RU2758109C2 - Бактерия lactobacillus rhamnosus для лечения, например, бактериального вагиноза - Google Patents
Бактерия lactobacillus rhamnosus для лечения, например, бактериального вагиноза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2758109C2 RU2758109C2 RU2017143465A RU2017143465A RU2758109C2 RU 2758109 C2 RU2758109 C2 RU 2758109C2 RU 2017143465 A RU2017143465 A RU 2017143465A RU 2017143465 A RU2017143465 A RU 2017143465A RU 2758109 C2 RU2758109 C2 RU 2758109C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- food
- strain
- composition according
- product
- Prior art date
Links
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 title claims abstract description 34
- 208000004926 Bacterial Vaginosis Diseases 0.000 title claims description 31
- 208000037009 Vaginitis bacterial Diseases 0.000 title claims description 31
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 56
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 49
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 28
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 28
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 claims description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 20
- 244000005706 microflora Species 0.000 claims description 18
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 12
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 8
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 7
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 7
- 206010048461 Genital infection Diseases 0.000 claims description 6
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 6
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 6
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 6
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 4
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000009245 menopause Effects 0.000 claims description 4
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 claims description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- -1 sachets Substances 0.000 claims description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 3
- 208000004746 Atrophic Vaginitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010003693 Atrophic vulvovaginitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 2
- 235000019985 fermented beverage Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 201000010808 postmenopausal atrophic vaginitis Diseases 0.000 claims description 2
- 235000008924 yoghurt drink Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 43
- 239000000047 product Substances 0.000 description 39
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 26
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 26
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 21
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 15
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 13
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 8
- 241001561398 Lactobacillus jensenii Species 0.000 description 7
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 6
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 6
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 6
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 241000385732 bacterium L Species 0.000 description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 3
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 2
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 2
- 208000006399 Premature Obstetric Labor Diseases 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-N isocaproic acid Chemical compound CC(C)CCC(O)=O FGKJLKRYENPLQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 2
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000606125 Bacteroides Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 208000004483 Dyspareunia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000004145 Endometritis Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241001324870 Lactobacillus iners Species 0.000 description 1
- 241001070018 Lactobacillus iners DSM 13335 Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 241001627205 Leuconostoc sp. Species 0.000 description 1
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 description 1
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000203736 Mobiluncus Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 description 1
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 1
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 1
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 1
- 206010036018 Pollakiuria Diseases 0.000 description 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000007313 Reproductive Tract Infections Diseases 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010047791 Vulvovaginal dryness Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 208000033847 bacterial urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 206010013990 dysuria Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 235000020190 lactose-free milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000013411 master cell bank Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000020166 milkshake Nutrition 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 208000022934 urinary frequency Diseases 0.000 description 1
- 230000036318 urination frequency Effects 0.000 description 1
- 210000002229 urogenital system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006216 vaginal suppository Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/46—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. skin, bone, milk, cotton fibre, eggshell, oxgall or plant extracts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
- A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/02—Suppositories; Bougies; Bases therefor; Ovules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
- A61K2035/115—Probiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии, биотехнологии, пищевой промышленности и медицины. Описан новый штамм молочнокислой бактерии Lactobacillus rhamnosus для продуцирования молочной кислоты с регистрационным номером CECT 8800. Также отражены пищевые и фармацевтические композиции его содержащие, пищевые и кормовые продукты, содержащие указанные пищевые композиции и способы их получения. Изобретение позволяет получить новый штамм Lactobacillus rhamnosus с хорошими свойствами, в частности, в отношении профилактики и лечения вагинальных женских половых и мочеполовых инфекций и/или инфекций мочевыводящих путей. 9 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 табл., 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к новой молочнокислой бактерии Lactobacillus rhamnosus, пригодной для лечения, например, бактериального вагиноза.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Бактериальный вагиноз (БВ) является одним из наиболее распространенных заболеваний у женщин репродуктивного возраста. Согласно данным Центров по контролю и профилактике заболеваний США (CDC), факторы риска для БВ включают спринцевание и наличие новых или множества половых партнеров.
БВ вызывается дисбалансом естественной бактериальной микрофлоры и может микробиологически характеризоваться замещением микрофлоры влагалища с преобладанием лактобактерий потенциально патогенными вагинальными бактериями. Переход от здоровой микрофлоры с преобладанием лактобактерий, продуцирующих Н2О2 и молочную кислоту, к сложной многовидовой микрофлоре может происходить относительно быстро и приводить к БВ.
Как обсуждается, например, в заявке ЕР 0257007 (поданной в 1987 г.), давно известно, что бактериальный вагиноз (БВ) сопровождается повышением рН (повышением от нормального/здорового рН, приблизительно равного 4, до рН выше 4,5) и микробным дисбактериозом, при котором микрофлора влагалища с преобладанием Lactobacillus подавляется разрастанием преимущественно анаэробных организмов.
Заявка ЕР 2509610 В1 (HSO Health Care, Vienna, поданная 13.09.2011 и опубликованная/предоставленная в 2013 году) предоставляет обобщенные результаты соответствующего предшествующего уровня техники.
Как обсуждается в ЕР 2509610 В1, в здоровом женском влагалище доминируют различные виды Lactobacillus, которые играют важную роль в защите женщин от урогенитальных инфекций. Лактобактерий обладают способностью прилипать к эпителию влагалища, подавлять адгезию и рост патогенов, поглощать питательные вещества, которые в противном случае доступны для патогенов, и модулировать иммунный ответ хозяина и микроокружение. Самое главное, лактобактерий метаболизируют гликоген, содержащийся в клетках свода влагалища, образуя молочную кислоту в качестве конечного продукта. Таким образом, в здоровом влагалище значения рН достигают уровня примерно 4,0, при котором многие патогены не могут активно развиваться.
При введении женщине в форме фармацевтической композиции (например, вагинальных капсул для введения во влагалище) защитный эффект лактобактерий против потенциальных возбудителей во влагалище осуществляется в результате метаболической активности лактобактерий. Бактерии потребляют гликоген и другие источники глюкозы и продуцируют молочную кислоту. Низкий уровень рН, создаваемый таким образом, вреден для менее желательных бактерий и грибов и, таким образом, защищает слизистую оболочку влагалища от инфекций.
Поскольку вагинальная инфекция является важным механизмом заболевания, ответственным за преждевременные роды, хранение естественного и здорового баланса микрофлоры Lactobacillus во влагалище особенно важно во время беременности. Дефицит лактобактерий может нарушить микробный баланс во влагалище, что часто приводит к синдрому бактериального вагиноза, который может быть связан с количественным и качественным переходом от присутствующих в норме лактобактерий к смешанной микрофлоре, в которой доминируют анаэробные бактерии. Согласно уровню техники, бактериальный вагиноз может характеризоваться полной потерей лактобактерий и сопутствующим увеличением грамвариабельных и грамотрицательных палочек, главными среди которых являются Gardnerella vaginalis, а также Bacteroides, Prevotella и Mobiluncus. Тем не менее, потеря вагинальных лактобактерий также делает небеременных женщин восприимчивыми к инфекции, что может привести к эндометриту или даже воспалительному заболеванию таза.
Во время менопаузы происходит инволюция женских половых путей, что отражает, возможно, встроенную биологическую продолжительность жизни, связанную с нейрогипофизарной эндокринной осью. Важнейшим общим изменением является атрофия влагалища. К частым жалобам относятся сухость, жжение, зуд и диспареуния в влагалище, а также дизурия, частое мочеиспускание и рецидивирующие инфекции. Атрофия мочеполовой системы после менопаузы связана с уменьшением секреции эстрогенов, сопровождающимся истощением лактобактерий и повышенной колонизацией патогенными микроорганизмами, связанными с бактериальным вагинозом и инфекциями мочевыводящих путей. У женщин в постклимактерическом периоде вагинальная эстриоловая терапия уменьшает колонизацию кишечной палочкой и увеличивает количество лактобактерий, в результате чего частота рецидивирующих инфекций мочевых и половых путей значительно снижается.
