RU2681116C2 - Dense nutrient medium for storage of plague microbe - Google Patents
Dense nutrient medium for storage of plague microbe Download PDFInfo
- Publication number
- RU2681116C2 RU2681116C2 RU2017122866A RU2017122866A RU2681116C2 RU 2681116 C2 RU2681116 C2 RU 2681116C2 RU 2017122866 A RU2017122866 A RU 2017122866A RU 2017122866 A RU2017122866 A RU 2017122866A RU 2681116 C2 RU2681116 C2 RU 2681116C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nutrient medium
- plague microbe
- agar
- plague
- storage
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, именно к получению питательных сред, которые создают оптимальные условия для хранения микроба чумы.The invention relates to biotechnology, namely to obtain nutrient media that create optimal conditions for the storage of the plague microbe.
Известна питательная среда Романова для сохранения жизнеспособности микроорганизмов, основой которой является панкреатический гидролизат казеина-8,0; натрия хлорида-5,0 агара 10,0; дистиллированная вода до 1 л; pH 7,1±0.1 (после автоклавирования). Панкреатический гидролизат казеина смешивают с дистиллированной водой из расчета 3 г сухих веществ на 1 л, вносят натрий хлористый до 5 г/л (с учетом содержания Cl в гидролизате казеина) и агар, устанавливают pH 8,0-8,2 10% раствором натрия гидроокиси. Расплавление агара производят в автоклаве при 100°C в течение 1 ч, затем среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают pH 7,2-7,4 5% раствором соляной кислоты, разливают по 5 мл в пробирки и стерилизуют при 120°C - 20 мин. Готовая среда годна к употреблению в течение 2-х месяцев со дня приготовления при условии хранения ее при температуре 6±2°C. (Приказ №31 от 13 января 1983 г. Об унификации методов контроля медицинских иммунобиологических препаратов. Москва - 1983 г. С. 21-22.)Known nutrient medium of Romanov to maintain the viability of microorganisms, the basis of which is pancreatic hydrolyzate of casein-8.0; sodium chloride-5.0 agar 10.0; distilled water up to 1 liter; pH 7.1 ± 0.1 (after autoclaving). Casein pancreatic hydrolyzate is mixed with distilled water at the rate of 3 g of dry matter per 1 liter, sodium chloride is added to 5 g / l (taking into account the Cl content in casein hydrolyzate) and agar, the pH is adjusted to 8.0-8.2 with a 10% sodium solution hydroxides. The agar is melted in an autoclave at 100 ° C for 1 h, then the medium is filtered through a cotton-gauze filter, the pH is adjusted to 7.2-7.4 with a 5% hydrochloric acid solution, poured into 5 ml tubes and sterilized at 120 ° C - 20 minutes. Ready medium is suitable for use within 2 months from the date of preparation, provided that it is stored at a temperature of 6 ± 2 ° C. (Order No. 31 of January 13, 1983, on the unification of control methods for medical immunobiological preparations. Moscow - 1983, pp. 21-22.)
Недостатком данной среды является малый срок хранения только 2 месяца.The disadvantage of this environment is the short shelf life of only 2 months.
Наиболее близкой к предполагаемому изобретению относится питательная среда - агар Хоттингера pH 7,2±0.1 для хранения микроба чумы, основой которой является ферментативный гидролизат говяжьего мяса до 170,0 мл; натрия хлорид - 5,0 г; агар микробиологический - 10,0-12,0 г; pH 7,0±0,2. Среду разливают по 7 мл в бактериологические пробирки, автоклавируют 30 мин при температуре 121°C, охлаждают до температуры 56°, затем скашивают. Рабочие субкультуры хранят на скошенном агаре в пробирках. Пересевы культур проводят не менее 1 раза в 3 мес., но не более четырех раз в год. (по МУК 4.2.2316-88, с. 33; МУ 3.3.2.2124-06 с. 7).Closest to the alleged invention relates to a nutrient medium - Hottinger agar pH 7.2 ± 0.1 for storage of the plague microbe, the basis of which is an enzymatic hydrolyzed beef meat up to 170.0 ml; sodium chloride - 5.0 g; microbiological agar - 10.0-12.0 g; pH 7.0 ± 0.2. The medium is poured into 7 ml into bacteriological tubes, autoclaved for 30 min at a temperature of 121 ° C, cooled to a temperature of 56 °, then mowed. Workers subcultures are stored on slanted agar in test tubes. Reseeding of crops is carried out at least 1 time in 3 months, but no more than four times a year. (according to MUK 4.2.2316-88, p. 33; MU 3.3.2.2124-06 p. 7).
