RU2455351C1 - Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria - Google Patents

Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria Download PDF

Info

Publication number
RU2455351C1
RU2455351C1 RU2011123264/10A RU2011123264A RU2455351C1 RU 2455351 C1 RU2455351 C1 RU 2455351C1 RU 2011123264/10 A RU2011123264/10 A RU 2011123264/10A RU 2011123264 A RU2011123264 A RU 2011123264A RU 2455351 C1 RU2455351 C1 RU 2455351C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nutrient medium
diphtheria
glucose
sodium chloride
distilled water
Prior art date
Application number
RU2011123264/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Эльвира Львовна Алутина (RU)
Эльвира Львовна Алутина
Галина Георгиевна Харсеева (RU)
Галина Георгиевна Харсеева
Валерий Николаевич Садовниченко (RU)
Валерий Николаевич Садовниченко
Татьяна Дмитриевна Гасретова (RU)
Татьяна Дмитриевна Гасретова
Original Assignee
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России) filed Critical Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России)
Priority to RU2011123264/10A priority Critical patent/RU2455351C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2455351C1 publication Critical patent/RU2455351C1/en

Links

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: nutrient medium contains solid and liquid phases. The solid phase of the nutrient medium contains a pancreatic digest of fish meal, a hemophilic bacteria growth stimulator, sodium chloride, yeastrel, glucose, agar, 2% potassium tellurite and distilled water in the preset proportions. The liquid phase contains the pancreatic digest of fish meal, enzymatic peptone, sodium chloride, yeastrel, glucose, cattle blood serum and distilled water in the preset proportions.
EFFECT: invention allows higher sensitivity of the medium, germination value and growth rate of diphtheria bacteria.
3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано при бактериологической диагностике дифтерии.The invention relates to medicine, namely to medical microbiology, and can be used in bacteriological diagnosis of diphtheria.

Заболеваемость дифтерией в современных условиях носит спорадический характер (Маркина С.С, Максимова Н.М., Черкасова В.В., Кошкина Н.А. Эпидемиологическая ситуация по дифтерии в России в настоящее время//Вакцинация. - 2006, №3, с.7-9). Однако возбудитель дифтерии продолжает циркулировать среди населения благодаря существованию бактерионосительства токсигенных штаммов дифтерийных микробов, что создает угрозу возникновения новых эпидемий дифтерии (Костюкова Н.Н. Возбудитель дифтерии и условно-патогенные коринебактерии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001, №6, с.25-31). В сложившейся ситуации диагноз «дифтерия» может быть выставлен без бактериологического подтверждения, что свидетельствует о недостатках в бактериологической диагностике дифтерии (Максимова Н.М., Маркина С.С., Яцковский К.А и др. Дифтерия в России в 2005-2009 годах // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. - 2010, №3, с.31-36) и связано со сложностью культивирования дифтерийных микробов на существующих питательных средах.The incidence of diphtheria in modern conditions is sporadic (Markina S.S., Maksimova N.M., Cherkasova V.V., Koshkina N.A. Epidemiological situation of diphtheria in Russia at present // Vaccination. - 2006, No. 3, p. 7-9). However, the causative agent of diphtheria continues to circulate among the population due to the existence of bacterial carriage of toxigenic strains of diphtheria microbes, which poses a threat of new epidemics of diphtheria (Kostyukova N.N. Pathogen of diphtheria and opportunistic corynebacteria // Clinical laboratory diagnostics. - 2001, No. 6, p.25 -31). In this situation, the diagnosis of "diphtheria" can be made without bacteriological confirmation, which indicates flaws in the bacteriological diagnosis of diphtheria (Maksimova N.M., Markina S.S., Yatskovsky K.A. et al. Diphtheria in Russia in 2005-2009 // Epidemiology and Vaccine Prevention. - 2010, No. 3, p.31-36) and is associated with the complexity of the cultivation of diphtheria microbes on existing nutrient media.

В настоящее время для культивирования дифтерийных микробов используют различные питательные среды, содержащие в своем составе гидролизаты белкового сырья, стимуляторы роста и ингибиторы роста посторонней микрофлоры (Методические указания 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» МЗ РФ. - Москва, 1998 г., с.20-25). Однако ростовые свойства известных питательных сред оставляют желать лучшего. Так при культивировании дифтерийных микробов на сушествующих плотных питательных средах единичные колонии возбудителя появляются только лишь через 24 часа, а достаточное количество колоний, необходимое для дальнейшего проведения бактериологической диагностики образуется только через 48 и более часов (Методические указания 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» МЗ РФ. - Москва, 1998 г., с.6, 9-12).Currently, various nutrient media are used for the cultivation of diphtheria microbes, which contain protein raw material hydrolysates, growth stimulators and growth inhibitors of extraneous microflora (Guidelines 4.2.698 - 98 “Laboratory diagnosis of diphtheria infection” of the Ministry of Health of the Russian Federation. - Moscow, 1998. , p.20-25). However, the growth properties of known culture media leave much to be desired. So, when cultivating diphtheria microbes on existing solid nutrient media, single colonies of the pathogen appear only after 24 hours, and a sufficient number of colonies necessary for further bacteriological diagnosis is formed only after 48 or more hours (Guidelines 4.2.698 - 98 “Laboratory diagnosis of diphtheria infections ”of the Ministry of Health of the Russian Federation. - Moscow, 1998, p.6, 9-12).

