SA112340163B1 - طريقة وجزء منشأ لمعزز النبات scbv التخليقي ثنائي الاتجاه - Google Patents

طريقة وجزء منشأ لمعزز النبات scbv التخليقي ثنائي الاتجاه Download PDF

Info

Publication number
SA112340163B1
SA112340163B1 SA112340163A SA112340163A SA112340163B1 SA 112340163 B1 SA112340163 B1 SA 112340163B1 SA 112340163 A SA112340163 A SA 112340163A SA 112340163 A SA112340163 A SA 112340163A SA 112340163 B1 SA112340163 B1 SA 112340163B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
promoter
gene
life
sequence
dna
Prior art date
Application number
SA112340163A
Other languages
English (en)
Inventor
ار. ريت تيرى
الابيد ديا
بينيت سارة
كومار سانديب
جاين سوزان
جوبتا مانجو
Original Assignee
دو اجروسينسيس ال ال سي
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by دو اجروسينسيس ال ال سي filed Critical دو اجروسينسيس ال ال سي
Publication of SA112340163B1 publication Critical patent/SA112340163B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8286—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for insect resistance
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بتقديم أجزاء منشأ constructs وطرق للتعبير الجيني expressing عن جينات متعددة multiple genes خلايا نبات plant cells و/أو أنسجة النبات plant tissues. تشتمل أجزاء المنشأ المقدمة على معزز ثنائي الاتجاه bi directional promoter على الأقل متصل بمجموعات cassettes تعبير جيني عن الجين متعددة، حيث يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع نيوكليوتيد معزز وظيفي functional promoter nucleotide sequence من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر Sugar Cane Bacilliform Virus promoter. في بعض التجسيمات، تستخدم أجزاء المنشأ والطرق المقدمة معزز ثنائي الاتجاه يعتمد على أدنى عنصر معزز أساسي minimal core promoter element من جين Zea mays Ubiquitin-1، أو مكافئ وظيفي منه، وعناصر تتابع نيوكليوتيد من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر. في بعض التجسيمات، تسمح أجزاء المنشأ وطرق المقدمة بالتعبير الجيني عن جينات بين ثلاثة وعشرون. شكل 2

