RU2767782C1 - Nutrient medium for obtaining listeria biomass - Google Patents

Nutrient medium for obtaining listeria biomass Download PDF

Info

Publication number
RU2767782C1
RU2767782C1 RU2021116115A RU2021116115A RU2767782C1 RU 2767782 C1 RU2767782 C1 RU 2767782C1 RU 2021116115 A RU2021116115 A RU 2021116115A RU 2021116115 A RU2021116115 A RU 2021116115A RU 2767782 C1 RU2767782 C1 RU 2767782C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
listeria
biomass
nutrient medium
pancreatic
hydrolyzate
Prior art date
Application number
RU2021116115A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Владимир Ильич Кузнецов
Наталья Маркеловна Хаптанова
Наталья Геннадьевна Гефан
Ольга Николаевна Ивашкова
Александр Сергеевич Остяк
Варвара Сергеевна Косилко
Сергей Владимирович Балахонов
Original Assignee
Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека filed Critical Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Priority to RU2021116115A priority Critical patent/RU2767782C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2767782C1 publication Critical patent/RU2767782C1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to medical biotechnology and can be used to produce listeria biomass. The nutrient medium contains pancreatic hydrolysate of river fish, pancreatic hydrolysate of meat water production waste, fermented egg yolk, sodium chloride, monosubstituted potassium phosphoric acid, disubstituted sodium phosphoric acid, vitamin B1, glucose, microbiological agar and distilled water with the proposed ratio of components.EFFECT: proposed medium makes it possible to obtain listeria biomass with the preservation of the S-form of the cultivated culture in an amount sufficient for the preparation of an antigen intended for the immunization of producing animals in the production of listeria agglutinating serum.1 cl, 1 tbl

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для получения биомассы листерий.The invention relates to medical microbiology and biotechnology and can be used to obtain listeria biomass.

Совершенствование лабораторной диагностики листериоза связано с разработкой питательной среды для получения микробной массы листерий, необходимой при производстве листериозной агглютинирующей сыворотки. Основным условием этого этапа является сохранение S-формы выращиваемой культуры, и получение ее в количестве достаточном для приготовления антигена при иммунизации животных-продуцентов. Это обеспечивает получение высокоактивной специфичной гипериммунной стабильной листериозной агглютинирующей сыворотки.Improving the laboratory diagnosis of listeriosis is associated with the development of a nutrient medium for obtaining the microbial mass of listeria, which is necessary in the production of listeriosis agglutinating serum. The main condition of this stage is the preservation of the S-form of the cultivated culture, and its receipt in an amount sufficient for the preparation of the antigen during the immunization of animal producers. This provides a highly active specific hyperimmune stable listeriosis agglutinating serum.

Поэтому разработка питательных сред, которые позволяют получать достаточное количество биомассы листерий с сохранением S-формы выращиваемой культуры, остается актуальной задачей.Therefore, the development of nutrient media that allow obtaining a sufficient amount of Listeria biomass while maintaining the S-form of the cultivated culture remains an urgent task.

В настоящее время для получения биомассы листерий используют питательный агар, в состав которой входят: панкреатический гидролизат казеина, пептон мясной, дрожжевой экстракт, литий хлористый, эскулин, железо лимонноаммиачное зеленое или коричневое, натрий углекислый, натрий хлористый, агар, селективная добавка (ГОСТ Р 51921-2002 Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes, п. 6.2.4.1) и питательный бульон для выделения листерий, в состав которой входят: панкреатический гидролизат казеина, пептон мясной, дрожжевой экстракт, литий хлористый, натрий хлористый, натрий углекислый, селективная добавка (ГОСТ Р 51921-2002 Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes, п. 6.2.2.1). Однако данные питательные среды не дают возможность получить достаточное количество биомассы микроорганизма.Currently, to obtain listeria biomass, nutrient agar is used, which includes: pancreatic hydrolyzate of casein, meat peptone, yeast extract, lithium chloride, aesculin, green or brown citric ammonium iron, sodium carbonate, sodium chloride, agar, selective additive (GOST R 51921-2002 Food products - Methods for the detection and determination of Listeria monocytogenes bacteria, paragraph 6.2.4.1) and nutrient broth for the isolation of Listeria, which includes: pancreatic digest of casein, meat peptone, yeast extract, lithium chloride, sodium chloride, sodium carbonate , selective additive (GOST R 51921-2002 Food products. Methods for detection and determination of Listeria monocytogenes bacteria, clause 6.2.2.1). However, these nutrient media do not make it possible to obtain a sufficient amount of microorganism biomass.

Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является питательная среда плотная для культивирования возбудителя листериоза, содержащая ферментативный гидролизат бобов сои, ферментативный гидролизат из активированной эмбрионально-яичной массы перепелов, натрий хлористый, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов (патент РФ №2525637, Опубл. 20.05.2014, Бюл. №14). Недостатком данной питательной среды является небольшой выход биомассы листерий. Кроме того, питательная среда достаточно дорога.Closest to the proposed invention is a dense nutrient medium for cultivating the causative agent of listeriosis, containing an enzymatic hydrolyzate of soybeans, an enzymatic hydrolyzate from an activated quail embryonic egg mass, sodium chloride, potassium phosphate 2-substituted 3-water, sodium phosphate 2-substituted 12-water , microbiological agar and distilled water in a given ratio of components (RF patent No. 2525637, Publ. 05.20.2014, Bull. No. 14). The disadvantage of this nutrient medium is the low yield of Listeria biomass. In addition, the nutrient medium is quite expensive.

Задача изобретения - расширение арсенала питательных сред для получения биомассы листерий, повышение эффективности питательной среды (увеличение выхода микробных клеток с 1 мл питательной среды).The objective of the invention is to expand the arsenal of nutrient media for obtaining Listeria biomass, increasing the efficiency of the nutrient medium (increasing the yield of microbial cells from 1 ml of nutrient medium).

Технический результат достигается тем, что предлагаемая питательная среда содержит гидролизат речной рыбы панкреатический, гидролизат отходов производства мясной воды панкреатический, ферментированный яичный желток, хлорид натрия, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий фосфорнокислый двузамещенный, витамин В1, глюкозу, агар микробиологический и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л:The technical result is achieved by the fact that the proposed nutrient medium contains pancreatic hydrolyzate of river fish, pancreatic hydrolyzate of meat water production waste, fermented egg yolk, sodium chloride, potassium phosphate monosubstituted, sodium phosphate disubstituted, vitamin B 1 , glucose, microbiological agar and distilled water in the following ratio of components, g/l:

гидролизат речной рыбы панкреатическийpancreatic hydrolyzate of river fish 10,0-12,010.0-12.0 гидролизат отходов производства мясной воды панкреатическийpancreatic meat water production waste hydrolyzate 8,5-9,58.5-9.5 ферментированный яичный желтокfermented egg yolk 1,12-1,301.12-1.30 хлорид натрияsodium chloride 2,9-3,52.9-3.5 калий фосфорнокислый однозамещенныйpotassium phosphate monosubstituted 2,2-2,82.2-2.8 натрий фосфорнокислый двузамещенныйsodium phosphate disubstituted 7,2-7,87.2-7.8 витамин В1 vitamin B 1 0,04-0,060.04-0.06 глюкоза glucose 5,0-5,55.0-5.5 агар микробиологическийmicrobiological agar 9,0-11,09.0-11.0 вода дистиллированнаяdistilled water до 1 лup to 1 l

Сравнение с прототипом показало, что предлагаемая питательная среда отличается от известной тем, что она содержит гидролизат речной рыбы панкреатический, гидролизат отходов производства мясной воды панкреатический, ферментированный яичный желток, калий фосфорнокислый однозамещенный, витамин В1 и глюкозу в предлагаемых количествах. Таким образом, данная питательная среда соответствует критерию изобретения "новизна".Comparison with the prototype showed that the proposed nutrient medium differs from the known one in that it contains pancreatic hydrolyzate of river fish, pancreatic hydrolyzate of meat water production waste, fermented egg yolk, monosubstituted potassium phosphate, vitamin B 1 and glucose in the proposed quantities. Thus, this nutrient medium meets the criterion of the invention "novelty".

Проведенный анализ патентной и научно-технической литературы показал, что предлагаемое техническое решение отличается не только от прототипа, но и от других технических решений в данной и смежных областях. Так, авторами не найдена питательная среда для получения биомассы листерий, которая содержала бы такие же компоненты в предлагаемом количественном соотношении. А именно такие компоненты, взятые в предлагаемом количественном соотношении, позволяют решить поставленную задачу - повысить эффективность питательной среды с сохранением S-формы выращиваемой культурыThe analysis of the patent and scientific and technical literature showed that the proposed technical solution differs not only from the prototype, but also from other technical solutions in this and related fields. Thus, the authors did not find a nutrient medium for obtaining Listeria biomass, which would contain the same components in the proposed quantitative ratio. Namely, these components, taken in the proposed quantitative ratio, allow us to solve the task - to increase the efficiency of the nutrient medium while maintaining the S-form of the cultivated culture.

Предлагаемая питательная среда может использоваться для получения достаточного количества биомассы листерий, необходимой при производстве листериозной агглютинирующей сыворотки, и, в частности, получение в короткие сроки достаточного количество наиболее иммуногенного штамма L. monocytogenes 766 с максимально выраженными О-антигенами.The proposed nutrient medium can be used to obtain a sufficient amount of Listeria biomass necessary for the production of listeriosis agglutinating serum, and, in particular, to obtain a sufficient amount of the most immunogenic L. monocytogenes 766 strain with the most pronounced O-antigens in a short time.

Таким образом, предлагаемая питательная среда соответствует критериям «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».Thus, the proposed nutrient medium meets the criteria of "inventive step" and "industrial applicability".

Предлагаемую питательную среду готовят следующим образом: навеску, содержащую гидролизат речной рыбы панкреатический (10,0-12,0 г), гидролизат отходов производства мясной воды панкреатический (8,5-9,5 г), ферментированный яичный желток (1,12-1,30 г), хлорид натрия (2,9-3,5 г), калий фосфорнокислый однозамещенный (2,2-2,8 г), натрий фосфорнокислый двузамещенный (7,2-7,8 г), витамин В1, (0,04-0,06 г), глюкозу (5,0-5,5 г) и агар микробиологический (9,0-11,0 г) размешивают в 950 мл дистиллированной воды, доводят до кипения при помешивании, кипятят в течение 6-8 мин, доводят до 1 литра стерильной дистиллированной водой, разливают в стерильную посуду и стерилизуют в течение (15±2) мин при температуре (112±2)°С.The proposed nutrient medium is prepared as follows: a sample containing pancreatic hydrolyzate of river fish (10.0-12.0 g), pancreatic hydrolyzate of meat water production waste (8.5-9.5 g), fermented egg yolk (1.12- 1.30 g), sodium chloride (2.9-3.5 g), monosubstituted potassium phosphate (2.2-2.8 g), disubstituted sodium phosphate (7.2-7.8 g), vitamin B 1 , (0.04-0.06 g), glucose (5.0-5.5 g) and microbiological agar (9.0-11.0 g) are stirred in 950 ml of distilled water, brought to a boil with stirring, boil within 6-8 minutes, brought to 1 liter with sterile distilled water, poured into sterile dishes and sterilized for (15±2) minutes at a temperature of (112±2)°C.

При этом, гидролизат речной рыбы панкреатический готовят следующим образом:At the same time, pancreatic hydrolyzate of river fish is prepared as follows:

В качестве сырья используют речную рыбу - сорогу. Не очищая от внутренностей и чешуи, рыбу режут на крупные куски (вместе с головой), взвешивают и моют проточной водой. В кипящую дитиллированную воду опускают рыбу из расчета 1,5 л на 1 кг рыбы и варят ее 20-30 мин с момента закипания. Вареную рыбу вынимают из бульона и размельчают. Бульон охлаждают до температуры (50±5)°С.The raw material used is river fish - horned. Without cleaning from the insides and scales, the fish is cut into large pieces (together with the head), weighed and washed with running water. Fish is dipped into boiling distilled water at the rate of 1.5 liters per 1 kg of fish and boiled for 20-30 minutes from the moment of boiling. Boiled fish is removed from the broth and crushed. The broth is cooled to a temperature of (50±5)°C.

В 20-ти литровые бутыли закладывают по 3,5 кг варенной измельченной рыбной массы (вмести с костями) и наливают по 7 л бульона (делят поровну). Устанавливают в смеси рН 8,0-8,2 при помощи 40% раствора натрия гидрооксида (NaOH). Затем добавляют в каждую бутыль фарш поджелудочной железы (1%) и хлороформ (1-1,5%). Все тщательно перемешивают, бутыли закрывают резиновыми пробками и ставят в термостат при температуре (45±2)°С на 5-10 дней. В первый день перемешивают 10-12 ч через каждые 30 мин, в последующие дни - 3-5 раз за рабочий день. В течение первых двух дней исправляют рН до 7,8-8,0 добавлением 40% раствора натрия гидрооксида. Хранят с добавлением 1,5-2% хлороформа в прохладном месте (6±2)°С в течение 6 месяцев. Содержание аминного азота в полученном гидролизате - 500-560 мг % (Дятлов И.А., Кутырев В.В., Храмов М.В. Питательные среды для выделения, культивирования и идентификации возбудителей особо опасных инфекций бактериальной природы. М.: ФБУН ГНЦ ПМБ, 2012. 415 с.).3.5 kg of boiled chopped fish mass (together with bones) are placed in 20-liter bottles and 7 liters of broth are poured (divided equally). Set in a mixture of pH 8.0-8.2 using 40% sodium hydroxide solution (NaOH). Then pancreas mince (1%) and chloroform (1-1.5%) are added to each bottle. Everything is thoroughly mixed, the bottles are closed with rubber stoppers and placed in a thermostat at a temperature of (45 ± 2) ° C for 5-10 days. On the first day, the mixture is stirred for 10-12 hours every 30 minutes, on the following days - 3-5 times per working day. During the first two days, the pH is corrected to 7.8-8.0 by adding 40% sodium hydroxide solution. Store with the addition of 1.5-2% chloroform in a cool place (6±2)°C for 6 months. The content of amine nitrogen in the resulting hydrolyzate is 500-560 mg% (Dyatlov I.A., Kutyrev V.V., Khramov M.V. Nutrient media for the isolation, cultivation and identification of pathogens of especially dangerous infections of a bacterial nature. M .: FBUN GNTs PMB, 2012. 415 p.).

Гидролизат отходов производства мясной воды панкреатический получали в соответствии с промышленным регламентом №01898090-03-06 (регистрационный номер ГИСК им. Л.А. Тарасевича №1733-06): в реактор заливают 128 л питьевой воды, добавляют в нее 1,2 л 20% раствора натрия гидроокиси (для доведения рН до 7,8-8,0), 32 кг измельченных отходов производства мясной воды, 11,7 кг измельченной поджелудочной железы и 1,28 кг хлороформа. Гидролиз проводят при температуре 43±2°С в течение 7 суток. После фильтрации (для консервации) к готовому гидролизату на 122 л добавляют 2,28 л хлороформа. Содержание аминного азота 6,0±0,25 мг/мл.Pancreatic hydrolyzate of meat water production waste was obtained in accordance with industrial regulations No. 01898090-03-06 (registration number GISK named after L.A. Tarasevich No. 1733-06): 128 liters of drinking water are poured into the reactor, 1.2 liters are added to it 20% sodium hydroxide solution (to adjust the pH to 7.8-8.0), 32 kg of crushed meat water production waste, 11.7 kg of crushed pancreas and 1.28 kg of chloroform. Hydrolysis is carried out at a temperature of 43±2°C for 7 days. After filtration (for preservation), 2.28 liters of chloroform are added to the finished hydrolyzate per 122 liters. The content of amine nitrogen is 6.0±0.25 mg/ml.