Поэтому разработка новых питательных сред для культивирования дифтерийных микробов, обладающих улучшенными ростовыми свойствами, остается актуальной проблемой современной микробиологии.Therefore, the development of new nutrient media for the cultivation of diphtheria microbes with improved growth properties remains an urgent problem in modern microbiology.

Проведенными исследованиями по патентной и научно-медицинской литературе найдены различные питательные среды для культивирования дифтерийных микробов.Conducted research on patent and medical literature found various nutrient media for the cultivation of diphtheria microbes.

Так, в работе Мазуровой И.К., Бочковой В.А., Сальниковой Г.П. (Методические рекомендации «Бактериологические исследования при дифтерийной инфекции», Москва. - 1980.- с.67) описана питательная среда Бучина, применяемая для культивирования дифтерийных микробов. Она содержит на 100 мл питательной агаровой основы 5 мл дефибринированной крови.So, in the work of Mazurova I.K., Bochkova V.A., Salnikova G.P. (Methodological recommendations "Bacteriological studies in diphtheria infection", Moscow. - 1980.- p.67) described Buchin's nutrient medium used for the cultivation of diphtheria microbes. It contains 5 ml of defibrinated blood per 100 ml of nutrient agar base.

Недостатком данной питательной среды является ее недостаточные ростовые свойства. Так, при посеве взвеси дифтерийных микробов, содержащей 100 микробных клеток, через 48 часов после посева вырастает не более 5 колоний.The disadvantage of this nutrient medium is its lack of growth properties. So, when sowing a suspension of diphtheria microbes containing 100 microbial cells, no more than 5 colonies grow 48 hours after sowing.

В работе Мазуровой И.К., Мельникова В.Г., Комбаровой С.Ю., Борисовой О.Ю. (Методические указания МУ 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». - МЗ РФ. - Москва, 1998 г. - с.22) описана питательная среда для культивирования дифтерийных микробов -кровяной теллуритовый агар. Питательная среда содержит на 100 мл питательной агаровой основы 7 мл дефибринированной или 10 мл гемолизированной крови человека или животных, а также 2 мл 2% раствора теллурита калия.In the work of Mazurova I.K., Melnikov V.G., Kombarova S.Yu., Borisova O.Yu. (Guidelines MU 4.2.698 - 98 “Laboratory diagnosis of diphtheria infection.” - Ministry of Health of the Russian Federation. - Moscow, 1998 - p.22) describes a nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes - blood tellurite agar. The nutrient medium contains per ml of nutrient agar base 7 ml of defibrinated or 10 ml of hemolyzed blood of humans or animals, as well as 2 ml of a 2% solution of potassium tellurite.

Недостатком этой среды является ее недостаточные ростовые свойства. Так, при посеве взвеси дифтерийных микробов, содержащей 100 микробных клеток, через 24 часа вырастает не более 10-15 колоний.The disadvantage of this environment is its lack of growth properties. So, when sowing a suspension of diphtheria microbes containing 100 microbial cells, no more than 10-15 colonies grow in 24 hours.

Патентом РФ №2412991 (2011 г., БИПМ №6) защищена "Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов", содержащая жидкую фазу, состав которой определяется биологическими особенностями конкретного микроорганизма, и твердую фазу, содержащую коагулированную сыворотку и агарозу, при заданном соотношении компонентов.RF patent No. 2412991 (2011, BIPM No. 6) protected "Nutrient two-phase medium for the cultivation of microorganisms" containing a liquid phase, the composition of which is determined by the biological characteristics of a particular microorganism, and a solid phase containing coagulated serum and agarose, with a given ratio of components.

Недостатком этой двухфазной среды является ее ограниченная область применения: ее невозможно использовать для культивирования дифтерийных микробов, так как для их культивирования необходимо наличие в ее составе не коагулированной, а нативной сыворотки (Методические указания МУ 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». - МЗ РФ - Москва, 1998 г. - с.23-24).The disadvantage of this two-phase medium is its limited scope: it cannot be used for the cultivation of diphtheria microbes, since their cultivation requires the presence of not coagulated but native serum in its composition (Guidelines MU 4.2.698 - 98 "Laboratory diagnosis of diphtheria infection". - Ministry of Health of the Russian Federation - Moscow, 1998 - p.23-24).