Было описано несколько видов Lactobacillus, в различной степени распространенных во влагалище. В течение некоторого времени считалось, что в микрофлоре здоровых женщин детородного возраста преобладают L. acidophilus и L. fermentum, за которыми следуют L. brevis, L. jensenii и L. casei. В другом исследовании, посвященном микрофлоре Lactobacillus во влагалище, авторы обнаружили, что в микрофлоре влагалища большинства участников преобладает один вид Lactobacillus, причем присутствие других видов демонстрирует широкую индивидуальную изменчивость. Наиболее часто встречающимися видами были L. crispatus, L. gasseri, L. iners и L. jensenii. В другом исследовании, наиболее часто выделяемыми штаммами Lactobacillus были L. jensenii, L. acidophilus, L. casei и L. gasseri. В недавних австрийских исследованиях преобладающие виды Lactobacillus, идентифицированные с помощью видоспецифической ПЦР, а именно L. crispatus, L. gasseri, L. jensenii и L. Rhamnosus, были использованы для создания ДНК-отпечатков (DNA fingerprints). L. crispatus, L. gasseri, L. jensenii и L. Rhamnosus можно считать преобладающими видами во влагалище.
Для восполнения дефицитов микрофлоры Lactobacillus (и, следовательно, защитных свойств 40 микрофлоры влагалища) наиболее распространенным способом замещения Lactobacilli является введение вагинальных суппозиториев, содержащих Lactobacilli. Некоторые авторы считают, что местное использование лактобактерий является безопасным и перспективным лечением для профилактики вагиноза и рецидирвирующих инфекций мочевыводящих путей.
Хотя вагинальные поддерживающие средства являются давней широко распространенной практикой замещения лактобактерий, пероральное введение препарата Lactobacillus представляет собой новую концепцию для восстановления нормальной микрофлоры влагалища. Сравнительно недавние результаты показывают, что пробиотические штаммы L. Rhamnosus GR-1 (АТСС 55826) и L. reuteri RC-14 (АТСС 55845) можно принимать перорально ежедневно в течение двух месяцев без каких-либо побочных эффектов. Употребление впоследствии приводило к значительному улучшению микрофлоры влагалища с точки зрения увеличения присутствия лактобактерий и снижения количества дрожжей и колиформ. В то время как одна группа авторов обсуждала полезные эффекты с точки зрения изменения иммунитета слизистой оболочки или пробиотических бактерий, поднимающихся к влагалищу от ректальной области, другая группа недавно продемонстрировала с помощью видоспецифической ПЦР-амплификации что L. Rhamnosus GR-1 и L. reuteri RC-14 могут быть доставлены в среду влагалища при пероральном введении.
В свете обсуждаемого выше предшествующего уровня техники, изобретение, описанное в ЕР 2509610 В1, относится к применению комбинации конкретных депонированных штаммов L. crispatus, L. Rhamnosus, L. jensenii и/или L. gasseri для лечения бактериального вагиноза (БВ). В таблице 11 на стр. 15 показано, что, например, депонированные L. Rhamnosus (DSM22560) обладают относительно хорошей способностью понижать рН.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задача, решаемая настоящим изобретением, состоит в том, чтобы обеспечить новый штамм Lactobacillus rhamnosus с хорошими свойствами, в частности, в отношении лечения вагинальных и женских половых и мочеполовых инфекций и/или инфекций мочевыводящих путей, вызванных дефицитом Lactobacillus (например, бактериального вагиноза).
Как можно видеть в рабочих примерах ниже, описанный здесь новый штамм L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800 (также называемый здесь BPL005) имеет ряд хороших/улучшенных свойств, в частности, в отношении лечения, например, бактериального вагиноза.
Результаты рабочего Примера 1 в настоящем документе продемонстрировали следующие соответствующие положительные характеристики выделенного штамма L. Rhamnosus СЕСТ 8800 (= BPL005):
1: Он был выделен de novo из изолятов из влагалища здоровых женщин, т.е. на первый взгляд, нет оснований полагать, что это не новый штамм как таковой;
2: Профиль, полученный методом случайной амплификации полиморфной ДНК (RAPD), показал, что штамм отличается от других, а секвенирование 16S рРНК показало, что BPL005 является уникальным штаммом L. Rhamnosus;
3: BPL005 обладал наибольшей среди выделенных штаммов влагалища способностью снижать уровень рН;
4: В анализах без контроля рН, BPL005 обеспечивал быстрое снижение рН. Быстрая продукция молочной кислоты в случае штамма BPL005 согласуется с его высокой способностью снижать рН за короткое время. Что касается продуцирования остальных кислот, штамм BPL005 был лучшим продуцентом среди исследованных штаммов;
5: Что касается резистентности к гинекологическим коммерческим продуктам, штамм BPL005 был устойчив к самой высокой из исследованных концентраций и не наблюдалось никакого ингибирования;
6: Полногеномное секвенирование штамма BPL005 показало, что он имеет уникальный контиг 3.023 Мб, то есть последовательность генома не была одной из последовательностей, описанных в предшествующем уровне техники.
Как обсуждалось выше, давно известно, что бактериальный вагиноз (БВ) сопровождается повышением рН (повышение относительно нормального/здорового рН, равного приблизительно 4, до рН выше 4,5) и микробным дисбактериозом, при котором обычная вагинальная микрофлора с преобладанием Lactobacillus подавляется разрастанием преимущественно анаэробных организмов.
Соответственно, тот факт, что описанный здесь новый штамм L. Rhamnosus СЕСТ 8800 (= BPL005) обладает очень хорошей способностью снижать рН, имеет важное значение для использования штамма в лечении, например, бактериального вагиноза.
Вкратце, не ограничиваясь теорией, на основе описанных в настоящем документе хороших свойств раскрытого в настоящем документе нового штамма L. Rhamnosus, нет оснований полагать, что этот штамм не будет полезен для лечения вагинальных и женских половых и мочеполовых инфекций и/или инфекций мочевыводящих путей, вызванных дефицитом лактобактерий (например, бактериального вагиноза).
Результаты рабочего Примера 2 в настоящем документе показали, что штамм BPL005 обеспечивает уровни снижения рН, близкие к исследованным пробиотикам рассматриваемых в настоящем документе коммерческих гинекологических пробиотических продуктов.
Результаты рабочего Примера 3 показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе продукции в лабораторных условиях (объем 1 л), а данные изготовленного лиофилизированного порошка показали, что штамм BPL005 обладает хорошей стабильностью в течение 15 месяцев. Результаты рабочего Примера 4 показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе продукции в промышленном масштабе (объем 1500 л), а данные изготовленного лиофилизированного порошка показали, что штамм BPL005 обладает очень хорошей стабильностью.
Очевидно, что то, что штамм Lactobacillus может быть получен надлежащим образом в промышленном масштабе, является преимуществом для возможности изготовления рассматриваемого в настоящем документе коммерческого продукта, соответственно, рабочий Пример 4 в настоящем документе демонстрирует дополнительные преимущества описанного в настоящем документе нового штамма L. Rhamnosus СЕСТ 8800 (= BPL005).
Соответственно, первый аспект изобретения относится к молочнокислой бактерии L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800 (здесь также обозначается BPL005) или ее мутанту, где мутантный штамм получают с использованием выделенного штамма в качестве исходного материала, и где мутант сохраняет способность СЕСТ 8800 снижать уровни рН или обладает улучшенной способностью.