Недостатком данной среды является, то что пересевы культур проводят не менее 1 раза в 3 мес., но не более четырех раз в год.The disadvantage of this environment is that the crops are reseed at least 1 time in 3 months, but no more than four times a year.
Целью изобретения является получение качественной питательной среды плотной для хранения микроба чумы на белковой основе из растительного сырья - ферментативного гидролизата кукурузного экстракта сгущенный, которая обеспечивает визуально обнаруживаемый рост на пробирках с питательной средой в течение длительного времени при температуре выращивания 27±1°C на всех засеянных пробирках с питательной средой, а также значительный экономический эффект.The aim of the invention is to obtain a high-quality nutrient medium dense for storing the plague microbe on a protein basis from plant material — the condensed corn extract enzymatic hydrolyzate, which provides visually detectable growth in test tubes with nutrient medium for a long time at a cultivation temperature of 27 ± 1 ° C on all seeded test tubes with a nutrient medium, as well as a significant economic effect.
Сущность предполагаемого изобретения заключается в том, что питательная среда плотная в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный, а также соли: натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, агар микробиологический и питьевую воду, при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The essence of the proposed invention lies in the fact that the nutrient medium is dense as a nutrient base, contains an enzymatic hydrolyzate of corn extract condensed, as well as salts: sodium chloride, sodium phosphate 2-substituted 12-water, microbiological agar and drinking water, in the following ratio of ingredients, g / l:
В качестве исходного сырья используют кукурузный экстракт сгущенный, содержащий в среднем 9,4% белка. Благодаря высокому содержанию в сухом остатке азотистых веществ (до 45%) и углеводов (до 25%), экстракт является хорошей питательной средой при производстве пенициллина и других антибиотиков, а также витаминов. Кроме того, он богат микроэлементами, мг/кг: цинк 22; марганец 5; медь 5; кобальт 0,02; йод 0,30, макроэлементами, в %: фосфора 0,25; натрия 0,04; кальция 0,59; калия 0,36; магния 0,12; серы 0,11; хлора 0,04; аминокислотами, в %: аргинина 90,0; гистидина 72,0; лейцина 72,0; изолейцина 89,0; фенилаланин 59,0; треонин 95,0; валин 12,7; лизина 0,96; метионина 0,56; триптофана 0,22; метионин + цистин 0,27 и витаминами, мг/кг: каротин (витамин А) 8,0; B1 4,0; B2 1,0; B3 (пантотеновая кислота) 6,5; B4 (холин) 400; B5 17; B6 2,9. Как известно (И.В. Петрухин, 1989), кукурузные белки характеризуются повышенным содержанием треонина, гистидина, лейцина, валина, поставляющих макроэргические связи, кукурузные белки содержат также большое количество таких незаменимых аминокислот как изолейцин, лейцин, аргинин, фенилаланином. (М.Ф. Нестерин, И.М. Скурихин. Химический состав пищевых продуктов. Москва. «Пищевая промышленность». 1979. 247 с). Имеются также сведения о способности лейцина, как аминокислоты с разветвленной белковой цепью, инициировать синтез белка (Е. А. Газов, X. С.Морган, / США / 1989).Condensed corn extract containing an average of 9.4% protein is used as feedstock. Due to the high solids content of nitrogenous substances (up to 45%) and carbohydrates (up to 25%), the extract is a good nutrient medium in the production of penicillin and other antibiotics, as well as vitamins. In addition, it is rich in trace elements, mg / kg: zinc 22; manganese 5; copper 5; cobalt 0.02; iodine 0.30, macrocells, in%: phosphorus 0.25; sodium 0.04; calcium 0.59; potassium 0.36; magnesium 0.12; sulfur 0.11; chlorine 0.04; amino acids, in%: arginine 90.0; histidine 72.0; leucine 72.0; isoleucine 89.0; phenylalanine 59.0; threonine 95.0; valine 12.7; lysine 0.96; methionine 0.56; tryptophan 0.22; methionine + cystine 0.27 and vitamins, mg / kg: carotene (vitamin A) 8.0; B 1 4.0; B 2 1.0; B 3 (pantothenic acid) 6.5; B 4 (choline) 400; B 5 17; B 6 2.9. As is known (I.V. Petrukhin, 1989), corn proteins are characterized by an increased content of threonine, histidine, leucine, valine, which supply macroergic bonds, corn proteins also contain a large number of such essential amino acids as isoleucine, leucine, arginine, phenylalanine. (M.F. Nesterin, I.M. Skurikhin. Chemical composition of food products. Moscow. "Food Industry". 1979. 247 p.). There is also information about the ability of leucine, as branched chain amino acids, to initiate protein synthesis (E. A. Gazov, X. S. Morgan, / USA / 1989).