Description

١ ‏التخليقي ثنائي الاتجاه‎ SCBY ‏لمعزز النبات‎ Lite ‏طريقة وجزء‎
Method and construct for synthetic bidirectional
SCBYV plant promoter ‏الوصف الكامل‎ ‏خلفية الاختراع‎ ‏؛ وبخاصة‎ plant molecular biology ‏يتعلق الاختراع الحالي بمجال النباتات الحيوي الجزيئي‎ ‏في النباتات المتحورة وراثياً‎ multiple genes ‏مجال التعبير الثابت للجينات المتعددة‎ i ‏قادرة على أن تتحول‎ plant species ‏تعد كثير من أنواع النباتات‎ transgenic plants ‏وراثياً من أنواع أخرى لتدخل صفات مرغوية محصولياً أو‎ transgenes said ‏بالجينات‎ ٠ ‏أو‎ «nutritional value ‏القيمة الغذائية‎ quality ‏خصائص»؛ على سبيل المثال» تحسين نوعية‎ ‏أو مقاومة الأمراض‎ conferring pest ‏الآفات‎ Ju ‏أو‎ «increasing yield ‏زيادة الناتج‎ stress ‏والسماحية للضغط‎ increasing drought ‏أو زيادة الجفاف‎ «disease resistance ‏(مثل الصبغ‎ horticultural qualities ‏أو تحسين الصفات البستانية‎ «tolerance herbicide ‏أو إضفاء القدرة على مقاومة مبيدات الأعشاب‎ «(growth ‏والنمو‎ 0100060181100 ٠ ‏أو أن تكون لها القدرة على إنتاج مركبات 6007800005 مفيدة صناعياً و/أو مواد‎ resistance ‏على إنتاج_المركبات الصيدلية‎ opal ‏تكون .لها‎ of ‏و/أو‎ alll ge materials plant cells lull ‏إلى خلايا‎ ays ‏لإدخال الجينات المتحورة‎ Sa .pharmaceuticals fertile transgenic plants ‏والاستخلاص التالي للنباتات المخصبة بالجينات المتحورة وراثياً‎ ‏بشكل ثابت للجين المتحور وراثياً أن تستخدم‎ integrated copy ‏التي تحتوي على نسخة متكاملة‎ _ ‏والتي تمتلك الصفات المرغوبة.‎ transgenic plants ‏في إنتاج نباتات متحورة وراثياً‎ mechanisms ‏لتعبير الجين من خلال آليات‎ regulation ‏والتنظيم‎ Control ‏قد يحدث التحكم‎ ‏طريقة تحكم سائدة لتعبير‎ gene ‏للجين‎ Transcription ‏النسخ‎ initiation ‏متعددة. ويُعد بدء‎ sequences ‏ويتم التحكم عامة في بدء النسخ بواسطة تتابعات‎ .gene expression ‏الجين‎ ‏أو المنطقة القبلية‎ 5- flanking ‏الواقعة في ال '5- الجانبي‎ polynucleotide ‏عديد النيوكليوتيد‎ Yo
ا ‎upstream region‏ للجين المراد نسخه ‎Jtranscribed gene‏ وتشير هذه التتابعات مجتمعة إلى كونها كمحفزات ‎promoters‏ وتحتوي المحفزات عامة على إشارات ‎.RNAl signals‏ بوليميراز ‎polymerase‏ لبدء النسخ ولذلك قد يتكون الظلل» الناقل ‎(MRNA) messenger‏ ويتم ترجمة ‎mRNAN‏ الناضج ‎Mature‏ بواسطة الريبوسوم ‎ribosome‏ وبالتالي توليفات © البروتينات 020161705. وتتفاعل البروتينات المرتبطة ‎DNAS‏ بشكل خاص مع تتابعات ‎DNAD‏ ‏المحفزة ‎promoter‏ لتعزز تكوين معقد النسخ ‎transcriptional complex‏ وتقوم ببدء عملية التعبير الجيني ‎.gene expression process‏ وهناك محفزات مختلفة حقيقية النواة منتفصلة ‎eukaryotic promoters isolated‏ ومتصفة عن النباتات التي تحد وظيفية لتدفع بالتعبير الجيني للجينات المتحورة وراثياً في النباتات. ويتم فصل ووصف المحفزات التي تؤثر على تعبير ‎Vy‏ الجين كرد فعل على المؤثرات البيئية ‎cenvironmental stimuli‏ أو إتاحة المواد الغذائية ‎«nutrient availability‏ أو الظروف المضادة ‎adverse conditions‏ والتي ‎Joli‏ الصدمة الحرارية ‎cheat shock‏ أو اللاهوائية ‎canaerobiosis‏ أو وجود معادن ثقيلة ‎.heavy metals‏ وهناك أيضاً المحفزات التي تتحكم في تعبير الجين أثناء التطور ‎development‏ أو في نسيج ‎tissue‏ أو عضو ‎Organ‏ معين. بالإضافة إلى أنه يتم فصل ووصف محفزات بدائيات ‎shal)‏ ‎١‏ المعزولة ‎promoters isolated‏ 81/016ا010 من البكتيريا ‎bacteria‏ والفيروسات ‎virus‏ التي تُعد وظيفية للدفع بتعبير الجين المتحور وراثياً في النباتات. ويتكون محفز حقيقيات النواة النمرذجي ‎promoter js. (typical eukaryotic promoter‏ ‎Jd‏ وعناصر سيس 16076015©-015. وِيُعد المحفز الأدنى هو في الأساس منطقة صندوق ‎box‏ ‎TATA region‏ حيث ربما ترتبط ‎RNA‏ بوليميراز ‎«(polll) polymerase ١١ ١١‏ وبروتين ‎٠‏ الارتباط ‎(TBP) TATA,‏ والعوامل المرتبطة ‎TBP.‏ (18]5) لبدء النسخ. بالرغم من أنه في معظم الأمثلة يتطلب عناصر تتابع غير باعث 1/7/0017 للنسخ المضبوط. وقد وجد ‎Jie‏ هذا التتبع من العناصر ‎elements‏ (مثل؛ المعززات ‎(enhancers‏ للتخلص من مستوى التعبير الكلي للجينات المجاورة ‎«nearby genes‏ غالباً في طريقة ‎Manner‏ موضع ‎position‏ و/أو توجه مستقل 0116013100-170806©00601. ‎Lays‏ تمد التتابعات الأخرى والتي بالقرب من مكان ‎YO‏ بدء النسخ (مثل؛ تتابعات ‎(INR‏ لبعض جينات الااا00 بمكان ارتباط بديل للعوامل التي تساهم
وه ‎Leaf‏ في النشاط النسخي ‎ctranscriptional activation‏ حتى أنها تمد بديلاً عن ذلك بأماكن ارتباط ‎binding‏ المحفز ‎core promoter uly)‏ للنسخ في المحفزات التي تفتقد عناصر ‎TATA‏ الوظيفية. انظر ‎Zenzie-Gregory etal. (1992) J.
Biol.
Chem. 267: Sie‏ 2823-30 © تشمل عناصر تنظيمية للجين ‎gene regulatory elements‏ أخرى على تتابعات تتفاعل مع عوامل ارتباط اللا الخاصة. ويتم الإشارةٍ للبواعث ‎motifs‏ التتابع تلك بعناصر سيس» ‎Wey‏ ‏موضع وتوجه مستقل؛ بالرغم من أنه ربما يتم إيجاد 5 أو '3 إلى تتابع تشفير ‎coding‏ لهذا ‎opal)‏ أو في إنترون 10000. وربما تحدد ‎Jie‏ عناصر سيسء والتي يرتبط بها عوامل نسخ ‎transcription factors‏ خاصة بالنسيج أو خاصة بالتطويرء بصفة فردية أو في مجموعة؛ نمط ‎Vo‏ التعبير الجيني الزماني المكاني ‎spatiotemporal expression pattern‏ للمحفز عند المستوى النسخي ‎(transcriptional level‏ وبشكل نموذجي يؤسس ترتيب عناصر سيس عكس الاتجاه 0 والتالي لها من المحفز الأدنى القطبية ‎polarity‏ لمحفز خاص. وتعد المحفزات في النباتات التي تم وضعها في مستعمرات ‎cloned‏ والمستخدمة بشكل واسع لكل من البحث الأساسي والتطبيق البيوتكنتولوجي ‎biotechnological application‏ بصفة عامة أحادية الاتجاه؛ موجهة ‎Vo‏ فقط جين واحد الذي يتم دمجه عند نهايته /3 (أي؛ مع الاتجاه ‎(downstream‏ انظر على سبيل ‎«Xie et al. (2001) Nat.
Biotechnol. 19)7(:677-9 Jt‏ براءة الاختراع الأميركية ‎TLYAAMNY‏ ‏وقد تم التعرف على العديد من عناصر سيس (أو 'تتابعات تنظيمية عكس الاتجاه ‎upstream‏ ‎(regulatory sequences‏ في محفزات النبات. وتختلف بشكل واسع عناصر سيس تلك في ‎Yo‏ طريقة التحكم التي تنفذها على الجينات المرتبطة بإجراء العملية. وبعض العناصر تعمل على زيادة النسخ للجينات المرتبطة بإجراء العملية كرد ‎Jad‏ للاستجابات البيئية ‎environmental‏ ‎(Jig) responses‏ درجة الحرارة ‎temperature‏ والرطوبة ‎«moisture‏ والإصابة ‎(wounding‏ وربما تستجيب عناصر سيس إلى العظة التطورية ‎developmental cues‏ (مثل؛ التجرثم ‎(germination‏ ونضوج البذور ‎maturation‏ 5660 والتزهر ‎(flowering‏ أو إلى © معلومة مكانية ‎spatial information‏ (مثل؛ خصوصية النسيج ‎(tissue specificity‏ انظر
على سبيل المثال ‎Langridge et al. (1989) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA‏ 86:3219-23. ويُعد نوع التحكم لعناصر المحفز الخاص ذا نوعية داخلية للمحفز بشكل نموذجي؛ أي يتم التعبير على الأرجح عن جين غير متجانس ‎heterologous gene‏ تحت التحكم ‎(id‏ هذا المحفز وفقاً للتحكم للجينات الأصلية ‎native gene‏ والتي منها تم ‎Jie‏ عنصر © المحفز. وربما يتم التبديل لتلك العناصر أيضاً بعناصر أخرى والحفاظ على قدرتهم بالتحكم الداخلي ‎intrinsic control‏ في التعبير الجيني. إنه من الضروري غالباً إدخال جينات متعددة في النباتات من أجل الهندسة الآيضية ‎metabolic‏ ‏9 ورص الصفات ‎trait stacking‏ التي يتم التحكم فيها مراراً بمحفزات متطابقة أو متجانسة. بالرغم من أنه على الأرجح لإسكات الجين على أساس التجانس ‎homology-based‏ ‎(HBGS) gene silencing ٠‏ أن تنش عندما تمتلك الجينات المتحورة وراثياً والتي تم إدخالها محفزات متجانسة ‎homologous promoters‏ تقوم بدفعهم. انظر على سبيل المثال ‎Mol et‏ ‎Plant Mol.
Biol. 13:287-94‏ )1989( .81. وقد تم تسجيل ‎HBGS‏ تحدث بشكل كبير في النباتات المتحورة وراثياً. انظر على سبيل المثال ‎Vaucheretand Fagard (2001) Trends‏ 17:29-35 .689061. وقد تم اقتراح العديد من الآليات لشرح ظاهرة ال1865؛ ويشمل كل منها ‎Vo‏ على الخاصية التي تحفز أليات 5 تعرف خلوي ‎cellular recognition‏ التي تؤدي إلى إسكات ‎silencing‏ الجينات المتكررة ‎repeated genes‏ لتتابع متجانس في المحفز. انظر على سبيل المثال ;107:679-85 ‎Matzke and Matzke (1995) Plant Physiol.‏ ‎Meyer and Saedler (1996) Ann.
Rev.
Plant Physiol.
Plant Mol.
Biol.‏ ‎Fire (1999) Trends Genet. 15:358-63; Hamilton and‏ ;47:23-48 ‎Baulcombe (1999) Science 286:950-2; and Steimer et al. (2000) Plant ٠‏ ‎Cell 12:1165-78‏ وتشمل استراتيجيات تجنب لل ‎HBGS‏ في النباتات المتحورة وراثياً مراراً على تطور المحفزات المخلقة ‎synthetic promoters‏ الني تعد مكافئة وظيفياً ولكن تمتلك التجانس الأدنى للتتابع. ‎aie‏ تستخدم مثل تلك المحفزات المخلقة لتعبر عن الجينات المتحورة في نباتات المحصول ‎plants Yo‏ م000؛ فربما تساعد في تجنب أو تقليل ‎(HBGS‏ انظر على سبيل المثال ‎Mourrain et‏
-- ‎al. (2007) Planta 225(2):365-79; Bhullar et al. (2003) Plant Physiol.‏ 132:988-98. ويمكن لهذه المحفزات ان تتولد بإدخال عناصر سيس المعروفة في امتداد ‎DNAY‏ الجديد أو المُخلق؛ أو بديلاً عن ذلك بواسطة "مجال مبادلة ‎"domain swapping‏ حيث يتم استبدال مجالات المحفز الواحد بمجالات مكافئة وظيفياً من المحفزات الغير متجانسة ‎heterologous promoters ©‏ الأخرى. بالتالي؛ يبقى هناك حاجة لأجزاء ‎(ie‏ وطرق للتعبير الجيني المستفر عن تمحورات وراثية متعددة بأدنى خطورة بشكل فعّال لناتج ‎sae‏ الارتباط الجيني أو فقط تمحور وراثي من خلال التولد ‎Sf breeding‏ الأجيال المتعددة في نباتات معدلة وراثياً. الوصف العام للاختراع يتم في هذه الوثيقة وصف معززات تخليقية خاصة تتضمن أدنى معزز 511لا. في التجسيمات؛ معزز تخليقي ‎synthetic promoter‏ يتضمن أدنى معزز ‎Ubil‏ يتضمن أيضاً على الأقل عنصر تتابع واحد من معزز ‎508١/‏ أو مكافئ وظيفي منه. في بعض الأمثلة؛ قد يكون ذلك المعزز التخليقي ‎iad)‏ /5081 تخليقي") عبارة عن معزز يكون قادر على التحكم بنسخ تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 17116160106 متصل بشكل عملي في خلية نبات ‎-plantcell‏ في الأمثلة ‎(all ١‏ قد يكون معزز ‎SCBV‏ تخليقي عبارة عن معزز ‎SE SCBV‏ الاتجاه تخليقي ‎synthetic bidirectional‏ على سبيل المثال؛ حمض نووي ‎acid‏ 01101616 يتضمن تتابعات نيوكليوتيد ‎nucleotide sequences‏ أدنى عنصر معزز 011لا موجهة في الاتجاه المقابل بالنسبة لعناصر معزز /5081 تكون قادرة على التحكم بنسخ في خلية نبات تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل ‎Lee‏ تحيط بالمعزز. تشتمل العناصر الإضافية التي يمكن تعديلها وراثياً التي تكون ‎Yo‏ متضمنة في معزز ثنائي الاتجاه ‎SCBV‏ تخليقي على إنترونات ‎introns‏ (على سبيل المثال؛ إنترونات كحول نازع للهيدروجين ‎alcohol dehydrogenase‏ (211ل))؛ إكسونات ‎«exons‏ ‏و/أو كل أو جزء من منطقة جين عكس الاتجاه. في أمثلة معينة؛ قد يشتمل معزز ثنائي الاتجاه تخليقي ‎synthetic bidirectional promoter‏ على أكثر من واحد من أي مما سبق.
—y— ‏(على سبيل المثال؛ خلايا نبات) تتضمن‎ cells ‏تشتمل تجسيمات خاصة من الاختراع على خلايا‎ ‏تخليقي أو مكافئ وظيفي منه. على سبيل المثال؛ قد تشتمل التجسيمات الخاصة‎ SCBV ‏معزز‎ ‏ثنائي الاتجاه تخليقي أو مكافئ وظيفي منه. قد توجد خلايا‎ SCBY ‏على خلية تتضمن معزز‎ «plant part ‏نسيج؛ جزء نبات‎ cell culture ‏نبات وفقاً لتجسيمات خاصة في مستتبت خلية‎ ‏بالتالي؛ يتم تضمين نباتات (على سبيل المثال؛ أحادية الفلقة‎ whole plant ‏و/أو كامل النبات‎ © ‏تخليقي أو مكافئ وظيفي‎ 5081١/ ‏تتضمن خلية بها معزز‎ (dicot ‏أو ثنائية الفلقة‎ monocot ‏منه في بعض التجسيمات.‎ functional equivalent ‏تشتمل تجسيمات أخرى من الاختراع على وسائل لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى‎ ‏محل الاهتمام. تشتمل وسائل بداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصلين بشكل عملي محل الاهتمام‎
LO ‏الاتجاه التخليقي لهوية تتابع رقم:‎ AW SCBV ‏على معزز‎ Vo ‏نبات و/أو أنسجة‎ DA ‏يتم أيضاً تقديم أجزاء منشاً وطرق للتعبير الجيني عن جينات متعددة‎ ‏المقدمة على معزز ثنائي الاتجاه‎ constructs Laid) ‏1801م. تشتمل أجزاء‎ tissues ‏النبات‎ ‎dua amie ‏على الأقل متصل بمجموعات تعبير جيني عن الجين‎ bi-directional promoter ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع نيوكليوتيد معزز وظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل‎ ‏في بعض التجسيمات؛‎ .)5081/( Sugar Cane Bacilliform Virus ‏مثل قصب السكر‎ Vo ‏والطرق المقدمة معزز ثنائي الاتجاه يعتمد على أدنى عنصر معزز أساسي‎ Lind) ‏تستخدم أجزاء‎ ‏أو مكافئ وظيفي منه؛ وعناصر تتابع نيوكليوتيد من معزز‎ (Zea mays ‏من جين 5100/100-1لا‎ ‏قصب السكر. في بعض التجسيمات؛ تسمح أجزاء المنشأ وطرق‎ Jie ‏فيروس عصوي الشكل‎ ‏المقدمة بالتعبير الجيني عن جينات بين ثلاثة وعشرون.‎ ‏في أحد السمات؛ يتم تقديم عديد نيوكليوتيد تخليقي يتضمن أدنى عنصر معزز أساسي من جين‎ YS ‏وتتابع نيوكليوتيد معزز وظيفي من معزز‎ Zea luxurians ‏أو‎ Zea mays ‏من‎ Ubiquitin—1 ‏فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر. في أحد التجسيمات؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي‎ ‏على تتابع عديد النيوكليوتيد حيث تكون على الأقل 255 .أن ذال عمال فال يكال‎ ‏أو تكملته. في تجسيم إضافي أو بديل؛ يشتمل أدنى‎ ١ ‏مطابقة لهوية تتابع رقم:‎ 2٠٠١ ‏أو‎ 5 ‏عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد منتقى من المجموعة التي تشتمل على هوية‎ YO
—A—
تتابع أرقام: )15 )8.600 تجسيم إضافي؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على هوية تتابع رقم: ‎١‏ أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يتكون أدنى عنصر معزز أساسي بشكل أساسي من هوية تتابع رقم: ‎١‏ أو تكملته. في تجسيم آخرء يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي مقدم أيضاً على إكسون ‎exon‏ من جين ‎Ubiquitin—1‏ وانترون من جين 01001000-1لا. في تجسيم إضافي؛ © يكون الإكسون من جين 1000-1و1طلا من ‎Zeamays‏ أو ‎Zea luxurians‏ في تجسيم آخرء يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي مقدم أيضاً على إنترون من جين كحول نازع للهيدروجين ‎dehydrogenase gene‏ ا81600. في تجسيم آخرء يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي مقدم أيضاً على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من معزز الفيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر. في تجسيم آخرء تتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل ‎Jie‏ قصب السكر وجين الكحول النازع للهيدروجين تتابع عديد النيوكليوتيد حيث تكون على الأقل 755 ‎JY‏ ‏دبال نمال ‎(JAS‏ .قال ددا أو ‎2٠٠١‏ مطابقة لهوية تتابع رقم: ‎١‏ أو تكملته. في تجسيم إضافي أو بديل؛ تشتمل تتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر وجين الكحول النازع للهيدروجين على هوية تتابع رقم: 1 تكملته. في تجسيم إضافي؛ يتكون تتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر وجين
‎١‏ الكحول النازع للهيدروجين بشكل أساسي من هوية تتابع رقم ‎٠:‏ أو تكملته. في أحد التجسيمات؛ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ مقدم أيضاً على عنصر واحد على الأقل منتقى من قائمة تتضمن تتابع تنظيمى عكس الاتجاه ‎upstream‏ ‎(URS) regulatory sequence‏ عنصر محسّن ‎enhancer element‏ إكسون؛ إنترون؛ موقع بداية نسخ ‎transcription start site‏ صندوق ‎(TATA‏ عنصر إجماعى للصدمة الحرارية ‎cheat shock consensus element ٠‏ وتتابع نيوكليوتيد لبدء ‎START‏ و/أو توقف ‎STOP‏ ‏الترجمة. في تجسيم ‎OAT‏ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي مقدم أيضاً على عنصر منتقى من المجموعة التي تشتمل على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه ‎(URS)‏ عنصر ‎(ane‏ إكسون؛ إنترون؛ موقع بداية نسخ؛ صندوق ‎(TATA‏ عنصر إجماعى للصدمة الحرارية؛ تتابع نيوكليوتيد لبدء ‎START‏ و/أو توقف ‎STOP‏ الترجمة؛ وتوليفات ‎lie‏ في تجسيم ‎OAT‏ يشتمل عديد ‎Yo‏ النيوكليوتيد التخليقي مقدم أيضاً على تتابع نيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل عملى ‎Sh‏
عنصر معزز أساسي ‎.minimal core promoter element‏ في تجسيم ‎AT‏ يكون أدنى عنصر معزز أساسي من جين ‎Zea mays Ubiquitin—1‏ وتتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل ‎Ji‏ قصب السكر .في اتجاه تكميلي عكسي ‎reverse‏ ‎complimentary orientation‏ بالنسبة لبعضها البعض في عديد النيوكليوتيد.
في تجسيم ‎AT‏ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على إكسون من جين ‎UbIQUItin=1‏ ‏إنترون من جين ‎(Ubiquitin=1‏ وإنترون من جين كحول نازع للهيدروجين. في تجسيم إضافي أو ‎(Jay‏ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على تتابع نيوكليوتيد مشفر تانية محل الاهتمام متصل بشكل عملي بتتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل ‎Jie‏ قصب السكر. في تجسيم إضافي؛ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على تتابع عديد النيوكليوتيد
‎٠‏ حيث يكون على الأقل ‎JY Je‏ فلل ‎AS JA‏ .حال دحا أو ‎2٠٠١‏ مطابق لهوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على هوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يتكون عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر بشكل أساسي من هوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يكون الإكسون أو الإنترون من جين ‎Ubiquitin—1‏ من ‎Zea luxurians J Zea mays‏
‎V0‏ في تجسيم إضافي؛ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على تتابع نيوكليوتيد مشفر أولى محل الاهتمام متصل بشكل ‎le‏ بأدنى عنصر معزز أساسي من جين ‎Zea mays‏ 0190100-1لا. في تجسيم ‎AT‏ إضافي؛ يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي المتوفر على تتابع نيوكليوتيد مشفر ثانية محل الاهتمام متصل بشكل عملى بتتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر.
‎SY‏ أحد السمات؛ يتم تقديم طريقة ‎method‏ لإنتاج خلية معدلة وراثياً تشتمل الطريقة على التعديل الوراثي للخلية باستخدام عديد النيوكليوتيد مقدم في هذه الوثيقة. في أحد التجسيمات؛ تكون الخلية عبارة عن خلية نبات. في سمة ‎(al‏ يتم تقديم خلية نبات يتضمن عديد النيوكليوتيد مقدم في هذه الوثيقة. في سمة أخرى؛ يتم تقديم نبات يتضمن خلية النبات المتوفرة في هذه الوثيقة.
“yam ‏في أحد السمات؛ يتم تقديم طريقة للتعبير الجيني عن تتابع نيوكليوتيد محل الاهتمام في خلية‎ ‏نبات؛ تشتمل الطريقة على إدخال في خلية النبات تتابع النيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل‎ ‏نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى محل الاهتمام. في أحد‎ Bla) Bilas ‏عملى‎ ‏التجسيمات؛ تشتمل الطريقة المقدمة على إدخال في خلية النبات حمض نووي يتضمن (أ) تتابع‎ ‏النيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل عملى بالوسائل لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل‎ © ‏عملى محل الاهتمام؛ و(ب) تتابع نيوكليوتيد ثانى محل الاهتمام متصل بشكل عملى بالوسائل‎ ‏لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى محل الاهتمام.‎ ‏لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى‎ means ‏في أحد التجسيمات؛ تشتمل الوسائل‎ ‏محل الاهتمام على هوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم آخرء تشتمل الوسائل لبداية نسخ‎ ‏تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى محل الاهتمام على هوية تتابع رقم: ©. في تجسيم آخرء‎ ٠ ‏محل الاهتمام على التكامل‎ ee ‏تشتمل الوسائل لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل‎ ‏العكسي لهوية تتابع رقم: 3.0 تجسيم آخرء يتم إدخال الحمض النووي في خلية النبات حتى‎ ‏بخلية النبات تتابع النيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل‎ DNA ‏تستهدف موقع سابق التحديد في‎ ‏عملى بالوسائل لبداية نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى محل الاهتمام. في تجسيم‎ ‏يستهدف تتابع النيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل عملى بالوسائل لبداية‎ odin ‏إضافي أو‎ Vo ‏نسخ تتابعى نيوكليوتيد متصل بشكل عملى محل الاهتمام الموقع سابق التحديد باستخدام ناتج‎
Zinc finger ‏عن نيوكلياز إصبع زنك‎ mediated recombination ‏عودة ارتباط جيني ناتج‎ .nuclease ‏في بعض‎ Zea spp ‏من‎ Ubiquitin=1 ‏في بعض التجسيمات؛ يكون الإكسون من جين‎ ‏في بعض التجسيمات؛ يكون‎ .>68 spp ‏من‎ Ubiquitin=1 ‏التجسيمات؛ يكون الإنترون من جين‎ ٠
Zea luxurians J Zea mays ‏هر‎ Zea ‏نوع‎ ‏للتعبير الجيني‎ nucleic acid construct ‏حمض نووي‎ Lae oa ‏في أحد السمات؛ يتم تقديم‎ ‏و/أو أنسجة نبات. يشتمل جزء منشأ الحمض النووي على (أ) معزز‎ WDA ‏عن جينات متعددة‎ ‏المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع نيوكليوتيد معزز وظيفي من معزز‎ Jad ‏ثنائي الاتجاه؛ حيث‎ ‏فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر (/5081)؛ و(ب) مجموعتين تعبير جيني عن الجين‎ YO
-١١- ‏على النهايات المتقابلة للمعزز ثنائي الاتجاه؛ حيث تشتمل واحدة على الأقل من مجموعات التعبير‎ translation ‏الجيني عن الجين على اثنين أو أكثر من الجينات متصلة عن طريق محول ترجمة‎ .switch ‏في أحد التجسيمات؛ يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على معزز واحد على الأقل. في تجسيم آخرء لا‎ ‏الحمض‎ Lite ‏في تجسيم آخرء يشتمل جزء‎ .enhancer ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على معزز‎ © ‏/08©0أ5_للتحول الوراثي الناتج عن الأجرعية‎ vector ‏ثنائي‎ Jib le ‏النووي‎ ‏في أحد التجسيمات؛ يشتمل المعزز ثنائي‎ -Agrobacterium-mediated transformation (URS) ‏الاتجاه على عنصر منتقى من المجموعة التي تشتمل على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه‎ ‏للصدمة‎ ola) ‏عنصر‎ (TATA ‏صندوق‎ rad ‏إنترون؛ موقع بداية‎ (sas) ‏عنصر محسّن؛‎ ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على أدنى عنصر معزز‎ «AT ‏الحرارية؛ وتوليفات منها. في تجسيم‎ ٠ ‏يكون‎ « Al ‏في تجسيم‎ .268 luxurians ‏أو‎ Zea mays ‏أساسي من جين 01901000-1لا من‎ ‏وتتابع نيوكليوتيد المعزز من معزز فيروس عصوي‎ Ubiquitin—1 ‏عنصر معزز اللب من جين‎ ‏قصب السكر (/5081) في اتجاه تكميلي عكسي بالنسبة لبعضها البعض. في تجسيم‎ Jie ‏الشكل‎ ‎Ano ‏إضافي أو بديل؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد على الأقل‎ ‏أو تكملته. في‎ ١ ‏مطابقة لهوية تتابع رقم:‎ 2٠٠١ ‏.حال ددا أو‎ (AS ‏م اال دلال امال‎ ‏تجسيم إضافي أو بديل؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد منتقى من‎ ‏في تجسيم إضافي؛ يشتمل أدنى‎ .50-١١و‎ ١ ‏المجموعة التي تشتمل على هوية تتابع أرقام:‎ ‏عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد منتقى من المجموعة التي تشتمل على هوية‎ ‏يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على تتابع عديد‎ (la) ‏و35-171. في تجسيم‎ ١ ‏تتابع أرقام:‎ ‏تجسيم‎ (VV) ‏النيوكليوتيد منتقى من المجموعة التي تشتمل على هوية تتابع أرقام:‎ ٠ ‏إضافي؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد منتقى من المجموعة التي‎ ‏في تجسيم إضافي؛ يشتمل أدنى عنصر معزز‎ .75-١76و‎ ١ ‏على هوية تتابع أرقام:‎ da ١ ‏أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد منتقى من المجموعة التي تشتمل على هوية تتابع أرقام:‎ ‏في تجسيم إضافي؛ يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي على تتابع عديد النيوكليوتيد‎ .7:-١١و‎ .١ ‏بهوية تتابع رقم:‎ YO toy
-١١7-
Ubiquitin=1 ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على إكسون من جين‎ can ‏في تجسيم إضافي أو‎ ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على إنترون من‎ «GAT ‏و/أو إنترون من جين 0190180لا. في تجسيم‎ ‏الحمض النووي محوّل وراثياً‎ Lite ein ‏جين كحول نازع للهيدروجين. في أحد التجسيمات؛ يكون‎ ‏بشكل مستقر إلى نباتات معدلة وراثياً. في أحد التجسيمات؛ تكون النباتات عبارة عن نباتات أحادية‎ ‏في تجسيم آخرء تكون النباتات عبارة عن نباتات ثنائية‎ -monocotyledons plants «all ‏ه‎ ‏عن نباتات أحادية الفلقة.‎ ple ‏لا تكون النباتات‎ « AT ‏في تجسيم‎ .dicotyledons plants ‏الفلقة‎ ‏في تجسيم آخرء لا تكون النباتات عبارة عن نباتات ثنائية الفلقة.‎ ‏في تجسيم إضافي أو بديل؛ يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من‎ ‏أو معزز الفيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر (/5081). في تجسيم‎ Ubiquitin ‏جين‎ ‏في‎ Ubiquitin ‏إضافيء؛ يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من جين‎ ٠
Ubiquitin ‏تجسيم آخرء يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من جين‎ .)5081/( ‏أو معزز الفيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر‎ he Aye ‏الاتجاه على عديد نيوكليوتيد لعلى الأقل‎ AW ‏في تجسيم إضافي؛ يشتمل المعزز‎ ‏مطابقة لهوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يشتمل‎ 2٠0١ ‏دهال 40 25 أو‎ ‏المعزز ثنائي الاتجاه على عديد نيوكليوتيد لهوية تتابع رقم: © أو تكملته. في تجسيم إضافي؛‎ ١ 290 Jaw ‏فال‎ he ve ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه على عديد نيوكليوتيد لعلى الأقل‎ ‏مطابقة لهوية تتابع رقم: > أو تكملته. في تجسيم إضافي؛ يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه‎ 7٠٠٠ ‏أو‎ ‏على عديد نيوكليوتيد لهوية تتابع رقم: 1 أو تكملته.‎ ‏في أحد التجسيمات؛ تشتمل كلا مجموعتي التعبير الجيني عن الجين على اثنين أو أكثر من‎ ‏الجينات متصلة عن طريق محول ترجمة. في تجسيم إضافي أو بديل؛ يتم اختيار محول الترجمة‎ Ys internal ribosome entry site ‏من المجموعة التي تشتمل على موقع دخول ريبوزوم داخلي‎ ribozyme ‏؛ موقع شطر ريبوزوم‎ alternative splicing site ‏موقع تضفير بديل‎ ؛)١4ع5(‎ ‏ببتيد‎ polynucleotide sequence coding ‏؛ تتابع عديد النيوكليوتيد يشفر‎ cleavage site ‏؛ تتابع عديد النيوكليوتيد يشفر ببتيد مشابه ل /2؛ تتابع عديد النيوكليوتيد‎ 2A peptide 2A protease cleavage ‏تتابع عديد النيوكليوتيد يشفر موقع شطر بروتياز‎ dntein ‏__يشفر إنتين‎ Yo
س١‏ 6 وتوليفات منها. في تجسيم إضافي أو بديل؛ يشتمل محول الترجمة على عنصر نازع للهيدروجين بتأثير سيس ‎cis-acting hydrolase element‏ (1ع]01175)._ في تجسيم إضافي؛ يكون ‎CHYSEL‏ عبارة عن تتابع ببتيد ‎2A‏ أو مشابهة ل ‎-2A-like peptide 2A‏ في تجسيم آخرء لا يشتمل جين عكس الاتجاه بمحول الترجمة على كودون توقف ترجمة ‎translation stop codon ©‏ في تجسيم آخرء ‎Ra‏ جزء ‎Lae‏ الحمض النووي من أو يسمح بالتعبير الجيني عن على الأقل أربع جينات. في تجسيم إضافي» تكون كل الجينات الأربعة محورة وراثياً. في تجسيم آخرء يمكّن جزء ‎Late‏ الحمض النووي من التعبير الجيني عن جينات بين ثلاثة وعشرون. في تجسيم ‎OAT‏ يمكّن جزء منشاً الحمض النووي من التعبير الجيني عن جينات بين أربعة وثمانية. في تجسيم إضافي أو بديل؛ تكون الجينات محورة وراثياً. في تجسيم آخر؛ على الأقل تشتمل أحد مجموعات التعبير الجيني عن الجين على تتابع عديد النيوكليوتيد يشفر 9 بروتين مندمج ‎fusion protein‏ في تجسيم إضافي؛ يشتمل البروتين المندمج على ثلاث إلى خمس جينات. في بعض التجسيمات؛ يكون التعبير الجيني عن جينات من المعزز ثنائي الاتجاه أعلى أربع أضعاف على الأقل ‎dle‏ بمعزز موحد الاتجاه ‎uni-directional promoter‏ في بعض ‎Vo‏ التجسيمات؛ يكون التعبير الجيني عن جينات من المعزز ثنائي الاتجاه من ثلاثة إلى عشرة أضعاف أعلى مقارنة بمعزز موحد الاتجاه. في بعض التجسيمات؛ يكون التعبير الجيني عن جينات من المعزز ثنائي الاتجاه من أربعة إلى ثمانية أضعاف ‎of‏ مقارنةً بمعزز موحد الاتجاه. في بعض التجسيمات؛ يتم وضع جين ‎jap‏ للاختيار ‎selection marker gene‏ عند نهاية بعيدة من المعزز (أي؛ عند نهاية '3 بجين مجموعة تعبير جيني مع الاتجاه من جين آخر).
‎٠‏ في أحد السمات؛ يتم تقديم طريقة لتوليد نبات معدّل وراثياً يتضمن التعديل الوراثي لخلية نبات باستخدام ‎Laie oda‏ الحمض النووي ‎adie‏ في هذه الوثيقة. في سمة أخرىء يتم تقديم طريقة لتوليد 09 خلية معدلة وراثياً يتضمن التعديل الوراثي للخلية باستخدام ‎line ein‏ الحمض النووي ‎adie‏ في هذه الوثيقة. في سمة ‎(Al‏ يتم تقديم خلية نبات يتضمن جزء ‎Lie‏ الحمض النووي مقدم في هذه الوثيقة. في تجسيم إضافي أو بديل؛ يكون ‎Lie ein‏ الحمض النووي محوّل
‎Yo‏ وناثياً بشكل مستقر إلى خلية النبات. في سمة ‎(al‏ يتم تقديم نبات معدّل ‎Why‏ يتضمن جزء yg
‎Laie‏ الحمض النووي مقدم في هذه الوثيقة. في تجسيم إضافي أو بديل؛ يكون جزء ‎Lite‏ الحمض
‏النووي محوّل وراثياً بشكل مستقر إلى خلايا من النبات المحور وراثياً. في سمة أخرى, يتم في هذه
‏الوثيقة تقديم طريقة للتعبير الجيني عن جينات متعددة خلايا و/أو أنسجة نبات؛ يتضمن إدخال في
‎DA‏ و/أو أنسجة النبات ‎Lie oda‏ الحمض النووي ‎adie‏ في هذه الوثيقة. في تجسيم إضافي أو
‏5 بديل؛ تكون خلايا و/أو أنسجة النبات محولة وراثياً بشكل مستقر باستخدام ‎Laie gia‏ الحمض
‏النووي ‎adie‏ في هذه الوثيقة. في سمة ‎(al‏ يتم تقديم ناقل ثنائي للتحول الوراثي الناتج عن
‏الأجرعية. في أحد التجسيمات؛ يشتمل الناقل الثنائي على ‎Lie gia‏ الحمض النووي ‎adie‏ في هذه
‏الوثيقة. في تجسيم آخرء يشتمل الناقل الثنائي على عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic‏
‎polynucleotide‏ المتوفر في هذه الوثيقة. في سمة ‎(Al‏ يتم تقديم استخدام المعزز ثنائي ‎٠‏ - الاتجاه المقدم في هذه الوثيقة للتعبير الجيني متعدد التمحور في النباتات.
‏شرح مختصر للرسومات
‏الشكل ‎١‏ يوضح معزز نموذجي (ليس بمقياس ‎scale‏ الرسم) لذرة 511لا (011ل2010)؛ حيث
‏يشتمل على تقريباً 905 زوج قاعدة عنصر عكس الاتجاه عند الموضع ”5 من موقع بداية النسخ
‎(TSS)‏ يحتوي عنصر عكس الاتجاه على صندوق ‎TATA‏ (موضوع تقريباً ‎Vom‏ زوج قاعدة من ‎(TSS Vo‏ وعنصري اتفاق صدمة حرارة متداخلين (موضوعة تقريباً ‎Yo vm‏ زوج قاعدة من ‎(TSS‏
‏يشتمل ذلك المعزز أيضاً على حوالي ‎٠١٠١‏ زوج قاعدة عند '3 من منطقة ‎TSS‏ تحتوي منطقة
‏3 هذه على تتابع موجهة مجاورة ‎leader sequence‏ 80[806601(إكسون ‎«(ZmUbil‏
‏وانترون.
‏الشكل ‎١‏ يوضح تجسيم نموذجي لمعزز ‎UDI‏ ثنائي الاتجاه التخليقي ‎Gene‏ حيث يشتمل على ‎٠‏ أدنى عنصر أساسي عكس الاتجاه 001015110 مستنسخ لمعزز ‎ZmUbil‏
‏الشكل ¥ يوضح رسم تخطيطي نموذجي ل ‎GUS‏ ثنائية الاتجاه ومجموعة تعبير جيني ل 10لا؛
‏تحتوي على مجموعات تعبير جيني عن جين ‎(GUS, Yip‏ حيث يكون كل منها متصلاً بشكل
‏عملي بمعزز ‎UDIL‏ ثنائي اتجاه تخليقي.
‏الشكل ؛ يوضح خريطة بلازميد ‎plasmid map‏ تمثيلية ل ‎.PDAB105801‏
اج \ — الشكل ‎o‏ يوضح رسم تخطيطي لمعزز ثنائي الاتجاه نموذجي لفيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر ‎dua (SCBV)‏ يشتمل على عنصر عكس الاتجاه مستنسخ لعنصر أساسي حصتاا ‎UbilPminimal‏ لمعزز ‎.SCBV‏ ‏الشكل 1 يوضح خريطة بلازميد تمثيلية ل ‎.PDAB105806‏ ‏© الشكل ‎١‏ يوضح رسم تخطيطي نموذجي لمجموعات التعبير الجيني عن جين ‎«GUS 5 YFP‏ حيث يكون كل منها متصلاً بشكل عملي بمعزز ثنائي الاتجاه ‎SCBY‏ تخليقي. الشكل م يوضح هوية تتابع رقم : ‎GATES‏ تشتمل على التكامل العكسي لبولي نيوكليوتيد يتضمن معزز أدنى لب 00100011 ‎mays‏ .2 (تحته خط)؛ قائد 011لا ‎Z. mays‏ (إكسون ‎¢ZmUbil‏ ‏خط سميك)؛ وانترون 1 ‎Z. mays‏ (حالة سفلية). شكل 4ب يوضح هوية تتابع ‎tad)‏ 1% ‎٠‏ حيث تشتمل على جزء من عنصر عكس الاتجاه ‎mays Ubil‏ .22 قد يقع هذا العنصر (و/أو تكامله العكسى) فى معزز ‎Ubil‏ تخليقى مع عنصر 00105110 مجاور لنهايتها ©” أو ‎CY‏ ‏الشكل ‎A‏ يوضح عروض تخطيطية نموذجية لأجزاء منشأ متعددة الجين مقدمة هنا والتى تشتمل على معزز ‎Ul‏ ثنائي اتجاه تخليقى (رسم علوى). تم عرض تحولات الترجمة الوراثية باستخدام نموذج خاص. ‎.pPDAB101556 ‏و‎ pDAB108708 ‏الشكل 4 يوضح خرائط بلازميد تمثيلية‎ Vo ‏زوج قاعدة لمعزز أدنى لب‎ ١١ ‏حيث تشتمل على منطقة‎ +٠: ‏يوضح هوية تتابع رقم‎ ٠١ ‏الشكل‎ ‏(0110ل010). يوضح الشكل ١٠ب هوية تتابع رقم: 7؛ حيث‎ Zea mays Ubiquitin—1
Z. mays 010100115 ‏تشتمل على التكامل العكسي لبولي نيوكليوتيد يتضمن معزز أدنى لب‎
Z. ‏0ا50)؛ وانترون‎ font ‏خط سميك‎ «ZmUbil ‏(إكسون‎ 2. mays ‏(تحته خط)؛ قائد 011لا‎ ‎٠٠‏ 011لا ‎dls) mays‏ سفلية). الشكل ‎١١‏ يوضح هوية تتابع رقم: ‎oF‏ حيث تشتمل على معزز ثنائي الاتجاه نموذجي تخليقي ‎(Ubil‏ حيت يكون التكامل العكسي لذ ‎AG minUbilP «Js minUbilP‏ تحته خط ‎.underlined
— أ \ — الشكل ‎VY‏ يوضح هوية تتابع رقم : 4 حيث تشتمل على حمض نووي نموذجي يتضمن مجموعات التعبير الجيني عن جين ‎GUS 3 YFP‏ المحركة بواسطة معزز ‎AW‏ الاتجاه ‎Ubi]‏ تخليقي. الشكل ‎١٠١‏ يوضح هوية تتابع رقم : ©؛ حيث تشتمل على معزز ثنائي الاتجاه ‎SCBV‏ يتضمن معزز أدنى لب 5110ل00101؛ حيث يكون التكامل العكسي ل 0010105117 تحته خط. © الشكل ‎VE‏ يوضح هوية تتابع رقم: 1 حيث تشتمل على معزز ‎SCBV‏ يتضمن إكسون ‎ADHI‏ ‎١‏ (تحته خط)؛ إنترون > (خط في حالة سفلية)؛ واكسون ‎١‏ (خط سميك). الشكل ‎١١‏ يوضح هوية تتابع رقم : ‎١‏ حيث تشتمل على حمض نووي يتضمن مجموعات التعبير الجيني عن جين ‎GUS 5 YFP‏ المحركة بواسطة معزز ثنائي الاتجاه ‎SCBV‏ نموذجي. هوية تتابع رقم: ‎A‏ يوضح البادئة ‎YFP‏ تقدمية: ‎.5'-GATGCCTCAG TGGGAAAGG-3"‏ ‎Jai ٠‏ هوية تتابع رقم: 4 على ‎YFP 20h‏ عكسية: ‎5'-CCATAGGTGA‏ ‎Jaks .60616610/0 AA-3‏ هوية ‎al‏ رقم: ‎٠١‏ على معزز إنقيرتاز تقدمي ‎١| 66000008 CGACTTGT-3' :Invertase Forward Primer‏ 5. تشتمل ‎Lea‏ ‏تتابع رقم: ‎١١‏ على معزز إنقيرتاز عكسي ‎:lnvertase Reverse Primer‏ ='5 ‎Jain LAAAGTTTGGA 660160061-3'‏ هوية تتابع رقم: ‎VY‏ على مسبار إنقيرتاز ‎5'-CGAGCAGACC GCCGTGTACT TCTACC-3' :Invertase Probe Yo‏ تفتمل هوية تتابع رقم: ‎١١‏ على معزز ‎AAD]‏ تقدمي ‎:AAD1 Forward Primer‏ -'5 ‎CCTCTACCAA-3‏ 1©11066110. تشتمل هوية تتابع رقم: ‎VE‏ على معزز ‎AAD]‏ ‏عكسي: ‎L5'-CAACATCCAT CACCTTGACT GA-3'‏ تشتمل هوية تتابع رقم: ‎٠١‏ على مسبار ‎5'-CACAGAACCG 1060110800 AACA-3' :AADI‏ (انظر أيضاً جدول ‎0٠‏ ). الشكل ‎١١‏ يوضح تحليل بقعة ‎Western‏ للتعبير المستقر عن ‎YFP‏ المحركة بواسطة بنية معزز ثنائي الاتجاه ‎(pDAB108708) SCBV‏ في نباتات 53 ‎TO plants TO‏ 013126. أظهرت النباتات التوضيحية تعبير مستقر عن ‎YFP‏ في الورق المحركة بواسطة عنصر معزز أدنى لب 5115ل1/10-1. يشار إلى كمية البروتين التي تم إنتاجها بالأجزاء بالمليون ‎(PPM)‏
ل \ — الشكل ‎١١‏ يوضح تحليل بقعة ‎Western‏ للتعبير المستقر عن ‎YFP‏ من جزء المنشاً المقارن يتضمن معزز 011ل200 الذي يحرك فقط التعبير الجيني عن ‎YFP‏ (8101556م600)؛ لا تكون تتابع تشفير ‎GUS‏ متضمنة في تلك البنية. يشار إلى كمية البروتين المنتجة كأجزاء بالمليون ‎(PPM)‏ ‏5 الشكل ‎YA‏ يوضح أجزاء ‎Laie‏ نموذجية من تكتلات ‎ic gana‏ من أربع جينات 05849 1 ‎pDAB‏
YFP-2A-AAD1 ) pDAB105865 5 (AAD1-2A-YFP plus Cry34-2A-Cry35) ‏النسخ من المعزز‎ direction ‏تشير الأسهم المظللة إلى توجيه‎ (plus Cry34-2A-Cry35
Yoo ‏على تتابع نيوكليوتيد لموقع بداية النسخ عكس الاتجاه‎ Ubi 1 —mimP ‏ثنائي الاتجاه. تشتمل‎
SCBV ‏عكس الاتجاه لمعزز‎ abil ‏على تتابع‎ SCBV-URS Jai ‏لمعزز ذرة 511لا.‎
Ubil ‏باستثناء معزز اللب (موضح في صورة سهم). تشتمل 0011-1014 على إنترون لذرة معزز‎ > ٠ ‏نموذجيين إضافيين من تكتلات مجموعة من أربع جينات.‎ Laie ‏يوضح جزئي‎ ٠9 ‏الشكل‎ ‎.pPDAB105748 5 pDAB105818 ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات‎ ٠١ ‏الشكل‎ ‏بهوية‎ (Ubil-minP ‏أو‎ min-UbilP) ‏الأشكال ١7أ-71ه يوضح أدنى معززات لب إضافي‎ .4 0-176 ‏تتابع أرقام:‎ .pPDAB105847 ‏و‎ pDAB105841 ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات‎ YY ‏الشكل‎ VO .pPDAB105849 ‏و‎ pDAB105840 ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات‎ YT ‏الشكل‎ ‏و0/8108719ام.‎ pDAB101917 ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات‎ YE ‏الشكل‎ ‎.pPDAB105848 5 pDAB105844 ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات‎ Yo ‏الشكل‎ ‏يوضح خرائط تمثيلية لبلازميدات 0085105865 و0/8108720م.‎ YT ‏الشكل‎ 9ص الشكل فا يوضح تتابع حمض نووي لمجموعات التعبير الجيني عن الجين ‎«pDAB 1 087 19 J‏ حيث يتم توضيح كل جين وعنصر.
م \ _ الشكل ‎YA‏ يوضح بيانات تعبير جيني عن بروتين نموذجي من بين أجزاء ‎Laie‏ مختلفة تم اختبارها ل ‎Cry34‏ (الشكل ‎((fYA‏ 1-طهظ (الشكل ‎(YA‏ و ‎Cry35‏ (الشكل 78ج). الشكل 79 يوضح متواليتين نموذجيتين لبروتينات فلورية صفراء من -ا5 ‎Phialidium sp.‏ ‎a.a., GenBank AAR85349.1 (PhiYFP) 2003‏ 234 (هوية تتابع رقم: ١د)؛‏ ‎PPhiYFPV3, ©‏ .8.8 234« (هوية تتابع رقم: ‎(OY‏ ‏الشكل 0 يوضح تجسيمات نموذجية لمعزز 011لا ثنائي الاتجاه التخليقي وأجزاء منشأ مقدمة؛ بما في ذلك ‎ZMUbi) pDAB108706‏ ثنائي الاتجاه )=+ ‎ZMUbi) pDAB108707 «((Y+‏ ثنائي الاتجاه )+ 2(« ‎SCBV) pDAB108708‏ ثنائي الاتجاه )=+ + ‎PDAB108709 5 ¢((Y‏ ‎SCBV)‏ ثنائي الاتجاه (-40)). 0088101556 (عينة مقارنة ‎((ZmUbi1-YFP‏ ‎osu SCBV) 0088108715 ٠‏ أدنى معزز)؛ و00/8108716 ‎ZmUbil)‏ بدون أدنى معزز) تعمل كأجزاء ‎Lie‏ مقارنة باستخدام معززات متحدة الاتجاه. الشكل ١؟أ‏ يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl‏ السبعة الموضحة في الشكل ‎٠١0‏ لبروتين ‎(LCMS) YFP‏ بالنانوجم/سم؟. يوضح الشكل ١7ب‏ نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎YFP RNA Iv.‏ ‎Yo‏ الشكل أ يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎٠١0‏ لبروتين ‎(LCMS) GUS‏ بالنانوجم/سم7. يوضح الشكل 77ب نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl)‏ السبعة الموضحة في الشكل ‎١‏ ؟ ل ‎GUS RNA‏ ‎YY J‏ يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl‏ السبعة الموضحة في الشكل ‎Yo‏ لبروتين ‎(LOMS) AAD‏ بالنانوجم/سم7. يوضح الشكل 77ب نتائج التعبير الجيني ‎٠‏ التموذجية النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء المنشاً السبعة الموضحة في الشكل 0؟ ل ‎AAD] RNA‏ الشكل ؛؟أ يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Laid)‏ السبعة الموضحة في الشكل ‎vo‏ لبروتين ‎(LCMS) YFP‏ بالنانوجم/سم7. المستويات غير المرتبطة بنفس الحرف فى الجدول مختلفة تماماً. يوضح الشكل ‎OVE‏ تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎toy‏
‎q —_‏ \ _ ‎(V6)‏ من أجزاء المنشاً السبعة الموضحة في الشكل 30 ل ‎YFP RNA‏ تم إدراج القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الشكل ©؟أ يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة الموضحة في الشكل 20 لبروتين ‎(LCMS) GUS‏ بالنانوجم/سم7. المستويات غير المرتبطة بنفس الحرف © فى الجدول مختلفة تماماً. يوضح الشكل ‎Fo‏ تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl‏ السبعة الموضحة في الشكل 0 ل ‎RNA‏ 5لا6. تم إدراج القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الشكل 77 يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Laid)‏ السبعة الموضحة في الشكل 30 لبروتين ‎(LCMS) AAD]‏ بالنانوجم/سم7. المستويات غير المرتبطة بنفس الحرف فى الجدول مختلفة تماماً. يوضح الشكل ‎OFT‏ تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Laid)‏ السبعة الموضحة في الشكل ‎RNA IY‏ 001. تم إدراج القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الأشكال ‎caf (YY‏ ولاج تعرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(VI0)‏ من أجزاء المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎Yo‏ لبروتين ‎YFP‏ 201ل و5لا6 ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم؟ على ‎ve‏ التوالي. الأشكال ‎VAs caPA (IVA‏ 2 توضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V10)‏ من ‎shal‏ ‏المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎vo‏ لبروتين ‎(LCMS) AAD1; (GUS (YFP‏ بالنانوجم/سم ؟ على التوالي. تم إدراج القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. المستويات غير المرتبطة بنفس الحرف فى الجداول مختلفة تماماً. ‎vy.‏ الأشكال 34 ‎cafe‏ 2745 تعرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(R3)‏ من أجزاء المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎Yo‏ لبروتين ‎«GUS (YFP‏ و ‎(LCMS) AAD‏ بالنانوجم/سم7؛ على التوالي. ‎toy‏
ل الأشكال ‎caf dfn‏ و0؛ج توضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(R3)‏ من ‎shal‏ ‏المنشأ السبعة الموضحة في الشكل ‎Yo‏ لبروتين ‎(LCMS) AADI; (GUS (YFP‏ بالنانوجم/سم7؛ على التوالي. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الشكل ١؛‏ يوضح أجزاء ‎(ie‏ متعددة التحول الجيني الإضافية باستخدام معزز 1أطلا؛ بما في © ذلك ‎.pPDAB108718 ; pDAB108717‏ الشكل 7؛أ يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎Cry34 RNA‏ من ‎shal‏ ‎ZmUbil-) pDAB105818 «(ZmUbil-YFP) pDAB105748 dl Lad‏ ‎YFP/AAD-1-) pDAB108717 «(Cry34/ZmUbil -Cry35/ZmUbil-AAD]‏ ‎ZmUbil‏ قائي الاتجاه ‎AAD1/YFP-ZmUbil) pDAB108718 ¢(Cry34-Cry35-‏ ‎٠‏ ثنائي الاتجاه ‎YFP/AAD1-SCBV) pDAB108719 ¢(Cry34-Cry35—‏ ثنائي الاتجاه - ‎AADI/YFP - SCBV) pDAB108720 5 «(Cry34-Cry35‏ ثنائي الاتجاه ‎Cry34—‏ ‏5 ) يوضح الشكل ‎af‏ نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎Cry34‏ ‏(161/5) .من نفس ‎«pDAB105818 pDAB105748 idl أشنملا chal‏ 7م 8108718م0م 088108719م و0/8108720م. ‎Yo‏ الشكل 167 يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎AADL RNA‏ من ‎shal‏ ‎Lud‏ الستة ‎pDABI05748‏ 088105818م ‎«pDAB108718 pDAB108717‏ ‎.pDAB108720 5 (pDAB108719‏ يوضح الشكل ‎EY‏ نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎(LCMS) AADI‏ من نفس أجزاء المنشأ الستة 0088105748 ‎ pDAB108717 pDAB105818‏ 8108718م0م | ‎«pDAB108719‏ ‎.pDAB108720 ٠‏ الشكل 44 يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎YFP RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎«pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 pDAB105748‏ ‎.pDAB108720 5 (pDAB108719‏ يوضح الشكل 4؛ب نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎(LCMS) YFP‏ من نفس أجزاء ‎Landi‏ الستة 0/8105748م؛ 7ط
-١-
pDAB108719 pDAB108718 «pDABI108717 «pDAB105818
.pDAB 1 08720
الشكل ‎feo‏ يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎Cry35 RNA‏ من ‎shal‏
«pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 ‏الستة 0/8105748م‎ Lud ‏نتائج التعبير الجيني النموذجية‎ fo ‏يوضح الشكل‎ .pDAB1087205 (pDABL08719 ©
النسبية ‎(V6)‏ لبروتين 60/35 ‎(ELISA)‏ من نفس أجزاء المنشأ الستة 0088105748 pDAB108719 pDAB108718 «pDABI108717 «pDAB105818
.pDAB 1 08720
الشكل £7 يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎PAT RNA‏ من أجزاء المنشأ ‎٠‏ الستة ‎pDAB108717 pDAB105818 (pDAB105748‏ 8108718م0م؛
.pDAB108720 5 pDAB108719
الشكل 18 يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎Cry34 RNA‏ من أجزاء المنشأ
«pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 (pDAB105748 ةتسلا‎
‎mums .pDABL08720 5 «pDAB108719‏ الشكل ‎EY‏ تحليل إحصائي لنتائج التعبير ‎Vo‏ الجيني ‎Cry34 (og (V6)‏ من نفس ‎chal‏ المنشا الستة 088105748
‎pDAB108719 pDAB108718 «pDABI108717 «pDAB105818
‎.pDAB108720 5‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‏الشكل 184 يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني (6/) ل ‎RNA‏ 101ل من أجزاء المنشأ
‎«pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 (pDAB105748 ةتسلا‎ ‏يوضح الشكل كب تحليل إحصائي لنتائج التعبير‎ .pDAB108720 ; «pDAB108719 Yo
‎pDAB105748 ‏الستة‎ laid chal ‏من نفس‎ AADL ‏لبروتين‎ (V6) ‏الجيني‎
‎pDAB108719 pDAB108718 «pDABI108717 «pDAB105818
‎.pDAB108720 5‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‏لول
١
الشكل 9؛أ يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎YFP RNA‏ من أجزاء المنشأ
«pDAB108718 pDAB108717 ‏088105818م‎ 088105748 ةتسلا‎ statistical ‏_يوضح الشكل 284 تحليل إحصائي‎ .pDAB1087205 «pDAB108719
لنتائج_التعبير الجيني ‎(V6)‏ لبروتين ‎YFP‏ من نفس أجزاء ‎Lad‏ الستة ‎pDAB108718 | pDAB108717 pDAB105818 pDAB105748 ©‏
9ه 5 ‎.pDAB108720‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
الشكل ١٠٠أ‏ يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎Cry35 RNA‏ من أجزاء المنشأ
«pDAB108718 pDAB108717 ‏088105818م‎ 088105748 ةتسلا‎
9م و088108720م. المستويات غير المرتبطة بنفس الحرف فى الجدول ‎٠‏ مختلفة تماماً. يوضح الشكل ٠٠ب‏ تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ لبروتين 607/35
من نفس أجزاء ‎Lad)‏ الستة 088105748م 088105818م ‎«pDAB108717‏
‎.pDAB108720 «pDAB108719 pDABI108718‏ & إدراج_القيم الوسيطة والنتائج
‏الإحصائية.
‏الشكل )0 يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎PAT RNA‏ من أجزاء المنشأ ‎pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 pDAB105748 idl ١‏
‏9ه 5 ‎.pDAB108720‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‏الأشكال ‎cao Joy‏ #7ج؛ و7دد توضح نتائج بروتين التعبير الجيني النموذجية (10/) ل
‎«pDAB105748 ‏و0/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة‎ «Cry34 (AAD1 (YFP
‎«pDAB108719 | ‏8108718م0م‎ pDAB108717 pDAB105818 .pDAB108720 ٠
‏الأشكال ‎z0F cot (ov‏ 5 207 توضح تحليل إحصائي لنتائج بروتين التعبير الجيني ‎(VI0)‏
‎(AAD1 YFP J‏ 00/34؛ و07/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة 0/8105748م؛
‎«pDAB108719 | ‏8108718م0م‎ pDAB108717 pDAB105818
‎.pDAB108720‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‏7ط
اس الأشكال ‎«oof (log‏ ؛5ج؛ 5 208 توضح نتائج بروتين التعبير الجيني النموذجية ‎(R3)‏ ل ‎«Cry34 (AAD1 (YFP‏ و0/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة ‎«pDAB105748‏ ‎«pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818‏ ‎.pDAB108720‏ ‏© الأشكال ‎Joo‏ 00( 50700 300 توضح تحليل إحصائي لنتائج بروتين التعبير الجيني (3) ل «pDAB105748 ‏و0/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة‎ «Cry34 (AAD1 (YFP «pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 ‏تم إدراج القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. المستويات غير المرتبطة بنفس‎ .pDAB108720 ‏الحرف فى الجداول مختلفة تماماً.‎
Cry34 ‏لبروتين التعبير الجيني عن‎ Western ‏شكل 071 (أ-ج) يوضح نتائج نموذجية من بقعة‎ ٠
PDAB108718 ‏(شكل ١دج) من‎ AADL; ء)بد١ ‏(شكل‎ Cry35 (fe) ‏(شكل‎ ‎.pDAB108720 5 «pDAB108719 ‏7م‎ ‏الوصف التفصيلي:‎ ‏معقد بشكل كبير؛ التي تتطلب‎ transgenic products ‏أصبح تطوير المنتجات المعدلة وراثياً‎ ‎Vo‏ تهريم ‎pyramiding‏ جينات متعددة متحورة إلى مكان واحد. ويتطلب كل جين متحور ‎transgene‏ غالباً بشكل تقليدي محفز مميز للتعبير؛ وبذلك فإنه يتطلب محفزات متعددة لتعبر عن جينات متحورة مختلفة خلال مجموعة جين واحد. بالإضافة إلى زيادة حجم مجموعة الجين ‎«gene stack‏ فهذا يؤدي مراراً إلى الاستخدام المتكرر لنفس المحفز للحصول على مستويات متشابهة من أنماط التعبير للجينات المتحورة المختلفة المتحكمة في نفس الصفة. ومن المعروف أن ‎٠‏ -بنيات متعددة الجينات مدفوعة بنفس المحفز تسبب إسكات الجين ‎cgene silencing‏ وبهذا تعمل على أن تكون المنتجات الوراثية أقل كفاءة في المجال. ويمكن للكثير من مواقع الربط لعامل النسخ ‎(TF) transcription factor‏ بسبب تكرار المحفز أن تسبب استنفاذ ‎depletion‏ ل175 الداخلي ‎endogenous‏ مؤدياً إلى تخميد لعملية النسخ ‎transcriptional inactivation‏ وسوف تؤثر بشكل غير مرغوب فيه إسكات الجينات المتحورة على أداء النبات المتحور وراثياً المنتج لتعبر عن
"١ ‏الجينات المتحورة. ربما تؤدي التتابعات المتكررة خلال الجين المتحور إلى جين متجانس‎ ‏مؤدياً إلى إعادات‎ intra—locus ‏داخل المكان‎ recombination ‏معاد الاتحاد‎ homologous ‏للبولي نيوكليوتيد.‎ rearrangements ‏ترتيب‎ ‎bidirectional ‏الاتجاه‎ Al ‏يتم توفير الطرق والبنايات التي تقوم بتجميع نظام المحفز‎ ‏للجينات على‎ bicistronic organization ‏مع تنظيم ثنائي السيسترونات‎ promoter system © ‏إما نهاية واحدة أو كلا النهايتين للمحفزء على سبيل المثال مع استخدام تتابع 2/8 من فيروس‎ ‏حمض‎ 0-١7 ‏الذي فقط يتكون من‎ (2A ‏ويشق بروتين‎ .)170588 asigna) ‏زوثيا أسيجنا‎ ‏عند نهايته الكربوكسيلية‎ polyprotein ‏©800100؛_البولي. بروتين‎ acids ‏أميني‎ ‏أو خاصية "تخطي‎ 'self-cleavage ‏ويمكن لهذا "الانشقاق الذاتي‎ .carboxyl-terminus ‏أن يستخدم في معالجة البولي‎ 2A ‏أو شبيه الببتيد‎ 2A ‏للببتيد‎ ribosome skip ‏الريبوسوم‎ ٠ ‏بروتينات المنتجة الصناعية في النباتات المتحورة وراثياً. وفي تجسيم واحد يتم دمج كل من‎ ‏(أو‎ YFP ‏و00/35© في مجموعة تعبير جيني واحدة؛ بينما يتم دمج جينات‎ Cry34 ‏الجينات‎ ‎open ‏و01اظ في مجموعة تعبير جيني أخرى (مع إطار فردي للقراءة المفتوحة‎ (PhiYFP ‏موضوعة ما بين جينين في كل‎ 2A ‏مع نسخة من البروتين الجيني‎ (ORF) reading frame ‏يمكن لكل من مجموعات التعبير الجيني تلك (أو‎ JB ‏التثام 60005108100). وعلى سبيل‎ vo ‏أن يتم وضعها على أي من النهايتين للمحفز ثنائي الاتجاه ليدفع ؛‎ (gene pairs ‏أزواج جينية‎ ‏باستخدام محفز فردي. وبذلك البنايات والطرق المقدمة هنا مفيدة لتجنب‎ Why ‏متحورة‎ cilia ‏الاستخدام المتكرر لنفس المحفز ويقلل حجم البنايات التجارية بوضوح. بالإضافة تمد أيضاً الأربع‎ ‏جينات أو أكثر المدفوعة بمحفز واحد القدرة على التعبير المشترك للجينات المتحكمة في صفة‎ ‏واحدة.‎ ٠ ‏المستخدمة لأجل البحث الأساسي أو التطبيق‎ Plant promoters ‏وتعد محفزات النباتات‎ 3' ‏فقط جين واحد والذي يتم دمجه عند نهايته‎ dense ‏البيوتكنولوجي بصفة عامة أحادية الاتجاه؛‎ ‏إدخال جينات متعددة في النباتات من أجل الهندسة‎ Wie ‏من الضروري‎ ails ‏(أي؛ الاتجاه السفلي).‎ ‏الآيضية ورص الصفات وبذلك يتطلب هذا محفزات متعددة بشكل نموذجي في محاصيل المستقبل‎ ‏لتدفع التعبير للجينات المتعددة. وانه من المرغوب فيه‎ transgenic crops ays ‏المتحورة‎ Yo
“yoo ‏تصميم الاستراتيجيات التي قد تحفظ رقم المحفزات المنتشرة وتسمح بتعبير منتظم مشترك في نفس‎ ‏وفي بعض التجسيمات؛ يمكن للمحفزات الثنائية الاتجاه‎ .961©6 pyramiding ‏الوقت لتهريم الجين‎ miRNA ‏أى‎ (RNAI ‏مشتملة على‎ axial transcription units ‏أن تدفع نسخ وحدات النسخ‎
RNAL haipin—loop ‏المصطنع؛ أو تتابعاتها بين الحلقية‎ ‏تستخدم التجسيمات هنا عملية حيث فيها محفز أحادي الاتجاه من جين الذرة يوبيكويتن-1‎ © ‏ومحفز /5081 لتصميم محفز مخلق ثنائي‎ (ZmUbil ‏(متلء‎ maize ubiquitin-1 gene ‏الاتجاه؛ ومثل هذا المحفز المخلق يمكن له مباشرة التعبير للجينين الاثنين حيث يوجد واحد عند‎ ‏كل نهاية من المحفز. وربما تسمح المحفزات المخلقة ثنائية الاتجاه لهؤلاء الموجودين في المجال‎ ‏الجينات المتحورة وراثياً في خلايا النبات والنباتات بينما يقوم بتقليل الاستخدام‎ stack ‏ليرص‎ ‏المتكرر لنفس المحفز ويقلل من حجم البنايات المتحورة وراثياً. وعلى نحو أكثر من ذلك ربما أيضاً‎ ٠ ‏يمد تنظيم التعبير للجينين الاثنين مع محفز مخلق ثنائي الاتجاه بالقدرة على التعبير المشترك‎ ‏للجينين الاثنين تحت نفس الظروف؛ مثل هذا ربما يكون مفيد؛ فعلى سبيل المثال عندما يساهم كلا‎ ‏الجينين الاثنين في صفة واحدة في المضيف. وقد تم تسجيل استخدام محفزات ثنائية الاتجاه من‎
CaMV 35 promoters (Barfield ‏حيث الوظيفة في نباتات في بعض الحالات؛ مشتملة على‎ and Pua (1991) Plant Cell Rep. 10(6-7):308-14; Xie et al. (2001)), and ٠ the mannopine synthase promoter (mas) promoters (Velten et al. (1984)
EMBO J. 3(12):2723-30; Langridge et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 86:3219-23)
DNA ‏يتم توجيه بدء النسخ وتنظيم تعبير الجين في جينات النبات بواسطة عناصر مختلفة لتتابع‎
Eukaryotic promoters ‏والتي مجتمعة تم ترتيبها خلال المحفز. تتكون محفزات حقيقيات النراة‎ Yo ‏وتتابعات‎ »)00100( minimal core promoter element ‏من عنصر قلب محفز أدنى‎
DNA ‏عنصر المحفز الأساسي امتداد أدني لتتابع‎ shy ‏تنظيمية أكثر عكس الاتجاه (455الا).‎
Core ‏المجاور الذي يُعد كافى ليوجه بدء مضبوط لعملية النسخ. ويضم أيضاً محفزات القلب‎
CAAT ‏صناديق‎ Jie ‏في النباتات على مناطق مقبولة مرتبطة بالبدء في النسخ؛‎ ١65 yo ‏نيوكليوتيدات عكس الاتجاه‎ Yo ‏إلى‎ ٠١ ‏غالباً تقريباً‎ TATA ‏ويقع عنصر الصندوق‎ TATA, ‏لمكان البدء في النسخ.‎ ‏بها يرتبط العديد من البروتينات‎ Ally ‏معتمداً على ال5+الا؛‎ MINPJ activation ‏تنشيط‎ amy ‏التي تحدد‎ DNAS ‏على تتابعات‎ URSSY ‏ويتفاعل لاحقاً مع معقد 00010167 بدء النسخ. ويضم‎ ‏ويتم تحديد القطبية للمحفز غالباً‎ URS ‏نمط التعبير الزمني المكاني للمحفز المشتمل على‎ ‏(أي أنه يقوم بوظيفته مستقلاً‎ bipolar ‏ثنائي القطبية‎ URSY ‏بواسطة اتجاه ال001000؛ بينما يُعد‎
CaMV ‏عن اتجاهه). على سبيل المثال؛ ربما يتم تحويل المحفز الأحادي الاتجاه القطبي المخلق‎ ‏عند نهاية '5 من المحفز في الاتجاه المقابل‎ MINP ‏إلى محفز ثنائي الاتجاه بواسطة دمج‎ 5
Xie et al. (2001) Nat. Biotechnol. ‏انظر على سبيل المثالء‎ .opposite orientation 19(7):677-9 ٠ ‏لمحفز‎ (MINUBITP) ‏في أمثلة خاصة لبعض التجسيمات يتم استخدام عنصر قلب محفز أدنى‎ ‏873؛ لهندسة محفز‎ 2. mays ‏مشتق من السلالة الطبيعية‎ Sal ‏1ل 33 معدل (011ل200)‎ ‏تقوم بوظيفة في النباتات لتقدم خصائص التحكم بالتعبير‎ Ley ‏مخلق ثنائي الاتجاه التي‎ 50817/ ‏التي تعد فريدة مع الأخذ في الاعتبار محفزات ثنائية الاتجاه متاحة سابقاً. وتشمل التجسيمات‎ ‏على تتابع نيوكليوتيد مشتقة من محفز‎ Load ‏الاتجاه المخلق الذي يشمل‎ SEN SCBV jae Vo ‏الأصلي. وربما تشمل أيضاً تجسيمات خاصة على محفز /5081 المخلق ثنائي الاتجاه‎ SCBV 0010105110 ‏وعناصر تتابع‎ SCBY ‏على مقربة من‎ (ADH ‏إنترون‎ Ji) ‏والمشتمل على إنترون‎ ‏في محفز /5081 المخلق ثنائي الاتجاه.‎ 849 ‏يقرب من‎ Led ‏يضم محفز 511لا200 أصلاً المشتق من 873 تتابعات تقع على جينوم الذرة‎ 3 ‏قاعدة من موقع بدء النسخ‎ ٠٠١57 ‏يقرب من‎ lads SY ‏قاعدة من موقع بدء النسخ‎ ٠
Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18(4):675-89 (describing a ‏المعدل المشتق من 873 والذي يستخدم في‎ ZmUbil ‏ويُعد محفز‎ .B73 ZmUbil gene) ‏وتقود عناصر‎ (TATA ‏كيلو قاعدة والذي يحتوي صندوق‎ Y ‏بعض الأمثلة محفز ما يقرب من‎ ‏نيوكليوتيد (معتمداً على مرجعية‎ AY ‏إجماع لاثنين متداخلين من الصدمات الحرارية؛ 87 أو‎ ‏التتابع القريبة بالفعل من موقع بدء النسخ؛ التي يمكن الإشارة إليها‎ (reference strand ‏الجديلة‎ Yo
هنا كإكسون ‎¢ZmUDIT‏ وانترون ‎٠١٠6-١٠٠9‏ نيوكليوتيد (انظر شكل ‎١‏ على سبيل المثال). وربما تبرز بدائل أخرى لمحفز الذرة اليوبيكويتن ‎(ubiquitin)‏ المشتق من أنواع ‎Zea‏ والتركيبات الوراثية ‎Zea mays genotypes‏ تتابع عالية البقاء حول عنصر ©0017 المتكون من عنصر ‎TATA‏ وعناصر مجتمعة عكس الاتجاه للصدمة الحرارية. وبذلك يتم توضيح تجسيمات الاختراع © بالأمثلة باستخدام تلك المنطقة عالية البقاء القصيرة ‎nt)‏ 200-) (مثل.1 ‎SEQ ID NO:‏ (
لمحفز ‎ZmUDIT‏ كعنصر قلب محفز أدنى لإنشاء محفزات نبات ثنائية الاتجاه مخلقة.
ويتم سرد بعض الاختصارات المعينة التي أفصح عنها في الجدول رقم ‎.١‏ ‏جدول ‎.١‏ الاختصارات المستخدمة في الإفصاح
حمض ‎(gb‏ سينكونينتك ‎bicinchoninic acid‏ فيروس القرنبيط الفسيفسائي ‎cauliflower mosaic virus‏ ببتيد عبور البلاستيدات الخضراء ‎chloroplast transit peptide‏ إسكات الجين على أساس متجانس ‎HBGS | homology—based gene silencing‏ minUbilP ZmUbil ‏قلب محفز أدنى‎ oligo ligation amplification ‏تضخيم قلة الريط‎ phosphate buffered saline ‏المنظم بالفوسفات‎ ald ‏المحلول‎ ‎PBST | 7... 04 phosphate buffered saline ‏المحلول الملحي المنظم بالفوسفات‎
خلال (توين) ‎٠١‏ polymerase chain reaction ‏سلسلة بوليميراز‎ Jes rolling circle amplification ‏تضخيم دائرة الدلفنة‎
‎A —‏ \ — ‎PCR‏ بإنزيم ترانسكريبتاز العكسي ‎RT-PCR reverse transcriptase PCR‏ بادئ امتداد النيوكليوتيد الوحيد ‎SNuPE | single nucleotide primer extension‏ ‎il il‏ > = جين يوبيكوتين-1 ‎ZmUbil Zea mays] Ubiquitin—1 gene‏ كالمستخدم هنا في أدوات التنكير والتعريف فإنها تشمل مرجعيات جمع إلا إذا كان السياق يملي إلى غير ذلك بوضوح وبدون لبس فيه. كالمستخدم هنا يشير المصطلح "عبور للوراء 08000055179" إلى عملية ‎Alls‏ فيها يتخطى المُولد ©0660 ذرية الهجين ‎hybrid progeny‏ راجعاً إلى أحد الأبوين ‎parents‏ على سبيل المثال؛ أول جيل هجين ‎generation hybrid F1 F1‏ مع واحد من التركيبات الوراثية الأبوية ‎F11 parental genotypes‏ الهجين ‎hybrid‏ ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "إنترون" إلى أي تتابع حمض نووي مشتمل في جين (أو تتابع نيوكليوتيد معبر عنها للفائدة) التي يتم نسخها ولا يتم ترجمتها. وتشمل الانترونات تتابع حمض ‎RNAYL ٠‏ المنسوخة من ذاك. كالمستخدم هنا يشير المصطلح 'معزول ‎"isolated‏ مكون حيوي ‎biological component‏ (مشتملاً على حمض أو بروتين) قد تم فصله فعلياً؛ تم إنتاجه من؛ أو تنقيته بعيداً عن المكونات البيولوجية ‎biological components‏ الأخرى في خلية الكائن الحي التي فيها يحدث المكون بصورة طبيعية ‎component naturally‏ (أي ‎RNA 3 DNA‏ الكروموسومي ‎chromosomal‏ ‎Vo‏ والغير كروموسومي؛ والبروتينات)؛ بينما تؤثر على تغير وظيفي أو كيميائي في المكون (على سبيل المثال؛ ربما يتم عزل الحمض النووي من كروموسوم بكسر الروابط الكيميائية ‎chemical‏ ‏5 التي تربط الحمض النووي إلى ‎DNA‏ المتبقي في الكروموسوم). يشمل جزيئات الحمض النووي ‎Nucleic acid molecules‏ والبروتينات التي قد تم "عزلها"” جزيئات حمض نووي وبروتينات تم تنقيتها بواسطة طرق التنقية القياسية ‎standard purification methods‏ ويحتوي
—vq- ‏والبروتينات المعدة بواسطة‎ nucleic acids ‏أيضاً المصطلح "معزول" على الأحماض النووية‎ ‏بالإضافة إلى جزيئات الحمض النووي المخلق‎ chost cell ‏التعبير المؤتلف في خلية المضيف‎ peptides ‏والبروتينات؛ والببتيدات‎ doles ‏إلى عملية بها يتم تحويل‎ "gene expression ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "التعبير الجيني‎ ‏للحمض‎ transcriptional unit ‏على وحدة النسخ‎ coded information ‏المعلومات المشفرة‎ © ‏إلى جزء عملي أو جزء غير عملي أو جزء‎ (genomic ‏الجينومي‎ DNA Sie ‏النووي (مشتملاً؛‎ ‏مشتملاً على تخليق البروتين. قد يتم حث التعبير‎ We ‏من الخلية؛‎ structural part ‏تركيبي‎ ‏تعرض خلية؛ أو نسيج؛ أو‎ (Jd) ‏على سبيل‎ texternal signals ‏الجيني بالإشارات الخارجية‎ ‏الذي يزيد أو يقلل من التعبير الجيني. ويمكن أيضاً‎ agent ‏إلى العامل‎ organism ‏كان حي‎ ‏إلى بروتين.‎ RNA ‏إلى‎ DNA ‏عن الجين أن يتم تنظيمه في أي مكان في الطريق من‎ pail] ٠ ‏ويحدث تنظيم التحكم الجيني على سبيل المثال خلال التحكمات التي تحدث على النسخ؛‎ ‏أو من خلال‎ MRNA (ie ‏والمعالجة؛ وتفسخ الجزيئات الوسطية‎ (RNA ‏والترجمة؛ ونقل‎ ‏جزيئات‎ degradation ‏أو تفسخ‎ «compartmentalization ‏التنشيط؛» أو الإخماد؛ أو التقسيم‎ ‏البروتين الخاصة بعد ما تم صناعتهم؛ أو بمجموعات من ذلك كله. وقد يتم قياس التعبير الجيني‎ ‏أو مستوى البروتين بواسطة أي طريقة معروفة في المجال؛ مشتملاً على‎ RNAD ‏عند مستوى‎ 5 ‏أو‎ (Western blot ‏وبقعة ويسترن‎ (RT-PCR Northern blot ‏وليس الحصر بقعة نورترن‎ ‏الحية؛‎ in vitro WAY ‏في خارج‎ 0101610 activity assay ‏فحص أو فحوصات نشاط البروتين‎
Jin vivo ‏أو في داخل الخلايا الحية‎ dn situ ‏أو في مكانها‎ homology—based gene ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "إسكات جين على أساس التجانس‎ ‏إلى مصطلح عام يشمل كل من إسكات الجين النسخي واسكات الجين بعد‎ (HBGS) "5110006109 ٠ target ‏وقد ينتج إسكات مكان الهدف‎ .posttranscriptional gene silencing ‏النسخي‎ ‏من تثبيط النسخ (إسكات‎ 001101460 silencing locus ‏ابواسطة مكان إسكات غير مرتبط‎ 5 ‏(إسكات الجين‎ mRNA ‏أو تفسخ‎ (TGS ‏؛‎ transcriptional gene silencing ‏الجين النسخي‎ double-stranded RNA ‏المزدوج الجديلة‎ RNA ‏مدينة بإنتاج‎ (RTGS ‏بعد النسخي؛‎ ‏متناظر للمحفز أو تتابعات منسوخة كل على حدة. ويقترح اشتمال المكونات الخلوية‎ (dsRNA) +
ل ‎cellular components‏ المميزة في كل عملية أن ال165 ‎PTGS,‏ التي يسببها ‎dsRNA‏ ‏تنتج من تنويع آلية مشهورة قديمة. بالرغم من أنه تُعد المقارنة الدقيقة ما بين ‎TGS‏ و5765 صعبة التحقيق بسبب أنها تعتمد عامة على تحليل أماكن الإسكات ‎silencing loci‏ المميزة. ويمكن لمكان الجين المتحور الواحد أن يتم توضيحه ليحفز كل من ‎TGS‏ و0165 بسبب إنتاج ‎dsRNA ©‏ المتناظر للمحفز والتتابعات المنسوخة للجينات المستهدفة المختلفة. انظر على سبيل المثال 225:365-79 ‎Mourrain et al. (2007) Planta‏ إنها أكثر أن عد ‎siRNAs‏ ‏الجزيئات الحقيقية ‎actual molecules‏ التي تحفز ‎PTGS; TGS‏ على التتابعات المتجانسة ‎:homologous sequences‏ يحتمل أن تحفز الفظلل51|4 في هذا النموذج إسكات واضافة الميثيل ‎methylation‏ لتتابعات متجانسة في سيس وفي ترانس خلال انتشار إضافة الميثيل في ‎٠‏ - الجين المتحور إلى المحفز الداخلي ‎.endogenous promoter‏ كالمستخدم هنا يشير المصطلح "جزئ حمض نووي ‎‘nucleic acid molecule‏ (أواحمض نووي" أو "بولي نيوكليوتيد") إلى هيئة البوليميرية ‎cpolymeric form‏ التي ربما تشتمل على كل من جديلات ‎RNA‏ في اتجاه وعكس اتجاه ‎DNAS «cDNA 5 cell‏ الجينوم؛ والهيئات المخلقة ‎synthetic forms‏ والبوليميرات المختلطة ‎mixed polymers‏ من السابق. ‎lays‏ يشير ‎Ve‏ النيوكليوتيد . إلى ريبونيوكليوتيد ‎ribonucleotide‏ أو دي أوكسي ريبونيوكليوتيد ‎cdeoxyribonucleotide‏ أو هيئة معدلة من أي نوع من النيوكليوتيد. ويستخدم "جزئ الحمض النووي" هنا كمترادف ل"الحمض النووي" و"عديد النيوكليوتيد”. ويتكون الحمض النووي ‎We‏ على الأقل من ‎٠١‏ قواعد في الطول؛ ما أن يذكر غير ذلك. وربما يشير المصطلح إلى جزئ ‎RNA‏ أو ‎DNA‏ 2 محدد الطول. ويشمل المصطلح هيئات ‎DNAY‏ المفرد الجديلة أو المزدوج الجديلة. ‎Yo‏ وربما يشمل جزئ الحمض النووي على إما أو كل من النيوكلوتيدات المعدلة والتي تحدث طبيعياً والمتصلة ببعضها بواسطة روابط نيوكليوتيد طبيعية الحدوث و/أو غير طبيعية الحدوث. ربما يتم تعديل جزيئات الحمض النووي كيميائياً أو بيوكيميائياً؛ أو ربما يحتوي قواعد نيوكليوتيد ‎nucleotide bases‏ غير طبيعية أو مشتقة؛ كالذي سوف يتم اختصاره بالفعل من هؤلاء من ذوي المهارة في المجال. وتشتمل مثل هذه التعديلات على سبيل المثال على علامات ترقيمية ‎labels Yo‏ أو إضافة الميثيل؛ أو تبديل واحد أو أكثر من النيوكليوتيدات الطبيعية الحدوث بمتمائتل
“yy ‏(مثل» الروابط‎ internucleotide modifications ‏أو تعديلات ما بين النيوكليوتيد‎ «analog methyl ‏على سبيل المثال؛ الميثيل فوسفات‎ uncharged linkages ‏الغير مشحونة‎ ‏والفوسفوأميدات‎ phosphotriesters | ‏وفوسفوتراي استرات‎ «phosphonates charged ‏وهكذا؛ والروابط المشحونة‎ ccarbamates ‏والكربامات‎ (phosphoramidates ‏والفوسفورودايثيوات‎ (phosphorothioates ‏على سبيل المثال؛ فوسفوروثيوات‎ :linkages © ‏فيها: على سبيل‎ pendent moieties ‏وهكذا؛ وأشطار غير مبتوت‎ (phosphorodithioates ‏وسورالين‎ cacridine ‏اكريدين‎ (JB ‏المثال: الببتيدات؛ والمقحمات 17160318105: على سبيل‎ ‏والروابط المعدلة‎ calkylators ‏والعوامل القلوية‎ ¢chelators ‏وهكذا؛ والخالبات‎ (psoralen alpha anomeric ‏على سبيل المثال؛ ألفا أنوميرك للحمض النووي‎ :modified linkages ‏هكذا). ويشمل المصطلح "جزئ الحمض النووي" أيضاً على أي تكيف‎ nucleic 26005 ٠ ‏تكيفات أحادية الجديلة‎ le ‏مشتملة‎ topological conformation ‏طوبولوجي‎ ‎partially ‏ومضاعف ثنائي جزئياً‎ «double-stranded ‏وثنائي الجديلة‎ single-stranded <hairpinned ‏؛ ومضاعف ثلاثي جزئياً 0 ؛ وفي شكل دبوس الشعر‎ 0 .padlocked ‏والمقفلة‎ «circular ‏والدائرية‎ ‏مصنوعة‎ RNA ‏يجرى النسخ في اتجاه نمط من "5 إلى '3 بطول جديلة الظلاانا. ويعني هذا أن‎ ١ -5- ribonucleotide ‏بواسطة الإضافة التتابع من ريبونيوكليوتيد -5- تراي فوسفات‎ ‏(مع النهاية الضرورية‎ growing chain ‏النهاية '3 من السلسلة المتكونة‎ J) triphosphates ‏في أي‎ 01501616 elements ‏تشير العناصر المنفصلة‎ La). (pyrophosphate ‏للبيروفوسفات‎ ‏(مثل؛ تتابعات نيوكليوتيد خاصة)‎ circular gal ‏أو‎ linear ‏من جزئ الحمض النووي الخطي‎ ‏لو كانوا مرتبطين أو ربما تكون مرتبطة‎ AT ‏بالتناسب إلى عنصر‎ Blasi) ‏إلى أن تكون "عكس‎ ٠ ‏إلى نفس الحمض النووي في اتجاه 57 من هذا العنصر. ومشابهاً لذلك ربما تكون العناصر‎ ‏المنفصلة 'في الاتجاه السفلي” بالتناسب إلى عنصر أخر لو كانوا مرتبطين أو ربما يتم ارتباطهم‎ ‏بنفس الحمض النووي في اتجاه '3 من هذا العنصر.‎ given ‏إلى مكان قاعدة معطاة‎ "7856 position ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "موضع القاعدة‎ designated ‏خلال حمض نووي مصمم‎ nucleotide residue ‏راسب النيوكليوتيد‎ Jbase Yo
