول ١١ يوريا Urea محلول منظم للفصل: ٠١ ملي مول بورات pH 4- ؟ مول ١ -NaCl مول يوريا Urea v ٠ - التركيز إلى © مجم/ ملي غشاء أوميجا ٠ كيلو دالتون (Filtron) َُ كروماتوجرافي الترشيح خلال الجيل على محلول منظم_للفصل: ٠١ ملي مول Superdex X200 XK +0 11و 2,5 Yor ملي مول NaCl ٠١ Yo = 1 مول Urea Lys
الج ٠7١ —Pharmacia) ملي من راتينج © ملي من عينة/ حقن © مرات حقن J الفصل الغشائي محلول منظم: ٠١ ملي مول POs ٠5٠١ - 4 (2°¢ —N/O) ملي مول =NaCl © مول 2 أرجينين Arginin * J الترشيح المعقم YY Millex GV ,+ ميكرومتر * نسبة: ١5 مول أرجنين Arginin لتركيز بروتين 10٠١0 ميكروجرام/ ملي النقاء ٠١ يتم توضيح مستوى النقاء كما تم تقييمه بواسطة SDS-PAGE في شكل § بالصبغ بواسطة Daiichi Silver وفي شكل © بواسطة 0250 .Coomassie blue بعد خطوة :Superdex200 > 96950 بعد خطوات الفصل الغشائي والترشيح «raked 9695 الإستخلاص ١ يتم تنقية )© مجم من البروتين Nef-Tat-his من VET جم من خلايا Pichia 5 معادة الإتحاد الجيني )= " لتر من جزء متجانس 55 OD 1لل0--01700). —o لتحضير اللقاح يتضمن لقاح محضر طبقاً للإختراع على ناتج التعبير من DNA معاد الاتحاد الجيني يكون أنتيجين antigen كما يوضح في مثال ١ أو ؟ وكمادة مساعدة؛ ويتضمن التكوين على Yo خليط من مونوفو سفوريل ليبيد A محتوي على أسيل في 7-دي- أوكسي de-O-acylated 3 3D-MPL و 0521 في مستحلب زيت foil ماء water 3D-MPL عبارة عن صورة منزوعة السمية كيميائياً من الليبو بولي سكاريد (LPS) من البكتريا السالبة الجرام .Salmonella minnesota
إل وقد أوضحت التجارب التي تمت عند Smith Kline Beecham Biologicals أن 3D-MPL المتحد مع مواد حاملة متنوعة يحفز بأسلوب قوي SIS من المناعة السائلة ونوع 1 من المناعة الخلوية. 1 هو أحد الصابونين المتقي من مستخلص خام من نخاع شجرة «Quillaja Saponaria Molina 0 والذي له فاعلية قوية مساعدة: حيث يحفز Ss من تكائر الليمف المحدد للأنتيجين antigen و CTLs لأنتيجينات 585 عديدة. وقد أوضحت التجارب التي تمت عند Smith Kline Beecham Biologicals تأثير معضد واضح لاتحاد من 3D-MPL و 0521 في تحفيز IS من إستجابات المناعة السائلة والمناعة الخلوية من نوع THI yo ويتكون المستحلب زيت foil ماء water من ؟ زيت oils (توكوفيرول tocopherol وإسكوالين «(squalene و PBS محتوي على توين Tween 80 As كمستحلب. ويتكون المستحلب من 9650 اسكوالين squalene 9656 توكوفيرول tocopherol 900.4 توين Av Tween 0 وله متوسط aaa جزيئي ٠8١ نانومتر (أنظر طلب البراءة الدولية 50/177١ (WO 95/17210 ye وقد أثبت التجارب التي تمت عند Smith Kline Beecham Biologicals أن الربط المساعدة لهذا المستحلب زيت foil ماء water مع 3D-MPL/QS21 يزيد أيضاً خواصها المحفزة مناعياً. تحضير المستحلب زيت foil ماء water (مركز لضعفين) يتم إذابة توين Tween 80 Av في محلول ملحي منظم من الفوسفات phosphate (PBS) Yo لاعطاء محلول 967 في PBS ولاعطاء ٠٠١ ملي من مستحلب مركز لضعفين يتم دوران © جم من DL ألفا توكوفيرول alpha tocopherol و © ملي اسكوالين squalene لخلطهم جميعاً. ويتم إضافة 0 ملي من محلول [PBS توين Tween وخلطهم جميعاً. وبعد ذلك يتم إمرار المستحلب الناتج خلال سرنجة وأخيراً يتم تميعه بأسلوب دقيق بإستخدام آلة تميع دقيق 211105. ولقطرات الزيت oil الناتجة حجم حوالي ١8١ نانومتر.