Второй аспект изобретения относится к пищевой или фармацевтической композиции, содержащей бактерии по первому аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации.
Термин «пищевая» относится в соответствии с уровнем техники к питанию или регулированию питания или потребления пищи. Соответственно, пищевая композиция представляет собой композицию, которая подходит для добавления к пищевому продукту для человека или кормовому продукту для животного.
Третий аспект изобретения относится к пищевой или фармацевтической композиции по второму аспекту и/или любому описанному в настоящем описании варианту реализации для применения в лечении нарушения у женщины, где нарушение представляет собой дисбаланс естественной бактериальной микрофлоры влагалища, вагинальную инфекцию, женскую генитальную инфекцию, урогенитальную инфекцию или инфекцию мочевыводящих путей.
Четвертый аспект изобретения относится к молочному продукту, напитку, пищевому продукту для питания человека и/или пищевому продукту для кормления животных, отличающемуся тем, что продукт содержит пищевую композицию по второму аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации.
Вариант реализации настоящего изобретения описан ниже исключительно в качестве примеров.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Новый штамм Lactobacillus rhamnosus
Образец нового штамма BPL005 Lactobacillus rhamnosus был депонирован в коллекции СЕСТ 
de Cultivos Tipo) под регистрационным номером СЕСТ 8800 с датой депозита 15 декабря 2014 года. Депозит был сделан в соответствии с Будапештским договором о международном признании депонирования микроорганизмов для целей патентной процедуры.
Первый аспект изобретения относится к описанному в настоящем документе новому штамму или «его мутанту».
Специалисту в данной области ясно, что, путем применения депонированного штамма в качестве исходного материала, квалифицированный читатель может с помощью обычных методов мутагенеза или повторной изоляции регулярно получать дополнительные мутанты или их производные, которые сохраняют описанные в настоящем документе соответствующие свойства и преимущества. Соответственно, термин «его мутант» по первому аспекту относится к мутантным штаммам, полученным с использованием депонированного штамма в качестве исходного материала.
Говоря другими словами, изобретение относится к способу получения мутантного штамма молочнокислой бактерии. L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800, включающему следующие этапы:
(i): получение мутантов молочнокислой бактерии L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800;
(ii): исследование мутантов, полученных на стадии (i), и выявление мутантного штамма, который сохранил или дополнительно улучшил способность СЕСТ 8800 снижать уровень рН; а также
(iii) выделение выявленного на стадии (ii) мутантного штамма с получением, таким образом, мутантного штамма молочнокислой бактерии L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800, где мутантный штамм сохранил или дополнительно улучшил способность СЕСТ 8800 снижать уровни рН.
Предпочтительно, первый аспект относится к молочнокислой бактерии L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800 (здесь также обозначено BPL005).
Статья (Chenoll Е, 
FM, Martinez-Blanch JF, 
D, 
S, Menabrito M. 2016. Complete genome sequence of Lactobacillus rhamnosus strain BPL5 (CECT 8800), a probiotic for treatment of bacterial vaginosis. Genome Announc 4(2):e00292-16. doi:10.1128/genomeA.00292-16. Copyright© 2016 Chenoll et al.) была опубликована в апреле 2016 года, то есть после даты приоритета настоящей заявки - 30 июня 2015 года ЕР 15174222.8.
В этой статье раскрыта полная последовательность генома молочнокислой бактерии L. Rhamnosus с регистрационным номером СЕСТ 8800 согласно настоящему изобретению.
Очевидно, работа по получению мутантного штамма СЕСТ 8800 была бы рутинной для специалиста даже без знания последовательности генома, а известной последовательностью это еще проще.
Пищевая или фармацевтическая композиция - второй аспект изобретения
Как обсуждалось выше, второй аспект изобретения относится к пищевой или фармацевтической композиции, содержащей бактерии по первому аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации.
Пищевая композиция обычно включает пищевые или питательные приемлемые адъюванты и/или вспомогательные вещества.
Фармацевтическая композиция обычно включает фармацевтически приемлемые адъюванты и/или вспомогательные вещества.
Обычно такая композиция включает бактерии в концентрированной форме, включая замороженные, высушенные или лиофилизированные концентраты, обычно имеющие концентрацию жизнеспособных клеток, которая находится в диапазоне от 104 до 1014 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции. Может быть предпочтительным, чтобы диапазон представлял собой диапазон от 106 до 1014 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции или представлял собой диапазон от 108 до 1014 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции. Соответствующий диапазон может также быть от 106 до 1013 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции.
Может быть предпочтительным, чтобы композиция содержала сублимированные (говоря другими словами, лиофилизированные) бактерии.
Композиция может в качестве дополнительных компонентов содержать криопротекторы (например, мальтодекстрин) и/или обычные добавки, включая питательные вещества, такие как дрожжевые экстракты, сахара и витамины.
Если композиция содержит лиофилизированные бактерии, то предпочтительно содержит подходящие вещества-криопротекторы (например, мальтодекстрин).
Как понятно специалисту в данной области, пищевая или фармацевтическая композиция, описанная в настоящем документе, будет в некоторых вариантах реализации включать множество штаммов, принадлежащих одному и тому же виду или принадлежащих разным видам. Типичным примером такой полезной комбинации молочнокислых бактерий в композиции, описанной в настоящем документе, является смесь Leuconostoc sp. и одного или нескольких подвидов Lactococcus. таких как Lc. lactis subsp. lactis, Lc. lactis subsp. cremoris или Lc.s lactis subsp. lactis биовар. diacetylactis.
Это также может быть, например, L. crispatus, L. Rhamnosus, Lactobacillus jensenii и/или L. gasseri. Могут быть предпочтительны формы применения композиций согласно настоящему изобретению, подходящие для перорального приема или местного введения во влагалище. Например, пробиотические бактерии для применения у женщин можно вводить перорально в виде капсул, или (насыпанных в пакетики) растворенных в напитке, или в виде ферментированного молока (йогурта). При пероральном введении бактерии должны выживать прохождение через желудок и двенадцатиперстную кишку (демонстрируя определенную устойчивость к кислоте и желчи) и временно колонизировать кишечник. Оттуда небольшое количество бактерий будет подниматься во влагалище и (опять же временно) колонизировать слизистую влагалища. Пробиотические бактерии можно также использовать обычным образом в виде вагинальных капсул или суппозиториев и непосредственно применять во влагалище. Защитный эффект лактобактерий против потенциальных патогенов во влагалище возникает в результате метаболической активности лактобактерий. Бактерии потребляют гликоген и другие источники глюкозы и продуцируют молочную кислоту. Низкий рН, генерируемый таким образом, вреден для менее желательных бактерий и грибов и, таким образом, защищает слизистую оболочку влагалища от инфекций. Поэтому композицию согласно изобретению можно вводить в виде суппозиториев, вагинальных капсул для вагинального введения или в виде капсул с покрытием, таблеток, саше, пилюль, ампул, флаконов для перорального приема, а также йогурта, йогуртовых напитков, ферментированного молока, соков и других ферментированных напитков и продуктов.
Использование для лечения нарушения у женщин - третий аспект изобретения
Как обсуждалось выше, третий аспект изобретения относится к пищевой или фармацевтической композиции по второму аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации для применения в лечении нарушения у женщин, где нарушение представляет собой дисбаланс естественной микрофлоры влагалища, вагинальную инфекцию, женскую половую инфекцию, урогенитальную инфекцию или инфекцию мочевыводящих путей.
Как понятно специалисту в данной области, в отношении нарушения у женщин, например, пищевая или фармацевтическая композиция, описанная в настоящем документе, будет применяться многократно для восстановления и/или поддержания здоровой бактериальной микрофлоры влагалища.