Наиболее близким техническим решением, принятым нами за прототип, является "Питательная среда для выделения дифтерийного микроба", защищенная патентом РФ №2041947 (1995 г., БИ №23). Указанная питательная среда - прототип, представляет собой твердую фазу. Среда содержит питательную основу - гидролизат панкреатический рыбной муки с добавлением гидролизата ферментативного черного альбумина, натрий хлористый, агар, теллурит калия - 2% раствор и воду дистиллированную, при следующем соотношении компонентов:The closest technical solution that we adopted for the prototype is "Nutrient medium for the isolation of diphtheria microbe", protected by RF patent No. 2041947 (1995, BI No. 23). The specified nutrient medium is a prototype, is a solid phase. The medium contains a nutrient base - pancreatic hydrolyzate of fish meal with the addition of an enzymatic black albumin hydrolyzate, sodium chloride, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water, in the following ratio of components:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 20,0-25,020.0-25.0 гидролизат ферментативный черного альбумина, гfermentative hydrolyzate of black albumin, g 8,0-12,08.0-12.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-6,04.0-6.0 агар, гagar, g 10,0-15,010.0-15.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 5,0-20,05.0-20.0 вода дистиллированная, лdistilled water, l до 1up to 1

Авторами прототипа описаны следующие показатели ростовых свойств питательной среды для выделения дифтерийных микробов: чувствительность среды - 10-7, показатель прорастания микроорганизмов - 104,2%, скорость роста дифтерийных микробов - 19 часов.The prototype authors described the following growth parameters of the growth medium for the isolation of diphtheria microbes: the sensitivity of the medium is 10 -7 , the germination rate of microorganisms is 104.2%, the growth rate of diphtheria microbes is 19 hours.

Недостатком данной питательной среды - прототипа являются невысокие показатели ростовых свойств среды, а именно чувствительности среды, показателя прорастания и скорости роста дифтерийных микробов.The disadvantage of this nutrient medium - the prototype is the low growth characteristics of the medium, namely the sensitivity of the medium, the rate of germination and growth rate of diphtheria microbes.

В соответствии с Методическими указаниями (МУК 4.2.2316 - 08) «Методы контроля бактериологических питательных сред». - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008. - с.37, 41):In accordance with the Methodological instructions (MUK 4.2.2316 - 08) "Methods for the control of bacteriological culture media." - M .: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of Rospotrebnadzor, 2008. - p. 37, 41):

"Чувствительность среды - это максимальное разведение культуры, обеспечивающее визуально обнаруживаемый рост колоний искомого штамма в течение определенного времени и температуры на всех засеянных чашках (пробирках) с питательной средой"; показатель прорастания микроорганизмов (%) - это "отношение среднего числа колоний, образовавшихся на испытуемой среде, к среднему числу колоний на контрольной среде"; "скорость роста (часы) определяют по минимальному времени инкубации посевов, за которое при соответствующем разведении обеспечивается отчетливый (не менее 100 жизнеспособных клеток) видимый невооруженным глазом рост культуры (помутнение, наличие пленки, осадка, роста по уклону и др.) во всех засеянных пробирках"."The sensitivity of the medium is the maximum cultivation, providing a visually detectable growth of the colonies of the desired strain for a certain time and temperature on all seeded cups (test tubes) with a nutrient medium"; the germination rate of microorganisms (%) is “the ratio of the average number of colonies formed on the test medium to the average number of colonies on the control medium”; "the growth rate (hours) is determined by the minimum incubation time of crops, for which, with appropriate dilution, a clear (at least 100 viable cells) culture growth (clouding, film, sediment, slope growth, etc.) is provided in all seeded test tubes. "

Задачей предлагаемого изобретения является создание питательной среды для культивирования дифтерийных микробов с улучшенными ростовыми свойствами.The objective of the invention is the creation of a nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes with improved growth properties.

Техническим результатом, проявляющимся при использовании данной питательной среды, является повышение чувствительности среды, показателя прорастания и скорости роста дифтерийных микробов.The technical result manifested when using this nutrient medium is to increase the sensitivity of the medium, the rate of germination and the growth rate of diphtheria microbes.

Технический результат достигается тем, что в питательную среду для культивирования дифтерийных микробов, представляющую собой твердую фазу, в состав которой входят гидролизат панкреатический рыбной муки, натрий хлористый, агар, теллурит калия - 2% раствор и вода дистиллированная, дополнительно введена жидкая фаза.The technical result is achieved by the fact that in the nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, which is a solid phase, which includes pancreatic fish meal hydrolyzate, sodium chloride, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water, an additional liquid phase is introduced.

Жидкая фаза содержит гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу, сыворотку крови крупного рогатого скота и воду дистиллированную. Соотношение компонентов жидкой фазы на каждый литр воды дистиллированной следующее:The liquid phase contains pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract, glucose, cattle blood serum and distilled water. The ratio of the components of the liquid phase for each liter of distilled water is as follows:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 8,0-9,08.0-9.0 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 8,0-9,08.0-9.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-4,54.0-4.5 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 3,0-5,03.0-5.0 глюкоза, гglucose g 3,0-5,03.0-5.0 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 80,0-100,080.0-100.0

Твердая фаза питательной среды для культивирования дифтерийных микробов дополнительно содержит стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, экстракт дрожжевой и глюкозу. Соотношение компонентов твердой фазы на каждый литр воды дистиллированной следующее:The solid phase of the culture medium for the cultivation of diphtheria microbes additionally contains a growth stimulator of hemophilic microorganisms, yeast extract and glucose. The ratio of the components of the solid phase for each liter of distilled water is as follows:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 20,0-25,020.0-25.0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 10,0-12,010.0-12.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-4,54.0-4.5 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 3,0-5,03.0-5.0 глюкоза, гglucose g 3,0-5,03.0-5.0 агар, гagar, g 10,0-12,010.0-12.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 13,0-15,013.0-15.0

Заявляемая питательная среда для культивирования дифтерийных микробов готовится следующим образом.The inventive nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes is prepared as follows.

