RU2247775C1

RU2247775C1 - Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis

Info

Publication number: RU2247775C1
Application number: RU2003124271/13A
Authority: RU
Inventors: Л.С. Катунина (RU); Л.С. Катунина; мкин Г.И. Л (RU); Г.И. Лямкин; О.Л. Старцева (RU); О.Л. Старцева; Р.Е. Цыганкова (RU); Р.Е. Цыганкова; пустина Л.В. Л (RU); Л.В. Ляпустина; И.Ю. Борздова (RU); И.Ю. Борздова; Е.Б. Смирнова (RU); Е.Б. Смирнова
Original assignee: Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Priority date: 2003-08-04
Filing date: 2003-08-04
Publication date: 2005-03-10
Also published as: RU2003124271A

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiology.

SUBSTANCE: invention relates to a method for preparing nutrient medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for the brucellosis disease. Nutrient medium contains beef meat hydrolyzate as a nutrient base, the preparation SAG-1 as a stimulating agent, and also sodium chloride, glucose, sodium citrate, glycerol, sodium hydroxide and distilled water. Invention provides enhancing accumulating properties of nutrient medium and alleviating the nutrient medium transportation.

EFFECT: improved and valuable properties of nutrient medium.

3 ex

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к транспортным жидким питательным средам для сбора материала, содержащего возбудитель бруцеллеза, культивирования и транспортировки бруцеллезного микроба. Изобретение целесообразно использовать для диагностики бруцеллеза у людей.The invention relates to medical microbiology, in particular to transport liquid nutrient media for collecting material containing the causative agent of brucellosis, cultivation and transportation of brucellosis microbe. The invention is advisable to use for the diagnosis of brucellosis in humans.

Известен способ сбора материала от больного для диагностики бруцеллеза: при отсутствии питательной среды проводят забор крови из вены больного в количестве 5-10 мл в стерильную бактериологическую пробирку, помещают в бикс и отправляют на исследование в бак. лабораторию (Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология. 1986, стр. 346).There is a method of collecting material from a patient for the diagnosis of brucellosis: in the absence of a nutrient medium, blood is sampled from the patient's vein in an amount of 5-10 ml in a sterile bacteriological tube, placed in a biq and sent for examination to the tank. laboratory (Cherkess F.K., Epiphany LB, Belskaya N.A. Microbiology. 1986, p. 346).

Недостатком данного способа является то, что кровь быстро свертывается - это затрудняет дальнейшую работу с ней.The disadvantage of this method is that the blood coagulates quickly - this complicates further work with it.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования бруцелл - заменитель среды Альбими, состоящая, г/л: 20 г пептона Дифко, 20 мм дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 1,0 г глюкозы, 0,1 г натрия бисульфита, дистиллированную воду (М.А.Сидоров, Д.И.Скородумов, В.Б.Федотов. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1985, с.183).Closest to the proposed invention is a nutrient medium for the cultivation of brucella - an alternative medium Albimi, consisting of, g / l: 20 g peptone Difco, 20 mm yeast water, 5 g sodium chloride, 1.0 g glucose, 0.1 g sodium bisulfite, distilled water (M.A. Sidorov, D.I. Skorodumov, V. B. Fedotov. Identifier of zoopathogenic microorganisms. M: Kolos, 1985, p. 183).

Недостатком данного способа является то, что при пересеве с бульона Альбими на пластинки агара вырастает малое количество колоний бруцеллезных бактерий.The disadvantage of this method is that when reseeding from Albimi broth on agar plates, a small number of colonies of brucellosis bacteria grow.

Целью предлагаемого изобретения является создание транспортной жидкой питательной среды для сбора, культивирования и транспортировки крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом.The aim of the invention is the creation of a transport liquid nutrient medium for the collection, cultivation and transportation of blood of patients suspected of having brucellosis.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что посев крови от больного осуществляют в транспортную жидкую питательную среду, завальцованную в пенициллиновые флаконы (v 15 мл) по 5 мл, стерильную, которые можно транспортировать на любые расстояния.The essence of the invention lies in the fact that the blood is sown from the patient in a transport liquid nutrient medium, rolled into penicillin vials (v 15 ml) of 5 ml, sterile, which can be transported at any distance.