Третий аспект может быть альтернативно описать как относящийся к способу лечения нарушения у женщин, где нарушение представляет собой дисбаланс естественной бактериальной микрофлоры влагалища, вагинальную инфекцию, женскую генитальную инфекцию, урогенитальную инфекцию или инфекцию мочевыводящих путей у женщины, включающему введение соответствующего количества пищевой или фармацевтической композиции по второму аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации у женщины.
Примерами соответствующего нарушения являются вагиноз, вагинит, хронический бактериальный вагиноз, хроническая дрожжевая инфекция, хроническая инфекция мочевыводящих путей в период менопаузы, атрофический вагинит, вагиноз или бактериальный вагиноз.
В предпочтительном варианте реализации, нарушение у женщины представляет собой бактериальный вагиноз (БВ).
Дополнительно, композиции согласно изобретению особенно подходят для применения в лечении или профилактике бессимптомного и рецидивирующего бактериального вагиноза при беременности или преждевременных родах вызванных бактериальным вагинозом.
Молочный продукт, напиток, пищевой продукт и т.д. - четвертый аспект изобретения
Как обсуждалось выше, четвертый аспект изобретения относится к молочному продукту, напитку, пищевому продукту для питания человека и/или кормовому продукту для кормления животных, отличающемуся тем, что продукт содержит пищевую композицию по второму аспекту и/или любому описанному в настоящем документе варианту его реализации.
Молочные продукты согласно настоящему изобретению могут состоять из молока, йогурта, сыра, гомогенизированных продуктов (на основе молока, сыра, фруктов), ферментированного или неферментированного молока (включая сухое молоко, безлактозное молоко, молочные коктейли), содержащих пробиотики.
Лечебный сыр можно получить путем добавления подходящих пробиотических микроорганизмов в концентрированной высушенной форме на определенной фазе обработки сыра, чтобы обеспечить поставку дозы микроорганизмов, необходимых для организма. Напитки могут быть напитками быстрого приготовления или водой, содержащей композиции согласно настоящему изобретению.
Указанные интегрированные продукты (integrators), молочные продукты и пищевые продукты подходят для применения в лечении тех же нарушений у женщин, о которых говорилось выше, то есть для применения в лечении нарушений у женщин, где нарушение представляет собой дисбаланс естественной бактериальной микрофлоры влагалища, вагинальную инфекцию, генитальную инфекцию, мужскую половую инфекцию, урогенитальную инфекцию или инфекцию мочевыводящих путей.
Один из вариантов реализации изобретения относится к способу получения ферментированного пищевого продукта или ферментированного кормового продукта, включающему добавление молочнокислой бактерии Lactobacillus rhamnosus по первому аспекту к исходному материалу пищевого или кормового продукта и хранению таким образом инокулированного исходного материала в условиях, когда молочнокислая бактерия является метаболически активной.
Пригодные исходные материалы пищевых продуктов включают любой материал, который обычно подвергают стадии молочнокислой ферментации (брожения), такие как молоко, растительные материалы, мясные продукты, фруктовые соки, сусло, тесто, соя и масла.
Ферментированные продукты, которые получают указанным способом, включают в качестве типичных примеров молочные продукты, такие как ферментированное молоко, йогурт, сыр, включая свежие сырные продукты или моцареллу и пахту.
В других вариантах реализации, исходный материал представляет собой исходный материал для корма для животных, такой как силос, например, травы, зерновой материал, горох, люцерну или листья сахарной свеклы, где бактериальными культурами инокулируют кормовую культуру, предназначенную для силосования, чтобы добиться ее сохранения, или богатые белками субпродукты для животных, такие как побочные продукты переработки мяса и рыбы также с целью сохранения этих субпродуктов для целей кормления животных.
ПРИМЕРЫ
ПРИМЕР 1 Выделение и характеристика штамма L. Rhamnosus BPL005 согласно изобретению
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
1. Изоляция и отбор штаммов
Чтобы получить изоляты из влагалища здоровых женщин, брали образцы из средней области влагалища у четырнадцати здоровых женщин в пременопаузе в возрасте от 18 до 45 лет. Заданными критериями исключения были беременные или кормящие женщины, менструирующие во время отбора проб, или получающие антибактериальную терапию против предыдущего вагинита.
Тампоном распределяли мазок на чашках с агаром MRS и инкубировали в анаэробных увловиях при 37°C. Грамположительные, неспорулированные палочки отбирали в качестве предположительных лактобактерий. Чистые культуры долговременно хранили (-20°C) в глицерине для дальнейшего анализа.
2. Молекулярная идентификация
Чтобы обеспечить уникальность изолятов, формировали агарозные профили случайно амплифицированной полиморфной ДНК (RAPD), и повторные изоляты отбрасывали.
Молекулярную идентификацию проводили с помощью секвенирования гена 16S рРНК, как описано у Chenoll et al. (Novel Probiotic Bifidobacterium bifidum СЕСТ 7366 strain active against the pathogenic bacterium Helicobacter pylori. 2011. Applied and Environmental Microbiology. 77(4): 1335-1343).
Вкратце, ДНК из чистых культур экстрагировали и очищали, a 16S рДНК амплифицировали с помощью технологии ПЦР. Продукты амплификации очищали и секвенировали. Идентификацию осуществляли путем сравнения последовательностей, полученных с базой данных BLAST (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
3. Выбор штамма, наилучшим образом снижающего рН.
Для изучения способности штаммов лактобактерий снижать уровни рН, стандартизированные культуры штаммов выращивали в среде MRS (de Man, Rogosa and Sharpe) в течение 17 ч при 37°C. Конечный рН измеряли с помощью рН-метра.
Анализ проводили в трех повторах. После проведения экспериментов отдельно исследовали комбинацию штаммов в наибольшей степени снижающих уровень рН. Для проведения этого анализа оба штамма культивировали совместно в среде MRS в течение 17 ч при 37°С, и конечный рН измеряли с помощью рН-метра.
4. Идентификация профиля органических кислот
Для получения профиля органических кислот отобранных штаммов, каждый штамм культивировали в анаэробных условиях при 37°С в ферментерах объемом 1 л. (Biobundle, Applikon) в промышленной среде, оптимизированной в Biopolis для лактобактерий. Для каждого штамма исследовали два состояния: с контролем рН и без контроля рН. В обоих случаях осуществляли мониторинг уровней рН во время анализа. В ходе анализа брали образцы.
Для количественного анализа органических кислот 0,8 мл бесклеточного супернатанта смешивали путем встряхивания с 0,2 мл смеси, содержащей 5% метафосфорной кислоты, сульфата меди (1,56 мг/мл) и 50 мМ 4-метилвалериановой кислоты в качестве внутреннего стандарта, затем образцы фильтровали через фильтры с размером пор 0,45 мкм и разбавляли 1/2 и 1/10.
Оценку органических кислот проводили с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Аликвоту 10 мкл обработанных образцов инъецировали в систему ВЭЖХ Альянс 2695 (Waters), снабженную колонкой Rezex (ROA Organic Acid (Н+) 8% 300×7,8 мм, 8 мкм [Премиум]) в условиях, рекомендованных производителем.
Детектирование осуществляли с помощью детектора показателя преломления (2414 Waters). Элюент дегазировали H2SO4 2.5 мМ при изократическом расходе 0,6 мл/мин. Во всех случаях, кривые количественной оценки строили с использованием заранее исследованных смесей.
5. Резистентность к коммерческим продуктам.
Чтобы проверить резистентность штамма BPL005 к различным гинекологическим продуктам, аликвоты непосредственно исходных растворов каждого продукта растворяли в жидкой среде до 5120 мкг/мл и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. Исходные растворы хранили при -80°C.