دج
‎nucleic acid‏ وربما يتم التعرف على الحمض النووي المصمم بالمحاذاة ‎alignment‏ (انظر
‏أدناه) مع الحمض النووي بمرجعية. كالمستخدم هنا يشير المصطلح ‎"hybridization cua‏ إلى ‎Adee‏ التي فيها يتهجن السلاسل ‎ALY‏ من النيوكليوتيدات ‎oligonucleotides‏ وأمثالها عن طريق الرابطة الهيدروجينية ‎chydrogen bonding ©‏ التي تشتمل على واطسن - كريك ‎«(Watson—Crick)‏ أو هوجستين ‎«(Hoogsteen)‏ أو هوجستين العكسي ‎(reversed Hoogsteen)‏ للرابطة الهيدروجينية ما بين قواعد مكملة ‎diay j.complementary bases‏ عامة يتكون جزيئات الحمض النووي من قواعد ‎Wo Ally nitrogenous bases dua ji‏ من البريميدينات ‎pyrimidines‏ (سيتوزين ‎«(C) cytosine‏ يوراسيل ‎uracil‏ (لا)؛ وثايمين ‎thymine‏ (1)) أو البيورينات ‎purines‏ (أدينين ‎(A) adenine | ٠‏ وجوانين ‎guanine‏ (©)). وتكون هذه القواعد النيتروجينية روابط هيدروجينية ‎hydrogen bonds‏ ما بين البيريميدين ‎pyrimidine‏ والبيورين ‎«purine‏ ويشير الترابط 009 ما بين البريميدين والبيورين إلى 'تزاوج القواعد ‎base pairing‏ وبشكل خاص أكثر ‎A‏ ‏سوف ترتبط هيدروجينياً بآ أو لا و© سوف ترتبط ب©. ويشير "المكمل ‎'‘Complementary‏ ‏إلى تزاوج القواعد الذي يحدث ما بين تتابعين معروفين اثنين للحمض النووي أو منطقتين معروفتين
‎Ye‏ اثنتين لنفس تتابع الحمض النووي. كالمستخدم هنا تشير المصطلحات "من الممكن تهجينه بشكل خاص” وامكمل بشكل خاص” إلى درجة كافية من التكامل ‎Jie‏ هذ الترابط الخاص والثابت يحدث ما بين قليل من النيوكليوتيد والظلل» أو اللا المستهدف. ولا تحتاج سلسلة النيوكليوتيد القليلة أن تكون ‎77٠٠٠‏ متكاملة إلى التتابع المستهدف لها لكي تكون من الممكن تهجينها بشكل خاص. وتتدخل سلسلة النيوكليوتيد ‎٠‏ القليلة التي من الممكن تهجينها بشكل خاص عندما ترتبط سلسلة النيوكليوتيد القليلة إلى جزئ ‎RNA, DNAY‏ المستهدف مع الوظيفة الطبيعية لل/لا0 المستهدف أو ‎RNA‏ المستهدف؛ وهناك درجة كافية من التكامل لتجنب الترابط الغير خاص لسلسلة النيوكليوتيد القليلة إلى تتابعات غير مستهدفة تحت الظروف التي فيها يُعد الترابط الخاص مرغوباً؛ على سبيل المثال تحت الظروف الفسيولوجية ‎conditions‏ 0071501091081 في حالة الفحوصات داخل ‎LAD‏ الحية ‎in‏
اا hybridization ‏هذا الترابط كونه تهجين‎ Jie ‏إلى‎ la. systems ‏أو الأنظمة‎ vivo assays
خاص.
سوف تختلف ظروف التهجين التي تؤدي إلى درجات خاصة من الصرامة معتمدة على طبيعة
طريقة التهجين ‎hybridization method‏ المختارة وتركيبة ‎composition‏ وطول تتابعات
0 الأحماض النووية المهجنة ‎nucleic acid‏ 7/011012779. بصفة ‎dle‏ سوف تساهم درجة الحرارة
للتهجين والقوة الأيونية ‎ionic strength‏ (خاصة تركيز ‎Na+ concentration‏ و/أو تركيز
‎(Mg2+‏ لمنظم التهجين ‎hybridization buffer‏ في صرامة التهجين» بالرغم من أن أوقات
‏الغسيل ‎wash times‏ أيضاً تؤثر في الصرامة ‎stringency‏ وقد تم شرح الحسابات التي تتعلق
‎Sambrook et al. ‏بظروف التهجين المطلوبة للحصول على درجات خاصة من الصرامة في‎ (ed.), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., vol. 1-3, Cold ٠
‎Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989,
‎.chs. 9 and 11
‏كالمستخدم هنا يشمل المصطلح "ظروف الصارمة ‎"stringent conditions‏ الظروف التي تحتها
‏سوف يحدث التهجين فقط لو كان هناك أقل من ‎75٠0‏ متصل بالخطأ ما بين جزئ التهجين ‎١‏ وال/لا0 المستهدف. وتشمل "الظروف الصارمة” على مستويات خاصة أكثر من الصرامة. وبذلك
‏كالمستخدم ‎lia‏ سوف لا يتم التهجين في ظروف "الصرامة المتوسطة ‎stringency‏ 110061818"
‏هي التي تحتها الجزيئات التي فيها أكثر من 756 متصل بالخطاً؛ وسوف لا يتم التهجين في
‏ظروف من "الصرامة العالية ‎"high stringency‏ التي فيها تتابعات بأكثر من 7780 اتصال
‏بالخطاً؛ وظروف "الصرامة العالية جداً” هي تلك التي فيها تتابعات بأكثر من ‎7٠١‏ اتصال بالخطأ ‎٠‏ والتي لا يتم فيها التهجين.
‏في تجسيمات خاصة يمكن للظروف الصارمة أن تشمل التهجين عند 10 درجة مئوية؛ وتالياً لذلك
‏بعمليات غسيل ‎Washes‏ عند 10 درجة مئوية ب550/0.1 ‎sad SDSJ0.1x‏ 50 دقيقة.
‏ويعد التالي ظروف تهجين ‎ales‏ غير قاصرة:
ديو" صرامة عالية جداً: التهجين في محلول منظم ‎5X SSC buffer‏ عند 15 درجة مثوية لمدة ‎١‏ ‎dela‏ وتتم ‎Lhe‏ الغسل في محلول منظم ‎2X SSC‏ في ‎sha dan‏ الغرفة ‎room‏ ‎١١ sad temperature‏ دقيقة لكل واحدة؛ وتتم عملية الغسل في محلول منظم ‎SSC‏ *0.5 عند درجة مثوية ‎٠١0 sad‏ دقيقة لكل واحدة. © صرامة عالية: التهجين في محلول منظم ‎5X-6X SSC‏ عند 70-75 درجة مئوية ‎Yoo) Tad‏ ساعة؛ وتتم عملية الغسل في محلول منظم ‎2X SSC‏ في درجة حرارة الغرفة ‎١-0 sad‏ 5 دقيقة لكل واحدة؛ وتتم ‎lee‏ الغسل في محلول منظم ‎1X SSC‏ عند 70-55 درجة مثوية لمدة ‎٠١‏ ‏دقيقة لكل واحدة. صرامة متوسطة: التهجين في محلول منظم ‎6X SSC‏ في درجة حرارة الغرفة إلى 5*5 درجة مثوية ‎70-١6 sad ٠‏ ساعة؛ وتتم عملية الغسل على الأقل مرتين في محلول منظم ‎2x=3x SSC‏ في درجة حرارة الغرفة إلى ‎oo‏ درجة مئوية لمدة ‎>-٠١‏ ؟ دقيقة لكل واحدة. قد يتبقى في بعض التجسيمات الخاصة جزيئات الحمض النووي الممكن تهجينها بخاصة مرتبطة تحت ظروف تهجين صرامة عالية جداً. وقد يتبقى في تلك التجسيمات وغيرها جزيئات الحمض النووي الممكن تهجينها بخاصة مرتبطة تحت ظروف تهجين صرامة عالية جداً. وربما قد يتبقى في ‎Vo‏ تلك التجسيمات وغيرها جزيئات الحمض النووي الممكن تهجينها بخاصة مرتبطة تحت ظروف تهجين متوسطة الصرامة. كالمستخدم هنا يشير المصطلح ‎(iF‏ النيوكليوتيد" إلى بوليمير 00170066 حمض نووي قصير. وربما يتم تكوين قليل النيوكليوتيدات بكسر أجزاء الأحماض النووية الطويلة ‎longer nucleic‏ ‎«acid segments,‏ أو ببلمرة ‎polymerizing‏ المواد السابقة للنيوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎precursors | ٠‏ الفردي. وتسمح المخلقات الآلية بتخليق قليل النيوكليوتيدات إلى العديد من ‎Sle‏ ‏تزاوج القواعد في الطول. وربما يتم استخدام قليل النيوكليوتيد كمجسات ‎probes‏ للكشف عن الطلا0_والظل!»_لأنها_ربما ترتبط إلى تتابع نيوكليوتيد مكمل. ‎lays‏ يتم استخدام قليل النيوكليوتيدات . المتكون .من ‎DNAL‏ (أوليجو ‎mS so‏ ريبونيوكليوتيدات ‎(oligodeoxyribonucleotides‏ في ‎(PCR‏ والذي يُعد تقنية لتضخيم ‎amplification‏ تتابعات
و ‎DNA‏ الصغيرة. وفي ‎PCRY‏ تشير قليل النيوكليوتيد بشكل نموذجي إلى "البادئ ‎primer‏ الذي يسمح ‎DNAT‏ بوليميراز ليطيل من قليل النيوكليوتيد وينسخ الجديلة المكملة ‎complementary‏ ‎.strand‏ ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "تعريف التتابع ‎"sequence identity‏ أو "التعريف ‎"identity‏ ‏© إلى سياق فيه ربما يشير تتابعى حمض نووي اثنين أو بولي ببتيد اثنين إلى راسب التتابعين الاثنين واللذان يُعدا نفس التتابعين عندما يتم التراص لأجل تطابق أقصى على شباك مقارنة خاص. كالمستخدم هنا يشير المصطلح "نسبة تعريف التتابع” إلى القيمة التي يتم تحديدها بمقارنة تتابعين بمحاذاة قصوى ‎(fi)‏ تتابعات حمض نووي؛ وتتابعات حمض أميني ‎amino acid‏ ‎(Sequences)‏ من خلال شباك مقارنة حيث ربما يضم جزء التتابع في شباك المقارنة على ‎٠‏ إضافات ‎additions‏ أو حذوفات ‎ol) deletions‏ فجوات ‎(gaps‏ بالمقارنة بالتتابع المرجعى (التي لا تضم إضافات أو حذوفات) لأجل تراص أقصى للتتابعين الاثنين. ويتم حساب النسبة بتحديد رقم المواضع التي ‎baie‏ يحدث النيوكليوتيد المطابق أو راسب الأحماض النووية ‎amino‏ ‎acid residue‏ في كلا التتابعين لإنتاج عدد من المواضع المتصلة ‎«matched positions‏ وبقسمة رقم مواضع الاتصال على الرقم الكلي للمواضع في شباك المقارنة؛ ويتم ضرب النتيجة في ‎٠٠١ ١‏ لإنتاج النسبة المثوية لتعريف التتابع. وتعد الطرق لتراص التتابعات للمقارنة معروفة جيداً في المجال. ويتم توضيح البرامج ولوغاريتمات التراص في على سبيل المثال: ‎Smith and Waterman (1981) Adv.
Appl.‏ ‎Math. 2:482; Needleman and Wunsch (1970) J.
Mol.
Biol. 48:443;‏ ‎Pearson and Lipman (1988) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
U.S.A. 85:2444;‏ ‎Higgins and Sharp (1988) Gene 73:237-44; Higgins and Sharp (1989) ٠‏ ‎CABIOS 5:151-3; Corpet etal. (1988) Nucleic Acids Res. 16:10881-90;‏ ‎Huang et al. (1992) Comp.
Appl.
Biosci. 8:155-65; Pearson etal. (1994)‏ ‎Methods Mol.
Biol. 24:307-31; Tatiana et al. (1999) FEMS Microbiol.‏ ‎.Lett. 174:247-50‏ وقد يوجد اعتبار مفصل لطرق التراص للتتابع وحسابات التجانس
1+ ‎Altschul et al. (1990) J.
Mol.
Biol.
Sie homology calculations‏ 215:403-10. يُتاح المركز القومي للمعلومات الحيوية التكنولوجية ‎National Center for Biotechnology‏ ‎Altschul <BLAST™) Basic Local Alignment Search Tool (NCBI) Information‏ ‎(et al. (1990) ©‏ من العديد من المصادرء؛ بما في ذلك المركز القومي للمعلومات الحيوية التكنولوجية ‎(Bethesda, MD)‏ وعلى شبكة الإنترنت؛ للاستخدام فيما يتعلق بالعديد من برامج تحليل ‎analysis programs‏ التتابعات. يُتاح وصف لكيفية تحديد تطابق تتابع مستخدمًا هذا البرنامج على الإنترنت بموجب القسم ‎"ae Lud‏ ل "81517. من أجل مقارنات وظيفة تتابعات الحمض النووي»؛ فإنه يمكن استخدام وظيفة 'تتابعات 2 ‎Blast‏ لبرنامج ‎(Blastn) BLAST™‏ ‎٠‏ مستخدماً المتغيرات الافتراضية ‎default parameters‏ سوف تؤدي تتابعات الحمض النووي ذات التشابه الأكبر للتتابعات المرجعية إلى نسبة تطابق زائدة عند قياسها بهذه الطريقة. كالمستخدم هنا يشير المصطلح 'مرتبط ‎ee‏ إلى سياق حيث يكون تتابع الحمض النووى الأول مرتبطة عملياً بتتابع الحمض النووى الثاني عندما يكون تتابع الحمض النووى الأول في علاقة مع تتابع الحمض النووى الثانى. فعلى سبيل المثال؛ يكون المحفز مرتبط عملياً بتتابع التشفير عندما ‎Vo‏ يؤثر المحفز على النسخ أو التعبير لتتابع التشفير ‎sequence‏ 000109. وعندما تنتج بإعادة الالتثام؛ فإنه تعد تتابعات الأحماض النووية المرتبطة عملياً بصفة ‎dale‏ متماسة وحيث يكون من الضروري لربط منطقتين اثنتين لتشفير البروتينات ‎protein-coding regions‏ في نفس إطار القراءة ‎frame‏ 680109. بالرغم من أنه لا تحتاج العناصر أن تكون متماسة لكي تكون مرتبطة ‎٠‏ كالمستخدم هنا يشير المصطلح ‎"jad‏ إلى منطقة من ال/لا0ا التي تقع بصفة عامة عكس الاتجاه (في اتجاه منطقة '5 من الجين) التي يتم احتياجها في عملية النسخ. وربما تيح المحفزات التنشيط الكافي أو كبت ‎repression‏ الجين التي تتحكم فيه. وربما يحتوي المحفز على تتابعات خاصة التي يتم معرفتها بواسطة عوامل النسخ. وتلك العوامل ربما ترتبط بتتابعات محفز ‎DNAN‏ ‏وتؤدي إلى إعادة توظيف ‎RNAY‏ بوليميراز» والذي عبارة عن إنزيم يخلق ‎RNA‏ من منطقة © التشفير ‎coding region‏ للجين.
الا كالمستخدم هنا يشير المصطلح "يتحول" أو 'ينقل" إلى عملية حيث ينقل الفيروس أو الناقل ‎vector‏ جزيئات الحمض النووي إلى الخلية. والخلية التي 'يتم تحويلها” بواسطة جزئ حمض نووي 'يتم ‎"als‏ إلى الخلية عندما يصبح جزئ الحمض النووي يمكن مضاعفته بثبات بواسطة الخلية؛ إما بواسطة دمج جزئ الحمض النووي إلى ‎asia‏ خلوي ‎cellular genome‏ أو بمضاعفة يصبوغية ‎episomal replication ©‏ (جرثومية). وكالمستخدم هنا يشمل المصطلح ‎Jind‏ ‏00 كل التقنيات التي بها يمكن لجزئ الحمض النووي إدخاله في مثل هذه الخلية. على سبيل ‎JE‏ وليس الحصر: تقل المادة الوراثية بنواقل فيروسية ‎viral vectors‏ وتحويل باستخدام نواقل بلازميدية ‎¢plasmid vectors‏ وعملية كهربية ‎(Fromm et electroporation‏ ‎Nature 319:791-3)‏ )1986( .21؛ ونقل الشحم ‎(Felgner etal. )1987( lipofection‏ ‎¢Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:7413-7) ٠‏ والحقن المجهري ‎microinjection‏ ‎Jus ¢(Mueller et al. (1978) Cell 15:579-85)‏ بواسطة أجروباكتيريم ‎(Fraley et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Agrobacterium-mediated transfer‏ ‎USA 80:4803-7)‏ .501؛_وارتشاف _ال/لا0ا_المباشر؛ وتحويل بواسطة ويسكرز ‎Whiskers-mediated transformation‏ ؛ وانفجار بمقذوف مجهري ‎microprojectile‏ .(Klein et al. (1987) Nature 327:70) bombardment ١٠ eX0Jgenous ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "جين معدل وراثياً” إلى تتابع حمض نووي خارجى‎ ‏الجين المعدل وراثياً هو تتابع جين (مثل؛ جين مقاوم لمبيدات‎ easly ‏في مثال‎ nucleic acid ‏الأعشاب)؛ وجين يشفر لمركب مفيد صناعياً أو صيدلياً؛ أو جين يشفر لصفة مرغوبة زراعياً. وفي‎ ‏حيث يثبط‎ antisense ‏تتابع حمض نووي ضد الإحساس‎ Why ‏يعد الجين المعدل‎ «AT ‏مثال‎ ‏التعبير عن تتابع الحمض النووي ضد الإحساس تعبير تتابع الحمض النووي المستهدف. وربما‎ ٠
Sig) Why ‏يحتوي الجين المعدل واثياً على تتابعات تنظيمية مرتبطة عملياً بالجين المعدل‎ ‏عبارة عن تتابع حمض نووي للفائدة.‎ Why ‏محفز). وفي بعض التجسيمات يعد الجين المعدل‎ ‏بالرغم من إنه في تجسيمات أخرى يعد تتابع الحمض النووي للفائدة تتابع حمض نووي داخلي؛‎ ‏حيث تكون النسخ الإضافية من الجينوم لتتابع الحمض النووي الداخلية مرغوبة؛ أو تتابع الحمض‎
م النووي الذى يكون في اتجاه ضد الإحساس مع الأخذ في الاعتبار إلى تتابع جزئ الحمض النووي المستهدف في ‎all AEE‏ المضيف ‎host organism‏ كالمستخدم هنا يشير المصطلح ‎oI‏ جزئ حمض نووي يمكن إدخاله إلى الخلية؛ وبذلك يتم إنتاج خلية متحولة ‎transformed cell‏ وربما يشمل الناقل على تتابعات حمض نووي تُتيح لها © المضاعفة في الخلية المضيفة؛ حيث تكون أصل المضاعفة. وتشمل الأمثلة على وليس الحصرء بلازميد ‎plasmid‏ أو كوزميد 0050010 وباكتيريوفا ج ‎bacteriophage‏ أو فيروس الذي يحمل ‎DNA‏ خارجي إلى داخل خلية. ويمكن أيضاً للناقل أن يشمل على واحد أو أكثر من الجينات؛ و/أو جزيئات ضد الإحساس ‎antisense molecules‏ و/أو جينات علامة منتقاه؛ والعناصر الجينية الأخرى المعروفة في المجال. وربما ينقل؛ أو يحول؛ أو يصيب الناقل الخلية؛ وبذلك يجعل ‎٠‏ الخلية تعبر عن جزيئات الحمض النووي و/أو البروتينات المشفرة بواسطة الناقل. وربما يشمل الناقل اختيارياً على المواد التي تساعد على تحقيق دخول جزئ الحمض النووي إلى داخل الخلية (مثلاًء ليبوسوم ‎.(liposome‏ ‏كالمستخدم هنا يشمل المصطلح "نبات" على النباتات وأجزاء النبات مشتملاً ولا يقتصر على خلايا النبات وأنسجة النبات ‎Jie‏ الأوراق ‎deaves‏ والسيقان ‎stems‏ والجذور ‎roots‏ والأزهار ‎flowers Vo‏ وحبوب اللقاح ‎pollen‏ والبذور 56605. ويُعد صنف النباتات التي يمكن استخدامها في الاختراع الحالي بصفة عامة بشكل واسع كصنف النباتات الأعلى أو الأقل والتي من الممكن تعرضها للطفرة ‎mutagenesis‏ مشتملة على كاسيات البذور ‎angiosperms‏ (نباتات مونوكوتيليدونس ‎(gla ymonocotyledonous‏ كوتيليدونس ‎(dicotyledonous‏ وعاريات البذور ‎(gymnosperms‏ والسرخسيات ‎ferns‏ والطحالب متعددة الخلايا ‎.multicellular algae‏ ‎٠‏ وبذلك ‎"old Jody‏ على نباتات مونوكوتيليدونس ‎monocotyledons plants‏ ونباتات داي كوتيليدونس ‎.dicotyledons plants‏ وتشمل ‎bls did‏ داي كوتيليدونس على التبغ ‎tobacco‏ وأرابيدوبسيس ‎«Arabidopsis‏ _وفول الصويا ‎soybean‏ والطماطم ‎dfomato‏ ‏والبابايا ‎papaya‏ والكانولا 8ا6800؛ والقطن 0601100؛ وعباد الشمس ‎sunflower‏ والبرسيم 3 والبطاطس ‎(potato‏ والعنب ‎(grapevine‏ والبسلة ‎(pigeon pea‏ والبازلاء ‎«pea‏ ‎Yo‏ والكرنب ‎(Brassica‏ والحمص ‎«chickpea‏ وبنجر السكر ‎sugar beet‏ وبذور اللفت
4+ ‎rapeseed‏ والبطيخ ‎cwatermelon‏ والشمام ‎«melon‏ والفلفل ‎cpepper‏ والفول السوداني ‎(peanut‏ والقرع ‎pumpkin‏ والفجل 2801557 والسبانخ ‎espinach‏ والكوسا ‎squash‏ والبروكلي ‎cbroccoli‏ والملفوف ‎«cabbage‏ والجزر ‎ccarrot‏ والقرنبيط ‎ccauliflower‏ والكرفس ‎«celery‏ ‏والكرنب الصيني ‎Chinese cabbage‏ والخيار ‎ccucumber‏ والباذنجان ‎eggplant‏ والخس © ©61006ا. وتشمل أمثلة نباتات مونوكوتيليدونس على الذرة ‎corn‏ والأرز 106 وقصب السكر ©1686 5008؛ والشعير ‎barley‏ والجاودار ‎rye‏ والذرة الرفيعة ‎csorghum‏ وبساتين الفاكهة 005 ؛ والخيزران ‎<bamboo‏ والموز ‎<banana‏ وأعشاب الأحواض ‎ccattails‏ والزنابق والشوفان ‎coat‏ والبصل ‎conion‏ والذرة العويجة ‎millet‏ (دخن)؛ والتريتيكال ‎triticale‏ ‏كالمسنخدم هنا يشير المصطلح ‎sal‏ نبات ‎"plant material‏ إلى الأوراق» والسيقان» ‎sally‏ ‎٠‏ والأزهار» أو أجزاء الزهرة؛ والفاكهة؛ وحبوب اللقاح؛ وخلايا البيض ‎cells‏ 99©؛ وخلايا الزيجوت ‎5d) zygotes‏ « والقصاصات ‎ceuttings‏ استنباتات الخلايا أو الأنسجة؛ أو أي جزء أو منتج نبات. ‎dy‏ بعض التجسيمات يشمل ‎sale‏ النبات على كوتيليدون ‎cotyledon‏ أو ورقة ‎leaf‏ ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح 'مفتاح ‎Real‏ إلى آلية عند نهاية جين تسمح بالترجمة لجين حالي في الاتجاه السفلي. ويمكن لآلية مفتاح الترجمة أن يتم توظيفه عند مستوى الحمض النووي ‎Vo‏ (على سبيل ‎(JB‏ مكان دخول الريبوسوم الداخلي لحقيقيات النواة أو الفيروس ‎eukaryotic‏ ‎«(IRES) internal ribosome entry site‏ أو مكان ربط بديل ‎«alternative splicing site‏ أو مكان كسر ريبوزيم ‎(ribozyme cleavage site‏ أو مستوى ببتيد/بروتين (على سبيل المثال؛ ببتيد ‎QA‏ أو ‎and‏ الببتيد ‎2A‏ أو ببتيد إنتاين» أو مكان كسر البروتياز ‎protease cleavage‏ ‎(site‏ ‎٠‏ وتعد تلك الآليات لمفتاح الترجمة عند مستوى الحمض النووي أو عند مستوى الببتيد/البروتين معروفة في المجال. ‎Li, H.M.
Schumacher, et al. (2010) J.
Sie «hl‏ .2 ‎Biotechnol. 145(1): 9-16; Y.
Chen, K.
Perumal, et al. (2000) Gene Expr.‏ ‎T.D.
Dinkova, H.
Zepeda, et al. (2005) Plant J. 41(5):‏ ;9(3):133-143 ‎Y.L.
Dorokhov, M.V.
Skulachev, etal. (2002) Proc.
Natl.
Acad.‏ ;722-731 ‎A. 99(8): 5301-5306; ©. Fernandez-Miragall and C.
Yo‏ .5 .لا ‎Sci.‏
مو
Hernandez (2011) PLoS One 6(7): 622617: E. Groppelli, G.J. Belsham, etal. (2007) J. Gen. Virol. 83(Pt 5): 1583-1588; S.H. Ha, Y.S. Liang, et al. (2010) Plant Biotechnol J. 8(8): 928-938; A. Karetnikovand ‏.ا‎ Lehto (2007) J. Gen. Virol. 83(Pt 1): 286-297; A. Karetnikov and ‏.كا‎ Lehto (2008) Virology 371(2): 292-308; M.A. Khan, H. Yumak, et al. (2009) J. ©
Biol. Chem. 284(51): 35461-35470; and D.C. Koh, S.M. Wong, et al. ‏والمحتوى _لتلك المدمجة هنا‎ (2003) J. Biol. Chem. 278(23): 20565-20573 ‏بمرجعية إلى مجاميعهم. وقد تم إفشاء بنايات التعبير المتعدد الجيني المحتوي إنتينات معدلة في‎ ‏براءات الاختراع الأمريكية أرقام 7,071,577 5 7,751,530 بالإضافة إلى تطبيق براءة‎ ٠٠١/١157 EY ‏الاختراع الأمريكية‎ ٠ ‏أو "جين‎ "5616018516 marker ‏كالمستخدم هنا يشير المصطلح "علامة من الممكن انتقائها‎ ‏إلى جين يتم استخدامه اختيارياً في‎ "selectable marker gene ‏علامة من الممكن انتقائه‎ ‏النبات من العامل المختار أو يمد بمقاومة‎ WIA ‏تحويل النبات ل ؛ على سبيل المثال؛ حماية‎ ‏وتستقبل فقط هذه‎ selective agent ‏إلى العامل المختار‎ tolerance ‏©51518006©ا/سماحية‎ ‏وظيفية من الممكن انتقائها والتي تعد قادرة على القسمة أو النمو تحت‎ Ale ‏الخلايا أو النباتات‎ vo ‏المضادات‎ (JED ‏ظروف تشتمل على عامل مختار. وتشمل أمثلة العوامل المختارة على سبيل‎ ‏ونيوميسين‎ «Spectinomycin ‏والمشتملة على سبيكتينوميسين‎ antibiotics ‏الحيوية‎ ‏وباروميسين 081017101777/010؛ وجنتاميسين‎ kanamycin ‏وكاناميسين‎ cneomycin ‏وتشمل العلامات التي يمكن انتقائها على جين‎ hygromycin ‏وهجيرومايسن‎ cgentamicin ‏(00111)؛ التي تعبر عن‎ neomycin phosphotransferase ‏الإنزيم نيوميسين فوسفوترانسفيراز‎ ٠ ‏801510116؛_والجينات‎ kanamycin ‏مقاومة إلى المضاد الحيوي كاناميسين‎ Jody ‏إنزيم‎ ‎(paromomycin ‏والباروميسين‎ antibiotics neomycin ‏للمضادات المتعلقة كالنيوميسين‎ ‏هيجروميسين فوسفوترانسفيراز‎ ay ‏و6418؛_ أو_الجين‎ gentamicin ‏والجنتاميسين‎ ‏(001)؛ التي تعبر عن إنزيم مشتمل على مقاومة‎ hygromycin phosphotransferase ‏للهيجرومايسين. وقد تشمل جينات يتم انتقائها أخرى على جينات تشفير لمقاومة مبيد الأعشاب‎ YO gy
مشتملة على بار ‎Bar‏ (مقاومة ‎BASTAR am‏ (جلوفوسينات أمونيوم ‎glufosinate‏ ‎«(ammonium‏ أو فوسفينوترايسين ‎SY (PPT) phosphinothricin‏ سنسيز ‎(ALS) acetolactate synthase‏ مقاومة ضد المثبطات ‎Jie inhibitors‏ سلفونيل يوريا ‎«(USs) sulfonylureas‏ واميدازولوينونات ‎«(IMls) imidazolinones‏ وتراي زولوبيريميدين ‎«(TPs) triazolopyrimidines ©‏ وبيريميدنيل أوكسيبتزوات ‎pyrimidinyl oxybenzoates‏ (0085)؛_وسلفونيل أمينو كربونيل تراي أزولينونات ‎sulfonylamino carbonyl‏ ‎triazolinones‏ )3 تمنع الخطوة الأولى من تخليق الأحماض الأمينية متفرعة السلسلة ‎(branched-chain amino acids‏ والجليفوسات ‎glyphosate‏ ؛ و 47 -0ا؛ ومقاومة المعدن ‎metal resistance‏ أو الحساسية. ‎.sensitivity‏ ويشير المصطلح ‎Ade’‏ إيجابية ‎'marker—positive ٠‏ إلى النباتات التي قد تم تحويلها لتشمل جين العلامة الذي من الممكن
انتقائه. قد يتم دمج العديد من العلامات التي يمكن كشفها وانتقائها إلى ناقل التعبير المختار ليسمح بالتعرف وانتقاء النباتات المتحولة ‎transformed plants‏ أو المتحولين ‎transformants‏ ‏وهناك العديد من الطرق المتاحة للتأكد من التعبير لعلامات الانتقاء في النباتات المتحولة؛ والتي ‎Vo‏ تشتمل على سبيل المثال على اللا( والها0 (تفاعل سلسلة بوليميراز ‎polymerase chain‏ ‎«(reaction‏ وبقعة ‎Southern blotting jis‏ وبقعة ‎(RNAJN‏ والطرق المناعية ‎immunological methods‏ للكشف عن البروتين المعبر ‎de‏ من الناقل» ‎Sle‏ البروتين المترسب ‎precipitated protein‏ الذي يتوسط لمقاومة فوسفوينوترسين ‎phosphinothricin‏ ‎resistance‏ أو بروتينات أخرى مثل جينات المسجل بيتا- جلوكرونيداز ‎B-glucuronidase‏ ‎(GUS) ٠‏ ولسيوفيراز ‎duciferase‏ وبروتين الضوء الأخضر ‎green fluorescent protein‏ ‎(GFP)‏ و05480؛_وبيتا- جالاكتوسيداز ‎«B-galactosidase‏ وكلورامفينيكول أسيتل ترانسفيراز ‎«(CAT) chloramphenicol acetyltransferase‏ وألكالين فوسفاتيز ‎alkaline‏ ‎«phosphatase‏ وأمثال ذلك (انظر ‎Sambrook, et al., Molecular Cloning: A‏ ‎.(Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Press, N.Y., 2001‏
وه
وتستخدم جينات العلامة التي من الممكن انتقائها لاختيار الخلايا المتحولة أو الأنسجة. وتشمل جينات العلامة التي من الممكن انتقائها على جينات مشفرة لمقاومة المضاد الحيوي ‎antibiotic‏ ‎resistance‏ _مثل هللاء المشفرين لإنزيم نيوميسين فوسفوترانس فيراز || ‎neomycin‏ ‎(NEO) phosphotransferase ١١‏ وهيجروميسين فوسفوترانس فيراز ‎hygromycin‏ ‎(HPT) phosphotransferase ©‏ بالإضافة إلى جينات مانحة مقاومة لمركبات مبيدات الأعشاب. وتشفر جينات مقاومة لمبيد الأعشاب ‎resistance genes‏ 16510106 ابصفة ‎ide‏ ‏لبروتين معدل مستهدف غير حساس إلى مبيد الأعشاب أو لإنزيم الذي يحلل أو يزيل سمية ‎detoxifies‏ مبيد الأعشاب في النبات قبل أن يعمل. على سبيل المثال مقاومة إلى جليوفوسات ‎glyphosate‏ أو التي تم الحصول عليها باستخدام جينات مشفرة لإنزيمات مستهدفة مطفرة ‎Sie «mutant target enzymes ٠‏ - إينوبيروفيل شيكيمات-؟*- فوسفات سنسيز ‎(EPSPS) 5—enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase‏ وقد تم إفشاء الجينات والمطفرات ‎EPSPS] mutants‏ في براءة الاختراع الأمريكية أرقام 414027875 ؛ ‎0,VAATEY‏ ولاتتن نارف رارف و44 كرا رف 5 ‎dy T,0TT,0AY‏ تم الحصول على مقاومة لجليوسينات أمونيوم ‎glufosinate ammonium‏ وبرومو أوكسينيل ‎dbromoxynil ٠‏ و 47 - ‎gla‏ كلوروفينوأوكسي أسيتات 061816 2,4-0101010011600:/8 (0-47) باستخدام جينات بكتيرية ‎bacterial genes‏ مشفرة لفوسفينوتريسن أسيتيل ترانسفيراز ‎cencoding phosphinothricin acetyltransferase‏ أو نيترايليز ‎«nitrilase‏ أو 7 - داي كلوروفينوكسي | أسيتات ...مونو | أوكسجينيز | ‎2,4-dichlorophenoxyacetate‏ ‎sl «monooxygenase‏ تزيل سمية مبيدات الأعشاب كل على حدة. وقد تم إفشاء ‎٠٠‏ إنزيمات/جينات لمقاومة/سماحية جلوفوسينات في براءات الاختراع الأمريكية أرقام ‎YY, ALE‏ ‎TVA 50, YYT,YTA‏ 2,5؛ و2,9011,771. وقد تم إفشاء الإنزيمات 5 | الجينات سابقاً لمقاومة 0-427 في براءات الاختراع أرقام ‎1,٠004647‏ و1,197,401؛ بالإضافة إلى تطبيقات براءة الاختراع الأمريكية 047775 ‎٠008/0‏ وبراءة الاختراع الدولية 487 7/67 ‎Yon‏
وقد تم إفشاء الإنزيمات/الجينات للنيتريليز سابقاً في براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎AY TEA‏
اسه يمكن لمبيدات الأعشاب الأخرى تثبيط نقطة النمو أو النسيج الإنشائي؛ مشتملة على إيميدازولينوان ‎imidazolinone‏ أو سلفونيل يوريا ‎sulfonylurea‏ وتم توضيح جينات للمقاومة/السماحية لحمض أسيتوهيدروكسي سنسيز ‎(AHAS) acetohydroxyacid synthase‏ وأسيتولاكتات سنسيز ‎(ALS)‏ لمبيدات الأعشاب تلك. وقد تم إفشاء الجينات والمطفرات ‎AHAST‏ والمطفرات في © براءات الاختراع أرقام 73رلألارك 5 ‎EVTY‏ رف ولانارناارف 5 ‎AST AVY‏ و/2,597/,97. وقد تم إفشاء الجينات والمطفرات ‎ALS]‏ في براءات الاختراع أرقام 017,184 ,؛ ‎AY‏ ل ‎Jods‏ جينات مقاومة لجليوفوسات ‎Glyphosate resistance genes‏ جينات * - إينوبيروفيل شيكيمات-؟ - فوسفات سنسيز ‎mutant 5-enolpyruvylshikimate-3 —phosphate‏ ‎(EPSPs) synthase ٠‏ المطفرة (بواسطة إدخال حمض نووي معاد الاتحاد و/أو هيئات متعددة لتخليق الطفرةٍ في الخلايا الحية لجينات ‎EPSPs‏ الأصلية)؛ وجينات 80/8 وجينات جليوفوسات أستيل ترانسفيراز ‎(GAT)‏ كل على حدى). وتشمل جينات المقاومة لمركبات الفوسفينو الأخرى على جلوفوسينات (جينات فوسفينوتريسن أسيتل ترانسفيراز ‎phosphinothricin acetyl‏ ‎(PAT) transferase‏ من أنواع الستربتومايسيس ‎«Streptomyces species‏ مشتملة على ‎١٠‏ ستريتومايسيس هيجروسكوبيكس ‎Streptomyces hygroscopicus‏ وستريبتومايسيس فيريديكروماجينز ‎«(Streptomyces viridichromogenes‏ وأحماض بيريدينوكسي ‎pyridinoxy‏ أو فينوكسي بروبيونيك ‎phenoxy proprionic‏ وسيكلوهيكسونز ‎cyclohexones‏ ‏(جينات تشفير مثبط ‎.(ACCasell inhibitor-encoding genes‏ وقد تم توضيح جينات المقاومة/السماحية لمبيد الأعشاب لأستيل كوانزيم ‎coemzyme‏ 9 كربوكسيليز ‎carboxylase‏ ‎(ACCase) ٠٠‏ في براءات الاختراع الأمريكية أرقام ‎VTY, TY‏ ,50 0,894,088 يمكن الحصول على جزئ ‎DNA‏ مشفر لجين ‎@roA‏ مطفر تحث انضمام ‎ATCC‏ رقم 9757 ويتم إفشاء تتابع النيوكليوتيد للجين المطفر ‎mutant gene‏ في براءة الاختراع الأمريكية رقم 4,714,071 ل 620008 )؛ والتطبيق الأوروبي لبراءة الاختراع رقم 77 377 ‎٠‏ ل ‎Kumada et‏ ‎al.‏ وبراءة الاختراع رقم 4,598,774 ل ‎«Goodman et al‏ وافشاء تتابعات نيوكليوتيد لجينات ‎Yo‏ إنزيم جلوتامين سنستايز ‎glutamine synthetase genes‏ التي تمنح مقاومة لمبيدات الأعشاب
وه ‎.L-phosphinothricin نسيرثونيفسوف-٠. Jie‏ وتم تقديم تتابع النيوكليوتيد لجين ‎PAT‏ في الطلب الأوربى رقم ‎Leemans etal ١ Y¢Y Y¢‏ وتصف ‎DeGreef et al., loaf‏ ‎Bio/Technology 7:61 (1989)‏ إنتاج نباتات متحورة وراثياً التي تعبر عن جينات خيمرية بار مشفرة ‎chimeric bar genes coding‏ إلى نشاط ‎PAT‏ وِيُعد من الأمثلة التي توضح الجينات ‎oo‏ المائحة ‎ded‏ إلى أحماض فينوكسي بروبيونيك ‎phenoxy proprionic acids‏ وسيكلوهيكسونز ‎ccyclohexones‏ مشتملة على سيزوكسيدم ‎sethoxydim‏ وهالوكسيفوب ‎chaloxyfop‏ جينات ال8001-51؛ و8001-52/؛ و001-53 والجينات الموضحة ‎dads‏ ‎.Marshall etal., Theon.
Appl.
Genet. 83:435 (1992)‏ وتم توضيح جينات ‎GAT‏ ‏القادرة على منح مقاومة جليفوسات في براءة الاختراع الدولية ‎5٠090178519‏ ل ‎.Castle etal‏ ‎Ve‏ وتم توضيح الجينات المائحة مقاومة لمبيدات الأعشاب 47 -0؛ وفوب ‎fop‏ وبيريديل أوكسي أوكسين ‎pyridyloxy auxin‏ في طلب البراءة الأمريكى رقم مسلسل ‎VV [OAV AY‏ وبراءة الاختراع الدولية ‎Yeo) VETY‏ يمكن لمبيدات الأعشاب الأخرى تثبيط التخليق الضوئي ‎photosynthesis‏ ؛ ومنها ترايازين ‎(1s+ psbA) triazine‏ أو بنزونيتريل ‎benzonitrile‏ (جين نيتريليز ‎.(nitrilase gene‏ ‎Vo‏ وتصف )1991( 3:169 ‎Przibila et al, Plant Cell‏ _تحويل الكلاميدوموناس ‎Chlamydomonas‏ بالبلازميدات ‎plasmids‏ المشفرة لجينات ‎pSbA‏ المطفرة. ويتم إفشاء تتابعات النيوكليوتيد لجينات النيتريليز في براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎EA TEA‏ ستوكر ‎«Stalker‏ وجزيئات ‎DNAY‏ المحتوية على تلك الجينات تعد متاحة تحت انضمام ‎ATCC‏ للأرقام ‎LIVESEY 5 (IVES) 5 OTE‏ وتم وصف تكون نسائل أو التعبير ‎DNAL‏ المشفر لجلوتاثيون ‎ Y.‏ 5- ترانسفيراز ‎glutathione S-transferase‏ بواسطة ‎Hayes et al., Biochem.
J.‏ )1992( 285:173. لأغراض الاختراع الحالي تشمل جينات العلامات المنتقاه وليس الحصر على جينات التشفير: نيوميسن فوسفوترانسفيراز ‎Fraley et al. (1986) ) neomycin phosphotransferase ١١ ١١‏ ‎¢(CRC Critical Reviews in Plant Science 4:1-25‏ وسياناميد هيدراتيز ‎cyanamide‏ ‎Maier—Greiner et al. (1991) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA ) hydratase Yo‏
هع
88:4250-4)؛ واسبرتات كيناز ‎caspartate kinase‏ وداي هيدروداي بيكولينات سنسيز ‎dihydrodipicolinate synthase (Perl et al. (1993) Bio/Technology‏ (11:715-718؛ وتريبتوفان ديك ربوكسيلاز ‎(Goddiin etal. tryptophan decarboxylase‏ ‎gly (1993) Plant Mol.
Bio. 22:907-912)‏ هيدرو _داي بيكولينات سنسيز ‎dihydrodipicolinate synthase ©‏ واسبارتاد كيناز المنزوع الحساسية ‎desensitized‏ ‎¢(Perl et al. (1993) Bio/Technology 11:715-718) aspartade kinase‏ وجين بار ‎(Toki etal. (1992) Plant Physiol. 100:1503-1507; and Meagher etal.‏ ‎bar gene Crop Sci. 36:1367)‏ ,)1996(¢ وتريبتوفان ديكربوكسيلاز ‎tryptophan‏ ‎¢(Goddijn et al. (1993) Plant Mol.
Biol. 22:907-912) decarboxylase‏ ‎٠‏ ونيوميسن فوسفوترانسفيراز ‎(Southem et al. (NEO) neomycin phosphotransferase‏ ‎J.
Mol.
Appl.
Gen. 1:327‏ )1982(¢ وهيجروميسين فوسفوترانسفيراز ‎hygromycin‏ ‎HPT) phosphotransferase‏ أو ‎(Shimizu et al. (1986) Mol.
Cell Biol. (HYG‏ (6:1074؛ وداي هيدرو فولات ريداكتاز ‎(Kwok et (DHFR) dihydrofolate reductase‏ ‎cal. (1986) PNAS USA 4552)‏ وفوسفينوتريسين استيل ترانسفيراز ‎phosphinothricin‏
—Y¢Y ‏وحمض‎ ¢(DeBlock et al. (1987) EMBO J. 6:2513) acetyltransferase ١٠ 2,2-dichloropropionic acid dehalogenase ‏داي كلوروبروبيونيك ديهالوجيناز‎ ‏وحمض‎ ¢(Buchanan-Wollatron et al. (1989) J.
Cell.
Biochem. 13D:330) (Anderson et al., U.S.
Pat. acetohydroxyacid synthase ‏اسيتوهيدروكسي سنسيز‎
—o 5 ¢No. 4,761,373; Haughn et al. (1988) Mol.
Gen.
Genet. 221:266) 5-enolpyruvyl-shikimate—phosphate ‏إينوبيروفيل- شيكيمات- فوسفات مسنسيز‎ ٠ ‏وهالو آريلنيريليز‎ ¢(Comai et al. (1985) Nature 317:741) (aroA) synthase ¢(Stalker et al., published PCT application WO87/04181) haloarylnitrilase (Parker et al. acetyl-coenzyme A carboxylase ‏كربركسيليز‎ A ‏واستيل -كوانزيم‎ dihydropteroate ‏(1990)؛ وداي هيدرو بتيورات سنسيز‎ Plant Physiol. 92:1220)
32 kD, ¢(Guerineau et al. (1990) Plant Mol.
Biol. 15:127) (sul ١( synthase Yo
الضوئي ‎١|‏ بوتي ببتيد ‎(Hirschberg et al. (psbA) photosystem II polypeptide‏ ‎Science 222:1346)‏ )1983(. وأيضاً المشتمل هو عبارة عن جينات تُشفر لمقاومة ل: الكلورامفينيكول ‎chloramphenicol‏ ‎¢(Herrera-Estrella et al. (1983) EMBO J. 2:987-992)‏ والميثوتركسات ‎(Herrera-Estrella et al. (1983) Nature 303:209-213; Meijer methotrexate ©‏ ‎cet al. (1991) Plant Mol Bio. 16:807-820 (1991)‏ وهيجروميسين ‎hygromycin‏ ‎(Waldron et al. (1985) Plant Mol.
Biol. 5:103-108; Zhijian et al. (1995)‏ ‎Plant Science 108:219-227; and Meijer et al. (1991) Plant Mol.
Bio.‏ )¢16:807-820 وستربتوميسين ‎(Jones et al. (1987) Mol.
Gen. streptomycin‏ ‎«Genet. 210:86-91) ٠‏ والسبيكتوميسين ‎(Bretagne-Sagnard et al. spectinomycin‏ ‎Transgenic Res. 5:131-137)‏ )1996(¢ والبليوميسين ‎(Hille et al. bleomycin‏ ‎Plant Mol.
Biol. 7:171-176)‏ )1986(¢ والسلفوناميد ‎(Guerineau et sulfonamide‏ ‎tal. (1990) Plant Mol.
Bio. 15:127-1306)‏ والبروموكسونيل ‎(Stalker bromoxynil‏ ‎(Streber et al. (1989) D-¢,v, cet al. (1988) Science 242:419-423)‏ ‎«Bio/Technology 7:811-816) ٠‏ والجليفوسات ‎(Shaw et al. (1986) glyphosate‏ ‎«Science 233:478-481)‏ والفسفينوتزريسين ‎(DeBlock et al. phosphinothricin‏ ‎EMBO J. 6:2513-2518)‏ )1987(. ولا تعني قائمة الجينات السابقة التي يمكن انتقائها كعلامات والمسجلة أنها ‎Spall‏ عليهم. ويتم شمول أي جين يمكن انتقائه أو مسجل بواسطة الاختراع الحالي. ولو من الضروري فمثل هذه ‎Ys‏ الجينات يمكن أن تتوالى بالطرق المعروفة في المجال. ويتم تخليق جينات العلامات التي يمكن انتقائها أو المسجل لأجل تعبير أقصى في النبات. ولأجل هذا قد تم تعديل تتابع التشفير للجين لتعزيز التعبير في النباتات. ويتم تصميم جين العلامة المخلق ليصبح معبراً عنه في النباتات في مستوى أعلى مؤدياً إلى كفاءة تحويل أعلى. وتعد الطرق متاحة في المجال لأجل تحسين أقصى للجينات المخلقة. وفي الحقيقة قد تم تحسين أقصى للعديد من ‎Yo‏ الجينات لزيادة التعبير لمنتج الجين في النباتات.
—gy— ‏قد يتم تحسين تتابع جين العلامة بشكل أقصى للتعبير في أنواع نبات خاصة أو بديلاً عن ذلك قد‎ ‏تكون معدلة للتعبير الأقصى في عائلات النبات. وربما يتم تحديد روامز النبات المفضلة من‎ ‏الروامز ذات التردد العالي في البروتينات المعبر عنها بالكمية الكبرى في أنواع نبات خاصة‎ ‏للفائدة. انظر على سبيل المثال براءة الاختراع الأوروبية رقم 7844977 ؛ ورقم 788457 + وبراءة‎
Perlak et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9/1477 ‏الاختراع الدولية‎ © 88:3324-3328; and Murray et al. (1989) Nucleic Acids Research 17: ‏وبراءة الاختراع الأمريكية رقم‎ €0,YAVATY ‏وبراءة الاختراع الأمريكية رقم‎ ¢477-498 ‏في هذه الطريقة قد يتم تحسين تتابعات النيوكليوتيد بشكل أقصى للتعبير في‎ Lays. 0,7, TY ‏أي نبات. وقد تم التعرف على أن كل أو أي جزء من تتابع الجين ربما يتم تحسينها بشكل أقصى‎ ‏أو تخليقها. وبهذا أيضاً ربما يمكن استخدام تتابعات محسنة كلياً أو محسنة جزئياً.‎ ٠ ‏الجينات التي تمنح مقاومة لمبيد الأعشاب:‎ acetohydroxyacid synthase ‏المقاومة/السماحية لحمض أسيتو هيدروكسي سنسيز‎ A ‏أو‎ imidazolinone ‏ضد مبيدات الأعشاب إميدازولينوان‎ (ALS) ‏وأسيتولاكتيت سنسيز‎ (AHAS) ‏سلفونيل يوريا 0768//ا501100. وقد تم إفشاء الجينات والطفرات ل1185/ والطفرات في براءات‎
AST, AVY 5 ‏الاختراع الأمريكية أرقام 1/11,777رك و"الأرك تارف ولا ارت كارف‎ ve ‏إفشاء الجينات والطفرات ل15/ في براءات الاختراع الأمريكية أرقام‎ ay .0,4YAATY
OVE), AY ‏ف و‎ VF 0d ‏ضد مبيدات‎ (ACCase) ‏كربوكسيليز‎ A ‏جينات المقاومة/السماحية لأستيل كوانزيم‎ oo ‏و/أو . حمض آريلوكسى فينوكسي بروبانويك‎ alah plain Glad ‏ديكلوفوب‎ (Haloxyfop ‏(مشتملاً هالوكسيفوب‎ aryloxyphenoxypropanoic acid ٠ ‏تم‎ (Quizalofop ‏كوازالوفوب‎ <Fluazifop ‏فلوازيغوب‎ <Fenoxyprop ‏فينوكسيبروب‎ (Diclofop 0,894,088 50 VIX, TY ‏توضيحها في براءات الاختراع أرقام‎ ‏ت. . جينات لأجل جليفوسات مقاومة/سماحية. جين ل *-إينوبيروفيل -؟-فوسفوشكيمات سنسيز‎ ‏تم‎ (synthase ‏سنسيز‎ ES3P) 5-enolpyruvyl —3-phosphoshikimate synthase
م ¢ — توضيحه في براءة الاختراع الأمريكية رقم 5,714,109. ‎Slay‏ ل ©-إينوبيروفيل -؟- فوسفوشكيمات سنسيز ‎(ES3PS) 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase‏ والطفرات تم توضيحها في براءات الاختراع الأمريكية أرقام ‎ONVANTEY 5 8,080 ATO‏ ‎EA 0,1YY,EY0 0,7) ٠ , VAY‏ 54 ,م ‎LOTT 0AY‏ & جينات لجلوسينات (بايالافوس ‎bialaphos‏ ؛ فوسفوفينوتزيسن ‎phosphinothricin‏ ‎(PPT)‏ مقاومة/سماحية. جينات لفوسفينوثريسن أستيل ترانسفيراز ‎phosphinothricin‏ ‎(Pat) acetyltransferase‏ تم توضيحها في براءات الاختراع الأمريكية أرقام دا الف وم اكد لكر وم )1 ,.¢0,00 ‎As‏ توضيح جين لجين المقاومة بايالافوس ‎(Bar)‏ في براءات الاختراع الأمريكية أرقام 211,775,رف و4 تأرف 5 ‎TEA EYY‏ 0 و 1,117,115 وتم ‎Ve‏ توضيح جين لجلوتامين سينستاز ‎(GS) glutamine synthetase‏ في براءة الاختراع الأمريكية رقم 4,4975,797/7 والتطبيق الأوروبي لبراءة الاختراع أ١ ‎EP YYY ry‏ ‎x‏ جينات المقاومة/السماحية لهيدروكسي فينيل بيروفات داي أوكسجينز ‎hydroxy phenyl‏ ‎(HPPD) pyruvate dioxygenase‏ ضد مبيدات الأعشاب ايزوأوكسازول ‎isoxazole‏ ‏ودايكيتونيتريلز ‎diketonitriles‏ و/أو ترايكيتونز ‎dtriketones‏ و/أو مشتملاً سالكوترايوان ‎sulcotrione ١٠‏ وميزوترايوان ‎mesotrione‏ والذي تم توضحيهم في براءات الاختراع الأمريكية أرقام 089 ‎SLT 0 50, Y TA‏ ‎z‏ جينات 0-467 مقاومة/سماحية. ‎As‏ توضيح جين 7ء0-45]- مونوأوكسيجنيز ‎2,4-D—-monooxygenase‏ في براءة الاختراع الأمريكية رقم 2 ‎EASE ER IPR FANE‏ وتم إفشاء جينات إضافية ل0-407 مقاومة/سماحية في براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎٠٠ 5 0 2 ١‏ و5787 إل .7 براءة الاختراع الدولية. خ. تم توضيح جين لإميدازول جليسرول فوسفات ديهيداتاز ‎(IGPD)‏ ضد مبيدات الأعشاب إميدازول ‎imidazole‏ و/أو ترايازول ‎triazole‏ في براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎41,7٠١‏ 5,5. وتم إفشاء الجينات لإنزيمات التفسخ دايكامبا ‎Dicamba degrading enzymes‏ (اوكسجينز
6 ؛ وفيرودوكسين ‎ferredoxin‏ وريدكتاز ‎(reductase‏ ضد مبيدات الأعشاب دابكامبا ‎herbicide Dicamba‏ في براءات الاختراع أرقام ‎E SOV, YY, AQT‏ الأر١٠رلاء‏ ‎La‏ جينات لمبيدات الأعشاب التي تثبط التخليق الضوئي؛ مشتملاً ترايازين ‎triazine‏ (جينات ‎psbA‏ و+15) أو بينزونيتريل ‎benzonitrile‏ (جين نيتريليز ‎.(nitrilase gene‏ انظر ‎Se‏ ‎Przibila et al, Plant Cell 3:169 (1991) o‏ لإفشاء ‏ تحول الكلاميدوموناس ‎Chlamydomonas‏ 4 البلازميدات المشفرة لجينات ‎psbA‏ المطفرة. ويتم الإفشاء لتتابعات النيوكليوتيد لجينات نيتريليز في البراءة الأمريكية رقم 5,890,747 وتعد جزيئات ال5/ل01 المحتوية على تلك الجينات متاحة تحت ملكية ‎ATCC‏ للأرقام 27475؛ و2745 و17557. ويتم توضيح إنشاء نسائل والتعبير عن تشفير ‎DNAD‏ لجلوتاثايون 5- ترانسفيراز ‎glutathione‏ ‎S-transferase ٠‏ بواسطة )1992( 285:173 ‎et al., Biochem.
J.‏ 65لا18. تمتلك كل التقنيات والمصطلحات المستخدمة هنا نفس المعنى كالمفهوم بشكل واسع من هؤلاء من ذوي المهارة العادية في المجال والتي ينتمي إليها هذا الإفشاء ما أن يتم شرح غير ذلك بصفة خاصة. وقد توجد التعريفات للمصطلحات المشهورة في علم الجزيئات الحيوية ‎molecular‏ ‎biology‏ على سبيل المثال: 1994 ‎Lewin, Genes V, Oxford University Press,‏ ‎(ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of ١٠‏ ‎Molecular Biology, Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9);‏ ‎and Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: A‏ ‎Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN‏ )1-56081-569-8. ‎ag ٠١‏ الإفشاء بجزيئات حمض نووي مشتملة على تتابع نيوكليوتيد مخلقة والتي ربما توظف كمحفز ثنائي الاتجاه. وربما يكون المحفز ثنائي الاتجاه المخلق في بعض التجسيمات عملياً مرتبط بواحد أو اثنين من تتابعات النيوكليوتيد للفائدة. على سبيل المثال؛ ربما يكون المحفز ثنائي الاتجاه المخلق عملياً مرتبط بواحد أو اثنين من تتابعات النيوكليوتيد للفائدة (مثل؛ جينين؛ واحد عند كل نهاية من المحفز)؛ وذلك لتنظيم النسخ على الأقل واحدة (مثل؛ واحدة أو كليهما) من تتابعات ‎Yo‏ النيوكليوتيد للفائدة. ربما يتم تحقيق تعبير خاص وأنماط تنظيمية ‎Jia)‏ مثل تلك التي يتم عرضها
له بواسطة الجينات تحت تحكم محفز ‎(SCBV‏ بدمج ‎URS) incorporating‏ من محفز ‎SCBV‏ ‏في المحفز ثنائي الاتجاه المخلق مع الأخذ في الاعتبار إلى تتابع النيوكليوتيد للفائدة التي تكون عملياً مرتبطة بمحفز ثنائي الاتجاه مخلق. يتم توضيح بعض التجسيمات للاختراع بالأمثلة هنا ‎men‏ عنصر قلب محفز أدنى من محفز جين © يوبيكوتين-1 الأحادي الاتجاه للذرة ‎gene‏ 00-1أناوأ0انا ‎(ZmUbil) maize‏ إلى سياق جزيئي مختلف عن ذلك المحفز الأصلي لهندسة المحفز الثنائي الاتجاه المخلق. ويشير عنصر قلب محفز أدنى هنا إلى ”7010105116 ويساوي تقريباً ‎Yeo‏ نيوكليوتيد ‎(nt)‏ في الطول. وقد تم التعرف من التوالي والتحليل لعناصر 0010100115 من أنواع ‎Zeal‏ المتعددة والتركيبات الجينية ‎Z. mays]‏ على أن تكون عناصر ‎minUbilP‏ الوظيفية عالية الحفاظء ‎Jie‏ عنصر ‎minUbilP ٠‏ هذا ربما يحتفظ بوظيفته كبادئ لعملية النسخ لو شارك؛ على سبيل ‎J‏ على الأقل ما يقرب من 7975؛ و/أو على الأقل ما يقرب من ‎A‏ و/أو على الأقل ما يقرب من ‎٠‏ ؛ وإ/أو على الأقل ما يقرب من ‎AY‏ و/أو على الأقل ما يقرب من 797؛ و/أو على الأقل ما يقرب من ‎AY‏ و/أو على الأقل ما يقرب من 794؛ و/أو على الأقل ما يقرب من 20 و/أو على الأقل ما يقرب من 678 و/أو على الأقل ما يقرب من ‎ay‏ و/أو على الأقل ما ‎٠‏ يقرب من 798؛ و/أو على الأقل ما يقرب من 09 و/أو على الأقل ما يقرب من ‎Vee‏ ‏تعريف تتابع إلى عنصر ‎ .586© ID NO:1! minUbilP‏ وتشمل خصائص عناصر ال5110ل0101 التي ربما تكون مفيدة في بعض التجسيمات للاختراع على سبيل المثال وليس الحصر على التتابع عالى الحفاظ من النيوكليوتيد سالف الذكر؛ و/أو وجود على الأقل صندوق ‎TATA‏ واحد؛ و/أو وجود على الأقل واحد ‎OB)‏ اثنين) من عناصر إجماع الصدمة الحرارية. ‎٠‏ وبالأخص عناصر 010105116 ربما يتم تداخل عناصر ‎plea)‏ أكثر من صدمة حرارية واحدة خلال تتابع ‎.minUbilP‏ ‏ربما تضم في بعض التجسيمات عملية دمج عنصر ‎MINUDILP‏ في سياق جزيئي مختلف عن ذلك المحفز الأصلى لهندسة محفز ثنائي الاتجاه مخلق على دمج عنصر ال ‎SIMINUBITP‏ ‏الحمض النووي لمحفز /50681؛ بينما يقوم بعكس اتجاه عنصر ال 5110ل101مع الأخذ في ‎Yo‏ الاعتبار راسب التتابع لمحفز /5681. وبذلك ربما يضم محفز ‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه المخلق على
-١ه-‏ عنصر قلب محفز أدنى ‎mInUDIIPY‏ والواقع على '3؛ وفي الاتجاه العكسي مع الأخذ في الاعتبار؛ لتتابع النيوكليوتيد للمحفز ‎¢SCBY‏ مثل ذلك ربما تكون عملياً متصلة بتتابع النيوكليوتيد للفائدة والواقعة على '3 من تتابع النيوكليوتيد للمحفز /5081. وعلى سبيل المثال؛ ربما يتم دمج عنصر ال5110ل0010 عند نهاية '3من المحفز /5081 .في الاتجاه العكسي ‎reverse‏ ‎.orientation ©‏
‎Ly)‏ يضم أيضاً محفز ‎SCBY‏ الثنائي الاتجاه المخلق على واحد أو أكثر من إضافية للتتابع بالإضافة إلى عنصر 0010105110 وعناصر المحفز /5681 الأصلي. وربما يضم محفز ‎SCBV‏ ‏الثنائي الاتجاه في بعض التجسيمات على محفز ‎(URS‏ واإكسون (مثل؛ إشارة ‎signal‏ أو قائد 8061| ببتيد ‎¢(peptide‏ وانترون؛ وتتابع مباعد ‎‘spacer sequence‏ و/أو مجموعات من ‎٠‏ واحد أو أكثر من أي مما سبق. وربما يضم محفز ‎SCBV‏ الثنائي الاتجاه المخلق على سبيل المثال وليس الحصر على تتابع ‎URS‏ من محفز /5081؛ وإنترون من جين ‎(ADH‏ واكسون
‏يشفر ببتيد قائد من جين 011لا؛ وانترون من جين 011لا؛ ومجموعات من هذا كله. في بعض تلك الأمثلة المشتملة على محفز ‎SCBV‏ الثنائي الاتجاه المخلق المشتمل على محفز ‎(URS‏ ربما يتم انتقاء ال45الا لتمنح خصائص تنظيمية خاصة على المحفز المخلق. وتختلف ‎Vo‏ المحفزات المعروفة بشكل واسع في نوع التحكم التي تبذله على الجينات المرتبطة عملياً (مثل» الاستجابات البيئية ‎cenvironmental responses‏ والعظة التطورية ‎«developmental cues‏ والمعلومات المكانية ‎(spatial information‏ ويحافظ ال4+5الا المدمج في محفز غير متجانس ‎heterologous promoter‏ نموذجياً على نوع التحكم الذي يعرضه ‎URSH‏ مع الأخذ في الاعتبار إلى محفزه الأصلي والجين أو الجينات المرتبطة عملياً. ,)1989( ‎Langridge et al.‏ ‎Yo‏ 80008. وتشكل أمثلة عن محفزات حقيقيات النواة التي قد تم وصفها ‎Lays‏ تحتوي على ‎URS‏ ‏مشتمل خلال محفز 011لا ثنائي الاتجاه المخلق وفقاً لبعض التجسيمات على سبيل المثال وليس الحصر: تلك المحفزات الموضحة في براءات الاختراع أرقام ‎1,471,71١‏ (محفز 4581 للذرة)؛ و5,141,877 (محفز أكتين للأرز ‎¢(rice actin promoter‏ ولتت كرا (محفز 4 للذرة)؛ و 1,474,717 (محفز 08-1 للذة)؛ 1,777,577 (محفز 3م للذن)؛ ‎TAVY, TY‏ © (محفزات بنيوية للذرة ‎s¢(constitutive maize promoters‏ 1,177,707 (محفز أوليسين ‎L3‏
لجن rice actin 2 ١ ‏(محفز أكتين‎ 1,471,751 ¢(maize L3 01605710 promoter sll ‏(محفز خاص‎ O,ATY, ALA 5 ¢(rice actin 2 intron GAY ‏وانترون أكتين‎ (promoter spall ‏و14لا,1,794 (محفزات محرضة‎ ¢(root-specific promoter ‏بالجذر‎ ‎salt-inducible ‏(محفزات محرضة للملح‎ 1,0,١ VA 5 ‏6ا001-100010ا)؛‎ promoters pathogen—inducible ‏(محفزات محرضة للكائنات الممرضة‎ 707,١78 ‏010001655)؛‎ © phosphorous | ‏و 1,175,070 (محفزات محرضة لنقص الفوسفور‎ ¢(promoters ‏(محفزات ثنائية الاتجاه)؛‎ 1,748,170 5 ¢(deficiency-inducible promoters ‏وتطبيق براءة الاختراع‎ ¢(gamma—coixin promoter ‏و1,175,80 (محفز جاما- كويكسين‎ maize chloroplast ‏(محفز كلوروبلاست ألدولاز للذرة‎ ٠ /751,089 ‏الأمريكية رقم مسلسل‎ .(aldolase promoter ٠ nopaline ‏وتشمل أمثلة موضحة إضافية لمحفزات بدائيات النواة على محفز إنزيم نوبالين سنسيز‎ (Ebert et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA (NOS) synthase ‏(الذي‎ (OCS) octopine synthase ‏(64)16(:5745-9؛ ومحفز إنزيم أوكتوبين سنسيز‎
Agrobacterium ( ‏يحمل على بلازميدات تحدث أوراماً لأجروباكتيريم تيوميفاشينس‎ ‏مثل فيروس القرنبيط الفسيفسائي‎ (CAUliMOVIrUS) ‏ومحفزات كوليموفيروس‎ ¢((tumefaciens | ٠ 19S(Lawton et al. (1987) ‏ومحفز‎ ¢(the cauliflower mosaic virus (CaMV)) 355 CaMV(Odell et al. (1985) Nature ‏ومحفز‎ ¢Plant Mol. Biol. 9:315-24) 35S(Walker et al. (1987) Proc. ‏ومحفز فيروس فيجورت الفسيفسائي‎ ¢313:810-2 (Yang and ‏ومحفز سكروز سينيز‎ ¢Natl. Acad. Sci. USA 84(19):6624-8)
R ‏ومحفز معقد الجين‎ (Russell (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4144-8) ٠ ‏(براءات الاختراع‎ CaMV35S 5 «(Chandler et al. (1989) Plant Cell 1:1175-83)
FMV35S 5 ¢(0,0%+,14%7 5¢0,704,1£Y 50,Y0Y, 1:0 50, YYY, ATA ‏الأمريكية أرقام:‎ ‏(براءة‎ PCISV jessy ¢(0,YVA TVA 5 1,00), Yor ‏(براءات الاختراع الأمريكية أرقام:‎ ‏(براءة_الاختراع الأمريكية رقم‎ SCPL ‏ومحفز‎ ¢(0,A04, 014 ‏الاختراع الأمريكية رقم‎ (GenBank Accession No. V00087; AGRtu.nos ‏)؟ ومحفزات‎ 1176 ¥ Yo
ارج ‎Depicker et al. (1982) J.
Mol.
Appl.
Genet. 1:561-73; Bevan et al.‏ ‎Nature 304:184-7)‏ )1983( وأمثال ذلك. ربما يضم محفز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه المخلق أكثر في بعض التجسيمات على إكسون. على سبيل المثال في الأمثلة ربما يكون من المرغوب استهداف أو نقل بولي ببتيد المشفرة بتتابع © النيوكليوتيد للفائدة والمرتبطة عملياً بالمحفز لمكان خاص تحت مستوى الخلية و/أو المقسم. في تلك التجسيمات وغيرها؛ ربما يتم دمج تتابع مشفر (إكسون) إلى جزئ حمض نووي ما بين تتابع ‎ial)‏ /5081 الثنائي الاتجاه المخلق المتبقي وتتابع نيوكليوتيد مشفر بولي ببتيد. وربما يتم تنظيم تلك العناصر وفقاً إلى حسن التصرف من الممارسين المهرة حيث أنه يعزز المحفز /5081 ثنائي الاتجاه المخلق التعبير للبولي ببتيد (أو واحد أو كل من تتابعى تشفير البولي ببتيد الاثنين التي تعد ‎٠‏ عملياً متصلة بالمحفز) المشتمل على الببتيد المشفر بواسطة تتابع التشفير المدمجة في علاقة وظيفية مع المتبقي من البولي ببتيد. وفي الأمثلة بالأخص ربما يتم دمج إكسون مشفر لقائد؛ أو ‎(Jil‏ أو إشارة ببتيد ‎(Jie)‏ ببتيد 511لا قائد). وتشمل الببتيدات التي ربما يتم تشفيرها بواسطة إكسون المدمج في محفز ال011لا ثنائي الاتجاه المخلق؛ على سبيل المثال وليس الحصر: ببتيد قائد يوبيكويتن ‎¢(Ubil (Ji)‏ ببتيد نقل ‎١‏ البلاستيدات الخضراء ‎(CTP)‏ مثلء ‎the A. thaliana EPSPS CTP (Klee et al.‏ ‎Mol.
Gen.
Genet. 210:437-42), and the Petunia hybrida EPSPS‏ )1987( ‎CTP (della-Cioppa et al. (1986) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA‏ ‎ARYL mas (83:6873-7)‏ لتهديف البلاستيدات الخضراء ‎aly‏ داي كامبا مونوأوكسيجنيز ‎(DMO)‏ في منشور ‎PCT‏ دولي رقم براءة الاختراع ‎.٠٠١ 8/٠١64 Adal‏ ‎Yo‏ ربما أيضاً يتم دمج الانترونات في محفز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه المخلق في بعض التجسيمات للاختراع على سبيل المثال ما بين تتابع المحفز /5081 الثنائي المخلق المتبقي وتتابع النيوكليوتيد للفائدة الذي يتم ارتباطه عملياً بالمحفز. في بعض الأمثلة ربما يكون الانترون المدمج ‎intron‏ ‏00 في المحفز ‎SU SCBV‏ الاتجاه المخلق وليس الحصر ‎UTR‏ "5 الذي يعمل كتتابع قائد للترجمة وظيفياً التي توجد في ‎MRNA‏ معالج تماماً عكس الاتجاه لتتابع بدء الترجمة 8 (مثل التتابع القائدة للترجمة ‎translation leader sequence‏ ربما تؤثر على معالجة المنسوخ
وه
المبتدئ ‎«mRNAI primary transcript‏ و/أو ثبات ‎Sif; mRNA‏ كفاءة الترجمة ‎efficiency‏ 8100ا1805). وتشمل تتابعات قائدة للترجمة على قادة ‎leaders‏ بروتين الذرة ‎petunia Ls silly maize‏ للصدمة الحرارية (البراءة الأمريكية رقم 2,777,875)؛ وقادة البروتين المغلق لفيروس النبات ‎cplant virus coat protein leaders‏ وقادة نبات روبيسكى ‎plant‏ ‎rubisco leaders ©‏ وأخرين. انظر ‎Turner and Foster (1995) Molecular Sie‏ ‎.Biotech. 3(3):225-36‏ وتشمل أمثلة غير محدودة ‎UTRsl‏ '5 على ‎GmHsp‏ (البراءة الأمريكية رقم 5,154,177)؛ وا00002 (البراءة الأمريكية رقم ‎¢(2,YTY,AT0‏ و [أمحقتط؛ ‎«TEV (Carrington and Freed (1990) J.
Virol. 64:1590-7(‏ ر ‎AGRtunos‏ ‎(GenBank Accession No.
V0O0087; and Bevan et al. (1983) Nature‏ ‎٠‏ )304:184-7. وفي أمثلة بالأخص ربما يتم دمج إنترون ‎Ubil‏ و/أو ‎ADH‏ في محفز ‎SCBV‏
ثنائي الاتجاه المخلق. تشمل تتابعات إضافية والتي ربما تكون تم دمجها اختيارياً إلى محفز/5081 ثنائي الاتجاه المخلق على سبيل المثال وليس الحصر: تتابعات /3 غير مترجمة؛ مناطق انتهاء النسخ ل3؛ ومناطق تذييل بعديد الادينيلات ‎polyadenylation regions‏ ويوجد عناصر وراثية تقع في الاتجاه ‎Yo‏ السفلي لتتابع النيوكليوتيد للفائدة (مثل؛ تتابع للفائدة التي تعد مرتبطة عملياً بمحفز ‎SCBV‏ الثنائي الاتجاه المخلق)؛ ويشتمل على بولي نيوكليوتيدات التي تمد بإشارة تذييل بالبولي أدينيل» و/أو إشارات تنظيمية أخرى قادرة على التأثير على النسخ؛ معالجة ‎(MRNA‏ أو التعبير الجيني. وربما توظف إشارة تذييل البولي أدينيل في النباتات لتسبب إضافة نيوكليوتيدات البولي أدينيلات إلى النهاية '3 من المادة السابقة ‎Lays -MRNAL‏ يتم اشتقاق تتابع التذييل بالبولي أدينيل من الجين ‎٠‏ الطبيعي؛ ومن مختلف ‎clin‏ النباتات؛ أو من جينات ‎abs T-DNA‏ إنزيم نوبالين سينسيز للمنطقة '3 ‎(nos 3: Fraley et al. (1983) Proc. nopaline synthase 3' region‏ ‎Acad.
Sci.
USA 80:4803-7)‏ .211ل مثال غير محدود لمنطقة نهاية النسخ 3. ويتم تقديم مثال الاستخدام للمناطق المختلفة الغير مترجمة )"3 في ‎Ingelbrecht et al. (1989), Plant‏ ‎.Cell 1:671-80‏ وتشمل أمثلة غير محدودة لإشارات تذييل البولي أدينيلات واحد من جين
هه ‎(Ps.RbcS2-E9; Coruzzi et al. (1984) EMBO J.
Pisum sativum RbcS2‏ ‎and AGRtu.nos (GenBank Accession No.
EQ1312)‏ )3:1671-9. يضم محفز ‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه المخلق في بعض التجسيمات على واحد أو أكثر من تتابعات النيوكليوتيد التي تشمل تهديف الحمض النووي المشتمل على المحفز إلى مكان مخصص ‎particularlocus ©‏ في الجينوم ‎genome‏ للكائن الحي المستهدف ‎.target organism‏ وربما تشمل واحد أو أكثر من التتابعات على سبيل المثال التي تعد متجانسة إلى أجزاء تتابع ‎DNA‏ ‏في الجينوم في المضيف ‎(Jie)‏ تتابعات ‎DNA‏ في الجينوم نادرة أو مميزة). ‎Las‏ ترشد في بعض الأمثلة تلك التتابعات المتجانسة على عملية إعادة الالتثام والتكامل ‎integration‏ للحمض النووي المشتمل على محفز ‎SW SCBV‏ الاتجاه المخلق عند مكان ‎DNAD‏ المتجانس في الجينوم ‎٠‏ المضيف ‎host genome‏ يضم المحفز /5081 الثنائي الاتجاه المخلق في أمثلة بالأخص على واحد أو أكثر من تتابعات النيوكليوتيد التي تسهل تهديف الحمض النووي المشتمل على المحفز إلى مكان نادر أو فريد في جينوم المضيف مستخدماً إنزيمات نيوكلييز المهندّسة ‎engineered‏ ‎nuclease enzymes‏ التي تتعرف على التتابع عند مكان نادر أو فريد وتسهل التكامل عند هذا المكان النادر أو الفريد. ‎Jie‏ نظام التكامل المستهدف هذا والذي يقوم بتوظيف إنزيمات زنك-فنجر ‎١‏ (ندونيوكلييز ‎zinc—finger endonucleases‏ كإنزيم نيوكلييز ‎Nuclease enzyme‏ موضح في براءة الاختراع الأمريكية رقم 3/01,7705. ‎Lay,‏ يتم إنتاج الأحماض النووية المشتملة على محفز /5081 الثنائي الاتجاه المخلق باستخدام أي تقنية معروفة في المجال؛ مشتملة على سبيل المثال وليس الحصر على: ‎(RCA‏ وتضخيم ‎(PCR‏ ‏وتضخيم ‎(OLA; (RT-PCR‏ وع0دل50. وتُعد هذه التقنية والتقنيات المكافئة الأخرى معروفة ‎Yo‏ جيداً لهؤلاء ذوي المهرة في المجال؛ وتم توضيحها أكثر بالتفصيل على سبيل المثال وليس الحصر: ‎Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed.,‏ ‎Cold Spring Harbor Laboratory, 2001; and Ausubel et al., Current‏ ‎.Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1998‏ التوصيل ‎Delivery‏ و/أو التحول ‎ctransformation‏ يمد أيضاً الإفشاء الحالي الطرق لأجل ‎YO‏ تحويل خلية بما تحتويه من جزئ حمض نووي مشتمل على محفز /5081 ثنائي الاتجاه المخلق.
-1ه- ربما يتم استخدام أي عدد كبير من التقنيات المعروفة في المجال لإدخال جزيئات الحمض النووي إلى النباتات لتحويل النبات بما يحتويه من جزئ الحمض النووي المشتمل على محفز ‎SCBV‏ ‏ثنائي الاتجاه المخلق وفقاً لبعض التجسيمات؛ فعلى سبيل المثال؛ لإدخال واحد أو أكثر من محفزات /50681 ثنائية الاتجاه المخلقة إلى جينوم نبات مضيف؛ و/أو لإدخال أكثر واحد أو أكثر © من جزئ أو جزيئات الحمض النووي للفائدة والتي عملياً مرتبطة بالمحفز. تشمل طرق مناسبة لتحويل النباتات على أي طريقة بها قد يتم إدخال ‎DNAY‏ إلى الخلية. على سبيل المثال وليس الحصر: عملية كهربية ‎electroporation‏ (انظر على سبيل المثال براءة الاختراع رقم ‎VALE, YOV‏ ,0(¢ وقصف مقذوف مجهري ‎microprojectile bombardment‏ ‎hail)‏ على سبيل المثال براءات الاختراع الأمريكية رقم ‎¥VA 5 0,010,0A‏ ,0,004 ‎٠‏ وتاارخ ادرف ‎TY A,‏ و11هرق ةا 5 ‎((TLYAEY VY‏ وتحويل . بوساطة الأجروباكتيريم ‎Agrobacterium-mediated transformation‏ (انظر_ على سبيل المثال براءات الاختراع رقم 3,175,655 ‎AVY‏ تأرف 5 ‎TV‏ ,)0,09 ونكارالخكترف و٠1,7485,70)؛‏ وتحويل البروتوبلاست ‎protoplast transformation‏ (انظر على سبيل المثال براءة الاختراع الأمريكية رقم 08/184 2,5). وخلال تطبيق التقنيات ‎Jie‏ السالف ذكره؛ فإنه يتم ‎Vo‏ تحويل ‎WAN‏ من أنواع النباتات الافتراضية؛ ومثل هذه الخلايا ‎Lay‏ يتم تطويرها إلى نباتات متحورة وراثياً بواسطة تقنيات معروفة إلى هؤلاء من ذوي المهارة في المجال. على سبيل المثال التقنيات التي ‎Lay‏ تكون مفيدة بالأخص في سياق تحول القطن ‎context of cotton‏ الموصوف في براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎CLIVE, TEE 500,00 §,ATY 500,908,1¥0 500 MET, VAY‏ والتقنيات لتحول تباثات البراسكا ‎Brassica plants‏ بالأخص والموصوفة على سبيل المثال في ‎٠‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم ‎5,705,89١‏ ؛ والتقنيات لتحول نبات الصويا ‎transforming soya‏ كالموضح على سبيل المثال براءة الاختراع الأمريكية رقم ٠1,705,70؛‏ والتقنيات لأجل تحول الذرة كالموضحة على سبيل المثال في براءات الاختراع الأمريكية رقم 7,055,877 و591,197,؛ ومنشور ‎PCT‏ دولي رقم براءة الاختراع الدولية 58/.01777. بعد تأثير توصيل حمض نووي خارجي إلى خلية مستقبلة ‎recipient cell‏ فإنه يتم التعرف على ‎Yo‏ بصفة عامة الخلية المتحولة ‎transformed cell‏ من أجل زرع ‎culturing‏ وتوليد أكثر للنبات
له ‎regeneration‏ 901ام. ولكي يحسن من القدرة على التعرف على المتحولين؛ فإنه ‎cep lay‏ أحدانا لتوظيف جين ذو علامة من الممكن انتقائه أو فحصه مع ناقل التحول المستخدم لتوليد المتحول 171805101100801. في هذه الحالة يمكن معايرة التكتل الخلوي المتحول ‎transformed‏ ‎cell population‏ فعلياً بتعرض ‎WAY‏ إلى عامل ‎agent‏ أو عوامل ‎agents‏ منتقاه ‎selective ©‏ أو قد يتم فحص الخلايا لجين الصفة المرغوبة ذي العلامة. ‎Ley‏ يتم زرع الخلايا التي تنجو من التعرض لعامل الانتقائية؛ أو الخلايا التي تم وسجلت إيجابية في تجربة الفحص في الوسط الذي تدعم توليد النباتات. في بعض التجسيمات ربما يتم تعديل أي وسط زرع ‎culture media‏ ملاثم لنسيج النبات ‎plant tissue‏ (مثل» ‎MS‏ ووسط ‎(N6‏ بأن يشمل على مواد أكثر ‎(fie‏ منظمات النمو ‎(growth regulators‏ ربما يتم الحفاظ على النسيج ‎Ve‏ على وسط قاعدي 10716018 08516 مع منظمي النمو حتى يكون هناك نسيج كاف متاح لبدء جهود توليد ‎celal)‏ أو الجولات المتكررة المتتابعة للاختيار اليدوي ‎manual selection‏ حتى يكون شكل ‎morphology‏ النسيج مناسب للتوليد (مثل؛ على الأقل أسبوعين)؛ ثم يتم النقل إلى وسط توصيل لتكوين النبتة ‎formation‏ 50001. يتم نقل الزروع ‎Cultures‏ دورياً حتى يحدث تكوين كافي للنبتة. ما أن تتكون النبتات فإنه يتم نقلهم إلى وسط موصل لتكوين النبتة. وما أن تكونت ‎Ve‏ الجذور الكافية قد يتم نقل النباتات إلى التربة ‎soil‏ لنمو ونضج ‎maturity‏ أكثر. ربما يتم إجراء تجارب متعددة للتأكد من وجود جزئ الحمض النووي المرغوب المشتمل على محفز ‎SCBV‏ المُخلّق ثنائي الاتجاه في النباتات المتولدة. وتشمل مثل هذه التجارب على سبيل المثال: التجارب الحيوية الجزيئية ‎molecular biological assays‏ مثل بقعة نورثرن وويسترن 5 ‎¢PCR‏ ‏وتجارب بيوكيميائية ‎biochemical assays‏ مثل استكشاف وجود منتج بروتيني ‎protein‏ ‎«product ٠‏ على سبيل المثال بوسائل مناعية ‎ELISA) immunological means‏ و/أو ‎dad‏ ‏ويسترن الجنوبي 51015 ‎(Western‏ أو بوظيفة إنزيمية ‎tenzymatic function‏ وتجارب ‎shal‏ ‏النبات ‎Jie plant part assays‏ تجارب الورقة ‎leaf‏ أو الجذر ‎eroot‏ وتحليل النمط الظاهري ‎SK «will phenotype‏ المتولد ‎.whole regenerated plant‏ يمكن فحص حالات التكامل المستهدفة؛ على سبيل المثال؛ بواسطة تضخيم ‎POR‏ باستخدام؛ على ‎YO‏ سبيل ‎(JBN‏ بوادئ أوليجونيوكليوتيد ‎oligonucleotide primers‏ محددة لجزيئات حمض نووي
—oA-
محل الاهتمام. من المفهوم أن التنميط الجيني ل ‎PCR‏ يتضمن؛ وليس على سبيل الحصر؛ تفاعل تضخيم سلسلة بوليميراز ‎(PCR) polymerase—chain reaction‏ لجينومي ‎DNA‏ مشتقة من نسيج خلية من النبات المضيف المفصول من المتوقع أن يتضمن جزيء حمض نووي محل الاهتمام متكامل داخل الجينوم؛ يلي ذلك نسخ عياري ‎cloning‏ 518008100 وتحليل تتابع منتجات 0 تضخيم ‎PCR‏ تم وصف طرق التنميط الجيني ل ‎jas PCR‏ (انظرء على سبيل ‎Rios «JG‏ 32:243-3 .ل ‎¢(et al. (2002), Plant‏ وقد تنطبق على جينومي ‎DNA‏ مشتقة من أي أنواع نباتات أو نوع نسيج؛ بما في ذلك استنبات ‎LAD‏ يمكن استخدام توليفات من بوادئ أوليجونيوكليوتيد ‎oligonucleotide primers‏ التي ترتبط بكلاً من تتابع الهدف والتتابع الداخل تتابعياً أو بشكل متعدد التضفير في تفاعلات تضخيم ‎.PCR amplification reactions‏ يمكن ‎٠‏ إنتاج بوادئ الأوليجونيوكليوتيد المصممة لتتصلب في الموقع المستهدف؛ تتابعات حمض نووي الداخلة؛ و/أو توليفات من اثنين منها. بالتالي؛ قد تشتمل استراتيجيات التنميط الجيني ل ‎PCR‏ ‏على؛ على سبيل المثال وبدون حصر: تضخيم تتابعات معينة في جينوم النبات ‎plant‏ ‏6*” تضخيم تتابعات متعددة معينة في جينوم النبات؛ تضخيم تتابعات غير معينة في جينوم النبات؛ وتوليفات من أي مما سبق. قد يحدد أحد المهرة في الفن توليفات إضافية من بوادئ ‎١‏ وتفاعلات تضخيم _ لفحص الجينوم. على سبيل ‎JE‏ يمكن تصميم مجموعة من بوادئ أوليجونيوكليوتيد التقدمية ‎forward‏ والعكسية ©6765 لتتصلب إلى تتابع (تتابعات) حمض نووي
محددة للهدف خارج حدود ‎boundaries‏ تتابع الحمض النووي المقدم. يمكن تصميم بوادئ أوليجونيوكليوتيد تقدمية وعكسية لتتصلب بشكل خاص بجزيء حمض نيوكليوتيد مقدم؛ على سبيل المثال؛ عند تتابع يقابل نطاق تشفير داخل تتابع نيوكليوتيد محل ‎٠‏ -_ الاهتمام متضمن به؛ أو أجزاء أخرى من جزيء الحمض النووي. يمكن استخدام تلك البوادئ بالترافق مع البوادئ الموصوفة أعلاه. يمكن تخليق بوادئ الأوليجونيوكليوتيد وفقاً لتتابع مرغوب فيه؛ وتكون متاحة تجارياً (على سبيل المثال؛ من ‎Integrated DNA Technologies,‏ ها ‎Coralville,‏ ,.106). يمكن نسخ التضخيم بعد ذلك وتسلسله؛ أو بواسطة منتجات تضخيم تحليل تتابع مباشر. قد يتصور أحد المهرة في الفن طرق بديلة لتحليل منتجات التضخيم المتولدة
-4ه- أثنا ¢ التنميط الجيني ‎PCR‏ أحد التجسيمات؛ يمكن استخدام بوادئ أوليجونيوكليوتيد محددة لهدف الجين في تضخيمات ‎PCR amplifications‏ تنص بعض التجسيمات الخاصة بالاختراع الحالي أيضاً على ‎WIA‏ يتضمن معزز /5081 ثنائي الاتجاه تخليقي؛ على سبيل المثال؛ كما قد يوجد في جزء ‎Lite‏ حمض نووي. في أمثلة خاصة؛ © يمكن استخدام معزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه تخليقي وفقاً لبعض التجسيمات كتتابع تنظيمى لتنظيم التعبير الجيني عن ‎WIA‏ نبات ونباتات محورة وراثياً. في بعض من تلك الأمثلة؛ قد يؤدي استخدام معزز ‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه تخليقي متصل بشكل عملى بتتابع نيوكليوتيد محل الاهتمام (على سبيل المثال» طفرة وراثية) إلى خفض عدد المعززات المتطابقة المطلوبة لتنظيم التعبير الجيني عن عدد معطى من تتابعات نيوكليوتيد محل ‎alain)‏ و/أو خفض حجم جزء (أجزاء) ‎Laie‏ للحمض ‎Vo‏ النووي مطلوبة لإدخال عدد معطى من تتابعات نيوكليوتيد محل الاهتمام. علاوة على ذلك؛ قد يسمح استخدام معزز ‎AW SCBV‏ الاتجاه تخليقي بالتعبير المشترك عن تتابعى نيوكليوتيد متصلين بشكل عملى محل الاهتمام فى نفس الظروف (أي؛ الظروف التي تحتها يتم تنشيط المعزز /5681). قد تكون تلك الأمثلة مفيدة بشكل ‎pala‏ على سبيل المثال؛ عندما يساهم كلا تتابعى النيوكليوتيد متصلين بشكل عملى محل الاهتمام إلى صفة واحدة في مضيف معدل ‎Ls‏ ‎Ve‏ يتضمن تتابعات النيوكليوتيد محل الاهتمام؛ والتعبير الجيني المشترك عن تتابعات النيوكليوتيد محل الاهتمام الآثار المفيدة للتعبير الجيني عن الصفة في المضيف المعدل وراثياً ‎transgenic‏ ‎.host‏ ‏في بعض التجسيمات؛ قد يكون لنبات معدّل وراثياً يتضمن واحد أو أكثر من معزز (معززات) ‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه تخليقي و/أو تتابع (تتابعات) نيوكليوتيد محل الاهتمام به واحدة أو أكثر من ‎Yo‏ الصفات المرغوب فيها ممنوحة ‎Jo)‏ سبيل المثال؛ متقدمة 00120000680 معززة ‎«enhanced‏ ‏أو مساهمة ‎contributed‏ في) عن طريق التعبير (التعبيرات) الوراثي عن تتابع النيوكليوتيا محل الاهتمام في النبات. قد تشتمل تلك الصفات على؛ على سبيل المثال لا الحصر: مقاومة الحشرات؛ الآفات ‎pests‏ الأخرى؛ وعوامل مسببة للمرض ‎«disease-causing agents‏ التحمل لمبيدات الأعشاب ‎herbicides‏ وتعزيز الاستقرار ‎enhanced stability‏ والغلة ‎cyield‏ أو العمر الافتراضي ‎Jel shelf-life‏ البيئي ‎environmental tolerances‏ وانتاج الأدوية qa «industrial product production ‏الإنتاج الصناعي‎ ¢pharmaceutical production ‏سمة مرغوب‎ mie ‏يمكن‎ AEN) ‏في بعض‎ -nutritional enhancements ‏والتحسينات الغذائية‎ ‏فيها بواسطة تحول نبات باستخدام جزيء حمض نووي يتضمن معزز /50581_ثنائي الاتجاه‎ ‏يمكن منح سمة‎ ABA) ‏تخليقي متصل بشكل عملى بتتابع نيوكليوتيد محل الاهتمام. في بعض‎ ‏عن طريق التربية‎ progeny plant ‏مرغوب فيها إلى نبات منتج في صورة نبات سلالة‎ © ‏منح تلك الصفة بواسطة واحد أو أكثر من تتابعات نيوكليوتيد محل‎ (So ‏حيث‎ breeding ‏الاهتمام متصل بشكل عملى بمعزز /5081 ثنائي الاتجاه تخليقي الذي/التي تمر إلى النبات من‎
SCBV ‏النبات الأصلي الذي يتضمن تتابع نيوكليوتيد محل الاهتمام متصل بشكل عملى بمعزز‎ ثنائي الاتجاه تخليقي. ‎٠‏ قد يكون أي نبات معدّل وراثياً وفقاً لبعض التجسيمات عبارة عن أي نبات قد يكون محول باستخدام جزيء حمض نووي للاختراع؛ أو تكون مولدة باستخدام نبات محول باستخدام جزيء حمض نووي للاختراع. وفقاً لذلك؛ قد يكون النبات ثنائي أو أحادي الفلقة. تشتمل الأمثلة غير المقيدة للنباتات ثنائية الفلقة للاستخدام في بعض الأمثلة على: البرسيم ‎alfalfa‏ الفول ‎tbeans‏ ‏القرنبيط» الملفوف؛ زيت الكانولاء والجزرء القرنبيط؛ الكرفس؛ الملفوف الصيني؛ القطن؛ الخيار؛ ‎١5‏ - الباذنجان؛ الخس؛ البطيخ؛ الباؤلاء؛ الفلفل؛ الفول السوداني؛ البطاطاء اليقطين؛ الفجل؛ اللفت؛ السبانخ» فول الصوياء الكوسة؛ بنجر السكر؛ عباد الشمس؛ التبغ؛ الطماطم؛ والبطيخ. تشتمل ‎dB‏ غير المقيدة للنباتات أحادية الفلقة للاستخدام في بعض الأمثلة على: الذرة؛ ‎(had)‏ ‏والأرزء الذرة؛ القمح؛ الجاودار؛ الدخن؛ قصب السكرء الشوفان ‎coat‏ التريتيكال ‎triticale‏ التبن ‎switchgrass‏ والمروج ‎turfgrass‏ ‎٠‏ في بعض التجسيمات؛ يمكن استخدام أو زراعة نبات معدّل وراثياً بأي ‎diph‏ حيث يكون من المرغوب فيه وجود معزز ‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه تخليقي و/أو تتابع نيوكليوتيد متصلة عملياً محل الاهتمام. وفقاً لذلك؛ يمكن تعديل تلك النباتات المعدلة وراثياً هندسياً؛ في مجمل ‎se)‏ ليكون بها واحدة أو أكثر من الصفات المرغوب ‎cleat‏ من خلال تحويلها باستخدام جزيئات حمض نووي ‎By‏ ‏للاختراع؛ ويمكن اقتصاصها و/أو زراعتها بواسطة أي طريقة معروفة لأولئك المهرةٍ في الفن.