Для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов берут в необходимых соотношениях: гидролизат панкреатический рыбной муки, например, производства Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (ФБУН ГНЦ ПМБ), п.Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), пептон ферментативный, например, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл. (ГОСТ 13805-76), натрий хлористый, например, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкозу, например, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск (ГОСТ 975-88), сыворотку крови крупного рогатого скота, например, производства ООО «Биолот», г.Санкт-Петербург и воду дистиллированную, например, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров (ГОСТ 6709-72).To prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, the following ratios are taken: pancreatic hydrolyzate of fish meal, for example, produced by the Federal State Institution of Science “State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology” (FBUN SSC PMB), p. Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), enzyme peptone, for example, manufactured by FBUN SSC PMB, p. Obolensk, Moscow region. (GOST 13805-76), sodium chloride, for example, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, for example, produced by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), cattle blood serum, for example, produced by Biolot LLC, St. Petersburg, and distilled water, for example, manufactured by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72).

Указанные компоненты, кроме сыворотки крови крупного рогатого скота, смешивают в эмалированной посуде в 1 л воды дистиллированной, кипятят в течение 2 минут, фильтруют через бумажный фильтр. Затем приготовленную основу помещают в стерилизатор, например "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживают при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждают до температуры плюс 45°С, добавляют необходимый объем сыворотки крови крупного рогатого скота, смешивают.These components, in addition to blood serum of cattle, are mixed in an enamel bowl in 1 liter of distilled water, boiled for 2 minutes, filtered through a paper filter. Then the prepared base is placed in a sterilizer, for example, "Steam sterilizer GK-100-3" manufactured by the company Tyumen Medico, is kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, add the necessary volume of blood serum of cattle, mix.

Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов берут в необходимых соотношениях: гидролизат панкреатический рыбной муки, например, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, например, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-28-93), натрий хлористый, например, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкозу, например, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск (ГОСТ 975-88), агар, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited», (Индия), теллурит калия - 2% раствор, например, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А.Семашко», г.Москва и воду дистиллированную, например, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров (ГОСТ 6709-72).To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, they are taken in the required proportions: pancreatic hydrolyzate of fish meal, for example, produced by the Federal State Budget Scientific Center SSC PMB, p. Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), a growth stimulant for hemophilic microorganisms, for example, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Microbiology, Obolensk, Moscow Region (TU 480-00001927-28-93), sodium chloride, for example, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, for example, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), agar, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”, (India), potassium tellurite - 2% solution, for example, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. N.A. Semashko ”, Moscow and distilled water, for example, produced by LLC MC“ Ellara ”, Pokrov (GOST 6709-72).

Указанные компоненты, кроме теллурита калия - 2% раствора, смешивают в эмалированной посуде в 1 л воды дистиллированной, кипятят до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, помещают в стерилизатор, например "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживают при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждают до температуры плюс 45°С, добавляют необходимый объем теллурита калия - 2% раствор, смешивают и разливают по 30 мл во флаконы объемом 100 мл. Флаконы закупоривают и оставляют в наклонном положении под углом 30° до застывания.These components, in addition to potassium tellurite - 2% solution, are mixed in an enamel bowl in 1 liter of distilled water, boiled until the ingredients are completely dissolved for 2 minutes, placed in a sterilizer, for example, Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico ”, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, add the required volume of potassium tellurite - 2% solution, mix and pour 30 ml into 100 ml vials . The vials are corked and left in an inclined position at an angle of 30 ° until solidification.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открывают, вносят в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрывают. Готовую питательную среду хранят в холодильном шкафу при температуре плюс 4°С.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, are opened sterile above the torch, 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium are introduced into them and closed. The finished nutrient medium is stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Практическая реализуемость использования предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов иллюстрируется следующими примерами.The practical feasibility of using the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes is illustrated by the following examples.

Пример 1. Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (ТУ 480-00001927-28-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), агар (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), теллурит калия - 2% раствор (производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г.Москва), при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):Example 1. To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, a pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by FBUN SSC PMB, p. Obolensk, Moscow Region), a growth stimulator of hemophilic microorganisms (TU 480-00001927-28-93, produced by the Federal State Institution of Science and Science, Scientific and Practical Center of Applied Medicine, settlement of Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, produced by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India)), glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhin ck), agar (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)), potassium tellurite - 2% solution (manufactured by Moskhimpharmpreparat named after NA Semashko, Moscow), with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-72, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,02.0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,01,0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,40.4 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,30.3 глюкоза, гglucose g 0,30.3 агар, гagar, g 1,01,0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,31.3

Гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу и агар смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 1,3 мл теллурита калия - 2% раствор. Разливали по 30 мл во флаконы объемом 100 мл. Флаконы закупоривали и оставляли в наклонном положении под углом 30° до застывания.Pancreatic fish meal hydrolyzate, growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose and agar were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, placed in a Steam Sterilizer GK-100-3 manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 1.3 ml of potassium tellurite - 2% solution was added. Pour 30 ml into 100 ml vials. The bottles were corked and left in an inclined position at an angle of 30 ° until solidification.