Из первого разведения делали серию разведений 
в диапазоне концентраций от 512 до 0,125 мкг/мл. Инокуляты получали непосредственно из 24-часовой колонии, ресуспендировали в физиологическом растворе до 0,5 MacFarland и разбавляли 1/20 в физиологическом растворе. Анализы проводили на многолуночных планшетах и инкубировали в анаэробных условиях при 37°C в течение 24 часов.
Минимальную ингибирующую концентрацию (MIC) определяли как минимальную концентрацию, при которой антибиотик вызывает явное ингибирование (рост отсутствует). В случае продуктов с высокой мутностью анализы включали вторую стадию, на которой 5 мкл 24-часовой культуры BPL005 в среде IST в присутствии серийно разбавленных коммерческих продуктов наносили по каплям в чашки с загаром, чтобы подтвердить рост пробиотика.
6. Геномная последовательность
Для получения полногеномной последовательности и анализа полного генома штамма BPL005, проводили секвенирование генома и биоинформационный анализ.
i) Секвенирование:
Чтобы получить последовательность полного генома отобранного штамма получали высококонцентрированный осадок из банка исходных клеток, и вручную экстрагировали ДНК высокой степени чистоты как описано у Pitcher et al. (Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidium thiocyanate. 1989. Letters in Applied Microbiology. 8 (4): 151-156). Секвенирование проводили с помощью платформы Pacific Biosciences (PacBio).
ii) Биоинформационные анализы:
Исходные последовательности, полученные в результате полногеномного секвенирования, собирали для построения скаффолдов, предназначенных для использования для аннотации генома. тРНК, рРНК и открытые рамки считывания (ОРС) будут предсказаны. Функциональность Открытых рамок Считывания (ОРС) будет аннотирована путем сравнения каждой ОРС с базой данных, содержащей все последовательности царства бактерий. После связывания функциональности гена с каждой ОРС, будут найдены и перечислены гены вирулентности и устойчивости к антибиотикам.
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Изоляция и выбор штаммов
Всего, было получено 14 образцов и они были распределены на чашках с агаром MRS для получения изолятов. Четырнадцать штаммов были получены из 100 выделенных изолятов. Все они были получены из вагинальных образцов. После получения штаммы долговременно хранили (-20°C) в глицерине для дальнейшего анализа. Выделенные изолятор были классифицировали на основе окрашивания по Граму и морфологии клеток. Четырнадцать грамположительных неспорулирующих палочек определяли как предположительные лактобактерий и, соответственно, отбирали для дальнейшей идентификации.
2. Молекулярная идентификация
После выделения изолятов, получали агарозные RAPD-профили для удаления дублированных изолятов. На основе профилей RAPD четырнадцать изолятов были сгруппированы в шесть разных штаммов. Штаммы идентифицировали секвенированием 16S рРНК (Таблица 1) и штаммы Lactobacillus были отобраны для дальнейших исследований (Таблица 2). Кроме того, в исследование были включены коллекционные штаммы L. crispatus СЕСТ 4840 и L. iners DSM 13335.
3. Выбор лучшего рН-снижающего штамма
Изучена способность штаммов снижать уровень рН. В Таблице 3 приведены результаты. В анализах, проведенных только с одним штаммом, уровни рН снижались во всех случаях. Наибольшее снижение рН было получено в случае штамма L. Rhamnosus BPL005, конечное значение рН составляло 3,82.
На основании результатов снижения рН, штамм L. Rhamnosus BPL005 и L. casei BPL013 отобрали для дальнейших исследований.
4. Идентификация профиля органических кислот
Органические кислоты были описаны как ингибирующие метаболиты, а также как соединения с пробиотическим действием. В этом смысле, штаммы BPL005 и BPL013 исследовали на основе продуцирования ими органических кислот при ферментации объемом 1 л. Что касается снижения рН в анализах без контроля рН, в случае штамма BPL005, рН начал очень быстро снижаться. Через 5 часов ферментации уровень рН составлял 3,7, а через 10 часов ферментации рН достигал своего минимума (рН 3,0). В случае штамма BPL013, рН постепенно снижался, наименьшее значение рН достигалось через 30 часов после ферментации.
В Таблицах 4-5 показана продукция органических кислот. В случае ферментации с контролем рН, образцы были извлечены в конце ферментации. Во всех случаях были получены самые высокие уровни для молочной кислоты, причем самыми высокими концентрациями были 22,53 г/л для штамма BPL013, и 19,90 г/л для штамма BPL005, в ферментациях с контролируемым рН. Быстрая продукция молочной кислоты в случае штамма BPL005 согласуется с его высокой способностью снижать рН за короткое время. За образованием молочной кислоты следовало снижение рН у обоих штаммов, которое было более заметным в случае штамма BPL005.
Что касается продукции остальных кислот, штамм BPL005 был лучшим продуцентом во всех случаях. Сообщалось, что эти органические кислоты могут ингибировать болезнетворные бактерии и дрожжи (
et al. Urogenital pathogen inhibition and compatibility between vaginal Lactobacillus strains to be considered as probiotic candidates. 2011 European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. 159: 399-406).
В случае молочной кислоты, полученные уровни были выше, чем другие, ранее описанные в процитированной выше статье et al.
5. Анализы резистентности к коммерческим продуктам.
Результаты, полученные с помощью гинекологических коммерческих продуктов, суммированы в Таблице 6. Во всех случаях, штамм BPL005 был устойчив к самой высокой концентрации, и никакого ингибирования не наблюдалось даже при самых высоких концентрациях в продуктах на основе гелей и кремов.
Таблица 6. Значения MIC, полученные для продуктов на основе прогестерона.
6. Последовательность генома
Был секвенирован полный геном штамма BPL005. Провели экстракцию полного генома, подтвердили идентичность штамма и применили секвенирование. Сборка дала уникальный контиг размером 3.023 Мб. Не было последовательностей предсказанных в качестве плазмид.
Выводы
Результаты этого примера продемонстрировали приведенные ниже в настоящем документе соответствующие положительные характеристики выделенного штамма BPL005 L. Rhamnosus:
1: Штамм был выделен de novo из изолятов из влагалища здоровых женщин, т.е., нет оснований полагать, что это не новый штамм как таковой;
2: Профиль случайно амплифицированной полиморфной ДНК (RAPD) показал, что указанный штамм отличается от других, а секвенирование 16S рРНК показало, что BPL005 является уникальным штаммом L. Rhamnosus;
3: BPL005 обладал самой высокой среди выделенных штаммов влагалища способностью снижать уровень рН;
4: В анализах без контроля рН, BPL005 давал быстрое снижение рН. Быстрое продуцирование молочной кислоты в случае штамма BPL005 согласуется с его высокой способностью снижать рН за короткое время. Что касается продукции остальных кислот, штамм BPL005 был лучшим продуцентом среди исследованных штаммов;
5: Что касается резистентности к гинекологическим коммерческим продуктам, штамм BPL005 был устойчив к самой высокой концентрации и не наблюдалось никакого ингибирования;
6: Полногеномное секвенирование штамма BPL005 показало, что он имеет уникальный контиг 3.023 Мб, то есть последовательность генома не была одной из последовательностей, описанных в предшествующем уровне техники.
ПРИМЕР 2. Сравнение BPL005 с коммерческими гинекологическими пробиотиками
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Жизнеспособные клетки в продукте.
Для более глубокого изучения различных коммерческих пробиотических продуктов, доступных на рынке, исследовали коллекцию из 18 продуктов на основе пробиотиков. Сводные данные по исследованным продуктам приведены в Таблице 7. Для каждого продукта получали концентрацию жизнеспособных клеток путем подсчета на чашках с агаром MRS, и исследовали функциональность штаммов. Для изучения функциональности пробиотические штаммы выделяли, идентифицировали путем секвенирования 16S рДНК и по их способности снижать рН.