و تحضير تكوين زيت اذه في ماء water تم تخفيف أنتيجين محضر lids للمثال ١ أو ؟ )© ميكروجرام) في PBS مركز ٠١ أضعاف pH 1,8 وماء water قبل إضافة متتابعة من 5862؛ 3D-MPL )© ميكروجرام)؛ 1 (* ميكروجرام) و © ميكروجرام/ ملي ثيومرسال كمادة حافظة عند فترة # دقائق. 0 وحجم المستحلب يساوي 969١ من الحجم الكلي )00 ميكروجرام لجرعة ٠٠١ ميكرولتر). وتم إجراء جميع التحضينات عند حرارة الغرفة بالاهتزاز. = تكوين مناعي بالنسبة إلى Tat و Nef-Tat في wal sil تم إجراء تمييز الاستجابة المناعية المحفزة بعد التحفيز المناعي بواسطة Tat و Nef- Tat وللحصول على معلومات عن مستويات النوع المشابه والمناعة الخلوية (CMI) تم عمل Vo تجربتين تحفيز في الفئران. وفي التجربة الأولي تم تحفيز الفثران Lelia مرتين في أسبوعين منفصلين في طبقة القدم بواسطة Tat و Nef-Tat في الصورة المؤكسدة أو المختزلة؛ على الترتيب. وتم تكوين أنتيجينات في مستحلب زيت oil في water ele متضمن على اسكوالين squalene توين TMA tween (بولي أوكسي إثيلين سوربيتان أحادي أوليات 3D-MPL «QS21 (polyoxyethylene sorbitan monooleate و Js od s— Sg —oc «tocopherol Vo ومجموعة مقارنة مستقبلة للمادة المساعدة فقط. وبعد أسبوعين تم الحصول على جميع السيرم الأخير المحفز Lelia وتعريضه لإختبار ELISA المحدد بالنسبة إلى Tat (بإستخدام Tat المحفز للتغليف) لتعيين تركيزات الجسم المضاد والأنواع المشابه (شكل ١أ). وكانت تركيزات الجسم المضاد أعلي في الفئران المستقبلة لبروتين Tat الموكسد. وبصفة dale حفزت الجزيئات المؤكسدة تركيزات جسم مضاد أعلي من الصور المختزلة؛ وحفز Tat ٠ -بمفرده تركيزات جسم مضاد Jef من NefiTat وتم تأكيد الملاحظة الأخير في التجربة الثانية. وبأسلوب مهم؛ إختلف مستوى النوع المشابه للأجسام المضادة المحددة لبروتين Tat إعتماداً على الأنتيجينهات المستخدمة للتحفيز المناعي. وأنتج Tat بمفرده مستوي متزن من IgGl و lawn IgG2a حفز Nef-Tat إنحياز أكبر بالنسبة إلى 19 (شكل 0( وتم تأكيد هذا مرة أخري في التجربة Ap ١١ ١
ا وفي تجربة الفئران الثانية إستقبلت الحيوانات الصور المختزلة فقط من الجزيئات أو المادة المساعدة بمفردها. وبجانب تحليل علم الأمصال (أنظر (Whe تم تقييم إستجابات التكاثر الليمفي من خلايا العقد الليمفية. وبعد إعادة تقييم هذه الخلايا في المعمل بإدخال OH Tat ثيميدين thymidine أو —3H Nef-Tat ثيميدين thymidine o تم قياسها بعد ؛ أيام من الزرع. وأوضح عرض النتائج كدلائل تحفيز أن الاستجابات القوية جداً تم تحفيزها في IS من مجموعات الفئران المستقبلة للأنتيجين antigen (شكل (V وملخص لهذا؛ فقد أوضحت دراسات الفئران Tat وأيضاً Nef-Tat هما أنتيجينات 585 لقاح مرشحين مكونين للمناعة. ويتم تمييز