RU2241034C1

RU2241034C1 - Nutrient medium for culturing cholera vibrio

Info

Publication number: RU2241034C1
Application number: RU2003121255/13A
Authority: RU
Inventors: В.А. Проскурина (RU); В.А. Проскурина; В.Д. Майска (RU); В.Д. Майская; Л.С. Катунина (RU); Л.С. Катунина; О.Л. Старцева (RU); О.Л. Старцева; В.Н. Савельев (RU); В.Н. Савельев; О.В. Ледовских (RU); О.В. Ледовских; Л.В. Гусева (RU); Л.В. Гусева
Original assignee: Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority date: 2003-07-09
Filing date: 2003-07-09
Publication date: 2004-11-27
Also published as: RU2003121255A

Abstract

FIELD: microbiology.

SUBSTANCE: invention relates to a method for preparing nutrient media providing optimal conditions for vital activity of cholera vibrio and can be used in microbiology and biotechnology. Nutrient medium for culturing cholera vibrio contains sodium chloride, refined sugar syrup as the nutrient base, pipe water as water, and sodium sulfite as a stimulating agent for growth of cholera vibrio.

EFFECT: simplified method for preparing nutrient medium, reduced cost of medium.

3 ex

Description

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для выделения и культивирования холерного вибриона.The invention relates to microbiology, in particular to the production of culture media that create optimal conditions for the isolation and cultivation of cholera vibrio.

При бактериологическом исследовании на холеру используют различные питательные среды: жидкие среды обогащения, щелочной агар, элективные дифференциально-диагностические среды и набор сред для идентификации (Лабинская А.С. Практикум по микробиологическим методам исследования. - М.: Медгиз, 1963, с.443). Основой известных питательных сред являются продукты животного происхождения - пептон, экстракт молодого мяса и др.In bacteriological research on cholera, various nutrient media are used: liquid enrichment media, alkaline agar, selective differential diagnostic media and a set of media for identification (Labinskaya A.S. Workshop on microbiological research methods. - M.: Medgiz, 1963, p. 433 ) The basis of the known nutrient media are animal products - peptone, young meat extract, etc.

Однако перечисленные выше среды дороги.However, the above environments are expensive.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является жидкая среда обогащения, содержащая 100 г пептона, 50 г натрия хлорида, 1 г нитрата калия, 20 г натрия бикарбоната, 1 л дистиллированной воды (Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - M., 1982, с.65).Closest to the proposed nutrient medium is a liquid enrichment medium containing 100 g of peptone, 50 g of sodium chloride, 1 g of potassium nitrate, 20 g of sodium bicarbonate, 1 l of distilled water (Birger M.O. Handbook of microbiological and virological research methods .-- M., 1982, p. 65).

Недостатком данной среды является ее дороговизна и сложность в приготовлении.The disadvantage of this environment is its high cost and complexity in the preparation.

Цель настоящего изобретения заключается в подборе основы питательных сред растительного происхождения, которая бы обеспечивала накопительный эффект и снижение ее стоимости, а также упрощение способа приготовления.The purpose of the present invention is to select the basis of nutrient media of plant origin, which would provide a cumulative effect and reduce its cost, as well as simplifying the method of preparation.

Поставленная цель достигается тем, что питательной основой предлагаемой питательной среды является патока рафинадная, натрия хлорид на водопроводной воде с добавлением в жидкую питательную среду стимулирующей добавки, причем в качестве стимулирующей добавки используют сульфит натрия при следующем соотношении ингредиентов, г/л:This goal is achieved in that the nutrient basis of the proposed nutrient medium is refined molasses, sodium chloride in tap water with the addition of a stimulating additive to the liquid medium, and sodium sulfite is used as a stimulating additive in the following ratio of ingredients, g / l:

Патока рафинадная 20,0Molasses refined 20.0

Натрия хлорид 5,0Sodium Chloride 5.0

Натрия сульфита 0,4Sodium sulfite 0.4

Водопроводная вода ОстальноеTap water rest

Патока рафинадная (ОСТ 18-233-75) в своем составе содержит не менее 45% сахарозы. В отличие от прототипа предлагаемая среда обеспечивает накопительные свойства, оптимальные условия и дешевизну.Refined molasses (OST 18-233-75) in its composition contains at least 45% sucrose. In contrast to the prototype, the proposed environment provides cumulative properties, optimal conditions and low cost.

Использование патоки рафинадной с натрием сульфита на водопроводной воде в качестве питательной основы является отличительным признаком предлагаемой питательной среды. Способ поясняется следующим примером.The use of molasses refined with sodium sulfite in tap water as a nutrient base is a hallmark of the proposed nutrient medium. The method is illustrated by the following example.

Питательную среду готовят следующим образом: патоку рафинадную растворяют в водопроводной воде, добавляют натрий хлористый, нагревают до кипения, доводят рН до 7,7-8,0 20% гидроокисью натрия. Выпавший осадок отфильтровывают через тканевой фильтр с фильтровальной бумагой, к раствору добавляют необходимое количество натрия сульфита. Готовую среду разливают в градуированные флаконы по 100 мл и стерилизуют в автоклаве при 0:5 атм 30 мин. Согласно методических указаний по определению качества питательных сред для выращивания холерного вибриона (Инструкция по бактериологическому контролю диагностических питательных сред для холерного вибриона), готовят культуру авирулентного штамма НАГ-вибриона Р-9741. Для чего культуру, хранящуюся на полужидком агаре, высевают в 17% пептонную воду или бульон Мартена (рН 7,6-7,8) и инкубируют при 37°С в течение 3-5 ч, после чего высевают на чашку с агаром Мартена или Хоттингера (рН 7,6-7,8). Через 18-20 ч роста с агара отбирают гладкие колонии НАГ-вибриона Р-9741 пересевают их на агаровые пластинки (2-пассаж). Культуру выращивают 3-6 ч при 37°С, после чего используют для контроля. Из суточной культуры готовили взвесь м.т., равной 5 ед. по оптическому стандарту мутности по ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасовича. Затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100 и 10 м. к. Из данных разведении взвеси культур высевали по 0,1 мл стерильной бактериологической пипеткой по 3 флакона опытной и контрольной среды. В качестве последней используется заранее проверенная высококачественная 1% пептонная вода, приготовленная на дистиллированной воде. Посевы инкубируют при 37°С 6 ч, после чего из каждого флакона с поверхности высевают петлей № 5 по Чаплевскому на чашку Петри с заранее проверенной высококачественной плотной средой. Выращивание производят при 37°С. Питательная среда жидкая считается пригодной в том случае, если при посеве 100 м.к. тест-штамма в 100 мл через 6 ч выращивания и последующего высева на агаровые пластинки вырастают соответственно не менее 10 и 1 колоний. Оценку ростовых свойств питательной среды проводят путем подсчета количества выросших колоний холерного вибриона при посеве содержимого флаконов на пластинки с плотной питательной средой.The nutrient medium is prepared as follows: refined molasses is dissolved in tap water, sodium chloride is added, heated to boiling, the pH is adjusted to 7.7-8.0 with 20% sodium hydroxide. The precipitate formed is filtered through a fabric filter with filter paper, and the required amount of sodium sulfite is added to the solution. The finished medium is poured into graduated 100 ml bottles and sterilized in an autoclave at 0: 5 atm for 30 minutes. According to the guidelines for determining the quality of nutrient media for growing cholera vibrio (Instructions for bacteriological control of diagnostic nutrient media for cholera vibrio), a culture of avirulent strain NAG vibrio R-9741 is prepared. For this purpose, a culture stored on semi-liquid agar is seeded in 17% peptone water or Marten broth (pH 7.6-7.8) and incubated at 37 ° C for 3-5 hours, after which it is seeded on a plate with Marten agar or Hottinger (pH 7.6-7.8). After 18-20 hours of growth, smooth colonies of the NAG vibrio R-9741 were selected from agar, and they were transferred to agar plates (2-passage). The culture is grown for 3-6 hours at 37 ° C, and then used for control. A suspension of bw was prepared from a daily culture of 5 units. according to the optical turbidity standard for CCA GISK them. L.A. Tarasovich. Then, serial ten-fold dilutions in physiological saline in a volume of 4.5 ml were adjusted to 100 ml and 10 mk in 1 ml. From the dilution data, 0.1 ml sterile bacteriological pipette of 3 vials of experimental and control medium was seeded. As the latter, a pre-tested high-quality 1% peptone water prepared using distilled water is used. Crops are incubated at 37 ° C for 6 h, after which from each bottle the Chaplevsky loop No. 5 is sown from the surface onto a Petri dish with a pre-tested high-quality dense medium. Cultivation is carried out at 37 ° C. A nutrient medium liquid is considered suitable if, when sowing 100 m.k. 100 ml of the test strain after 6 hours of cultivation and subsequent plating on agar plates grow at least 10 and 1 colonies, respectively. Assessment of the growth properties of the nutrient medium is carried out by counting the number of grown colonies of cholera vibrio when sowing the contents of the bottles on plates with a dense nutrient medium.

