RU2549707C1 - Nutrient medium for culturing diphtheria microbes - Google Patents

Nutrient medium for culturing diphtheria microbes Download PDF

Info

Publication number
RU2549707C1
RU2549707C1 RU2014101552/10A RU2014101552A RU2549707C1 RU 2549707 C1 RU2549707 C1 RU 2549707C1 RU 2014101552/10 A RU2014101552/10 A RU 2014101552/10A RU 2014101552 A RU2014101552 A RU 2014101552A RU 2549707 C1 RU2549707 C1 RU 2549707C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nutrient medium
solution
microbes
agar
distilled water
Prior art date
Application number
RU2014101552/10A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Галина Георгиевна Харсеева
Анатолий Прокопьевич Шепелин
Эльвира Львовна Алутина
Ольга Вадимовна Полосенко
Валерий Николаевич Садовниченко
Татьяна Дмитриевна Гасретова
Original Assignee
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерств здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России)
Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерств здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России), Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора) filed Critical Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерств здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздрава России)
Priority to RU2014101552/10A priority Critical patent/RU2549707C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2549707C1 publication Critical patent/RU2549707C1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: nutrient medium comprises a solid and a liquid phase. The solid phase of the nutrient medium comprises a hydrolyzate of pancreatic fish flour, the growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water at a given ratio of the components. The liquid phase comprises the hydrolyzate of pancreatic fish flour, enzymatic peptone, yeast extract, glucose, agar, sodium chloride, potassium tellurite - 2% solution, blood serum of cattle and distilled water at a given ratio of the components.
EFFECT: invention enables to increase the inhibitory properties of the nutrient medium relating to microbes-associants of staphylococci.
4 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии.The invention relates to medicine, namely to medical microbiology, and can be used for the cultivation of diphtheria microbes in artificial nutrient media for bacteriological diagnosis of diphtheria.

В постэпидемический период основным источником дифтерийной инфекции являются бактерионосители токсигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae. Наиболее опасны в этом отношении бактерионосители, страдающие острыми заболеваниями верхних дыхательных путей (Маркина С.С., Корженкова М.П., Максимова Н.М. Дифтерия // Фельдшер и акушерка. - 1992. - №1. - С.13-19), обусловленными сопутствующей микрофлорой, в частности стафилококками. При этом на долю стафилококков приходится 71,8% от общего числа микробов, выделенных из верхних дыхательных путей (Извин А.И., Катаева Л.В. Микробный пейзаж слизистой оболочки верхних дыхательных путей в норме и патологии // Вестник отоларингологии. - 2009. - №2. - С.64-68). Известно, что возбудители дифтерии и стафилококки, присутствуя на эпителии верхних дыхательных путей, не вступают в антагонистические взаимоотношения друг с другом (Харсеева Г.Г., Алутина Э.Л., Васильева Г.И. Апоптоз макрофагов как один из механизмов патогенного действия возбудителя дифтерии // Журн. микробиол. и эпидемиол. - 2012. - №5. - С.63-66). В связи с этим, в материале, взятом для выделения возбудителя дифтерии от больных и бактерионосителей, содержатся помимо Corynebacterium diphtheriae представители сопутствующей микрофлоры - стафилококки, которые создают сложности при выделении дифтерийных микробов на питательных средах.In the post-epidemic period, the main source of diphtheria infection is the carrier of toxigenic strains of Corynebacterium diphtheriae. The most dangerous bacteria carriers in this regard are those suffering from acute diseases of the upper respiratory tract (Markina S.S., Korzhenkova M.P., Maksimova N.M. Diphtheria // Paramedic and midwife. - 1992. - No. 1. - P. 13- 19), due to concomitant microflora, in particular staphylococci. Moreover, staphylococci account for 71.8% of the total number of microbes isolated from the upper respiratory tract (Izvin A.I., Kataeva L.V. Microbial landscape of the mucous membrane of the upper respiratory tract in normal and pathological conditions // Bulletin of Otolaryngology. - 2009 . - No. 2. - S.64-68). It is known that the causative agents of diphtheria and staphylococci, present on the epithelium of the upper respiratory tract, do not enter into antagonistic relationships with each other (Kharseeva G.G., Alutina E.L., Vasilyeva G.I. Macrophage apoptosis as one of the mechanisms of the pathogenic action of the pathogen diphtheria // Journal of Microbiol. and Epidemiol. - 2012. - No. 5. - P.63-66). In this regard, in the material taken to isolate the causative agent of diphtheria from patients and bacterial carriers, in addition to Corynebacterium diphtheriae, there are representatives of the concomitant microflora - staphylococci, which create difficulties in the isolation of diphtheria microbes on nutrient media.

