RU2728217C1 - Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles - Google Patents
Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles Download PDFInfo
- Publication number
- RU2728217C1 RU2728217C1 RU2020101873A RU2020101873A RU2728217C1 RU 2728217 C1 RU2728217 C1 RU 2728217C1 RU 2020101873 A RU2020101873 A RU 2020101873A RU 2020101873 A RU2020101873 A RU 2020101873A RU 2728217 C1 RU2728217 C1 RU 2728217C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nutrient medium
- vibrio cholerae
- cultivation
- bottles
- disubstituted
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/63—Vibrio
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается усовершенствования состава питательной среды, пригодной для использования на начальных этапах технологии получения ИБП на основе V. cholerae. Для накопления, диагностики, идентификации и выращивания холерных вибрионов используют большое количество разнообразных питательных сред. Однако большинство из них в силу дороговизны, применения дефицитных компонентов, относящихся к пищевому сырью, трудоемкости и многоэтапности в приготовлении непригодно для использовании в технологии получения посевных материалов и посевных культур.The invention relates to biotechnology and concerns the improvement of the composition of the nutrient medium, suitable for use at the initial stages of the technology of obtaining UPS based on V. cholerae. For the accumulation, diagnosis, identification and cultivation of Vibrio cholerae, a wide variety of nutrient media are used. However, most of them, due to their high cost, the use of scarce components related to food raw materials, labor intensity and multi-stage preparation, are unsuitable for use in the technology of obtaining seeds and crops.
Предложенная нами питательная среда содержит набор относительно простых и доступных органических и неорганических соединений: лимонную кислоту, янтарную кислоту, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, сульфат железа, сульфат магния, сульфат цинка, натрий хлористый, дистиллированную воду. Изобретение позволяет получить качественную и дешевую питательную среду для культивирования холерного вибриона.Our proposed nutrient medium contains a set of relatively simple and available organic and inorganic compounds: citric acid, succinic acid, disubstituted potassium phosphate, disubstituted sodium phosphate, ferrous sulfate, magnesium sulfate, zinc sulfate, sodium chloride, distilled water. The invention makes it possible to obtain a high-quality and cheap nutrient medium for the cultivation of Vibrio cholerae.
Изобретение относится к биотехнологиии касается усовершенствования состава питательной среды для культивирования холерного вибриона при производстве медицинских иммунобиологических препаратов.The invention relates to biotechnology and concerns the improvement of the composition of the nutrient medium for the cultivation of Vibrio cholerae in the production of medical immunobiological preparations.
Для культивирования холерных вибрионов используют различные питательные среды (Лабинская А.С. Руководство по медицинской микробиологии, 2015). Большинство питательных сред, применяемые для культивирования возбудителя холеры в качестве основы содержат ферментативный (кислотный) гидролизат казеина или ферментативный гидролизат мяса крупного рогатого скота (КРС) по способу Хоттингера (Козлов Ю.А. Питательные среды в медицинской микробиологии, 1950; Виноградова И.Н. Производственные питательные среды / Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, 1962).Various nutrient media are used for the cultivation of Vibrio cholerae (Labinskaya A.S., Guide to Medical Microbiology, 2015). Most nutrient media used for the cultivation of the causative agent of cholera as a base contain enzymatic (acid) hydrolyzate of casein or enzymatic hydrolyzate of cattle meat (cattle) according to the Hottinger method (Kozlov Yu.A. Nutrient media in medical microbiology, 1950; Vinogradova I.N. Production culture media / Guide to microbiology, clinical picture and epidemiology of infectious diseases, 1962).
Основными недостатками указанных сред являются дороговизна, сложность и длительность их приготовления.The main disadvantages of these media are their high cost, complexity and duration of their preparation.