Ферментированный яичный желток изготавливается из свежих отборных куриных яиц высокого качества. Механическим способом желток отделяется от белка, ферментизируется и сушится выкуумно-распылительным методом. Сухой термостабильный яичный желток более устойчив к воздействию высоких температур и обладает лучшей вязкостью. Введение в состав яичного желтка способствует восстановлению поврежденных клеток микроорганизма.Fermented egg yolk is made from fresh selected high quality chicken eggs. The yolk is mechanically separated from the albumen, fermented and dried by the vacuum spray method. Dry, thermostable egg yolk is more resistant to high temperatures and has better viscosity. Introduction to the composition of the egg yolk contributes to the restoration of damaged cells of the microorganism.

Оценка качества питательной среды для получения биомассы листерий по биологическим показателям.Assessment of the quality of the nutrient medium for obtaining Listeria biomass according to biological indicators.

Для контроля использовали суточную агаровую культуру L. monocytogenes 766. Готовили взвесь листерий в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида рН 7,2±0,1, соответствующую 10 единицам по стандартному образцу мутности ФГБУ «НЦЭСМП» ОСО 42-28-85-2018, эквивалентную 2,2×109 м.к./мл. Приготовленную взвесь в объеме 1,0 мл стерильной пипеткой переносили в пробирку, содержащую 4,5 мл стерильного 0,9%-го раствора натрия хлорида. Затем осуществляют десятикратные последовательные разведения, перенося 0,5 мл взвеси тест-штамма L. monocytogenes 766 в пробирки, содержащие 4,5 мл 0,9%-го раствора натрия хлорида до разведения 10-7, тщательно перемешивая и меняя пипетки после каждого разведения.A daily agar culture of L. monocytogenes 766 was used as a control. A suspension of Listeria was prepared in a sterile 0.9% solution of sodium chloride pH 7.2 ± 0.1, corresponding to 10 units according to the standard turbidity sample of the Federal State Budgetary Institution "NTsESMP" OSO 42-28-85- 2018, equivalent to 2.2 × 10 9 mc / ml. The prepared suspension in a volume of 1.0 ml was transferred with a sterile pipette into a test tube containing 4.5 ml of a sterile 0.9% sodium chloride solution. Then tenfold serial dilutions are carried out, transferring 0.5 ml of a suspension of the L. monocytogenes 766 test strain into test tubes containing 4.5 ml of a 0.9% sodium chloride solution to a dilution of 10 -7 , mixing thoroughly and changing pipettes after each dilution .

Тест-штамм L. monocytogenes 766 из разведений 10-6 и 10-7 высевали в объеме 0,1 мл на 3 свежеприготовленные и тщательно просушенные агаровые пластинки в чашки Петри с питательной средой для наращивания биомассы листерий. Посевной материал равномерно распределяли покачиванием чашки. Посевы инкубировали при температуре (37±1)°С в течение 24-48 ч.The test strain L. monocytogenes 766 from dilutions of 10 -6 and 10 -7 was sown in a volume of 0.1 ml per 3 freshly prepared and thoroughly dried agar plates in Petri dishes with a nutrient medium to increase the biomass of Listeria. The inoculum was evenly distributed by shaking the cup. The inoculations were incubated at a temperature of (37±1)°C for 24-48 hours.

Питательная среда для получения биомассы листерий считается пригодной, если на ней вырастают типичные по морфологии колонии L. monocytogenes, диаметром не менее 1,0 мм, в количестве 30% от расчетной посевной дозы 100 м.к., при наличии единичных колоний на 3 чашках Петри с посевной дозой 10 м.к. Расчет ведется по среднему числу колоний на всех чашках.A nutrient medium for obtaining Listeria biomass is considered suitable if colonies of L. monocytogenes, typical in morphology, with a diameter of at least 1.0 mm, grow on it, in an amount of 30% of the calculated sowing dose of 100 mc, in the presence of single colonies on 3 cups Petri dishes with a seed dose of 10 m.k. The calculation is based on the average number of colonies on all plates.