Поэтому разработка новых питательных сред для культивирования дифтерийных микробов, обладающих улучшенными ингибирующими свойствами в отношении стафилококков, является актуальной задачей современной микробиологии.Therefore, the development of new culture media for the cultivation of diphtheria microbes with improved inhibitory properties against staphylococci is an urgent task of modern microbiology.

Проведенными исследованиями по патентной и научно-медицинской литературе найдены различные питательные среды для культивирования дифтерийных микробов.Conducted research on patent and medical literature found various nutrient media for the cultivation of diphtheria microbes.

Так, в работе Мазуровой И.К., Бочковой В.А., Сальниковой Г.П. (Методические рекомендации «Бактериологические исследования при дифтерийной инфекции», Москва. - 1980. - с.67) описана питательная среда Бучина, применяемая для культивирования дифтерийных микробов. Она содержит на 100 мл питательной агаровой основы 5 мл дефибринированной крови.So, in the work of Mazurova I.K., Bochkova V.A., Salnikova G.P. (Methodological recommendations "Bacteriological studies in diphtheria infection", Moscow. - 1980. - p. 67) Buchin's nutrient medium used for the cultivation of diphtheria microbes is described. It contains 5 ml of defibrinated blood per 100 ml of nutrient agar base.

В работе Мазуровой И.К., Мельникова В.Г., Комбаровой С.Ю., Борисовой О.Ю. (Методические указания МУ 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». - МЗ РФ. - Москва, 1998 г. - с.22) описана питательная среда для культивирования дифтерийных микробов - кровяной теллуритовый агар. Питательная среда содержит на 100 мл питательной агаровой основы 7 мл дефибринированной или 10 мл гемолизированной крови человека или животных, а также 2 мл 2% раствора теллурита калия.In the work of Mazurova I.K., Melnikov V.G., Kombarova S.Yu., Borisova O.Yu. (Guidelines MU 4.2.698 - 98 “Laboratory diagnosis of diphtheria infection.” - Ministry of Health of the Russian Federation. - Moscow, 1998 - p.22) describes a nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes - blood tellurite agar. The nutrient medium contains per ml of nutrient agar base 7 ml of defibrinated or 10 ml of hemolyzed blood of humans or animals, as well as 2 ml of a 2% solution of potassium tellurite.

Недостатком данных питательных сред является отсутствие ингибирующих свойств в отношении стафилококков (Методические указания МУ 4.2.698-98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». - МЗ РФ. - Москва, 1998 г. - с.22).The disadvantage of these culture media is the lack of inhibitory properties against staphylococci (Guidelines MU 4.2.698-98 "Laboratory diagnosis of diphtheria infection." - Ministry of Health of the Russian Federation. - Moscow, 1998 - p.22).

В патенте РФ №2041947 (1995 г., БИ №23) описана "Питательная среда для выделения дифтерийного микроба". Указанная питательная среда представляет собой твердую фазу. Среда содержит питательную основу - гидролизат панкреатический рыбной муки с добавлением гидролизата ферментативного черного альбумина, натрий хлористый, агар, теллурит калия - 2% раствор, и воду дистиллированную, при заданном соотношении компонентов.In the patent of the Russian Federation No. 2041947 (1995, BI No. 23), "Nutrient medium for the isolation of diphtheria microbe" is described. The specified nutrient medium is a solid phase. The medium contains a nutrient base - pancreatic hydrolyzate of fish meal with the addition of an enzymatic black albumin hydrolyzate, sodium chloride, agar, potassium tellurite - 2% solution, and distilled water, at a given ratio of components.

Недостатком данной питательной среды являются ее невысокие ингибирующие свойства относительно микробов-ассоциантов: стафилококков.The disadvantage of this nutrient medium is its low inhibitory properties relative to microbes-associates: staphylococci.

Патентом РФ №2412991 (2011 г. , БИПМ №6) защищена "Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов", содержащая жидкую фазу, состав которой определяется биологическими особенностями конкретного микроорганизма, и твердую фазу, содержащую коагулированную сыворотку и агарозу, при заданном соотношении компонентов.RF patent No. 2412991 (2011, BIPM No. 6) protected "Nutrient two-phase medium for the cultivation of microorganisms" containing a liquid phase, the composition of which is determined by the biological characteristics of a particular microorganism, and a solid phase containing coagulated serum and agarose, with a given ratio of components.

Недостатком этой двухфазной среды является ее ограниченная область применения: ее невозможно использовать для культивирования дифтерийных микробов, так как для их культивирования необходимо наличие в ее составе не коагулированной, а нативной сыворотки (Методические указания МУ 4.2.698 - 98 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции». - МЗ РФ - Москва, 1998 г. - с.23-24).The disadvantage of this two-phase medium is its limited scope: it cannot be used for the cultivation of diphtheria microbes, since their cultivation requires the presence of not coagulated but native serum in its composition (Guidelines MU 4.2.698 - 98 "Laboratory diagnosis of diphtheria infection". - Ministry of Health of the Russian Federation - Moscow, 1998 - p.23-24).

Наиболее близким техническим решением, принятым нами за прототип, является "Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов", защищенная патентом РФ №2455351 (2011 г., БИПМ №19). Указанная питательная среда - прототип, содержит твердую и жидкую фазы.The closest technical solution that we adopted for the prototype is "Nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes", protected by RF patent No. 2455351 (2011, BIPM No. 19). The specified nutrient medium is a prototype, contains solid and liquid phases.

Твердая фаза содержит гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу, агар, теллурит калия - 2%-ный раствор и воду дистиллированнную, при следующем соотношении компонентов твердой фазы на каждый литр воды дистиллированной:The solid phase contains pancreatic fish meal hydrolyzate, a growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water, with the following ratio of solid phase components for each liter of distilled water:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 20,0-25,020.0-25.0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 10,0-12,010.0-12.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-4,54.0-4.5 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 3,0-5,03.0-5.0 глюкоза, гglucose g 3,0-5,03.0-5.0 агар, гagar, g 10,0-12,010.0-12.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 13,0-15,013.0-15.0

Жидкая фаза содержит гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу, сыворотку крови крупного рогатого скота и воду дистиллированнную, при заданном соотношении компонентов жидкой фазы на каждый литр воды дистиллированной.The liquid phase contains pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, sodium chloride, yeast extract, glucose, cattle blood serum and distilled water, at a given ratio of the liquid phase components for each liter of distilled water.

Недостатком прототипа - питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, является ее недостаточно эффективные ингибирующие свойства относительно микробов-ассоциантов - стафилококков, обусловленные составом жидкой фазы питательной среды.The disadvantage of the prototype is a nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, is its insufficiently effective inhibitory properties against microbes-associates - staphylococci, due to the composition of the liquid phase of the nutrient medium.

В сответствии с Методическими указаниями (МУК 4.2.2316-08) «Методы контроля бактериологических питательных сред» - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2008. - с.38-39) характеристикой ингибирующих свойств питательных сред является «показатель ингибиции», который в указанных методических указаниях определен только лишь для плотных и жидких (полужидких) питательных сред. Поэтому в качестве характеристики ингибирующих свойств сред, содержащих твердую и жидкую фазы, т.е. двухфазных питательных сред, мы использовали «показатель ингибиции двухфазной питательной среды» (ПИ2Ф), который определяется как отношение среднего числа колоний микробов на твердой фазе, сформировавшихся после высева из жидкой фазы двухфазной питательной среды, к среднему числу колоний тех же микробов после их культивирования на соответствующих питательных средах (Алутина Э.Л., Айдинов Г.Т., Харсеева Г.Г., Гасретова Т.Д. Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов // Проблемы антибиотикорезистентности возбудителей внутрибольничных инфекций: сб. науч. - практ. работ / под общ. ред. Г.Г. Харсеевой. - Ростов-на-Дону: Издательство РостГМУ, 2013. - С.8). При этом соответствующими питательными средами являются среды, ростовые свойства которых полностью удовлетворяют потребностям микробов. Так, для штамма Staphylococcus aureus Wood-46 соответствующей питательной средой является 5% кровяной агар (Приказ №535 от 22 апреля 1985 года «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» - М.: Министерство здравоохранения СССР, 1985. - С.55). А среднее число колоний микробов на твердой фазе, сформировавшихся после высева из жидкой фазы двухфазной питательной среды и среднее число колоний тех же микробов после их культивирования на соответствующих питательных средах определяется как среднее арифметическое результатов трех повторов культивирования.In accordance with the Guidelines (MUK 4.2.2316-08) “Methods for the control of bacteriological culture media” - M .: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of Rospotrebnadzor, 2008. - p.38-39) the characteristic of inhibitory properties of culture media is “an indicator of inhibition” , which in the indicated guidelines is defined only for dense and liquid (semi-liquid) culture media. Therefore, as a characteristic of the inhibitory properties of media containing solid and liquid phases, i.e. of biphasic culture media, we used the “biphasic culture medium inhibition indicator” (PI2F), which is defined as the ratio of the average number of colonies of microbes in the solid phase formed after seeding from the liquid phase of the biphasic culture medium to the average number of colonies of the same microbes after their cultivation on appropriate nutrient media (Alutina E.L., Aydinov G.T., Kharseeva G.G., Gasretova T.D. Nutrient medium for cultivating diphtheria microbes // Problems of antibiotic resistance of pathogens hospital infections: collection of scientific - practical works / under the general editorship of GG Kharseeva. - Rostov-on-Don: Publishing house RostSMU, 2013. - P.8). At the same time, the corresponding nutrient media are those whose growth properties fully satisfy the needs of microbes. So, for the Staphylococcus aureus Wood-46 strain, the corresponding nutrient medium is 5% blood agar (Order No. 535 of April 22, 1985 “On the unification of microbiological (bacteriological) research methods used in clinical diagnostic laboratories of medical institutions” - M. : Ministry of Health of the USSR, 1985. - P.55). And the average number of colonies of microbes on the solid phase, formed after seeding from the liquid phase of a two-phase nutrient medium and the average number of colonies of the same microbes after their cultivation on the corresponding nutrient media is determined as the arithmetic average of the results of three repetitions of cultivation.

Задачей предлагаемого изобретения является создание двухфазной, т.е. содержащей жидкую и твердую фазы питательной среды для культивирования дифтерийных микробов с улучшенными ингибирующими свойствами относительно микробов-ассоциантов.The objective of the invention is to create a two-phase, i.e. containing liquid and solid phases of a nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes with improved inhibitory properties against associate microbes.

Техническим результатом, проявляющимся при использовании данной питательной среды, является повышение ее ингибирующих свойств относительно микробов-ассоциантов: стафиллококков, а именно уменьшение значения «показателя ингибиции двухфазной питательной среды» (ПИ2Ф) для культивирования дифтерийных микробов.The technical result that is manifested when using this nutrient medium is to increase its inhibitory properties with respect to associative microbes: staphillococci, namely, to decrease the value of the “two-phase nutrient medium inhibition index” (PI2F) for the cultivation of diphtheria microbes.