Способность снижать уровень рН
Пробиотические штаммы выделяли из коммерческих продуктов и хранили при -80°C. Идентификацию на уровне видов была подтвержади секвенированием 16S рДНК. Для каждого 10 штамма, анализы по снижению рН выполняли, как описано выше. BPL005 штамм был включен в качестве контроля.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Жизнеспособные клетки в продукте
Для более глубокого изучения различных коммерческих пробиотических продуктов, доступных на рынке, была проанализирована коллекция из 18 продуктов на основе пробиотиков. Испытанные продукты суммированы в Таблице 8. Для каждого продукта получали концентрацию жизнеспособных клеток путем подсчета на чашках с агаром MRS, и исследовали функциональность штаммов. Для изучения функциональности пробиотические штаммы выделяли, идентифицировали путем секвенирования 16S рДНК и по их способности снижать рН.
Как показано в Таблице 8, результаты были очень переменными. Некоторые из них показали более низкое по сравнению со спецификацией число жизнеспособных клеток,.
Способность снижать уровень рН
Были выделены пробиотические штаммы из коммерческих продуктов, и исследовали их способность снижать уровень рН. В таблице 9 показано сравнение между ними.
Полученные результаты показали, что штамм BPL005 имеет уровни снижения рН, близкие к уровням лучших исследлованных пробиотиков.
Выводы
Результаты этого Примера показали, что штамм BPL005 имеет уровни снижения рН аналогичные таковым у лучших протестированных пробиотиков из рассмотренных в настоящем документе соответствующих коммерческих гинекологических пробиотических продуктов.
ПРИМЕР 3: Оценка продуктивности штамма LPLB005 Lactobacillus в лабораторных условиях (объем 1 л)
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для оценки продуктивности были созданы мастер-банк клеток и рабочий банк клеток при -80°C. Продукция в лабораторных условиях осуществлялось в ферментере объемом 1 л (Biobundle, Applikon), в промышленной среде, оптимизированной для лактобактерий. Культуру получали в стандартных условиях (Таблица 10) и клетки собирали путем центрифугирования. После сбора клеток, осадок ресуспендировали в растворе носителя на основе мальтодекстрина и замораживали при -80°C и лиофилизировали.
Чтобы оценить устойчивость штамма к процессам замораживания и лиофилизации, выживаемость клеток проверяли на чашках с агаром MRS перед сбором и после лиофилизации.
Изучение стабильности лиофилизированного продукта
Лиофилизированный порошок упаковывали под вакуумом и хранили при 5°C (±3°C). Стабильность продукта проверяли путем подсчетов в чашках с агаром MRS в течение 15 месяцев.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Для получения оценки эффективности штамма BPL005 осуществляли продукцию в лабораторных условиях. Полученные результаты приведены в Таблице 11. Полученные результаты показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе продукции в лабораторных условиях.
Лиофилизированный порошок упаковывали под вакуумом и хранили при 5°C. Стабильность продукта проверяли путем подсчета на чашках с агаром MRS. У штамма BPL005 была хорошая стабильность в течение 15 месяцев.
Выводы
Результаты этого примера показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе продукции в лабораторных условиях (объем 1 л), а данные изготовленного лиофилизированного порошка показали, что штамм BPL005 обладал хорошей стабильностью в течение 15 месяцев.
ПРИМЕР 4. Промышленное получения штамма lactobacilli BPL005 (объем 1500 л)
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Промышленное расширение получения
Промышленную продукцию проводили в ферментере объемом 1500 л. Выращивание осуществляли в промышленной среде, оптимизированной для лактобактерий. Культуру получали в стандартных условиях (в анаэробных условиях, при контроле рН и температуры), и клетки собирали путем центрифугирования в промышленной центрифуге.
Оптимизация лиофилизации
После получения осадок ресуспендировали в носителе (на основе мальтодекстрина) и лиофилизировали в промышленном лиофилизаторе. Чтобы получить устойчивость штамма к процессу лиофилизации, жизнеспособность проверяли на чашках агара MRS сразу после процесса ферментации и после промышленного процесса лиофилизации. Чистоту культуры и лиофилизированного продукта проверяли с помощью электрофоретических профилей RAPD (Random Amplification of Polymorphic DNA) случайно отобранных колоний.
Оценка сока хранения нерасфасованного порошка.
Срок годности нерасфасованного порошка еще исследуется. Аликвоты нерасфасованного порошка хранят при 5°C и 25°C. Оценка будет проводиться периодически путем подсчета на агаре MRS.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Промышленное расширение получения
Промышленную продукцию проводили в ферментере на 1500 л в стандартных условиях. Культура Lactobacillus rhamnosus BPL005 составила 6.55×109 КОЕ/мл. Этот результат согласуется с результатами, полученными в объеме 1 л, и приемлемы с точки зрения эффективности процесса.
Оптимизация лиофилизации
Полученные подсчеты суммированы в Таблице 12. Полученные результаты показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе получения в объеме 1500 литров.
Оценка срока хранения нерасфасованного порошка.
Стабильность, полученная при продукции в объеме 1500 л при 5°C и 25°C упакованного под вакуумом лиофилизированного штамма BPL005, показала, что продукт был очень стабильным при температуре 5°C. Результаты, полученные при 25°C, показывают приемлемое небольшое снижение в цифрах.
Выводы
Результаты этого Примера показали хорошую эффективность штамма BPL005 в процессе продукции в промышленном масштабе (объем 1500 л), и данные изготовленного лиофилизированного порошка показали, что штамм BPL005 обладал очень хорошей стабильностью.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1: ЕР 0257007(подана в 1987).
2: ЕР 2509610 В1 (HSO Health Care, Вена - подана 13.09.2011 и опубликована/предоставлена в 2013 году).
3: Chenoll Е, FM, Martinez-Blanch JF, 
D, 
S, Menabrito M. 2016. Complete genome sequence of Lactobacillus rhamnosus strain BPL5 (CECT 8800), a probiotic for treatment of bacterial vaginosis. Genome Announc 4(2):e00292-16. doi:10.1128/genomeA.00292-16. © 2016 Chenoll et al. - опубликовано в апреле 2016 года.
Claims (21)
1. Молочнокислая бактерия Lactobacillus rhamnosus для продуцирования молочной кислоты с регистрационным номером CECT 8800.
2. Пищевая композиция, включающая бактерию по п. 1 и пищевые или питательные приемлемые адъюванты и/или вспомогательные вещества.
3. Пищевая композиция по п. 2, где концентрация жизнеспособных клеток в композиции находится в диапазоне от 104 до 1014 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции, предпочтительно, где концентрация жизнеспособных клеток находится в диапазоне от 106 до 1013 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции.
4. Пищевая композиция по п. 2 или 3, причем композиция содержит бактерии в замороженном виде, высушенном виде или лиофилизированном виде.
5. Пищевая композиция по п. 4, причем композиция содержит бактерии в лиофилизированном виде, и композиция дополнительно содержит подходящие криопротекторные средства (например, мальтодекстрин).
6. Пищевая композиция по любому из пп. 2-5, где композиция подходит для перорального приема.
7. Пищевая композиция по п. 6, причем композиция имеет форму йогурта, йогуртовых напитков, ферментированного молока, соков и других ферментированных напитков и пищевых продуктов.
8. Фармацевтическая композиция для лечения нарушения у женщины, где нарушение представляет собой дисбаланс естественной бактериальной микрофлоры влагалища, вагинальную инфекцию, женскую половую инфекцию, урогенитальную инфекцию или инфекцию мочевыводящих путей, где композиция включает бактерию по п. 1 и фармацевтически приемлемые адъюванты и/или вспомогательные вещества.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где концентрация жизнеспособных клеток в композиции находится в диапазоне от 104 до 1014 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции, предпочтительно, где концентрация жизнеспособных клеток находится в диапазоне от 106 до 1013 КОЕ (колониеобразующих единиц) на грамм композиции.