— \ أ — في حين تم وصف الاختراع بالإشارة إلى الطرق والتجسيمات الخاصة؛ فإنه سوف يتم إدراك أنه يمكن إجراء التعديلات والتغيرات المختلفة بدون الحيود عن مجال الاختراع. تم تقديم الأمثلة التالية لتوضيح السمات و/أو التجسيمات الخاصة. يجب عدم اعتبار الأمثلة مقيدة للكشف بالسمات المحددة أو التجسيمات النموذجية.
‎oo‏ الأمثلة تحول الأجرعية المورمة ‎:Agrobacterium tumefaciens‏ يتم تحويل ناقل ‎pDAB108706‏ ‏ثنائي إلى الأجرعية المورمة صبغة 08813192 ثلاثي (براءة اختراع أمريكية مؤقتة رقم ‎8515/7١‏ ؟). تم فصل مستعمرات بكتيرية ‎Bacterial colonies‏ وبلازميد ‎binary Al‏
‎restriction enzyme ‏وتأكيدها عن طريق تصميم إنزيم تقييد‎ DNA plasmid ٠ ‏وفصل الأجنة‎ Ear Sterilization ‏تعقيم السنبلة‎ :Corn Transformation ‏تحويل الذرة‎ ‏تم إنماء‎ 101018176 embryos ‏للحصول على أجنة ذرة غير ناضجة‎ .Embryo Isolation self ‏في الصوبة 926601100156 وتلقيح ذاتي أو أشقائي‎ (c.v.
B104) Zea mays ‏نباتات من‎ ‏يوم بعد التلقيح‎ ١-4 ‏تقريباً‎ ears ‏لإنتاج السنبلة. تم تجميع الستابل‎ or 516-00
‎Yo‏ 108000ا0051-00. في يوم التجربة؛ يتم تعقيم سطح السنابل عن طريق الغمر 1117176151017 في محلول ‎77٠١‏ من ‎(mie‏ صوبة ‎household bleach‏ حيث يحتوي على 75 صوديوم هيبوكلوريت ‎hypochlorite‏ 500000؛ ‎shaken ells‏ لمدة ‎YoY.‏ دقيقة؛ يلي ذلك ثلاث شطفات ‎rinses‏ في ماء معقم ‎sterile water‏ بعد التعقيم ‎sterilization‏ تم تشريح الأجنة الملقحة غير الناضجة ‎(ae Y.Y=).0) immature zygotic embryos‏ في جو معقم من كل
‎ear din Ye‏ وتوزيعها بشكل عشوائي في أنابيب طرد مركزي دقيقة ‎tubes‏ 6و001010-060171119 تتضمن وسط إصابة سائل ‎liquid infection media‏ (وسط ‎(LS Basal‏ 5.47 جم/لتر؛ محلول قيتامين ‎٠.٠١ [XY +o] N6 Vitamin Solution‏ مل/لتر؛ ا- برولين 8ةأاد«م0حا ‎Yeros‏ مجم/لتر؛ سكروز ‎sUCrOse‏ 08.5 جم/لتر؛ جلوكوز ‎7٠.١ glucose‏ جمالتر؛ ‎oY‏
١ ‏الأجنة‎ pooled ‏مجم/لتر. بالنسبة لمجموعة معطاة من التجارب؛ وسحب‎ ٠.56 lf ‏؛؟-‎ ‎treatment ‏سنابل تم استخدام لكل معالجة‎ Y=Y ‏من‎ 05 ‏يتم تخطيط جليسرول‎ :Agrobacterium Culture Initiation ‏بداية استنبات الأجرعية‎ ‏الموصوفة‎ binary vectors ‏تتضمن النواقل الثنائية‎ Agrobacterium ‏من الأجرعية‎ Glycerol ‏ملائمة وتم‎ antibiotics ‏تتضمن مضادات حيوية‎ AB ‏أدنى وسط‎ plates ‏أعلاه على أطباق‎ © ‏واحدة ووضعها على‎ colony ‏أيام. تم التقاط مستعمرة‎ 4-١ ‏درجة مئوية لمدة‎ Vo ‏إنماءها عند‎ ‏يوم.‎ 7-١ ‏درجة مئوية لمدة‎ YA ‏تتضمن نفس المضادات الحيوية وتم احتضانها عند‎ YEP ‏أطباق‎ ‏في يوم التجربة؛ المستعمرات‎ :Co—cultivation ‏تم أخذ استنبات الأجرعية والاستنبات المشترك‎ infection ‏إصابة‎ laws ‏مل من‎ ٠١ ‏في‎ suspended ‏معلق‎ YEP ‏الأجرعية من طبق‎ cell ‏الخلية‎ AES ‏وتم تعديل‎ (Jo 5 ٠ ‏يمكن التخلص منه سعة‎ tube ‏في أنبوب‎ medium ٠ ‏ضوئي‎ ah lie ‏إلى 00600 = 40.7 _نانومتر باستخدام‎ density
Jaa rotary shaker ‏تم وضع استتباتات الأجرعية على هزاز دوار‎ .spectrophotometer ‏تم فصل‎ .601507/0 dissection ‏لفة بالدقيقة؛ درجة حرارة الغرفة؛ أثناء تشريح الجنين‎ ٠ ‏مم في الحجم‎ 7.7-٠.6 ‏بين‎ Immature zygotic embryos ‏الأجنة الملقحة غير الناضجة‎ ‏مل من وسط الإصابة‎ ١ ‏ووضعها في‎ sterilized ‏المعقمة‎ maize kernels ‏من حبات الذرة‎ VO
Agrobacterium ‏وغسلها مرة واحدة في نفس الوسط. تمت إضافة معلق الأجرعية‎ ١5-٠١ sad ‏مرة ثم هزها‎ Vo ‏إلى كل أنبوب وتم قلب الأنابيب حوالي‎ (Je Y) suspension «MS ‏(أملاح‎ co—cultivation media ‏دقيقة. تم نقل الأجنة على وسط الاستنبات المشترك‎ ٠٠١.١ ‏مجم/لتر؛ إنوسيتول عضلي 0-10051101لا0‎ Vero ‏جم/لتر؛ 1- برولين»‎ YY ‏مجم/لتر؛‎ ٠٠٠.١ casein enzymatic hydrolysate ‏لكازين إنزيمي‎ Sle ‏مجم/لتر؛ تحلل‎ Yo ‏جم/لتر؛‎ ..٠ (Gelzan™ ‏جم/لتر؛‎ 7٠.٠ ‏مجم/لتر؛ سكروزء‎ 7.٠١ - Dicamba ‏ديكامبا‎ ‏مجم/لتر؛ أسيتو سيرينجون‎ ٠5.١ 890103 ‏مل/لترء‎ ٠.٠١ [XY vv] ‏معدّل‎ MS - ‏قيتامين‎ ‎eV ‏موجهة‎ scutellum ‏ميكرومولار)؛ موجه باستخدام قصيغة‎ ٠٠0١ 866105710006 ‏درجة مثوية.‎ YO ‏عند‎ light ‏والاحتضان لمدة ؟- أيام في الضوء‎
ا يمكن ملاحظة ‎GUS‏ والتعبير الجيني العابر ‎:YFP/PhiYFP Transient expression‏ ‎[Transient YFP‏ 21171 والتعبير عن ‎GUS‏ في الأجنة المحولة ‎embryos transformed‏ وبعد 7 أيام من الاستنبات المشترك باستخدام الأجرعية. تمت ملاحظة الأجنة تحت ميكروسكوب مجسم ‎(Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL)‏ باستخدام مرشح ‎YFP filter‏ ومصدر ‎٠0٠0 light source sam 5‏ نانومتر. يتم اختيار الأجنة التي تعرض التعبير الجيني عن ‎PhiYFP/YFP‏ لتجربة نسيجية 5لا6. يتم تحضير محلول تلطيخ ‎GUS staining solution‏ كما هو موصوف في (1989) ‎Maniatis et al.‏ ويتم احتضان الأجنة في ‎١‏ مل من محلول لمدة ‎YE‏ ساعة عند ‎TV‏ درجة مئوية. تمت ملاحظة الأجنة للتعبير الجيني ‎GUS‏ العابر تحت المجهر ‎.microscope‏ ‎Yo‏ اختيار وإعادة توليد نسيج لين ‎Callus‏ من حالات مفترضة: بعد فترة الاستنبات المشترك ‎«co—cultivation period‏ تم نقل الأجنة إلى وسط استقرار ‎resting media‏ (أملاح ‎MS‏ ‎£7Y‏ جم/لتر؛ ‎—L‏ برولين؛ 700060 مجم/لتر؛ إنوسيتول عضليء؛ ‎٠٠٠٠١‏ مجمالتر؛ ‎MES‏ ‏[(حمض 7-(7- مورفولينو)- إيثان سلفونيك ‎¢(2—(n—morpholino)—ethanesulfonic acid‏ حمض حر ‎٠0006 [free acid‏ مجم/لتر؛ تحلل مائي لكازين إنزيمي ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ ديكامبا ؛ 3.20 مجم/لتر؛ سكروزء 7006 جم/لتر؛ ‎Gelzan‏ 7.20 جمالتر؛ قيتامين- ‎MS‏ معدل ‎٠.٠١ [XY oot]‏ مل/لتر؛ 890103 ‎١5.٠‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين ‎Yo... «Carbenicillin‏ مجم/لتر) بدون عامل انتقائي والاحتضان في الضوء لمدة 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل الأجنة على وسط اختيار ‎١‏ (أملاح ‎MS‏ 4.37 جم/لتر؛ ‎—L‏ برولين» ‎7٠00050‏ مجم/لتر؛ إنوسيتول ‎٠٠٠٠١ cline‏ مجم/لتر؛ ‎MES‏ [(حمض 7-(©- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ ‎Yo‏ حمض ‎[a‏ 0000© مجم/لتر؛ تحلل مائي لكازين إنزيمي ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ ديكامبا؛ ‎Fore‏ ‏مجم/لتر؛ سكروز» ‎٠٠١‏ جم/لتر؛ ‎7.٠١ Gelzan™‏ جمإلتر ؛ فيتامين - ‎MS‏ معدل ]000 ‎XY‏ ‎٠‏ مل/لتر؛ 891103 ‎You‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين» ‎7508.٠0‏ مجم/لتر) تتضمن ‎٠٠١‏ ‏نانومتر هالوكسيفوب والاحتضان في ‎VE‏ ساعة ضوء بكثافة ضرء ‎o. light intensity‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١‏ لمدة 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية.
تم نقل الأجنة ذات كالس تخلقي تكائزي ‎proliferating embryogenic calli‏ على وسط اختيار
7٠٠٠٠١ ‏مجم/لتر؛ ا- برولين»‎ ٠٠٠٠١ ‏جم/لتر؛ إنوسيتول عضلي؛‎ £.YY (MS ‏(أملاح‎ Y lane 5000٠ [a ‏[(حمض 7-(0- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ حمض‎ MES ‏مجم/لتر؛‎
تحلل ‎Ale‏ لكازين إنزيمي ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ ديكامبا ‎7.٠١‏ مجم/لتر؛ سكروز؛ ‎٠٠٠١‏ جم/لتر؛
‎٠.٠١ Gelzan™ ©‏ جمالتر؛ قيتامين - ‎MS‏ معدل ‎٠٠٠١ (XV viv]‏ ملالتر؛ ‎Youu (AgNO3‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين»؛ 790.0 مجم/لتر) تتضمن ‎5٠٠0‏ نانومتر هالوكسيفوب واحتضانها في ‎Vi‏
‏ساعة ضوء ‎AES‏ ضوء ‎٠٠‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١ ‎sad‏ أخرى ‎VE‏ أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تسمح خطوة الاختيار هذه للنسيج اللين المعدل وراثياً بتكاثر وتمايز إضافي. يستغرق اختيار النسيج اللين مدة ثلاث أسابيع. تم نقل كالس تخلقي تكاثري على وسط إعادة توليد ‎١‏
‎You ‏مجم/لتر؛ 1- برولين»‎ ٠٠٠٠١ (dime ‏جم/لتر؛ إنوسيتول‎ £77 MS ‏(أملاح‎ ٠ lane 75000 [a ‏[(حمض 7-(0- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ حمض‎ MES ‏مجم/لتر؛‎
‏تحلل مائي لكازين إنزيمي ‎٠٠0٠0‏ © مجم/لتز ؛ ‎٠.٠0٠ NAA‏ مجم لتر ؛ ‎٠.٠٠١ ABA‏ مجم لتر ؛ ‎BA‏
‎٠‏ مجم/لتر؛ سكروزء 0.6 جم/لتر؛ "6812807 7.50 جما/لتر؛ قيتامين ‎١/5-‏ معدل
‎٠٠٠١ [XY evi]‏ مل/لتر؛ 891103 ‎٠.٠١‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين» ‎7090٠٠0‏ مجم/لتر) تتضمن ‎١ ٠‏ نانومتر هالوكسيفوب والاستنبات في ‎YE‏ ساعة ضوء بكثافة ضوء ‎٠٠‏ ميكرومول دقيقة- ".ثانية-١‏ لمدة 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل كالس تخلقي مع براعم شبيه الفسيلة على
‏وسط ‎sale)‏ توليد ؟ (أملاح ‎(MS‏ 077 جم/لتر؛ ثيتامين- ‎MS‏ معدل ‎Voor XV]‏ مل/لتر؛ إنوسيتول ‎٠٠٠٠١ (Lame‏ مجم/لتر؛ مكروزء 6000 جم/لتر؛ 6000 ‎Gellan‏ ‎Yoo 64347‏ جم/لتر؛ كاربينيسيلين» ‎750.٠0‏ مجم/لتر) تتضمن ‎5٠0٠‏ نانومتر هالوكسيفوب
‎ Y.‏ م10ل07ا8. تم ‎lial‏ الاستنبات تحت الضوء لمدة ‎YE‏ ساعة بكثافة ضوء ‎٠‏ 5 ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١‏ لمدة ‎٠١-١‏ أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل الفسائل ‎shoots‏ الصغيرة بجذور أساسية لإطالة الفسيلة ‎Shoot‏ ووسط تجذيري ‎rooting media‏ (أملاح ‎(MS‏ 5.77 جم/لتر؛ فيتامين - ‎MS‏ معدّل ‎٠٠٠١ ]٠00١0[‏ مل/لتر؛ إنوسيتول عضلي؛ ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ سكروز؛
‎٠‏ جم/لتر؛ ‎Yoo vo Gellan Gum G434™‏ جم/لتر؛ كاربينيسيلين» 150800 مجم/لتر) في
‎ANT ‏واحتضانها تحت‎ (Sigma-Aldrich, St.
Louis, MO) MAGENTA™ ‏صناديق‎ Yo
اج أ —
ساعات ضوء/ظلام لمدة ‎١7‏ أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم تحليل الشتلات المعدلة وراثياً المفترضة
لتحديد عدد النسخ المعدلة ‎ays‏ ونقلها إلى الصوبة 07661001156.
المثال ‎:١‏ تكوين معزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه تخليقي وناقل ‎pDAB108708‏
تم عرض رسم تخطيطي نموذجي لمعزز ‎Ubiquitin=1‏ للذرة (511لا) في الشكل ‎.١‏ تم نسخ
© معزز 011لا من الذرة. تم تضمين ‎PCR‏ لبلازميد تتضمن المعزز باستخدام نظام تضخيم ‎PCR‏
عالي الدقة. تم تعريف تقريباً ‎7٠0‏ منطقة نيوكليوتيد من معزز ذرة [أطالا في صورة معزز أدنى
لب 011لا ‎Zea mays‏ (0110ل00101) (هوية تتابع رقم: ‎.)١‏ بعد ذلك تمت إضافة 001010011
بهوية تتابع رقم: ‎١‏ إلى بولي نيوكليوتيد يتضمن إكسون ‎Zea mays Ubiquitin—1‏ (إكسون
1 ا0) وانترون ‎Zea mays Ubiquitin—1‏ (إنترون ‎(ZmUbil‏ باستخدام طرق نسخ ‎٠‏ معروفة بشكل شائع في الفن لإنتاج عديد النيوكليوتيد بهوية تتابع رقم: ‎LY‏ بعد ذلك تم نسخ عديد
النيوكليوتيد عكس الاتجاه الناتج في اتجاه عكسي لحمض نووي يتضمن معزز الذرة ‎Ubil‏ (بما
في ذلك ‎(Ubil URS‏ لإنتاج معزز 011لا ‎AU‏ الاتجاه التخليقي بهوية تتابع رقم: .
تم نسخ تتابعات تشفير جين مراسل بعد كل نهاية من معزز 1أتلا ثنائي الاتجاه التخليقي. تم
إدخال تتابع تشفير بروتين تفلور أصفر ‎(YFP) yellow fluorescence protein‏ بعد شظية ‎Yo‏ عديدة النيوكليوتيد حيث تتضمن عناصر معزز 100611 إكسون 2001 وانترون
‎.ZmUbil‏ بالإضافة لذلك؛ تتابع قائد تالي يتضمن تتابع توقف عديدة النيوكليوتيد ذات ؟ إطارات
‎As‏ إضافة تتابع عديد النيوكليوتيد يتوافق مع الذرة إلى شظية عناصر معزز ‎minUbilP‏ ؛» إكسون
‏1 وانترون ‎.ZmUbil‏ تم إدخال تتابع تشفير ‎UidA (GUS)‏ أيضاً بعد معزز ‎Ubil‏
‏ثنائي الاتجاه التخليقي في اتجاه عكسي بالنسبة لتتابع ‎wy YFP‏ ج الحمض النووي بهوية تتابع ‎Yo‏ رقم: 4. يتم نسخ عديد النيوكليوتيد الناتج يتضمن معزز 011لا ثنائي الاتجاه التخليقي متصل
‏بشكل عملى بجينات ‎GUS YFP‏ إلى بلازميد 01085105801. يوضح الشكل ؛ اتجاه
‏مجموعة التعبير الجيني عن ‎GUS; YFP‏ بالنسبة لمعزز 011ل ثنائي الاتجاه التخليقي في
‎.PDAB105801 ‏بلازميد‎ ane ‏ثنائي الاتجاه من بلازميد‎ UbIl ‏تمت إزالة معزز تتابع 511لا الأصلي من معزز‎ ‏وإنترون‎ SCBV ‏مضخمة تتضمن معزز‎ PCR ‏واستبداله باستخدام شظية‎ 1 ‏ثنائي الاتجاه التخليقي النموذجي الناتج في‎ SCBV ‏(هوية تتابع رقم: 6). تم ذكر معزز‎ ADH
JUS) ‏هذا إلى‎ 5081/ jee ‏صورة هوية تتابع رقم: © (انظر أيضاً الشكل 5). تؤدي إضافة‎ ‏(الشكل 1( ذلك الناقل المتضمن في مجموعات التعبير الجيني عن جين‎ pDAB105806 Jit © (Fray ‏الاتجاه (هوية تتابع‎ SUE 5681/ ‏حيث تكون متحركة بواسطة معزز‎ GUS; YFP
AY ‏انظر أيضاً الشكل‎ ‏تم استكمال الناقل الثنائي الذي يتضمن مجموعات التعبير الجيني عن الجين 5لا6 و0 من‎
Invitrogen,) GATEWAY L-R CLONASE ‏بلازميد 0/88105806م عن طريق تفاعل‎ ‏الناقل الناتج؛ 010/5108708؛ محتواة في مجموعات التعبير الجيني عن‎ (Carlsbad, CAV. .)4 ‏(انظر الشكل‎ T ‏داخل منطقة سلالة‎ AAD-1 5 YFP (GUS ‏الجين‎ ‏ثنائي الاتجاه تخليقي‎ SCBV ‏المثال ©: التعبير الجيني عن جينات متصل بشكل عملى بمعزز‎
Zea mays ‏و5لا6 في أجنة‎ YFP ‏يمكن تصوير الأمثلة النموذجية للتعبير الجيني العابر عن‎ ‏ثنائي الاتجاه التعبير‎ SCBV ‏قد يحرّك كلا جانبي معزز‎ .pDABI08T08 ‏محولة باستخدام‎ ‏المرتبطة عملياً. يكون التعبير الجيني عن‎ GUS; YFP ‏الجيني القوي عن تتابعات تشفير‎ Vo ‏مقارناً بالتعبير عن مستويات 5ل60. تؤكد تلك الملاحظات أن كلا من جانبي‎ YFP ‏مستويات‎ ‏الاتجاه تكون بوظيفة بيولوجية. علاوة على ذلك؛ قد يعبر عنصر‎ SE SCBV ‏معزز‎ ‏عند مستويات تعبير مشابه مقارنة‎ YFP ‏ثنائي الاتجاه التخليقي عن‎ SCBV ‏لمعزز‎ minUbilP ‏التي تتضمن فقط‎ (PDABL01556) Al ‏لين محول باستخدام بلازميد‎ Zea mays ‏بنسيج‎ ‏ثنائي الاتجاه لتتابع تشفير 770. لا يتم كشف التعبير الجيني عن 770 أو‎ ZmUbil ‏معزز‎ Yo binary ‏في أجنة غير ناضجة مقارنة سالبة التي لا تكون محولة باستخدام بنية ثنائية‎ GUS
GUS ‏أو‎ YFP ‏ولا تحتوي على تتابعات تشفير‎ construct ‏ثنائي الاتجاه‎ SCBV ‏بمعزز‎ ee ‏المثال ؛: التعبير الجيني المستقر عن جينات متصل بشكل‎ ty ‏تكون مستقرة محولة باستخدام ناقل‎ Ally ‏لين‎ Zea mays ‏نسيج‎ WIA ‏يمكن ملاحظة صور‎ ‏تم الحصول على تلك الخلايا من‎ YFP ‏على تتابع تشفير‎ ging ‏تثنائي؛ حيث‎ 8 ‏التي تم نشرها على وسط اختيار 7. تم استخدام ظروف وبروتوكول المجهر التي‎ 2. mays ‏أجنة‎ ‏تم استخدامها لتوليد صور الأجنة. قد يحرّك معزز /5081 ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن‎
SCBV ‏من معزز‎ Min-UbilP ‏معزز‎ idl ‏تؤكد تلك النتائج أن عنصر‎ YFP ‏تتابعات تشفير‎ © ‏لين محولة بشكل‎ 2. Mays ‏نسيج‎ WDA ‏في‎ alae ‏ثنائي الاتجاه يكون قادراً على التعبير عن جين‎ ‏في‎ YFP ‏متشابهة مقارنةً بالتعبير عن‎ YFP ‏مستقر. تكون مستويات التعبير الجيني عن بروتين‎ ‏موحد‎ ZMUDIT ‏اللين المحول باستخدام ناقل ثنائي مقارن يحتوي على معزز‎ 2. mays ‏نسيج‎ ‏في النسيج‎ YFP ‏لا يتم كشف التعبير الجيني عن‎ .)00/85101556( YFP ‏الاتجاه تتابع تشفير‎
YFP ‏اللين المقارن السالب الذي لا يكون محولاً باستخدام بنية ثنائية ولا يحتوي على تتابع تشفير‎ ٠ .GUS J
Real Time TagMan™ PCR ‏تقدير عدد النسخ المعدلة وراثياً باستخدام‎ ro JE ‏ثنائي الاتجاه؛‎ SCBV jie ‏يتضمن‎ A Jib ‏باستخدام‎ Zea mays ‏تم تحويل أجنة‎ ‏تم‎ .00/8101556 «le ‏8ه وتم تحويل نباتات أخرى باستخدام ناقل ثنائي‎ ‎١٠‏ تأكيد وجود ‎YFP‏ محورة وراثياً داخل جينوم لكل مجموعة من نباتات ‎mays‏ .2 عن طريق تجربة مسبار للتحلل المائي. تم الحصول على شتلات ‎mays‏ .2 معدلة وراثياً محولة بشكل مستقر نمت من النسيج اللين ‎callus‏ وتحليلها لتعريف الحالات التي تحتوي على عدد نسخ منخفض ‎Y=)‏ ‏نسخة) لوليجات تضفير ‎T=‏ بطول ‎full-length Jel‏ من ناقل ‎pDAB108708‏ ثنائي وناقل 6 تثائي مقارن. تم ‎Ji‏ الشتلات المعرفة إلى الصوبة وإنماءها. ‎٠‏ تم استخدام نظام ‎Roche‏ للضوء ‎Cyclerd80™‏ لتحديد عدد النسخ المعدلة وراثياً للحالات التي تكون محولة باستخدام ناقل 0/8108708م ثنائي. تستخدم الطريقة تفاعل ‎TagMan®‏ ثنائي الضفيرة الذي يستخدم أوليجونيوكليوتيدات محددة للجين ‎YFP‏ وإلى جين مرجعي ‎mays‏ .2 داخلي المنشاًء إنقيرتاز ‎invertase‏ (رقم الانضمام لبنك الجينات: ‎((U16123.1‏ في تجربة واحدة. تم تحديد عدد النسخ ‎lilly‏ عن طريق قياس شدة 70- المحددة لتفلور؛ بالنسبة لتفلور ‎Yo‏ الإنقيرتاز النوعي ‎cinvertase-specific fluorescence‏ مقارنة بمعايير عدد النسخ المعروف. ‎toy
‎h A —_‏ _ في ‎mays‏ .2 المحولة باستخدام ناقل 0005108708 ثنائي؛ يتم تضخيم شظية ‎fragment‏ ‏جين ‎YFP‏ - محدد ل ‎DNA‏ باستخدام مجموعة بادئة/مسبار ‎TAQMAN®‏ واحدة تتضمن مسبار مرقم باستخدام صبغة تفلور ‎(FAM fluorescent dye‏ وتم تضخيم إنقيرتاز باستخدام مجموعة بادئة ‎primer‏ /مسبار ‎TAQMAN® probe‏ 436 تتضمن مسبار مرقم باستخدام ‎HEX‏ تفلور © (الجدول 7). يتم تحضير خليط تفاعل ‎PCR‏ كما هو مذكور في الجدول ‎oF‏ وتم تضخيم شظايا ‎DNA‏ المحدد للجين وفقاً للظروف المذكورة في الجدول 4. تم تحديد عدد النسخ لقاحات العينات عن طريق قياس الكثافة النسبية للتفلور المحدد للجين المراسل؛ ‎YFP‏ إلى تفلور محددة للجين المرجعي؛ إنقيرتاز؛ مقارنةً بمعايير عدد النسخ المعروف. الجدول ‎LY‏ بادئ نيوكليوتيد تقدمي وعكسي ومسبارات تفلور ‎fluorescent probes‏ (مخلقة ‎٠‏ بواسطة ‎(Integrated DNA Technologies, Coralville, IA‏ بادئة ‎YFP‏ تقدمية هوية تتابع رقم: ‏ | ‎GATGCCTCAGTGGGAAAGG‏ ‏بادئة ‎YFP‏ عكسية هوية تتابع رقم: 4 | ‎CCATAGGTGAGAGTGGTGACAA‏ ‏مسبار ‎YFP‏ هوية تتابع رقم: )£ |مسبار ‎ROCHE UPL‏ رقم ‎Yo‏ 061166866 رقم 04693604001 ‎(Roche, Indianapolis, IN) Cat‏ هوية تتابع رقم: ‎TGGCGGACGACGACTTGT | ٠١‏ هوية تتابع رقم: ‎AAAGTTTGGAGGCTGCCGT | ١‏ مسبار إنقيرتاز هوية تتابع رقم:؛ ‎S'HEX/CGAGCAGACCGCCGTGTACTTCTAC | VY‏ '1/3-_©38110/© هوية تتابع رقم: ‎TGTTCGGTTCCCTCTACCAA | VY‏ معزز 801 عكسي أهوية تتابع رقم: ‎CAACATCCATCACCTTGACTGA | ٠‏ ‎toy‏
‎h q —_‏ _ مسبار ‎AAD]‏ هوية تتابع رقم: ‎CACAGAACCGTCGCTTCAGCAACA | ٠١‏ تم تكوين المعايير عن طريق تخفيف ‎«Jalil‏ 0108108708 في 5104 ‎mays‏ .2 جينومي ‎(gDNA) DNA‏ للحصول على معايير بعلاقة معروفة ل ‎:pDAB108706‏ 8لا90. على سبيل المثال؛ تم تحضير العينات التي بها نسخة واحدة؛ نسختين؛ أربع نسخ لناقل ‎DNA‏ لكل نسخة من ‎mays 8104 gDNA‏ .2. تم تقييم تخفيفات نسخة واحدة ونسختين من 8108706نام © المختلطة باستخدام معيار ‎mays 8104 gDNA‏ .2 مقابل حالة ‎Zo mays‏ مقارن تكون معروفة بأنها أحادية التلقيح» وحالة ‎mays‏ .2 مقارن تكون معروفة بأنها ثنائية التلقيح (حالة ‎Z.‏ ‎¢YVA mays‏ انظر منشور براءة الاختراع الدولي ‎PCT‏ رقم براءة الاختراع الدولية 7747 7101/70). تم إجراءة تجربة ‎TagMan®‏ ثنائية الضفيرة باستخدام أوليجونيوكليوتيدات محددة لجين ‎AAD]‏ وأوليجونيوكليوتيدات محددة لجين مرجعى ‎Z. mays‏ ‎٠‏ داخلي ‎Landi‏ إنقيرتاز» عن طريق تضخيم وكشف شظية ‎DNA‏ محددة للجين ل 2/201 باستخدام ‎ic gana‏ بادثة/مسبار ‎TAQMAN®‏ واحدة تتضمن مسبار مرقم باستخدام صبغة تفلور ‎FAM‏ ‏وعن طريق تضخيم وكشف شظية ‎DNA‏ محددة لجين الإنقيرتاز باستخدام مجموعة بادئة/مسبار ‎TAQMAN®‏ 4% تتضمن مسبار مرقم باستخدام ‎HEX‏ تفلور (الجدول 7). تم تحضير خليط تفاعل ‎AAD] TagMan®‏ كما هو مذكور في الجدول 7 وتم تضخيم الشظايا المحددة وفقاً ‎١‏ للظروف المذكورة في الجدول 4. الجدول ؟. خليط تفاعل ‎.JTAQMAN® PCR‏ 0
— 7 «=
تم تحليل مستوى التفلور المولد لكل تفاعل باستخدام ™480 ‎Roche LightCycler‏
‎Thermocycler‏ وفقاً لتوجيهات المصنّع. تم تنفيذ جزيء التفلور ‎FAM‏ بكثافة بصرية تبلغ
‏5 تانومتر؛ وتم إثارة جزيء الفلور ‎HEX‏ بكثافة بصرية ‎optical density‏ تبلغ
‏7 تانومتر. تم تحديد عدد النسخ عن طريق مقارنة قيم مستهدفة/مرجعية للعينات غير المعروفة (حصيلة ‎(Lig htCycler 480 ™ dail gs‏ إلى قيم مستهدفة/مرجعية لأربع معايير عدد
‏النسخ المعروف ‎-١ (Null)‏ نسخة ‎—Y (hemi)‏ نسخة ‎(homo)‏ و4 - نسخ).
‏الجدول 4. ظروف الدورة الحرارية ‎Thermocycler‏ لتضخيم ‎PCR‏
‏= = حلا - -
‎٠١ q0‏ ثواني 2
‎١ \ —_‏ تم عرض النتائج من تحليل عدد النسخ المعدلة وراثياً لنباتات معدلة وراثياً تم الحصول عليها عن طريق التحويل باستخدام معزز ثنائي الاتجاه ‎ZmUbil construct‏ (010/8108706)؛ ونباتات معدلة وراثياً تم الحصول عليها عن طريق التحويل باستخدام معزز موحد الاتجاه مقارن جزء ‎Laie‏ ‎ZmUbil YFP‏ (00/8101556) في الجدول ©. تم ‎Jus‏ النباتات فقط باستخدام ‎7-١‏ نسخة 5 .من تحويل 10لا إلى الصوبة لتحليلات التعبير الجيني الإضافي.
‏الجدول ©. تقدير عدد النسخ المعدلة وراثياً للنباتات المعدلة وراثياً التي تم الحصول عليها من معزز ثنائي الاتجاه وأجزاء ‎Laie‏ مقارنة.
‏المثال 1: التعبير الجيني المستقر للنبات بالكامل لجينات متصل بشكل عملى بمعزز ‎SCBV‏ ‏ثنائي الاتجاه تخليقي.
‎١١‏ كل النباتات التي تحتوي على عدد نسخ منخفض من البلازميد الثنائي 8 تنام والنباتات التي تحتوي على عدد نسخ منخفض من البلازميد الثنائي المقارن 0008101556 تم للتعبير عن ‎YFP‏ في ‎TO‏ نباتات ‎mays‏ .2 التي تكون مستقرة المحولة باستخدام جزء منشأ لحمض نووي نموذجي يتضمن مجموعة تعبير جيني ‎YFP‏ متصل بشكل ‎Jee‏ بمعزز ‎SE‏
‎١‏ _ الاتجاه ‎SCBV‏ تخليقي (00/8108708). توضح الأمثلة النموذجية للتعبير الجيني المستقر عن ‎YFP‏ في الورق ونسيج جذر نباتات ذرة ‎TO‏ مطفرة تم الحصول عليها من أجنة ‎Z. mays‏ المحولة باستخدام 0088108708 تعبير جيني جيد عن ‎.YFP‏ قد يحرك معزز /5081 ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن ‎YFP‏ تشفر تتابعات في ‎NS‏ من أنسجة الورق وأنسجة الجذر. يؤكد التحليل المجهري أيضاً أن عنصر أدنى معزز 5101لا-1/10 في ‎jie‏ /5081 ثنائي
‎Z. mays ‏عند مستويات تعبير جيني مشابه مقارنةً بنباتات‎ YFP ‏الاتجاه قد يحرّك التعبير عن‎ YL ‏المحولة باستخدام بلازميد ثانوي مقارن (00/8101556) يحتوي على معزز 511لا201 ثنائي‎
يحرّك التعبير الجيني عن تتابع تشفير ‎YFP‏ توضح النباتات المقارنة تعبير مستقر عن ‎YFP‏ في أنسجة الورق وأنسجة الجذر. المثال ‎:١‏ تحليل بقعة ‎Western Blot‏ لجينات متصل بشكل عملى ‎AW SCBV jira‏ الاتجاه تخليقر ‎Ja) ©‏ بروتين قابل للذوبان ‎:Total Soluble Protein‏ تم أخذ عينات من نباتات ‎TO‏ ذرة محولة عند المرحلة التنموية ‎developmental stage‏ 6/. تم أخذ عينات من إجمالي أربع ورقات مشتراة من الورق غير المطوي ‎unfolded leaf‏ الأصغر في مصفوفة أنابيب ‎matrix‏ ‎tube‏ ووضعها داخل صندوق ذو صفوف ‎matrix box‏ بالنسبة للعينة السالبة؛ تم أخذ عينات من أربع ورقات مشتراة من نبتتين من ذرة 8104 غير محولة عند المرحلة التنموية ‎١/6‏ في أنبوب ‎٠‏ مصفوف. يتم وضع كرية صلبة ‎51886١ bead‏ في أنابيب المصفوفة مع العينات؛ وبعد ذلك يتم إضافة 500 ميكرولتر ‎PBST‏ إلى كل أنبوب. تم تغطية الأنابيب؛ واستخلاص البروتين عن طريق تحويل إلى كريات بمعدل ‎١٠5٠٠0‏ لفة بالدقيقة ‎sad‏ © دقائق في مطحنة أنسجة ‎tissue‏ ‎.Kleco™ grinder‏ يتم وضع كريات ‎Debris‏ عن طريق الطرد المركزي 0810117098101. تم تخفيف عينة © ميكرولتر من كل أنبوب إلى ‎Yo‏ ميكرولتر باستخدام ‎PBST‏ في طبق بقياس ‎Vo‏ دقيق ذو 976 عين. تم تحليل تلك العينات للبروتين القابل للذوبان الإجمالي باستخدام أداة اختبار بروتين ‎(Thermo Scientific Pierce, Rockford, IL) BCA‏ وفقاً لتوجيهات المصنّع ‎.manufacturer’s directions‏ ثم تحليل ألبومين مصل بقري ‎Bovine serum albumin‏ ‎(BSA)‏ معايير مجهزة في الأداة بصورة متكررة؛ وتم استخدام متوسط القيم لتوليد منحنى قياسي ‎standard curve‏ حيث يتم استخدام بشكل متكرر لاحتساب إجمالي البروتين القابل للذوبان لكل ‎٠‏ عينة. تم معادلة إجمالي البروتين القابل للذوبان لكل عينة إلى مجم/ميكرولتر. الجدول 1 بروتوكول ‎Western daa‏ ا ّ | لأولى ب
‎١ ".-‏ التهجين الأساسي | 7 ميكرو جم/مل مضاد - ‎PhiYFP‏ لأرنب ( ‎Axxora,‏ ‎(San Diego, CA Primary‏ في 120 ‎٠١ | StartingBlock™‏ دقائق ‎(Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA) Hybridization‏ بيروكسيداز فجل لحصان ‎horse radish peroxidase‏ التهجين الثانوي . ‎٠‏ دقائق ‎(HRP)‏ — مقترن ‎1gG—alias‏ لأرنب وعنزة تحليل بقعة ‎Western‏ ل ‎:PhiYFP/YFP‏ في طبق بقياس دقيق ‎microtiter plate‏ ذو 17 عين؛ تم تخفيف كل © ميكرولتر من عينة البروتين المستخلص باستخدام © ميكرولتر ‎XY‏ محلول منظم ‎Laemmli‏ + 8-7- ميركابتو إيثانول ‎.2-B-mercaptoethanol‏ تم شراء عينات المقارنة من 70/001770 منقاة في محلول منظم ‎HEPES‏ (50 مم ‎٠٠١ (HEPES‏ مم ‎72٠١ (KCI 0‏ جليسرول) من ‎Diego, CA) Axxora‏ 580). تم تحضير العينات في نفس الطبق عن طريق تخفيف ‎١:١‏ باستخدام محلول منظم ‎oly Laemmli‏ منحنى ‎gle‏ للتركيزات 0 التالية: ‏ *.»_نانوجم/ميكرولتر؛ ‎_.١.”©‏ نانوجم/ميكرولتر؛ 5 ‎vAYo‏ ‏نانوجم/ميكرولتر. تم تسخين العينات في ‎Thermocycler‏ عند 40 درجة مئوية لمدة ‎7١‏ دقيقة؛ وبعد ذلك تبريدها إلى ؛ درجة مئوية. تم تجميع ‎Bio-Rad Criterion gel™‏ بعد ذلك مع ‎Ve‏ محلول منظم ‎.SDS/MES‏ & ترك العينات ‎Bail‏ إلى درجة حرارة الغرفة؛ وتم تحميل ‎٠١‏ ‏ميكرولتر من العينة على كل عين من المركبين الهلاميين. بالإضافة إلى ذلك؛ تم تحميل عينات من ‎YFP/PhIYFP‏ المنقاة لمنحنى عياري؛ ومرمز عقدة بروتين؛ في العيون من الجل. تم ‎JAY‏ ‏المركبات الهلامية ‎gels‏ بشكل رحلاني عند ‎١5١0‏ قولت و١5٠١‏ مللي أمبير لمدة 0 دقائق بعد الدخول؛ تم فتح أغطية الجل ‎Jay‏ البروتينات إلى غشاء نيتروسيلولوز باستخدام ‎Blot‏
و١‏ ‎System™‏ (107100980). تم نقل البروتين من الجل إلى الغشاء عن طريق مرور تيار ‎Yo‏ ‏قولت لمدة ‎٠١‏ دقائق. تم إزالة غشاء النيترو سيلولوز ‎Nitrocellulose membrane‏ ووضعه في محلول احتجاز ‎blocking buffer‏ منظم "120 ‎StartingBlock‏ طوال ‎Jl‏ عند ؛ ‎dap‏ ‏مثوية. تم فصل محلول الاحتجاز المنظم بعد ذلك؛ ومعالجة الغشاء باستخدام البروتوكول المذكور © في الجدول 6. تم كشف ارتباط الجسم المضاد ‎Antibody‏ باستخدام نظام كشف تألق كيميائي ‎Amersham ECL™ plus chemiluminescent‏ بإتباع توجيهات ‎ahead)‏ تم تعريض الرقاقة ‎٠١ Film‏ دقائق و٠‏ دقيقة. تم استخدام الرقاقة المعرضة لمدة ‎٠١‏ دقائق لتحديد كمية البروتين» وتم استخدام الرقاقة المعرضة بشكل زائد لمدة ‎7١0‏ دقيقة لتأكيد غياب البروتين في ‎٠‏ 8104 وعينات المقارنة الأخرى. تم تسجيل الغشاء على خلفية الرقاقة المعرضة؛ وتم تحديد كمية البروتين بواسطة تحليل كثافة ثنائي الضفيرة ‎.pixel density analysis‏ تم أولاً استخدام الكثافة ثنائية الضفيرة ‎pixel density‏ لمعايير البروتين المنقاة ‎purified protein standards‏ لإنشاء منحنى عياري تم استخدامه لتحديد كمية البروتين في العينات. بالرغم من أن الغشاء يعرض ارتباط بمونومر ‎monomer‏ ودايمير ‎PhiYFP dimer‏ حتى في المعيار المنقّى؛ يتم استخدام مونومر ‎PhiYFP | ١‏ فقط لتحديد كمية التعبير الزائد عن البروتين. بعد ذلك تمت معادلة قيم البروتين إلى نانوجم/ميكرولتر. تم احتساب نسبة البروتين القابل للذوبان الإجمالية المعادلة ‎(TSP)‏ إلى ‎PhiYFP‏ إلى وحدات من نانوجم من © 777/مجم ‎(TSP‏ أو على نحو بديل» أجزاء بالمليون ‎(PPM)‏ ‏تحليل ‎GUS‏ لبقعة ‎:Western‏ يتم تحديد مقدار التعبير الجيني عن بروتين ‎GUS‏ بطريقة مماثلة ل ‎PhIYFP‏ بالاستثناء التالي: يتم تخفيف ‎٠١‏ ميكرولتر من عنية من مستخلص ‎١:١‏ باستخدام ‎x ¥‏ 2-8 + 86001 - ميركابتو إيثانول ‎2—-B-mercaptoethanol‏ محرفة عند 90 درجة ‎Adie‏ لمدة 0 دقيقة؛ وبعد ذلك يتم تحميل ‎١١‏ ميكرولتر في الجل. تم تغطية الأغشية المعالجة باستخدام رقاقة (تعرض لمدة دقيقة واحدة) باستخدام غشاء لتحليل ‎AES‏ البكسل. تم عرض نتائج تحليل بقعة ‎VY JWestern‏ نبات ذرةٍ ‎TO‏ مطفرةٍ تم الحصول عليها من أجنة ‎Z.‏ ‎mays Yeo‏ المحولة باستخدام الناقل الثنائي» ‎(pDABIO8708‏ في الشكل ‎NT‏ يوضح معزز
VN
‎SCBY‏ ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن ‎GUS; YFP‏ تشفر تتابعات من نسيج الورق. ‏تؤكد تلك الملاحظات أن عنصر أدنى معزز 5101لا-1/10 مفصولاً عن معزز ‎Zea mays‏ ‏1 ومندمج بمعزز ‎SCBV‏ قد يعبر وراثياً عن ‎YFP‏ عند نفس مستويات التعبير الجيني ‏مقارنةً بالنسيج اللين من ‎mays‏ .2 المحول باستخدام بلازميد ثنائي يتضمن معزز ‎ZmUbil‏ ‏© متحد الاتجاه يحرّك تتابع تشفير ‎YFP‏ (60/8101556؛ انظر الشكل ‎(OV‏ ‎JE‏ 8: جزء ‎Lite‏ من تجمع مجموعة من أربع جينات ‏يتم استخدام جزء ‎Lite‏ بلازميد ‎PDABL05806‏ كبلازميد بادئ لتوليد تجمع مجموعة من أربع ‏جينات ‎Spall (Cry34(8V6)-2A-Cry35 5 AAD1-2A-PhiYFP)‏ بواسطة معزز ‎1 ‏في الشكل‎ pDABL05806 ‏واحد ثنائي الاتجاه. تم عرض خريطة ممثلة لبلازميد‎ DCBV ‏ثنائي الاتجاه.‎ SCBY ‏حيث يحتوي على معزز‎ ٠ ‏تم نسخ شظية ‎AAD1-2A-PhiYFP‏ مشتقة من بلازميد 008105841 (الشكل ‎(YY‏ إلى ‏سلسلة ‎Jit‏ قطع ‎Pstl cut vector backbone‏ وا586 من البلازميد 88105806نام ‏باستخدام طرق نسخ معروفة بشكل شائع في الفن. يؤدي ذلك إلى إنتاج بلازميد ‎PDABI0S847‏ ‏(الشكل ‎(YY‏ تم نسخ شظية ‎Cry34(8V6)-2A-Cry35‏ مميزة ب ‎Notl/Xbal‏ تم الحصول ‎Vo‏ عليها من البلازميد 0088105840 بين مواقع ‎Notl/Spel‏ من بلازميد 0088105847 إلى ‏جزء ‎Lite‏ بلازميد ‎pDAB105849‏ (الشكل ‎(YY‏ يحتوي البلازميد ‎PDAB105849‏ على ‏مجموعات جين ‎Cry34(8V6)-2A-Cry35‏ و 01-2-1710 على كل جانب من ‏90817 معزز ثنائي الاتجاه. ‏تم توليد ناقل ثنائي تتضمن /5081 معزز ثنائي ‎olay)‏ ومجموعات التعبير الجيني عن الجين ‎AADI-2A-PhiYFP, Cry34(8V6)-2A-Cry35 ٠‏ من بلازميد ‎PDAB105849‏ عن ‎Jala (Invitrogen, Carlsbad, CA) GATEWAY L-R CLONASE ‏طريق تفاعل‎ ‏7 بلازميد مقصود (الشكل 4 7). تحتوي الناقل الناتج» ‎PDABIO8T1IY‏ على ‎(Cry34(8V6)-2A-Cry35‏ 1-2-1770 لال ومجموعات التعبير الجيني عن جين ‎.)7 4 ‏(الشكل‎ T-DNA ‏داخل حدود‎ PAT
‎١ h —‏ المثال 19 جزء ‎Lie‏ من مخزون مجموعة أربع جينات ثانية يتم نسخ مشتقات شظية ‎PhiYFP-2A-AAD]‏ من 010088105844 بلازميد (الشكل ‎(Yo‏ في سلسلة ناقل قطع ‎Pstl‏ وا586 لبلازميد 0108105806 باستخدام طرق نسخ معروفة بشكل شائع في الفن. يؤدي ذلك إلى إنتاج 0108105848 بلازميد (الشكل ‎(Yo‏ تم نسخ شظية ‎Cry34(8V6)-2A-Cry35 ©‏ مميزة 5 ‎Notl/Xbal‏ .تم الحصول عليها من البلازميد 0 بين مواقع ‎Notl/Spel‏ من 0088105848 بلازميد إلى جزء ‎lie‏ ‏5 ص09 بلازميد (الشكل ‎(YT‏ يحتوي بلازميد 105865 0858م على -(01/34)81/6 20-5 ومجموعات جين ‎PhiYFP-2A-AAD]‏ على كل جانب من ‎SCBV‏ معزز ثنائي الاتجاه. ‎٠‏ ناقل ثنائي تتضمن /5081 معزز ثنائي الاتجاه؛ ومجموعة جين 017/35-/2-(81/6) ‎Cry34‏ ‏و ‎Sap 00088105865 « PhiYFP-2A-AADI‏ توليد عن طريق تفاعل ‎(Invitrogen, Carlsbad, CA) GATEWAY L-R CLONASE‏ داخل ‎pDAB101917‏ ‏بلازميد مقصود (الشكل ‎(VE‏ يحتوي الناقل الناتج؛ ‎«pDABI08720‏ على ‎Cry34(8V6)-‏ ‎2A-Cry35‏ 01ل/-/01770-2؛ ومجموعات التعبير الجيني عن جين ‎JA PAT‏ حدود ‎T-DNA vo‏ (الشكل ‎.)١١‏ ‏المثال ‎:٠١‏ تحول الأجرعية المورمة صبغة ‎DAt13192‏ ‏تم تحويل النواقل الثنائية ‎pDAB1087205 pDAB108719‏ إلى صبغة الأجرعية المورمة الثلاثية ‎DAE13192‏ (انظر ‎calla‏ براءة الاختراع المؤقت الأمريكي رقم ‎(TV [FTA‏ تم فصل مستعمرات بكتيرية ‎Bacterial colonies‏ وتم استخلاص ‎DNA‏ بلازميد ثنائي والتحقق منها عن ‎٠‏ طريق قيود ‎restriction‏ إنزيم الهضم ‎.enzyme digestions‏ ‎:١١ JE‏ التحول إلى ‎A‏ ‏تعقيم السنبلة وفصل الأجنة: للحصول على أجنة ذرة غير ناضجة؛ تم ‎sla)‏ نباتات من ‎Zea‏ ‎(cov. 8104( mays‏ في الصوبة وتلقيح ذاتي أو أشقائي لإنتاج السنبلة. تم تجميع السنابل تقريباً ‎١-4‏ يوم بعد التلقيح. في يوم التجربة؛ يتم تعقيم سطح السنابل عن طريق الغمر في محلول
—vy-— «sodium hypochlorite ‏من مبيّض صوبة؛ حيث يحتوي على 70 صوديوم هيبوكلوريت‎ ٠ ‏دقيقة؛ يلي ذلك ثلاث شطفات في ماء معقم. بعد التعقيم 516171/1281017؛ تم‎ Yo-Yo ‏والهز لمدة‎ ‏في جو معقم من كل سنبلة وتوزيعها بشكل‎ (ae 7.7-٠١5( ‏تشريح الأجنة الملقحة غير الناضجة‎ £.¢Y (LS Basal ‏عشوائي في أنابيب طرد مركزي دقيقة تتضمن وسط إصابة سائل (وسط‎ ‏مجم/لتر؛ سكروز»‎ 70٠0١8 ‏مل/لتر؛ ا- برولين»‎ ٠.٠٠١ (XY 00d [NG ‏جمإلتر؛ محلول قيتامين‎ 5 ‏مجم/لتر. بالنسبة لمجموعة معطاة‎ ٠.5٠١ (all -4 oF ‏جم/لتر؛ جلوكوز؛ 760.0 جم/لتر؛‎ 5 ‏من التجارب؛ تم استخدام الأجنة المسحوبة من 7-؟ سنابل لكل معالجة.‎ ‏بداية استنبات الأجرعية: تم وضع بقعة مخزون جليسرول من سلالات الأجرعية تتضمن النواقل‎ ‏تتضمن مضادات حيوية ملائمة وتم إنماءها‎ AB ‏الثنائية الموصوفة أعلاه على أطباق أدنى وسط‎
YEP ‏مثوية لمدة 6-7 أيام. تم التقاط مستعمرة واحدة ووضعها على أطباق‎ dap Yo ‏عند‎ ٠ ‏يوم.‎ 7-١ ‏درجة مئوية لمدة‎ YA ‏تتضمن نفس المضادات الحيوية وتم احتضانها عند‎ ‏استنبات الأجرعية والاستنبات المشترك: في يوم التجربة؛ تم التقاط مستعمرات الأجرعية من طبق‎ ‏مل؛ وتم تعديل‎ ٠٠ ‏مل من وسط إصابة في أنبوب يمكن التخلص منه سعة‎ ٠١ ‏معلق في‎ (YEP ‏ضوئي. تم وضع‎ Cada ‏نانومتر باستخدام مقياس‎ ..4-١.7 = 000600 ‏كثافة الخلية إلى‎ ‏لفة بالدقيقة» درجة حرارة الغرفة؛ أثناء إجراء تشريح‎ ١١١ ‏استتباتات الأجرعية على هزاز دوار عند‎ ٠ ‏مم في الحجم من حبات الذرة‎ 7.7-٠.5 ‏للجنين. تم فصل الأجنة الملقحة غير الناضجة بين‎ ‏واحدة في نفس الوسط. تمت إضافة‎ ye ‏مل من وسط الإصابة وغسلها‎ ١ ‏المعقمة ووضعها في‎ ١5-٠١ ‏مرة ثم هزها لمدة‎ Vo ‏مل) إلى كل أنبوب وتم قلب الأنابيب حوالي‎ Y) ‏معلق الأجرعية‎ ‏جم/لتر؛ 1- برولين؛‎ 4.77 (MS ‏الأجنة على وسط الاستتبات المشترك (أملاح‎ Ja ‏دقيقة. تم‎ ٠٠٠٠١ ‏مجم/لتر؛ تحلل مائي لكازين إنزيمي‎ ٠٠٠٠١ ‏مجم/لتر؛ إنوسيتول عضليء‎ Yeon ٠ ‏جمالتر؛‎ Toor 68128017" ‏جدالتر؛‎ 0.0 pfu ‏مجم/لتر؛ ديكامبا 7.330 مجم/لتر؛‎ ‏مجم/لتر؛ أسيتو سيرينجون؛‎ ٠٠.١ 891103 ‏مل/لتر؛‎ ٠٠٠١ (XV 00] ‏معدّل‎ MS - ‏قيتامين‎ ‏أيام في‎ oF ‏ميكرومولار)؛ موجه باستخدام قصيغة موجهة لأعلى؛ والاحتضان لمدة‎ ٠ ٠0 ‏درجة مئوية.‎ YO ‏الضوء عند‎ toy
-م١-‏ يمكن ملاحظة التعبير الجيني العابر عن ‎:YFP/PhIYFP‏ التعبير الجيني عن 70/051717 العابر في الأجنة المحولة بعد ؟ أيام من الاستنبات المشترك باستخدام الأجرعية. تمت ملاحظة الأجنة تحت ميكروسكوب مجسم ‎(Leica Microsystems, Buffalo Grove, IL)‏ باستخدام مرشح ‎YFP‏ ومصدر ضوء ‎©٠0٠0‏ نانومتر. اختيار وإعادة توليد نسيج لين من حالات مفترضة: بعد فترة الاستنبات المشترك؛ تم نقل الأجنة إلى وسط استقرار (أملاح ‎MS‏ 5.77 جم/لتر؛ ا- برولين» ‎7٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ إنوسيتول عضلي؛ ‎٠‏ مجم/لتر؛ ‎MES‏ [إ(حمض 7-(0- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ حمض ‎500.٠ a‏ مجم/لتر؛ تحلل مائي لكازين إنزيمي؛ ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ ديكامباء ‎7.7٠8‏ مجم/لتر؛ سكروزء ‎Voor‏ ‏جم/لتر؛ ‎(Gelzan™‏ 7.30 جمالتر؛_ثيتامين- ‎MS‏ معدّل [١000٠6ل]» ‎Vern‏ مل/لتر؛ ‎٠5.١ 8900103 ٠‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين»؛ ‎7090805٠0‏ مجم/لتر) بدون عامل انتقائي والاحتضان في ‎YE‏ ساعة ضوء بكثافة ضوء ‎٠٠‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية ‎١-‏ لمدة 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل الأجنة على وسط اختيار ‎١‏ (أملاح ‎YF (MS‏ جم/لتر؛ - برولين» ‎7٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ إنوسيتول ‎٠٠٠٠١ cline‏ مجم/لتر؛ ‎MES‏ [(حمض 7-(©- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ حمض ‎[a‏ 0000© مجم/لتر؛ تحلل ‎Sle‏ لكازين إنزيمي؛ ‎٠٠٠٠١‏ مجم/لتر؛ ديكامباء 3.730 ‎VO‏ مجمإلتر؛ ‏ سكروزء ‎Toor‏ جمإلتر؛ ‎(Gelzan™‏ 7.30 جمإلتر؛ فيتامين- ‎Jie MS‏ ‎٠.٠١ ]70٠٠٠١[‏ مل/لتر؛ 903 ‎٠5...‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين»؛ ‎Your‏ مجم/لتر)؛ تتضمن ؟ مجم/لتر بايالافوس والاحتضان في ‎VE‏ ساعة ضوء بكثافة ضوء ‎٠‏ 5 ميكرومول دقيقة- ".ثانية-١‏ لمدة 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل الأجنة ذات كالس تخلقي تكاثري على وسط اختيار ؟ (أملاح ‎(MS‏ 5.77 جمالتر؛ ‎٠‏ إنوسيتول ‎٠٠٠٠١ (lime‏ مجم/لتر؛ 1- برولين» ‎7000٠0‏ مجم/لتر؛ ‎MES‏ [(حمض 7-(0- مورفولينو)- إيثان سلفونيك)؛ حمض حر]؛ ‎٠000٠0‏ مجم/لتر؛ تحلل مائي لكازين إنزيمي» ‎٠٠٠٠١‏ ‏مجم/لتر؛ ديكامباء 7.330 مجم/لتر؛ سكروزء 70.0 جم/لتر؛ "6612807 7.30 جمالتر؛ قيتامين - ‎٠.٠١ »]٠٠٠١[ Jae MS‏ مل/لتر؛ ‎Your AGNO3‏ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين» 6 ؟ مجمإلتر)؛ تتضمن © مجم/لتر بايالافوس واحتضانها في ‎YE‏ ساعة ضوء ‎BLS‏ ضوء ‎١ YO‏ ميكرومول دقيقة-؟.ثانية-١ ‎sad‏ أخرى ‎VE‏ يوم عند ‎YA‏ درجة مئثوية. تسمح خطوة الاختيار ‎toy‏
هذه للنسيج اللين المعدل الوراثياً بتكاثر وتمايز إضافي. يجب أن يستغرق اختيار النسيج اللين فترة لا تقل عن ثلاثة أسابيع. تم نقل كالس تخلقي تكاثري على وسط إعادة توليد ‎١‏ (أملاح ‎MS‏ ‏اا جم/لتر؛ إنوسيتول عضلي؛ ‎١٠١١.٠‏ مجم/لتر؛ ‎-L‏ برولين» ‎You.‏ مجم/لتر؛ ‎MES‏ ‎asa]‏ 7-(م- مورفولينو)- ‎Ol‏ سلفونيك)؛ حمض ‎You.
J‏ مجم/لتر؛ تحال ماني لكازين إنزيمي» ‎Cre‏ مجم/لتر؛ ‎(NAA‏ ...م مجم/لتر ¢ ‎٠.٠١ ABA‏ مجم/لتر؛ ‎٠.٠.١ (BA‏ مجم/لتر؛ سكروزء؛ 8.6 جم/لتر؛ ‎Y.o.
Gelzan™‏ جم/لتر؛ قيتامين - ‎MS‏ معدّل ] ‎[XY va‏ 3 .أ مل/لتر؛ ‎AgNO3‏ .أ مجم/لتر؛ كاربينيسيلين» ‎You.‏ مجم/لتر)؛ تتضمن ؟ مجم/لتر بايالافوس والاستنبات في ‎Ve‏ ساعة ضوء ‎ABEL,‏ ضوء 560 ميكرومول دقيقة - ‎Y‏ .ثانية- ‎١‏ ‏لمدة ‎١‏ أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. ‎٠‏ تم نقل كالس تخلقي مع الفسيلة/البراعم على وسط إعادة ‎Yad‏ (أملاح ‎MS‏ £77 جم/لتر؛ قيتامين - ‎MS‏ معدّل ] ‎Cee‏ دل .أ مل/لتر إنوسيتول عضلي؛ ‎Yeon‏ مجم/لتر ؛ سكروزء ‎Tea‏ جم/لتر؛ ‎Gum G434™‏ صقااعة ‎٠.٠.١‏ جم/لتر؛ كاربينيسيلين» 8 مجم/لتر)؛ تتضمن ؟ مجم/لتر بايالافوس. تم احتضان الاستنبات تحت الضوء لمدة ‎VE‏ ساعة بكثافة ضوء ‎٠‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١‏ لمدة ‎٠١-١‏ أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم نقل الفسائل الصغيرة ‎١5‏ بجذور أساسية لإطالة الفسيلة ووسط تجذيري (أملاح ‎(MS‏ 5077 جم/لتر؛ محلول ثيتامين ‎NG‏ ‎vee ]‏ كي ...ا مل/لتر إنوسيتول عضلي ‎١٠١١.١6‏ مجم/لتر ؛ سكروز ‎١.٠١‏ جم/لتر ¢ ‎BN]‏ ‏جم/لتر؛ في طبق نبات واحتضانها تحت ‎8/١١‏ ساعات ضوء/ظلام عند ‎9٠0‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١ ‎sad‏ 7 أيام عند ‎YA‏ درجة مئوية. تم اختيار الشتلات المعدلة ‎hs‏ المفترضة السليمة ثم احتضائها في 4/17 ساعات ضوء/ظلام عند ‎٠٠0١‏ ميكرومول دقيقة-7.ثانية-١‏ لمدة ‎٠‏ أخرى ؟-ه أيام عند ‎YO‏ درجة مئوية وتم تحليلها لتحديد عدد النسخ المعدلة وراثياً والنقل إلى الصوبة. المثال ‎:١١‏ التعبير الجيني عن 501755 العابر تم إجراء التعبير الجيني العابر عن 001776 _من ‎Zea mays Lal‏ محولة_باستخدام 59 . يمكن لمعزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه أن يعبر عن 001758 من مجموعة ‎Yo‏ التعبير الجيني عن جين ‎Laie AAD 1 -2A—-Ph iYFP‏ لا يوضح جنين غير محول أي تفلور الل he
Zea mays dial ‏يمكن ملاحظة مستوى مشابه للتعبير الجيني عن 0017570 من‎ PhiYFP محولة باستخدام بلازميد 010/8105748 ثنائي (الشكل ‎(Yo‏ تتضمن ‎Mays‏ 268 موحد الاتجاه معزز ‎(Zm) Ubil‏ يحرّك تتابع تشفير 001750 أحادية تعرض مستوى متوقع من التعبير الجيني
Zea mays ‏يمكن ملاحظة التعبير الجيني العابر عن 001770 من أجنة‎ .70/001770 J © محولة باستخدام ‎(pDAB108720‏ حيث قد يعبر معزز 011لا 200 ثنائي الاتجاه عن ‎PhiYFP‏ من مجموعة التعبير الجيني عن جين 1770-2-81 المثال ؟٠:‏ التعبير الجيني عن 001770 في ذرة محولة بشكل مستقر التعبير الجيني عن 001771 في نسيج ‎Zea mays‏ لين محل بشكل مستقر محرك بواسطة معزز 511لا 200 ثنائي الاتجاه: توضح ‎Zea mays dal‏ محولة باستخدام ‎Jib‏ ‎٠‏ 0088108719 الثنائي تتضمن مجموعة التعبير الجيني عن جين ‎AAD1-2A-PhiYFP‏ تعبير ‎PhiYFP‏ جيد. قد يحرّك معزز /5081 ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن ‎PhIYFP‏ تؤكد تلك النتائج أن عنصر أدنى معزز 5101ل1/10-1 ‎jad‏ /50681 ثنائي الاتجاه يكون قادراً على التعبير عن جين ‎cidie‏ على سبيل المثال ‎PhIYFP‏ أو ‎YFP‏ تكون مستويات التعبير الجيني عن بروتين ‎PhIYFP‏ متشابهة مقارنةً بنسيج ‎Zea mays‏ لين محول باستخدام ناقل ثنائي ‎Gus (ple Vo‏ يتضمن ‎Ubil jee‏ 200 موحد الاتجاه يحرّك تتابع تشفير ‎PhiYFP‏ (00/8105748). لا يتم كشف التعبير الجيني عن 0017570 في النسيج اللين المقارن السالب الذي لا يكون محولاً باستخدام بنية ثنائية ولا يحتوي على تتابعات تشفير ‎PhiYFP‏ توضح أجنة ‎Zea mays‏ محولة باستخدام الناقل الثنائي 008108720 حيث يحتوي على مجموعة التعبير الجيني عن جين 01//-001770-2/8 تعبير ‎PhiYFP‏ جيد. قد ‎lay‏ معزز ‎٠‏ 5087 ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن 0051770. تؤكد تلك النتائج أن عنصر أدنى معزز 5101لا-1/10 لمعزز /5081 ثنائي الاتجاه يكون قادراً على التعبير عن جين ‎ile‏ على سبيل المثال ‎PhiYFP‏ أو ‎YFP‏ المثال ‎:٠6‏ تقدير عدد النسخ المعدلة وراثياً
‎A \ —_‏ _ تقدير عدد النسخ المعدلة وراثياً باستخدام ‎:Real Time TagMan™ PCR‏ تم تحويل نباتات ‎Zea mays‏ باستخدام نواقل ثنائية تتضمن معزز ‎Al SCBV‏ الاتجا ‎PDAB108719‏ ‏و00/8108720؛ وتم تحويل نباتات أخرى باستخدام ناقل ثنائي مقارن» ‎.pDAB105748‏ تم تأكيد وجود تتابع تشفير ‎(Pat 00/35 0/34 AADL (PhiYFP)‏ داخل جينوم نباتات .2 © 5لا03 المعدلة وراثياً إلى ‎pPDAB108720 5 pDAB108719‏ بواسطة تجربة مسبار تحلل مائي ‎TagMan‏ تم تحليل النباتات المعدلة وراثياً إلى ناقل مقارن 0088105748 لتحديد وجود تتابع ©00177. تم الحصول على شتلات ‎mays‏ .2 المعدلة وراثياً المحولة بشكل مستقر التي نمت من النسيج اللين وتحليلها لتعريف الحالات التي تحتوي على عدد نسخ منخفض ‎7-١(‏ نسخة) لوليجات تضفير ‎T-strand inserts T—‏ بطول كامل من النواقل الثنائية ‎pDAB108719‏ ‎٠‏ و00/88108720 وناقل ثنائي مقارن 00/8105748. تم تقديم الشتلات المؤكدة إلى الصوبة وانماءها. تم استخدام نظام ‎Roche‏ ضوء ‎Cyclerd80™‏ لتحديد عدد النسخ المعدلة وراثياً للحالات التي تكون محولة باستخدام الناقل الثنائي 0088108719 5 ‎.pDAB108720‏ الطريقة التي تستخدم تفاعل ‎TagMan®‏ ثنائي الضفيرة التي تستخدم أوليجونيوكليوتيدات خاصة لتتابع التشفير وجين ‎mays Vo‏ .2 مرجعي داخلي ‎laid)‏ إنقيرتاز (رقم الانضمام لبنك الجينات: 16123.1لا)؛ في تجربة واحدة. تم تحديد عدد النسخ والتلقيح عن طريق قياس شدة تفلور تتابع التشفير الخاصة؛ بالنسبة لتفلور الإنقيرتاز النوعي؛ مقارنةٌ بمعايير عدد النسخ المعروف. الجدول 7. بادئ نيوكليوتيد تقدمي وعكسي ومسبارات تفلور (مخلقة براسطة ‎Integrated DNA‏ ها ‎.(Technologies, Coralville,‏ بادئة ‎YFP‏ تقدمية ‎GATGCCTCAGTGGGAAAGG‏ (هوية تتابع رقم: ‎(A‏ ‏بادئة ‎YFP‏ عكسية ‎CCATAGGTGAGAGTGGTGACAA‏ (هوية تتابع رقم: 4(
-؟-
(£) ‏(هوية تتابع رقم:‎ CTTGGAGC \Yo ‏رقم‎ ROCHE UPL lw YFP ‏مسبار‎ ‎es ‎5'HEX/CGAGCAGACCGCCGTGTACTTCTACC/3BHQ_1/3' SE ‏مسبار‎ ‎I pDAB108719 ‏المحولة. باستخدام النواقل الثنائية‎ Zo mays clued daly
‎pDAB108720‏ يتم تضخيم شظية ‎DNA‏ خاصة بتتابع تشفير باستخدام مجموعة بادئة/مسبار
‎A Ad —_‏ _ ‎TagMan®‏ تتضمن مسبار مرقّم باستخدام صبغة تفلور ‎(FAM‏ ويتم تضخيم إنقيرتاز باستخدام مجموعة بادئة/مسبار ‎TagMan®‏ ثانية تتضمن مسبار مركّم باستخدام تفلور ‎HEX‏ (الجدول 7). تم تحضير خليط تفاعل ‎PCR‏ كما هو مذكور في الجدول ‎oh‏ وتم تضخيم ‎DNA Las‏ المحدد للجين وفقاً للظروف المذكورة في الجدول 9. تم تحديد عدد نسخ وتلقيح العينات عن طريق قياس ‎oo‏ الكثافة النسبية للتفلور المحدد لتتابع التشفير للتفلور المحدد للجين المرجعي؛ إنقيرتازء مقارنة بمعايير عدد النسخ المعروف. تم تكوين المعايير عن طريق تخفيف الناقل ‎pDAB108719)‏ أو ‎(pDAB108720‏ داخل ‎Z.‏ ‎mays B104‏ جينومي ‎(GDNA) DNA‏ للحصول على معايير بعلاقة معروفة للناقل: ‎(IDNA‏ ‏على سبيل ‎(Jal‏ يمكن تحضير العينات التي بها نسخة ‎sans‏ ونسختين وأربع نسخ لناقل ‎DNA‏ ‎٠‏ الكل نسخة من ‎mays 8104 gDNA‏ .2. تم التحقق من تخفيفات نسخة واحدة ونسختين من الناقل المختلط مع معيار ‎mays 8104 gDNA‏ .2 مقابل ‎mays Ala‏ .2 مقارنة التي تكون معروفة بأنها أحادية اللواقح» وحالة ‎mays‏ .2 مقارنة التي تكون معروفة بأنها ثنائية اللواقح ‎Ala)‏ ‎Z. mays‏ 77/8؛ انظر منشور براءة الاختراع الدولي ‎PCT‏ رقم ‎.)٠١١/١ 774314 YT‏ تم ‎shal‏ ‏تجربة ‎TagMan®‏ ذنائي الضفيرة التي تستخدم أوليجونيوكليوتيدات محددة لجين تتابع التشفير ‎Vo‏ وأوليجونيوكليوتيدات محددة لجين مرجع ‎mays‏ .2 داخلي ‎Gla andl‏ عن طريق تضخيم وكشف شظية ‎same DNA‏ للجين لتتابع التشفير باستخدام مجموعة بادئة/مسبار ‎TAQMAN®‏ ‏واحدة تتضمن مسبار مرقم باستخدام صبغة تفلور ‎(FAM‏ وعن طريق تضخيم وكشف شظية ‎DNA‏ محددة للجين لإنقيرتاز باستخدام مجموعة بادئة/مسبار ‎TAQMAN®‏ ثانية تتضمن مسبار مرقم باستخدام ‎HEX‏ تفلور. وفقاً للجدول 7؛ تم تحضير خليط تفاعل تتابع التشفير ‎TagMan®‏ ‎٠‏ كما هو مذكور في الجدول ‎A‏ وتم تضخيم الشظايا المحددة وفقاً للظروف المذكورة في الجدول ‎A‏ ‏الجدول 8. خليط تفاعل ‎.TAQMAN® PCR‏ ‎toy‏
م- تم تحليل مستوى التفلور المتولد لكل تفاعل باستخدام ™480 ‎Roche LightCycler‏ ‎Thermocycler‏ وفقاً لتوجيهات المُصنّع. تم إثارة جزيء الفلورة ‎FAM‏ بكثافة بصرية تبلغ 9 تانومتر؛ وتم إثارة جزيء الفلورة ‎HEX‏ بكثافة بصرية تبلغ ‎OA [OTT‏ نانومتر. يمكن تحديد عدد النسخ عن طريق مقارنة ‎of‏ مستهدفة/مرجعية للعينات غير المعروفة (حصيلة بواسطة ‎(LightCycler 4807" ©‏ إلى قيم مستهدفة/مرجعية لأربع معايير عدد النسخ المعروف (على سبيل المثال؛ ‎-١ Null‏ نسخة ‎—Y (hemi)‏ نسخة ‎(homo)‏ و4 - نسخ). الجدول 9. ظروف الدورة الحرارية لتضخيم ‎PCR‏
اج ‎A‏ _ تم تلخيص النتائج من تحليل عدد النسخ المعدلة وراثياً لنباتات معدلة وراثياً تم الحصول عليها عن طريق التحويل باستخدام أجزاء ‎SCBV jee line‏ ثنائي الاتجاه ‎PDAB108719)‏ ‏و00/88108720)؛ ولنباتات معدلة وراثياً تم الحصول عليها عن طريق التحويل باستخدام جزء منشأ معزز موحد الاتجاه مقارن ‎ZmUbil PhiYFP‏ (00/8105748) في الجدول ‎.٠١‏ تم ‎oo‏ تقل النباتات فقط ذات ١-؟‏ نسخة من كل المحورة ‎ays‏ إلى الصوبة لتحليلات التعبير الجيني ا لأخرى. الجدول ‎.٠١‏ تقدير عدد النسخ المعدلة وراثياً للنباتات المعدلة وراثياً التي تم الحصول عليها من معزز ثنائي الاتجاه وأجزاء ‎Laie‏ مقارنة. المثال ‎sve‏ التعبير الجيني المستقر عن ‎PhiYFP‏ في نباتات ذرةٍ ‎TO‏ ‎Ve‏ يمكن ملاحظة التعبير الجيني المستقر عن ‎PhiYFP‏ في نباتات ‎Zea mays TO‏ المحركة بواسطة معزز /5081 ثنائي الاتجاه: أجنة ‎Zea mays‏ محولة باستخدام ناقل ‎PDAB108719‏ ‎SUN‏ تتضمن مجموعة التعبير الجيني عن جين ‎AADI-2A-PhiYFP.‏ قد يحرّك معزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه التعبير الجيني القوي عن 001750 في ‎3S‏ من الفسيلة وأنسجة الجذر. تؤكد النتائج أن عنصر أدنى معزز 5101ل1/10-1 لمعزز /5081 ثنائي الاتجاه يكون قادراً على ‎١‏ التعبير عن جين ‎cals‏ على سبيل المثال ‎YFP PhiYFP‏ التي تكون مندمجة بشكل ثنائي
-01- السيسترونيك مع 01 باستخدام تتابع 2/8. تكون مستويات التعبير الجيني عن بروتين ‎PhiYFP‏ مشابهة لأجنة ‎mays‏ .2 المحولة باستخدام ناقل ثنائي مقارن حيث يحتوي على معزز ‎Zm 1‏ موحد الاتجاه يحرّك تتابع تشفير ‎PhiYFP‏ (00/8105748). لا يتم كشف التعبير الجيني عن ‎PhiYFP‏ في النباتات المقارنة السالبة التي لا تكون محولة باستخدام بنية ثنائية ولا © تحتوي على تتابعات تشفير ‎PhiYFP‏ ‏يمكن ملاحظة التعبير الجيني عن ‎PhiYFP‏ في الورق وأنسجة جذر نباتات 10 ‎Zea mays‏ معدلة وراثياً إلى ناقل ثنائي ‎pDAB108720‏ حيث يحتوي على مجموعة التعبير الجيني عن جين ‎.PhiYFP-2A-AAD]‏ قد يحرّك ‎SW SCBV jie‏ الاتجاه التعبير الجيني القوي عن ‎Si .PhiYFP‏ النتائج أن عنصر أدنى معزز ‎Min-UbiP1‏ لمعزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه يكون ‎٠‏ قادراً على التعبير عن جين مَِلَّغْ؛ على سبيل المثال ‎PhiYFP‏ أو ‎YFP‏ مندمج ب ‎AAD]‏ مع تتابع ‎2A‏ أو تتابع مشابهة ل ‎2A‏ ‏المثال ‎V1‏ تحليل ‎«Cry35 «Cry34‏ وبروتين 1 ‎AAD]‏ ‏تم أخذ عينات ‎be‏ لنباتات في الأعمدة ‎٠١-١‏ من مصفوفة صناديق في ‎٠١5‏ مل أنابيب مخروطية إليها تمت إضافة ‎١‏ كرية صلبة يليها ‎BSA 7.6.5 + PBST‏ (7؛ مل). بعد ذلك تم ‎Vo‏ سحق الصندوق إلى كريات لطحن العينة في ‎Geno Grinder‏ لمدة © دقائق عند ‎al ١50860‏ بالدقيقة ثم ‎Shall‏ المركزي عند ‎©70٠0‏ لفة بالدقيقة لمدة ‎١‏ دقائق عند ؛ درجة مئوية. تجربة ‎:Cry34/35 ELISA‏ في طبق عميق منفصل ‎deep well plate‏ ذو 41 عين؛ تم تخفيف عينة من المستخلص ‎:١‏ 700 في ‎.blotto 7) + PBST‏ تم ‎Jai‏ الحجمين ‎volumes‏ ‏من ‎YO‏ ميكرولتر من العينة المخففة إلى أطباق منفصلة ذات 96 عين تم ترتيبها باستخدام مضاد ‎Cry34 - ٠‏ ومضاد - ‎(Meso Scale Discovery) Cry35‏ في العمود ‎١١‏ و١١‏ من كل طبق تمت إضافة تركيزات عيارية من ‎Cry34‏ و00/35 في ‎Yo) blotto ZY + PBST‏ ميكرولتر). بعد ذلك تم احتضان الأطباق أثناء الهز عند درجة حرارة الغرفة ‎sad‏ ساعة واحدة. تم ‎Jue‏ الأطباق بعد ذلك باستخدام ‎x 3©( PBST‏ 00 ميكرولتر). بعد ذلك تمت إضافة ‎Yo‏ ‏ميكرولتر من محلول من مضاد- ‎Cry34‏ متقارن مع ‎SUfoTAG‏ ومضاد- ‎Cry35‏ إلى كل
—AV- عين والاحتضان مع الهز عند درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم غسل الأطباق بعد ذلك باستخدام ‎٠0١0 x FY) PBST‏ ميكرولتر). بعد ذلك تمت إضافة مقدار من ‎١5١‏ ميكرولتر ‎Read‏
SECTOR® ‏وقراءة الطبق مباشرةً على قارئ‎ (Meso Scale Discovery) Buffer T 6000 يمكن احتساب تركيزات البروتينات في العينة باستخدام المنحنى العياري للبروتين الخاص 0 المولد من نفس الطبق. تجربة ‎ELISA‏ 10-1: في طبق عميق منفصل ذو 976 عين؛ تم تخفيف عينة من المستخلص ‎٠٠0 :١‏ في ‎BSA 75.5 + PBST‏ تم نقل الحجمين من ‎Yoo‏ ميكرولتر من ‎Anal)‏ المخففة بعد ‏ذلك إلى أطباق ذات 976 عين منفصلة تم تغطيتها باستخدام مضاد ‎AAD]‏ (متوفرة بواسطة ‎(Acadia Bioscience LLC‏ في العمود ‎١١‏ و١١‏ من كل طبق تمت إضافة تركيزات عيارية ‎٠‏ من 01 في ‎Yoo) BSA Zio + PBST‏ ميكرولتر). بعد ذلك تمت إضافة مقدار من ‎Ov‏ ‏ميكرولتر من مضاد 8/801 بمجموعة بيوتين إلى كل عين وتم احتضان الأطباق أثناء الهز عند ‏درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة. تم غسل الأطباق بعد ذلك باستخدام ‎٠٠١ x 0) PBST‏ ‏ميكرولتر). بعد ذلك تمت إضافة ‎٠٠١‏ ميكرولتر من محلول مقترن ستيبتاقيدين - فوسفات قلوي ‎steptavidin-alkaline phosphate conjugate solution‏ إلى كل عين والاحتضان مع ‎Vo‏ الهز عند درجة حرارة الغرفة ‎Ye sad‏ دقيقة. تم غسل الأطباق 5 بعد ذلك باستخدام ‎PBST‏ ‎Tov X 0)‏ ميكرولتر). تمت إضافة مقدار من ‎٠٠١‏ ميكرولتر من ركيزة (0- نيتروفينيل فوسفات ‎(PNPP (p-nitrophenylphosphate‏ بعد ذلك والاحتضان مع الهز عند درجة حرارة الغرفة ‏لمدة £0 دقيقة. بعد ذلك تم قراءة الأطباق عند 8405 على قارئ أطباق ‎SpectraMax M5‏ ‎(Sa (Molecular Devices)‏ احتساب تركيزات البروتينات في العينة باستخدام المنحنى ‎٠‏ العياري المولد من نفس الطبق. ‎TO ‏تحليل بروتين نباتات ذرة‎ :١١ Jia ‏تم إجراء تحليل البروتين لنباتات ذرة ‎TO‏ المحركة بواسطة جزء ‎lie‏ معزز ‎Zea mays SCBV‏ ‏ثنائي الاتجاه ‎(pDAB108719)‏ في ذلك المثال.
م - الجدول ‎.١١‏ التعبير الجيني عن ‎Cry34/Cry35/AADT‏ في 353 ‎TO‏ نباتات ‎PDABL08719‏ ‏معدلة وراثياً ‎I‏ ‏تم عرض تحليل ‎ELISA‏ التمثيلي ل ‎VY‏ نبات 53 ‎TO‏ مطفرة تم الحصول عليها من أجنة ‎Zea‏ ‏5 محولة باستخدام 0008108719 التي تحتوي على مجموعة التعبير الجيني عن جين ‎Cry34-2A-Cry35 ©‏ باختصار في الجدول ‎.١١‏ قد يحرّك معزز /5081 ثنائي الاتجاه التعبير ‎ual)‏ القوي عن 38 من 607/34 و0/35© التي تشفر تتابعات في الورق. توضح تلك 7ط
‎A q —_‏ _ الملاحظات أن معزز ‎SCBV‏ ثنائي الاتجاه المنفرد في جزءٍ ‎Laie‏ 00/8108719 قد يعبر عن جينات متعددة (على سبيل المثالء ‎Cry34‏ 07/35 و1 ‎(AAD‏ ‏تحليل البروتين لنباتات ذرة ‎TO‏ المحركة بواسطة جزء ‎Laie‏ معزز ‎Zea mays Ubiquitin]‏ ثنائي الاتجاه (00/8108720): تم عرض تحليل ‎ELISA‏ التمثيلي ل 4 نباتات ذرة ‎TO‏ مطفرة تم الحصول عليها من أجنة ‎Zea mays‏ محولة باستخدام ‎pDAB108720‏ التي تحتوي على مجموعة تعبير جيني عن جين ‎Cry34-2A-Cry35‏ بشكل مختصر في الجدول ‎BY‏ يحرّك معزز ‎SW SCBV‏ الاتجاه التعبير الجيني القوي عن ‎3S‏ من ‎Cry35;5 Cry34‏ التي تشفر تتابعات في الورق ‎deaf‏ ‏الجدول ‎VY‏ التعبير الجيني عن 00/34/007/35/8/801 في 5)3 ‎TO‏ نباتات ‎PDAB108720‏ ‎Yo‏ معدلة ‎ays‏ ‏4 تانوجم/سم 7 ‎Cry35|‏ نانوجم/سم ‎AAD | ١‏ نانوجم/سم ؟ ‎IE‏ ‎toy‏
‎q «=‏ _ المثال ‎:٠8‏ تكدس التطفير ‎Stacking‏ 17805986106 : معززات ثنائية الاتجاه التخليقية (بيانات ‎(T1‏ ‏التعبير الجيني عن نباتات 11 المحركة بواسطة المعزز ثنائي الاتجاه أجزاء منشاً: تم اختيار عشر إلى إثنى عشر ‎Ala‏ نسخة منفردة لكل ‎Lane on‏ للتحليل باستثناء أن ‎Land) oa‏ المقارن © 0088108716 يكون به ‎Als‏ واحدة فقط. تم اختبار خمس نباتات/الحالات لمرحلة ‎V6‏ وتم اختبار ثلاث نباتات/الحالات لمراحل ‎VI0-12‏ و/43. تم إجراء تجارب بروتين باستخدام ‎ELISA J 5‏ تم عرض أجزاء ‎Laid)‏ المستخدمة في ذلك المثال في الشكل 20. تكون ‎PDAB108708‏ ‎SCBV)‏ ثنائي الاتجاه )—+ + ‎SCBV) pDAB108709 5 ((Y‏ ثنائي الاتجاه (-90)) عبارة عن ‎٠‏ أجزاء ‎Lane‏ ذات معزز ثنائي الاتجاه تمثيلي خاصة بالاختراع الحالي بالإضافة إلى أجزاء منشأ مع ‎jee‏ ذرة ‎Ubil‏ ثنائي الاتجاه ‎ZMUbi] pDABL08706)‏ ثنائي الاتجاه ‎))٠٠١-(‏ ‎ZMUbi) pDAB108707‏ ثنائي الاتجاه (-90))]؛ 0088101556 (عينة مقارنة ‎osu SCBV) 0088108715 (ZmUbil-YFP‏ أدنى معزز)ء و08108716م ‎ZmUbil)‏ بدون أدنى معزز) تعمل كأجزاء ‎Lite‏ مقارنة باستخدام معززات متحدة الاتجاه. تم عرض تتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl‏ السبعة لبروتين ‎(LCMS) YFP‏ بالنانوجم/سم ؟ في الشكل ١؟أ.‏ تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء المنشاً السبعة ل ‎YFP RNA‏ في الشكل ‎LF)‏ ‏تم عرض تتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Laid)‏ السبعة لبروتين ‎GUS‏ ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم؟ في الشكل ‎IVY‏ تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ‎Yo‏ من أجزاء ‎Land)‏ السبعة ل ‎GUS RNA‏ في الشكل ‎CTY‏ ‏تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(VO)‏ من أجزاء المنشأ السبعة لبروتين ‎AAD]‏ ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم؟ في الشكل ؟؟أ. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ‏من أجزاء المنشاً السبعة ل ‎AAD] RNA‏ في الشكل ‎LY‏ ‎toy‏
‎q \ —‏ — تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة لبروتين ‎YFP‏ ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم؟ في الشكل 4 ؟أ. ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا كبيرا تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Land)‏ السبعة ل ‎YFP RNA‏ في الشكل ؛”ب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. © تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Lindl‏ السبعة لبروتين ‎GUS‏ ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم؟ في الشكل ‎Live‏ ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا كبيرا تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء ‎Land)‏ السبعة ل ‎GUS RNA‏ في الشكل ©7؟ب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة لبروتين 1 طم
‎٠‏ (01015]) بالنانوجم/سم؟ في الشكل 37أ. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني النسبية ‎(V6)‏ من أجزاء المنشأ السبعة ل ‎AAD] RNA‏ في الشكل 776ب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا كبيرا الأشكال ‎caf (YY‏ ولاج تعرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(VI0)‏ من أجزاء المنشأ السبعة لبروتين ‎(YFP‏ 01م؛ و5لا6 ‎(LCMS)‏ بالنانوجم/سم ‎oY‏ على التوالي.
‎١‏ الأشكال 986 ‎TA «FA‏ 2 توضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني (10/) من أجزاء ‎Laid)‏ السبعة لبروتين ‎«GUS YFP‏ و ‎(LCMS) AADI‏ بالنانوجم/سم7؛ على التوالي. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. مستويات لم ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا الأشكال ‎cP (Fa‏ 2745 تعرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎(R3)‏ من أجزاء ‎Lindl‏
‎Yo‏ السبعة لبروتين ‎(GUS (YFP‏ و01 ‎Yanan silly (LCMS)‏ على التوالي. الأشكال ‎z 605 cots df‏ توضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(R3)‏ من أجزاء المنشأ السبعة لبروتين ‎«GUS (YFP‏ و ‎(LCMS) AADI‏ بالنانوجم/سم7؛ على التوالي. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‏لول
+4 توضح النتائج أن 38 من معززات /5081 ثنائية الاتجاه الخاصة بالاختراع الحالي ومعززات ذرة 1لا ثنائية الاتجاه قد يحرّك التعبير الجيني القوي عن ‎YFP GUS‏ يكون التعبير الجيني عن ‎YFP‏ من معزز 33 ‎Ubil‏ ثنائي الاتجاه مشابه ل ‎YFP‏ محرّك من ذرةٍ 1أطلا. يكون التعبير الجيني عن ‎YFP‏ من /5081 معزز ثنائي الاتجاه أعلى إلى حدٍ كبير من ‎YFP‏ محرّك من ذرة ‎Ubil ©‏ أو معزز 33 511لا ثنائي الاتجاه. مع ذلك؛ يصبح ذلك الاختلاف أقل بكثير عند مرحلة
0. تقترح النتائج أيضاً أن النسخ ثنائي الاتجاه له تأثير غير ملحوظ على التعبير عن ‎GUS‏ ‏(التعبير عن ‎GUS‏ مقارنةٌ بأجزاء المنشأ التي تفتقر لأدنى معزز بدون التعبير عن ‎(YFP‏ توفر معززات ‎SCBV‏ ثنائية الاتجاه أيضاً تعبير جيني ‎el‏ بكثير عن ‎GUS‏ مقارنةً بمعززات ذرة 1لا ثنائية الاتجاه.
‎٠‏ المثال ‎:٠5‏ توليفة ‎Combination‏ _من معزز ‎AW‏ الاتجاه وتتابع ‎AAW 2A‏ السيسترون ‎Bicistronic‏ لتحريك أربع محورات وراثية من معزز منفرد واحد (بيانات 11) التعبير الجيني عن نباتات 11 المحركة بواسطة المعزز ثنائي الاتجاه أجزاء منشاً: تم اختيار عشر إلى إثنى عشر حالة نسخة منفردة لكل جزءٍ ‎Lane‏ للتحليل باستثناء أن أجزاء المنشاً المقارنة يكون بها أربع أو خمس حالات لكل جزء منشاً. تم اختبار خمس نباتات/الحالات لمرحلة ‎V6‏ وتم اختبار
‎١٠‏ ثلاث نباتات/الحالات ‎Jabal‏ 10-12/ و/43. تم إجراء تجارب بروتين باستخدام ‎LCMS‏ أو ‎ELISA‏ ‏تم عرض ‎pDAB108720 5 pDAB108719‏ في الشكل ‎V4‏ تم عرض ‎PDAB105748‏ ‎pDAB105818 5‏ في الشكل ‎Wve‏ عرض أجزاء ‎lie‏ متعددة التحول الجيني الإضافية باستخدام معزز ‎(Ubil‏ بما في ذلك ‎pDAB108718 5 pDAB108717‏ في الشكل 49.
‎٠‏ تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية (6/) ل ‎Cry34 RNA‏ من أجزاء ‎Landi‏ الستة 88م ‎ZmUbi1-Cry34/ZmUbil-) pDAB105818 «(ZmUbil-YFP)‏ ‎YFP/AAD-1-ZmUbil) pDAB108717 «(Cry35/ZmUbil-AADI‏ ثنائي الاتجاه - ‎AADI/YFP-ZmUbil) 0088108718 «(Cry34-Cry35‏ ثنائي الاتجاه ‎Cry34—‏ ‎YFP/AADI-SCBV) pDAB108719 ») 05‏ ثنائي الاتجاه ‎«(Cry34-Cry35-‏
‎toy
او ‎AADI/YFP - SCBV) pDAB108720 ,‏ ثنائي الاتجاه ‎(Cry34-Cry35-‏ في الشكل 7أ. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎(LCMS) Cry34‏ من نفس أجزاء المنشاًً الستة ‎(pDAB105748‏ 8105818م0م ‎(pDAB108717‏ ‏8ههم ‎«pDAB108719‏ و 0088108720 في الشكل ‎Lot‏ ‏© تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎AAD] RNA‏ من أجزاء ‎Landi‏ الستة ‎pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 «pDAB105748‏ ‎pDAB108720 5 <pDAB108719‏ في الشكل 7؛أ. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين 8001م ‎(LCMS)‏ من نفس أجزاء ‎Lindl‏ الستة 0/8105748م؛ ‎«pDAB108719 pDAB108718 «pDAB108717 pDAB105818‏ ‎pDAB1087205 ٠‏ في الشكل ؟؛“ب. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية (1/6) ل ‎YFP RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 «pDAB105748‏ ‎pDAB108720 5 <pDAB108719‏ في الشكل ؛؛أ. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎(LCMS) YFP‏ من نفس أجزاء المنشاأ الستة 0088105748 ‎«pDAB108719 pDAB108718 «pDAB108717 pDAB105818 ٠‏ ‎pDAB108720 ;‏ في الشكل ؛ ؛ب. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية (6/) ل ‎Cry35 RNA‏ من أجزاء ‎Landi‏ الستة ‎pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 «pDAB105748‏ ‎pDAB108720 5 <pDAB108719‏ في الشكل 5؛أ. تم عرض نتائج التعبير الجيني النموذجية ‎٠‏ النسبية ‎(V6)‏ لبروتين ‎(ELISA) Cry35‏ من نفس أجزاء ‎Land‏ الستة ‎«pDAB105748‏ ‎«pDAB108719 pDAB108718 «pDAB108717 pDAB105818‏ ‎pDAB108720‏ في الشكل ‎٠#‏ ؛ب.
الشكل £7 يوضح نتائج التعبير الجيني النموذجية النسبية ‎(V6)‏ ل ‎PAT RNA‏ من أجزاء المنشأ
«pDAB108718 pDAB108717 pDAB105818 pDAB105748 ةتسلا‎
9ه و088108720م.
تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎Cry34 RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎ pDAB105748 ©‏ 088105818م؛ | ‎pDAB108718 | pDAB108717‏
‎pDAB108720 5 pDAB108719‏ في الشكل 7؛أ. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير
‏الجيني (6/)_لبروتين ‎Cry34‏ من نفس أجزاء_المنشأ ‎andl‏ 088105748
‎«pDAB108719 | ‏8108718م0م‎ pDAB108717 pDAB105818
‎pDAB108720‏ في الشكل ‎atv‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية.
‎٠‏ تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎AAD] RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎ pDAB105818 pDAB105748‏ 8108717م0م | ‎«pDAB108718‏ ‎pDAB108720 5 pDAB108719‏ في الشكل 8؛أ. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني (6/)_لبروتين ‎AADL‏ من نفس أجزاء _ المنشا ‎pDAB105748 andl‏ ‎ pDAB108717 pDAB105818‏ 8108718م0م | ‎«pDAB108719‏
‎pDAB108720, Vo‏ في الشكل 48 ب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني (6/) ل ‎YFP RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎ pDAB105818 pDAB105748‏ 8108717م0م | ‎«pDAB108718‏ ‎pDAB108720 5 pDAB108719‏ في الشكل 5.089 عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ لبروتين ‎YFP‏ من نفس أجزاء المنشاً الستة ‎«pDAB105818 pDAB105748‏
‎٠‏ 008108717 008108718 00/8108719 و0/8108720م في الشكل 4 ؛كب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎Cry35 RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‎ pDAB105818 pDAB105748‏ 8108717م0م | ‎«pDAB108718‏ ‏9م 5 ‎pDAB108720‏ في الشكل ‎١‏ ٠أ.‏ تم عرض تحليل إحصائي لنتائج التعبير
‏7ط
_ q ‏اج‎
088105748 ‏المنشا الستة‎ chal ‏من نفس‎ Cry35 (mgd (V6) anal «pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 ‏في الشكل .> 5ب. تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. مستويات لم‎ pDAB108720 ‏ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا كبيرا.‎
© الشكل )0 يوضح تحليل إحصائي لنتائج التعبير الجيني ‎(V6)‏ ل ‎PAT RNA‏ من أجزاء المنشأ الستة ‏ 0/8105748م 88105818م0م 08108717م 8108718م0م ‎.pDAB108720 5 (pDAB108719‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الأشكال ‎Y‏ دا *دب؛ ‎«z° Y‏ و؟دد توضح نتائج بروثين التعبير الجيني النموذجية ‎J (V10)‏ ‎«Cry34 (AAD1 (YFP‏ و0/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة ‎«pDAB105748‏
«pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818 ٠ .pDAB 1 08720 (V10) ‏توضح تحليل إحصائي لنتائج بروتين التعبير الجيني‎ 30 520 ¥ cot (for ‏الأشكال‎ ‎«pDAB105748 ‏00/34؛ و07/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة‎ (AAD1 YFP J «pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818
‎.pDAB1087205 Vo‏ تم إدراك القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. الأشكال ‎(Lot Jog‏ ؟ ‎z°‏ و؛دد توضح نتائج بروثين التعبير الجيني النموذجية ‎J (R3)‏ ‎«Cry34 (AAD1 (YFP‏ و0/35© على التوالي من أجزاء المنشأ الستة ‎«pDAB105748‏ ‎«pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818‏ ‎.pDAB 1 08720‏
‎٠‏ الأشكال ‎Joo‏ ددب؛ 50200 200 توضح تحليل إحصائي لنتائج بروتين التعبير الجيني (43) ل ‎«Cry34 (AAD1 (YFP‏ و0/35© على التوالي من أجزاء ‎Lindl‏ الستة ‎«pDAB105748‏ ‎«pDAB108719 «pDAB108718 «pDAB108717 «pDAB105818‏ ‎.pDAB108720 5‏ تم ‎oly‏ القيم الوسيطة والنتائج الإحصائية. مستويات لم ترتبط بها نفس الرسالة في الجداول تختلف اختلافا كبيرا.
_ q ‏أ‎ _
الشكل 01 (أ-ج) يوضح نتائج نموذجية من بقعة ‎Western‏ لبروتين التعبير الجيني عن ‎Cry34‏
شكل ‎Cry35 doy‏ شكل ١دبء‏ و01 شكل ‎zo)‏ من 088108718
.pDAB108720 5 080108719 ‏؛‎ 7
توضح النتائج أن الأربع محورات الوراثية كلها في أجزاء ‎Late‏ مشتقة من المعزز المنفرد تكون
© وظيفية بمستويات تعبير جيني جيد. توضح الجينات الثلاثة ‎(Cry34/Cry35/AAD])‏ في
مستويات تعبير جيني قوي يوضح تكدس 011لا ‎AW‏ الاتجاه في صورة مشابهة لمستويات التعبير
الجيني المقدمة بواسطة تكدس الجين المشتق من ‎Ubil‏ (057).
بالرغم من مناقشة عدد من السمات والتجسيمات النموذجية أعلاه؛ سوف يدرك أولئك المهرة في
الفن أنه يمكن إجراء تعديلات؛ وتبديلات؛ وإضافات معينة وتوليفات ثانوية منها. بالتالي يكون من ‎Yo‏ المقرر تفسير عناصر الحماية الملحقة وعناصر الحماية المقدمة في هذه الوثيقة ‎led‏ بعد بأنها
تتضمن كل تلك التعديلات؛ والتبديلات؛ والإضافات والتوليفات الثانوية كما لو كانت ضمن مجالها
وفحواها الحقيقي.
toy