الاستجابة المناعية الموجهة ضد الجزيئين بإستجابات الجسم المضاد العالية بعلي الأقل +965 1801. وفضلاً عن ذلك؛ تم ملاحظة ٠ إستجابات CMI قوية (كما يقاس بالتكاثر الليمفي). =v خواص فعالة للبروتينات Tat و Nef-Tat تم التحقق من الجزيئات Tat و Nef-Tat في الصورة المؤكسدة أو المختزلة للكشف عن قدرتها على الإرتباط مع خطوط خلايا T البشرية. وفضلاً عن ذلك؛ تم تقييم التأثير على نمو خطوط الخلايا هذه. وتم تغليف أطباق ELISA طول الليل بتركيز مختلف من البروتينات Tat ١ و ,D (Nef-Tat الغير متعلق من فيروس herpes simplex النوع 11 أو بمحلول منظم بمفرده للمقارنة. وبعد إزالة محلول التغليف تم إضافة HUT-78 WA إلى الأنابيب. وبعد ساعتين من التحضين تم غسل الأنابيب وتقييم إرتباط الخلايا بقاع الأنابيب ميكروسكوياً. وكقياس كمي تم صبغ الخلايا بطولويدين toluidine أزرق» وتحللها بواسطة (SDS وتعيين تركيز الطولويدين toluidine الأزرق في الجزء الطافي بقارئ طبق ELISA وأوضحت النتائج أن جميع Ye البروتينات الأربعة؛ Tat و 1162188 في الصورة المؤكسدة أو المختزلة تتوسط إرتباط الخلايا بطبق ELISA (شكل 8). ولا يثبت البروتين الغير متعلق lily) غير موضحة) والمحلول المنظم الخلايا. وأوضح هذا أن البروتينات المحتوية على Tat المعبر عنها بأسلوب معاد الاتحاد الجيني تحديداً بخطوط خلايا 7 البشرية. وفي تجربة ثانية تم ترك الخلايا 1101-78 ملامس للبروتينات لمدة ١7 ساعة. وعند Gls Yo فترة التحضين تم توضيح الخلايا بواسطة [711]- ثيميدين thymidine وتعيين معدل yy الادخال كقياس لنمو الخلايا. وثبطت جميع البروتينات الأربعة المشتملة في هذا الإختبار نمو الخلايا كما يقرر بواسطة إدخال النشاط الاشعاعي المنخفض (شكل 3( ولا يتوسط محلول المنظم الخاص بالمقارنة هذه التأثير. المعادة الاتحاد الجيني قادرة على Tat وتوضح هذه النتائج أن البروتينات المحتوية على تثبيط نمو خط خلايا 7 البشري. © قادرة class ll أن هذه Nef-Tat و Tat وكملخص يشير التمييز الفعال للبروتينات البشرية. وفضلاً عن ذلك؛ فإن البروتينات تعتبر قادرة على تثبيط T على الربط بخطوط خلايا نمو خطوط الخلايا هذه. خلال الوصف والعناصر في هذا الوصف؛ لا يقصد بالكلمة 'يتضمن" ومتغيرات الكلمة؛ -مثل "متضمن" و "'يتضمن' أن تستبعد المواد الإضافية؛ المكونات؛ الأعداد الصحيحة أو الخطوات الأخري. ويتم إشتمال مناقشة النصوص؛ الأجزاء الممثلة؛ المواد؛ الأجهزة؛ المقالات وأمثالهم في هذا الوصف بمفردهم لغرض إعطاء نص للإختراع الحالي. ولم يفترض أو يمثل أن أي من أو جميع الموضوعات المكونة لجزء من أساس الصناعة السابقة أو المعرفة العامة الشائعة في المجال المتعلق بالإختراع الحالي حيث يتواجد في إستراليا قبل تاريخ الأسبقية لكل عنصر في Ve هذا الطلب.