Натрий хлористый, хч, ГОСТ 4233-77 партия 24, срок годности 12.2015. Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей. Будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке.Sodium chloride, hch, GOST 4233-77 batch 24, shelf life 12.2015. Bacteria need a minimal amount of salt. Being dissolved in a nutrient medium and being in a state of electrolytic decay, ionized mineral compounds are simultaneously catalysts of various chemical processes occurring in a microbial cell.
Включение в состав среды натрия фосфорнокислого 2 замещенного 12 водного обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне pH, они малотоксичны (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов - М., 1989). (М.С. Поляк; В.И. Сухаревич; М.Э. Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С. 37-38).The inclusion in the medium of sodium phosphate 2 substituted 12 water is justified by the widespread use of phosphates in the preparation of nutrient media, because these are the only inorganic compounds that have a buffering effect in a physiologically important pH range, they are low toxic (Guidelines for the manufacture and use of nutrient media and solutions for microbiological purposes, the cultivation of cells and viruses - M., 1989). (M.S. Polyak; V.I. Sukharevich; M.E. Sukharevich. Nutrient media for medical and sanitary microbiology. St. Petersburg: ELBI-St. Petersburg. - 2008. - P. 37-38).
Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Производитель: «Pronadisa» Испания. Партия LF 15130184. Срок годности до 10.2017 г. Дата изготовления: октябрь 2013 г.Microbiological agar - bacteriological agar (European type). Producer: "Pronadisa" Spain. Lot LF 15130184. Shelf life until 10.2017. Production date: October 2013.
Питьевая вода-ГОСТ Р 51232-98 отвечает всем гигиеническим требованиям.Drinking water-GOST R 51232-98 meets all hygiene requirements.
Приготовление ферментативного гидролизата из кукурузного экстракта сгущенный.Condensed enzymatic hydrolyzate preparation from corn extract.
Способ приготовления питательной основы для хранения микроба чумы заключается в следующем: кукурузный экстракт сгущенный в количестве 4,0 кг помещают в варочный котел, затем добавляют 24 л питьевой воды кипятят в течение 5 минут, устанавливают pH до 8,2 40% раствором натрия гидроокиси в количестве 52 мл, затем настой сливают в 10 л баллоны, охлаждают до 46°C. В остуженный настой добавляют поджелудочную железу крупного рогатого скота (КРС) из расчета 30,0 на 1 л, устанавливают pH до 8,2-8,5, добавляют 1,5% хлороформа. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 46°C в течение 10 сут. В первые 24 ч смесь перемешивают через каждые 15 мин, в последующем смесь перемешивают через каждые 2 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота. На 10 сутки аминный азот составляет 1120 мг%, а сухой остаток соответственно 25,5%. С прекращением нарастания аминного азота, что бывает на 7-10 сутки, прекращают перемешивать и подогревать. Дают отстояться в течение 2 суток, затем жидкость отфильтровывают от осадка на пресс-фильтре, разливают по бутылям с добавлением 1% хлороформа, пробкуют стерильными резиновыми пробками и хранят при температуре 4-6°C.A method of preparing a nutrient base for storing the plague microbe is as follows: 4.0 kg of condensed corn extract is placed in a digester, then 24 liters of drinking water are added, boiled for 5 minutes, the pH is adjusted to 8.2 with 40% sodium hydroxide solution. amount of 52 ml, then the infusion is poured into 10 l containers, cooled to 46 ° C. In the cooled infusion, add the pancreas of cattle (cattle) at a rate of 30.0 per 1 liter, set the pH to 8.2-8.5, add 1.5% chloroform. Hydrolysis is carried out in a heat chamber at a temperature of 46 ° C for 10 days. For the first 24 hours, the mixture is stirred every 15 minutes, then the mixture is stirred every 2 hours. The level of amine nitrogen is measured daily. On day 10, amine nitrogen is 1120 mg%, and the dry residue is 25.5%, respectively. With the cessation of the growth of amine nitrogen, which happens on the 7-10th day, stop mixing and heating. Allowed to stand for 2 days, then the liquid is filtered off from the precipitate on a press filter, poured into bottles with 1% chloroform, poured with sterile rubber stoppers and stored at 4-6 ° C.