10. Фармацевтическая композиция по п. 8 или 9, причем композиция содержит бактерии в замороженном виде, высушенном виде или лиофилизированном виде.
11. Фармацевтическая композиция по п. 10, причем композиция содержит бактерии в лиофилизированном виде, и композиция дополнительно содержит подходящие криопротекторные средства (например, мальтодекстрин).
12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-11, где композиция подходит для перорального приема или вагинального введения.
13. Фармацевтическая композиция по п. 12, причем композиция имеет форму суппозиториев, вагинальных капсул для вагинального введения или капсул с покрытием, таблеток, саше, пилюль, бесшовных капсул, ампул, флаконов для перорального приёма.
14. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 8-13, где нарушение представляет собой вагиноз, вагинит, хронический бактериальный вагиноз, хроническую дрожжевую инфекцию, хроническую инфекцию мочевыводящих путей в период менопаузы, атрофический вагинит, вагиноз или бактериальный вагиноз.
15. Фармацевтическая композиция по п. 14, где инфекция представляет собой бактериальный вагиноз.
16. Молочный продукт, характеризующийся тем, что продукт содержит композицию по любому из пп. 2-13.
17. Питьевой продукт, характеризующийся тем, что продукт содержит композицию по любому из пп. 2-13.
18. Пищевой продукт для питания человека, характеризующийся тем, что продукт содержит композицию по любому из пп. 2-13.
19. Кормовой продукт для кормления животных, характеризующийся тем, что продукт содержит композицию по любому из пп. 2-13.
20. Способ получения ферментированного пищевого продукта, включающий добавление молочнокислой бактерии Lactobacillus rhamnosus по п. 1 к исходному материалу пищевого продукта и хранение инокулированного таким образом исходного материала в условиях, в которых молочнокислые бактерии являются метаболически активными.
21. Способ получения ферментированного кормового продукта, включающий добавление молочнокислой бактерии Lactobacillus rhamnosus по п. 1 к исходному материалу кормового продукта и хранение инокулированного таким образом исходного материала в условиях, в которых молочнокислые бактерии являются метаболически активными.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EPEP15174222.8 | 2015-06-29 | ||
| EP15174222 | 2015-06-29 | ||
| PCT/EP2016/065074 WO2017001440A1 (en) | 2015-06-29 | 2016-06-29 | Lactobacillus rhamnosus bacterium for treatment of e.g. bacterial vaginosis |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017143465A RU2017143465A (ru) | 2019-08-01 |
| RU2017143465A3 RU2017143465A3 (ru) | 2019-11-20 |
| RU2758109C2 true RU2758109C2 (ru) | 2021-10-26 |
Family
ID=53496506
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017143465A RU2758109C2 (ru) | 2015-06-29 | 2016-06-29 | Бактерия lactobacillus rhamnosus для лечения, например, бактериального вагиноза |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10588926B2 (ru) |
| JP (1) | JP6837015B2 (ru) |
| KR (1) | KR102713511B1 (ru) |
| CN (2) | CN108076643B (ru) |
| AU (1) | AU2016287200B2 (ru) |
| CA (1) | CA2989977A1 (ru) |
| MX (1) | MX2017016748A (ru) |
| RU (1) | RU2758109C2 (ru) |
| WO (1) | WO2017001440A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102713511B1 (ko) | 2015-06-29 | 2024-10-04 | 훼링 비.브이. | 세균성 질증의 치료를 위한 락토바실러스 람노서스 박테리아 |
| EP3427745A1 (en) | 2017-07-12 | 2019-01-16 | Nederlandse Organisatie voor toegepast- natuurwetenschappelijk onderzoek TNO | New probiotic composition for prevention of bacterial vaginosis |
| CN108004188B (zh) * | 2018-01-11 | 2020-02-14 | 广东龙创基药业有限公司 | 一种鼠李糖乳杆菌及其用于制备阴道抑菌药物的应用 |
| RU2703708C1 (ru) * | 2018-10-08 | 2019-10-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования степени риска нарушения микробиоты влагалища |
| BR112022024128A2 (pt) | 2020-06-01 | 2022-12-27 | Ferring Bv | Composição de microbiota vaginal, e, método para tratar uma infecção |
| EP4165220B1 (en) * | 2020-06-11 | 2024-07-03 | ADM Denmark A/S | Probiotic composition and uses thereof against candida infections |
| FI3939602T3 (fi) * | 2020-07-14 | 2024-06-26 | Probisearch S L U | Lactobacillus salivarus -kanta ps11610 ja sen käyttö virtsa- ja sukuelinten dysbioosin ennaltaehkäisyssä ja hoidossa |
| KR102546934B1 (ko) | 2021-04-02 | 2023-06-23 | 대한민국 | 락토바실러스 람노서스 kcc-51 균주 및 이를 포함하는 조성물 |
| CN113287753A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-08-24 | 国珍健康科技（北京）有限公司 | 一种用于改善女性阴道炎症的益生菌组合物 |
| CN115252655B (zh) * | 2022-07-14 | 2023-06-16 | 金华银河生物科技有限公司 | 用于改善阴道炎症的益生菌后生元制品及制备方法和应用 |
| CN115569154B (zh) * | 2022-09-21 | 2024-06-11 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 防治念珠菌阴道炎的鼠李糖乳杆菌LRa05及其应用 |
| CN118077903B (zh) * | 2024-03-27 | 2024-09-17 | 瀚天生物(北京)科技有限公司 | 一种用于女性改善阴道紧致和水润环境的口服益生菌复合制剂及其制备方法与应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA000412B1 (ru) * | 1995-06-02 | 1999-06-24 | Лэфор Лэбараторис Лимитед | Фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы, способы их применения и препарат из микроинкапсулированных лактобацилл |
| EP1137423B1 (en) * | 1998-12-11 | 2005-03-09 | Urex Biotech, Inc. | Oral administration of lactobacillus for the treatment and prevention of urogenital infection |
| EP1858340B1 (en) * | 2005-02-15 | 2010-07-14 | Barry R. Goldin | A food containing a probiotic and an isolated beta-glucan and methods of use thereof |
| RU2013147472A (ru) * | 2013-10-24 | 2015-04-27 | Автономная Некоммерческая Организация "Научно-Исследовательский Центр Биотехнологии Антибиотиков И Других Биологически Активных Веществ "Биоан" | Использование штамма lactobacillus rhamnosus b51 для лечения репродуктивных осложнений, обусловленных бактериальным вагинозом |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8603338D0 (sv) | 1986-08-07 | 1986-08-07 | Bjorn Andersch | Medel for behandling av tillstand i slidan |
| FR2672300B1 (fr) * | 1991-02-01 | 1994-09-23 | Agronomique Inst Nat Rech | Xylanase, souches de bacillus productrices de xylanase et leurs utilisations. |
| US6461607B1 (en) | 1998-08-24 | 2002-10-08 | Ganeden Biotech, Inc. | Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof |
| US20020044926A1 (en) * | 1999-12-10 | 2002-04-18 | Gregor Reid | Oral administration of lactobacillus for the treatment and prevention of urogenital infection |
| SE521022C2 (sv) * | 2001-09-20 | 2003-09-23 | Ellen Ab | Mjölksyraproducerande bakterier för användning som probiotiska organismer i vaginan hos människa |
| US20040022775A1 (en) * | 2002-04-15 | 2004-02-05 | Gregor Reid | Methods of treating viral infections in mammals |
| US20090028839A1 (en) * | 2004-12-23 | 2009-01-29 | Tchikindas Mikhail L | Compositions and methods for the prophylaxis and treatment of vaginal infections |
| EP2206506A1 (en) * | 2008-12-18 | 2010-07-14 | Bracco Imaging S.p.A | Probiotic formulations |
| EP2216036A1 (en) * | 2009-02-10 | 2010-08-11 | Nestec S.A. | Lactobacillus rhamnosus NCC4007, a probiotic mixture and weight control |
| EP2428214A1 (en) * | 2010-09-14 | 2012-03-14 | HSO Health Care GmbH | Compositions for the vaginal and oral administration of lactobacillus and uses thereof |
| CN102835657B (zh) * | 2011-06-20 | 2014-08-20 | 丰华生物科技股份有限公司 | 用以抑制发炎反应及抗阴道炎的含乳酸菌食品组合物及医药组合物 |
| FR2992861B1 (fr) * | 2012-07-09 | 2014-10-17 | Probionov | Utilisation de thiosulfate pour potentialiser l'effet anti-pathogene des lactobacilles |
| US20140234259A1 (en) * | 2012-12-11 | 2014-08-21 | Suzanah Juras | Natural Intra-Vaginal Inserts to Control Imbalanced pH |
| CN103409334B (zh) * | 2013-01-16 | 2018-07-20 | 生合生物科技股份有限公司 | 抑制阴道炎病原菌之乳酸杆菌及其用途 |
| JP6110240B2 (ja) * | 2013-04-10 | 2017-04-05 | 国立大学法人広島大学 | 乳酸菌の菌体等、並びにこれらを含有する口腔内疾患の予防材等及び食品 |
| KR102713511B1 (ko) | 2015-06-29 | 2024-10-04 | 훼링 비.브이. | 세균성 질증의 치료를 위한 락토바실러스 람노서스 박테리아 |
-
2016
- 2016-06-29 KR KR1020187000096A patent/KR102713511B1/ko active IP Right Grant
- 2016-06-29 AU AU2016287200A patent/AU2016287200B2/en active Active
- 2016-06-29 CN CN201680036708.XA patent/CN108076643B/zh active Active
- 2016-06-29 US US15/740,807 patent/US10588926B2/en active Active
- 2016-06-29 RU RU2017143465A patent/RU2758109C2/ru active
- 2016-06-29 WO PCT/EP2016/065074 patent/WO2017001440A1/en active Application Filing
- 2016-06-29 JP JP2017567804A patent/JP6837015B2/ja active Active
- 2016-06-29 CN CN202110848314.7A patent/CN113564075A/zh active Pending
- 2016-06-29 MX MX2017016748A patent/MX2017016748A/es unknown
- 2016-06-29 CA CA2989977A patent/CA2989977A1/en active Pending
-
2020
- 2020-03-03 US US16/808,242 patent/US11202813B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA000412B1 (ru) * | 1995-06-02 | 1999-06-24 | Лэфор Лэбараторис Лимитед | Фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного начала жизнеспособные лактобациллы, способы их применения и препарат из микроинкапсулированных лактобацилл |
| EP1137423B1 (en) * | 1998-12-11 | 2005-03-09 | Urex Biotech, Inc. | Oral administration of lactobacillus for the treatment and prevention of urogenital infection |
| EP1858340B1 (en) * | 2005-02-15 | 2010-07-14 | Barry R. Goldin | A food containing a probiotic and an isolated beta-glucan and methods of use thereof |
| RU2013147472A (ru) * | 2013-10-24 | 2015-04-27 | Автономная Некоммерческая Организация "Научно-Исследовательский Центр Биотехнологии Антибиотиков И Других Биологически Активных Веществ "Биоан" | Использование штамма lactobacillus rhamnosus b51 для лечения репродуктивных осложнений, обусловленных бактериальным вагинозом |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHEW S.Y. et al. Probiotic Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14 exhibit strong antifungal effects against vulvovaginal candidiasis-causing Candida glabrata isolates, Journal of Applied Microbiology, 2015, May, 118 (5), pp.1180-1190. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US11202813B2 (en) | 2021-12-21 |
| KR20180021777A (ko) | 2018-03-05 |
| AU2016287200A1 (en) | 2018-01-18 |
| US20180228850A1 (en) | 2018-08-16 |
| AU2016287200B2 (en) | 2020-09-17 |
| MX2017016748A (es) | 2018-11-09 |
| US20200268815A1 (en) | 2020-08-27 |
| WO2017001440A1 (en) | 2017-01-05 |
| JP2018520677A (ja) | 2018-08-02 |
| JP6837015B2 (ja) | 2021-03-03 |
| US10588926B2 (en) | 2020-03-17 |
| CA2989977A1 (en) | 2017-01-05 |
| RU2017143465A (ru) | 2019-08-01 |
| CN113564075A (zh) | 2021-10-29 |
| KR102713511B1 (ko) | 2024-10-04 |
| CN108076643B (zh) | 2021-09-21 |
| CN108076643A (zh) | 2018-05-25 |
| RU2017143465A3 (ru) | 2019-11-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2758109C2 (ru) | Бактерия lactobacillus rhamnosus для лечения, например, бактериального вагиноза | |
| US11116806B2 (en) | Composite probiotic lactic acid bacteria powder and preparation method and use thereof | |
| DK1859022T3 (en) | New acid tolerant Lactobacillus sakei Probio-65 with the ability to inhibit growth of pathogenic microorganisms and antiallergic effect | |
| JP4022780B2 (ja) | コレステロールを低下および同化する能力を有する酸および胆汁酸塩耐性のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ分離株 | |
| US9649347B2 (en) | Protective effects and application of a Lactobacillus rhamnosus on the alleviation of chronic alcoholic liver injury | |
| TW201625284A (zh) | 新穎的雷曼氏乳桿菌菌株（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）與其用於抑制黃嘌呤氧化酶及治療痛風之代謝產物 | |
| CN110564638A (zh) | 一株具有益生特性的罗伊氏乳杆菌及其用途 | |
| CN116396890B (zh) | 用于防治结肠癌的植物乳杆菌zjuids15及其应用 | |
| KR20230154400A (ko) | 락토바실러스 플란타럼 hom3201 균주 및 이의 생균 제제, 제조 방법 및 용도 | |
| CN117143767A (zh) | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 | |
| CN117159598B (zh) | 植物乳植杆菌Lp18在制备增强免疫的药物或保健食品方面的用途及产品 | |
| CN114774315A (zh) | 鼠李糖乳杆菌菌株LRa05在制备增强免疫力制品和/或缓解湿疹制品方面的用途 | |
| CN117917475A (zh) | 一种调节肠道菌群的植物乳植杆菌p16及其应用、产品和方法 | |
| US11045507B2 (en) | Bifidobacterium animalis AMT30 strain and the composition containing the strain of Bifidobacterium animalis AMT30 | |
| CN114410531B (zh) | 降低血浆tmao及缓解、预防动脉粥样硬化的长双歧杆菌ccfm1216及其应用 | |
| EP3313424B1 (en) | Lactobacillus rhamnosus bacterium for treatment of e.g. bacterial vaginosis | |
| CN112236155A (zh) | 一种组合物及其应用 | |
| CN117327604A (zh) | 包含鼠李糖乳杆菌菌株的活菌制剂及其用途 | |
| CN116925964A (zh) | 一种通过调节肠道微生物菌群来预防治疗肥胖的植物乳杆菌 | |
| CN117323349A (zh) | 包含鼠李糖乳杆菌菌株的组合物及其用途 | |
| CN118126894A (zh) | 一株能够拮抗肠道肠杆菌科缓解结肠炎的益生菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |