RU98113063A

RU98113063A - Ферменты, их получение и их использование для получения аммонийакрилата

Info

Publication number: RU98113063A
Application number: RU98113063/13A
Authority: RU
Inventors: Кристин Армитэйдж Ивон; Хьюс Джонатан; Эндрю Вебстер Нейл
Original assignee: Эллайд Коллоидс Лимитед
Priority date: 1995-12-12
Filing date: 1996-12-12
Publication date: 2000-05-20

Claims

1. Фермент нитрилаза, отличающийся тем, что имеет значение Кm при рН 7.0 для акрилонитрила 500 мкМ или меньше.

2. Нитрилаза по п.1, отличающаяся тем, что имеет значение Кm при рН 7.0 для акрилонитрила 100 мкМ или меньше, предпочтительно 50 мкМ или меньше.

3. Нитрилаза, отличающаяся тем, что имеет значение Ki при рН 7.0 для аммонийакрилата, по крайней мере, 100 мМ.

4. Нитрилаза по п.3, отличающаяся тем, что имеет значение Ki при рН 7.0 для аммонийакрилата, по крайней мере, 250 мМ.

5. Нитрилаза, отличающаяся тем, что имеет величину отношения (Ki при рН для аммонийакрилата)/(Кm при рH 7.0 для акрилонитрила), по крайней мере, 200.

6. Нитрилаза по п.5, отличающаяся тем, что величина отношения составляет, по крайней мере, 5000.

7. Нитрилаза, отличающаяся тем, что имеет при рН 6.8 акрилонитрилазную активность, которая составляет, по крайней мере, 80% ее акрилонитрилазной активности при оптимальном значении рН.

8. Нитрилаза, отличающаяся тем, что сохраняет при 50°С, по крайней мере, 80% своей акрилонитрилазной активности при 25°С.

9. Нитрилаза, отличающаяся тем, что сохраняет, по крайней мере, 80% своей исходной акрилонитрилазной специфической активности после иммобилизации в шариках сшитого полиакриламида в условиях с охлаждением следующим образом: пасту, состоящую из клеток, содержащих нитрилазу, суспендируют в охлажденном буфере и добавляют к смеси акриламидного мономера и метиленбисакриламидного сшивающего агента в охлажденном буфере, затем немедленно добавляют водорастворимую компоненту системы окислительно-восстановительного инициатора, и полученную смесь переносят в полимерный реактор, снабженный мешалкой, содержащий охлажденное минеральное масло и поверхностно-активный агент, и вторую компоненту окислительно-восстановительного инициатора, растворимую в обеих жидких фазах, добавляют для инициирования полимеризации, после чего клетки иммобилизуют в шариках сшитого полимера.

10. Нитрилаза по п.9, отличающаяся тем, что сохраняет, по крайней мере, 90% ее акрилонитрилазной специфической активности в иммобилизованной форме после того, как шарики сшитого полиакриламида сушат до 12% влажности при 60°С и/или сушат вымораживанием при давлении 0,1 мбар в течение 24 часов.

11. Нитрилаза по п.9 или 10, отличающаяся тем, что сохраняет, по крайней мере, 90% своей акрилонитрилазной специфической активности в иммобилизованной форме после того, как шарики сшитого полиакриламида хранят при 20°С в течение 17 дней.

12. Нитрилаза, отличающаяся тем, что ее, срок полураспада, измеренный в водном растворе, содержащем 125 - 175 мМ акрилонитрила и 2475 - 2525 мМ аммонийакрилата, составляет, по крайней мере, 5 дней.

13. Нитрилаза, получаемая при культивировании Rhodoсоссus rhodochrous NCIMB 40757 или NCIMB 40833.

14. Микроорганизм, который является Rhodococcus rhodoсhrous NCIMB 40757 или NCIMB 40833 или его мутант, обладающий способностью продуцировать нитрилазу.

15. Способ превращения акрилонитрила в аммонийакрилат в присутствии в качестве катализатора нитрилазы по любому из пп.1-13 и в присутствии воды.

16. Способ детектирования нитрила и в присутствии воды, отличающийся тем, что включает осуществление контакта нитрила и нитрилазы по любому из пп.1-15 в присутствии воды, предоставление нитрилу возможности превращения в его соответствующую аммонийную соль, определение изменения, которое связано с превращением нитрила.

17. Способ по п.15, отличающийся тем, что является способом очистки полимера, образованного из мономерной смеси, включающей акрилонитрильный мономер, и который содержит непрореагировавший акрилонитрильный мономер, путем превращения непрореагировавшего акрилонитрильного мономера в аммонийакрилат в присутствии в качестве катализатора нитрилазы по любому из пп.1-13