Claims (1)
- عناصر_الحماية -١ ١ تركيب لقاح والذي يتضمن على بروتين متضمن على " () بروتين HIV Tat أو مشتق منه مرتبط إما مع () شريك إندماج أو (if) بروتين HIV Nef أو 3 مشتق منه؛ أو ؛؟ (ب) بروتين HIV Nef أو مشتق منه مرتبط إما مع (i) شريك إندماج أو (i) بروتين HIV Tat © أو مشتق منه؛ أو (ج) بروتين HIV Nef أو مشتق منه مرتبط بالبروتين HIV Tat أو مشتق منه وشريك إندماج؛ "في خليط مع مادة سواغة مقبولة صيدلانياً. ١ - تركيب كما ذكر في العنصر ١ ينضمن على بروتين إندماج HIV Nef أو مشتق منه. ١ *- تركيب كما ذكر في العنصر ١ يتضمن على بروتين إندماج HIV Tat أو مشتق منه. ١ +- تركيب طبقاً لأي واحد من العناصر ١ إلى ؟ حيث به يكون المشتق من البروتين Tat هر -_ بروتين Tat محور (به طفرة). ١ #- تركيب طبقاً لأي واحد من العناصر ١ إلى ؛ حيث به يكون المشتق من البروتين Nef هو VY بروتين Nef محور (به طفرة). -١ ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر -١ 0 حيث به يكون شريك الإندماج عبارة عن Y ليبوبروتين أو مشتق منه. ١ #- تركيب كما ذكر في العنصر + حيث به يكون الليبوبروتين هو بروتين لمن Haemophilus Influenza Y أو مشتق منه.Y ] — _ =A \ تركيب كما ذكر في العنصر ل Cua به يتضمن شريك الإندماج بين وول للا حمسض amino acid wd Y عند (NGL بروتين 0 الخاص بفيسروس Haemophilus Influenza BY ١ +- تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى A حيث به يكون البروتين Tat هو Y بروتين Tat الكلي . -٠١ ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى A حيث به يكون البروتين Nef هو Y البروتين Nef الكلي. -١١ ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى ١٠؛ حيث به يتم دمج البروتين Tat بالبروتين HIV Nef وشريك إندماج. -١١ ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى OY حيث به يكون للبروتين ذيل Y هستيدين Histidine es sr) كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى ١١ حيث به يكون البروتين محتوي على 7 كربوكسي مثيل -Carboxymethyl -١4 ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١ إلى oF يتضمن إضافياً على مادة مساعدة. -١ ١ تركيب كما ذكر في العنصر VE حيث به تكون المادة المساعدة عبارة عن مادة مساعدة Y تحفز THIواNT) تركيب كما ذكر في العنصر VE أو ١5 والذي به يتضمن المادة المساعدة على "> مونوفسفوريل ليبتيد A monophosphoryl lipid أو مشستق منه مثل مونوفسفوريل ليبيد ¥ ا monophosphoryl lipid محتوي على أسيل في -١ دي أوكسي .-١7 ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر VE إلى ١١6 يتضمن إضافياً على مادة صابونين Y مساعدة.-١8 ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر ١4 إلى ١١ والذي يتضمن إضاياً على Y مستحلب زيت أآه في water elaHIV gp 160 يتضمن أيضاً على VA إلى ١ تركيب كما ذكر في أي واحد من العناصر -١5 ١ أو مشتقه 0120ع. 7١ ١؟- بروتين معزول أو منقي أساسيا يتضمن على بروتين Tat 1117 أو مشتق منه مرتبط " بالبروتين HIV Nef أو مشتق منه في الاتحاد ‘Tat-Nef 5 Nef-TatAE حمض نووي يكون بروتين العنصر -71١ ١XV ؟؟- عائل محول بحمض نووي في العنصر ١Pichia pastoris E. coli. حيث به يكون العائل إما YY 7؟- عائل كما ذكر في العنصر ١ تتضمن على إعداد عائل كما ذكر في العنصر ؟؟ أو oY طريقة لإنتاج بروتين العنصر mye) التعبير عن البروتين المذكور وإستخلاص البروتين. YY XYAg 3 -— _ -Yo ١ طريقة لتحضير )1( بروتين HIV Nef أو (ii) بروتين HIV Tat كما عرف في العنصر ١ Y في Pichia pastoris وتتضمن هذه الطريقة على خطوات تحويل Pichia pastoris بواسطة DNA YF مكون للبروتين المذكور HIV Nef أو مشتق منه أو بروتين HIV Tat أو مشستق منه؛ 8 والتعبير عنه البروتين المذكور وإستخلاص البروتين. ١ 77- الطريقة في العنصر Yo أو العنصر (Yo تتضمن أيضاً على خطوات إضافة كربوكسي 7 مثيل Carboxymethyl إلى البروتين المعبر عنه. ١ 77؟