Приготовление питательной среды плотнойPreparation of a dense culture medium
Питательную среду на основе ферментативного гидролизата кукурузного экстракта сгущенный для хранения микроба чумы готовят следующим способом: ферментативный гидролизат, разбавленный питьевой водой до показания аминного азота 0,12% 48 мл, натрий хлористый 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водного 4,0; агар микробиологический 17,0; питьевая вода до 1 литра. Среду кипятят до полого растворения, затем устанавливают pH 7,2±0,1 с помощью 20% раствора натрия гидроокиси, разливают в бактериологические пробирки по 7,0 мл, затем стерилизуют при 1 атм. в течение 10 мин. После стерилизации, охлаждают до 56°C, затем скашивают.A nutrient medium based on an enzymatic hydrolyzate of corn extract condensed for storage of a plague microbe is prepared in the following way: an enzymatic hydrolyzate diluted with drinking water to an amine nitrogen reading of 0.12% 48 ml, sodium chloride 5.0; sodium phosphate 2-substituted 12-aqueous 4.0; microbiological agar 17.0; drinking water up to 1 liter. The medium is boiled until it is completely dissolved, then the pH is adjusted to 7.2 ± 0.1 using a 20% sodium hydroxide solution, poured into bacteriological tubes of 7.0 ml, then sterilized at 1 atm. within 10 minutes After sterilization, cool to 56 ° C, then mow.
Перед приготовлением культуры каждого штамма со среды хранения пересевают на чашки Петри с агаром Хоттингера pH 7,2±,1 (МУК 4.1./4.2.588-96, с. 45), инкубируют при температуре (28±1)°C в течение (48±1) ч. Выросшие на питательном агаре культуры каждого штамма проверяют визуально на чистоту роста и пересевают на скошенный в пробирках питательный агар. Одновременно контролируют ее культурально - морфологические и ферментативные свойства, высевают по 2 пробирки со средами Гисса с сахарозой, лактозой, рамнозой и глицерином, к которым добавляют индикатор Андреде, и высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH,3±0,1. Также культуру высевают на 3 чашки Петри с агаром Хоттингера pH,1±0,1, которые в дальнейшем используют последовательного рассева с целью получения изолированных колоний. Все чашки Петри с посевами помещают на (48±2) ч для выращивания в термостат при температуре (27±1)°C. В том случае, если культура без диссоциации т.е. морфология колоний типична для микроба чумы и штаммы стойко удерживают свой биохимический тип. Посевы инкубируют (24±1) ч при (27±1)°C. Через сутки пробирки с культурой высевают на скошенные поверхности исследуемой плотной питательной среды в количестве 1 бактериологической петли, затем выращивают термостате в течение (48±2) ч. при (27±1)°C. Пробирки с посевами запаивают и хранят при температуре (5±1)°C в течение 12-18 месяцев (срок наблюдения). В опыте были использованы девять штаммов возбудителя чумы из коллекции института. Семь штаммов Yersinia pestis sybspecies pestis из Центрально-Кавказского высокогорного, и Прикаспийского песчаного природных очагов чумы. Пять штаммов (С-767, С-787, С-788, С-839, С-840) были изолированы в разные годы от основных переносчиков (блох Nosopsyllus laeviceps, Neopsylla.setosa, Nosopsyllus. mokrzeckyi) с очеса гребенщиковых и полуденных песчанок, малого суслика и серого хомячка в Прикаспийском песчаном природном очаге. Два штамма (С-724, С-780) были выделены в Центрально-Кавказском высокогорном очаге от блох Ceratophilus tesquorum. Штаммы проявляли биологические свойства, типичные для основного подвида. Для их роста на синтетических питательных средах необходимы метионин, треонин, фенилаланин, цистеин, одному из штаммов (С-724) дополнительно требуется пролин. Две культуры (С-744, С-831), выделенные в разные годы в Восточно-Кавказском высокогорном природном очаге от блох {Frontopsylla. elata и Ctenophthalmus. intermedins), проявляли свойства, характерные для Y. pestis sybspecies caucasica.Before preparation, cultures of each strain from the storage medium are transferred to Petri dishes with Hottinger agar pH 7.2 ± 1 (MUK 4.1./4.2.588-96, p. 45), incubated at a temperature of (28 ± 1) ° C for (48 ± 1) h. Cultures of each strain grown on nutrient agar were visually checked for purity of growth and passaged onto nutrient agar mowed in test tubes. At the same time, its cultural, morphological and enzymatic properties are monitored, 2 test tubes with Giss medium with sucrose, lactose, rhamnose and glycerin are added, to which Andrede indicator is added, and plated on 3 Petri dishes with Hottinger agar pH, 3 ± 0.1. The culture is also seeded on 3 Petri dishes with Hottinger agar pH, 1 ± 0.1, which subsequently use sequential sieving in order to obtain isolated colonies. All Petri dishes with crops are placed for (48 ± 2) h for growing in a thermostat at a temperature of (27 ± 1) ° C. In that case, if the culture without dissociation i.e. colony morphology is typical of a plague microbe and strains persistently retain their biochemical type. Crops incubated (24 ± 1) h at (27 ± 1) ° C. After a day, culture tubes are sown on the sloping surfaces of the studied solid nutrient medium in the amount of 1 bacteriological loop, then the thermostat is grown for (48 ± 2) hours at (27 ± 1) ° C. Inoculated tubes are sealed and stored at a temperature of (5 ± 1) ° C for 12-18 months (observation period). In the experiment, nine strains of the plague pathogen from the institute's collection were used. Seven strains of Yersinia pestis sybspecies pestis from the Central Caucasian high-mountain, and Caspian sandy natural foci of plague. Five strains (C-767, C-787, C-788, C-839, C-840) were isolated in different years from the main carriers (fleas Nosopsyllus laeviceps, Neopsylla.setosa, Nosopsyllus. Mokrzeckyi) from comb combed and midday gerbils , small gopher and gray hamster in the Caspian sandy natural center. Two strains (C-724, C-780) were isolated in the Central Caucasian alpine outbreak from fleas Ceratophilus tesquorum. Strains showed biological properties typical of the main subspecies. For their growth on synthetic nutrient media, methionine, threonine, phenylalanine, cysteine are required, one of the strains (C-724) additionally requires proline. Two cultures (C-744, C-831), isolated in different years in the East Caucasian high-mountain natural focus from fleas {Frontopsylla. elata and Ctenophthalmus. intermedins), showed properties characteristic of Y. pestis sybspecies caucasica.
Учет результатов:Profitability Analysis:
Для плотных сред проводят учет ежемесячно. После чего изучают культурально - морфологические и биохимические свойства, лизироваться бактериофагами: поливалентным Покровской и Л-413С. По морфологии - должны быть грамотрицательными палочками с закругленными концами, неподвижные, на агаре образовывать колонии в R-форме не менее 1 мм в диаметре с шероховатым центром коричневого цвета и кружевной зоной. Биохимические свойства - должны ферментировать глюкозу, манит, и мальтозу, не должны ферментировать глицерин и рамнозу.For dense environments, they are monitored monthly. After that, they study the cultural - morphological and biochemical properties, lysed by bacteriophages: polyvalent Pokrovskaya and L-413C. According to morphology, they should be gram-negative rods with rounded ends, motionless, on the agar, form colonies in the R-form at least 1 mm in diameter with a rough center of brown color and a lace zone. Biochemical properties - should ferment glucose, beckons, and maltose, should not ferment glycerol and rhamnose.