Claims (1)

  1. ‎q 7 —‏ — عناصر الحماية ‎-١‏ عديد النيوكليوتيد تخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ يتضمن أدنى ‎pate‏ معزز أساسي ‎minimal core promoter element‏ من جين ‎Ubiquitin—1‏ من ‎Zea mays‏ أو ‎Zea‏ ‏5 وتتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 7110160106 معزز وظيفي ‎functional promoter‏ من معزز ‎promoter‏ فيروس عصوي الشكل ‎Jie‏ قصب السكر ‎Sugar Cane Bacilliform‏ ‎Mirus ©‏ "- عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎٠‏ حيث يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي ‎minimal core promoter element‏ على تتابع ‎ye‏ ‏النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ حيث تكون 7975 مطابقة لهوية تتابع رقم: ‎١‏ أو ‎٠‏ تكملته. "- عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎dus)‏ ‏يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي ‎minimal core promoter element‏ على هوية تتابع رقم: ‎١‏ أو تكملته. ‎Vo‏ ‏؛- عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية )¢ يتضمن ‎Lia‏ إكسون ‎€X0ON‏ من جين ‎Ubiquitin—1‏ وانترون من جين ‎Ubiquitin=1‏ ‎—o‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎٠‏ يتضمن ‎٠‏ أيضاً إنترون ‎intron‏ من جين كحول نازع للهيدروجين ‎.alcohol dehydrogenase gene‏ ‎-١‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎٠‏ يتضمن تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من معزز الفيروس عصوي الشكل ‎Jie‏ قصب السكر ‎Sugar Cane‏
    ‎.Bacilliform Virus promoter‏ ‎Yo‏
    -8م4- ‎—V‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية © ‎dus‏ ‏تشتمل تتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي ‎functional promoter nucleotide sequence‏ من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب ‎Sugar Cane Bacilliform Virus Sul‏ ‎promoter‏ وجين الكحول النازع للهيدروجين ‎alcohol dehydrogenase gene‏ على هوية تتابع رقم: 1 أو تكملته. ‎—A‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎٠‏ يتضمن ‎La‏ عنصر منتقى ‎element selected‏ من المجموعة التي تشتمل على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه ‎(URS)‏ عنصر ‎enhancer element (fuss‏ إكسون ‎exon‏ إنترون 1013017 موقع ‎٠‏ . بداية نسخ ‎dranscription start site‏ صندوق ‎(TATADbOX‏ عنصر ‎ela)‏ للصدمة الحرارية ‎cheat shock consensus element‏ ترجمة ‎START translation‏ و/أو تتابع نيوكليوتيد ‎cnucleotide sequence STOP‏ وتوليفات منها. 4- عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية )¢ يتضمن ‎Vo‏ أيضاً تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 7110160106 محل الاهتمام متصل بشكل عملى بأدنى عنصر معزز أساسي ‎.minimal core promoter element‏ ‎-٠‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎٠‏ حيث يكون أدنى عنصر معزز أساسي ‎core promoter element‏ 1717102 من جين ‎Zea mays‏ ‎Ubiquitin—1 ٠‏ وتتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي ‎functional promoter nucleotide‏ ©0086 من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر ‎Sugar Cane Bacilliform‏ ‎Virus promoter‏ في اتجاه تكميلي عكسي ‎reverse complimentary orientation‏ بالنسبة لبعضها البعض في عديد النيوكليوتيد ‎.polynucleotide‏ ‎-١١ ©‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية 9؛ يتضمن ‎La‏ على عنصر منتقى ‎element selected‏ من المجموعة التي تتكون من تتابع تنظيمى
    عكس الاتجاه ‎upstream regulatory sequence‏ (45+الا)؛ عنصر محسّن ‎enhancer‏ ‎<element‏ إكسون ‎exon‏ إنترون ‎cintron‏ موقع بداية نسخ ‎«transcription start site‏ صندوق ‎(TATA‏ عنصر ‎clea)‏ للصدمة الحرارية ‎cheat shock consensus element‏ تتابع نيوكليوتيد لبداية ‎START‏ و/أو وقف ‎STOP‏ الترجمة؛ وتوليفات منها. ‎lo}‏ ‎-١‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎Vv‏ حيث يشتمل عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ على إكسون ‎(exon‏ جين ‎Ubiquitin—1‏ إنترون 10100 من جين ‎«Ubiquitin—1‏ وانترون من جين كحول نازع للهيدروجين ‎.alcohol dehydrogenase gene‏ ‎ye ‎VY ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ synthetic polynucleotide ‏عديد_النيوكليوتيد التخليقي‎ -١ ‏يتضمن هوية تتابع رقم: © أو تكملته.‎ ‏وفقاً لعنصر الحماية 9؛ يتضمن‎ synthetic polynucleotide ‏عديد النيوكليوتيد التخليقي‎ -٠4 ‎Ve‏ تتابع نيوكليوتيد مشفر ‎coding nucleotide sequence‏ أولى محل الاهتمام متصل بشكل عملى بأدنى عنصر معزز أساسي ‎minimal core promoter element‏ جين ‎Zea mays‏
    ‎.Ubiquitin—1‏ ‎-١‏ عديد _النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎VE‏ ‎Yo‏ يتضمن تتابع نيوكليوتيد مشفر ‎coding nucleotide sequence‏ ثانية محل الاهتمام متصل بشكل عملى بتتابع نيوكليوتيد المعزز الوظيفي ‎functional promoter nucleotide‏ ©0086 من معزز فيروس عصوي الشكل مثل قصب السكر ‎Sugar Cane Bacilliform‏ ‎Virus promoter‏ ‎method ‏تشتمل الطريقة‎ transgenic cell Lily, ‏خلية معدلة‎ z WY method ‏طريقة‎ -١١ Yo ‏على:‎
    ا ‎-١‏ ‏التعديل الوراثي ‎transforming‏ للخلية ‎cell‏ باستخدام عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎.١‏ ‎-١١‏ طريقة ‎method‏ لإنتاج خلية معدلة وراثياً ‎ctransgenic cell‏ تشتمل الطريقة على: © التعديل الوراثي ‎transforming‏ للخلية ‎cell‏ باستخدام عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎A‏ ‎-١٠‏ الطريقة ‎method‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎VT‏ حيث تكون الخلية ‎cell‏ عبارة عن خلية نبات
    ‎.plant cell‏ 7" 4- الطريقة ‎method‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(VY‏ حيث تكون الخلية ‎cell‏ عبارة عن خلية نبات
    ‎.plant cell‏ ‎-Y‏ خلية نبات ‎plant cell‏ يتضمن عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎Yo‏ 3 ‎—Y)‏ خلية نبات ‎plant cell‏ يتضمن عديد النيوكليوتيد وفقاً لعنصر الحماية ‎A‏ ‎YY‏ عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic polynucleotid‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎of‏ حيث ‎Yo‏ يكون الإكسون ‎exon‏ جين ‎Ubiquitin—1‏ من ‎Zea luxurians J Zea mays‏ ‎YY‏ جزء منشأ حمض نووي ‎nucleic acid construct‏ للتعبير الجيني ‎expressing‏ عن جينات متعددة خلايا ‎multiple genes‏ و/أو أنسجة ‎tissues‏ نبات؛ يتضمن؛ 0 معزز ثنائي الاتجاه ‎promoter‏ ا51-013601008؛ حيث يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه ‎bi-directional promoter Yo‏ على تتابع نيوكليوتيد معزز وظيفي ‎functional promoter‏
    -١١١- ‏قصب السكر‎ Jie ‏فيروس عصوي الشكل‎ promoter ‏من معزز‎ nucleotide sequence ‏و‎ ¢(SCBV) Sugar Cane Bacilliform Virus ‏عن الجين على النهايات المتقابلة‎ expression cassettes ‏(ب) مجموعتين تعبير جيني‎ tbi-directional promoter ‏للمعزز ثنائي الاتجاه‎ opposite ends gene expression cassettes ‏حيث تشتمل واحدة من مجموعات التعبير الجيني عن الجين‎ © translation 510/5400 ‏على اثنين أو أكثر من الجينات متصلة عن طريق محول ترجمة‎ ‏حيث‎ (YY ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ nucleic acid construct ‏؛- جزء منشأ الحمض النووي‎ ‏واحد على‎ enhancer ‏على معزز‎ bi-directional 010000181 ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه‎ ‏الأقل.‎ ٠ ‏حيث‎ (VE ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ nucleic acid construct ‏الحمض النووي‎ Lae ‏؟- جزء‎ © binary vector ‏ثنائي‎ Jit ‏على‎ nucleic acid construct ‏يشتمل جزء منشأ الحمض النووي‎ .Agrobacterium-mediated transformation ‏للتحول الوراثي الناتج عن الأجرعية‎ Vo ‏حيث‎ (YY ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ nucleic acid construct ‏جزء منشأ الحمض النووي‎ -7 element ‏على عنصر منتقى‎ bi-directional promoter ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه‎ upstream regulatory ‏المجموعة التي تشتمل على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه‎ oe selected dntron ‏إنترون‎ «exon ‏إكسون‎ «enhancerelement (fas ‏عنصر‎ (URS) sequence ‏عنصر إجماعى للصدمة الحرارية‎ (TATA ‏صندوق‎ dranscription start site ‏موقع بداية نسخ‎ Yo ‏وتوليفات منها.‎ cheat shock consensus element ‏حيث‎ (YY ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ nucleic acid construct ‏الحمض النووي‎ Laie ‏جزء‎ -7١ ‏على أدنى عنصر معزز أساسي‎ bi-directional promoter ‏يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه‎ Zea J Zea mays ‏من‎ Ubiquitin—-1 ‏من جين‎ minimal core promoter element Yo Juxurians
    ‎٠ \ —‏ \ — ‎—YA‏ جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يشتمل أدنى عنصر معزز أساسي ‎minimal core promoter element‏ على تتابع ‎ye‏ ‏النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ 7975 مطابقة لهوية تتابع رقم: ‎١‏ أو تكملته. ‎lo}‏ ‏4- جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يشتمل المعزز ‎SW‏ الاتجاه ‎bi-directional promoter‏ على إكسون ‎exon‏ من .جين ‎Ubiquitin—1‏ و/أو إنترون ‎intron‏ من جين ‎Ubiquitin‏ ‎=F 0 ٠‏ جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث ‎Jai‏ المعزز ثنائي الاتجاه ‎bi-directional promoter‏ على تتابع تنظيمى عكس الاتجاه من جين ‎Ubiquitin‏ أو معزز الفيروس عصوي الشكل مثل قصب ‎Sugar Cane Kull‏
    ‎.(SCBV) Bacilliform Virus‏ ‎-١ ١‏ جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يشتمل المعزز ثنائي الاتجاه ‎Je bi-directional promoter‏ عديد نيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ لهوية تتابع رقم: © أو تكملته. ‎—¥Y‏ جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث ‎Wipes ‏عديد‎ Je bi-directional promoter ‏الاتجاه‎ AW ‏يشتمل المعزز‎ Yo ‏لهوية تتابع رقم: 6 أو تكملته.‎ polynucleotide ‏حيث‎ (YY ‏وفقاً لعنصر الحماية‎ nucleic acid construct ‏جزء منشأ الحمض النووي‎ - ‏عن الجين على اثنين أو أكثر‎ expression cassettes ‏تشتمل كلا مجموعتي التعبير الجيني‎ ‎translation switch ‏متصلة عن طريق محول ترجمة‎ genes ‏من الجينات‎ YO
    ‎٠ ".-‏ \ — ؛- جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎TY‏ حيث يتم اختيار محول الترجمة ‎translation switch‏ من المجموعة التي تشتمل على موقع دخول ريبوزوم داخلي 5116 ‎¢(IRES) internal ribosome entry‏ موقع تضفير بديل ‎alternative splicing‏ ‎site‏ تتابع عديد النيوكليوتيد يشفر ‎polynucleotide sequence coding‏ ببتيد ‎2A 2A‏ ‎peptide ©‏ تتابع عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ تشفر 000109 ببتيد مشابه ل ‎(2A-like peptide 2A‏ تتابع عديد النيوكليوتيد ‎coding iii polynucleotide sequence‏ إنتين ‎cintein‏ تتابع عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ تشفر ‎coding‏ موقع شطر بروتياز ‎cprotease cleavage site‏ وتوليفات منها. ‎٠‏ #©؟- جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(VY‏ حيث لا يشتمل جين عكس الاتجاه بمحول الترجمة ‎translational switch‏ على كودون توقف ‎day‏
    ‎.franslation stop codon‏ 1- جزء ‎Lite‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث ‎Ka Vo‏ جزء منشأً الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ من التعبير الجيني ‎expression‏ ‏عن أربع جينات على الأقل. ‎—¥V‏ جزء ‎Laie‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يمكّن جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ من التعبير الجيني ‎expression‏ ‎Yo‏ عن جينات 96065 بين ‎ADE‏ وعشرون. ‎TA‏ — جزء ‎Laie‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يمكّن جزء منشاً الحمض النووي من التعبير الجيني عن جينات بين أربعة وثمانية. ‎YO‏ 4- جزء منشأ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث يكون التعبير ‎expression all‏ عن جينات من المعزز ‎A‏ الاتجاه ‎bi-directional‏
    ‎٠ —‏ \ — ‎lel promoter‏ أربع أضعاف على الأقل مقارنة بمعزز موحد الاتجاه ‎uni—directional‏
    ‎.promoter‏ ‏6 - جزء ‎Lite‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎(YY‏ حيث © يكون التعبير الجيني ‎expression‏ عن جينات من المعزز ‎A‏ الاتجاه ‎bi-directional‏ ‎promoter‏ من ثلاثة إلى عشرة أضعاف ‎Jef‏ مقارنةً بمعزز موحد الاتجاه ‎uni-directional‏
    ‎.promoter‏ ‎١‏ - طريقة ‎method‏ لتوليد ‎generating‏ نبات معدّل وراثياً ‎transgenic plant‏ يتضمن ‎٠‏ التعديل الوراثي لخلية نبات ‎plant cell‏ باستخدام جزءٍ ‎lite‏ الحمض النووي ‎nucleic acid‏ ‎construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎JY‏ ‏7 - طريقة ‎method‏ لتوليد خلية معدلة ‎dy,‏ يتضمن التعديل الوراثي للخلية ‎transgenic cell‏ باستخدام جزء ‎lite‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎JY‏ ‎Vo‏ ‏؟ - خلية نبات ‎plant cell‏ يتضمن جزء ‎Lie‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎JY‏ ‏؛- خلية النبات ‎plant cell‏ وفقاً لعنصر الحماية 47؛ حيث يكون جزء ‎(ie‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct ٠‏ محل ‎ays‏ بشكل مستقر إلى خلية النبات ‎plant cell‏ 5- طريقة ‎method‏ للتعبير الجيني ‎expressing‏ عن جينات متعددة ‎multiple LIA‏ ‎if 5 genes‏ أنسجة ‎tissues‏ نبات؛ يتضمن إدخال في خلايا ‎cells‏ و/أو أنسجة ‎tissues‏ ‏النبات جزء منشأً الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎JY‏ ‎Yo‏
    مج \ _ 7 - الطريقة 0610700 وفقاً لعنصر الحماية £0( حيث تكون ‎WA‏ 5اا©© و/أو أنسجة ‎tissues‏ ‏النبات محولة ‎Lal)‏ بشكل مستقر باستخدام جزء ‎lite‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎YY‏ ‏© 497؛- ‎Jit‏ ثنائي ‎binary vector‏ للتحول الوراثي الناتج عن الأجرعية ‎Agrobacterium—‏ ‎mediated transformation‏ يتضمن جزء ‎lie‏ الحمض النووي ‎nucleic acid construct‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎YY‏ ‏8 - ناقل ‎binary vector Ab‏ للتحول الوراثي الناتج عن الأجرعية ‎Agrobacterium—‏ ‎mediated transformation | ٠‏ يتضمن عديد النيوكليوتيد التخليقي ‎synthetic‏ ‎polynucleotide‏ وفقاً لعنصر الحماية ‎.١‏
    ‎٠ h —‏ \ _ ‎TATAbox 5‏ عناصر نوافق ا صدمة الحرارة ‎-t‏ ‏ ‏إنترون اكسون ‎amUbil‏ صر ‎GH‏ ‏شكل ‎١‏ ‎minbibiPl‏
    _ \ ٠ 7 _ 111 ‏ال‎ ‎CE NE ‏تل‎ ‎LA Be
    ‎٠ A —‏ \ _ ‎ZmPers 37 UTR Flip 3 UTR‏ الل متوالية توجيه مصب / متوالية توجيه مصب / ‎GUS \ / vip \‏ / ‎IK ECO‏ شكل ؟ ب لوا (كسون ‎zmUbil‏ ‏,ْ ين ‎gp zmUbil‏ معنن انطتاصه إنترون [01نا7_ى > ا 0 الح اانقرون ‎mUbil‏ ‏توقف إطار أ ‎a RS SEIT‏ 20001 توافق ذرة ل الوا د توقف إطار ؟ ول اا 88 ‎oF‏ تو افق دزةٌ ‎UR‏ ناو( ‎١‏ ل ا اللي ‎١‏ لد ى| "0 ‎wm‏ 20053 يسا | الي اص 101 ‎RY ١ ChiR‏ و ‎AmpR‏ ‎١ kanR‏ شكل ¢ ‎TIN‏
    _ \ ٠ q — ADH]1 ‏إكسون‎ ‎MinUbiPt + ADHI ‏إنترون‎ ‏ب‎ 71 \ J 7 on | | 1 zmUbil ‏انرون‎ zmUbil ‏أكسون‎ \ SCBV Jas 7 | ADH ‏إكسون‎ ‎1 ‏ال ا ا‎ § 1 3 ' 1 ‏...جاه جه هه جاجهححجهأ77[‎ o Ki 211085 3 UR atl? iia \ RE i on TE - ‏توافق ذرة‎ a 2 "١ NE 1 ADHI ‏إكسون‎ AY ‏ية‎ geniR 0 NN E ADHI ‏و ل معزز‎ EN 1 a RE ADH] ‏اكسون‎ 0 pDABL05806 #8 SCBY ‏معزز‎ 7 ١ [vam MolniPt JR aa AN a. zmUbil ‏إكسون‎ "eo EE ‏مص‎ ‎zmUbil ‏إنترون‎ | ) Er Soman, : i) Eh ‏توقف إطار ؟‎ 77 BY ath ‏توافق ذرة‎ H Zmiip 3 Um vip ١ ‏شكل‎ ‎toy
    =« \ \ — معزز ‎SCBV‏ ‏| نون إكسون ‎ADHI‏ الكسون ‎zmUbil‏ ‎mUbiloo #1 ADH Sm‏ ‎Toll ADHI Oss!‏ توافق ذرة ‎١|‏ اٍْ ‎١000|‏ لتوافق ‎sp‏ ‎aus ZiPers UTR‏ 1 1 | } | 1 إ أ ‎yp‏ 01# هوت ‎of‏ 1 ! حا ةذ | لكي أ ‎٠ MRE SE‏ انس لب سل ‎I" JE‏ شكل أ ‎pals‏ ‎Winthiap Ge SCBVE‏ ترون 1 4 ل إنترون ‎EE‏ ‏سمت لس ا ‎A‏ ‏جين ‎Yoo Kom ee Ea)‏ تبديل الترجمة جين ‎IY‏ جين ‎mmm)‏ جين ‎٠‏ ‏جين ‎YY‏ جين ‎ee)‏ جين ‎IV‏ جين ؛ جين ؟ ل جين ‎lf onl) CoV‏ جين ° تل( أ + ‎Es oneRoRoReRs! I‏ ااا جا اا ‎Lo‏ ‏جين الاجين الاجين اندز مدر = ‎RESTS CRUE (RUIN‏ > شكل ‎A‏ ‎LAN‏
    ARR ZPess 3 UT i Gus ‏أ‎ ‏إ توافق رده‎ | 1 ‏رهبا مع | ١اكسون لتزنلد‎ woud \ 5 ‏المي اي “اانترون اتزمة‎ 2 1 ‏ا ا اذا الى 3“ إكسون‎ 50857 me ‏اللي‎ 8 ٍ MRR Na ‏يي ل‎ ZED] ‏اكسون‎ ‎zmUbil ‏اكسون‎ oF Wo 0 zmUbil ‏معزز‎ ‎+R 7 ‏ند‎ A SIE 8 faa 1 ETS +i zmbibil ‏القروت‎ PUSIRAR A | ey ZOU 9H ‏_توقف إظار ؟‎ >< { 9. EAE ‏قف اط‎ FEET Est a Fan ‏توافق ذرة‎ tA a New ‏توافق‎ ‏طق نا اح‎ 2m oR SN ps PUR 0 "a . > ‏إ: 1 70 ا‎ T-DNA = ‏ل 0 ب اي لوا إطار‎ Homwlogy Region! v1 Overdrive’ Pp IE VL T-DNA | ‏إطار‎ ‏»جم‎ 7 T-DNA ‏إطار‎ ‎1 ht Isa] FA ' T-DNA ١ ‏إطار‎ ‎1 aft Er T-DNA ‏إطار ب‎ Overdrive) speck NL zm Ubi ‏إكسون‎ ‎Tl FT |e oo. 2 ‏معزز إزرانادوج_ الثم‎ gi ‏الث‎ Ubil ‏إنترون‎ ‎B Flip RT ‏توقف إطار‎ on A. ‏توافق ب‎ WA ‏ا‎ PE - ‏تا 05م‎ 8 8 Hoe 5 7 21053 UR fe yaks a : w ‏ا‎ ‏الكت‎ EI ea AE ‏ب نات‎ 35 : EE Ao ) ET A rmuhil ‏إكسون‎ ‎T-DNA ‏إطار ا‎ "oe 7” ‏اله‎ zmUbil ‏معزز‎ ‎T-DNA 1 ‏إنترون [زمانادوع* 1 487 إطار‎ T-DNA ‏إطار ا‎ 1 AY ‏توقف إطار‎ ‏سلا‎ um 4 ‏تو افق ذرة‎ aad 1 oN q toy
    -١١١- َ ‏م » هم ب‎ ١ : ‏هوية متوالية رقم‎ ‏لت نافتنا انا الاماطاتاخضتاتات‎ TCCUU FCC ACTOT ‏نل خمفف( فال اكخاااطت ان تن لفان‎ COTORIGHAGCGGUAGACGTCAGCCGOC AUG ‏بسع اوناخ الك ] تلن نات ااه‎ CAGCTACGOGGGATICCTTTCCCACOGC 121 106-01102111 ‏د الغفه اهمد ونا‎ ACACCCCCTCCACACCCTCT £ 8 ١١٠١ ‏شكل‎ ‏اام ام‎ ‏هوية متوالية رقم : ؟‎ 20223533013 055022551301 133225231331525 205033301 101001510021103 135322162353013 2 1333101-33 221313123313210 igecaicaigiaiatgentoaginanacecaratraacatgataciaicoiagatogatatitocatecatcfagaoicgiaactalgan gat glial gar aCacacat acaghiccaasatianianaiacaceaggiagtiigaaacaptatictactocalcin Rac ani SARC ZRECROCORACOACACCROAICAICACRROTAAIC ERacazaRlpeaCiciptatatzcatagiasaacocpralcaacat glatacc rico tagato gatasticeaicoatcateicaaticgtasctat gaatatgtatg 2CBCACRCAIACESAICCaRAAIRAAAAICCACCA IR RI EAR AC ARAANICIACICC AICI A EARC ZAC AE CCC ARCCAGACCACATCAICACRROCAR 210581192001233 IA ZAC CC LACRARCADSIBCACE ECAIAIAIEAARIARAZSARGAE EEC AARTCRRALCOIA gira ‏0ع‎ ‎alcsigasatcgaicol Ging gE ant BECIARR 0-8215 SAC AARC ACTRRC AAS HAR BAICAGRAC Bt RCAC ACA CE catceglgtacgracgoingcagrac ggatelaacaraaacacggnlclsaracaRaaigaaca Sas ‏ممما مجع‎ gEgreciageoa grat ggace gg agcgeogRicingngadggisgagagegeprnregesaonganr gagregr stim CT TGAAGCGHGAGGTGCUGACGGETG GATT TLGGGGUAGATCTGGTTGTHTCTL TO TGOGUTCOGAACAACACGAGHTTLGGGGAGHT ACTAAGAGGFIGTCEAGGOOGOTO TU TATT TAT TACGGEGHGCOAGTAAGGUEAA AGCGAAGGAG COLTGOOAAAGOAATCCCCOGTAGUTGCCGETOCUCTGAGAGGAGTAGUAGOCIGCCTUCOTG CLOGOTCACOTCTGLCGCTCCGCCACGUAATTTOTGGATHECGACAGCGGAGCAAGTCCAACGAOT GUAGLEGAATTOCTOGAGAGGGG TCCAG 3 ‏نت‎ ١ A + toy
    -١١-
    هوية متوالية رقم : ؟ ‎CTHCAGAAGTAACACCAAACAACAGGGTOAGCATCGACAAAA GAA ACAGTALTAAGCAAATAA‏ ‎ATAGCGTATGAAGGCAGGGCTASAAAAATCCACATATAGCTOGUTGCATATGCCATCATCCAALT‏ ‎ATATCAAGATCGAAATAATTATAAAACATACTTGTTTATTATAATAGATAGGTACTCAAGGTTAG‏ ‎AGCATATGAATAGATGCTGCATATOCCATCATCTATATGOATCAGTASAAACCCACATCAACATET‏ ‎ATACUTATOCTAGATOGATATTICCATCCATCT TAA AC TUGTAACTATOAAGATGTATGATC ACAC‏ ‎ACATACAGTTOCCAAAATTAATAAATACACCAGGTAGTTITOAAACAQTATTCTACTCCGATCTAGA‏ ‎ACGAATUAACGACTGUCCAACCACACCACATUATUACAACCAAGUGAAUAAAAAGCATOTOTGY‏ ‎ATATGUATCAGTAAAACCCGUATCAACATGTATACCTATCUTAGATCGATATTICCATCCATCAT‏ ‎CTY AATTCOTAACTATGAATATOTATGOQCACACACATACAGATCCAAAATTAATAAATCUACCA‏ ‎GUTAGTTTGAAACAGAATICTACTCCGATOTAGAACGACTGUCCAACCAGACCALCATCATCALA‏ ‎ACCAAGATAAAAAASACGUATGAAAAGATGACCCGATAAACAAGTGCACGGUATATATTIOAAAT‏ ‎BAAGGAAAAGGGCAAACCAAACCETATGCAADGAAACAAAAAAAATCATGAAATCGATCCOGT‏ ‎CTGOGGAACGRUTAGAGUCATOCCAGGATTCCOCAAAGAGAAACACTOGUAAGTTAGC AA TCAD‏ ‎AACGTOTUTOACGTACAGGTCOCATCOGTGTACGAACOCTAGCAGCACGGATOTAACACAAATA‏ ‎CHGATOTAACACAAATATGAACAGAAGTAGAACTACCGOGECCTAACCATGLATGGRACUGGAAT‏ ‎GCOGATCTAGAGAAGG TAGAGAGGEGGGGGHAGNGOAGGATUGAGCOGOLTACCTTGAAGCGEA‏ ‎GOTGOLGACGGOTGGATTTGGGGGAGATCTGRTTOTGTGTGTGTGOGCTOL GAA AACALGAGH‏ ‎TTGGLEGALDGTACCAAGAGGGTOTOHAGHOOGGTGTCTATTTATTACGGCGGGUGAGGAAGIOAA‏ ‎AGCOGAAGGAGCGOTGGGAAAGGAATCCCCOGTAGL TGCCGGTOCCGTGAGAGGAGGAGGAGGT‏ ‎COCCTGCCGTOECOGETCACGTCTGCCGCTLCGUCACHUAATTICTGOATGCCGACAGCGGAGCA‏ ‎AGTCOAACGHTGGAGCOGAACTUTCGAGAGGGRTCOAGUCGCGGAGTETGLAGCGTGACCEGGT‏ ‎COTGULCCTOCTCTAGAGATAATGAGCATTGCATOTCTAAGTTATAAAAAATTACCACATATTTTIYT‏ ‎THOTCACACTTGITTOAAGTOCAGTTTATCTATCTTTATACATATATTTAAACTTTACTCTACGAAT‏ ‎AATATAATCTATAGTACTACAATAATATCAGTGTITTAGAGAATCATATAAATGAACAGTTAGAL‏ ‎ATGGTCTAAAGGACAATTOAGTATTTTOACAACAGGACTCTACAGTITTATUTTITTAGTGIGUAT‏ ‎VOC AAATAGCTTCACCTATATAATACTTCATCCATTTTATTAGTACATCE‏ 010113011111111 ‎ATTTAGGO TT TAGGGT TAATGGT TTT TATAGACTAATTITITTAGTACATOCTATTTTATICTATTIT‏ ‎AGCCUTCTAAATTAAGAAAATUTAAAACTCTATTITAGTTTTTITATTTAATAGTTTAGATATAAAAT‏ ‎AGAATAAAATAAACTGACTAAAAAT TAASCAAATACCCTTTAAGAAN TT TAA AAA AACTAAGGA‏ ‎AACATTTITICTTGYTTCGAGTAGATAATGCCAGUUTQTTAAACGCOGTUGALGAGTCTAALGGALC‏ ‎ACCAACCAGCGAACCAGCAGUGTCGCGTUOGGOCAAGCGAAGCAGACGGCACGGUATOTUTGTIC‏ ‎GUTQCCTCIGGACCCCTCTCGAGAGTTCCGETUCCACCGTTGGACTIGCTCCGC TO TC GGUATCCA‏ ‎GAAATTGCGTGOUGGAGLGGEAGACOTGAGCCGGC ACO AGGOGOOCTOCTCCYCCTCTOALG‏ ‎GCACCOOT AGU TACGGLGGATICCTTTOCCACCGUTOCTTCGCT TIC CCT TOOCTUGCOCGEUG TAA‏ ‎TAAATAGACACCCCOTCOACALCCTC TT TCCCTAACCTOGTGTITGTIC‏
    1١٠١ ‏شكل‎
    -١١؟-‎ GGAGCGCACACACATACAACCAGATCTCL ‏ابفمعصون تمع مذ لالخهفخب ان‎ 100061 ACGCCGUTCGTLCTCCCCCCCCCCCCCCCICTCTACCTTCICTAGATOGGUGTTOCGGTCCATGCA TOOT TAGOGCCUGU TAG TIC TACT PCIE TI CATGT TIO TOT TAGATCCGTGTTTOTGI TAGATCLG TOUTGCTAGCGTIVOTACACGGATOUGACCTOTACOTCAGACACGTTUCTGATTOCTAACTTGUCA GTGTTTCTCTTIGGGGAATCOTGGGATGGCTCTAGLCGTTCCGUAGACGGGATCGATTTCATGATT TTTITTGITTCGTITOCATAGGG TI TGG IT TGUCOCTITTICCTI TAT TIC AATATATOCCGTGUALC TG TTTGTCOGGTCATC TTT ‏اتا ها‎ TTI TTTGOTCTTGOTIGTGATGATOTGGTCTGGTTGGGCGRRTT GTTCTAGATCGOAGTAGAATTCIGTTTCAAACTACCTGUTGOATT TAT TAATTTTGOATCTGTATG TGTGTGCCATACATATTICATAGTTACGAATTGAAGATGATGCGATGOAAANTATCGATCTAGGATAL GTATACATOTTGATGEGROTTTTALTGATGUATATACAGAGATOCTITTTGTICGCTTGOTIGTGA TGATGITGOTGIGGTTGGGCRGTUGTTCATIUGTICTAGATUGUGAGTAGAATACTGITICAAALCTA COTGGTGTATTITATTAATTTTGGAACTGTATOTGTGTGTCATACATUTTCATAGTTACGAGTTTAX GATOEOATQRAAATATOOATCTAGGATAGOTATACATGTTOATGTGGGT TITACTOGATGCATATAC ATOATGGUATATGCAGUATCTATTCATATGUTCTAACCTTGAGTACCTATCTATTATAATAAACA AGTATGTTTTATAATTATTTCGATCT TGATATACTTGOGATGATGOCATATOCAGCAGCTATATGTG GATTTTTITAGCCOCTGCCT TCA TACGUETATTYATTTIGUTTGOTACTGITTCYTTTGTCGATGUTCAC CCTOTIOTTTGGTGTITACTICTIOUAG de 4) ‏شكل‎ ‎toy
    اج \ \ _
    2 : ‏هوية متوالية رقم‎ AGCACTTAAAGATCTITAGAAGAAAGCAAAGCATTTATTAATACATAACAATOGTCCAGHTAGEC CAGCTGAATTACAATACGCAACTOUTCATAATAATTCAACAAACCCAAGTAGTACACSACATCC AGAAGCAXATAAAGCCCATACGTACCAAADBCCTACATAAGCAGUAACACTCACTGCC AG TGLCG GTGGGTETTTAAAGCACACGEGLUTTGACCACGUGATCCACCTTEAAACAAACTTOOTAAAATTA AAGCANACCAGAAGCACATVACACGUCAACGEAACGUTTUTGATUGEGEGECCAAGGCLEGG ICG GUCAGAACGTACGACGOACACGCACACGCTOUGACTGAGUTCTAGGTOATTAAGCTAACTACTC AAAGOGTAGGTCTIGCGACAGTCAACAGUTCTGACAGTTICTTICAAGGACATGITGICICTIGTGG TOTGTCACATOCTTIGGAAAGTTTCACATGGTAAGACATOTGATGATALCTOUTGGAACATGAALTGSG ACCTCOADCAATGOGAGTGTICATCTOOOTOTGGTCAGCCACTATGAAGTCGCOTTIGUTGUC AD TAATCTCATGACAGATCTTGAAGGUE TGACTTGAGACCGIGGTTGOUTTOOGTCACCCCAGATG TAG AGGCAGTOOGRAGTOAAGTTGAALTCCAAGTTCTTICCCAACACATOACCATCTTTOCTTGAAGCO TTGACCATTGAGT TTA CCTATIGTAGATAGACCCATICTU AAAGGTGACTICAGCCCTAGTICTT GAAGTTGCCATCTCOTTCAAAGGTGATTOGTGUGUICT TGC ACATAGCCATOTGORCATACAGGALT TOTAGAAGTCCTTCAALTUTOGOACCATACTTGHOAAA GUACTGTOOTCCATAGOTGAGAGTGGTG ACAAGTOTGUIECAAGGCACAGGAACATCACCAGTTOTGCAGATOAALTGTIGEATCAACCYTICC CACTOAGOCATCTCCGTAGCOCTTITCCCALGTATOO TAAAGG TETOGUCATCAACATTICCUTTICCA TOTCCACAACGTAAGGAATCTTCCCATGAAACGAGAAGTGCTCCAGATGICATGGTGTCGTGTGN ATCCGGTACACACGTGCCTAGHACDOOTTCAACTAACTACTGOAGAAGTAACACCAAACAACAG GOTGAGCATCGACAAAAGAAATAGTACCAAGCAAATAAATAGCGT ATGAAGOGCAGGGUTAAAA AAATCCACATATAGCTGCTGUATATOUCCATCATCCAAGT ATATCAAGATCGAAATAATTATAAAA CATACTTGTI TIT TATTATAATAGATAGGTACTUAAGHTTAGAGCATATGAATAGATGLTGCATATGE CATCATGTATATGCATCAGTAAAACCCACATCAACATOTATACCTATCCTAGATCGATATTTICCA TCCATCTTAAACTCOTAACTATGAAGATGTATGACACACACATACAGTTICCAAAATTAATAAATA CACCAGGTAGTTTGAAACAGTATICTACTCCGATCTAGAACGAATRAACOHACOGOCCAACC ACA COACATCATCACAACC AAGOGAACAAAAAGLATCTICTGTATATGCATCAGTAAAALCCGCATCOA ACATGTATACCTATCCTAGATCGATATTITCCATCCATCATCTTICAATICGTAACTATGAATATGTA TGGUACACACATACAGATICAAAATTAATAAATCC ACC AGG TAGTITGAAACAGAATICTACTCE GATCTAGAACGACOGCCCAACCAGACCACATCATCACAACCAAGACAAAAAAAAGCATIGAAAA GATGACCCGACAAACAAGTGCACGGLATATATTG AAA TAMAS AAA AGGGUAAACTAAALCCT ATGCAACGAAALCAAAAAAAATCATGAAATCGATCCOGTUTGUGGAACGGCTAGAGUCATELCAG GATTCUCCAAAGAGAAATALCTGGUAAGTTAGCAATCAGAAUGTGIUTGACGTACAGGTCGCATL CHTOTACGAAUGE TAGCAGCEACGGATCTAACATAAACATGGATCTAAT ACAXACATGAACAGAA GTAGAATTACCGEUGUUCTAACCATGUATGHACCGGAATOOCGATUTAGAGAACOTAGAGAGE, GGGHGOGOGGOGAGOACGAGTOGUGTACCTTIGA AGUGHAGHGTGLCGALGGOGTGUGATTIGEHHGGA GATCTGGTIOTGTOTIGTGTOUGUTCCGAACAATACGAGHTTOLOGAGGTATCAAGAGGLG TET AGGGGGTOTCTATITATTACGUGCGGGCGAGGAAGGGAAAGUGAAGGAGCGOTGGGAAAGGAAT CCCOCGTAGCTGCCGUTOLOGTGAGAGGAGGAGGAGDCCGECTOCCGTACCOGUTICACQTOTGC COUTCCGCCACGCAATTTICTGGATGCOGACAGCGGAGCAAGTCCAALGGTGGAGUGGAACTCTT GAGAGHGGTCCAGUEGCOEAGTGTGUAGCGTGACCUGETICGTOCUCCTOCTCTAGAGATAATGAG CATTOOATOGTCTAAGTTATAAAAAATTACCA CATATTITTITIGIC ACACTIGTTTGAAGTGLCAG vy ‏شكل‎ ‎TITATC TATC ‏ا‎ TATACATATATTTAAADTITACTCTACGAATAATATAATCTATAGTACTACAAT AATATCAGTGTTTTAGAGAATCATATAXATGAACAGTTAGACATGUGTCTAAAGGACAATTGAGT ATT GACAAC AGA T TAC AGT IT TA TCT TTT TAGTG TGCATGTGTICTCCTTTITITITIGU AAA TAGUTTCACCTATATAATACTTICATOCATTITIATTAGTACATCCATTTAGGOGTTTAGGGTTAATGS TTT TATAGAC TAATT TTT IT AGTACATC TAT TT TAT TO TATTTTAGCCTCTAAATTAAGAAAACTA
    -١١1- AAACTCTATTTTAGTITTITIATTTAATAGTTTAGATATAAAATAGAATAAAATAAXGTGACTAA AAATTAAACAAATACCCTTTAAGAAATTAAAAAASATUTAAGGAAACATTITICTTOTTTICGAGTAG ATAATOCCAGCCTOTTAAACGUCGTCOACGAGTCTAACGOACACCAACCAGUGAACCAGLARCS TCOCGTCGGGCCAAGCGAAGCAGACGGUACGOCATCTCTGTCGCTGOC TC IGGACCCCTCTEGAG AGTICCGCTCCACCGTTGOACTTIGCTCCOCTHTCGGCATOCAGAAATTGOGTGGCGGAGCGGCAG ACGTGAGCOGGEACGGCAGGCGGOCTCC TOC TOO TC TCACGGC ACT GGT AGETACGGGGGATIC ‏ناا ]انا الات الح كاتا لت‎ TCG UUGECOTAATAAATAGACACCCLCCTCCAC ACC CTCTTTCCCCAACCTOGTOTIOTTCGOAGCGCACACACACACAATCAGATCTCCCCLAAATCC AL CUGTCGOGOACCTCOROTTCAAGGT AGC COU TCETCOCTOCCCCCCCCOCOUCCTOTCTACCTICTE TAGATCGGOGTTCCGGTCC ATGUA TOG TI TAGGGU CCGG TAGT IC TACTIC TGTTICATGTTIGTGTY AGATCCOGTOTTTGTGT TAGATCOGTGETGOTAGCGT TOGTACACGGATGUGACCTGTACG TC AGA CACGTTOTGAT TGC TAACT TOL CAGTGY TIC TOTTI TOOGGOAATCCTOUCATO GO TC TAGUCGT ICC OCAGACGOOGATCGATTTCATGAT FT TT TT TGT TT CGT TOC ATAGGGTTTGGTTTGUECCTITICCTTY ATTIC AATATATGUCGTOCACTTIGT TIGTCGGGTCATU TTT TCATGCTITITITIGICTTGGTIGTIG ATGATGTGGTCTGGTTGGGOGGTCG TTC TAGATCGGAG TAGAATTCTGTTICAAACTACCTGGTG GATT TAT TAAT TT TGOATOTOTATGTGTGTOCCATACATATICATAGTTAUGAATTGAAGATGATG GATOOAAATATCGATCTAGGATAGGTATACATOTTGATGUCGGGTTTTACTOGATGC ATATACAGAG ATGOTTITTIGTICGCTITGGITOTGATGATOTGETGTGOTTIGGGCGGTIOGTTCATTICGTTICTAGATC GGAGTAGAATACTGTTTCAAACTACCTGOTGTATITATTAATTITGGAACTOTATGTIGTGTOTCAT ACATCTTCATAGTTACGAGTTITAAGATOGATORAAATATCOGATCTAGGATAQOTATACATGTTOA TOTGOGTTTTACTGATGCATATACATGATGGUATATGCAGCATCTATICATATGCTCTAACCTTGA GTACCTATCTATTATAATAAACAAGTATGTTTTATAATTATITCOATCTTGATATACTIGGATGAT GGA TATGOAGCAGCTATATGTGOATT TTT TTAGCCC TOO TTCATACGCTATITATTTGOTTGGT ACTGITTCTTTTGICGATGE TC ACCC ‏ات‎ IGT TTGGTO TTACTTOTGCAGGTACAGTAGTTAGTTG AGGTACAGUOGCCGRAGGOUACCATOGTCCGTCCTGTAGAAACCCCAACCCOGTGAAATCAAAAA ACTCOGACGHGCUTGTGOGO ATTCAGTCTOGATCGLEGAAA AU TOTGGAATTOATCAGCGTTIGGTGG QAAAGOGEGTTACAAGAAAGCCOOGUAATTGCTGTGOCAGGCAGTT TTAACGATCAGTTOGECG ATGCAGATATTCGTAATTATGCOGGOUAACUGTCTGOTATCAGUGCGAAGTCTTTATACCGANAGGT TGGGCAGGUCAGUGTATCETOUIGUGTTICGATGEGGTCACTCATTACGOCAAAGTOTGGGTC AA TAATCAGGAAGTHATGGAGUATCAGGGUOGGUTATACGUCATTITGAAGUCGATOTCACGCOG TAT GITATTGCCGOGGAAAAGTGTACGTATCACCGTTI TG TGTGAACAACGAACTGAACTGGC AGACTAT CLCGOCGGGAATGGTIGATTADCGACGAAAACGGCAAGAAAAAGCAGTCTTACTICCATCGATTIC TTTAACTATGOCGGAATCUATCLGCAGCGTAATGCTCTACACC ACGUCGAACACCTGOOTGGACGA TATCACCOTGGTGACGCATGIUGCGCAAGATTOTAALCACGOGIC IGT TGACTO GU AGL TGGTHG CLAATGGTGATOTCAGUGTTGAACTOOOTGAT GC GGATCAACAGETGGT TGCAACTGGACAAGH CACTAGCGHGGACTTTGUAAGTGOTGAAT
    شكل ‎VY‏ ب ‎TAR!‏
    -١- ‏ا مماهفدذة اومااطلمعمدا“ووانل لتأنخ تان‎ TATC TCTATGAACTOTGUGTCACAGLCAAAAGCCAGA ‏ممم اوعدو عقب مضناقو ل ماوت ووو )اذ الفمافما 1 مذي يل‎ COCTCATTAACCACAAACCGTTCTACTITACTGOUTTTGG ‏مداو ا فواهذى خا ون‎ 0 GCAAAGOATTCOATAACGTGUTGATOUTGCACGACCACGUATTAATGOACTGGATTGOOGCCAA CTCCTACCGTACCTCQUATTACCUTTACGUTGAAGAGATCUICGACTOLGGUAGATGAACATGGCA TCGTOGTGATTGATGAAACTGC TGC TOTCGGUTTTAACCTCTCTTTAGGCATTGOGT TTC GAAGC GG GUAACAAGOCGAAAGAACTOTACAGCGAAGAGGUAGTCAACGGGGAAAUTCAGCAAGIGCALTY TACAGGUGATTAAAGAGCTGATAGCGUGTGACAAAAACCACCCAAGUGTGOTGATUGTOGAGTAT TOCCAACGAACCOGOATACCCGTUCGCAAGHGTOUACGOGAATATIICOUGLCACTOOUGGAAGCA ACGUGTAAACTEGACCUGACGOGTCUGATCACCTGUOTCAATOTAATGTTCTBUGACGUTUACALC COATACCATCAGCGATCTCTTTGATOTGOCTOTGCCTGAACCGTTATTACGOATGGTATATCCAAA GUGGUGATTTGOAAACGOGCAGAGAAGGTACTGGAAAAAGAACTTCTGGECTGGUAGGAGAAAC TOCATCAGUCGATTATCATCACCGAATACGGUGTGOATACGTTAGCCGHGGUTGCACTCAATGTAC ACCGACATGTGOAGTOAAGAGTATCAGTOTGUATOOCTGGATATOTATCACCGOGTCTTTIGATCG CHTCAGCGUCGTOGTCOOTGAACAGGTATOOAAT TTCGUCHATTTTGCRACUTCGCAAGGUATAT TGOGCGTTOGULGOTAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGUGACCGCAAALCGAAGTCGGCGGLTTT TCTGCTGUAAAAACGETGOACTGGCATEAACTTCGET GAA AAACCGUAGEAGGGAGRCAAACAA TGAGACGTCOGGTAACE TITAAACTGAGGGCACTGAAGTCGLTTGATGTGCTGAATIGTITIGTGA TGTTGGTOGCOTATTITGTTTAAATAAGTAAGCATGGCTGTGATTTTATCATATOATCGATETTTG GGOTTTTATTTAACACATTGTAAAATGTGTATCTATTAATAAL TCAATGTATAAGATGTGTTICATT CTTOGGTTGOCATAGATCTGCTTATTTGACCTGTIGATGTITTGACTUCAAAAALCAAAATCACAAL TCAATAAACTCATRGAATATGTCCACCTOGTTTUTTGAAGAGTTCATCTACCATTCCAGTTGGCATT TATCAGTGTIGCAGUCGOCGUTOTGUTTTOTAACATAACAATTGTTACGGUATATATCCAA on
    “VV A-
    : ‏هوية متوالية رقم‎ CTOUAGAAGTAACACCAAACAACAGGGTOAGCATCGACAAAAGAAACAGT ‏خف امخض خخ ناد‎ ATAGCUTATGAAGGCAGGGCTAAASAASTCCACATATAGCTGUTGCATATGCCATCATCCAALGT ATATCAAGATCHAAATAATTATAAAACATACTTGTTTATTATAATAGATAGGTACTCAAGET TAG AGCATATOAATAGATOGUTGCATATOUCCATCATGTATATGCATCAGTAA AACUCACATCAACATEYT ATACCTATCCTAGATCGATATTTCCATOCATOTTAAACTCGTAACTATGAAGATOTATGACACAC ACATACAGTTCCAAAATTAATAAATACACCAGGTAGT TTGAAACAQTATTCTACTCCGATCTAGA ACQAATOAACGACCGUOCAACCACACCACATCATCACAATUAAGUGAACAAAAAGUATOTOTGTY ATATGOCATUCAGTAAAACCCGCATCAACATGTATACCTATCCT AGATOGATATTICCATCOATCAT CTTCAATTCOTAACTATGAATATOTATGOUACADACATACAGATCCAAAATTAATAAATCCACCA GUTAGTTTIGAAACAGAATTCTACTCCGATUTAGAACGACCHGCLCAACTCAGACCACATCATC ACA ACCAAGACANAARAAAGCATGAAAAGATGACCCGATAAATAAG TGCACGGUATATATTGAAAT AAATGGAAAAGGOCAAACCAAACCCTATGOAACGAAACAAAAAAAATCATGAAATCGATCCCGT CTGCGGAACGGCTAGAGCCATOCCAGGATTCCCC AA AGAGAAACACTOGUAAGTTAGUAATCAG AACHIOTCTGACGTACAGGTCOCATCOOTGTALGAATGOTAGCAGUACGGATCTAACACAAATA CGGATOTAACACAAACATGAACAGAAGTAGAACTACOGGOUCCTAACCATGCATGRACCGGAAL GCOGATCTAGAGAAGGTAGAGAGGGGGGGGHGROOOAGGACHAGCGGEOTACCTTOAAGTGEA GOTGCCBACGGOTGOATTTGGGGGAGATCTGGT TG TGTGTHTG TEGO TCCGAAL AAC ADGAGG TTGGOGOALGTACCAAGAGGGTCTGOAGHOGGTCTC TAT TTATTACGGCGGOCGAGGAATGGTAA AGCGAAGEAGCGETCGOAAAGGAATCOCCCG TAG ‏لخي دوا تخت انان نا‎ CEUCTECOGTHLCGGCTCACGYICTGUOCGCTOOGOCACGUAATTTCTGOUATGOCGACAGCGGAGCA AGTCCAALGOTGOAGCGGAACTOTCGAGAGGOOTUCAGUCGLGGAGTATCGGAAGTTGAAGAC AAAGAAGGTCTTAAATCCTGOCTAGUAACACTCAACTATGOCAGAAALCACATCAAAGUATATC QOUAAGCTTCTTOGOCCATTATATCCAAAGACCTCAGAGAAAGHGTOAGOGAAGGCTCAATTCAG AAGATTGGAAGUTOATCAATAGGATCAAGACAATGGTOAGAACGOTTCCAAATCTCATTATTCEC ACCAGAAGATGCATACATTATCATTGAAACAGATGCATOTGCAALTGGATGGGUAGCAGTATOD AAGTGGAAGAAAANAAGGUAGACLUAAGAAATACAGAGCAAATOTETAGGTATGLCAGTGGA AAATTTGATAAGCCAAAAGGAACCTOTGATGCAGAAATCTATOOGHTTATOAATGGCTTAGAAA AGATCAGATTGTTCTACT TCO AT AAA AGADAGATCACAGICAGAAUTGACAGTAGTOCAATOGA ARGGTTCTACAACAAGAGTGOTOAACACAAGCCTTICTGAGATCAGATGGATCAGGTT
    PY ‏شكل‎
    SARE CATOOACTACATCACTGGTOUAGOGACCAGAGATAGTCATTGAACACATAAAAGHGAAGAGCAAT GOTTTAGCTGACATCITGTLCAGGUTUAAAGIC AMAT TAGUTCAGAATGAACC AACGGAAGAGA TEGATOCTGUTTACACAAGCCATAAGGGAAGTAATTCLCTTATCCAGATCATCCATACACTGAGUAA CTCAGAUGAATOOOGAAACAAAATTCTGGATCCATTOCCCACATICAAGAAGLGACATGTTCGAAA GAACAGAGCAAGOTTITATGUTAAC AGAGGAALCAGTTCTACTOTGTOCATHGCAGGAAGCUTEC AATTCAGTTAGIGTCCAGAATCATCTGCC AACCCAGGAAGGAAATTICTTCAAGTGCGCAATGAAL AAATGUCATTGUTOOTACTOOGCAGATOTCATTGAAGAACACATTOAAGATAGAATTGATGAAT TICTCAAGAATCTTEAAGTTUTGAAGACCGGTOGEGTGOAAACAATGGAGGAGGAATUTTATGAA GOAAGTCACCAAGETGAAGATAGAAGABCAGGAGTTCOAGGAATALCAGGUCACACLC ‏تخ‎ ‎TATGTCGECAG TAG UGC AGAAGATGTGUTAGATCTCCAAGAUGTAAGUDAATGACGATTGAGGA GGUATTGACGTCAGGOGATGACCGCAGC GGAGAGTACTGGGCUCATTCAGTGGATHGCTCCACTGA GITGTATTATIGTGTGCTTTITCGGACAAGTOGTGOTOGTCCACTYTCTTITGOUADCTGTGCCACTTTA TICCTTGICTGCCACGATGOUTITIGUTTAGCTTATAAGCAAGGATCOCAGTRUGTGTRTGALUACT ACCCCCCTICOGACGCTCTGOOUTATATAAGGUACCGTCTOTAAGCTCTTACGATCATCGOGTAGT TC ACCAAGGUCOCGOGETCHHATCTAGUTGAAGOU TCGACAAGGCAGYCCACGHGAGGAGUTOATATY THGTGOATAAGUTGTOGATAGGAGUAACCCTATOOCTAATATACCAGCACCALCAAGTCAGHRGO AATCCCCAGATOACCCCAGCAGATTOUGAAGAAGOTACAGTACACACACATGTATATATGTATGA.
    TGTATCCCTTCGATCGAAGGCATOL CTT TATAATCACTGAGTAGTCATTITATTACTTIGITIT GACAAGTCAGTAGTTCATCCATTIGTCCCATTTTITTCAGOTTGGAAGT TIGOTTGCACTGGCCTTG GTCTAATAACTGAGTAGTCATITTATTACGTTGTTITCOACAAGTCAGTAGCTCATCCATUTGTCLT ATTTTTTCAGETAGGAAGTTITGGTTGCACTGGUCTTGOACTAATAACTGATTAGTCATTTEATTAC ATTOTITCGACAAGTCAGTAGCTCATCUATCTGTCCCATTITITCAGCTAGGAAGTTC
    شكل “١١ب‏
    -١١-
    ١ : ‏هوية متوالية رقم‎ ATOGGAAGTTGAAGACAAAGAAGGTCTTAAA ‏اناا‎ TGGUTAGCAACACTOAACTATGUUAGAAAD CACATEAAAGTATATCOGCAAGCTTCTTOGCCCATTATATCCAAAGACCTCAGAGAAATITGAG COARGOCTCAATTCAGAAGATTGGAAGOCTGATCAATAGUATCA AG AC AATGGTGAGAATGCT IC CAAATCTCACTATICCACCAGAAGATCCATACATTATCATIGAAACAGATGCATGTGEAACTGGA TGOGGAGCAGTATGUAAGTOEAAGAAAAACAAGGCACACCCAAGAAATACAGATGCANATCIGT AGOTATGUCAGTGEAAAATTTGATAAGUC AAA AGHAACCTGTGATOCAGAAATCTATGLEGTTA TGAATGGCTTAGAAAAGATGAGATIGTTCTACTIGGACAAAAGAGAGATCACAGTCAGAACTGA CAGTAGTGCAATCGAAAGGTTCTACAACAAGAGTOCTGAACACAAGCCTTCTGAGATCAGATGE ATCAGOTTCATGCGACTACATCACTGGOTGCAGGACCAGAGATAGTCATTGAACACATAAAAGGGA AGAGUAATOOTTTAGCTGACATCTTG TCC AGGUTCAAAGCCAAATTAGCTCAGAATGAACCAAT GGAAGAGATGATOCTGCTTACACAAGTCATAAGGGAAGTAATTICCTTATCCAGATCATECATAL ACTOAGCAACTCAGAGAATOOGGAAACAAAATTICTOOATCCATTCOCCACATICAAGAAGGACA TOTICGAAAGAACAGAGCAAGCTIT TATOO TAACAGAGGAACCAGTTCTACTCTGTGCATGCAG GAAGCCTOCAATTCAGTTAGTGTOCAGAACATCTOOC AATCC AGGAAGGAAATTICTICAAGTGC GUAATOAACAAATGCCATTIGCTAGTACTOOGOAGATCTCATTGAAGAACACATTICAAGACAGAA TTGATGAATTICICAAGAATCTIGAAGT TCTHAAGACOGUTGOCG THU AAADAATGGAGGAGGA ACTTATGAAGGAAGTCALCAAGCTGAAGATAG AAGAGCAGGAGTTCGAGGAATACCAGGECAC ACCAAGGGCTATGTCOUCAGTAGCCOLAGAAGATGTGCTAGATCTCCAAGACGTAAGIAATGAC GATTOAGGAGGCATTUACGTCAGOGATGACCGUAGCGLAGAGTACTGGGCLCATTCAGTGGATG CTOCACTGAGTIGTATTATIGTGTCC TT ITCGGACAAGTGTOCTGTCCACT TIC TIT TOGGCACCTGT GCCACTTTATTCCTTGTOTGCCACGATGUCTITGCTTAGCTTGTAAGCAAGGATCGRAGTGCGTGT GTGACACCACCCTCOTTCCGACGOTCTGCCTATAT AAGHCACCGTCTGTAAGUTCTTACGATCAT COGTAGTTCACCAAGGOCCGGEATCGHATCTAGUTOA AGOGO TCGACAAGGCAGTOCACGGAGGA GUTGATATTTGOTGGACAAGCTOTGGATAGGAGCAACCCTATCOCTAATATACCAGCACCALCCA AGTCAGGGUAATCOCCAGATCALCCCAGCAGAT TOGA AGA AGtacagtacacacacaigiatatatglatgatgtatee clirgalcgaaggoatgoeitggiataateactigaglagtvatiitatiaciiigitigacaagicagtagiicatceatiigivecatiitifeagriiggaagitiggtigos clggeehigoictanizactgagiagieatitiaiacgtighticgaceagicagtageteatecatctgicoratiitticagetagpaagttiggtioeactggioitgesn claateacteattagicatitianacatigiticgacasgicagiageicatecatoigivccatttiteagC T AGGAAGT TC
    : » Vi ‏شكل‎
    ARE
    هوية متوالية رقم : لا ‎AGCACTTAAAGATCTTTAGAAGAAAGCAAAGCATTTATTAATACATAACAATGYCCAGGTAGEC‏ ‎CAGCTOAATTACAATACGUAACTOCTCATAATAATTCAACAAACCUAAGTAGTACACAAC ATCC‏ ‎AGARGCAAATAAAGOCCATACGTACCAAAGCCTACALAAGUAGCAACACTUACTGCCAGTGLOG‏ ‎GTGGGTCTTTAAAGCACACGUGCGUCT TACT ACGCGATCCACCTTGAAACAAACTTGOTAAAATTA‏ ‎AAGCAAACCAGAAGCACACACACGUCAACGCAACGUT TCTGATCGCGC GUCCAAGGUUCGHICG‏ ‎GCCAGAACGTADGACGOACACGCACAUGCTGCGACCGAGCTCTAGGTOATTAAGUTAACTACTC‏ ‎AAAGGTARGTCTTGUGACAGTCAACAGCTOTCACAGTTITCTTTICAAGGACATGTTGTOTCTGIGG‏ ‎TCTOGTCACATCTTTGHGAAAG TI TCACATOGUTAAGACA TOTGATGATACTCIGGAACATGAAUTRG‏ ‎ACCTCCACCAATGOOGAGTGTTCATCTGOOTG TOG TCAGCUAUTATGAAGTCGCOTTTGUTGCCAG‏ ‎TAATCTCATOACAGATCTTGAAGGO TGACTTGAGACCGTOUTTOGUTTGGTCACCCLAGATG TAG‏ ‎AGGCAGTGGOCGAGTGAAGTTGAAL TCCAAGTTCTTTECCAACACATGACCATCTTITCTITGAAGCE‏ ‎TTGACCATTGAGTY TGACCCTATTIGTAGACAGACCCATTCTCAAAGGTGACTTCAGCCCTAGTCTY‏ ‎GAAGTTGCCATCTUCTTCAAAGGTGATTGTGUGUTCYTGCACATAGCCATCTGGCATACAGGACT‏ ‎TOTAGAAGTCCTTCAACTCTOGACCATALTTGGOAAAGCACTGTGUTCCATAGOTGAGAGTGGTG‏ ‎ACAAGTATGCTCCAAGGCACAGGAACATCACCAGTTOTGUAGATOAACTGTGCATCAACTTITTCC‏ ‎CACTGAGGCATCTCOGTAGCCTT TCCCACGTATECT AA AGG THTGOOCATOAACATTCUUTTIUCA‏ ‎TOTCCACAACGTAAGGAATCTTCOCATGAAAGAGAAGTGCTCCAGATGCCATGG TG TCGTGTRN‏ ‎ATCOGGTACACACGTGUCTAGOACCGOGTTCAACTAAUTACTOGO AGAAGTAACACTCAAACAACAG‏ ‎GOTGAGCATCGACAAAAGAAACAGTACCAAGUAAATAAATAGOCGTATGAAGOCAGGGUTAAAA‏ ‎AAATCCADATATAGOTGOTOGUATATOLCATCATCCAAGTATATCAAGATCGAAATAATTATAAAA‏ ‎CATACTIGTTIATTATAATAGATAGHTACTCAAGHTTAGAGCATATGAATAGATGUTGUATATGC‏ ‎CATCATGTATATGCATCAGTAAA ACCUACATCAACATOTATALCTATCCTAGATCGATATTITLCA‏ ‎TCCATCTTAAACTCOGTAACTATGAAGATGTATGACACACACATACAGTICCAAAATTAATAAATA‏ ‎CACCAGGTAGTTTOAAACAGTATICTACTCCGATCTAGAACGAATGAACGACCGUUCAATL ACA‏ ‎CCACATCATCACAACCAAGUGAACAAAAAGCATUTCTGTATATGCATCAGTAAAACCOGCATOA‏ ‎ACATGTATACCTATCCTAGATCGATATTICCATOCATCATCT TC AAT TCG TAACTATGAATATGTA‏ ‎TGGCACACACATACAGATCCAAAATTAATAAATCCACCAGOGTAGTTTGAAACAGAATTCTACTCC‏ ‎GATCTAGAACGACCGUTCAACCAGACCACATCATCACAACCAAGACAAAAAAAAGCATOAAAA‏ ‎GATGACCCGACAAACAAGTGCACGOGCATATATIGAAATAAAGGAAAAGGGCAA ACT AAACCCT‏ ‎ATOCAACGAAACA AAA RAAATCATOAAATCGATCCCGTCTGOCGRAACGGUTAGAGUCATCCCAG‏ ‎GATTCCCCAAAGAGAAACACTCGCAAGTTAGCAATCAGAACGTGTUTGACGTACAGGTCGCATC‏ ‎COTOTACGAAUGUTAGCAGUACGUGATCTAACACAAACACOUGATCTAATACAAACATGAAUAGAS‏ ‎GTAGAACTACUGHOUCCTAACCATGCATGHGACCOGAACGCOGATU TAGAGAAGOTAGAGAGGS‏ ‎GGGOGGLGOGGAGGACOAGIOOCETACCTTGAAGCGGAGG TGCOCOGALGOGTGGATTTGGGUGA‏ ‎GATCTGOGTTOTGTOTGTGTOOGCTCCGAACAACACGAGGTTGROGAGOGTACCAAGAGGGTGTIGR‏ ‎AGGGGGTGTCTATTITATTACCGGCGGGUGAGGAAGGGAAAGUGAAGGAGUGOTGGGAAAGGAAT‏ ‎CCCLOGTAGCTOCCAGGTHUCGTGAGAGGAGGAGUAGGLUGCCYOCCOGTGCCOOUTCACGTCTGL‏ ‎CGETCCGCCACGUAATTTCTOGATGUCGACAGCUGGAGCAAGTCCAACGGTGGAGCGGAACT‏
    Yeo ‏شكل‎
    —-\YY- CTCGAGAQGOOTCCAGLCOGCGGAGTATCOOAAGTTIGAAGACAAAGAAGGTUTTAAATCCTGGEUT AGCAACACTGAACTATOUCAGAAACCACATCAAAGUCATATOGOUAAGUTICTIGOUCCATTEATAT COAAAGACCTCAGAGAAAGUTGAGCGAAGGC TU AATICAGAAGATTGGAAGUTOATCAA TAGE ATCAAGACAATOGOTGAGAACGUTTCCAAATCTCACTATTCCACTAGAAGATGCATACATTATCAT TGAAATAGATGUATGTOUAATTGGATGGUGAGCAGTATGCAAGTOGAAGAAAAACAAGGLAGA CCCAAGAAATACAGAGUAAATCTGTAGGTATGCCAGTGGAAAATTTGATAAGLCAAAAGGAALC TUDNCATGCAGAAATUTATGHUGUGTTATGAATOOUTTAGAAAAGATCAGATTGTICTACTTOGOACAA AAGAGAGATCACAGTUAGAACTGACAGTAGTGCAATCGAAAGUTTCTACAACAAGAGTGUTGAA CACAAGUCTTIUTOAGATCAGATGGATCAGOGTTCATGGACTACATCACTGOTOCAGOGACCAGAGA TAGTCATTGAATACATAAAAGROAAGAGCAATGOTTTAGUTOACATUT TG TCCAGGUTC AAAGC CAAATTAGCTCAGAATOAAUCAACGGAAGAGATGATOCTGCTTACATCAAGUCATAAGGGAAGTA.