- طريقة لإنتاج لقاح؛ تتضمن على خليط البروتين من أي واحد من العناصر 74 أو 77 مع ideale " مقبولة صيدلانياً. -YA ١ الطريقة في العنصر YY تتضمن أيضاً على إضاقة 80160 HIV أو مشتقه 120مع. ١ 79- الطريقة في العنصر YE إلى YA تتضمن أيضاً على إضافة مادة مساعدة؛ وبصفة خاصة Y مادة مساعدة تخفز 1111. or ١ تركيب لقاح يتضمن على بروتين معاد الاتحاد الجيني يحتوي على Tat مكون مع خليط " من 3D-MPL 0522 ومستحلب زيت اذه في ماء water -7١ ١ تركيب كما ذكر في العنصر Cua ١ به يتضمن مستحلب الزيت oil في الماء water 0 على اسكوالين «Squalene بولي أوكسي إثيلين سور بيتان أحادي أوليات polyoxyethylene sorbitan monooleate ¥ و —oc توكوفيرول tocopherol ١ 7*- تركيب لقاح طبقاً للعنصر )0 أساسياً كما ذكر هنا سابقاً بالإشارة للمثال 0-YY-— أساسياً كما ذكر هنا سابقاً بالإشارة لأي واحد من الأمثلة. 3٠0 بروتين طبقاً للعنصر -7*7 ١
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9720585.0A GB9720585D0 (en) | 1997-09-26 | 1997-09-26 | Vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA98190877B1 true SA98190877B1 (ar) | 2006-09-10 |
Family
ID=10819735
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA98190877A SA98190877B1 (ar) | 1997-09-26 | 1998-12-15 | بروتينات اندماج تتضمن على بروتينات tat hiv-1 nef hiv-1 comprising fusion proteine and /or nef proteins |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1015596B2 (ar) |
| JP (2) | JP2001518300A (ar) |
| KR (1) | KR100554487B1 (ar) |
| CN (1) | CN1188519C (ar) |
| AR (2) | AR017147A1 (ar) |
| AT (1) | ATE338128T1 (ar) |
| AU (1) | AU746564B2 (ar) |
| BR (1) | BR9812547A (ar) |
| CA (1) | CA2305013C (ar) |
| CO (1) | CO4810339A1 (ar) |
| CZ (1) | CZ302878B6 (ar) |
| DE (1) | DE69835756T3 (ar) |
| DK (1) | DK1015596T4 (ar) |
| ES (1) | ES2272012T5 (ar) |
| GB (1) | GB9720585D0 (ar) |
| HU (1) | HUP0004896A3 (ar) |
| IL (1) | IL135102A0 (ar) |
| NO (2) | NO328824B1 (ar) |
| NZ (1) | NZ503482A (ar) |
| PL (1) | PL195243B1 (ar) |
| PT (1) | PT1015596E (ar) |
| SA (1) | SA98190877B1 (ar) |
| SI (1) | SI1015596T2 (ar) |
| TR (1) | TR200000864T2 (ar) |
| TW (1) | TW499436B (ar) |
| WO (1) | WO1999016884A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA988789B (ar) |
Families Citing this family (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9706957D0 (en) | 1997-04-05 | 1997-05-21 | Smithkline Beecham Plc | Formulation |
| GB9720585D0 (en) * | 1997-09-26 | 1997-11-26 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| GB9820525D0 (en) * | 1998-09-21 | 1998-11-11 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| WO2000050077A1 (en) * | 1999-02-25 | 2000-08-31 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Immunogens comprising a peptide and a carrier derived from h.influenzae protein d |
| ATE342275T1 (de) * | 1999-04-12 | 2006-11-15 | Heart Biosystems Gmbh | Vorübergehend-immortalisierte zellen zur verwendung in gentherapie |
| ES2250151T3 (es) * | 1999-06-29 | 2006-04-16 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Uso de cpg como adyuvante de vacuna contra vih. |
| GB0000891D0 (en) | 2000-01-14 | 2000-03-08 | Allergy Therapeutics Ltd | Formulation |
| PL211762B1 (pl) * | 2000-01-31 | 2012-06-29 | Smithkline Beecham Biolog | Zastosowanie białka fuzyjnego zawierającego białka HIV Tat i HIV Nef lub polinukleotyd kodujący takie białko, białka lub polinukleotydu HIV gp120, białka lub polinukleotydu SIV Nef, adiuwanta indukującego TH1 zawierającego monofosforylolipid A lub jego pochodną i adiuwanta saponinowego oraz kompozycja szczepionki |
| US6472176B2 (en) | 2000-12-14 | 2002-10-29 | Genvec, Inc. | Polynucleotide encoding chimeric protein and related vector, cell, and method of expression thereof |
| GB0110431D0 (en) * | 2001-04-27 | 2001-06-20 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compounds |