Для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), пептон ферментативный (ГОСТ 13805-76, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), сыворотка крови крупного рогатого скота (производства ООО «Биолот», г.Санкт-Петербург) при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):To prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic pancreatic hydrolyzate of fish flour was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by the Federal State Budget Scientific Center SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), enzyme peptone (GOST 13805-76, manufactured FBUN SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, manufactured by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)) , glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk), serum of large cattle about cattle (produced by Biolot LLC, St. Petersburg) with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-72, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,80.8 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,80.8 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,40.4 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,30.3 глюкоза, гglucose g 0,30.3 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 8,08.0

Гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой и глюкозу смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр. Затем помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 8,0 мл сыворотки крови крупного рогатого скота, смешивали.Pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract and glucose were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled for 2 minutes, filtered through a paper filter. Then it was placed in the Steam Sterilizer GK-100-3 manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 8.0 ml was added cattle blood serum mixed.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открывали, вносили в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрывали. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°С.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared nutrient medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ростовых свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.25-27) использовали взвесь дифтерийных микробов штаммов: С.diphtheriae gravis tox+, BH, серотип 2, полученный из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов (ГКПМ) Федерального государственного бюджетного учреждения «Государственный научно-медицинский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ ГИСК им. Л.А.Тарасевича Минздравсоцразвития России), и свежевыделенный штамм С.diphtheriae gravis tox+.To determine the growth properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes in accordance with MUK 4.2.2316-08 (Methods for the control of bacteriological culture media, 2008, p.25-27), a suspension of diphtheria microbes of the strains: C. diphtheriae gravis tox +, BH was used , serotype 2, obtained from the State collection of pathogenic microorganisms (GKPM) of the Federal state budgetary institution “State scientific and medical institute of standardization and control of medical biological preparations named after L.A. Tarasevich "of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation (FSBI GISK named after L.A. Tarasevich of the Ministry of Health and Social Development of Russia), and a freshly isolated strain of C. diphtheriae gravis tox +.

Определение чувствительности, показателя прорастания и скорости роста дифтерийных микробов на предлагаемой питательной среде выполняли в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.37, 41).The sensitivity, germination rate and growth rate of diphtheria microbes on the proposed nutrient medium were determined in accordance with MUK 4.2.2316-08 (“Methods for controlling bacteriological nutrient media”, 2008, p. 37, 41).

Были получены следующие результаты: чувствительность среды - 10-8, показатель прорастания дифтерийных микробов - 269,3%, скорость роста дифтерийных микробов - 13,5 часов.The following results were obtained: Sensitivity medium - 10 -8, the germination rate of diphtheria microbes - 269.3%, the growth rate of microbes diphtheria - 13.5 hours.

Пример 2. Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (ТУ 480-00001927-28-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), агар (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), теллурит калия - 2% раствор (производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г.Москва), при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):Example 2. For the preparation of the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic pancreatic hydrolyzate of fish flour was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by the Federal State Institution of Science and Science, PMB, Obolensk, Moscow Region), a growth stimulator of hemophilic microorganisms (TU 480-00001927-28-93, produced by the Federal State Institution of Science and Science, Scientific and Practical Center of Applied Medicine, settlement of Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, produced by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India)), glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhin ck), agar (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)), potassium tellurite - 2% solution (manufactured by Moskhimpharmpreparat named after NA Semashko, Moscow), with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-72, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,32,3 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,11,1 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,40.4 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,40.4 глюкоза, гglucose g 0,40.4 агар, гagar, g 1,11,1 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,41.4

Гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу и агар, смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 1,4 мл теллурита калия - 2% раствор. Разливали по 30 мл во флаконы объемом 100 мл. Флаконы закупоривали и оставляли в наклонном положении под углом 30° до застывания.Pancreatic fish meal hydrolyzate, growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose and agar, mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients are completely dissolved for 2 minutes, placed in a Steam Sterilizer GK-100-3 "manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 1.4 ml of potassium tellurite - 2% solution was added. Pour 30 ml into 100 ml vials. The bottles were corked and left in an inclined position at an angle of 30 ° until solidification.