Питательная основа содержит гидролизат говяжьего мяса - его основные характеристики: рН среды 7,2; общий азот 902 мг%, аминный азот 600 мг%, процент расщепления 74, натрия хлорида 0,086%, пептона 1,2 мг%; Са 4,2 мг%:, Мg 516 мг%; фосфор общий 96,8 мг%; фосфор неорганический 56,4 мг%; сухой остаток 10+1,5%; редуцирующие вещества 364 мг%; и стимулирующую добавку, причем в качестве стимулирующей добавки используют САГ-1 (смесь аминокислот гидролизная, сухая - необогащенная, ТУ 10 16 УССР 40-88. Партия 020389. Опытное производство института биоорганической химии АН УССР), содержащая воды не менее 8%, М. Д. азота общего не менее 13%, М. Д. азота аминного не менее 10,5%, М. Д. золы не менее 5,0% при следующем соотношении ингредиентов, г/л:The nutrient base contains a beef meat hydrolyzate - its main characteristics: pH 7.2; total nitrogen 902 mg%, amine nitrogen 600 mg%, percent cleavage 74, sodium chloride 0.086%, peptone 1.2 mg%; Ca 4.2 mg% :, Mg 516 mg%; total phosphorus 96.8 mg%; inorganic phosphorus 56.4 mg%; dry residue 10 + 1.5%; reducing substances 364 mg%; and a stimulating additive, and SAG-1 (a mixture of hydrolytic, dry and unenriched amino acids, TU 10 16 of the Ukrainian SSR 40-88. Party 020389. Pilot production of the Institute of Bioorganic Chemistry of the Ukrainian Academy of Sciences) is used as a stimulating additive, containing at least 8% water, M D. total nitrogen not less than 13%, M. D. amine nitrogen not less than 10.5%, M. D. ash not less than 5.0% in the following ratio of ingredients, g / l:

Гидролизат говяжьего мяса 160,0-180,0Beef Hydrolyzate 160.0-180.0

Натрий хлористый 4,0-6,0Sodium chloride 4.0-6.0

Глицерин 19,0-21,0Glycerin 19.0-21.0

Глюкоза 9,0-11,0Glucose 9.0-11.0

Цитрат натрия 4,0-6,0Sodium Citrate 4.0-6.0

САГ-1 0,5-0,7SAG-1 0.5-0.7

20% гидроокись натрия 0,0001-0,000320% sodium hydroxide 0.0001-0.0003

Дистиллированная вода до 1 лDistilled water up to 1 liter

Использованние в качестве стимулирующей добавки САГ-1, содержащей дополнительно азот, позволяет активизировать наличие основного структурного элемента клеток оксидоредуктаз, являясь дополнительным источником энергии, и является отличительным признаком.The use of SAG-1 as a stimulating additive, additionally containing nitrogen, makes it possible to activate the presence of the main structural element of oxidoreductase cells, being an additional source of energy, and is a hallmark.

В новом качестве САГ-1 проявляет свое действие, находясь в питательной среде для культивирования микробов бруцелл, так как аминокислоты являются источником белка, который, в свою очередь, необходим для построения клеток микроорганизмов и в целом обеспечивает активацию роста. В отличие от прототипа предлагаемая среда обеспечивает высокую конечную концентрацию засеваемых микробов бруцелл.In its new quality, SAG-1 exerts its effect when it is in a nutrient medium for the cultivation of Brucella microbes, since amino acids are a source of protein, which, in turn, is necessary for the construction of microorganism cells and, on the whole, ensures growth activation. Unlike the prototype, the proposed environment provides a high final concentration of seeded microbes of Brucella.

Питательную среду готовят следующим образом.The nutrient medium is prepared as follows.

Среду нагревают при непрерывном помешивании до полного растворения ее компонентов, фильтруют через тканевой фильтр, затем устанавливают рН 7,2±0,1 гидроокисью натрия 20% и разливают во флаконы по 5,0 мл. Стерилизуют при 0,3 атм 20 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл. Испытуемые культуры - Br.melitensis 16 М, Br.abortus 544, выращенные на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С в течение 24 ч. Из суточных культур готовили взвесь м.т. тест-штаммов в физиологическом растворе с концентрацией, соответствующей 10 единицам ОСО мутности ГИСК им. Л.А.Тараcевича, эквивалентного 1,0·10 м.к./мл бруцелл. Затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 100; 500; 1000 м.к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл в 3 флакона. Посевы инкубировали в условиях термостата при 37°С в течение 48 ч. Оценку ростовых свойств питательной среды проводили путем подсчета количества выросших колоний бруцелл при посеве содержимого флаконов на пластинки с плотной питательной средой.The medium is heated with continuous stirring until all its components are completely dissolved, filtered through a fabric filter, then adjusted to pH 7.2 ± 0.1 with sodium hydroxide 20% and poured into 5.0 ml vials. Sterilized at 0.3 atm for 20 minutes. The finished medium is used for growing brucella. The test cultures were Br.melitensis 16 M, Br.abortus 544 grown on solid agar plates with a pH of 7.2 ± 0.1 at a temperature of 37 ° C for 24 hours. A suspension of batch was prepared from daily cultures. test strains in physiological saline with a concentration corresponding to 10 units of CCA turbidity GISK them. L.A. Tarasevich, equivalent to 1.0 · 10 m.k. / ml of brucella. Then, serial ten-fold dilutions in physiological saline in a volume of 4.5 ml were adjusted to a content of 1 ml 100; 500; 1000 m.k. From these dilutions, a suspension of cultures was sown in 0.1 ml in 3 bottles. Crops were incubated in a thermostat at 37 ° C for 48 h. The growth properties of the growth medium were assessed by counting the number of brucella colonies grown by inoculating the contents of the vials on plates with a dense nutrient medium.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат из говяжьего мяса 160,0; натрий хлористый 4,0; глицерин 19,0; глюкозу 9,0; цитрат натрия 4,0; САГ-0,5; 20% гидроокись натрия 0,0001; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 150 и 500 м.к. При посевной дозе 100 м.к. был получен сплошной рост бактерий на пластинках агара.Example 1. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: hydrolyzed beef meat 160.0; sodium chloride 4.0; glycerin 19.0; glucose 9.0; sodium citrate 4.0; SAG-0.5; 20% sodium hydroxide 0.0001; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on solid agar plates for two types of brucella, seeded from vials at a sowing dose of 10 and 50 m.k., amounted to 150 and 500 m.k. With a sowing dose of 100 m.k. continuous growth of bacteria on agar plates was obtained.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 170,0; натрий хлористый 5,0; глицерин 18,0; глюкозу 10,0; цитрат натрия 5,0; САГ-1 0,6; 20% гидроокись натрия 0,0002; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 160 и 555 м.к. При посевной дозе 100 м.к. на пластинках агара был получен сплошной рост бактерий.Example 2. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: hydrolyzed beef meat 170.0; sodium chloride 5.0; glycerin 18.0; glucose 10.0; sodium citrate 5.0; SAG-1 0.6; 20% sodium hydroxide 0.0002; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on dense agar plates for two types of brucella, seeded from vials at a sowing dose of 10 and 50 mk, was respectively 160 and 555 mk. With a sowing dose of 100 m.k. continuous growth of bacteria was obtained on agar plates.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: гидролизат говяжьего мяса 180,0; натрий хлористый 6,0; глицерин 21,0; глюкозу 11,0; цитрат натрия 6,0; САГ-1 0,7; 20% гидроокись натрия 0,0003; дистиллированную воду до 1 л. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцелл двух видов, высеянных из флаконов при посевной дозе 10 и 50 м.к., составило соответственно 139 и 425 м.к. При посевной дозе 100 м.к. на пластинках агара был получен сплошной рост бактерий.Example 3. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: hydrolyzed beef meat 180.0; sodium chloride 6.0; glycerin 21.0; glucose 11.0; sodium citrate 6.0; SAG-1 0.7; 20% sodium hydroxide 0,0003; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, the number of colonies grown on dense agar plates for two types of brucella, seeded from vials at a sowing dose of 10 and 50 mk, was 139 and 425 mk, respectively. With a sowing dose of 100 m.k. continuous growth of bacteria was obtained on agar plates.

Таким образом, вариант питательной среды N 2 является оптимальным по количеству подобранных ингредиентов, они в совокупности с САГ-1 обеспечивают рост культур Br.melitensis 16 М и Br.abortus 544 и позволяют получить конечную концентрацию бактерий, значительно превышающую их посевную дозу.Thus, the nutrient medium option N 2 is optimal in terms of the number of selected ingredients; together with SAG-1, they provide the growth of Br.melitensis 16 M and Br.abortus 544 cultures and make it possible to obtain a final concentration of bacteria significantly higher than their inoculum dose.

Питательную среду N 2 в количестве 5 мл помещают в пенициллиновые флаконы v 15 мл, вальцуют, стерилизуют, затем используют для введения крови у постели больных, подозреваемых на бруцеллез, и транспортируют на любые расстояния.Nutrient medium N 2 in an amount of 5 ml is placed in penicillin vials v 15 ml, rolled, sterilized, then used to administer blood at the bedside of patients suspected of brucellosis, and transported at any distance.

Claims

Transport liquid nutrient medium for collecting, culturing and transporting blood of patients suspected of having brucellosis, containing a nutrient base, a brucella growth stimulator, sodium chloride, glucose, distilled water, characterized in that it additionally contains sodium citrate, glycerin, 20% sodium hydroxide, as a growth promoter, contains SAG-1, and as a nutritional basis, a beef meat hydrolyzate with the following ingredients, g / l:

Beef Hydrolyzate 160.0-180.0

Sodium chloride 4.0-6.0

Glycerin 19.0-21.0

Glucose 9.0-11.0

Sodium Citrate 4.0-6.0

SAG-1 0.5-0.7

20% Sodium Hydroxide 0.0001-0.0003

Distilled water Up to 1 L