    ATTCOTTATCCAGATCATCCATACACT GAG AAC TCAGAGAATGGGGAAACAAAATTICTORATCC ATTCCCCACATTCAAGAAGGACATOETICGAAAGAACAGAGCAAGOT TITATOUTAALCAGAGGAA COAGTTOTACTCTOTGUATGCAGGAAGCCTGCAATTCAGTTAGTGTUCAGAATATCTGUCAACCC AGGAAGGAKATICTICAAGTGUGEAATOAACAAATGLCATTIGUTGETACTOOGUAGATCTCATY GAAGAACAUATICAAGACAGAATTIGATGAATTTCTCAAGAATCTTGAAGTTOTGAAGACCGGTG GUGTGCAAACAATHGAGGAGGAACTTATGAAGGAAGTCACC AAGCTGAAGATAGAAGAGUAG AGTTCGAGGAATACCAGLGOCACALCAAGGGUTATGTICOOCCAGTAGUCLCAGAAGATHRTGUTAGA TOTCCAAGACOTAAGCAATGACGATTGAGGAGGUATTGALG TC AGGGATOACCGCAGEGGAGAG TACTGGGCCCATTCAGQTGOATGCTCCACTOAGTTATATTATTGIGTGCTITICGGACAAGTOGTGET GTCCACTTTCITITGGCACCTGTGCCACTTTATTCCTTIG IU TGCCACGATGCCTT TOUT TAG TTGT AAGCAAGGATCOCAGTGCGTGTOGTGACACCACCCCCCTTCLGACGCTCTGCCTATATAAGOCALC GTCTGTAAGCTCTTACGATUATCGGTAGTICALCAAGDLCCGGOGTURGATCTAGCTGAAGGCTC GACAAGGCAGTCCACGGAGHAGUTGATATTTGOTGGACAAGCTGTGOATAGGAGCAACCLTATE COTAATATACCAGCACCACCAAGTCAGGUCAATCOCCAGATCACCCCAGCAGATTCGAAGAAGG TACAGTACACACACATOTATATATGTATOATGTATCCCTTCCGATCGAAGGOATGLOCTTGGTATAA TCACTGAGTAGTCATTTTATTACYTTITOTTTITGACAAGTCAGTAGTTCATCCATITGTCCCATTTTIT CAGCTTGRAAGTTTIGGTTGCACTOGECTIGGTCTAATAACTGAGTAGTCATITTATTACGTIOTTY COACAAGTCAGTAGCTCATCCATOTGTCUCATTTITICAGCTAGGAAGTITGGTTGCACTGOLCTT GOACTAATAACTGATTARTCATT TIA TTACAT TO ITTICGACAAGTC AGT AGC TC ATCCATOTGTEC CATTTTICAGUTAGGAAGTTORUGGCCGLAGOGOUACCATGOTCOGTICTETAGAAALCCCAACCD GTGAAATCAAAAAACTCGACGGCCTOTGOGGCATICAGTCTGOGATCOUGAAAACTGTIGGAATIGA TCAGCGTTOOTGGGAAAGCGCGTTACAAGAAAGCCGGGCAATTGCTGTGCCAGGCAGTTTTAAL GATOCAGTIOGCCGATGCAGATATTICOTAATTATGUGGGUAACGTOTOOTATCAGUGOGAAGTCTT TATACCGAAAGUTTGGGCAGGCCAGUOTATCG TOO TGUGTTTCGATGUGUTITACTOATTAC GGA AAGTGTGOATCAATAATCAGGAAGTGATOOAGUCATCAGGGOGGUTATACGUCATTTGAAGCCGA TOTCACGUCGTATGTTATTIGLEGGGAAAAGTGTACGTATCACCGTTTIGTGTGAACAACGAATTGA ACTOGCAGACTATCCCGCCGGGAATOOTGATTACCGACGAAAATGGCAAGAAAAAGCAGTCTTA CTTCCATGATTICTTTAACTATGCCOHAATCCATCGUAGCGTAATGOTCTACACCALGCOGAACA CCTGOOTGGACGATATCACCOTGOTGACGCATOTCGUGCAAGACTGTAACC ALG
    ب١١ ‏شكل‎ ‎ICA
    “yy CGTOTGTTGAC TOOCAGOTGGTGGUCAATOGTGATOTCAGUGT TGAALTGCOTGATGCGGATC AA CAGGTGGTTGCAACTOGGACAAGGCACTAGUGGUACTTTIGUAAGTGGETGAATCCGCACCTCTOHE AACCGGGTGAAGGTTATCTCTATGAACTOTGOGTCACAGCCAAAAGUCCAGACAGAGTOTGATAT CTADCCGOTTCGCOTOGGCATCCGOTCAGTOOUAGTGAAGGGUGAACAGTTCCTOATTAACTCACA AACCGTTCTACTTTACTGGUTT TOG IUGTCATGAAGA TOGO GDACTTGOOTGGCAAAGGATTCGAT AACGTOGUTGATGGTGUATGACCACGUATTAATOGAUTGGATTGO GU CAACTOC TACUGTACCTC OCATTACOCTTACGUTOAAGAGATOCTCGACTOGG GU AGATEAACATOGCATCOTLGOGTGATTIGAT QAAACTGCTOUTOGTCGGO TT TAACCTICTCTTITAGGCATTGOTTTCGAAGUGGLLUAATAAGUTGAA AGAACTUGTAC AGCGAAGAGHCAGTCAACGHGGGAAACTCAGD AAGOGCACT TACAGRCGATTAA AGAGCTGATAGCGCOTGACAAAAACCACCCAAGLGTGGTGATLGTGGAGTATTGCCAACLAACLG GATACCCGTECGCAAGGTGUALGOGAATATITCGCOLCACTGUOGGAAGUAACOGEGTAAACTCG ACCCGACGCETUCGATCACCTECGTCAATGTAATGTICTGOGACGUTCACACCGATATCATCAGC GATCTUTTTGATGTGUETGTLGUCTGAACCGTTATTACGGATGGTATGTCCAAAGCGGOGATTTGGA AATGGCAGAGAAGOTATTORAAAAAGAACTTOCTGHCCTGGCAGGAGAAACTGCATCAGCLGATTY ATCATCACCOAATACGHGUGTOGATACGTTAGCCGGGUTGOACTCAATQTACACCOACATUG TOGA GTOAAGAGTATCAGTOTGUATOGOTGGATATOTATCACCGUGTOTITGATCGOGTCAGUGL CGT GTEOAGTGASCAGGTATAGAATTICGCCGATTT IGE GACCTICGUAAGGCATATIGUGCOTTGGCGG TAACAAGAAAGGGATCTTCACTCGURACCGCAAACCGAAGTCGOEGGUTTTTOTGCTGC AAA AA CGOTOGACTGGCATOGAACTTCOGOTGAAAAACCGC AGCAGGGAGGCAAACAATBAGRALGTCCGGT AACCTTTAAACTGAGGGCACTOAAGICGCTTGATGTDETGAATTGTTTGIGATGTTIGOTGGOGT A TITTOTTTAAATAAGTAAGCATGGCTGTGATT I TATCATATGATCGATCTITGGGGTITIATTTAA CACATIGETAAAATOTPGTATCTATTAATAACTCAATOTATAAGATGTIGTTCATTCTTCGGTTIGC CAT AGATCTGCTTATT TGACCTS TGA TET TTTIGACTUCAARAACCAAAATCACAAUTUAATAAACTCA TGUAATATOQTCCACCTGITICTTIGAAGAGTTCATCTACCATTCCAGTTGGOATITATCAGTGTTGC AGCGGCGCTGTROTITGT AACATAACAATTGTTACGGCATATATCCAA Yo ‏شكل‎ ‎Yar
    By ‏دارا لازنا اناا أأأأاأا ل لرراا لأا لأررر أأأررأ رأأأرا اران أأأأأأأأأأأاأأأ1١ اللا لحن‎ : ‏هت‎ ; : ERE 8 0 ٍ i : 8 8 : 1 : 8 8 : : : N : 1 8 8 : 1 : 8 8 : vo 3 0 ١ 1 H N N ; 1 ٍِ : 8 8 3 : 1 ‏ل ا‎ SE IIIT 1 : \ : « N 8 8 : i : \ 8 5 8 ‏الو فرع‎ i : a 2 : : 8 0 8 5 8 ‏ووو ضاق‎ ‏ا #88 ا ابا‎ 8 : ‏ا‎ OY ORIEN ERE Ry wwwx : CN § RE NE ‏ا‎ 0 0 1 ْ: PR) ME ‏نا‎ EB Nou 8 3 3 { 8 ‏وج اي أن 2ل‎ OB 8 N 8 : ‏ل اباد‎ BR BE BEB J I : i EEE EE vr OS 3] 8 : 1 BIE NE BR 8 8 N N 3 : ER BI BN BE OB OB © BR “8 8 : i NARNE RXNE YH B§ - 3 : Vopr (ARN BNR BY Ba N FN NS EXPE : 1 ‏ىا كيذ حي هن ىا حم ىب د اج‎ 32 > ot tN ‏الجا لكي‎ : ‏د د ل اناد ان اد ل ل ل ا‎ : H NES 4 ‏ا 5 3 و‎ Io nN oN oh St ey >. 200A : ‏أن ا أ ل‎ I ‏لف الب أن لانت لنت كن اند اند‎ : ‏ا ا أ ان ان اند ا اد ا د ل ان ا لق‎ :
    ١٠١ ‏شكل‎ ‎: 8 ٍْ ‏مق‎ i : N : 3 8 ‏ا‎ ‎SE § § 8 N 0 Y ‏ا‎ © 8 8 ¥§ § § 5 ‏ا‎ CO : 8 a N N N Nia TPE SS ‏ا ا‎ NN oN No cone 2 8 § § © } 3 § 8 FE : 8 RS RN 8 8 8 N 8 8 : ; ROR 8 8 8 8 0 8 © B ١ ‏و‎ 8 A 8 5 8 Ny N 88 8 88 : : ‏ل‎ : : ¥ XE © ‏؟‎ OB X © RB EB 1 : SY 8 ‏ا § 8 § > 0 ا § ا‎ ‏ىا‎ NH BE OB EB B 8 HF BE B B : ‏لحر‎ ١ ‏:ال لان :ع اكننن:: نننة :00111 : ان :لانن ان ا‎ : Poa Be BOB Bo Bw BO RL ROE ‏ا‎ ‎| ‏د نا قا أن‎ EE ‏د نا دا دواد لد‎ : oF ol 5 EZ RE < EC : : ‏بن‎ 6 8 S&F ‏الى‎ a ‏أن الم‎ CR & FL : : oF A re ‏ف ل‎ A oF & oY ‏بن‎ oF a i A FE RC AC ‎HS‏ رغ
    ‎3
    ‎toy
    _ \ \ ‏اج‎ ‏ل‎ ‏ل لس‎ SU URE UUUU RU RURRRPUUUUUE aaa asa RASA AAA AAA : 3% ] 1 ‏ا‎ i ER 7 ‏الم اا‎ a SEAT rn sah Same SS rinssonn iY <> ‏الحا‎ A ER, | R000 BRP ERE ‏اوري‎ VEE WANS Thien 2 PARMA TON ‏مم‎ paetdtimR Hg fod ‏اال‎ A ‏موك‎ Ered HE {~ 28 gig ‏وا ) ل‎ 29 - : PER s Sov sg & aE ‏(غير متوقف‎ ‏ووم تاياي‎ ‏اا‎ ‎8 ‎i ‎JER Tanne 4 pss ‏حا‎ : Pa ctl) oe SA 0 ‏وا كنا الت ال‎ N 5 ‏بج‎ RRS A AAA EE Ee ‏ا‎ ‏الس‎ NE RRR ET X Ne ‏ا‎ ‎Noid eg Naas Ua UR ‏وتوم‎ rag wm ow 0:44 SE Anam Frame 7 ‏ده‎ IU ‏بد ارركم ال" اليج‎ Nop {8 Yo ag } 5 ‏اي‎ Spend WH SORT RR EE oF TRE BER : ‏قلف 5 اَن‎ gt 3 > ‏(غير متوكئف)‎ . Fad by Wit ay CO $e Nn ‏متت ا‎ 0 A Pe ‏ل‎ sows Jd N 1 ‏#ج لي‎ > A RR Neh NEE aes ae 1 ae ‏عل‎ OY TRADER SHE vos est X ‏عي‎ FeeSoUHIR awa 0 RY A ad LTT ‏اب‎ 1 ‏(غير متوقف)‎ 2335 (ge pe) te ae ‏مستا‎ ‎i ‎ee ‏لل لب‎ ‏تيع ؟: ا‎ 8 § ‏ل‎ PL ‏ل ايج ممح‎ NON NII & BBR Lr rr N CE eae RN ANCHE apa NEE ‏عضيس‎ 8801S wp ‏الما : 5 ب توقف)‎ OES T RR UTR a xd a = ‘ra fees 10870 {Hagia ‏(غير‎ ‎4 ‏شكل‎
    -١؟-‎ T-DNA SB ‏حدود‎ i SpnR 1 . 20117571 ga ‏لمعزز‎ V2 ‏منطقة‎ ‏ان / ا‎ zmUbil gfe ‏معزز‎ ‎~ {3 ‏مس‎ 2 ‏الي‎ rill re Crab v2 iA LX ‏سا سن ا ال‎ N Bg qt sa as FE: oo zmUbil ge ‏معزز‎ ‎SE : ‏جلا‎ 0 as rim ‏اجا‎ ‏ب‎ 23 pOABIOSE1S | zmUbil V2 ‏معزز‎ ‎T-DNA ‏انا كردم‎ a ~ T-DNA JA ‏حدود‎ TN 1 : N T-DNA JA aga" ‏ا‎ Fong ‏ا لازي‎ 201 Ne SEN onan ve TN em ‏الصا ل‎ 3 UR v2 1 27 J } 7 ‏ا‎ Ny - 7 / zmUbil V2 jaa zmUbil ‏منطقة 172 لمعزز منيع‎ 50# kN NE | ‏عي وا‎ ‏الاي‎ zmbibil ade ‏معزز‎ ‎ - SE EEE Loo BN Sag, ‏احم‎ zmUbil V2 Je 0 ‏ا‎ wd h 5 ce NY 8: ad ‏ل‎ 2 bind 845 \ SDPB105748 \ Phe «3 {with N ‏ماقم‎ N 3 B TTT ‏عط‎ 3 URRY ‏ال‎
    ‏ع . ب‎ = oo Ta . - ‏ماع‎ ‎Seo zmilbil V2 ‏معززل‎ ‎§ ri AN = Zmlip 3 UTR v1 PATVS ٠١ ‏شكل‎
    ١ ‏-/ل7‎
    ٠3 : ‏هوية متوالية رقم‎ CIGGACCCCTCTCBASTGTTCCGUTTCACCGTTGOACTTGLTACGCTGTCAGCATOGAGATOTT GCGTGGOGGAGCGOCAGACTTGAGCUGTCACGGCAGGUGGUCTOCTCOTCCTUTCACGUGLATC TETAGCTACGOUUGATICCTTICOCACCOCTCGTTCGUTT 1011012-31 02 GANA TAAT GTTACACCCCOCTREACAGUCTCY SEQ ID NO: 17 CTGGACCCCTETOGAGAGTTOCGETCO ACCT TGGACTAGCTCTGCTGTCGGCATOCCAGAAAAT GUTTOGCAGTOUGGCAGACOTOAGCCOGUACGGLAGLGHGGGECTOCTCCTOCTCTCACGGLACA TGAAGCTACGUGGTGATAGCTTGECCACCOUTCCAACGCTTTCOOTTACTUTCACGUOGTAATAA ATAGACACCCCTTCCACAACCTCT SEQ INO: 18 CTEEACCTCTOTCGAGAGTTGLGUTCCACCGATOGACTTGOTCCGUETGTCGOUGTCUATAATTYT GCOTGGCGGAGCGGLAGACGGRAGLCGEIACGGCAGHGGAGCCTCATCCTCCTCTCACGGTALCT TOCAACTACGGRGOATTCCTATCCCACOCOOTCOCTICGUTTICACTTCITCGUCOTCUTTAATAAG TAGAUACCCCATUCGAGUCOTCT SEQ ID NO 19 CAAGACCCCTUTCGAGAGTTICCGCACCACCGTIGRACGTGCTUCGUTATCTGCATCCAGAAATT GEGTGGCGGAACGGTAAACGTGAGCCGTEAL GOUAGGCGGCCTCCTOOTCCTCTCACHGACACK GGCAGCTACGGGGGATACCTGTCACACAGCTCUT TOOT TITCITICCTCGUCCGCUGTAATAT GTATACACTCCCTCCGCACCOTET SEQ INQ 20 CTGGACCCOCTCTCHAGGGTTCCGTICCACCGTTAGTCTTQQTECGLTATCGGGATUCAGAAATA GEATGGUGGAGCGGOAGACGTOATCUGGCALGGCATGOGGCOCTCCTAGTOCTATCACAGL ACT GOCAGCTATGGGABATTCCATTCCCACCOCTCCTOCGOTITCACTGGCTGOCCCGLCGTGATAG ATAGACACCCCCTICCATACCCICT
    £ - IVY ‏شكل‎
    -١ ‏م‎
    ؟١‎ : ‏هوية متوالية رقم‎ 1 1000110101 0 ‏1و1 1 ماك‎ FC ACGUATGGACTTGOTCAACGO ‏اتلد‎ ATCCAGAATTT GCETGGLGTAGUGGUGGACGTOATCCGOUOCOOCAGGUGGITTCUTCUTOCTUTCACT TAAGT GACAGUTACAGGGOATTUCTTTCCCACCOUTCCTTOGOT TOU COTACCTOOOCOGCOHGTAATAA ATAGACACCCCTTCCACTCOCTCY SEG IDNQGL22 CTGGATCCCTCTCOAGAGTGUGGUTCCOACGTIGGACTTIGUTOCGAABTCGGUATCUAANAAATT GUOTOOGTGGAGAGOCAGACTTGAGCCGGCACGGCAGGAGOCLTCGTCCTACTCOLALGETATC GGUAGCAACGGGAGAATCCTTGCACTUTGOTCCTICGCTGTACCTTCCTCGCCCGCTHATATTG ATAGACALCCCCTGCATACCCTCT SEQ ID WO: 23 ATGGACCCTICTCGAGTOTTOGGOTCLCACCOTTAGACTTGCTCCACGATCRACATUAAGAAATT GCGAGADGRAGCTACAAACGTAAGAAATCTCGOTAGGGGGCCTCCTCOTCCTCTCACGGLACC GGUAGCTACGGGGGATTOCTGTOCCACTTCTCCTTCACGTICCCTACCTCGCCOOOCCATAATTA ATAAGCACCOUCTCCGCACCETCT SEQ ID MNO 24 CTGOGACCCCTCTAAAGAGTTCCACGCCACCGTTATAATOECTCOCGOTGTCOOUATCCAGAAATT ACTTGGOCGATCAGCAGACGTCAGCCAGCATGGCTGGCGGLETCCTCOTCCTICTCACGATGCCG TCAGUTACGOGGGATTCOTTICCCAACGCTCOCTICGUTTTOCTATGUGUGCCTOUCOGATTA AAT AGGOCAGCTTCTOGTCACCOTCT SEQ INO 25 CAAGACACCTCTCOGATTGTICCGUTTCACCOGTTIGGACTTTOTCCTCAGTCGGUATACAGAAATT GUTTGGCGAAGCGOCAGACATGAGCCGGUACGACATGCGTCETCATTCTCCTCTOATGGCACCE GUCAGTTACTOOTRAATCCTATCOCACCOQUTCLTTCGCTGTCOCT TAA TIGUCCGOCGAA AATA ATFGACACCCTCATCCACACCUTCY
    » od YY ‏شكل‎
    -4؟١-‏ جم اجو هن ب
    77 : ‏هوية متوالية رقم‎ ‏تلفت ]1 1 اناا ]لت اك وى مان رداغت‎ TOO TCCACTATEGOG UG TACAGAAAAT TCGTTGCGAAGCGOUCAGACOTOAGTCTACACGGCAGTULGUITCTACC ‏تانتفاانباخمقاذا تلا‎ TGCAGCTACAGATOATGCETTTCCLCALCACTCUTTUGCOTTCCTTTECTCOGUCATCAGTAATGAA TOGGACACGTCCTOCAGACTOTCY SEG IDNG: 27 CTGAACCCATCTCGAGTATGCCGCALGATCGATTHACATOUTCCACTGOCAGCATCCAGAAATT GUATTGGGGAGCATCAGGUGTCAGUCTOLACGGCAGGUCGGACTATTCCTCCTCGEGLGOLACT GOCAACTACGOGGGATGUTTGACCGACCGCTCCATUGATTTOCCAATCTCGOTTGUL GTATTAA ATAGATAACCCCTTCACACCCICT SEQ DRO: 28 CTEGACTCUTTACGGGAGATCCGUTCCACCGT IOOACTAGUTUCGT TI TCGEOTTICAA TA AAG GEGTEGGGGAGCGLOAGTOGGGGOCAGGCACHGCAGTORTCCTLATCCATATCTCACGGEGOC GGUAGTTOAGGGGGATTOUTGTOCCACTTOACCTACTCTTICCCTACCTCGTOTGUCATATTAAA TAGTCACCCCCTCCACAACCTIT SEQ ID MNO 29 TTGGACCCCTCTCGAAAGT TAGGCTLCGLCGTTGGACTGOT TTCGCGGTCATCAATCAGOAATT GCGGOLGUGGAGGGTCAGACGTGTGCUGGUACAGCAGOTGGCCTCCTCATCOTCATAAGGCALT GOUAACTACGGOTOGATTCATTTOCTYCAGCACCTACGUTTACCCTGUCALGCCUTOUGTATTAT AATRACACCCCCTICCACACOTTAT SEQ NO 3G CTGGACCCCACGCGGGGTITTOOT TCO TCOGTTGGGATAGETCCHGTGTCAGCATACAGAGAAT ATATGTOHGAGCGRAAGACGTGAGCCGACACGRCGOLUTGCEGCCTLCTUITGTCACGACALCT GUCAGGTACGGOGGATTCCGTTCCCGOCGCACAGTL AC TTTCOCTICCTTOUCGUTCGTATTAA ATAGACACCOTGTCCACAGUCTCY
    HS
    ١+.
    VY : ‏هوية مثوالية رقم‎ ‏الوعفم ] الخكت د 10001 01نا0ن] أذ ا عاخن تخخذي اناهن 11 اقب ! المندمعمف لت عض زعطامهذن ري ل‎ GOGAGGCAGAACGTCATATGAGAGTCGGLACGGGAGGUGTTUGUTACOTCCGUGUACTACAGE GOOAGUTGCGOAATATACUTGTCCCAATGCTGCTACGUTI TIC CCT TC CGCGOCUACUG TAG AAA AATEACAGTCUCTTCATACTOTUT SEQ ID NO: 32 TAGGAGGOUTUTICOAAAGGTCOGOAACTOCGTAGGACGTGOTCOGUTOGACAGUATCCAGGAAT ATCATGGOGLGGAGCTGCAGACGAGAGULTGGACGACAALGGOTLALCTCGGUCGCTGACALGTT GUOLCAGUAACGGAGTATOCTTTTCTCACCGUTCCOGUOUTTIUCCTTCGACGUAGGUCAGAAT AAGTAGACATCAGUGCCACACCCTOT SEQ ID WO 33 CTIGTCTCCACTCTGATGTTOCGUTOCAACATTIGATTITGCTOCCTCTGTAGGCATACAGTTATIG GUGEACTGATOGOGEAGATUGTG A GCCAGCACTGCAAACGOGUCAACTUCTCCTCTUTCOALTAAG GGATTAATTAAGGATACCTTACCCGCGGOCTCCTICTCTTICOCTACCTAQLOCUGCUTTATTAAAT AGAGACCGCCTCCACAGOCGCT SEQ IDO: 34 CTOTACCCTTICACAAGGOT TACACGCTACCGATGOACTTGCACCACTOTOOGGTTCCAATAATT GCGTGGCTOGGCHGTCAGATATATTOCGOUATGGUAAGUGGUCTGUTCC TCL TO TGGGAGCALCT GGCAACAATGOGGHATTCCAAGCCCOUAGGTCCTTCGTTTTACCGTOCTCGUCCOOCGTAGTAT GTAGGCATCCCAGAGACTACCTOT SEQ ID NOS CAG GAACCCTAACGAGG 3 TTCCGCALGA 0+ CAAATGACTTGATCTTCTIGTCGGCATCCAGAAAT GOGOETOTCAGAGCGOCATGLGTGAGLCGGCGGGGUGTGCGGCCTCATGUTGCTITCGCGGGAC TAGGAGTTACGGGGOATACCTOTATTGOCGCTCCGEACACTOTACCATUOCTOTCCCGECGGAGT A TAGAGACACDCCCTIGATGUCATAT
    شكل ١د‏
    -١١-
    AR ‏هوية متوالية رقم‎ 01301-70140001 ‏الممقمكن حت دتك رارع 1008 اكقمم ماقت اعم‎ GCGTGGTTOATC TOO TACO TT AAAGGGC TCTGCAGGCOGE TTC TICOGCTATGAAGGTACTS GCGTCTGOAAGTGATGCTTTTOE TAACTCGOC TIOGA TGTCCCTICCTOGCGTGUTTTAATAGGT TGICAGUCOCTCCAGACCATYT SEQ 7 CTGGTCCCATCGUTAGTOOGTACGUTCCACCGGTGGAGTAGUTCAGATOTCTGAAGOOTGOGAATTY TAGAGOTGGAGAGACAGACGTOAGCTAGAGCGGUATOOGACCTOOTCCATUCGUTCGAGGCAA TGGUAACGACTOTTIGAAACCTIGCUCACCACTCOTGC AAT TT FCCATUCCTCACCGGLCGGAATG AATTAAAACCCACGTCACAACCTCOT SEG 1 NO: 38 CHTGACAGHGUTCGOOTAGT TOGO TCCATOGTAGTGCATGUGUCGATATAAGTATACAAGAAG TACGTGGCTTOOOGTCTGACGAGGGUOGTCAAGGCAGGCGGCCTCOT TO TAAGCTTACGHGOGT CHGCAGHTTEGRTAGGTTACCTTACACTUAALTEATAGTUTATCTAT TACTEGTACTGUG TTATAA ATTGTCACCCCOTOOACACCCTCT SEQ 0 NG: 39 AGGAALGCTTCTCGATGGTTGUGCACATAGGAGGGACTTGATAGTLGGTGGAAATCTAAGAAT TGCATATCAGATCTGOAGACGTTAGCCGACA TOGCTAGCABACTACTCCOCTTCACACGTCAGE, GAAAGLGATGGAGGATITCTTGCCAACGGUCGCOCTTCGCGAACCOCTTCUTOGUCCOGTCGGAAGA AAGATACTCCCCTTOCACADCCTCT SEQ ID NG an CTTOACTTOGCTCOAGAGTTICT GOGO TTCCATIGTAGTTGCAGUGATGTOGRAGTCCGAGGGTT GEOTGGCGOTGCGGCAGALGTGGGUAGATACGACTGTATGCCAGUACCTAAACATACGLOTACC AAAGUTRCGOTOUATACCTTITCOCOACGCATATACGTITICOGTGUCTCTCACGUOGTAGTAA ATAAMTTCOCCCTCCTLTTCOTTY
    -١+7- 17 : PH) rely a ‏ع0 ميم‎ - 2 - a 2 . KanR Na << ‏توافق زر حل‎ 8 5 N ‏غير مترقف) تفي‎
    "0". 0" ‏,أ‎ ‎1 0 88 ‏ماعب‎ N 0 3 ‏ا‎ N 88 ‏اسن‎ 1 Jp NN 2 TONE BN Cot 4 ‏ب اا اصل‎ ea a =k ‏"م‎ NN Fcc ‏بد‎ ‎EN ‏(بالإنتزرون) قب ةورع‎ ‏اع‎ ons ’ Zmlip 3 UTR vt PRIYFP v3 ‏(بالإنتزون)‎ ‎ai 1 FE ‏قة‎ ‎AmpR AN - 1 ‏ا‎ 0 ٍ 0 : > ~ Aw 2 3 7 i Ni Ng AAD v3 ‏(غير متوشف])‎ 8 ‏حفن‎ +R Wn waa ork ‏ال‎ Nu ‏توافق ذرة‎ ‏الم‎ S$ » N ; CHIR N Con 8 ws iD NN pDABIOSS47 8 ‏وبع ديه و11‎ \ id gems &§ ‏قر‎ SCBV V2 ‏معزز‎ ‏ب‎ ‏د ما ب‎ «SS ‏حك امنا‎ rh wv atl a AF ‏توافق ذرة “لج‎ ‏لام‎ / “ous ZePei5 3 UTR v2 YY ‏شكل‎
    -- ‏الا‎ ‏تف لمح 1 الحا‎ ‏وم مار 0 ا‎ ‏دضة‎ Riese 5 yd ‏توافق‎ ‎Naw 1 ‏أغبر متوقف) ات ا‎ ‏الل * م‎ Ni 8 ZA N ‏لمعه تح‎ 5 NA \ 80 N 3 ً 1 pDABLOSE40 OY X ‏جود‎ NS \ i Cate SPI UR \ Ba > N High ‏قحم‎ ‎EN ST IN “Nao ‏هم‎ ‎ri NS Er am "86 ‏كيين‎ ‎Amp f Zmikip 3 UR v1 g 0 ‏ال سم‎ ‏لج ارا لصي ا‎ 19 vB ‏(بالألتزرون)‎ ‎kan® Ay 2A SE ‏الل‎ ‎N 3 ‏(غير متوقف)ي سيا‎ 88 S \ ‏توافق درة‎ ‏ل‎ We N 8105 ْ ‏ت- جرفيو‎ 219 :
    HN . gh ‏ب دا‎ 3 ‏ا‎ ‏ا‎ PF a. ‏الي اله‎ SCBV V2 Je mr ‏وان وا الس‎ A 0 VB pd ‏افق‎ ‎SPUR? VN ‏و‎ ‎Crya58b1 5 1 BYE (ihe ye) 28 YY ‏شكل‎
    ARE A sig | PE 8 ye zmUbil V2 J Jr ‏كلور مفينيكول‎ OW ¥ ‏الب‎ ‎81161 ‏موقع‎ “gi \PATYS T-DNA = B ‏جدود‎ DRB101917 5 ‏مضاعفة السرعة‎ N 8 wit 1 {ERR ser _\ we T-DNA ‏ل‎ A 33 3 wl T-DNA ‏حدود مر ل‎ 3 <2 10 ‏حدود هر‎ ‏ومح اا ةا‎ wha T-DNA ‏13ل‎ 23a Overdrive { atl SenR ‏ونام ب با‎ ums raed df ‏)ميم‎ Cs AS CS [arte ofA « + 2 NS vad gle pa) ‏توافق ذرة 87 ل‎ N i Mires OFT mi ‏ب 99 تتم‎ " 8 Wedd hy & : BSCRV VY 13 T-DNA ‏اب جدود هر ل‎ Ce R.
    SCBV V2 ‏معزز‎ ‎T-DNA Ades LN ‏و‎ ATI 7 ‏كين لا‎ 3 Ni ‏توافق قد‎ T-DNA ‏دود م ل‎ 7 RQ 3 ata at Zmiip 3 UR V1 AN Lf Sad hae ‏(غير‎ ‎PATYS / BY 0 eryasabs ¥5 / \ EE 31 TL v.00 BEE | SiPinil 3'UTR v2 mil V2 ‏ا معزز‎ ٠؛ ‏شكل‎ ‎
    ١+ ‏الي‎ ١ ‏ا‎ WS 00 LL ‏توافق‎ ‏ال‎ O A N ‏ل“ << زوين اط‎ AY N Nee 5 ‏(بالإتترون) بدون‎ 4 \ { i : ‏مجعدو تطقوم‎ 0 / sty . Z N 0 DO j NEEL Col E1cbal Ny, & ANN an ‏وو‎ ‎Sim ‎att} ‎AmpR i; . > 7 Zmbip 3 1 ‏يوقم لي لهي ب‎ ar ‏ا‎ ‏ات‎ # ER Nn ‏ااال ا‎ 0 Ni R Le ‏يدون توقف‎ (Os ANY) CHIR Ni NF DE A ‏ذرة‎ GH NN » geniR N a 5 " ‏قام ت-‎ 45 : hi ‏سب ماوق‎ 3 1 ‏لا‎ ‏ل‎ Pa i SCBV V2 jim Siig TIE ‏لل "0 ب من‎ ‏كن ا ليقو يد‎ Mines ZmPers 3 UTR v2 Ee GUS - ‏توافق ذرة‎ Yo ‏شكل‎
    ١ - 2011 ‏م‎ / 20134
    >. ‏الي ل‎ MADE v3 kan® OF Ns Ng 2 eB Nell yw ‏اليل‎ eed ‏(بالإنثرون) بدون ا ّ| جب‎ 3 ‏ا‎ N N 1 Lx ‏توافق‎ ‎N 8 N : ‏65م ال‎ ; nt “NN : 9 NS sate on 2 B ‏ىوق‎ ‏أب ا‎ 5077 V2 ‏معزز‎ ‏ل اه ا حل‎ PEE RR XN A az” ‏ترايق زر ويك ا‎ ‏ال‎ F UTR v2 / aA EVE Eg ‏(بدون‎ ‎Cry35Ab1 v5 T-DNA-B isa Overdrive / ai 508 0 / ‏م2‎ 3 UTR v1 ‏لاطي‎ PAR VE CEE INN 28 A rE 3 No 52 ‏(بالإتترون) بدون متوقف‎ ‏اليا‎ N RN *“ ‏ا ب‎ wae nN Eas ‏رك‎ [Lig Sl N 3 S : ‏"م‎ pOVEL08720 gy ‏الح‎ ‎Orff ‏لدان‎ IN 8 7 i ‏ا‎ Ri : ‏اناا‎ promoter vi T-DNAJA sss ‏املا‎ Ny
    =. pgs a Aga a Se ai ‏ب‎ ٠ © ‏د‎ BYE TLE ‏ندع :"تع‎ 2004 ‏(بدون توقف) م 8 م نب‎ 1 ‏ا ايت‎ # ‏جر‎ 1 ١ 5 vs / \ ‏الواضيع”‎ FUR v2 mUbil V2 ‏معزز‎ Y 252 3
    الج يد اي ع اليد عات بجو ال مادج جو و ‎RT‏ يرك اجاج جع لحر حدر حر ان ااه المج ا : الالا تضحا نا اداج الإانة بلومققيان ‎CATCRETIRCA‏ حنيت وحن تنا الال اح اانا واللفظنام تقض م دانع أجل ددري عا التي ‎RETAIN‏ دجوا اي دانع لجرا الراك كم رو و لضن ادا ‎CREAR NRT BONER‏ ب ‎CRATTEMIST ITRORZATIIA ALTTIGITUT TAGIIZTACE‏ ونان كدق ‎LR GITTEAASTT‏ ‎mal TRL ARE TUT CRATTAT‏ مادا تايا رط ددا ‎FR‏ لاحر ودام ‎LEI ATETTACTIL CURGATIUTE‏ ‎OOR3EIARGT‏ نج لماج احا ادا نافد سعط ‎IED ATTTEITICE ATTTRATTES STATTGRETH‏ تلمحو مج لم داج جرم ع لدب ارا زكرا لتق اجاور ارج فريك ‎SEOCECRTAR ETTTETACAD‏ اي عا جه وان ارا ‎Re Br‏ محر ‎IPs APE ain Foe SIE dod‏ الوا لم ضام ‎SI UR abort‏ انو ارو نيه ‎SR st AF PAE,‏ رد لد ا لتقا لتاق ‎TAGRUOTSSy‏ لازا لق اناي انراج رات الاق عاد للا اررق انارق تالكا عا لان ااا ادا عضول ا تمواق ‎SATUTTTRGA‏ فقا انار ‎GUOGCRE0AT ATATGRATTY‏ الاتمطوى لا حيط مق امكاح كي رك تحت اطي ‎TL Re‏ ب يوم لامح جاه راح دياوو لا ‎Feat ode,‏ ‎wl‏ ا 2 ا جح محم ‎ACQIOCALIDE ARTTROMLTS‏ لاض عت لا ار لكك درت الا اتات انا 4 ايه 77742 4140 ‎Wa Tiles‏ ‎FY UTR wl‏ توت انع نوق ‎RAGUARATAS‏ جنم دا لهك ‎BaGTAGTANE‏ الم بخ قم كرد ‎hi CATARTRATTY‏ دي ‎3OINE‏ ميقت لح وح حر واج نر جر ا ص ريم ار ال روحت متخ ‎IR RINNE, A RR I‏ و ورا اح احص ع داه و وريج الا قت لفقا اتويات رصن ‎RECURRED‏ انتم الما اناق عاد الاققم اناما ‎Dak‏ ‏ا ‎anil 3 wER wl‏ ونع افع ‎TARDY.‏ اا دعق اانا رطق فق لبن عدا نايتا اننا لضا اناا ‎Sa‏ ‎wi‏ ورت الت ‎Fado‏ ‏ا لتقي تا لعاف ‎DROGCEINIA ABRIIDERY‏ توصت تدا ‎GUIBACEIRR‏ اماق ا اقشاع 6 ا ‎SARS‏ ري ا اه لظا ضار بيه الاي ضارعا ل كاف مراع انك رقا ركم ال الع اح با لاله الاي ركاه ال ا اضرم الاب الع لاط اي ااا بابض الال انه ام قار ل لع بام ااه يه بهن ‎YOUTH wi‏ مت ‎RE‏ ل خا الا رج حبك اليا لاج ان لات جح تجا حر ليا جا ا ا حي ‎RASAGTCART‏ الج رد محمد من شكس ادن تايا معدا الاج ضاق وااو ‎Fad TACEROFEAL‏ ا ا ا ل ‎inured‏ اتوم لدان ‎PRAYER‏ بتاع ‎FmLEp 3 OEE‏ اح - ‎STE‏ بوتوي ‎TN SITIES TT TATA AT TATE ST‏ جاو وميا ‎[IST TLR UR,‏ ضفن ال ‎EDTUCTHTGE TITSTIACATY‏ افر قر لاطو ‎DIAN AEITOTEATE GITTOTINIE‏ ‎TERR me fred dm en §‏ ‎FRATEE TY ORLITO Intron‏ أن اح أده لريب لد اداو تود ال أل جرع با اسار ا ‎RNR TOR‏ تحجر الخ ضح حا ا يج اا ‎MRR TR ND TER‏ دحي جحي ‎WE TTY‏ دضع رقت طن قد تق ‎TRACKCETAT GRATEATRITO THSARURATER‏ حانج ضام الا 2&0 وجاارلة اللي دا ياه ‎a NE PN‏ ااا تا يا راي راجيا ‎Fe‏ ا ‎SN‏ اااي ريه ايم رار لايم يفيه الجا ليه اح ارقي مت ‎v3 {with‏ لت مط ‎TRATTTOATR‏ ايم جاه انار ‎SISSTOTEEE CRITTERS SRALETTENST‏ انر نا تتا تحاط ‎ESR‏ ‎{With invroa‏ لك اا ‎UNE‏ اه الى لوا وض اردع ران لالت هللاوو دوعن اليا ‎RAGHOTGACT‏ انا لاا تاقاظ انوي ‎inErend‏ دج وج 3« الات وض ‎TORCHACALS THRIIRTIDT TOTTSRAGID‏ للستت لمات ‎TAL SIGGEERETE AACTTEANIT‏ ا ‎me Fmd dn cd em em‏ اصح ‎TE‏ ‏لصت تود ‎[mith‏ اا اللا تداع رع ل ‎mR man mmm‏ لي ا ل ل ل ا ا لي ل ل ا جين له حا لاا ‎TUARREETER‏ :دام اهاب الجا انهه مط جاه اميد ‎ASTITEREIDT‏ م لالض جد ا اس ‎i TT‏ حا الا ان ا ل ا ان ل ل ل ‎a‏ اذا ا لال نجه الت اداج صضض 1 ‎fwith‏ الم لالتحا مص اوه ‎SATIRNRIED TUTTE IAT‏ لمتكم رات ال اتنا امنا لالت ‎LAL‏ ‎en nr A ph AN‏ ا ‎A SEs Ne arts Ea A 2 fe a‏ ص ارمع تتح للخو ‎PRATER UE‏ ‎Ee a oe‏ ل ‎Fae‏ ‏ماج ىلق لنت مقت عد ‎THIACCATAD‏ ا ممع اا ‎Fede CATACAGTAC TISTRERSGAT‏ اباجيا ‎a‏ واي لتحا جه فلاب ب عه مكاي يها ألا ماري جا باو و لا يحاي بلا قا 5 4 8 ‎i‏ ريع واي رتح عا لاي ماي طخي ف £ شكل يكل
    BL ERE wd ley detain ‏الس ا ا‎ Fa WAIN AsTyam: AE OBIT NIE CUTER ER Ae VE ROYER IEA | Tl SANE ‏و‎ AR BN RES ‏لاسن نا‎ CTIATGRLSA, ‏نات دبعم الات تمحر‎ ACI IIE ‏امي امير‎ ‏لضام حرق تجو الا الاج ورج‎ ‏اا ل اا ا اج ا انحا‎ ‏ل ل‎ RANTS ‏امو جا وان‎ ATR ‏اللي لي ارج كي يد ورين حو الجر ا‎ SE EL ‏اماج وي المج‎ ‏الما يجا الما ارت تيم را الاي داجيا الخ ايا اام تيا‎ ATNTTRSRAR ‏يمه مك ادي‎ ‏ايا ماه تيح تاه ايه ييه ضيه‎ A Ae SA A rR Ae re ‏جود ف لاك ماده جيه‎ Sr SA A ‏اب امك با ياوه فيه‎ Ar ‏فيه عه‎ brn PRLVPR wi {with ‏تلمدطعة‎ ‎Soni AES RS IVER ANIA ACNE EEE Bt SEA ET ‏لي ل‎ SS, MN dA RE ‏امام دومج الاسم ام للضي ال متحت دجي السام أدج توج محمد‎ WN ITNIDIAYR ‏ب ا احا ماه ب ا جاه معي يه يعي يه احاح مدر ايع‎ BT ‏ايا‎ NR ‏ايا افيه لي عي ايا عه ييه‎ NY ATA ‏كوه‎ NA ‏اجا م عه‎ A ‏باعي لا يه اح تا ألا جيه جيه‎ ‏احا‎ EE ‏لجيه‎ Saadeh ‏لاح ال‎ saw ‏ل‎ ‏الت رس اط‎ with ‏لمح طحية‎ ‏اليمج اق محقم فيا اجيم وعدي اميه تمض اوم د عد ممم ا‎ ‏ال تجاه يحاي‎ RAR AA A ‏ار يما احا يم ب بايا أ ييه تاي وا جما م يات راق تجا بات رجاه بجا باعي بحي لي ل اله ااا‎ FRANEE ‏مط كتج اولخد لذت‎ ‏ا ا ا اا ا اا خخ‎ EE ‏جلي ان جحي الماع راجا اي لص ا م ما ا اموا ع اله ا حم ميج‎ oa ‏مر رايا الح لان لاا تار لب اللا لاا الت ترد لانم ةدارالا ااا‎ NN ‏ا ل ل‎ NN NE ‏ا‎ AN Se ‏ا اح‎ ‏ا الا د ال‎ ‏اج ا م ا ال ل احج‎ EN ‏لاي لعي اللاي ل ل ل ل‎ BA ‏ل ا‎ ‏#باستا ا لاي الغ ااا امتح‎ QE TATRCEND ‏ا تا الم ع الا مقا ااا ات‎ ‏لابح شاع نه‎ a ‏جاح‎ Ba a A ‏بده‎ a8 Ae ‏ا بواجي ماع لم و با كات ا‎ SN AR NAS ‏يا جا مشي يا لوه هعم او ا ممت ده ع‎ NYT ‏ا امل الج حي‎ Ayan RAYNER +0 ‏تمسح كد‎ ‏ل الح‎ A NII INIA AR Ah Aa ARTE ‏الم داح لاض الما ااا‎ ATGATITRSE ‏الوا م ادا اتا مر اسان ااي‎ CEE ERY ‏ل‎ ‏بلمسعحة الجت 3+ معاد‎ ‏ل اي‎ Tp Sopra LEER TIRES ITT CONIDIA AA CUT ‏انما نزاوي لمان الات باكيم‎ Hed wR Satin domes ABD L WR nm STOR can ACRE fat NR YE EIS SANE NS A RA A RY, RA REE ‏م اي العم د ا اموس لحا المت سد جم امات اواو امات سات‎ 0 a AA a Ae SE CN A i Ae Fr A TN Tian ae RE hols 3 ARE owns ‏تدج‎ ‎LENGE ‏الخ اوج اكد اا دالوالا لاد المع مات‎ ARENA RIND SAPIENS ‏ا ل ا‎ Fa ee ‏اا اتات تح حت تا ا ا تا امم الت‎ ‏تمي مد تع للسحقة‎ yn ‏لدي ا الا ا ا نا‎ a TE ‏جا لجان اميس حاتي اليج‎ Ea ‏ايض لج ارا ايا الحم ا يي اماد‎ 4 ‏ارال ران اتيم متم اللي ااانا الم وى الماح كيم رامد‎ STRAIT ‏مرا الما‎ ‏جرحي ايا لاي يه‎ ea ‏عاديا بم يي‎ ng ‏محا اما‎ ee ‏برجي‎ a eA Te ae ‏الا فيد لد روا مجاه‎ aa oe 1a ‏وله ماه ميدي‎ fe ‏جد يك‎ SR ‏لمجم جيم بح‎ ‏اله‎ wl ‏رودي مي‎ TOR BE ANN SRL AIR SEL nN | ot At TE TE YS BU Bt MO ST ‏ال‎ ‎ALL AURFIARRTT ‏الا ممصم المت سا ا فى لبا ف جم‎ IAIN nA ‏الا مجه بحاي ا اح ايه لايع لحلاف‎ a Arn ‏باجا ها مهاعم تيه ها الات ايحة يا افج ف اي #8 تاه‎ 8 in ‏اي اه‎ Ar i ‏ال بدي ار م يجيا‎ ‏اط الال لالع‎ sd in ‏نشخ‎ Ed ‏ماي جة‎ ERC ‏الح لا اجا فر لا تدا ماه دوع ام لكر ل احا‎ ٠ ‏مرك لحف ممه عد العا المي الى‎ RN LEE SRGADESANT ‏ااا اي‎ IROIRGINIY ‏لي لاتير لمج امور رصي‎ ‏بي لجيه‎ SSA ‏ب يرا معي تاي‎ AA ‏واب‎ I NR ‏ا ا جك‎ NRE ‏بي تاي م وا بيه‎ SN TN YS ‏لاكاجاة فيه تيع و تي ماه عه عي ني ايا امه‎ ‏النسطمة‎ we ‏يمع جد‎ ‏تالالطا ا‎ NAG ‏او او‎ SAAR ‏اوتاه تيد يض‎ EIR ‏مض الرداة ري ديق‎ ‏ا‎ ‎BRL WE EG ‏بجع‎ ‎aia TR EINE TEC ANAT {RI ENT An RENEE RT AA ON SRE ‏المت اااي المتض فقت تايا . الات لان دلي .ترا باجام اااي نايا الما لاا‎ NTT ‏لحا ا ليا اي ناته وم‎ AS AR ‏لتحا‎ ET ‏ا تاه و لتحا اه ااه وا ييه الح جاه‎ RC SG Xe Ve 5 RS YR NN ‏لج وا خدج‎ HAT-L AT ‏جح‎ hoes ‏ل ل ل ل ا ا ابيع احا سن ل المي ب ل ا راي ا اي ا ا ل ل ل م حم‎ ‏الدع ل مح ا الك العم الاق لكام تتا لالت عت لمكت تمع تمان‎ ren a ‏اتبيه‎ A AE ‏لاماي اي يكلا افيه اوقا لاج يماي‎ ee ‏ااا بايا يا ايا لتقا يه ليا ايه يه‎ A ‏مال مايه بيع يه ا ايه ايا با لي اياي‎
    ABW. NER ‏اي‎ ROLY A&W wd fhe sua) a PUAN A RTI ‏ا‎ BAS 8 ny ‏ال‎ A MEY SUA BL MN IE ‏ديجا حب‎ NN AN 23 RETREAT ‏لق امم دتما الما ا الم د صا الس فكت بدا‎ ‏ييا لايع‎ RR ‏لهااي ايه لي‎ AA et ‏يا تاي اا ييه اي مايا توي ا‎ SE ‏اهديعي يع اي اده لهاي اي‎ AS ‏بج جا له ايه جيه باعتا اه ع‎ 0
    -١“4- AAD~1 wd ing ‏دمعي‎ ‎IFEX ‏بالا تان‎ QUEDIRITNY ‏ابا لحك لتم‎ RSRCTVRLEN TAGLINES PRIMES ‏ره يحي ا يي‎ ALIN Ne ‏الي قبي اليه‎ Aa ‏اليا لاماي اا‎ TE ‏لال ايد بية لخبي لاي ب ايع مي كايا وي ليه بي اميه يه يك لكي رع يحاي‎ ‏لتحقعة‎ vd ine ‏تمع‎ ‏شو ا يي اناا اتا #ال متي الأ ااام ااي الاح ابا لحتني مقا تي‎ ‏يله بيه فيه‎ Ro ‏احج الما يا حاتي‎ A ‏دايا‎ SA ‏يا ب ها لله لك عا وا جه يا‎ 8 SAR SN ‏ماده لاا‎ AA ‏ا مح يد ا‎ EADS ‏مه‎ ine ‏تحية»‎ ‏مجح اا ماي اا التاق #لسسد سكسا اص اكد مم اسم كمتصات سكا الا ا‎ ‏لماه بع ايحي ماي يداي معي جد يي نت رماي‎ AAS AT ‏مام ع ايه اي اموه عه ياي اك اع ايا © ايه ع اي بج وروا ايه جه تاي يا £2 جا اياده اي ايا‎ ‏ال‎ VE ino ‏الا‎ ‏بمو مت عي الداعت لاسا الا لني لقعي لضا لاي لقم تا لما اسان اتا م‎ ‏لباه يه جعي اموه‎ me ‏بحاي‎ ATF FRA ‏لا جه اا لاح ع ايو ايم ااه قح ليا لمعيه يح ا مكح يا جا جاه دهاج‎ Ar ‏ع جار لاي يا ب هج‎ ARID wd imo ‏جم‎ ‎ERI SITAREEART ‏اد ع رقع ماي ماد مار الم اي صا‎ SAREE ‏الس‎ TERR SRE ET ‏اماه يديم م‎ on ‏ليه عاط ريه‎ ara eed Ara ‏بردي‎ es ‏ايه باه زرديه‎ i ‏مااي‎ ed ‏ا بر‎ ane ‏لاي تو‎ ed ‏يمتح‎ WE Ine ‏يمعي‎ ‏اخ د عض م عمد لبد ص اميك المج جم عي لأس ا لي سا فت ا‎ ‏ا‎ SAHTALANTAL ‏ارج مارم فق اه المت الى اج ضري د قرام امهم لتحم م مت رةه‎ ‏التي ااانا رقنا الام لامي . لايق لت ما بترتي لان ا‎ ATICAANTAN ‏اااترنية ارا‎ ‏متسس تج ممعت دجم امو تاي الم دبعي تمس محم سمت اا‎ IEE ‏لض ما لح المع معد اج ا صغم الالح ضعي مع “جد ص ا مستا‎ EER TITER ‏انم ضر لوقي‎ IINATRATDARY ‏لحم لتحم وا‎ GAURURCHUR ‏عالضالا‎ ‎LER JIBHITEH TAR STRAUS IAL ‏امي لا يعات‎ CHTIRTIUIA ARIA TITS ASIANA ESHER SENFACENI ‏ورنوم ادا ااا الح ا اه عد امك مم دامر ا لاد تود الا ارم مق‎ FURY ‏اوموق الخدت عم لمعت ااا‎ COTRESOTAY ‏الال تانيع‎ QUATGRRTIA ‏م ع امد الاسم اعت لاع الام رت الا ا ااي الك لوت الع ا اا جد‎ ‏امعد الاي اج لاس ات تتا لطي‎ CRATTOTASE ‏المت ارت رمو مساح مت عم لمارا لاما‎ ‏سد لومم المت تتا امات معدم ا متعم قملتدسامم عه مسمس ام‎ ‏يتمهم ليمع ابم ممه صغم جع حمق مسنس سا تايس المي‎ 3 ‏اص تدر امممع مجم لمعه اما ا ضع تمض فو‎ AARLATARRS RE Sd ‏اتيت الا ارد تضق لاسا‎ HRIEINIRCES ACTIIRCASENE ‏ل و تلا تيا تيمم‎ ERE BEIRGORINNT ATTAATRIS ARCANEIATD ‏جيم لق ساي متخ انتوم ممتي عار‎ ‏الجا ااا رايا منت تر ضيه امسا ليان الام تارانم مرا حرا مما اتات مجك‎ ‏ادق سمت تمع ات‎ TAD ‏امم موا الت ات اعسات وي التصسا سمت‎ KET) TELAT ‏ممصم تع لسعو ا ضرمو اتح مج‎ ARTIS ‏د ل‎ FEE ‏اللا لامجا‎ CTRITTATTALY ‏تي‎ TRAD ‏مج دوي امش ميا تعد معي‎ ‏ري جيه ححا ياي‎ A ‏بلي يا ل ايه اي يا لي يتح معاي اي ااه لحي يا ليه أي لحي‎ A ed ‏جام لجيه بي احا يي ل مااي يي ايا ا‎ MTR ‏ديا‎ ‎RAE RATIONED ‏اران لا رك ا‎ FIO IRARATA MAGN ‏أنه لكر اجن ورا الل ا م‎ RIA ‏ياتا بدا يا يي وكيا ايا كوا يد دا وا حا راي اوري حا‎ ea ‏الا اه رابيد اا يا ايا يزه ل حا ملكي ايا بره اا واه‎ MIn Uddin 41 ‏تسمه لعي لمعه مادا اوج جر ماع صو ممع ماي‎ 0 ‏تح مج‎ ATHY ‏ال ا ا‎ WF ‏مه لاي ال تاي جني يه‎ SR A ATA RAS SN A ‏م تاتشك ما متحمس لدت تدم سوم مايه الاستستتت تح ال‎ ‏ددس صا‎ Y \% 9 KS 0 3 d
    =« ¢ \ _ ‎YE‏ لاسن بسي ‎LEN‏ ‎NA Td A fa‏ بر ماقا ‎RB‏ اااي باه ‎NN 7X A FRR RR Ar‏ لماي ‎SN‏ اي لتحا تح ‎A ST MA BERTON RN NAINA SEY BRN AI A IY‏ جر جما مين ‎SII‏ اج ‎RO‏ ‎CANANACTAD ATINASSORY ATOMEIRART‏ الست قد لمات اس ااا ‎EEL TRASTOIDIS‏ سب ‎PRS one‏ ‎wl‏ ال ا ا الا ا اس ‎RA ve AN RR‏ ل ‎Th TNR Bh‏ اي ‎et RN dh SNE oN A‏ ل ‎rere ENN (YN YEN TE SLT‏ رضي اام امم دمض ‎ATIATATION ARSADITOMD AUNAKININA‏ اس مسا ‎A320‏ ‎epee rans dea a‏ ل ‎SURV persian wl‏ لخدام ‎ae‏ لام ‎PN NSS my Ne‏ بال ‎PN a a NR An, SN‏ ره يداك لجار يرح واي باح ها ‎NN‏ ‏معد م #ممحقة لما ‎CPEEMIAGRRY‏ ا اس كي الست سمحي ‎SEL STPEERNMT‏ > ل ‎wl‏ ال ل ا ‎ATEN‏ ‎ol‏ لح ل ‎ACER‏ ‏الت ل ا ل اج ‎A‏ ا ل ‎A‏ تت م لي ال ‎A A‏ الا 8 ‎AA‏ ل ا ام اي ان الوحت يمره جيه ‎AAAI AM BINED,‏ كت ‎ANNAN‏ ماج لالم يد ‎sua SRR ATI, WE‏ تي وحمي ‎CATATNIBIG‏ صق جما اماس تمصا اسع ‎ERE‏ ‏ل الا ‎we‏ لمج مج ‎SURV‏ ‏ا اجر ‎A re‏ مايه لاح ااه تاراح هيلا ‎AAT‏ اماه تجاه اماه ‎re A‏ امك ميات احم ضيه جاه م ميج و لج ل لج ‎ASE‏ اللي يا ‎ARN TR‏ و لعي ل ات كه اع ل تو ا ار ال ا ا ‎FETRREYRIS‏ لتقم لص لاقت حم اتج لحك االمعمعة تعسى ااال_ ااا التي دي اجو جوم باج ري عه مصاع ‎ACER‏ ‏يل عي لي ايل بحاي لهااي اياي اااي يفا رلك يهاي ‎i‏ لايع ايع الا 5 امل رتاه ايه اي ونيا يراه ‎a‏ ايه لي يل يا جح لايع يم نحي لقاع 3 لايم تجاه د لسرا اجا ‎RARE‏ اس ا ل جا ال مان اا ا الجا رن ‎AN TR RL‏ ارا ا ا ميخ ال لك اال اا الس ‎CUTE‏ الا ال ا كياد الت ل ل ا ا ال ‎pass‏ ‏و الا لي المح ‎Nh Ae eed Neer‏ ا ا ‎ve‏ ا ل ا ل ا ل ا ل ا د ‎eT‏ لا ‎RANE A SYR SN‏ لال عسي الاح ا اموت المح ار را احم ا ل ل ا مضي اف م ترا اج ردج ا ا تمش ا من نم ا تتا امسا ا كرس مستا اتا الت ‎wl‏ عه مادج بات أده ‎SrA‏ يا باع ‎AA‏ يهاب جيه ‎ALA‏ ايه عا يه ع ‎A‏ اديه اي أيه يا ا اق ااي ‎ae‏ ايه اموا بي يحاي فاه ‎AA‏ لج ايه لايعاي لهاي يع يداه تيع ا ‎AAT‏ ل ل ل ‎TAN AYE ATR‏ م ا لك ل ‎CAA‏ ال ارج تايا التاق تف ‎MIATA‏ رعق ا تا .اوفع لاا الست افا ا ‎ol‏ اام جور ‎WON‏ ‏اا الح ا سا الس ا حا اليه بي له واي ‎Fa Ne‏ الام بر بيه يا احا معاي يا اد ‎A‏ ا حا ااه بي اي تايا ‎RE A NN A A‏ ري الاح لي احم اي ع ا مي الت د اا الم حم اج الا ‎ANT‏ ل ا ل ال اا ا ام ا ا ا ‎CELT‏ م اا ا رطم التي تتفي ‎TIARA‏ امال لكيه ناو ‎IPR IATICAD‏ ارت لان اي ‎ARAL‏ ‏اها لدي لتحم م معي دي ‎puowsten‏ توا ‎Ae a‏ يذاه اي ةي ‎TAR‏ ع يجري لياه ‎STRIATE‏ بيه اي ‎SrA A ATE TRA‏ ا ‎EE ATE ST‏ مج عي اي ‎SA‏ ماه ب تجتحا يه ‎A‏ ماحد ييه ارح دا ل ا العا ايا ا محا ‎Or I‏ ل ا ا م امات انا يي تح و ال ا ال اضيا لفكي لومم نك نالعشي الاو الح نا التتدن نمضا اندم ضرت لاهن اث التتاة ال ممالا > وي الموج تم اح ل ‎Se‏ ا ا اح ا ل ا حر ا ا ا بج لامكا سر اتا لماي الصا مشا لبي م شوشم متا أرق الالح قد ممع كي ل اي اوش صا ‎SLANT‏ ‏جد مومع «ممجممح م مع لمجم كه تمه ترضح جمد ‎ATCOREGHTOH‏ ا لي الس ممص ‎SAY‏ ‎AS 2 8 pe 8 eee‏ 28 111133333310114 ‎SN Pe PATIENTS TVR A RT‏ ل ‎AN FIN a ct AIAN BY‏ ا ا ‎Sa‏ ‏الت بار المج لديم كرض لمت ته لطبي الت ابت كحقعة ا لكات ااا 81 ياب ره صعب لبتي ‎BRD, (RT SII RT, TA RY‏ الاي لت نيك اتا ‎a en pr er NE‏ اا ‎ITERATE.
    FEHR STERNDY AERATOR‏ الا تت ضيه امد مضق تحط ‎SEAL‏ ‏دي احج با مدع خوط مياه اوكا و ب ل رايا و حي ا و يار يه يحاي اوم كي اااي ‎A‏ اا وا متا ايارو لكايه مايا ‎A‏ يق اما متايه ايا ‎NA‏ اديه م ‎Se i meet dA‏ ل لا ‎ANY AN SY‏ ل ل ‎re CE BAT BET IR‏ ‎UAW TEES IAR RUNTIME ORT ras‏ ال اي الا اللا ل اا شد ‎RAE SESAME‏ ‎BEY passione wi‏ يدايا ايه جا كر اي ا ا م ‎ST‏ مر ع ا ‎MS‏ ا ير لك ايه ل ‎TT A‏ ا ام ‎AA AAS TAS‏ عه ياه ‎A a‏ حنج ‎eR‏ ‎NNR Bd‏ ل ب لماجي ل لجا ليه ل ‎BAAS‏ أ ل اي ا ل ا ‎ATINNITHIRRT ARUITTERSS‏ امعد لح «المحعس ا أن اماس فعا الاتدااا لت امت ال احج ارج ارت ورج جد ا م امت جر ‎premier €l‏ اقم ااا ‎ee‏ ال ‎ew‏ جاده ‎ae a A‏ جاو ايه لجال ير تراه اه ‎a A a Sa‏ ايه جا ريه لاج م ‎EN A Ei‏ ايح ا ل ل ‎EEO A AINE SOTA CEO‏ ا ل ا ل ل تح لمحت اعم ا ‎MEAL‏ لمم حو لضم كود دتمم عمق الا اع لبا لمعا ااا امد
    وم ‎SORE pidmatar‏ ‎Win ne BT Re A A a AA A a A tm at se atl RR nD A i A‏ ام ا © ‎ECAR OR ET BNR TAC BER BIT ER‏ ادك جا ‎OD, AE‏ يي ا ل د ‎ry‏ ‎TIUHRALERAL RVG EITHT MIGARSRFY SUSTTEULNG‏ ناتاه اجات ملاتا ‎EXEL‏ ‎va‏ الجن ا عدب ‎SUEY‏ ‎SE EEIRT TE‏ اوداك لطر ارقا ‎GRONITINIARG.
    ATETAXMEIAL‏ الف اانا الوا ‎SARL TARGUS EIALR‏ ‎pramober vi‏ 320255 ‎EN TA Na a ee i a a Ne i a men ema XS ir A Ne Nw ele‏ الاجم وت رد ال لالد ا ماد ااا :الوا تفع امات نضا تداق "اناق ال ‎YE‏ هج ماج وو ب بكر ‎A‏ جيه يا لياه راي واي ما يه يه أ كول ‎SA‏ لواو يها يه مياه ‎Re‏ اكيت جاه ع ‎Re‏ يه اياي يمال بعت تاك للع نات ناته ممعت كي لاد دع ‎CARNE‏ ارات لمحا اجام ‎OR TO TRON‏ 7 نتم اتاج لزان لكين ارا ااانا لوانتت الال تاااة لارام الال ا هرضن نقيت تأت الال لادان واي ‎STATTATTRED‏ نهدي ‎wa‏ دجي سي مر ‎SEY‏ ‏اونا رياب يل زعي لحي مويك يا بواج الت ‎Sd a a‏ ححا ‎i‏ رحد ع اي أيه يه ‎Na RR A Tr‏ وميه ‎AR‏ تايا بسار ايه لاه واي يك ‎DOTTED TITIES aT mT‏ ادو سا ‎mT eT en‏ اوس ‎IT TNE‏ لدجو ‎TIAN OTR TAT‏ ا رع موي ا ‎ADTASOCATY SUACTSLIES‏ اجا واوا ‎E230 TETLTTOOTT CTOTCUORUD LATCODTTIOD‏ لحب ‎ore = i ST Sa‏ ‎Wid‏ دجي يحاي لووط ياه جو جاوما رلا ‎Sr‏ اح اه أي وراد يه اورم يتاي ‎Ne Sa NS‏ ياه وحار ‎a‏ اومان يحي الام واه رحا لاو يدايا ‎Nea‏ يكام ‎NR‏ يعمد بجا يم مر الح تحرج حيس ادا ا حت وا ‎RT‏ ال اجاج ا الات ايد ون ال وت تخت اا الوم وا وود جو ضع ‎TIITAT‏ عاق العا لئان فى ‎STRATATAREE‏ لأسن اج الى لاسا لاب ‎SEAL TET TAICA‏ الماح حي حا ححا د ‎promoter‏ تايا ورج اه عه لامو أ ا لوو يالوماي ‎Sen ARC‏ المج ا اس ع ادا عا امس ال و جد نقد لصفم ‎TSARGEITIG‏ ماكر مايا ‎ERTS SARTCATUSGT ROTTORMOCAR SGOEUIGGERET‏ ‎FATT‏ عي لوس ا ‎EER STR STAT GAC‏ وار ‎Sai FRO ERLE CTR REET‏ ام لأا ام ‎GUTLATETDT GETGEATARTZ OTETROATAT LAGTERRIDNIT‏ مجاه الا ‎SAT‏ ‏تور اه الاح سيت وجي لواو حر عو ادا رح و حرو م حرو الح ‎BOTT‏ لحرت ‎BY‏ حت كين الك الجر ورا جرع اجرج عضي ع المج مدقم ات لض رمق اع لاقام قدا امنا فشك حت ‎TACISGITADD AUCARGTIAG‏ تفط ااااطياا اال ‎TOFAANGRL AT‏ امعان لاما راض نايا لالضج بواجا اا ما مدت لقنا قاضال ناض تمع ات ‎CASTIRTTOR‏ صفق عق ‎ATTRITIINT‏ الا حاتجي اقم امار قط نيا ‎io He 7‏ ار نص رواحي ‎RT‏ رحج به اموجه ع كرح تج عر جم ديح ات تح ته حدر نج اا مح ‎TR HATTIE‏ تي ا 7 ا ‎TOFAATEACT CACTALTUAT‏ لتر لاون امف ل ارات لمارا ددني اتا بترت الا ال ما تجاه جارك اك المشاء عع د اماجة ال اكيب د ل رتم1 باخام دا لون د ايض الو تلوت م انه راجالا لاض لوال الل فا اللا اا لو ‎IAL TI A‏ موصي .و ‎Fe XD AYE LS‏ لماي كت لتو مج ‎I,‏ ل ا ا ‎TART CRTTTTATTA IATTERTITOR‏ لبي ا راهع ‎USRANTAATE‏ انان جاجةء لشجة والاجاجا لال جار ال دا ا حا الج اج ا الي ال نا ان تت لج مار الوا ‎SI‏ ل ماع اا الو ‎GEARSTTIEY‏ الا اننا تو ‎BOAACTUAST AGUTIETIOS TUTRIUOIAT‏ ا احج حا محا 7 لحويماه صا اماج ل ا ال ان سكا الحا ا ام ا للد ا ا ا ا ل اس لماج ‎SUE me‏ ‎EEE no stop)‏ ‎ite‏ بيذ لي جا ‎rH Ce fr‏ ال جيه ‎A A Fo‏ بام جا مه ‎RNR ARS AE Bn fe nr A An Fn A Hr he‏ لقي نج جيم ل ل ل ل ل حم ‎GRDTARLET:‏ لاماي لام غار رد ها اناه هام اداج لاوا نار تاءاغاناتنا ملاتا ارت لود اريت را وان و2 الل ا ‎sro!‏ دا ‎EVE‏ ‏لي لال امال يه ‎a SR Ne i oe eo FE NR NAR Sr‏ ل ‎NE SP‏ يه ضيه اح ‎NS‏ ‏جات تق ‎SRATICANTG GOUTTUATGED‏ تتا اا ارم وم نا رقع موا اناق ‎HERE‏ ‎stopd‏ مه ‎HVE‏ ‎OTITIS a A BD Se‏ ب ‎eT‏ م اج ‎EN‏ أن ‎RT PE ERE TS RTA RT OR TOON TT VE‏ ار ‎Sven‏ ‏انه وال مك مكو ‎GOUTOTANTT‏ قتا العامة عد لصح عدن ‎SARL SGIALNTAETIT ACTACTUCAT,‏ الح ددا ‎SVE‏ ‎Sete‏ اا ‎Ne Se‏ لاا له ‎A‏ ااي ‎Se NA Se Sr‏ ايا بلقاي يه م يخاي ايحا ‎Br‏ ره ‎Nee‏ اضر يه ‎NN‏ ‎NTR Tr‏ اا ‎STR‏ مسي لمكا ا اه عاج اه اع عع مع ال ‎BTR‏ عا رسع كاه ‎RN‏ ااي نويد التاق الالقته قد الفا ااترارانا ‎TUUASCANGT‏ ارات لمر را ‎QUARTAASTN‏ اران تالالا الا امح لاضع ‎IEE‏ ‎AE {me susp)‏ حا ضاي ‎maa Fe‏ ارال كام لوا ‎AR pe Fr a ea‏ ريه را ليا حلي وكا لحر جام لدي كاي ‎am re re‏ ل ل ل ار الما ‎mem‏ لتر ال كد ‎ANT‏ ا ‎rT HE‏ جاجع لازال اران ‎STOTIACCTG MUTTRIATCRA DUTACGRTIURT‏ لاضع باجنا ‎CAREEURRIT‏ لدم الال اع ل يري - ودع م اديع ا لوو و جروا اين بي دا جرع امسر ‎TERRE RT.‏ ال دراج بج يونا ا م احا ادي اج مون جد عقا ‎OTTITERCAT GURGTRADET‏ الا شيش ا الست #ته اذا ارج القن انناف التق انه
    كه ‎Nae IEEE‏ ‎wh‏ تقد وات ريكيية إ ‎SS‏ يه او ‎ee‏ لخم بول ماي لجرا ‎a Na a EL‏ معي ايه لاير تجاه يه ايم رمه يح محالم ملا موت الج حق وت تاج ضرم ماه ‎TEUDIERINT JAMDRRRETS TAUSARGATIE‏ ال ناتاه ااا ‎BOREL‏ ‎vE‏ تحظقة توصي اجا ‎ne‏ لايح معاي بيه أي ياد جا ‎NA‏ هه لمم م جه ا تالا جاه حاف ليها امه ماني بها ‎Fr‏ م اانا يا ‎Fm‏ بلالا امي مقايه ‎ve‏ وي اا ب لاا وه اللاي لجالا ماع ةبيعال ا اله سا ع م ا ا اج اب تع د اج ل ا ل ل ‎TRRGRATHAL‏ مالي لاا لزيا اتات تان ‎TOTUEALGAL‏ الا ردت لقانت ا لاوما ال ‎an‏ ا كب تطمكتايعه ‎rel‏ ا ‎Nn A Se‏ ل ل ا ا ا ‎dn‏ ا ل ‎mE‏ ال ل ‎Nn‏ ال لي ا ‎ER DRT DAE‏ ضوع مرح مكو عدا عا كحضن مض نمي لا ‎ADGALTATAN ODTORASTSS‏ سد لمعه ا ال كام نقحت ب ‎SUCHE UY‏ الدع موحي قح تيان ‎LUODIRACAEN‏ اتصاخ علطاو ‎Pad ATIATOACITY CUTROSCIGT CRARTARUTET‏ اجر الا ا ‎VS‏ ل ا ع وري زو يه يا و يا رياه يه ا معاي أيه ل له وتيا أيه ‎re a ad Re‏ را حا وز جيم ‎NR‏ لماجا رقو وساي ها ‎RE‏ يري مه ارك مت بذج لقم قاد لمق فت ثم الوطم مد لقم أب ترقت ان الا لت اشرق اخ ايا ‎Teer ASAT‏ ‎i a Pe NA Se Gt i eT Tne‏ د ‎Ne tf‏ ا ‎NL nN rr TA Ne he Xr‏ ‎Re Cra Ree‏ اجا ا لع ‎RRS‏ روج اا لي ‎EN‏ اي لتر | ‎Sade ri‏ ا د ‎me‏ م اا ايد ال الا ال ا ا ‎SEA GAEL‏ ا ابل لخ كم شعني اك ارات وري ‎REE‏ كح ‎RA‏ الح ع اع ‎PSEA Tah MY‏ حصت مضخ ‎RTE‏ صخ حح تضم محم ‎ERED‏ ا متاك قوئاة لمق ارمق ممه التق لويد م سجس الم ااا الح را الا وان ا ‎CYVALAD.
    WX‏ ‎INT Tm BT TUE Te TO NOD Ba Dg‏ الل ‎STATINS TS ED RT TS‏ ج ددح ‎TT RS DTT‏ جحت ‎ma‏ ‏لكات بض دض ‎Se QUenToN TORACRIIAN‏ تعض انمه اناا ‎TOA‏ لاعت لضان لتنا الاي ‎LENGE‏ ‎wh‏ لطم تمع ‎QRERIEHNCATYY DRUAMIGEILA OOTHITOELS GETS TREE‏ لط تا اتام ‎STE THODOGAAET‏ ‎wh‏ ال اي تتكس تمق ‎TOGACARGAS‏ حضتت لاض ‎DRONETECAT DAPGETHRARY‏ اتا اتنا ال ‎WE‏ النطهقة تبعت نجام وم ياه آم لم يا جه جه ب اليم ‎ron A tH‏ للا يللاه ل يي لعا فا اه ايه مارجا اذم امنيح £85 لماي تي لم اجا يلاع انه مج تعن حامج جد ‎DUTCRRSANGE TACORITAMNT‏ حو د م ام ال تعبت الم رفظ انتج ‎v3‏ ل 0 روج داح ا صرت ارس ‎TT als By AT‏ توح اج جات يج اجا دخ د روحم شح اودكا حصت حر د اج رح اح جات اي ا تمق انق جتان مم اتام مر اناا ‎OGABRARAAS‏ قتنى 0 اتات اتا لصتاف ال ‎WR‏ ا ا اي م ارت رليم ‎A A a NP‏ اج راع حاب لايم رت يخاي رونا ‎vr a EE‏ ويد ل ام ييه بي لط يم يه ار وا م ادي ‎A NRT‏ اج د احم المي اج ذاه الملا امه دالج الس اتات م ‎TNR NE‏ ا ا ‎geri‏ 7 بالقنا ناقور مداه لاد الات ا تقض تور رتم ملاتا ‎ERCCAERAGA‏ الم ‎Mer wh‏ ‎wh‏ هي ‎Try‏ ‏بغرا يع ل جلاعا ما 4 جيه تاي ‎A Rn bn Re XR a A en‏ اااي له ‎ee SR A‏ لال را ال يه له حمالم ‎rea‏ تت ‎FTN Emme YR‏ الل كات ا لنت ‎err‏ ات ‎Tian NCIC RTE, RS HD [AT‏ متت كم و ا قات أرق صني للدت دوت لاحت لسرا تان ‎PUUDSEACED‏ ا افق د لتقف ‎ERR‏ ‏كي طق تيص ‎TOAUNGCRLARIE AACATYAELSE ASKAGTIECOCA GGARTASLTIO‏ اناه لاد انتج دام ‎GERAGUTTARSA‏ ادا ‎of‏ لمق ب حب ‎NS‏ الح جات ‎SORBENTS RAC TEN TID INIT EY‏ حك ‎DORI‏ الع ا ا ‎Ta‏ ‏عد بست الا ‎SOTDIOTIAY‏ الممضاتاج نضا بض ‎CUASTUUNTS‏ لضا فاه اق ‎SEONRTOENTA‏ الا ‎ASAD wh‏ حي ‎Mp EERE wh‏ أي ‎NE‏ لخم را ‎RV 8 RA A Fn NN AF A Ns‏ يه ايا م ‎or‏ لاوم ‎Ne a NA aN So A NN‏ تمشح سد ‎CESTTOIERT ATIOVIGORTIA TOURSATICL,‏ اقح تنم حت يلاعا ص ‎TRE‏ ‏0 ‏شكل ب \