Для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), пептон ферментативный (ГОСТ 13805-76, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), сыворотка крови крупного рогатого скота (производства ООО «Биолот», г.Санкт-Петербург) при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-22, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):To prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic pancreatic hydrolyzate of fish flour was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by the Federal State Budget Scientific Center SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), enzyme peptone (GOST 13805-76, manufactured FBUN SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, manufactured by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)) , glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk), serum of large cattle about cattle (produced by Biolot LLC, St. Petersburg) with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-22, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,80.8 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,80.8 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,40.4 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,40.4 глюкоза, гglucose g 0,40.4 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 9,09.0

Гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой и глюкозу смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр. Затем помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 9,0 мл сыворотки крови крупного рогатого скота, смешивали.Pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract and glucose were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled for 2 minutes, filtered through a paper filter. Then it was placed in a steam sterilizer GK-100-3 manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 9.0 ml was added cattle blood serum mixed.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открывали, вносили в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрывали. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°С.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared nutrient medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ростовых свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.25-27) использовали взвесь дифтерийных микробов штаммов: С.diphtheriae gravis tox+, ВН, серотип 2, полученный из ГКПМ ФГБУ ГИСК им. Л.А.Тарасевича Минздравсоцразвития России, и свежевыделенный штамм С.diphtheriae gravis tox+.To determine the growth properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes in accordance with MUK 4.2.2316-08 (“Methods for the control of bacteriological culture media”, 2008, p.25-27), a suspension of diphtheria microbes of the strains was used: C. diphtheriae gravis tox +, ВН , serotype 2, obtained from GKPM FSBI GISK them. L.A. Tarasevich of the Ministry of Health and Social Development of Russia, and a freshly isolated strain of C. diphtheriae gravis tox +.

Определение чувствительности, показателя прорастания и скорости роста дифтерийных микробов на предлагаемой питательной среде выполняли в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.37, 41).The sensitivity, germination rate and growth rate of diphtheria microbes on the proposed nutrient medium were determined in accordance with MUK 4.2.2316-08 (“Methods for controlling bacteriological nutrient media”, 2008, p. 37, 41).

Были получены следующие результаты: чувствительность среды - 10-8, показатель прорастания дифтерийных микробов - 201,6%, скорость роста дифтерийных микробов - 14,5 часов.The following results were obtained: the sensitivity of the medium is 10-8 , the germination rate of diphtheria microbes is 201.6%, the growth rate of diphtheria microbes is 14.5 hours.

Пример 3. Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов (ТУ 480-00001927-28-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), агар (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), теллурит калия - 2% раствор (производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г.Москва), при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-72, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):Example 3. For the preparation of the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by FBUN SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), a growth stimulator of hemophilic microorganisms (TU 480-00001927-28-93, manufactured by the Federal State Institution of Science and Science, Scientific and Practical Center of Applied Medicine, settlement of Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, produced by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India)), glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhin ck), agar (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)), potassium tellurite - 2% solution (manufactured by Moskhimpharmpreparat named after NA Semashko, Moscow), with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-72, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,52.5 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,21,2 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,450.45 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,50.5 глюкоза, гglucose g 0,50.5 агар, гagar, g 1,21,2 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,51,5

Гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу и агар, смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 1,5 мл теллурита калия - 2% раствор. Разливали по 30 мл во флаконы объемом 100 мл. Флаконы закупоривали и оставляли в наклонном положении под углом 30° до застывания.Pancreatic fish meal hydrolyzate, growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose and agar, mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients are completely dissolved for 2 minutes, placed in a steam sterilizer GK-100-3 "manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 1.5 ml of potassium tellurite - 2% solution was added. Pour 30 ml into 100 ml vials. The bottles were corked and left in an inclined position at an angle of 30 ° until solidification.

Для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки (ТУ 480-00001927-27-93, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), пептон ферментативный (ГОСТ 13805-76, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п.Оболенск, Московская обл.), натрий хлористый (ГОСТ 4233-77, производства ООО «Агат-Мед», г.Москва), экстракт дрожжевой (производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия)), глюкоза (ГОСТ 975-88, производства ООО «Вита Реактив», г.Дзержинск), сыворотка крови крупного рогатого скота (производства ООО «Биолот», г.Санкт-Петербург) при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной (ГОСТ 6709-22, производства ООО МЦ «Эллара», г.Покров):To prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic pancreatic hydrolyzate of fish flour was taken (TU 480-00001927-27-93, manufactured by the Federal State Budget Scientific Center SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), enzyme peptone (GOST 13805-76, manufactured FBUN SSC PMB, Obolensk, Moscow Region), sodium chloride (GOST 4233-77, manufactured by Agat-Med LLC, Moscow), yeast extract (manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India)) , glucose (GOST 975-88, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk), serum of large cattle about cattle (produced by Biolot LLC, St. Petersburg) with the following ratio of components per 100 ml of distilled water (GOST 6709-22, produced by MC Ellara LLC, Pokrov):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,90.9 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,90.9 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,450.45 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,50.5 глюкоза, гglucose g 0,50.5 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 10,010.0

Гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой и глюкозу смешивали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр. Затем помещали в "Стерилизатор паровой ГК-100-3" производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживали при температуре плюс 121°С и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждали до температуры плюс 45°С, добавляли 10,0 мл сыворотки крови крупного рогатого скота, смешивали.Pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract and glucose were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled for 2 minutes, filtered through a paper filter. Then it was placed in a steam sterilizer GK-100-3 manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, 10.0 ml was added cattle blood serum mixed.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открывали, вносили в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрывали. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°С.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared nutrient medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ростовых свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.25-27) использовали взвесь дифтерийных микробов штаммов: С.diphtheriae gravis tox+, ВН, серотип 2, полученный из ГКПМ ФГБУ ГИСК им. Л.А.Тарасевича Минздравсоцразвития России, и свежевыделенный штамм С.diphtheriae gravis tox+.To determine the growth properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes in accordance with MUK 4.2.2316-08 (“Methods for the control of bacteriological culture media”, 2008, p.25-27), a suspension of diphtheria microbes of the strains was used: C. diphtheriae gravis tox +, ВН , serotype 2, obtained from GKPM FSBI GISK them. L.A. Tarasevich of the Ministry of Health and Social Development of Russia, and a freshly isolated strain of C. diphtheriae gravis tox +.