Пример 1. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующее соотношение компонентов, г/л:Example 1. The nutrient medium is prepared as described above, using the following ratio of components, g/l:

гидролизат речной рыбы панкреатическийpancreatic hydrolyzate of river fish 10,010.0 гидролизат отходов производства мясной воды панкреатическийpancreatic meat water production waste hydrolyzate 8,58.5 ферментированный яичный желтокfermented egg yolk 1,121.12 хлорид натрияsodium chloride 2,92.9 калий фосфорнокислый однозамещенныйpotassium phosphate monosubstituted 2,22.2 натрий фосфорнокислый двузамещенныйsodium phosphate disubstituted 7,27.2 витамин В1 vitamin B 1 0,040.04 глюкозаglucose 5,05.0 агар микробиологическийmicrobiological agar 9,09.0 вода дистиллированнаяdistilled water до 1 лup to 1 l

При таком соотношении компонентов количество колоний L. monocytogenes 766, выросших на питательной среде для накопления биомассы листерий, при посевной дозе 100 и 10 м.к. через 24 ч инкубации составило соответственно 78 и 9 колоний диаметром от 1,5 до 3,5 мм, а через 48 ч инкубации диаметр колоний составил от 3,0 до 4,0 мм. Колонии листерий круглые, выпуклые с ровным краем, белые с сероватым оттенком, полупрозрачные, гладкие, структура однородная, консистенция слизистая.With this ratio of components, the number of L. monocytogenes 766 colonies grown on a nutrient medium for the accumulation of Listeria biomass, at a seed dose of 100 and 10 m.k. after 24 hours of incubation, there were 78 and 9 colonies, respectively, with a diameter of 1.5 to 3.5 mm, and after 48 hours of incubation, the diameter of the colonies was from 3.0 to 4.0 mm. Listeria colonies are round, convex with a smooth edge, white with a grayish tint, translucent, smooth, homogeneous structure, mucous consistency.

Пример 2. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующее соотношение компонентов, г/л:Example 2. The nutrient medium is prepared as described above, using the following ratio of components, g/l:

гидролизат речной рыбы панкреатическийpancreatic hydrolyzate of river fish 12,012.0 гидролизат отходов производства мясной воды панкреатическийpancreatic meat water production waste hydrolyzate 9,59.5 ферментированный яичный желтокfermented egg yolk 1,301.30 хлорид натрияsodium chloride 3,53.5 калий фосфорнокислый однозамещенныйpotassium phosphate monosubstituted 2,82.8 натрий фосфорнокислый двузамещенныйsodium phosphate disubstituted 7,87.8 витамин B1 vitamin B 1 0,060.06 глюкозаglucose 5,55.5 агар микробиологическийmicrobiological agar 11,011.0 вода дистиллированнаяdistilled water до 1 лup to 1 l

При таком соотношении компонентов количество колоний L. monocytogenes 766, выросших на питательной среде для накопления биомассы листерий, при посевной дозе 100 и 10 м.к. через 24 ч инкубации составило соответственно 79 и 8 колоний диаметром от 1,5 до 3,5 мм, а через 48 ч инкубации диаметр колоний составил от 3,0 до 4,0 мм. Колонии листерий круглые, выпуклые с ровным краем, белые с сероватым оттенком, полупрозрачные, гладкие, структура однородная, консистенция слизистая.With this ratio of components, the number of L. monocytogenes 766 colonies grown on a nutrient medium for the accumulation of Listeria biomass, at a seed dose of 100 and 10 m.k. after 24 hours of incubation, there were 79 and 8 colonies, respectively, with a diameter of 1.5 to 3.5 mm, and after 48 hours of incubation, the diameter of the colonies was from 3.0 to 4.0 mm. Listeria colonies are round, convex with a smooth edge, white with a grayish tint, translucent, smooth, homogeneous structure, mucous consistency.

Таким образом, заявленная питательная может применяться для получения биомассы листерий.Thus, the claimed nutrient can be used to obtain listeria biomass.