| WO2003046124A2 (en) | 2001-11-21 | 2003-06-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
| EP1279404A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-01-29 | Istituto Superiore di Sanità | Use of HIV-1 tat, fragments or derivatives thereof, to target or to activate antigen-presenting cells, to deliver cargo molecules for vaccination or to treat other diseases |
| GB0118367D0 (en) * | 2001-07-27 | 2001-09-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel use |
| EP1944043A1 (en) | 2001-11-21 | 2008-07-16 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
| KR100466382B1 (ko) * | 2002-01-08 | 2005-01-14 | 주식회사 엘지생명과학 | 인간 면역 결핍 바이러스-1, -2 타입의 단백질이 융합된 재조합 콤보 단백질, 이의 생산방법, 이를 포함하는 벡터, 형질전환된 대장균 및 진단키트 |
| GB0206360D0 (en) | 2002-03-18 | 2002-05-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Viral antigens |
| GB0206359D0 (en) | 2002-03-18 | 2002-05-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Viral antigens |
| EP1506223B1 (en) | 2002-05-16 | 2005-11-16 | Bavarian Nordic A/S | Fusion protein of hiv regulatory/accessory proteins |
| GB0225788D0 (en) | 2002-11-05 | 2002-12-11 | Glaxo Group Ltd | Vaccine |
| US20050208482A1 (en) | 2004-03-16 | 2005-09-22 | Cohen David I | Tat-based immunomodulatory compositions and methods for their discovery and use |
| TW200613554A (en) | 2004-06-17 | 2006-05-01 | Wyeth Corp | Plasmid having three complete transcriptional units and immunogenic compositions for inducing an immune response to HIV |
| GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| GB0507003D0 (en) * | 2005-04-06 | 2005-05-11 | Molmed Spa | Therapeutic |
| KR101441843B1 (ko) | 2005-10-18 | 2014-09-17 | 내셔날 쥬이쉬 헬스 | 조건부 불멸화 장기 줄기 세포 및 상기 세포의 제조 및 사용 방법 |
| EP2463362B1 (en) | 2007-11-28 | 2017-11-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian subfamily c adenovirus SAdv-31 and uses thereof |
| AU2008331906B2 (en) | 2007-11-28 | 2014-03-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian E adenovirus SAdV-39 |
| CA2716928C (en) | 2008-03-04 | 2018-04-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenoviruses sadv-36,-42.1, -42.2, and -44 and uses thereof |
| KR101803099B1 (ko) | 2008-05-16 | 2017-11-30 | 타이가 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드 | 항체 및 그 제조 방법 |
| DK2313496T3 (en) | 2008-07-21 | 2014-12-15 | Taiga Biotechnologies Inc | Anukleære differentiated cells, and method for preparation thereof |
| WO2010025421A2 (en) | 2008-08-28 | 2010-03-04 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Modulators of myc, methods of using the same, and methods of identifying agents that modulate myc |
| US8940290B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-01-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenoviruses SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49, and -50 and uses thereof |
| NZ595060A (en) | 2009-03-23 | 2013-05-31 | Pin Pharma Inc | Treatment of cancer with immunostimulatory hiv tat derivative polypeptides |
| EP2435559A1 (en) | 2009-05-29 | 2012-04-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus 41 and uses thereof |
| AU2011332025B2 (en) | 2010-11-23 | 2015-06-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily E simian adenoviruses A1321, A1325, A1295, A1309 and A1322 and uses thereof |
| EP2708561A4 (en) * | 2011-03-15 | 2014-09-24 | Univ Yonsei Iacf | BIO-PIN |
| US9217159B2 (en) | 2012-05-18 | 2015-12-22 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily E simian adenoviruses A1302, A1320, A1331 and A1337 and uses thereof |