Наиболее широко используемой питательной средой для лабораторного культивирования микроорганизмов, в том числе и холерных вибрионов, является среда на основе гидролизата мяса говяжьего ферментативного. Содержание аминного азота в питательной среде составляет 0,10-0,12%, натрия хлористого (NaCl) 0,3-0,4%, натрия фосфорнокислого двузамещенного (Na2HPO4×12H2O) - 0,1%, калия хлористого (KCl) - 0,02%. Данная питательная среда полноценна по аминокислотному составу и обеспечивает питательные потребности возбудителя холеры. Однако гидролизаты говяжьего мяса различных производителей зачастую значительно отличаются друг от друга как по качественному, так и количественному составу питательных веществ, что существенно влияет на ростовые характеристики питательных сред. Это связано, на наш взгляд, не только с техническими особенностями приготовления гидролизатов, но и с возможным использованием антибиотиков, гормонов и т.п. соединений на этапах выращивания КРС. Кроме того, питательные основы и среды отечественных производителей имеют достаточно непродолжительные сроки годности и часто даже после недлительного хранения (в пределах сроков годности) ростовые характеристики их значительно снижаются.The most widely used nutrient medium for laboratory cultivation of microorganisms, including cholera vibrios, is a medium based on fermentative beef meat hydrolyzate. The content of amine nitrogen in the nutrient medium is 0.10-0.12%, sodium chloride (NaCl) 0.3-0.4%, sodium phosphate disubstituted (Na 2 HPO 4 × 12H 2 O) - 0.1%, potassium chloride (KCl) - 0.02%. This nutrient medium is complete in amino acid composition and provides the nutritional needs of the cholera pathogen. However, hydrolysates of beef meat from different manufacturers often differ significantly from each other both in qualitative and quantitative composition of nutrients, which significantly affects the growth characteristics of nutrient media. In our opinion, this is due not only to the technical features of the preparation of hydrolysates, but also to the possible use of antibiotics, hormones, etc. compounds at the stages of cattle rearing. In addition, the nutrient bases and media of domestic producers have a rather short shelf life and often, even after short storage (within the shelf life), their growth characteristics are significantly reduced.
Так же необходимо отметить, что недостатком данной питательной среды является достаточно высокая стоимость и использование в составе пищевого сырья.It should also be noted that the disadvantage of this nutrient medium is the rather high cost and use in the composition of food raw materials.
Целью настоящего изобретения является разработка качественной более дешевой питательной среды контролируемого состава (которая бы обеспечивала накопительный эффект), характеризующейся простотой приготовления и не имеющей дефицитных компонентов, представляющих пищевую ценность.The aim of the present invention is to develop a high-quality, cheaper nutrient medium of controlled composition (which would provide a cumulative effect), characterized by ease of preparation and not having deficient components of nutritional value.
Техническим результатом изобретения является создание новой питательной среды для культивирования холерных вибрионов, не уступающей по своим ростовым свойствам питательным средам основе белков животного происхождения и отличающейся более стандартными и воспроизводимыми результатами при получении биомассы. Экономический эффект от использования изобретения заключается в снижении себестоимости конечного продукта - иммунобиологических препаратов.The technical result of the invention is the creation of a new nutrient medium for the cultivation of Vibrio cholerae, which is not inferior in its growth properties to nutrient media based on proteins of animal origin and is distinguished by more standard and reproducible results in obtaining biomass. The economic effect from the use of the invention is to reduce the cost of the final product - immunobiological preparations.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда содержит нижеперечисленные химические ингредиенты вследующем соотношении, г/л:The essence of the invention lies in the fact that the nutrient medium contains the following chemical ingredients in the following ratio, g / l:
Питательную среду для выращивания холерного вибриона готовят следующим способом. Лимонную и янтарную кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, сульфат железа, сульфат цинка, натрий хлористый последовательно растворяют в дистиллированной воде и с помощью 20% раствора натрия гидроокиси устанавливают рН 7,5±0,2. После этого в раствор вносят сульфат магния и добавляют дистиллированную воду до необходимого объема среды.A nutrient medium for growing Vibrio cholerae is prepared in the following way. Citric and succinic acids, disubstituted potassium phosphate, disubstituted sodium phosphate, ferrous sulfate, zinc sulfate, sodium chloride are successively dissolved in distilled water and a pH of 7.5 ± 0.2 is adjusted using a 20% sodium hydroxide solution. After that, magnesium sulfate is added to the solution and distilled water is added to the required volume of the medium.
Питательную среду разливают во флаконы объемом 100 мл по 50 мл и в бутыли объемом 20 л по 10 л. Стерилизацию проводят в автоклаве при 0,5 атм в течение 30 мин.The nutrient medium is poured into 100 ml vials of 50 ml each and into a 20 l bottle of 10 l each. Sterilization is carried out in an autoclave at 0.5 ATM for 30 minutes.