Пример 1. Культуры микроба чумы выращивали на скошенной поверхности питательной среды плотной для хранения микроба чумы, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный 40,0; натрий хлористый 4,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12 водный 3,0; агар микробиологический 8,0; питьевую воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов при окраске мазков по Граму - грамотрицательные палочки с закругленными концами, на агаре вырастают колонии в R-форме, диаметром 1,1 мм, с менее выраженной кружевной зоной, ферментируют глюкозу, манит, и мальтозу, не ферментируют глицерин и рамнозу, лизируются чумными бактериофагами: поливалентным Покровской и Л-413С.Культуры микроба чумы сохраняются в течение 1 года.Example 1. Plague microbe cultures were grown on a sloping surface of a nutrient medium dense for storing the plague microbe, containing, g / l: condensed corn extract hydrolyzate 40.0; sodium chloride 4.0; sodium phosphate 2-substituted 12 aqueous 3.0; microbiological agar 8.0; drinking water up to 1 liter. With this ratio of ingredients when staining Gram smears - gram-negative sticks with rounded ends, colonies in the R-shape, 1.1 mm in diameter, with a less pronounced lace zone grow on agar, ferment glucose, beckon, and maltose, do not ferment glycerol and rhamnose are lysed by plague bacteriophages: polyvalent Pokrovskaya and L-413C. Plague microbe cultures are preserved for 1 year.
Пример 2. Культуры микроба чумы выращивали на скошенной поверхности питательной среды плотной для хранения микроба чумы, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный 48,0; натрий хлористый 5,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12 водный 4,0; агар микробиологический 10,0; питьевую воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов при окраске мазков по Граму - грамотрицательные палочки с закругленными концами, на агаре вырастают колонии в R-форме, диаметром 1,8 мм, с выраженной кружевной зоной, ферментируют глюкозу, манит, и мальтозу, не ферментируют глицерин и рамнозу, лизируются чумными бактериофагами: поливалентным Покровской и Л-413С. Культуры микроба чумы сохраняются в течение 18 месяцев.Example 2. Plague microbe cultures were grown on a sloping surface of a nutrient medium dense for storing the plague microbe, containing, g / l: condensed corn extract hydrolyzate, condensed 48.0; sodium chloride 5.0; 2-substituted sodium phosphate 12 aqueous 4.0; microbiological agar 10.0; drinking water up to 1 liter. With this ratio of ingredients when staining Gram smears - gram-negative sticks with rounded ends, colonies in the R-shape, 1.8 mm in diameter, with a pronounced lace zone grow on agar, ferment glucose, beckon, and maltose, do not ferment glycerol and rhamnose, lysed by plague bacteriophages: polyvalent Pokrovskaya and L-413C. Plague microbe cultures persist for 18 months.
Пример 3. Культуры микроба чумы выращивали на скошенной поверхности питательной среды плотной для хранения микроба чумы, содержащей, г/л; ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный 56,0; натрий хлористый 6,0; натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12 водный 5,0; агар микробиологический 12,0; питьевую воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов при окраске мазков по Граму - грамотрицательные палочки с закругленными концами, на агаре образовывают колонии в R-форме, диаметром 1,0 мм, с менее выраженной кружевной зоной, ферментируют глюкозу, манит, и мальтозу, не ферментируют глицерин и рамнозу, лизируются чумными бактериофагами: поливалентным Покровской и Л-413С. Культуры микроба чумы сохраняются в течение 11 месяцев.Example 3. Plague microbe cultures were grown on a sloping surface of a nutrient medium dense for storing a plague microbe, containing, g / l; condensed enzymatic hydrolyzate of corn extract 56.0; sodium chloride 6.0; sodium phosphate 2-substituted 12 aqueous 5.0; microbiological agar 12.0; drinking water up to 1 liter. With this ratio of ingredients when staining Gram smears - gram-negative sticks with rounded ends, on the agar form colonies in the R-shape, 1.0 mm in diameter, with a less pronounced lace zone, ferment glucose, beckon, and maltose, do not ferment glycerol and rhamnose are lysed by plague bacteriophages: polyvalent Pokrovskaya and L-413C. Plague microbe cultures persist for 11 months.