Определение чувствительности, показателя прорастания и скорости роста дифтерийных микробов на предлагаемой питательной среде выполняли в соответствии с МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.37, 41).The sensitivity, germination rate and growth rate of diphtheria microbes on the proposed nutrient medium were determined in accordance with MUK 4.2.2316-08 (“Methods for controlling bacteriological nutrient media”, 2008, p. 37, 41).

Были получены следующие результаты: чувствительность среды - 10-8, показатель прорастания дифтерийных микробов - 134,8%, скорость роста дифтерийных микробов - 17 часов.The following results were obtained: the sensitivity of the medium is 10-8 , the germination rate of diphtheria microbes is 134.8%, the growth rate of diphtheria microbes is 17 hours.

Согласно МУК 4.2.2316-08 («Методы контроля бактериологических питательных сред», 2008, с.25-27, 37, 41) с использованием взвеси дифтерийных микробов штаммов: С.diphtheriae gravis tox+, BH, серотип 2, полученного из ГКПМ ФГБУ ГИСК им. Л.А.Тарасевича Минздравсоцразвития России, и свежевыделенного штамма С.diphtheriae gravis tox+ нами были проведены исследования ростовых свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов при различных соотношениях входящих в нее компонентов.According to MUK 4.2.2316-08 (“Methods for the control of bacteriological nutrient media”, 2008, p.25-27, 37, 41) using a suspension of diphtheria microbes of strains: C. diphtheriae gravis tox +, BH, serotype 2, obtained from GKPM FSBI GISK them. L.A. Tarasevich of the Ministry of Health and Social Development of Russia, and a freshly isolated strain of C. diphtheriae gravis tox +, we studied the growth properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes at various ratios of its constituent components.

Были получены следующие результаты: величина чувствительности среды во всех случаях составила 10-8, значение показателя прорастания микроорганизмов варьировало от 134,8 до 269,3%, величина скорости роста дифтерийных микробов - от 13,5 до 17 часов.The following results were obtained: the sensitivity of the medium in all cases was 10 -8 , the value of the rate of germination of microorganisms ranged from 134.8 to 269.3%, the growth rate of diphtheria microbes was from 13.5 to 17 hours.

Таким образом, по сравнению с прототипом предлагаемая питательная среда для культивирования дифтерийных микробов позволяет повысить чувствительность среды в 10 раз, показатель прорастания микроорганизмов - более чем в 1,3 раза, скорость роста дифтерийных микробов - более чем на 2 часа.Thus, in comparison with the prototype, the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes can increase the sensitivity of the medium by 10 times, the rate of germination of microorganisms by more than 1.3 times, the growth rate of diphtheria microbes by more than 2 hours.

Claims (1)

Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов, содержащая твердую фазу, в состав которой входят гидролизат панкреатический рыбной муки, натрий хлористый, агар, теллурит калия - 2%-ный раствор и вода дистиллированная, отличающаяся тем, что питательная среда дополнительно содержит жидкую фазу, включающую гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу, сыворотку крови крупного рогатого скота и воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов жидкой фазы на каждый литр воды дистиллированной, г:
гидролизат панкреатический рыбной муки 8,0-9,0 пептон ферментативный 8,0-9,0 натрий хлористый 4,0-4,5 экстракт дрожжевой 3,0-5,0 глюкоза 3,0-5,0 сыворотка крови крупного рогатого скота 80,0-100,0 мл,

твердая фаза дополнительно содержит стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, экстракт дрожжевой и глюкозу при следующем соотношении компонентов твердой фазы на каждый литр воды дистиллированной, г:
гидролизат панкреатический рыбной муки 20,0-25,0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов 10,0-12,0 натрий хлористый 4,0-4,5 экстракт дрожжевой 3,0-5,0 глюкоза 3,0-5,0 агар 10,0-12,0 теллурит калия - 2%-ный раствор 13-15 мл
Nutrient medium for cultivation of diphtheria microbes, containing a solid phase, which includes pancreatic fish meal hydrolyzate, sodium chloride, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water, characterized in that the nutrient medium additionally contains a liquid phase, including hydrolyzate pancreatic fish meal, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract, glucose, cattle blood serum and distilled water in the following ratio of liquid phase components per liter distilled water, g:
Pancreatic fish meal hydrolyzate 8.0-9.0 peptone enzymatic 8.0-9.0 sodium chloride 4.0-4.5 yeast extract 3.0-5.0 glucose 3.0-5.0 cattle blood serum 80.0-100.0 ml