Сравнительную оценку качества предлагаемой питательной среды проводят согласно нормативным документам (Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона). Для определения качества питательных сред используют культуру тест-штамма V. cholera не O1 Р-9741. Для этого культуру, хранившуюся на полужидком агаре, высевают в 1% пептонную воду или бульон Мартена рН 7,7±0,1 и инкубируют при температуре 37±1°С в течение 3-5 часов. Затем культуру высевают бактериологической петлей на чашку с агаром Хоттингера рН 7,7±0,1 (1 пассаж).A comparative assessment of the quality of the proposed nutrient medium is carried out in accordance with the regulatory documents (Instruction for bacteriological control of diagnostic nutrient media for Vibrio cholerae). To determine the quality of nutrient media, a culture of the V. cholera not O1 P-9741 test strain is used. For this, the culture, stored on semi-liquid agar, is inoculated in 1% peptone water or Martin broth pH 7.7 ± 0.1 and incubated at 37 ± 1 ° C for 3-5 hours. Then the culture is seeded with a bacteriological loop on a plate with Hottinger's agar pH 7.7 ± 0.1 (1 passage).
Через 18-20 ч роста с поверхности агара отбирают типичные по морфологии колонии холерных вибрионов, пересевают их на агаровые пластинки и инкубируют при температуре 37±1°С в течение 3-5 часов (2-пассаж).After 18-20 hours of growth, colonies of Vibrio cholerae with typical morphology are selected from the agar surface, subcultured onto agar plates and incubated at 37 ± 1 ° C for 3-5 hours (2-passage).
Для контроля питательных сред готовят взвесь вибрионов в 0,9%-м растворе натрия хлорида с рН 7,2±0,1, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича (ОСО 42-28-85П), эквивалентную 2,2×109 м.к./мл. Приготовленную взвесь в объеме 1,0 мл стерильной пипеткой переносят в пробирку, содержащую 1,2 мл стерильного 0,9%-ого физиологического раствора натрия хлорида. Затем осуществляют десятикратные последовательные разведения, перенося 0,5 мл взвеси холерных вибрионов в пробирки, содержащие 4,5 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида до разведения 10-7.To control nutrient media, a suspension of vibrios is prepared in 0.9% sodium chloride solution with a pH of 7.2 ± 0.1, corresponding to 10 units according to the standard turbidity sample of the GISK im. L.A. Tarasevich (OSO 42-28-85P), equivalent to 2.2 × 10 9 m.c. / ml. The prepared suspension in a volume of 1.0 ml is transferred with a sterile pipette into a test tube containing 1.2 ml of sterile 0.9% saline sodium chloride solution. Then tenfold serial dilutions are carried out by transferring 0.5 ml of a suspension of vibrio cholerae into test tubes containing 4.5 ml of 0.9% sodium chloride solution to a dilution of 10 -7 .
Культурой холерных вибрионов из разведений 10-6 и 10-7 (что соответствует содержанию 100 и 10 м.к.) стерильной бактериологической пипеткой засевают по 0,1 мл по 3 флакона опытной и контрольной сред. В качестве контрольной используют заранее проверенную высококачественную 1% пептонную воду, приготовленную на дистиллированной воде. Посевы инкубируют при температуре 37±1°С в течение 6 ч, после чего из каждого флакона петлей №5 осуществляют высев на чашку Петри с заранее поверенной высококачественной плотной питательной средой. Выращивание производят при температуре 37±1°С в течение 12-18 ч.Culture of Vibrio cholerae from dilutions of 10 -6 and 10 -7 (which corresponds to the content of 100 and 10 m.c.) with a sterile bacteriological pipette is inoculated with 0.1 ml of 3 vials of experimental and control media. Pre-tested high-quality 1% peptone water prepared in distilled water is used as a control. The inoculations are incubated at a temperature of 37 ± 1 ° C for 6 hours, after which, from each bottle, loop No. 5 is inoculated onto a Petri dish with a previously verified high-quality dense nutrient medium. Cultivation is carried out at a temperature of 37 ± 1 ° C for 12-18 hours.