Пример 1. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 18,0; натрия хлорида 3,0; натрия сульфита 0,3; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м. к., составило соответственно 15 и 2.Example 1. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: molasses refined 18.0; sodium chloride 3.0; sodium sulfite 0.3; tap water - the rest. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on dense agar plates for cholera vibrio sown from vials at a sowing dose of 100 and 10 m.k., amounted to 15 and 2, respectively.

Пример 2. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 20,0; натрия хлорида 5,0; натрия сульфита 0,4; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило соответственно 30 и 5.Example 2. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: molasses refined 20.0; sodium chloride 5.0; sodium sulfite 0.4; tap water - the rest. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on solid agar plates for cholera vibrio seeded from vials at a sowing dose of 100 and 10 mk amounted to 30 and 5, respectively.

Пример 3. Тест-штамм выращивали на питательной среде содержащей, г/л: патоку рафинадную 22,0; натрия хлорида 6,0; натрия сульфита 0,5; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для холерного вибриона высеянных из флаконов при посевной дозе 100 и 10 м. к. составило соответственно 13 и 2.Example 3. The test strain was grown on a nutrient medium containing, g / l: refined molasses 22.0; sodium chloride 6.0; sodium sulfite 0.5; tap water - the rest. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on dense agar plates for cholera vibrio seeded from vials at a sowing dose of 100 and 10 m.k. was 13 and 2, respectively.

На 1% пептонной воде (контроль) количество выросших колоний составило 10 и 1 соответственно.On 1% peptone water (control), the number of grown colonies was 10 and 1, respectively.

Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе патоки рафинадной (пример 2).The results obtained allowed us to determine the optimal variant of the nutrient medium based on refined molasses (example 2).

Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой питательной среды, состоящей из патоки рафинадной 20,0 г/л; натрия хлористого 5,0 г/л; натрия сульфита 0,4 г/л; водопроводной воды - остальное.Thus, based on the foregoing, we can say about the obvious advantages of the proposed nutrient medium, consisting of molasses of refined 20.0 g / l; sodium chloride 5.0 g / l; sodium sulfite 0.4 g / l; tap water - the rest.

Питательная среда технически проста в приготовлении без предварительного этапа подготовки основы.The nutrient medium is technically easy to prepare without a preliminary stage of preparation of the base.

Предлагаемая питательная среда дешевле, так как в основу берется растительное сырье (патока рафинадная с натрием сульфита) и для ее приготовления не требуется дистиллированной воды - среда готовится на водопроводной воде.The proposed nutrient medium is cheaper, since plant raw materials (refined molasses with sodium sulfite) are taken as the basis and distilled water is not required for its preparation - the medium is prepared using tap water.

Claims

Nutrient medium for the cultivation of cholera vibrio, containing a nutrient base, sodium chloride and water, characterized in that it additionally contains sodium sulfite as a growth promoter, refined molasses as a nutrient base, water - tap water with the following content of ingredients, g / l :

Molasses refined 20.0

Sodium Chloride 5.0

Sodium sulfite 0.4

Tap water rest