the solid phase additionally contains a growth stimulator of hemophilic microorganisms, yeast extract and glucose in the following ratio of the components of the solid phase for each liter of distilled water, g:
Pancreatic fish meal hydrolyzate 20.0-25.0 hemophilic microorganism growth stimulator 10.0-12.0 sodium chloride 4.0-4.5 yeast extract 3.0-5.0 glucose 3.0-5.0 agar 10.0-12.0 potassium tellurite - 2% solution 13-15 ml
RU2011123264/10A 2011-06-08 2011-06-08 Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria RU2455351C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011123264/10A RU2455351C1 (en) 2011-06-08 2011-06-08 Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011123264/10A RU2455351C1 (en) 2011-06-08 2011-06-08 Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2455351C1 true RU2455351C1 (en) 2012-07-10

Family

ID=46848546

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011123264/10A RU2455351C1 (en) 2011-06-08 2011-06-08 Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2455351C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542390C1 (en) * 2014-01-09 2015-02-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека NUTRIENT MEDIUM FOR DETERMINING ANTIBIOTIC SUSCEPTIBILITY OF Legionella pneumophila
RU2549707C1 (en) * 2014-01-20 2015-04-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерств здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России) Nutrient medium for culturing diphtheria microbes
RU2571940C1 (en) * 2015-01-13 2015-12-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России) Method of culturing diphtheria bacteria

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2041947C1 (en) * 1992-03-04 1995-08-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Culture medium for isolation of diphtheritic microbe
RU2077576C1 (en) * 1994-08-25 1997-04-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Nutrient medium for gonococcus isolation and culturing

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2041947C1 (en) * 1992-03-04 1995-08-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Culture medium for isolation of diphtheritic microbe
RU2077576C1 (en) * 1994-08-25 1997-04-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Nutrient medium for gonococcus isolation and culturing

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
См. Интернет: http://infopravo.by.ru/fedl998/ch09/akt26774.shtm, 1998 год. Методы общей бактериологии./ Под ред. ГЕРХАРДТА и др. - М.: Мир, т.1, 1983, с.331-333, 338-339. *
Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований./ Под ред. А.С. ЛАБИНСКОЙ. - М.: Медицина, 2005, с.580-585. СИДОРОВ М.А., СКОРОДУМОВ Д.И., ФЕДОТОВ В.Б. Справочник. Определитель заоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, с.134-136. Справочник по микробиологическим питательным средам./ Под ред. М.М. МЕДЖИДОВА. - Махачкала: Дагестанское книжное издательство, 1989, с.52-54. *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2542390C1 (en) * 2014-01-09 2015-02-20 Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека NUTRIENT MEDIUM FOR DETERMINING ANTIBIOTIC SUSCEPTIBILITY OF Legionella pneumophila
RU2549707C1 (en) * 2014-01-20 2015-04-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерств здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России) Nutrient medium for culturing diphtheria microbes
RU2571940C1 (en) * 2015-01-13 2015-12-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России) Method of culturing diphtheria bacteria

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2455351C1 (en) Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria
RU2429012C1 (en) Method of manufacturing associated vaccine against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets
CN101153316B (en) Method for detecting lactobacillus casei in probiotic bacteria milk product
RU2388489C1 (en) Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias
RU2759831C1 (en) Nutrient medium for cultivating microorganisms from burkholderia cepacia complex
CN112680499B (en) In-vitro detection kit for anaerobic microorganisms
Taylor et al. Assessment of transport and isolation methods for gonococci.
RU2580227C1 (en) Medium for isolation of legionella pneumophila
RU2538158C1 (en) Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle
CN112831539A (en) In-vitro detection kit for aerobic microorganisms
RU2288002C1 (en) Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias
RU2247775C1 (en) Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis
RU2738858C1 (en) Method of extracting uncultivated forms of staphylococci
RU2460801C1 (en) Method for detecting sanitary indicator bacteria and starter culture in meat products
RU2571940C1 (en) Method of culturing diphtheria bacteria
RU2722071C1 (en) Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079
RU2711914C1 (en) Nutrient medium for separation and identification of para-hemolytic vibrios (embodiments) and method for production thereof (embodiments)
RU2549707C1 (en) Nutrient medium for culturing diphtheria microbes
RU2756201C1 (en) Storage nutrient medium for transportation of biomaterial and environmental objects contaminated with foreign microflora to be examined for brucellosis
RU2681116C2 (en) Dense nutrient medium for storage of plague microbe
EA032485B1 (en) Dry living camel plague vaccine
RU2510416C1 (en) Nutritive medium for extraction of lactobacteria
RU2406532C1 (en) Method of producing associated vaccine against streptococcosis and staphylococcosis of cattle
RU2465316C1 (en) Haemophilus influenzae b n 326 bacterial strain, stable producer of capsular saccharide
RU2041947C1 (en) Culture medium for isolation of diphtheritic microbe

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
PD4A Correction of name of patent owner
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20190609