    مي ‎ET ANY‏ ميت ‎CxyISabl ow‏ ‎ev‏ حا ل ‎res Bn es me te fa ee‏ ات ‎Gr nn eh‏ ‎any EE BN TT SAE BIN ET RE YT CTU (ET EE EL Ch TSI TE EN Bf LT EE‏ تل ال اي تاي زنير ال للدي ‎REE‏ الاق اشر انق ماران اا تاضافح نسم ال للضي اه ‎RRR‏ ‎UTR aed‏ ا ‎TT‏ ل ‎STPinII OY UTR wl‏ ا ‎SN‏ لد ‎A REN NT‏ ا ‎Se NR‏ ل ‎A NTR STN SA HNN SY‏ ‎DEGLI ND RT AR TR 2 ny‏ آله لاس دارب رامن ودر ‎QR EIR ١‏ اليو واه ‎TE EAT en TUTE PVD‏ ‎TRATTRATET‏ لمق لوو ‎RICE AGITTRATOS DUTACRAUDT AGADTTETCL ATTTTOTGSE‏ ‎UIE wi‏ :3 تتسمتطعع اجات ‎AED TIT RT AT‏ جع ‎SE EL‏ اد لوه وحم مسح ‎DE BEERS‏ عجج د ‎aa AMO‏ مت ا يقن نوالا مرق ‎TEUTARTIRD‏ اسهد طم قد قمخ عض وار . ‎Tadd ATEHARTARA‏ هد سياه لحب 7< ‎La Ta‏ لا رضنا 2 لملتمدطك» وول وز ‎Tr RT‏ و أي او وفعي بيهم له و عه اليم يه وم لاع ليام لح ماي ريا له اهيب ‎Een,‏ ني لا ‎ae NE‏ علي إل كرما يه باتعا ححا ياه لالم اتا لاله تقاف قم ‎STETRATTRD TRETTATITE RRTADIAGAYE‏ لد تا اجا اج ‎PIR wR‏ 3 تاتمرقم ‎ir A‏ د ‎NS fa RE ON‏ ا ايه ا لما ‎i Ar A NR SN‏ ‎TIT, OT‏ لبي حي ‎MOT AAR WOOTTON RR TD TIRANA, SA OR on‏ الا ‎Tei rah a tas Sag‏ ‎LATINTTITEL TEARITASET GUATTETIATT‏ اااي المج معاد ‎REL TIATOUTERA‏ ‎wD‏ ود ‎fPiniT BY‏ ‎ATATRGATAT ASKTATTART CATATRTRAT TRATRTUART TGEETTRGLA‏ ان مكصاضة 01 ‎Gwe wl‏ »ىا دم نجع ‎NH Ve‏ الع ال ص ‎RUrTOTCATOR‏ تا )وجح وا لايم عد لواو اليم صق ‎TERY SRARTIENTOT‏ رجاه جعي وجو جايح الموج مس ححص وم ليسي ‎MT FT RR‏ لاوا الدب جين لماج لوحيو الماع رد و مرا ارج ‎Pri‏ اج صصح ورتم الوا قتالا قم لالع تماد النوقزرا ات وال تقاض تارادالا الاج رج لمارا ا ‎ATTTARATEY TTREERETI‏ ال فار الف ا اررض الل تاو لوا توي ‎TETAUARBNT‏ دااع ‎TER‏ ‏ا المج مج لجنا لض رتم اديه كاتس ميت اتيت الجاع وج د ضام .جا قا لص اتنا الما اا اس ‎ewdhil promoter vi‏ ‎Sn ACR A‏ ريا بار ااي بط ريا ‎MS A‏ يه بكاوم ‎NN RN Se A SR Nn‏ راح لك 0 ريه ‎Na SNE‏ ‎DTT TE RAR‏ اح ‎SONNET‏ ا ووم مااع حورت الصا مجح ‎TONY.
    SAX SNOEADE TL‏ صوق ‎TAR‏ ‏لتخم لتر ‎TAAGTTATAR ARMATTRILR TRATATIITTT TTETIACALT‏ د لاج الور اند ال ‎IRai‏ ‏عب ‎pronetex‏ لطم ياه ‎ea‏ ب بي ل ولاخ ‎ee‏ ويه ‎mR mia‏ يا ليد ةوه يد رساي ‎ee me‏ اليا الم فاه وك يا دي الي ل يي ا برعاي لاا نيعي اي كران لي ‎TRA‏ ا ع اكلا مالع ل الي ام الور ار شك مضا مقو اق ‎ASOTTFADTY‏ ااا د اتات القن اما كرا ا لاون التق لاتق اح ‎WI‏ بم عجعج ‎mihi‏ ‏رست جد رفاغ ‎TITTREAGES DIRTATARAT GARRIAGTTAL‏ اماق اردور ند قم ا مقت كاتا ال دي ‎Ih promoter‏ ‎NST, A NN i Ni Fa Ne PS Ne A at A‏ د ل ‎Ne PE Si‏ اجيج ان تو اريت ري عا او و الموج م ال ادل و يا اماد مدال وان لعجي يجيج الماح ‎tt‏ ما ا ‎I 5A‏ نن ا لدم داج داج راجا لاد ارال اااي ازا ارق للارييا لال دار مضق جاو اراق ال اورت ‎SAGEROEATE‏ وني تا عومج ‎Zmtthil‏ ‎TTTATITAGTA‏ القت اا لوي لم مقف ثم لايق لض التكاجية. . ‎TITTTTEORS‏ اتا تاد دي اجو عاج ‎SPRAY‏ ‎TO TE TE‏ دتري رو د جد اليس ااه مس ال ريه مي لد اع الجا ا لالت لج ا احج و جود لتقا ‎ATITITITAL‏ تمد نقتا تالالا اا ارام ضااة جا تر اياي . غات ا ساي لضت لاجد تر ير إلى رس ‎Sram‏ لاج ‎reli‏ ‎Phil promoter vi‏ ‎To PT 8 el it‏ ل ‎Ph Sh A 2 To NA Sn Mae A SP i‏ ‎TACIT TASTT RTE mT‏ اليد ا ‎RYT‏ ادام مسي الاي سه ال ‎ana FTE RTT ERT.‏ ‎TATDITASTT TITITATITA‏ لاد باللكسكا مام 1 تكد ‎ASTTRALONAN‏ لالم مامةجالفد ات ‎TTATTUTADT‏ 2 عي ‎poomoter‏ اتيم بدي اياج ايد اي تر ‎a‏ اياف رحا وا مال ييه ,3 ‎TR‏ يفا ري جيم رايا ب اليا ‎ET‏ و ركيد يه ل ايز يد ‎TN‏ يكح هري ‎Nl‏ يم وريد الا امو فعا اق لشت ا امد لاعت محقم احم ‎ATRFITTRRA TATARBATASR‏ ا * 1 شكل 7 1 ‎i‏
    ا ا ار ا تي الا مح ‎wi‏ ا ا اتا ‎JERR‏ لمت ا ‎A a A Si a SR Sa A ee a NI A‏ ا ‎Yr Ne‏ ست ل ‎A NN‏ ا ا رن ال ‎IANA RE‏ ا ال د ا ال الس ‎AEE SANA‏ ع اله كت و اه ات ‎aad‏ ‏ا م الح لك الا رطا الجر لد ات تالالا لاجد حي الت لت ادع الاق ا د ‎wld‏ الو ا ل لا ورج احرج تحمس د اللنخلطمة وز كاي قا ب ‎ASA‏ جاه أي ‎BARRA‏ لحا ياد ‎NAT Teta NAS NN‏ ووه ‎Tee SN‏ ا ا ‎NAS NAY SA AT Na‏ جر رع ‎NAS‏ ‎I a‏ ات يات ‎YAN SRN RMIT EN STRAY‏ الا يجت اموي ا المي حا ا ‎oN VA‏ متك ا الات تر التاق اع لاض ‎GRITAENITA‏ لاا ا تفع اجا ا ا لد ا ل اه لأاضال اام لدج المت اا ‎ve a ea‏ ل الج لج دكي الجا ‎i‏ نج مما ا ل جوج و الما الجا جه لح ا ‎ay AYES NINN A, SST NENT EOIN‏ اي ال اا اش ااا لسرا ارا لال مسي الا الال جد ‎ERE‏ ‎RE Tr‏ ‎WS‏ الح ا ‎SIRI‏ ‎AN‏ لام اي يا ‎Se Be‏ يم وا ‎Se AN a ARN‏ قوم ‎AR SAS EG AS‏ تجا اما ‎AE a AEN‏ ع ‎ATOIAGARRET WRITERS AROSE‏ الا ا ا لاوا ‎REL‏ اتا ساس اتا ‎SESE‏ ‏ااه الل يع جرت مدان ‎ae‏ ل تدج ‎We‏ ليان اط السام ‎AE‏ ل م ا ا ‎Rn‏ ل ا ا ا ا ل ا بي ل ل لا ار يلي ا ل ا ا ع ين ااه لجل راي لساك لي ال راي ا ل ا ام ا جيتس ود صر لت ته لضي جم امد وجح س/اة ممصي ‎ROOT‏ اولمعا ا اجو اعم يع ا يم رح ا لماع ار ال ا ل و د م ا د د ا ا ل ا ا ل ل ‎NR‏ ‏ل ل رج الت الم د زم وي ا الحا امف م الا م ا الا ا ضح وو ممعي تكمح وميم د ممم مج الامج ترد ارس ا ناا ىلا1 خالاب“ جاه الج كاي اج يي ‎SIRE SY‏ مار ال الما ‎RT NE‏ ل ا ب ااي الاي الل ا الجا ورا امور لوي رجي و ال ‎CII NR‏ ال ل ا ال امتح دانم اودمتعا واد كدت اما اتات تاد للستت ااا 8 ا ا لتر دري ال ل ‎wl‏ سج تيم ا ال اتا ‎x‏ ‎Sata A SA‏ ل ‎TARA RYE AT eh A RT SRA‏ ل ‎AT aR NR A SS Sa SN‏ ‎A‏ جا ا ‎NG ATEN‏ موا ا اورت ‎SO‏ الداعت ‎TVR‏ لمعا ديه وا 0 لحي اج لاي ‎Aen FRONT TURNS SVE‏ مامتا تج لاا ارا لازنا التو لا تا لاوا لاسي الات ‎INRITSRSAAT‏ ات راوص ع ‎[WELL‏ ‏اا د اد ات لس ‎A A AT‏ ا ‎A‏ ل ‎a A Th‏ د ل ‎NAR,‏ اسع واي ا لت ان تق لا ف ييه اج ‎MA‏ دنال ما في ‎NOLIN Yo‏ ل ل ا را ا ا ام مايه اكاساكا جه اماج المج ممتي ان التي ماما اما الج اد مايا لمتحا لمت كيك تت را ل را ل ‎FOTIA‏ ‎Gromer.
    WI‏ نط ‎eis SO A‏ سوال ال ‎Ee A i Sb ae‏ اليج ‎SIE RIAA A Ci i ns XENI‏ جين ‎wos SEU CL AR SRLS‏ ودين لمر نواكن ‎Lite‏ ورد < ‎maa RANE‏ ب ‎UP‏ لون اجيم ااا بال لاسر ‎STICRTOTET CPOTTAGHIY‏ لأسا لاما ا ‎RIE‏ ‎gn ar‏ مضه ‎Wat Wet wee‏ ‎ARV AA PETROL RL VL‏ ‎Sa at A A re‏ ا لس ا ‎RN RN EE SRS SVE SANS SES RS SAR SR‏ جع ري المح لون اج ‎TE] METI RA NS OA ST TA ROR STONEY ROTEL VR SRM SIE IA NIN TN‏ جم ا ضع ‎CAURFITINIA‏ اتح سكا ميات اتا مضع اتا ‎PEE‏ ‏اليه لين ات مجع لا الاج ‎Wo‏ "ان شب لجر اللاي ا اس ل د ا ات ‎A‏ ا د ا تا ل ادي أ ‎A‏ ا اتح لا ل د ا ا ل لا ل ل ا ا نج ا ل لات ل لي ال ل ا . توا الوم المع مات ا مسح جاح اا ممم وحية ‎CORTTERELE‏ تي ال ال ا وجا بج اام ‎ETT RR TAT‏ لج جم اب او جات لتو باه حل الأجمجن اضر ومنو رص وض ال يون نو وي اجون جمد ردجي ما عد يي لوس لاا تاوما الا وجي الاجر 7عيرو امومعو راي ‎TETTTDEITY‏ ااام ‎Sill parameter wd‏ ا محرو ‎rR ae A‏ لجيه ‎A rr ne NF near rm‏ م مره ‎Ne‏ اي وا ££ ‎Nr‏ اللا وار اي يي ‎an‏ دام بي ا ا راي ااي مر ا السو جديا لوج ال ا ايا المج جا او جا مووي لا ا اي الوا ا جلي ‎CTR EMEA‏ اج لام ‎LIISA‏ لاطا و الا الال اا روا لعن اتادلا ‎REE SASNPERDNT‏ ا ا ادي اج حي لكا له ار ‎wi‏ مم تمصع متام ‎SN Rh (NN‏ ل ‎AN ATA RAT NAR‏ لد ل ل ل ‎aa‏ ل ل ل سحت وا ار جر الوا اشوا موود ‎ANTONIN‏ ا ارو ارم لوي عي الجر ادر جد احم ا ال م ا دوحج ‎IEMITREETTY‏ تيع للق ا الاو لل اكلا ا الما لا اي الي الح ‎wl‏ الجا مادج # الااجية ا لد ‎A‏ ل ل ل ل ‎A SYA‏ الج رار ميات متم لماعي وي نر تم 300 عدي يا د للم ل جيه ود ‎OVERTONES‏ تي خم تمك يجي الات سدع مات الابما اليس الا بس متت الي لض حار رت جد حب اح الدج تايا ‎v8‏ ال ل ‎NI PNP SNCS PUN‏ 00 ‎A‏ كج ل ‎eA ET‏ يجيت نئي التو جار ال كي الجا رع جا ايو ‎way CRITI RAN‏ عدم ا تيال ‎CREEDTTIRD‏ لجار حا اش اد تدا لبج البإ لامك سياس ‎WIE‏ ‏2 ‏1 7 / \ ور
    الكو الواح لح ددح عورد ‎EE‏ ‎wl‏ المج مدعي ل تطتتصة ا جا ا ‎a‏ اد رح الو مرك د ‎RT A‏ ال و روس ‎COTTE‏ ا دع ل را ايح ل | الا ‎Wad ATHEARADS DITTIETTOR CTTEETTETS RTEATETECST CTHETTERHNRD GETUSTTUAY‏ ‎wo‏ بترتت داج ‎SERIE‏ ‎(LN TRA TER B SOT LINE‏ ل ل ل ‎Asn TEED RT A AE TTI EBT A‏ تدافا ازعم ‎GTEIalTray‏ الاو اكه تخطة . مورت لتر راق تضق لمانا مضق الا جار ‎ETL‏ ‎WYOMOL Er vd‏ ال الما لد ‎SoRARMTLTIES‏ جاب كك ل نر تا فض ‎TEDETOATRD ATCTTCATAS TTAOTGAGCTTYT.‏ ااال انه راد جار ا ‎VELL‏ ‏جم المج لج م جم > لمجت ‎vi‏ اله لامجا اتات ‎A 1 A‏ م لت ‎PPA LS Fi AAT‏ ا ل ل ل ل ‎AS Sh‏ ‎A TEE‏ عي ‎WOR TOTS PTT LOTR ATS TAT IED‏ لاح اليج رسع ‎Sd TUR RAR TS‏ ‎TTTARCDIANE CATATAUADS ATOGCAIETG‏ لماجا اا لحان للحت تمتخو راجا ا ‎REDE TOTACAATRS‏ تاد ‎promoter‏ ال ‎Twili‏ ‎TURTATEIN TRACUTTGRAS TAUDTATIVA TIATAATSR: CRAGCTATLTE‏ الزن ةورفل امعد ال ‎EE‏ ‎groomer wl‏ ا ناتس ‎Ta‏ ا ا ابي لخ يا ‎TSR‏ وبي ‎ARE Sm‏ لوجي ا جا يو ادي الما لا طعي مج الج هد جات هذ انا امل ولع رجا لآ ‎ATEHATERCAT‏ تجاه د الط لمجاام ا كجابة اد ‎TIRTRETTAT‏ الاي ‎wd‏ احرج تم عع ‎Twill‏ ‏ل ل سيف رساك دسا لت لفت لان ميت اا ل لت لح ا ا ا ‎pe Fe a pg‏ اح ولس جل دبي ‎RE‏ وماج مر رجه لي ا ل ل ل ‎EARNS TITITTISET QUIDECOTICA TAROGITATID ATIDSOTIEG TRIIGITIOT TRTETIGATE‏ دي ‎TMUni) promoter wi TAT‏ ب ‎a Ae i Ne 2m ne‏ 0 2 الوم ‎AUER‏ فج بالا اا ‎DETTTRETEST TAITTOTEIZS S05 TalasTs‏ ميات لت قتا ‎SEAL‏ ‏الا ‎TR‏ ‎ERT wl‏ ‎ah TN SE a A Ru AR Se Sa‏ ل ‎RAE aN Rl a AR RN NR fT fe‏ ‎mn sre a‏ وروت حرصم احاح جاع رصح ات حا ا اسه داح حو ‎RS‏ مدا و ا اج وا ‎a TAT‏ ‎TEC TERE‏ عامقا اقم اننا اتاد رااان ‎ACTAGRRIIAG TDGRGRATIRS‏ انط مالالا ‎SEL‏ ‎EET wd‏ ‎NN A Reo Ne A xe‏ لح ‎CANN RN EE Re A a Ra eS a NN RT RN‏ اصع ‎TOR Ae‏ المع جعت ‎RSE CITT LGR BA‏ ممعي كم ‎ER BNR‏ لوجع و حصي ‎Cdn‏ ‎CREMMATA‏ اوداق ا ال ‎ACATIRAGES: GUITACHFG AS‏ :الت ا لقا لاف ‎TATE‏ لو ا ‎SRE‏ ‎aE de‏ عي ‎TARY‏ ‏الجا حي ‎pene mee BE ED PRCT i re‏ لاحل يي ‎Rn TERT BME‏ ا و زح ‎PTE ARE‏ مجك الجا الك لا رقا لع ‎GRESTTEIHEA‏ اشح اا ا ماني جتنا ات الدع الكمقنا امفط ا عي متي متا خا لوال ‎CROULITERR‏ اتيك توا نتيا ناا لجا اج لاا مايق لاضن لاا اا اح ‎FRY‏ ‏م اليه ع وتاي ‎Ae Hard she be isi‏ بح يوه لدعم جا و ف جيه ‎Aes en‏ اج قو محا لاه به ا ‎An rt is nn‏ تجاه إل اللي يجمه ‎an gon‏ حال ‎ECS Te‏ احرج وت اج ‎DR‏ عام ‎TRY Ea ET A.
    MURR SRE A‏ وضع سو كاك ‎ea I‏ وعد لمتحم مكعم تج دع الست عدا دج ‎ATASTRITED‏ اجر راع جما دحج ‎Thiel‏ ‎ERT WH‏ ‎nh‏ مه يي £1 معام رحا ‎Se ra A‏ يحاي اول اه الوط جرم م يا ‎BH‏ لجال ‎le Pe fr nn Re LR‏ ‎RE A RN NL TT SE By 4 ARTS Td BR RAT BAS Rin TNE Ta {EIT a Tr‏ لا تجقهاداة تمعد كايا ضور وج لالت مقن انيد لاج رق ‎CUTRGEFRTOC‏ ار مس ا ‎ERT TT‏ ‎NS Nh i‏ ل ‎a a ti Ne Th nN Se‏ ا ‎aN‏ ا ‎Nl i Ne HN‏ مح ‎An Ete Hn‏ لسوت حي حا تيون ‎TNE FETT EEA TRY ECE ARETE‏ اجا را تانق جارح اتا لالانا مض الالاوا براااي ارما اشاتان اران الا ارا اناا لاما ل الا لامالا اموي دي ‎SET‏ ‎Tea‏ مي ا يدب ره يح يا ياه وي ب ا ار لام بي ‎TA‏ ا ع اي وا ‎he‏ لاو ‎Ti‏ لاي اه كيح يا له جيه وك 8 ‎A‏ لوحا فيه لجا ضيه ‎NS‏ حرا رو لصوي ‎Le TTS NEB RAI TG TT Te Tm By hn Ten, gE Tn, (1 Tn TERA © nm fT TT‏ لاج الامتحا راجا ‎TEEATARURLS TATRIISELT‏ انما الا اناا جنا اطاط ا اف ‎FORE‏ ‎DAT VE‏ ‎hr me TAT ne ay fhm te fa‏ رجاه ‎ein aE‏ وليك ءاي يل ‎a a ed a‏ و ايد ‎gh WL Sy a mR A‏ دبج خوك و ‎NETS CLT SN IO mT A TT ERT TE, SNR ETE‏ المي ‎SR ANNE‏ لع ان تا عا ‎AEE‏ ‏لالد لذ حت اااي ‎IA,‏ لخاد ماله ولق ا ‎MYITIOTGIA‏ انا سا1 تاد ات الام اعرد ‎TIRFTITTTEE‏ الا
    شكل فاط
    PRT wD Amidp Ir UTR wi 10841 SCARRIUILN, CTRAGSTIDEA GIUIATIAGT: ‏ااال اقيق الا لضت ما‎ DOTAGDRTEY Tei 37 OGTR ‏حي‎ ‏الى جنعدمة‎ OTR vi ‏تح‎ EAA ‏ال ل‎ CRA ‏ير مي الوا م ارا اا ابن مو ارج رو لمر‎ RR ‏واوا‎ ‏امار لام ضاي لاد نات ااا سانا لات # الاتاه لاا تماد تار ا‎ RIUETRRCER ‏عي الجوواية الا الل عي‎ Aman ‏ةق‎ U = ‏مقتمضة‎ 30 WER wi ‏لقم‎ Se ‏هم‎ Tn AN a ‏ييه زه‎ a ‏لا‎ A, a A ‏بسار ايه‎ a ‏شرم راتحا يرا رحا‎ Ns Ah ‏امي ايه ل ا‎ a ‏م ليميا را‎ ‏تضم مم لمجي جح ويم ا‎ TAL ‏وده‎ TR RTI ‏لصاوو ع‎ pi mi ‏لاا ازا ااا‎ GTEITFTIDRE TTTHCTTTAS ‏ا تتا اناا رفاسا ارد‎ ‏اج اماد يم + ااا‎ ‏الدب لاا 2 متشا‎ ‏ل ل ل ا لاحي‎ TR BEEN BA ‏اع ال ا ل للج لل لا ل‎ ‏مادام واوا دربم اتا لضم تو ااا التق لاا اا ا‎ GUAGTEEETE ‏ا‎ ‎maT ‏حي العا كله‎ SAEED FY ‏كرا‎ vi ‏ايحا لاا له لام يديه امم‎ TN ‏ل ا ريه‎ WENNER VSS FE CRE TRIE ONE VES ‏جاجد اي اليا ا اا اعمتجا ارا لوطا الو يي امم ال مم تج لد تي لاا امقس‎ ‏م الحو ال ال تيد‎ ‏نا ال‎ TYE vo NN NS TN SEE Ne 1 ‏اد ااا‎ Ta NN 7 ‏ا‎ Ni fe ‏سا ححا جح من حا‎ Te te ‏ا لي ا اي ال تا موحد‎ VE AY ‏ار قا ام روه اوج ال ان لي او‎ SANT ‏ما راي ال‎ A ‏ااا فق الا ا‎ TRTERLIAST ‏ع امار انرو التي لبا امام ار 77 تو‎ Lmbip 35 WYER wl nn AN NA En ‏ل‎ ET NN RS Ee ‏ل اا ل‎ Si RIN NR CE ‏و امح مومع‎ TRA ‏رحا و‎ OT MRT RK So RTE RAT ‏جاع جات حرط‎ TE ‏حل ريح احاح‎ en FERS CIATTRATAS ATGUTTTSOT ‏مب ب دماج‎ GATITITASS TRUETOTARER GUATHURCAT ‏لامعا لع مقع اللا‎ TEATRITTRS TALTARTTAT ‏توتحا‎ TOTITLTEIL ‏قدت يم مامص مم ااه ا عدصت محقم امو مدقف لق مكهت امات المع ا‎ rusal TTRARRRIET UVECAEATRTE TTATTAAGTY GTUTAAGUET CRAATTTRATIT ‏يداه اعفد‎ EERE FIR ITN OER ‏الله‎ TE ELE TRA ‏ها‎ TET RCD TT ‏د حر‎ ERR TUN, Te ‏بحرا‎ ‎BREE: TATETOOREY ‏جانا ددجا اونا مادا اجا اانا‎ ATTTRIAATY ‏اناد ا محالت احا ناد ممه اماما‎ ‏حا اياج‎ ANT ‏الل ماج ا‎ TA AS AA TAT ‏لت كين ميوت لماج ع ع مام اع اي ميج‎ TT AR DORAN ‏لتقل‎ A ‏جك اج‎ TEAL ‏اماج ااال ااا‎ TUDAGEAATT ‏مايا ماج لكي لاي ادا مضه الاج ما عاج دا دا هياو تعاض ا قرس ايا‎ ‏ا‎ AMATAARGAT TTICREATIE, CRATAATIDE ‏لقالا ضار اتا لامتكا لماز الات‎ ATRDGAUEES 1i22L TOETAATTTE TIORTTITATS AAARTSTACT TICATITIAT ARMTAADEITE GIRGRCRTIIR RE ‏ا اد ا نج جعي الم جر ا‎ ee EE ‏دجم‎ A ‏ري ا و انج مما زر ناض‎ 1 ‏ممممممعوة مقت اللا‎ ATTICTAATT ‏يال لباقي ا عا الأو لبا‎ 11 TAOPOEDYGT ‏ال كم للضي تضق رن افكت اط ا مض ل واي الات صقا‎ PRR DATED / » 1 ‏ب‎ 1 / re
    ‘ ‏ااا اول‎ Se i ‘ i i yor a} 3 1 or i i i ‏لحا ارس‎ add i ‏الج‎ i 7 H H 0 ‏دو‎ > i i K i i i pos 3 H H SR : i ‏إْ‎ ‎i 5 i ‏تت‎ i
    Tv. RE Nee 3 FEN 1 TY SEE ‏ال ] الها‎ HN > ‏ميد اا جا ااي‎ i Sey 0 ‏سق‎ i . EM i Fr} i Yeo 3 1 ‏ا‎ > > REN ie i Ra 5, 1 > Jeet . NN ‏ا ع‎ LAS SE Fe > Tee SS 1 AEE TT a SO ‏أرط عا‎ SATA AVIV AVIA ‏الأ‎ VL ANY ‏كل الأزراج.‎ ‏امم اد ع متشا‎ PTA 1) ‏تو ءا ا كب‎ ‏منود 5 المسبتوى‎ "٠ ‏ل 0 > ا اا‎ 0. 0 + ‏خاخب رارك 8 يم كا‎ ٠١ ‏بخ‎ ¥ 2 ve 1 CAVES 4 Yo ‏اج ما‎ YAY ‏أ‎ CERI VeAYY LICR Pe 1 ‏م‎ ‎A ‏شكل‎ ‎* ‏0770/7/70/7/7/70/000//0لالاالللاللال ا‎ 7 A i : 1 ‏ب‎ { a Yen . = 0
    1 . - =< A of Ra M re > 3 H ‏مي‎ { H 1 ‏ل‎ . 3 ; A 8 0 ‏ا . مج‎ x ‏و‎ R A Pa 0 : ‏الت‎ eal FERRY A He safe RN 1 ‏ا‎ ‏اللا سا‎ ٍ : CACTI SR XY Frey $ ¢ RAS he RE Ma Li ard BY rer Sr re cent ‏مساق مسي‎ ‏فالالا‎ ! 1 AVIA LAYS bays ‏كل الأزواع‎ ‏سحو واي جد ع مدنا‎ ‏المستوى‎ las sie F- ‏الل‎ = AY, 80a vs YUAN VA ; YA, ATYY ‏باحق‎ 8 YY,2ve «x ٠١ AVYSR 5 ‏دده فيك‎ ‏“كبحل‎ EA ‏ا نا لق اك‎ YVeAYY ٠. Yr ‏سج اج‎ ae YA
    “VENA Yo ‏لفان لان اللا الالالال‎ 3 < = ‏ا‎ 2
    H . wy Daag [ag N N ‏الب‎ i ‏ا‎ ١ 4 - i N > = NR : ‏بس‎ ‎N Cee 5 +“ 3 Y . ed ieee ‏حصي ب"‎ x8 N ps Jn at Fran A Yea 3 x 2 Sed Ea 7 Ny Ey + ae Vom ‏حل‎ si Ee ‏ااا تق‎ Si . $ JEAN ETE SH ENS ‏اا اليا‎ age i Ey A ١ - ‏سل‎ pr sss ‏سات اللمسسس سس سسس يس‎ ‏الراخة ا ولام با‎ AVIV VU AVIA TL AVI LL AVY. ‏كل الأزواج‎ ‏ددن دف جز ع متشا‎ * 1 adh 3 wow sD 8 ‏المستو‎ “oi gis Ct ٠١ ‏ل ألا‎ A YYR,AVY.¢ Va AY YA » ‏مكاحت قح‎ ٠ ‏اكه‎ . 475 YoAYY E ‏مخضا ليك‎ ‏اد ا 8 4 خا‎ ١ AY EA AAV YA ‏شكل‎ ‎d ‎toy
    Pre. 5١ : ‏هوية متوالية رقم‎
    MSSGALLFHG KIPYVVEMEG NVDGHTFSIR GEGYGDASVG KVDARFICTT GDVPVPWSTL STTETYGAQU FARKYGPELKD FYKSUMPEGY VQERTITTEG DGVERTRAEV TRFENGSVYY KR VRINGOGEKE DGHVLGRNLE PNFTPHUOLYT WODQANHGLE SAFKIMHEEIT GSKEDFIVAD HTOMNTPIGG GPVHVPEYHH ITYHVTLSED VIDHEDNMEL VETVRAVDCR KTYL
    57 : ‏هوية متوالية رقم‎ MSSGALLFHG KIFYVVEMEG NVDGHTFSIR GRGYGDASYG KVDAQFICTT GDVEVPWSETL VTTLTYGAQC FAKYGPELKD FYKSCMPDGY VQERTITEEG DONFRTRAEV TFENGEVY RE YVRELNGOOGEKE DGHYLGKNLE FNFTPHCLY I WGDQANHGUK SAFRICHEIT GSKGDEIVAD HTOMNTRGG GPVHVPEY HE MSY HVRLSKD VTDHRENMSL KEFTVRAVIUCR KTYL rd v4 ‏شكل‎
    _ \ OW — ‏لاح‎ LR EET EER ‏امام م‎ PPR PP PT 1 A A A A AA AAA AA AAA AA AAA AAA SARA AAA RA AA Se me RY 1 Sm - : [ES — hh . ‏مسي‎ TTT SE 88 HENNE 18 ‏م أ تون‎ 0-3078 ‏ل 385 ن" تلطا ل" عبد‎ ‏تتمبيب }200{ أن‎ 6 ‏ا 1 ل‎ : S 1 ‏ال‎ ‎STE ‏لال‎ NEN Ta Ta Conn > ‏ا‎ TR mitt isi 1-1 2 1 ٍ 2 3 0 ‏ل‎ hi 1-4 831 ‏مودي ان ددس دلوو الحا‎ : 4 YEP © UbIZ-URS GUS Peri-3"UTR Lo pDARIOBIDT Uh) ‏عسل‎ ) ‏بس ...للا‎ HE ‏ام‎ ‎Lp-2UTEY yep Ubil-int ‏وريم 85 مجع ريم‎ Uhit-mind {200} ‏48م‎ ‎ery ‏ل حدم ده مه مه ممه ممه ممه ممه مهمه مه مه ممه ممه مع‎ Sm oN IRINA, RRR TT ‏ا‎ ‎PEE yep TE | SCBV-URS ‏ممم‎ Gus ‏الح‎ ‎+ 79 ‏سواط‎ ) ‏المج اج ماج امج حا‎ A EN EN rere \\\\ SSE ‏1-1اطنا ونون‎ ِ YEP POrS-RUTR 8 ‏ار ا رما ا‎ ns ‏ا‎ ‏نت تح‎ Be wo STI pe YFP ١ 5685 ADM-Int GUS “Par5-3UTH ‏تع‎ 5 ‏ا ل ب‎ Sma SEEN ‏ال‎ ‎RE ae ESE ‏سي اا ا اننتتاضع سد‎ ‏لاي‎ ype ‏ا د‎ ODE BUS ress yu pORRIO8TIE a ve ‏شكل‎ ‎
    _ \ o \ —_ ‏الا ااا‎ a pe RR ‏الها ا ااا الاو وا و و ا الوه‎ 0 ‏ا ا ا ل ا‎ = : : : : : i yo ow : . : : HB Sa : 8 0 : ; 1 : ¢ $i : : ‏لاو‎ : 3 Co : H ‏ب" : اليا و د‎ : i jo 1 ٍ : ‏ل‎ ٍ i ~~ : : Po : i ‏ل‎ Tas : a. 3 ‏أ‎ : . Do ; 3 ‏خاي‎ ٍْ ‘ : = 1 : : : i Yaad ‏ب"‎ 8: 1 : : H ‏ف 1 5 م 0000| 2م‎ : ; H oF : A ‏لم‎ * . : : i Pow Loe A 0 ‏ا‎ : H 0 ٍ ‏م م م‎ fo i TT J UU UU SUT UU UU UE JOU UU UUU UUUU UU UU EOL UU UU ‏ااا‎ ‎¢ ‏م‎ ‎1 4 TT ym ‏ال‎ CENCVSSRT ORGAN AY OR ER ale EAN ER ' i : : : { i : : : i H : : : H i : : : : i Se : : : : i H : H * : H bi : 1 > : bi i : : > : i PI : : 2 > : i io ١ : ْ: i H : ٍِ ‏م‎ bt : H ; : : H F : ; I : : : 7 : bi H : : - +: : i ‏ب‎ - : ٍِ : H g Ya . i ‏إْ‎ ‎5 H : : : : H s ‏ا‎ : : : 1 N Hi hig i : : 3 : : i 2 i : : x : i EE A : : . - : { to : ol : ٠ : i i : NE : : : i H : . H N > . : H i : : IY 5 : i i - : & 2 N : i of 4 : 9 : 5 2 : A 1 & : rd H ‏ف‎ 7 : i Pos : > HY - - : i Iw : hd HE > Ad : H HES Pt HS " . : i Ie : TE 1 H i : : : i Le : : ‏ابم‎ HS H H : H : H i : : : i i : : : i H : H : H i : : : i ‏أ ليسا لف رواج‎ FEV SUR 1 - (3 0 ١ - f
    _ \ o \ —_ ‏ال و‎ Es ‏إٍْ : : : : لير‎ $a : : : ; i : pH 3 s H al i : i ‏ص‎ © i = ed ‏ال‎ I ‏ات‎ EP go 2 : i oo i : 12 I N i = + : 0 : ‏ل‎ 5 H b) i : LI : 2 od i : : . 3 od 4 63 J 2 Sd $d 3 i : « : . : 0 i A ; 0 ‏ا ا‎ 1 : 7 3 : HE H 3 FEY 4 : : : i ve . . . a ‏لممس سس لش لل ل لل سس سس فت و و ا‎ ‏ع‎ ‎' & ‏ا‎ ‎LY; dab Ta RR ‏ل ل‎ 3 , ١ + 2 J ‏ع‎ A ‏يا‎ ‎5 § i 8 . a § : § Y 5 0 ٌُ Ra * ¥ é . \ : 1 : 1 & > 0 2 > x . - . . . J El YY ‏شك‎ ‏ب‎
    _ \ o Ad — Yoo Eel ‏لا‎ RAGE ARG Nad Bale alin : J 0 i > 7 Id > ‏ايحا‎ YOu 5 A rE of i ‏صم سم‎ ‏اب‎ i. < 0: |ّ ‏لم‎ ١ ‏م‎ ‎3 FE « i H H kd 1 I 08 ‏ري‎ ‎ay 3 : i Oya IR { a I = ivy RR ad : : ; : 2 : : : ٍْ “1 : : ‏ب‎ : ‏نج ال‎ ٍْ 0 | . 0 08" ‏م0 ل‎ N i 3 . : : yi LH x : : ; z : 0 0 0" . i. 1 : : 2 : ‏ل ام 7 ام‎ ‏م 0[ هم سي 100 ل‎ : Ea Pose S&F & Vi ov CF Sl CE CF a : J i ie 0 0 : Eo SE A 08 8 ‏ا ؟ُ‎ & [| 1 ‏شك ا‎ - J
    ‎o ¢ —‏ \ — ‎Ll : !‏ ‎For ok “ i‏ 'ْ :ْ : ‎i‏ 8 ٌ اا به 'ْ م ا ا ‎ERR‏ ‏ب 5 ‎i‏ 8 اا يي ‎IRN,‏ اا ا« 6 ل ا ا > ‎١‏ د ‎Po‏ اس ‎Yeu‏ © ‎١ 4 ) i : J‏ 31 ااا زايا" انان ااا 111111111111107 ا ‎LI‏ ‏ا ار ام | ‎HE SUR NU ST EE‏ > أن أ د اي ! الس لست تيح تت لجسا زع ‎anal‏ ‏لحن 0 جر ذأ ثبخ أجلأ اد ا 3 اخ أ 1774 ردلا 8 نم١٠‏ 2,14 8 حت ‎YAY‏ ‏ا 8 ‎٠١3‏ ‎IAW. : 1 ;‏ ‎٠1‏ 8 ع ‎٠١‏
    ‏. 8 7 شكل ‎ve‏
    _ \ 00 —
    2. 8 ‏م‎ : ‏اضر‎ i i cn,
    Er. sie 3 & ‏متا ؟‎ Fae Sov, + : TR ‏ب‎ ‎= 8 3 : N ‏ااا كايا‎ ‏مما ا ا ال ا أ ا‎ > ‏م مل‎ ٠ ; EE & ١ on Fa 0 ‏لدت‎ ‎EN CN A ‏اماف‎ CE WI BYTE ‏كل الأزراج‎ bod. 1 50 1 ‏جرخ المتشأ‎ :
    + . » ‏تا‎ ‎PY a AV A TY, AY 14 ARFSER 8 ‏تحت‎ ‎١٠١ ‏ابه‎ < 3,979.74 ‏لخر‎ - Ar VY A C - ‏ب اناي‎ ٠١5 c 8 155477 ‏بع خا 5 ا‎
    1. ‏ا هت كخم‎ 1 ‏ص‎
    _ \ o ‏أ‎ _ Fo ‏077ااان ترات‎ $ x BH : > wr : : ; Lol 1 ‏اساي‎ ! N SEEN EE IE EE EEE & i tion Leis ‏الم اا اه لما‎ ١ ‏بس سيا ل مح‎ A Ysa I ‏اح‎ ) ١ ‏تت‎ ‏لج كايا لامعل‎ AY OFT ‏أل‎ A ‏قفالا أ لا‎ LAY TEE + 5a ‏ل م‎ ‏م جر المنشا‎ ‏يغ خالا‎ YAY,YY4+8 VeAVeA 8 YYA AVY ‏م‎ ‎Ye AVY A BG YAY. ‏بيده‎ ‎YeAvie LG ‏لمي‎ ‎Ya AY EY ’ ; Ya), ‏لفك‎ ‎VOAVAY 0 58 ‏ا أ‎ . v veer oo ‏و‎ ‎2 ‎A " iy © ‏شكل‎ ‎toy
    _ \ o 7 _ 1 TT o- oo . 2 ‏ا‎ EEN ‏اص‎ ‎& ¥- ‏مسا تن الم‎ ] . ; FY UU SUT TUNE SU a ‏اتا‎ ‏مما 0 ل " أ‎ ’ FE ‏إٍْ‎ ‎E SERN TE Foes H a : : ‏ا‎ ‎٠ 189% ‏كل الأزواج كا تفلي جا ا وا اط‎
    ‏ا . م‎ Lite ‏جزء‎ NS ‏كأ‎ AY ١ ‏عب ماخر‎ ‏اا‎ AVR ‏3ك‎ ‎١ ‏تتكفققي أ م الخ‎ ‏زا‎ eAV LA 5 Y,A2YVYo Ya AVY 5 GVATY EY & VOAY LT = TEV ١ ‏مضأ‎ ‎Yo ‏شكل‎
    — \ o A — ‏وج و الا‎ A A a — !) , 00 ‏لحي‎ | (١ ~ i Posie : hal EE ON SC 32 i J. RY SRR edie } i oF Yves k 8 . ‏إْ‎ ً Jb Ft HS { § oy 1 : ‏ا ل‎ : i ov : 1 2 0 ‏ل اا اط‎ A ol : ' 1 ٍ ٍ . LS " i 11687 LAY VAY LAVA ‏عالاايا لكلاف‎ JAW ‏كل الأزراج‎ ‏نينا جزء المنشاً‎ - ‏شنط‎ slo YeAVYT 8 ‏م الحا‎ 7 ١ك“‎ eA AB ‏كما‎ Aled : ‏ل‎ ‏بق ا‎ BG VEYY,Y 0A Va AVY LIN ‏ازغ‎ oY ed ١ AVY ‏م م‎ ٍ ١ ‏اد د ال‎ 8 ٠١١7 0 ALT, 0A h 7 . K
    VAY. 2 ‏نحي ال‎ £ - Iv ‏شكل‎ ‎toy
    _ \ o q —_ 2 : H 3 ¢ ْ wn, 3 - 4 ‏إٍْ 0 8 إٍْ ب‎ £77 : ‏لقع‎ EE - : ١ NN ‏ام‎ ‎turd ‏الح ل‎ N 3 H TEN i = 0 ‏ا‎ ! 0 rT : : ١ 5 0 ‏إ‎ ‎So RE ‏سس الأو ل ات سن ل‎ \ ¢ H 0 i LS ‏ل‎ H aE i 0 i ; = 3 i fe i : : § ¥ 1 ¥ = ‏ا ا ا م ا ل ل ل ا ل‎ ‏لأس كربا ود ا ال ال‎ Yea YE Ya ‏الجر‎ =a ‏كل‎ ‎Lindt ‏ا جز م‎ ١ , eS Ye AavY ‏ب‎ ‎١ 0 8 ‏ا لض‎ ‏أ‎ . YO o RE . 1 ِ ‏جو جا‎ AN - ‏م‎ : YeAY LA © 5 4 ‏برقا‎ 8 : VLYTAVYY YAY g ‏تمت‎ ‎Ye AV ‏ما‎ V,i0087 Ya AY] SATVY CA 2 ‏شكل 1؟ب‎ ‏الل‎
    RL 1 he a a Tend : ‏ل‎ ٍْ 0 : : ‏إٍ‎ ١ a. To : “i : : ‏بل‎ ; : . i. 1 ‏ا ل‎ : ni vi 1 Boye . : 2 Hi ‏إٍْ‎ ‎Loin PAE ‏سحل‎ CE ‏هر‎ BI a. A Po a EC oo ' ‏بج‎ : : : ; of : - ‏و م م‎ © 4 ‏لممسسس لسلس مالسالل اسيس سس‎ ‏شكل أ‎ 0 i 1 ‏ل‎ ‎Youd ٍْ ٍ : : : : ‏ب‎ : : : : : oi fn} : . ِ : : : ‏ب"‎ ‎= : : : : : ; ‏ب‎ 0 i ‏إٍْ م‎ a So 0 ‏إٍْ ْم ٍْ مر "م‎ + Ce AEE EE ‏إٍْ ا‎ Lr ee > : or of 2 : : ‏إٍ ًٍْ ب‎ : : : : 0 ‏شكل‎
    -١١1- ‏ص‎ ‎You ٍْ : : . 0 0 : 2 ‏ب بم‎ ‏ل 1 : ٍ مك‎ ٌْ ١ Ww : 0" : : = : N : R - R N ‏تا‎ Ya EE «© . ix : : 3 SE : : ‏ا‎ ! 00 a f J VV ‏شكل‎ ‎d
    -١١7- Tas i . > { Ag] wi > ‏مض‎ 4 x ‏اي‎ 000 ‏أرق ا‎ . : : ft | ¥ CC ‏؛ لل‎ Ns A ‏و الل‎ ١ Gy 4 Pre LE NP aC OW ai ‏هد د:‎ We ID ‏لد ل‎ NR ‏رد‎ ‎A Po ‏ا د الس أ‎ ‏ا | سر ا ا د ا عات‎ ‏معام‎ HAVEL VAVAY FAVA AY CT AVI ‏كل الأزراج 1 الها‎ {one ‏ج إل‎ a TubayKianwy ‏متوسط 1 مستوى‎ YOAV OA & ١٠.77 ‏م‎ ‎YAY eS A A]LEYY ‏ند‎ ‎٠١ ‏ارق‎ A AY, A CAVY ¢ 1 ‏أ بلالا‎ AR ‏اراح كا جلا‎ ١٠١اقدمكأ‎ AaB ‏أي‎ 7 Va AVI AR YY, Ye) VeAVYe - 8 ١:6 ‏اج‎ ‏شكل أ‎ toy
    -١1- vel = Y | * i I i + : a Is 0 oo Pow ‏رسا الث‎ > 3 . ae STN Fat FEN A i ‏الل للستت‎ 4 0٠ 3 ‏تح‎ pe EW : ‏ل‎ ‎x o k ‏و‎ pe Ww a ‏م سي‎ ‏اللا اس 1 با ل‎ 33 6 »
    NE . . . . EE i ‏ا اك الى الجمع أ‎ AY YA VAY, A ‏الخد الملا‎ LAY ‏ل الأزواج‎ ‏وض زع المنشأ‎ ‏جز‎ Ju YOAV LAR ‏لتن ارت ؟‎ ; wg ‏ال‎ Yor, (IYVY A * AVA LAB \ ‏مكلخ‎ 8 A, ‏أ د‎ ‏لاا‎ 8 3 ‏باخ‎ 8 \ +907 0 8 ١ ٍُ ‏ا ل‎ 7 4604 LET ‏اجاج‎ + + Qf ‏شكل‎ ‎
    ‎(AER y‏ ‎NN‏ | $8 : اام ال 1 ‎YY eer‏ ‎Yeon os BE ES |‏ ‎Aer - hd ENC‏ 2 ‎SEEDS : ww‏ ‎DAR EE ee =P : ad‏ ‎"١ ١‏ د ب ‎“Hy a ١ '. Tr Frise‏ ‎Kd ua :‏ ‎A or |‏ ‎Yow i‏
    ‎a.‏ ‎Vas . . - i‏ كل الأزراج تكردا ‎Taree THaAVCT AV OY LOA SAT VAY TVA Ye‏ ممح واي :ع ‎Liat‏ ‎Os en o‏ ‎sia‏ 2 } المستو & ‎y YY 3 X ; .‏ معي ‎٠٠١‏ 5 لاا ل 5 ‎Vole‏ ‎Cp 0 a)‏ خب ‎YY‏ والح ! ‎CAVE BG I‏ 3 ‎Ya AVY oo ERR «AA‏ تت ‎VeAVYYO GR SV An‏ ‎oh -‏ اام ‎SVA,NYVY‏ 5 © ال ‎VeAV‏ ‏خا ل لاه كلخ ‎٠١‏ ‏1375 .هت ‎wy ES‏ شكل ‎z YA‏ ‎toy‏
    -0؟١-‏ ‎a‏ اال ا ا ولتت القت و : ْ : با ‎You ًٍْ ٍْ‏ ‎SEAR | EE‏ ‎Fo Yes ٍْ : ;‏ ‎Yaad : Ny : :‏ & ‎A ٍ 0 Pe :‏ ‎id : : dl Ss B .‏ 8 . 5 ال ‎NE‏ ; ‎pe .‏ الام ‎NO TEE A‏ لسلس ل ل لس ل لل لل سلساسمسسس ا سياه » © ‎ra‏ م شكل 4 ‎١‏ ‎"es‏ ‏1 2 - : دي « 3 ‎I: H‏ : ‎$i . i‏ 0 ا ل ا 0 3 ‎Fo R 1‏ . : ُ عع ‎١ 1‏ : : ا ‎H 1‏ ل" ‎i‏ 9 ‎Sd‏ م م ‎es‏ ا ‎A ٍ Co‏ ْ ْم : 0 ‎i‏ ع ما الم ب ."م 8 أ ا نس .*
    = = vp. TEES MER NAR a re aay : | دا Youd | 5 3 — ١ 4 0 : ; : : : + ‏اي‎ i NE Ll H jo] ] i EE ‏ب"‎ © & Z YA 1 : : | : | : : ’ 3 YY § | : oS 1 ETE HR ] 00-0 : wT ye 0 0 8 : | 0 VE : 8 ‏ا‎ ,أ ,أ | اي شكل ‎va‏ ‏اج
    -١ًأ-‎ ‏ا ال م ااا«‎ ‏ب‎ Y ‏وص‎ ٍ ‏سلب‎ X LI > 1 ‏ف‎ : ‏ا‎ Ye. : . 1 Teo JS : : ‏ل‎
    ‎. 3 ‏اليا‎ 3 JRE . Gamay hrs - we ‏اا ٍ الا ا لاع‎ i © ‏سا ا م ل د ا د ل ا ل ار‎ > Rt ; A A EEE ‏ل‎ ‎i * : * ‏الا ا ل‎ a east 7 ‏كلاف‎ AY VV ‏الخلا ا ا‎ AVY ‏كل الأزراج 1 تعدا‎ Lait ‏جز ع‎ id YOAV a ‏حر‎ do EY AB YAY A SE TYLYYYYYY Yoda AB 0 ‏نافغامة؟ 58 لأ‎ Ae 3 Yoel Bi HA 5% 8 & Ya AVY = : ‏م‎ ‏واحبهي ا‎ BE A Pe AB FEI ‏ب د د‎ LIN EEE £ J “ IE» ‏شكل‎ ‎
    -١١8- AES ; YY ad ) i ARR 1 8 : wn 1rd . EON NY ST ‏لا ا‎ pa od = As ’ YY 8 ‏ا‎ i =, MES X . ATT ¥ 5 ed : : J ‏بت م | ال‎ + N + ‏م الح آنا جا‎ [ [a win, ES SUT: SEC NE J + fe co te SIE 2 Ovo CI RETOE W BN $d ‏اليا اذ ل اب اا ب‎ J = ; > ‏ال‎ : SRT Vid a ew, pm : SUN EE SE : : Et TI Ya JIE BC ‏الس ميت بي لي الاي عي ا ا ل سس‎ ‏يردا لمعمل‎ AY VAY ‏ام‎ AY EL AVILA ‏كل الأزراج‎ 0 ‏بجا سا‎ Lina ‏م جزءع‎
    VeAV Lda Pees
    YaAVYY BE 30303 383
    حتت لابراء 8ت إلا. ‎١‏
    ‎fara.‏ 0 #8 لاما
    ‎EA e‏ ل ا ل
    ‎YAY.‏ 2,0 0 حي لاخدا اختتتتا فيا ‎٠١5‏ ‏شكل ‎te‏ ‏: 8 ‎toy‏
    -١4-
    YY. ‏سس‎ 3 ARID . ‏ب‎ 3 3 ‏الا ا : و اس‎ } 2 ١ 5 ٠ ١ 8 : : : ~, ‏اح 1 ب"‎ f =A ١ : 2 ‏الل الست‎ FINES i ey . NES a i od nN fo Es Ye ‏الأ حت ححا اا حا ااا اا اا ا سي ا اا‎ i d ah PUREE ca ‏أ د ال سس وي‎ pe NG ‏ات ال‎ on RT JET Mad ‏مب‎ 1 1 3 “5 7 10. Re ones Nn ; : Vy og SE 0 ‏ب ؟“‎ mm ١ ‏ْم‎ : ‏ل ايا تت ' ملل‎ 1 ‏تمعت‎ Er AY THAAY SV TO AVIA CAV I ‏مالا‎ 1٠١811 ‏كل الأزراج‎ ‏لضان جزء المتشا‎ * * > @ 3 TAVITA ‏أ‎ AY, ‏مخ‎ *+ EY Ya AV. ‏قا‎ 1% ‏ملقم الجر‎ YA ‏م مر‎ Votes BOD WWE, Veen Ye AY eA Fe ‏هاا‎ «Kw YeAY : To 3 SAYTYY VAY WY 7 3 ALYY A YY You, 4 Yov, feted 9 0 giro
    =« 7 \ _ ما ‎[ESS‏ ‏{ ‏اال الست حت ات تح ل ل ل © الع ب اا ا ‎od nd HES N N N‏ & 3 3 5 ‎TANASE NN SY SRN ERE Soni een‏ ‎SN :‏ ا الو :8 $ + ‎a Na NNN‏ 0 يوسيب ‎NHN‏ 8 الح 23 _ اك ل ام 8 ‎Frey‏ مسي ‎Weve Wm TR ea‏ ات عوجي ا ‎[EES‏ ‏(بدون ‎(iB‏ (بدوان توقف مرح 7 متم كا ‎Hd‏ ‎i‏ ‎UL ia 0‏ مضو د ‎BY‏ ‎AE a & aaa Nm,‏ 3 ف ‎N‏ 3 اج ‎NE‏ اج ا المي 0 ‎ARN ALIN‏ ا لت م ا لح ‎SR ERRRRREEY‏ ¥ يض ‎a‏ ب“ ‎TEESE‏ تت © ‎Yee or ’ Co shag‏ ممه ممصي (بدون توقف) 108718 (بدون توقف) ‎es‏ ان ايز ‎toy‏
    ال ‎ARE TOE‏ اليد الال ا امت اااي ‎E : |‏ : & : 2 إٍ : ‎١‏ : : ; . § . . ٍْ : > ~ لام > ب" > = ‎i 2 NE - So‏ ‎N <i :‏ م ; ل . ل 8 > : ‎al h Ny‏ ‎J Ei FI 3‏ . 2 :+ نا { : 8 0 تت ‎N‏ : & و : م . أ ‎So So‏ . ما م ضر م : ل ل ا 7 : ‎١ } ¢ : 7 s ar‏
    ‎I. x :‏ : $ : ‎eh :‏ ‎B 1‏ بن { & ' ‎NG Tae‏ اللاي الفا أ ااي ‎Vive : : : !‏ ‎i‏ : : : ‎he LS : > : i‏ ‎tT Baw : > i‏ ‎on : : : ;‏ 1 : : : 0 ‎fran : : !‏ & إْ | : _— ‎xX Yay : . N : i‏ ‎at : i‏ ‎t R : * Pa 1‏ ‎Es Yuva : 8 * : : H‏ ‎J i : : ١‏ 5 : نب ‎H‏ : & 3 : ديجا ‎R ? : H‏ : ‎im - - 0‏ . ‎Crm AANA ANNAN NNN‏ تسا ‎CN A‏ 3 ‎Eo)‏ ‏أ “انلا ‎n‏
    -١- REE RA 2 : ْ: ٍ : : $ : IT ‏إٍْ‎ 3 i 8 | : ‏ا‎ 0 i: : : - I i + i
    =v . ‏ب" م‎ NE 0 I SE EN << : 8 ‏ال الم م‎ 8 « : + 3 : 2 : + : tg 9 : 0 N 1 8 : 3 : - H ‏ص‎ : 4 A Fo oo 28 0 : 7 2 : § : $ : 5 i Coe 9 ‏ل‎ 8 ١ Le ry 3 ! : ‏ل و‎ : Pe : ٠ - 2 ٍْ ! £ I ‏اجأ‎ ‎A CELE I RE ae H N : Yoel i 0 : ‏ادها‎ d 3 : 3 : i < A] LI ‏ة‎ ed » : SN i 0 : £4 ; ; : 2 ٍْ ! | : Len Eo Noor’ : . Fy 8 : . : 5 N Zo + : ‏ا‎ rd 0 : ‏إٍْ‎ é Co .
    “i . . - ‏للا سا‎ & \y ‏م‎ ‏نبا‎
    ١/8 ANSEL AI ‏الاي ا لات مضي‎ ‏إ | : ا‎ ‏له‎ EE gy 4 if 0 : : ‏د‎ ‎2 2 ‏و‎ : PYF : I ‏مد‎ - ; | Co 1 ‏م‎ ? So R: : 8 9 : 5 1 hd i 8 : 3 0 : ; 3} ‏د‎ ‎: : a & : & - 1 ‏ب أ 2 . إٍْ أل‎ ٍ : 3 2 ‏و‎ 3 { i ‘ i : v = iN ٍ jee ‏شكل‎ ‏الت لفت ييل‎ GARY AL ‏ااا لت‎ ِ | ; [EE » : o * ‏؟‎ * x : 0 ; [18 4 * + . > : fx * : * ‏ب : ب‎ > ‏ها‎ * : . ‏انحر‎ M : ٠. ‏ب‎ : $ x * ® : ‏ا‎ Fy 2 : E ‘ JEN SI = Veen * H ‏َي‎ H £ ; : Py * f of ¢ + » Re ‏اود‎ : ORR + We 4 LT so ‏ل‎ SS FUE SOUS 4 0 ‏شكل ب‎
    -١6- 0 REE ee : i 8 0 i NE 3 * . 0 0 ٍ § 8 : i 2 R 0 ; 0 38 0 0 8 Sd & Tv 2 HN g ‏انم‎ ‎ٍِ 1 0 8 i : 5 2 ; NE
    Y- . 5 I: i 0 i . 5 Fl rl i 0 03 ‏َم‎ £ ; ١ ‏ْم‎ : 2 4 : 7 5 i ; N i
    % . i ‏شكل 0 أ‎ 4 SEVERN I ‏ا‎ ey ‏الها‎ : : 0 : : : un 1 : ’ : eo ‏إ‎ ٍْ ٍْ ta Sean 5 : " : 0 1 : 3 = Ww i : : : ay i : 1 : : 3 ‏لبرت‎ ْ: 0 : B : : x : . 1 : § : Ry i . 0 ٍْ 1 i { ; ‏ن"‎ ‎H : ‏بك‎ > : i 7 ‏ل‎ . ‏ليبا 0 سم 1 ب . : ا‎ 2 ‏شكل‎
    _ \ 7 ‏اج‎ ‎“ LAYER LAYER LAVIY MAVEA BA aa. £: | | ١ gv : ٍ ‏ض‎ ْ Toy d i ْ: ‏ا‎ ‎7 0 ٍْ 1 i ‏م‎ F i : 2 + ٠ 0 ‏ل‎
    ‎. ‏ا : م ٍ 7 بم‎ ‏ر‎ EE ‏سر‎ ‏مم‎ ‎en ‏شكل‎ ‎
    -١؟-‎ o . ) ’ «A & : : : : Co So B 3 2 § * xY 1 ‏ب"‎ : : : | ny ‏ب‎ Ee as = WUT ١ ‏ل‎ 00 Jol USS ‏اا‎ SR Gok J— po HS + pS ARTE diene FO : § ‏تم ا يج‎ ee N § Co ‏ا ال‎ : ١ ‏لاا 1 رشك‎ CAV AVIA ١ ‏خالل‎ ١ ‏الأ‎ ١ ‏كل الأزراج‎ . Fhe Kony ‏المنشا‎ $ ya NP ‏متو 0 المستوى‎ Ye AVIV A Y, IVY TY. YeoAYARQD VLEET AYYYY VC AYYAREB Y,Yoeotose VaAVY. BO ‏را‎ £A9A ١ a : ‏ا‎ CG 4 ١ ‏نغ لأ‎ D A LI ‏و ه ةء‎ * » ‏شكل ا‎
    —\VYV- ‏ب‎ “en ¥ i ‏لن يداب ي‎ : i x ‏و و وت‎ ; x ‏لص‎ i ‏ل«‎ teen " + i = Toes ٠ : ‏إٍْ‎ ‎= aN . JRE H 3 ‏وول‎ : SEE 3 ’ i i * ‏؟‎ 3 2 Se” H ‏ا‎ ١ ‏د‎ Ta ‏امي 1 محا ال‎ i Fre ‏ا اس ل‎ fe eed Th he ٠ ‏ال م مس‎ FOAYEA TRAVIAN ‏بخاص كالاب‎ AVIA TY ‏اج ب للخل‎ PUR. ‏ممم 1 جزء المنشاً‎ ١ FE. ‏المستوى‎ Las sia ny Ve AVIV ‏م‎ Ya £E WY EA VvoAA B Ye, Vo. Va AVY ‏ب‎ : ١ 0 8 BE ‏ف‎
    ‎٠. ANY he Co BG 1,947 Ye AV EN ' OS ‏جيه‎ en ‏بجع قو« » الخ ا‎ Jo LEV ‏شكل‎ ‎
    —\VA- \ ‏ؤ‎ : ‏قي‎ : : 2g 1 : Ed SR I 0 hy Ad 4 1 J : ; 3 ٍّ 3 © ‏ددا ال‎ Wo 8 SEE FT SE ‏ااا‎ REE ‏اا سس‎ preside ns i ‏يد‎ i : EST ae TARE 4 : : : : h hl i ROE > ّ 5 5 7 or ville : { i VOAYEA ١ AYTAY CAVIVE AVIA ‏الى‎ 451 AVY + ‏كل الأزراج‎ ‏م جزء المنشا‎ - : ALY e"Y VOAVIY A Y, ALY Veo AYA ‏يج‎ Ye YIAYAY Ve AVY AAR » \ ٠ . 3 hE Y,avety de AVY ١ re B hi 0 Fis » 3 2 ١ 3 * } ‏فى" قم 3 ©“ * لخ‎ ١ ‏أب اكب‎ EEE ER 8 < 2 HEA ‏شكل‎ ‎toy
    -١6- “ * ‏»ده‎ « 2 ' < ‏جه ؟:| »# + أ‎ ; ~~ § } "aN . - 2 SRT UF
    A I. H } EN " ~ : ROE 3 ‏تتأ — د الع«‎ ‏مستت المي + . ب الا‎ KH VeAVEA LAVA LAV GAVIA CAVITY AVY ‏كل الأزراج‎ Land ‏بح جزء‎ a i] > gg vee AY ‏ملو تلض‎ ‏عدر ؟ ات‎ ٠١مل ‏قاب‎ LAV
    V.oAYA 5 YyYve, vite Y2AVYA 5 TYTV, oY0, ‏أ‎ e AVY > Yio 9447 VeAVY] a. ULC TEVA A AV EA LR * «+ } CEA ‏شكل‎ ‎
    — \ A «= ve LS I ْ' fod : a : ) i ‏حت‎ : . : Cob ‏الست + اج‎ : : ES EI : de ; ; su 1 ¥ ; ge SEER ee fa 3 : : a Ld ٍ ٍ ‏نب‎ + HN 3 - ‏لحي‎ i ٠ ‏ته‎ N Pod 1 VOAVEA Te AVIA AVIV TL AVIA ‏كل الأزراج ءالأ١ 1 1 الأخدا‎ RI ‏تدا تت + ع‎ #ٍ ‏جر‎ ed ‏متوسط المستوى‎ Ce Sq ATTY TE Ve AVEA & ‏برآ‎ + ٠١ ‏م" ارت‎ YLVAYYYYA Ya AVY 2] . AVIA OB ‏مرا‎ ‎YeAVYY RB YLAVY . B Y, Ave ELEY, YoAVYIA & YLEAYATRY 1) » ج0١‎ ١+ ‏؟‎ + 4 + 3 -, J £4 ‏شكل‎
    -١1- Teen ] fo ‏إٍْ .ا‎ Be faa, : = ‏»وو ثلا‎ ١ N : |ّ ْ' 2 ; : : a. 3 Y PEE = EA i 8 ً ْ ‏ا‎ ‏ب بي فت‎ : Pee) ‏ثبت‎ TE Ee Ee 3 2 LI Hem a ‏ال ا‎ . + ‏اردة لبي مج‎ . 1 SUE Oo PAYER TAVITA AVIV VAI AY CAVITE TAY ‏كل الأزراج ا‎ La ‏ص واي‎ ‏جزء الملا‎ Foy YeAVEIAN 8 VEY, TAAT VeoAYWAB 0 ‏عم وعد‎ VAVAA BE Va ١ 0 8 4 ‏اد‎ 2 : Le AT Ye AVYA © YA ,od0A Yor MAYS
    -١ 8 ١- Ay VA ' . / ‏حم‎ i : : . : & ¢ } 1 H : N ~ ‏إٍْ‎ ‏ال‎ ied 3 & 3 i Sel BE I : Ree : ERE po ‏مح‎ i Sf ; 0 ‏سس ا سا ووأ لسو ااال‎ i I. § 3 RETR TN ‏الو د‎ Sed : Vi BE : | | ‏لها‎ ‏ا : مستت‎ VOAYEA TV AVIA ‏لالخ‎ AVIA ‏كل الأزراج. لأ 1 الى‎ PE Fukey-Rramw ‏جزء المنشا‎ a ‏متوسط المستوى‎ VLAVIY 8 ‏لوج نطبب‎ Ye AVY A 8 ‏اا ال اه‎ ‏أ خا‎ ٠ 8 ‏ات د ا‎
    ٠.خلخ‎ 4 ‏ةي‎ 1,977. Y 3 SAVY A i ‏.ا« مح تلا‎ ١ ‏م رع اكب‎ I EEE fo ‏شكل‎ ‎toy
    “VAY - =f | N ‏م‎ ْ : ‏نج‎
    ‏و .و ولأ‎ 0 8) la ‏ه‎ : . = 1 A * RLY Sy ENN 2 : a 2 ES = + : . 0 ‏ا‎ SA ; 0 a a haa HEE ‏الت‎ SEN a PER > 2 RR Re } 7 ‏اح ا ااا ل د جحو م جح را‎ emer ‏ا سا‎ ‏ا رتلا كلاخ ا‎ AVIV 1 ‏دا خالا‎ AVAL ١ AVY had Bs BAR ‏مالوغ‎ ‏جزء المنشا‎ Ce 0 ‏َه‎ ‏أ‎ AVIVA Ye. AYeY. ANY . YeAVYA 8 YAY, ‏م‎ ‎Ye AVIA GE ‏لكي 0 © وما‎ ‏كلكلا‎ Lg gaya VaAYY. Le EN EE * EINE BE TE pS ‏0ل‎ * ‏ف‎ ‎toy
    -١06- £4 :
    i . SN : ْ a : © § . ‏بن : : 4 م‎ ‏م‎ Po endive 3 HN 3 EOL ‏حت ات‎ wis ; : ‏زرك‎ ‎A 4 5 ‏ا‎ J ‏ادا الج اخ حي * مما‎ ‏مح حأ مح جح اق‎ ERR RR ‏اح‎ EE tM 4 B i 0 we 1 ‏اا‎ ‎i TE ‏امات‎ A § 3 0 R LJ] : a YOAVEA 10AYTA YeAVIY YoAYIA LL AVIA YOAVY. ‏كل الأزراج‎ FETE Tukep-hrang Lad PAREN SEIS Pr ‏ا‎ ‏و ىَْ‎ mi i Fa ‏أت قرا بخ ار لتقا‎ 1 ‏أ اكات‎ A TR - ‏دام ة 1,670 8 الي‎ ٠ ‏للا‎ B ‏ا ل‎ ‏ا‎ Co LAYS Y VAY A AES LAY oy Ki
    _ \ A ‏اج‎ * ‏ل‎ ‎: ٍ 1
    : . : i
    You. H : i ! 1 + 1 : ; vow oa : i ! ; i : i 3 : bi Xx od : i 1 : i . 1 : : H Yue wd i & 1 ١ : ; x 1 : i YO od i ! : i ١ : : H vo ‏ب" 0 لذي‎ 3 : : i i : : 0 : i ‏روت‎ . : + H 3 < > : » bi
    1 . . 2 ‏ب احم‎ PR : N 1 ‏ب : م ب‎ vd R * - . _ ‏يا سا‎ i : : bi i : i ! i 1 ley ‏شكل‎ ‏ا ا ال الس للبت‎ Youu : 1 ‏لوو‎ < i 1 7 " : 1 2 J 8
    + . ‏1ج‎ > H YOu ai Ll 0 : : J So 0 : ‏ا‎ | 3 - : i H Yue ad . " : 3 1 1 : . : 8 ‏اوت‎ : 1 . A . ” : > ‏با‎ 1 nS ‏خخ‎ ‎A H ‏نا‎ { ry
    ‎A A‏ ا ا ا ‎H‏ : 1 ‎H‏ : ‎H‏ : ‎i‏ : ‎Yon ; i‏ 3 ل ‎H‏ : ‎i‏ : ‎H‏ . : ‎H‏ : : ‎i‏ " م ‎Yau‏ ‎H‏ : ‎H‏ : ‎H‏ + ‎v |‏ ‎Yous i$ : ;‏ ‎I vi : i‏ 1 ل“ 20 ‎oN g vo 5 1‏ ‎EEE 5‏ 3 * ‎PRR : { H‏ 8 : ‎i‏ 1 ا ‎La ¢ i‏ ‎i‏ 3 : ‎Qo of 8 : + i‏ ‎i‏ : { ‎H‏ : ‎H‏ : ‎i‏ : الس ا ‎om JR‏ - 3 : 0 ‎H‏ : ‎H‏ : ‎H‏ : ‎i‏ & انيه ‎LIE rte ttt tt tet ttt tt ttt ttt tt ttt tt‏ ‎NY‏ ‎'e) 0 ّ‏ 3 ل ‎Pe : :‏ ‎H 2 : : H‏ ‎H : : H‏ ‎H N i : H‏ ‎t : : H‏ ‎H : : H‏
    ‎H . : : H‏ ‎i : : ;‏ ‎of : i‏ د ‎١5‏ ‎H : : H‏ ‎H : : H‏ ‎i 5 : 1‏
    ‎i . : . : H‏ 1 : : ب" : ‎i‏ ‎N a . : H‏ ‎i $0 ~ : H‏ ‎N : H‏ :2 . لم و
    ‎i . : ¢ ‘ i‏ 8 ‎H : 8 : H‏ 5 ‎i‏ : ا : 1 = ‎So |‏ : 5 1 : * : . 1 ‎i ‘ . : N : 1‏ ‎N : H‏ : م ‎H‏ : : 3 ‎H : : H‏ ‎H : : H‏ ‎H : : H‏ ‎H‏ : : 3 ‎H : : H‏ ‎H : : H‏ 1 : : 1 ‎wb « : : HERG H‏ ‎i : 1‏ ‎H‏ : : : : : 1 يتلم ‎LAN‏
    -لأم ‎-١‏ ‎od‏ + * ¥ 3 ‎LAE BS A ١‏ ¥ 8 ‎fy 47‏ $ ام 3 1 3 تا ‎Yaa‏ ‏- ْسمس ."0 ‎Nn‏ ‏أ ا إن أ أ أ ...<< . كل الأزواج ‎١ AVY,‏ 5 الأخا ‎TCAVIA‏ لجالا ل خالأخ ا ‎TeAVEA‏ ‏مجه لمعا ل ‎AS‏ جر ع ‎Lili‏ ‏متو 1 ‎i‏ لمستو ص ا ل مخ لاه ‎om‏ 4 الا ج ال ‎YA 8 YY, YAY e‏ لكر 0 ‎ARIANA‏ 8 كاه ا ع لال ‎NA.‏ ‎PAYEE TY, EAL‏ ب £ ‎oY, I< 9‏
    -١ ‏حمر‎ ‎X Oa b . ~ ‏لول‎ : : . 0 * ‏ا > لالت‎ FERRE ‏اح‎ RE ‏دأ ال‎ hed 4 SEITE 3 3 HR = H pais : 5 SY aa . : 3 ein i 3 + CHAN Oo Sun ‏ل ا ا ا لات ال ا‎ segs i Pe - st, ‏الا ا‎ k
    Eo . coal ‏ل ا‎ } VOAVEA VC AYTATLAVIV LAY TA ‏خالا‎ LOAVES ‏كل الأزراج‎ fan. Tuer badall ‏جزء‎ Via EON Medi ANY ! A Le EAYAS VEYT AL YVaAVYA OB ALY B 0 ‏الل‎ Fo FAY] ‏نا ؟‎ [SS LANE a Ne AY ١ ‏ب خاب‎ & £R,847Y * 0 *» ‏و كا‎ 4 1 > oY ‏شكل‎ ‏ب‎ ‎toy
    -١ ‏ؤي‎
    ‎Yo. ay 5 : ‏ليولا‎ .
    i . : YOu “ 3 3 i NS i » ar RN Ne N : 0» he ‏م‎ Yeas ‏هت‎ 3 Le Sr 1 ha elie i Ho
    1 . * a : Ld Ow a i > i SN i py a Co Co, ; JE ‏الإ‎ . “٠ ‏ويا 0 لأس تي‎ ONO ‏سالا‎ ‎VOAVEA ‏الخلاا‎ AVIV ‏ا‎ AVERT AVIA TV ‏الف‎ ١ ‏كل الأزراج‎ ER ‏وساي‎ SR Load) = ‏ا جر‎ * Joan ‏و‎ ‏تالاخ‎ SA YAR YYVA LAY IAS Ye, AS ٠١كم‎ © Yi%, ‏ل‎
    ‎١٠.746 RB 0 ١ ‏يج 4 كلخي‎ 0 ‏اا‎ # 0 Hd gov ‏شكل‎ ‎toy
    -١86- ‏مسمس »ان و الا‎ ْ : : : ‏إٍْ‎ /
    H . ‏اي‎ x i SN i wn - ete, CNERDERES 3 : Sd : ‏ال‎ ٠٠ i ‏مي‎ RS BE ‏الأ ا‎ 3 : Ra DN > i Pam H i . 3 i 3 - . : ‏إٍْ‎ i a FE ~ ‏ال‎ ed SE i H > epee ae NE i ‏ا‎ H PAAVEA LOAVIA AVIV ‏تجار‎ 1١كألا‎ AVY ‏كل الأزراج‎ ee {IP ‏امد ا‎ Dali ‏وي جز ع‎ ‏أ ل & اا ريا‎ Ye ‏اخ ار‎ A {5 EY Ya AVY YA A KA ACTRY ‏جح يه 8 خب “حصا‎ ‏ا‎ B LINE II 3 ٠ ‏الام‎ * B ‏ا‎ FURR = Jey ‏شكل‎ ‎toy
    -١4١- ‏اا تلات ال ا الت لات اال ا‎ 1 ‏لاا‎ 1 2 ‏ا‎ EI I H ’ 8 . ‏ويا‎ «i 3 3 8 ‏م ل‎ SEA f 8 ioe IK
    Yo. BAER LR RR ae Yow J 7 0 5 i $ B 5 3 Se o + ‏ن‎ 5 J BR SI Pe ١ :
    I. Ls i ~ le im a of ‏شكل‎
    ‎. ‎toy
    AR y RE RR RE ae Vs oR SOME A ER A OW FIN | | ]ٍ ‏إٍْ‎ . { ; ٍْ ] > ‏م + حوبا‎ : N . : i 3 | 200 ‏لم‎ : "© : ! : : ww i ) : : : { Po َ ِ ‏اد ام‎ i . : - ws ‏إْ‎ ‎0 ' a Oo ‘ C Vo SERRE RE a i Youn : ‏إْ‎ ‎| 8 ; 2 ‏إْ‎ ‎ِ ‏إٍْ‎ ٍْ & £ : 2 3 ‏لذ"‎ : a EC + “ : - 1 wi ‏شكل‎ ‎toy
    -١8- 4 ERE J + i " ١ ‏إٍْ الس : : ٍ نا ب ا‎ Tre : { H 1 Yous J hs ١ « ‏يي‎ 1 ‏م ا‎ Pome ‏و‎ {od ‏إٍْ‎ ‎veel oo see ToL i . " ay ON : i ae SEE ARE i +d Se ‏ال دن الست‎ ‏4ط ااا‎ TV AVIARY AVIV AVIA AVIA ‏كل الأزراج > الأخنا‎ ‏ا‎ A ‏مح اا‎ ‏م جزءع المنشا‎ © oi ‏متوسط الم‎ YeoVEIAR ‏دما‎ ١ ١٠١اظز ‏الم‎ OB ٠ك ‏ثتبقغق يج‎ ANS # 3 A 8 ٠١. ‏ارق‎ ‏ا + أ‎ Ce ١ A ‏ا ا م‎ * O ‏ف‎ Lg -_- nl 1 A A Sot £ hy R \ “3 1 ‏ا‎ ‎١٠١ AVY ‏م‎ i ‏باغ كك‎ ‏شكل ددا‎ toy
    -١؟6-‎ A} fa.
    NEN : ht vou oa rN 0 3 * ‏الس‎ ‎EC 3 2 HER BALI BEEZ ~ = WE od ٠١٠١ ee — ee Oe ao ES FE ‏ناا‎ Ey { La i Lo A os HI.
    S YOAVEA Te AVIA ‏اللا‎ YoAVIA Ye AVIA ‏الأزّواج بألا‎ Js 3m : ‏المج ساي‎ ‏ع المنشا‎ BES Ces ‏المستوى‎ 3 ‏اخنتخة خا رقا تابف أ‎ VeAVIVS ٠ك ‏احج‎ ‎Ye AVIALR ‏بحي وال‎ ‏ج 4 لاا‎ ATS, sVaY YeoVEA LQ Yig,80 AY 3 e AVY ‏د‎ EW ‏ةوة‎ I eo I< 5 toy
    -١ه-‎ : = ١ Yew pl aE : SN S > MC Ny J ) : wb bi, SEY ‏ا ا ا ا اس ا‎ Sit SOTTO ow J ‏ناا ل الال لجالا 0 خلا‎ YL AVIAT 1و١ ‏كل الأزراج‎ ‏و : وا‎ ‏م جزء المنشا‎ ‏متوسط المستوى‎ ‏م لبإلا رغم 17 رق حا احا‎ YeAVIA B Void VEAL ٠١ ‏قح تي‎ 8 ¥Yo A, 17 Yo AY YA Ls qo, oY en YeoVEA 8 iYY, ion ٠ ‏الك‎ ٠ ‏م‎ VEY, ‏مخ‎ ‎d o fe { | 3 9
    -١- ‏حرملا‎ ‏ل‎ ‏حمرلا ال‎ : ‏ا نّ‎ 4 eb : SH, ; A ‏الاي‎ SI Sond I: STI Ed ET wi You ond 5 i . a ‏الب الدج ا‎ I ‏المسصحطة» : ال‎ a0 bY FO i ‏و يد 1 ] - ٍ 7 ال‎ ‏مكلا ل مق لأا‎ Va AVAY VAY TAT 1١ج‎ 4 AVY جارزألا ‏كل‎ ‎fa I , Tobey ‏لمحو‎ ‎sas £ a ‏مد المستوى‎ ‏يأ اخ‎ £4Y,Y VED Ye OAYAN YYy,yeiny YA AVIAR ‏رخ‎ 4 ٠١الا‎ 4 ‏نج‎ AY, + 16 Is 1 A ‏ما كلأ د المي‎ ١ ‏أب اخ‎ EB LIP RCE BE ‏و‎ ‎200 I< 9 tle NN : ‏كيلو دالثون يم‎ R gh! ae 0 ‏شكل “ما‎ wo ‏شكل‎
    AAD1 . =! —
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA112340163A 2011-12-30 2012-12-30 طريقة وجزء منشأ لمعزز النبات scbv التخليقي ثنائي الاتجاه SA112340163B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161582148P 2011-12-30 2011-12-30
US201261641956P 2012-05-03 2012-05-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA112340163B1 true SA112340163B1 (ar) 2015-11-25

Family

ID=48698501

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA112340163A SA112340163B1 (ar) 2011-12-30 2012-12-30 طريقة وجزء منشأ لمعزز النبات scbv التخليقي ثنائي الاتجاه

Country Status (17)

Country Link
US (1) US9453235B2 (ar)
EP (1) EP2797407A4 (ar)
JP (1) JP6301265B2 (ar)
KR (1) KR20140109909A (ar)
CN (1) CN104135850B (ar)
AR (1) AR089511A1 (ar)
AU (1) AU2012363063B2 (ar)
BR (1) BR112014014029B1 (ar)
CA (1) CA2855125C (ar)
HK (1) HK1202222A1 (ar)
IL (1) IL233453A0 (ar)
IN (1) IN2014DN03383A (ar)
RU (1) RU2627595C2 (ar)
SA (1) SA112340163B1 (ar)
TW (1) TWI620820B (ar)
WO (1) WO2013101344A1 (ar)
ZA (1) ZA201402991B (ar)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2855902C (en) * 2011-12-30 2022-06-21 Dow Agrosciences Llc Construct and method for synthetic bidirectional plant promoter ubi1
TW201538518A (zh) * 2014-02-28 2015-10-16 Dow Agrosciences Llc 藉由嵌合基因調控元件所賦予之根部特異性表現
TW201619386A (zh) * 2014-11-11 2016-06-01 陶氏農業科學公司 合成性雙向植物啓動子
AR102612A1 (es) * 2014-11-11 2017-03-15 Dow Agrosciences Llc Promotor vegetal bidireccional sintético
CN114875025B (zh) * 2022-03-25 2023-09-19 广东省科学院南繁种业研究所 一种干旱、aba诱导型启动子pscbv-yz2060及其应用
CN114574492B (zh) * 2022-03-25 2023-09-19 广东省科学院南繁种业研究所 一种来自甘蔗杆状病毒的组成型启动子pscbv-chn1及其应用

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5750866A (en) * 1994-09-08 1998-05-12 American Cyanamid Company AHAS promoter useful for expression of introduced genes in plants
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
US6489462B1 (en) * 1996-08-09 2002-12-03 Regents Of The University Of Minnesota Sugarcane bacilliform virus promoter
US5994123A (en) * 1996-08-09 1999-11-30 Regents Of University Of Minnesota Sugarcane bacilliform virus promoter
CN1230592A (zh) 1999-03-22 1999-10-06 中国科学院遗传研究所 棉花曲叶病毒启动子及其应用
US6388170B1 (en) 2000-04-07 2002-05-14 University Of Kentucky Research Foundation Bidirectional promoters and methods related thereto
AUPR160400A0 (en) * 2000-11-21 2000-12-14 Bureau Of Sugar Experiment Stations Plant virus promoter
EP1360310A2 (en) 2001-02-13 2003-11-12 University Of Florida A bi-directional dual promoter complex with enhanced promoter activity for transgene expression in eukaryotes
AU2004267161B2 (en) * 2003-07-22 2009-10-29 Sungene Gmbh & Co. Kgaa Expression cassettes for the bi-directional transgenic expression of nucleic acids in plants
US7235652B2 (en) 2004-03-31 2007-06-26 Council Of Scientific And Industrial Research Artificial bidirectional promoter for activation of gene expression
WO2006005023A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Ceres Inc. Promoter, promoter control elements and combinations, and uses thereof
AU2006274964A1 (en) * 2005-07-27 2007-02-08 Basf Plant Science Gmbh Selection system for maize transformation
TWI361220B (en) * 2005-08-02 2012-04-01 Univ Nat Taiwan A plant shsp gene bi-directional promoter and uses thereof
CN101351555A (zh) * 2005-09-13 2009-01-21 巴斯福植物科学有限公司 用于小麦的新选择系统
WO2007039424A1 (en) * 2005-09-23 2007-04-12 Basf Plant Science Gmbh D-amino acid a selectable marker for barley (hordeum vulgare l.) transformation
CN102851306B (zh) * 2005-09-26 2016-05-18 绿色细胞有限公司 用于生产蛋白的转基因芦荟植物及其相关的方法
EP2205749B1 (en) * 2007-09-27 2016-05-18 Dow AgroSciences LLC Engineered zinc finger proteins targeting 5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase genes
CN102439156A (zh) * 2008-12-17 2012-05-02 巴斯夫植物科学有限公司 来自玉米的双向启动子
JP2013526832A (ja) * 2009-08-19 2013-06-27 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー Ａａｄ−１イベントｄａｓ−４０２７８−９、関連するトランスジェニックトウモロコシ系統およびそのイベント特異的同定
HUE033500T2 (en) 2010-01-22 2017-12-28 Dow Agrosciences Llc Genetically modified landing site for gene targeting in plants
EP2385129A1 (en) * 2010-05-03 2011-11-09 BASF Plant Science Company GmbH Enhanced methods for gene regulation in plants
CN103052712B (zh) * 2010-05-10 2016-10-12 德克萨斯A&M大学系统 用于在植物中表达基因产物的组合物、生物体、体系和方法

Also Published As

Publication number Publication date
AR089511A1 (es) 2014-08-27
CN104135850B (zh) 2017-09-22
BR112014014029B1 (pt) 2021-12-14
IN2014DN03383A (ar) 2015-06-05
TW201329241A (zh) 2013-07-16
ZA201402991B (en) 2015-11-25
CA2855125C (en) 2021-03-09
KR20140109909A (ko) 2014-09-16
EP2797407A1 (en) 2014-11-05
IL233453A0 (en) 2014-08-31
JP6301265B2 (ja) 2018-03-28
CA2855125A1 (en) 2013-07-04
CN104135850A (zh) 2014-11-05
US20130198898A1 (en) 2013-08-01
US9453235B2 (en) 2016-09-27
AU2012363063B2 (en) 2018-04-19
RU2014131447A (ru) 2016-02-20
TWI620820B (zh) 2018-04-11
RU2627595C2 (ru) 2017-08-09
EP2797407A4 (en) 2015-07-08
JP2015503343A (ja) 2015-02-02
HK1202222A1 (en) 2015-09-25
WO2013101344A1 (en) 2013-07-04
BR112014014029A2 (pt) 2020-11-03
AU2012363063A1 (en) 2014-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11261457B2 (en) Transgenic plants with enhanced traits
SA112340162B1 (ar) جزء منشأ وطريقة لمعزز النبات ubi1 التصنيعي ثنائي الاتجاه
Nolan et al. Auxin up-regulates MtSERK1 expression in both Medicago truncatula root-forming and embryogenic cultures
Imin et al. Proteomic analysis of somatic embryogenesis in Medicago truncatula. Explant cultures grown under 6-benzylaminopurine and 1-naphthaleneacetic acid treatments
RU2644205C2 (ru) Регуляторные элементы растений и их применение
SA112340163B1 (ar) طريقة وجزء منشأ لمعزز النبات scbv التخليقي ثنائي الاتجاه
Edmond et al. Comparative analysis of CAX2-like cation transporters indicates functional and regulatory diversity
US9000259B2 (en) Polynucleotides and methods for the improvement of plants
KR20080083145A (ko) 구성적 식물 프로모터
Hoshikawa et al. Enhanced resistance to gray mold (Botrytis cinerea) in transgenic potato plants expressing thionin genes isolated from Brassicaceae species
CN105624188B (zh) 一种spl18基因在提高植物产量中的应用
WO2011156539A2 (en) Compositions and methods for protein production
CN105102474B (zh) 组成型大豆启动子
US20230203522A1 (en) Compositions and methods for expressing transgenes using regulatory elements from chlorophyll binding ab genes
Luo et al. The MYB family transcription factor TuODORANT1 from Triticum urartu and the homolog TaODORANT1 from Triticum aestivum inhibit seed storage protein synthesis in wheat
AU2017234672A1 (en) Zea mays regulatory elements and uses thereof
MX2011000225A (es) Plantas que tienen caracteristicas agronomicas alteradas en condiciones limitantes de nitrogeno y constructos y metodos relacionados que involucran genes que codifican polipeptidos lent1 y sus homologos.
US20190382783A1 (en) Transgenic plants with enhanced traits
CN103255165B (zh) Soar1蛋白及其编码基因在调控植物抗逆境胁迫中的应用
JP6262217B2 (ja) アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）二方向構成的プロモーターを使用してトランス遺伝子を発現するための構築物および方法
US20180230482A1 (en) Transgenic Plants with Enhanced Traits
CN103232536B (zh) Soar1蛋白及其编码基因在调控植物对aba耐受性中的应用
CN109310062A (zh) 植物调控元件和其用途
Brini Genetic transformation of wheat: current status and futures challenges
Mulangi Characterization of polyamine transporters from rice and Arabidopsis