Согласно нормативным документам жидкая питательная среда считается пригодной в том случае, если при посеве 100 м.к. (разведение 10-6) и 10 м.к. (разведение 10-7) тест-штамма в 100 мл через 6 ч выращивания и последующего высева на агаровые пластинки вырастают соответственно не менее 10 и 1 колонии. Оценку ростовых свойств питательной среды проводят путем подсчета количества выросших колоний холерного вибриона при посеве содержимого флаконов на пластинки с плотной питательной средой.According to regulatory documents, a liquid nutrient medium is considered suitable if, when sowing 100 m.k. (dilution 10 -6 ) and 10 m.c. (dilution 10 -7 ) test strain in 100 ml after 6 hours of cultivation and subsequent sowing on agar plates, respectively, at least 10 and 1 colonies grow. Evaluation of the growth properties of the nutrient medium is carried out by counting the number of grown colonies of Vibrio cholerae by sowing the contents of the vials on plates with a dense nutrient medium.
Пример 1. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: кислоту лимонную 1,5; кислоту янтарную 1,5; калий фосфорнокислый двузамещенный 2,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; железа сульфат 0,05; магния сульфат 0,6; цинка сульфат 0,03; натрий хлористый 1,5; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м.к., составило соответственно 15 и 2 колонии.Example 1. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: citric acid 1.5; succinic acid 1.5; potassium phosphate disubstituted 2.0; disubstituted sodium phosphate 3.0; iron sulfate 0.05; magnesium sulfate 0.6; zinc sulfate 0.03; sodium chloride 1.5; distilled water up to 1 liter. With such a ratio of ingredients, the number of colonies grown on dense agar plates, for Vibrio cholerae sown from vials at a seed dose of 100 and 10 mc, was 15 and 2 colonies, respectively.
Пример 2. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: кислоту лимонную 3,0; кислоту янтарную 3,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 2,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; железа сульфат 0,05; магния сульфат 0,6; цинка сульфат 0,03; натрий хлористый 1,5; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м.к., составило соответственно 29 и 6 колонии.Example 2. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: citric acid 3.0; succinic acid 3.0; potassium phosphate disubstituted 2.0; disubstituted sodium phosphate 3.0; iron sulfate 0.05; magnesium sulfate 0.6; zinc sulfate 0.03; sodium chloride 1.5; distilled water up to 1 liter. With such a ratio of ingredients, the number of colonies that grew on dense agar plates, for Vibrio cholerae sown from vials at a seed dose of 100 and 10 mc, was 29 and 6 colonies, respectively.
Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: кислоту лимонную 4,5; кислоту янтарную 4,5; калий фосфорнокислый двузамещенный 2,0; натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; железа сульфат 0,05; магния сульфат 0,6; цинка сульфат 0,03; натрий хлористый 1,5; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м.к., составило соответственно 19 и 2 колонии.Example 3. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: citric acid 4.5; succinic acid 4.5; potassium phosphate disubstituted 2.0; disubstituted sodium phosphate 3.0; iron sulfate 0.05; magnesium sulfate 0.6; zinc sulfate 0.03; sodium chloride 1.5; distilled water up to 1 liter. With such a ratio of ingredients, the number of colonies that grew on dense agar plates, for Vibrio cholerae sown from vials at a seed dose of 100 and 10 mc, was 19 and 2 colonies, respectively.
Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды жидкой для культивирования холерного вибриона (пример 2). Питательная среда технически проста в приготовлении (без предварительного этапа подготовки основы), не содержит дорогостоящих ингредиентов.The results obtained made it possible to determine the optimal variant of the liquid nutrient medium for the cultivation of Vibrio cholerae (example 2). The culture medium is technically simple to prepare (without a preliminary stage of preparation of the base), does not contain expensive ingredients.
Основной этап оценки предусматривал использование заявленной питательной среды в реальных условиях при получении посевных материалов и посевных культур холерных вибрионов во флаконах объемом 100 мл и бутылях объемом 20 л в условиях аэрации. Для этого исходную культуру холерных вибрионов в количестве 0,1-0,2 мл стерильно вносили во флаконы с жидкой питательной средой и выращивали в статических условиях при температуре 37±1°С в течение 18-24 ч. Затем посевной материал из флаконов в объеме около 500 мл стерильно с помощью вакуума вводили в 20-литровые бутыли, которые инкубировали с аэрацией (не менее 10,0 дм3 воздуха в минуту на объем среды) при температуре 37±1°С в течение 18-20 ч. В качестве контроля параллельно осуществляли приготовление посевных материалов и посевных культур с использованием жидкой питательной среды из гидроли-зата говяжьего мяса в аналогичных условиях.The main stage of the assessment involved the use of the declared nutrient medium in real conditions when obtaining seeds and inoculum cultures of Vibrio cholerae in 100 ml bottles and 20 L bottles under aeration conditions. For this, the initial culture of Vibrio cholerae in an amount of 0.1-0.2 ml was sterilely introduced into vials with a liquid nutrient medium and grown under static conditions at a temperature of 37 ± 1 ° C for 18-24 hours. Then the inoculum from the vials in volume About 500 ml was sterile using vacuum was introduced into 20-liter bottles, which were incubated with aeration (at least 10.0 dm 3 of air per minute per medium volume) at a temperature of 37 ± 1 ° С for 18-20 hours. As a control in parallel, the preparation of inoculum and inoculum crops was carried out using a liquid nutrient medium from beef hydrolyzate under similar conditions.
Необходимо отметить, что процесс приготовления посевных культур (в бутылях с аэрацией) с использованием питательной среды из гидролизата говяжьего мяса (как и других сред, имеющих белковую основу) неизменно сопровождается пенообразованием, которое может повлечь за собой загрязнение как самой культуры, так и систем подачи воздуха и вакуума. Для предотвращения этого в питательную среду добавляли пеногаситель - стерильное растительное масло. В случае использования заявленной питательной среды введения пеногасителя не требуется, т.к. пенообразования не наблюдается.It should be noted that the process of preparing seed crops (in bottles with aeration) using a nutrient medium from beef hydrolyzate (as well as other media with a protein base) is invariably accompanied by foaming, which can lead to contamination of both the culture itself and the supply systems air and vacuum. To prevent this, an antifoam agent, sterile vegetable oil, was added to the nutrient medium. If the declared nutrient medium is used, the introduction of an antifoam agent is not required, since no foaming is observed.
По окончании инкубирования из каждой бутыли с посевной культурой отбирали пробу и осуществляли высев последовательных десятикратных разведений на чашки Петри с заранее поверенной высококачественной плотной питательной средой.At the end of incubation, a sample was taken from each inoculum bottle and seeding tenfold dilutions were carried out on Petri dishes with a previously verified high-quality solid nutrient medium.
Показано, что прикультивировании V. cholerae Р-9741 во флаконах и бутылях на заявленной питательной среде было получено на 25-35% больше биомассы, чем на питательной среде из гидролизата мяса говяжьего ферментативного.It was shown that the cultivation of V. cholerae P-9741 in vials and bottles on the declared nutrient medium yielded 25-35% more biomass than on the nutrient medium from the fermentative beef hydrolyzate.
Показатель эффективности среды, содержащей лимонную и янтарную кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, железа сульфат, магния сульфат, цинка сульфат, натрий хлористый, дистиллированную воду выше по сравнению со средой, полученной на основе гидролизата мяса говяжьего ферментативного. Увеличение выхода биомассы микроорганизмов обусловлено введением лимонной и янтарной кислот, а также более полноценному и сбалансированному солевому составу, которые способствуют повышению обмена веществ и росту клеток. Кроме того, органические кислоты улучшают растворимость химических ингредиентов и более полно обеспечивают питательные потребности холерных вибрионов.The indicator of the effectiveness of a medium containing citric and succinic acids, disubstituted potassium phosphate, disubstituted sodium phosphate, iron sulfate, magnesium sulfate, zinc sulfate, sodium chloride, distilled water is higher compared to the medium obtained on the basis of enzymatic beef hydrolyzate. The increase in the biomass yield of microorganisms is due to the introduction of citric and succinic acids, as well as a more complete and balanced salt composition, which contribute to an increase in metabolism and cell growth. In addition, organic acids improve the solubility of chemical ingredients and more fully provide the nutritional needs of Vibrio cholerae.
Таким образом, предлагаемая питательная среда включает комплекс легкоусвояемых органических кислот и неорганических соединений, обеспечивает полноценную замену питательным средам на основе гидролизата мяса говяжьего ферментативного при культивировании холерных вибрионов. При этом использование в питательной среде относительно дешевых и доступных органических и неорганических соединений позволяет существенно сократить себестоимость питательной среды без потери ее эффективности.Thus, the proposed nutrient medium includes a complex of readily assimilable organic acids and inorganic compounds, provides a complete replacement for nutrient media based on fermentative beef meat hydrolyzate during the cultivation of Vibrio cholerae. At the same time, the use of relatively cheap and affordable organic and inorganic compounds in the nutrient medium can significantly reduce the prime cost of the nutrient medium without losing its effectiveness.
Предлагаемая питательная среда обеспечивает получение необходимых выходов биомассы и создание требуемых посевных доз на начальных этапах производства иммунобиологических препаратов.The proposed nutrient medium provides for obtaining the necessary outputs of biomass and the creation of the required inoculum doses at the initial stages of production of immunobiological preparations.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020101873A RU2728217C1 (en) | 2020-01-16 | 2020-01-16 | Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020101873A RU2728217C1 (en) | 2020-01-16 | 2020-01-16 | Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2728217C1 true RU2728217C1 (en) | 2020-07-28 |
Family
ID=72085699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020101873A RU2728217C1 (en) | 2020-01-16 | 2020-01-16 | Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2728217C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2241034C1 (en) * | 2003-07-09 | 2004-11-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Nutrient medium for culturing cholera vibrio |
| RU2301256C1 (en) * | 2006-01-10 | 2007-06-20 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федерального агентства по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio |
-
2020
- 2020-01-16 RU RU2020101873A patent/RU2728217C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2241034C1 (en) * | 2003-07-09 | 2004-11-27 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Nutrient medium for culturing cholera vibrio |
| RU2301256C1 (en) * | 2006-01-10 | 2007-06-20 | Российская Федерация, от имени которой выступает Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федерального агентства по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| НИКИФОРОВ А.К., АНТОНЫЧЕВА М.В. и др., Разработка питательных сред на основе не пищевого сырья для глубинного культивирования штаммов холерного вибриона. Проблемы особо опасных инфекций, 2015, вып. 1, с. 85-88. * |
| СИДОРОВ М.А., СКОРОДУМОВ Д.И., ФЕДОТОВ В.Б. Справочник. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М.: КОЛОС, 1995, с.183. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6338964B1 (en) | Process and medium for mammalian cell culture under low dissolved carbon dioxide concentration | |
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| JP2008054688A (en) | Osmotically controlled fermentation process for preparation of acarbose | |
| CN109234215B (en) | Lactobacillus rhamnosus low-salt culture medium and culture method | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| CN110982750A (en) | High-density fermentation method for rhodopseudomonas palustris and application of high-density fermentation method | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2728217C1 (en) | Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles | |
| RU2415923C1 (en) | Method for production of fermentative hydrolysate of fresh white cabbage and nutritive medium for cultivation lactobacteria based thereon | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| RU2447143C2 (en) | METHOD FOR SUBMERGED CULTIVATION OF Bacillus brevis FOR PRODUCING GRAMICIDIN S | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| RU2767782C1 (en) | Nutrient medium for obtaining listeria biomass | |
| RU2711914C1 (en) | Nutrient medium for separation and identification of para-hemolytic vibrios (embodiments) and method for production thereof (embodiments) | |
| RU2708029C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev | |
| RU2394905C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of plague microbe | |
| RU2792438C1 (en) | Selective nutrient medium with mannitol, bile and polymyxin to detect bacteria of the genera proteus, morganella, providencia, dry | |
| RU2301256C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio | |
| RU2380409C1 (en) | Nutrient medium for pestilential microbe cultivation | |
| RU2748492C1 (en) | Dense nutrient medium for monitoring the number of live microbial cells of the vaccine strain of the plague microbe y.pestis ev | |
| RU2642316C1 (en) | Method for production of vaccine against brucellosis of small cattle | |
| RU2757428C1 (en) | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev | |
| RU2593712C2 (en) | METHOD FOR PREPARING CONCENTRATED BRUCELLA CELL CULTURE FROM Brucella abortus 19 STRAIN TO PREPARE BRUCELLOUS ANTIGENS, BRUCELLOUS ANTIGENS (THREE VERSIONS), METHOD OF MAKING BRUCELLOSIS DIAGNOSTIC SERUM AND TEST SYSTEM FOR DIAGNOSING BRUCELLOSIS IN ANIMALS (THREE VERSIONS) | |
| RU2681116C2 (en) | Dense nutrient medium for storage of plague microbe |