| WO2014012090A1 (en) | 2012-07-13 | 2014-01-16 | The Broad Institute, Inc. | Molecular sleds comprising a positively-charged amino acid sequence and a molecular cargo and uses thereof |
| DK2877189T3 (da) | 2012-07-20 | 2021-02-22 | Taiga Biotechnologies Inc | Forbedret rekonstituering og autorekonstituering af det hæmopoietiske kammer |
| US10272115B2 (en) | 2013-03-11 | 2019-04-30 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Production and use of red blood cells |
| US9365825B2 (en) | 2013-03-11 | 2016-06-14 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Expansion of adult stem cells in vitro |
| AU2014329393B2 (en) | 2013-10-04 | 2020-04-30 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory HIV Tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
| EP3142750B1 (en) | 2014-05-13 | 2020-07-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions comprising aav expressing dual antibody constructs and uses thereof |
| US11207421B2 (en) | 2015-04-16 | 2021-12-28 | The Research Foundation For The State University Of New York | Nanostructures comprising cobalt porphyrin-phospholipid conjugates and polyhistidine-tags |
| WO2016168817A1 (en) * | 2015-04-16 | 2016-10-20 | The Research Foundation For The State University Of New York | Nanostructures comprising cobalt porphyrin-phospholipid conjugates and polyhistidine-tags |
| WO2018102678A1 (en) | 2016-12-02 | 2018-06-07 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Nanoparticle formulations |
| US10149898B2 (en) | 2017-08-03 | 2018-12-11 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Methods and compositions for the treatment of melanoma |
| KR20210149746A (ko) | 2019-04-08 | 2021-12-09 | 타이가 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드 | 면역 세포의 동결보존을 위한 조성물 및 방법 |
| AU2020274117A1 (en) | 2019-05-14 | 2021-12-02 | Taiga Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating T cell exhaustion |
| CN117881786A (zh) | 2021-04-27 | 2024-04-12 | 世代生物公司 | 表达治疗性抗体的非病毒dna载体及其用途 |
| WO2023177655A1 (en) | 2022-03-14 | 2023-09-21 | Generation Bio Co. | Heterologous prime boost vaccine compositions and methods of use |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9003010D0 (en) * | 1990-02-09 | 1990-04-04 | Glaxo Group Ltd | Gene expression in yeast cells |
| EP0625052A4 (en) * | 1991-10-21 | 1995-07-19 | Medimmune Inc | SECRETION SIGNAL OF LIPOPROTEIN-ENCODING DNA CONTAINING BACTERIAL EXPRESSION VECTOR. |
| EP2000536A3 (en) * | 1992-08-21 | 2010-06-30 | Biogen Idec MA, Inc. | Tat-derived transport polypeptides |
| PT681483E (pt) * | 1993-01-26 | 2005-11-30 | Wyeth Corp | Composicoes e metodos para distribuicao de material genetico |
| WO1996027389A1 (fr) * | 1995-03-08 | 1996-09-12 | Neovacs | Immunogenes denues de toxicite derivant d'une proteine de regulation retrovirale, anticorps, procede de preparation et compositions pharmaceutiques les renfermant |
| GB9720585D0 (en) * | 1997-09-26 | 1997-11-26 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
-
1997
- 1997-09-26 GB GBGB9720585.0A patent/GB9720585D0/en not_active Ceased
-
1998
- 1998-09-17 PT PT98952625T patent/PT1015596E/pt unknown
- 1998-09-17 TR TR2000/00864T patent/TR200000864T2/xx unknown
- 1998-09-17 DK DK98952625.6T patent/DK1015596T4/da active
- 1998-09-17 ES ES98952625T patent/ES2272012T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-17 CZ CZ20001091A patent/CZ302878B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 NZ NZ503482A patent/NZ503482A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 PL PL98339432A patent/PL195243B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 CA CA002305013A patent/CA2305013C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-17 KR KR1020007003180A patent/KR100554487B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-17 HU HU0004896A patent/HUP0004896A3/hu unknown
- 1998-09-17 IL IL13510298A patent/IL135102A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 AT AT98952625T patent/ATE338128T1/de active
- 1998-09-17 SI SI9830860T patent/SI1015596T2/sl unknown
- 1998-09-17 DE DE69835756T patent/DE69835756T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-17 AU AU10255/99A patent/AU746564B2/en not_active Ceased
- 1998-09-17 BR BR9812547-8A patent/BR9812547A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-09-17 JP JP2000513953A patent/JP2001518300A/ja not_active Withdrawn
- 1998-09-17 WO PCT/EP1998/006040 patent/WO1999016884A1/en not_active Ceased
- 1998-09-17 CN CNB988114321A patent/CN1188519C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-17 EP EP98952625A patent/EP1015596B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-24 AR ARP980104779A patent/AR017147A1/es active IP Right Grant
- 1998-09-25 CO CO98056054A patent/CO4810339A1/es unknown
- 1998-09-25 ZA ZA9808789A patent/ZA988789B/xx unknown
- 1998-10-22 TW TW087117493A patent/TW499436B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-12-15 SA SA98190877A patent/SA98190877B1/ar unknown
-
2000
- 2000-03-23 NO NO20001508A patent/NO328824B1/no not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-12-14 NO NO20076467A patent/NO20076467L/no unknown
-
2009
- 2009-06-30 JP JP2009155916A patent/JP2009213492A/ja active Pending
-
2011
- 2011-02-28 AR ARP110100606A patent/AR080331A2/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA98190877B1 (ar) | بروتينات اندماج تتضمن على بروتينات tat hiv-1 nef hiv-1 comprising fusion proteine and /or nef proteins | |
| AU743616B2 (en) | Synthetic HIV gag genes | |
| KR101501495B1 (ko) | Ｈｉｖ-감염의 예방 및 치료를 위한 백신 | |
| EP0689551B1 (en) | Immunogenic chimeras comprising nucleic acid sequences encoding endoplasmic reticulum signal sequence peptides and at least one other peptide, and their uses in vaccines and disease treatments | |
| US6696291B2 (en) | Synthetic HIV gag genes | |
| EP1427826B1 (en) | HIV- RT-nef-Gag codon optimised DNA vaccines | |
| JPH07509121A (ja) | ｍＲＮＡの阻害／不安定領域の除去方法 | |
| JP2002541069A (ja) | Ｈｉｖペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びｈｉｖによって誘発された抗体を検出する方法 | |
| CN115594742A (zh) | 一种冠状病毒s蛋白变体及其应用 | |
| WO2017113050A1 (zh) | 猪圆环病毒2型的外鞘蛋白质的制备方法及含该外鞘蛋白质的医药组合物 | |
| CA2325345C (en) | Medicaments for inducing cytotoxic t-cells | |
| US20100215681A1 (en) | Fusion proteins comprising hiv-1 tat and/or nef proteins | |
| WO2019059817A1 (en) | VACCINE BASED ON FUSION PROTEIN AND PLASMIDIC DNA | |
| MXPA00002973A (en) | Fusion proteins comprising hiv-1 tat and/or nef proteins | |
| HK1030431B (en) | Fusion proteins comprising hiv-1 tat and/or nef proteins | |
| Bensoussan | Production of recombinant allergen birch pollen betv1a modified with hydrophobic moieties in the host escherichia coli | |
| WO2005051419A1 (en) | Retrovirus-like particles and retroviral vaccines | |
| HK1114395A (en) | Hiv peptides from conserved regions in gag p17 and p24 and their application in e.g. vaccines | |
| HK1066830B (en) | Hiv- rt-nef-gag codon optimised dna vaccines | |
| MXPA99007248A (en) | Synthetic hiv gag | |
| HK1066830A1 (en) | Hiv- rt-nef-gag codon optimised dna vaccines |