Figure 00000001
Figure 00000001

Предлагаемый состав среды позволяет повысить эффективность питательной среды по выходу микробных клеток с 1 мл питательной среды за 24 ч инкубации листериозного микроба. Количество выросших колоний листерий на предлагаемой среде в 1,3 раза больше, чем на среде-прототипе. Среда проста в приготовлении и экономически выгодна. Установлено, что биомасса листерий, выращенная на заявленной питательной среде, отвечает всем требованиям нормативной документации по изготовлению и проверке качества иммуногена, предназначенного для иммунизации животных-продуцентов при производстве листериозной агглютинирующей сыворотки. Производственный штамм L. monocytogenes 766 формирует на предлагаемой среде гладкие колонии, обладающие максимально выраженным О-антигеном, являясь наиболее иммуногенными.The proposed composition of the medium makes it possible to increase the efficiency of the nutrient medium in terms of the release of microbial cells from 1 ml of the nutrient medium for 24 hours of incubation of the listeriosis microbe. The number of grown colonies of Listeria on the proposed medium is 1.3 times greater than on the prototype medium. The medium is easy to prepare and cost effective. It has been established that the biomass of Listeria grown on the declared nutrient medium meets all the requirements of the regulatory documentation for the manufacture and quality control of the immunogen intended for immunization of animal producers in the production of listeriosis agglutinating serum. The production strain L. monocytogenes 766 forms smooth colonies on the proposed medium, which have the most pronounced O-antigen, being the most immunogenic.

Таким образом, предлагаемая среда, позволяет получать биомассу листерий с сохранением S-формы выращиваемой культуры в количестве, достаточном для приготовления антигена, предназначенного для иммунизации животных.Thus, the proposed medium makes it possible to obtain Listeria biomass while maintaining the S-form of the cultivated culture in an amount sufficient to prepare an antigen intended for immunization of animals.

Claims (2)

Питательная среда для получения биомассы листерий, содержащая питательную основу, хлорид натрия, натрий фосфорнокислый двузамещенный, агар-агар и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит ферментированный яичный желток, витамин В1 и калий фосфорнокислый однозамещенный, а в качестве питательной основы - гидролизат сороги панкреатический, гидролизат отходов производства мясной воды панкреатический и глюкозу при следующем соотношении компонентов, г/л:Nutrient medium for obtaining listeria biomass, containing a nutrient base, sodium chloride, disubstituted sodium phosphate, agar-agar and distilled water, characterized in that it additionally contains fermented egg yolk, vitamin B 1 and monosubstituted potassium phosphate, and as a nutrient base - pancreatic hydrolyzate of roach, pancreatic hydrolyzate of meat water production waste and glucose in the following ratio of components, g/l: гидролизат сороги панкреатическийhydrolyzed roach pancreatic 10,0-12,010.0-12.0 гидролизат отходов производства мясной воды панкреатическийpancreatic meat water production waste hydrolyzate 8,5-9,58.5-9.5 ферментированный яичный желтокfermented egg yolk 1,12-1,301.12-1.30 хлорид натрияsodium chloride 2,9-3,52.9-3.5 калий фосфорнокислый однозамещенныйpotassium phosphate monosubstituted 2,2-2,82.2-2.8 натрий фосфорнокислый двузамещенныйsodium phosphate disubstituted 7,2-7,87.2-7.8 витамин Β1 vitamin B 1 0,04-0,060.04-0.06 глюкозаglucose 5,0-5,55.0-5.5 агар микробиологическийmicrobiological agar 9,0-11,09.0-11.0 вода дистиллированнаяdistilled water до 1 лup to 1 l
RU2021116115A 2021-06-02 2021-06-02 Nutrient medium for obtaining listeria biomass RU2767782C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021116115A RU2767782C1 (en) 2021-06-02 2021-06-02 Nutrient medium for obtaining listeria biomass

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021116115A RU2767782C1 (en) 2021-06-02 2021-06-02 Nutrient medium for obtaining listeria biomass