Таким образом, заявленная питательная среда плотная для хранения микроба чумы (пример 2), приготовленная на основе ферментативного гидролизата кукурузного экстракта сгущенный может применяться для хранения микроба чумы, которая обеспечивает визуально обнаруживаемый рост в течение 18 месяцев (срок наблюдения) с сохранением культурально - морфологических и биохимических свойств, лизируются чумными бактериофагами: поливалентным Покровской и Л-413С. При хранении микроба чумы на плотной питательной среде основой которой является ферментативный гидролизат кукурузного экстракта сгущенный нет необходимости пересевать культуры часто, достаточно 1 раз в 18 месяцев. Отмечается значительный экономический эффект при замене мясных питательных основ на кукурузные. Рентабельность составляет 35 процентов.Thus, the claimed nutrient medium is dense for storing the plague microbe (example 2), prepared on the basis of the enzymatic hydrolyzed corn extract condensed can be used to store the plague microbe, which provides visually detectable growth for 18 months (observation period) while preserving the cultural - morphological and biochemical properties, are lysed by plague bacteriophages: polyvalent Pokrovskaya and L-413C. When storing the plague microbe in a dense nutrient medium, the basis of which is a condensed corn extract enzymatic hydrolyzate, there is no need to reseed crops often, only once every 18 months. Significant economic effect is noted when replacing meat nutritional bases with corn. Profitability is 35 percent.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017122866A RU2681116C2 (en) | 2017-06-28 | 2017-06-28 | Dense nutrient medium for storage of plague microbe |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017122866A RU2681116C2 (en) | 2017-06-28 | 2017-06-28 | Dense nutrient medium for storage of plague microbe |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017122866A RU2017122866A (en) | 2018-12-28 |
| RU2017122866A3 RU2017122866A3 (en) | 2019-01-18 |
| RU2681116C2 true RU2681116C2 (en) | 2019-03-04 |
Family
ID=64977408
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017122866A RU2681116C2 (en) | 2017-06-28 | 2017-06-28 | Dense nutrient medium for storage of plague microbe |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2681116C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2270856C2 (en) * | 2003-12-24 | 2006-02-27 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Nutrient medium for submerged culturing plague microorganism of vaccine antibiotic-resistant strain eb p2 |
| RU2433170C1 (en) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb |
-
2017
- 2017-06-28 RU RU2017122866A patent/RU2681116C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2270856C2 (en) * | 2003-12-24 | 2006-02-27 | Научно-исследовательский институт микробиологии Министерства обороны Российской Федерации | Nutrient medium for submerged culturing plague microorganism of vaccine antibiotic-resistant strain eb p2 |
| RU2433170C1 (en) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| ГЮЛУШАНЯН К.С. Использование питательной среды на основе кукурузного экстракта в производстве чумной вакцины ЕВ, Автореф. дисс. на соискание ученой степени к.б.н., Саратов, 1994, с. 6-23. * |
| МУ 3.3.2.2124-06. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза., 2007, Роспотребнадзор, с. 7-21. * |
| МУК 4.2.2316-08. Методы контроля бактериологических питательных сред. 2008, Роспотребнадзор, с. 25-36. * |
| МУК 4.2.2316-08. Методы контроля бактериологических питательных сред. 2008, Роспотребнадзор, с. 25-36. МУ 3.3.2.2124-06. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза., 2007, Роспотребнадзор, с. 7-21. ГЮЛУШАНЯН К.С. Использование питательной среды на основе кукурузного экстракта в производстве чумной вакцины ЕВ, Автореф. дисс. на соискание ученой степени к.б.н., Саратов, 1994, с. 6-23. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2017122866A3 (en) | 2019-01-18 |
| RU2017122866A (en) | 2018-12-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112251371B (en) | Lactococcus lactis, microecological preparation and application | |
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2412240C1 (en) | Culture medium for growing legionella | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| RU2681116C2 (en) | Dense nutrient medium for storage of plague microbe | |
| KR100942389B1 (en) | Culture or Transport Media for Campylobacter Strain | |
| RU2455351C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| RU2245362C2 (en) | Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| RU2708029C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev | |
| RU2681499C1 (en) | Nutrient medium on basis of secondary product of beef hydrolyzate for cultivation of microorganisms | |
| RU2648160C2 (en) | Nutrient medium for the isolation of bacteria yersinia enterocolitica | |
| RU2247775C1 (en) | Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis | |
| RU2301256C1 (en) | Liquid nutrient medium for culturing cholera vibrio | |
| RU2722071C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| RU2757428C1 (en) | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev | |
| RU2410424C1 (en) | Culture medium for growing microorganism | |
| RU2528101C2 (en) | Nutrient medium for legionella culture | |
| RU2460768C1 (en) | Solid nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2333948C2 (en) | Nutritional medium for growing causative agent of tularemia | |
| RU2725733C1 (en) | Transport liquid nutrient medium for maintaining the viability of the brucellous microbe | |
| RU2748492C1 (en) | Dense nutrient medium for monitoring the number of live microbial cells of the vaccine strain of the plague microbe y.pestis ev |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190629 |