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2767782C1 true RU2767782C1 (en) 2022-03-21

Family

ID=80819244

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021116115A RU2767782C1 (en) 2021-06-02 2021-06-02 Nutrient medium for obtaining listeria biomass

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2767782C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2366702C2 (en) * 2007-07-31 2009-09-10 Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУЗ "ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ" Роспо Nutrient listeria recovery medium
RU2525637C2 (en) * 2012-11-12 2014-08-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2366702C2 (en) * 2007-07-31 2009-09-10 Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУЗ "ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ" Роспо Nutrient listeria recovery medium
RU2525637C2 (en) * 2012-11-12 2014-08-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SIMMLER C., Universal quantitative NMR analysis of complex natural samples, Cur.Opin. Biotechnol, 2014, 25:51-9, https://doi.org/10.1016/j.copbio.2013.08.004. *
КОВТУН Ю.С, и др. Сравнительная оценка потенциальных белковых основ микробиологических сред, Проблемы особо опасных инфекций, вып. 3, 2014, с.92-95. *
КОВТУН Ю.С, и др. Сравнительная оценка потенциальных белковых основ микробиологических сред, Проблемы особо опасных инфекций, вып. 3, 2014, с.92-95. SIMMLER C., Universal quantitative NMR analysis of complex natural samples, Cur.Opin. Biotechnol, 2014, 25:51-9, https://doi.org/10.1016/j.copbio.2013.08.004. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2580028C1 (en) Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella
RU2767782C1 (en) Nutrient medium for obtaining listeria biomass
RU2522811C2 (en) METHOD OF PREPARING SYMBIOTIC BACTERIA OF GENUS Xenorhabdus, ISOLATED FROM NEMATODES OF GENUS Steinernema feltiae protense, FOR STORAGE
CN113862196B (en) Bacillus subtilis SD-KC-001 and application thereof
RU2681285C1 (en) Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation
RU2711914C1 (en) Nutrient medium for separation and identification of para-hemolytic vibrios (embodiments) and method for production thereof (embodiments)
KR102609289B1 (en) Bacterial growth in non-animal media
RU2309767C1 (en) Method for manufacturing vaccine against pseudomonosis in swine
RU2748808C1 (en) Dense universal nutrient medium for growing brucella biomass
RU2728217C1 (en) Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles
RU2648153C1 (en) Solid nutrient medium cultivation of a plague microbe
RU2648160C2 (en) Nutrient medium for the isolation of bacteria yersinia enterocolitica
RU2642316C1 (en) Method for production of vaccine against brucellosis of small cattle
Feinberg A method for the bulk growth of a parasitic protozoan
RU2792438C1 (en) Selective nutrient medium with mannitol, bile and polymyxin to detect bacteria of the genera proteus, morganella, providencia, dry
CN115960842B (en) Method for improving ability of recombinant avian influenza virus to infect chick embryo
RU2444567C1 (en) NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY
RU2593712C2 (en) METHOD FOR PREPARING CONCENTRATED BRUCELLA CELL CULTURE FROM Brucella abortus 19 STRAIN TO PREPARE BRUCELLOUS ANTIGENS, BRUCELLOUS ANTIGENS (THREE VERSIONS), METHOD OF MAKING BRUCELLOSIS DIAGNOSTIC SERUM AND TEST SYSTEM FOR DIAGNOSING BRUCELLOSIS IN ANIMALS (THREE VERSIONS)
RU2348686C2 (en) Nutrient medium for microorganism cultivation
RU2644248C2 (en) Dense nutrient medium for cultivation and growing of tularemic microbe
RU2750865C1 (en) Polyvalent inactivated vaccine against riemerellosis, pasteurellosis and salmonellosis of turkeys, ducks and geese, the method of its preparation
RU2722071C1 (en) Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079
RU2525637C2 (en) Nutrient medium for cultivation of listeriosis causative agent
RU2795907C1 (en) Selective nutrient medium for isolating aeromonads from water bodies
Scherp et al. The growth of Neisseria meningitidis in simple chemically defined media