Технический результат достигается тем, что жидкая фаза двухфазной питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, в состав которой входят гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, экстракт дрожжевой, глюкоза, натрий хлористый, сыворотка крови крупного рогатого скота и вода дистиллированная, дополнительно содержит агар и теллурит калия - 2% раствор. Соотношение компонентов жидкой фазы на каждый литр воды дистиллированной следующее:The technical result is achieved in that the liquid phase of a two-phase nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, which includes pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, yeast extract, glucose, sodium chloride, cattle blood serum and distilled water, additionally contains agar and tellurite potassium - 2% solution. The ratio of the components of the liquid phase for each liter of distilled water is as follows:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 8,0-9,08.0-9.0 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 8,0-9,08.0-9.0 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 3,0-5,03.0-5.0 глюкоза, гglucose g 3,0-5,03.0-5.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-4,54.0-4.5 агар, гagar, g 0,75-1,00.75-1.0 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 80,0-100,080.0-100.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 13,0-15,013.0-15.0

Соотношение компонентов твердой фазы питательной среды для культивирования дифтерийных микробов на каждый литр воды дистиллированной следующее:The ratio of the components of the solid phase of the nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes for each liter of distilled water is as follows:

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 20,0-25,020.0-25.0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 10,0-12,010.0-12.0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 4,0-4,54.0-4.5 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 3,0-5,03.0-5.0 глюкоза, гglucose g 3,0-5,03.0-5.0 агар, гagar, g 10,0-12,010.0-12.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 13,0-15,013.0-15.0

Заявляемая питательная среда для культивирования дифтерийных микробов готовится следующим образом.The inventive nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes is prepared as follows.

Для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов берут в необходимых соотношениях: гидролизат панкреатический рыбной муки, например, производства Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (ФБУН ГНЦ ПМБ), п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), пептон ферментативный, например, производства ООО НПО «Порт-Петровск», г. Курск (ГОСТ 13805-76), экстракт дрожжевой, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкозу, например, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), натрий хлористый, производства, например, ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), агар, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), сыворотку крови крупного рогатого скота, например, производства ООО «Биолот», г. Санкт-Петербург, теллурит калия - 2% раствор, например, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, и воду дистиллированную, например, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72).To prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, the following ratios are taken: pancreatic hydrolyzate of fish meal, for example, produced by the Federal State Institution of Science “State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology” (FBUN SSC PMB), Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), enzyme peptone, for example, produced by NPO Port-Petrovsk LLC, Kursk (GOST 13805-76), yeast extract, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, for example, produced by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), sodium chloride, produced, for example, Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77) , agar, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), blood serum of cattle, for example, manufactured by Biolot LLC, St. Petersburg, potassium tellurite - 2% solution, for example, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, and distilled water, for example, produced by LLC MC“ Ellara ”, Pokrov (GOST 6709-72).

Указанные компоненты, кроме сыворотки крупного рогатого скота и теллурита калия - 2% раствора, смешивают в эмалированной посуде в 1 л воды дистиллированной, кипятят до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, фильтруют через бумажный фильтр, например бумажный фильтр производства завода «Химреактивкомплект» (ТУ 6-09-1706-82), помещают в стерилизатор, например в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживают при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждают до температуры плюс 45°C, добавляют необходимые объемы теллурита калия - 2% раствора, сыворотки крупного рогатого скота и смешивают.These components, in addition to cattle serum and potassium tellurite - a 2% solution, are mixed in an enamel bowl in 1 liter of distilled water, boiled until the ingredients are completely dissolved for 2 minutes, filtered through a paper filter, for example, a paper filter manufactured by the Chemreaktivkomplekt factory ( TU 6-09-1706-82), placed in a sterilizer, for example, in the "Steam Sterilizer GK-100-3" manufactured by Tyumen Medico, is kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes , cooled to a temperature of plus 45 ° C, ext volume by the necessity of potassium tellurite - 2% solution of bovine serum and mixed.

Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов берут в необходимых соотношениях гидролизат панкреатический рыбной муки, например, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, например, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-28-93), натрий хлористый, например, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкозу, например, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975- 88), агар, например, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited», (Индия), теллурит калия - 2% раствор, например, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, и воду дистиллированную, например, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72).To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, the pancreatic hydrolyzate of fish meal is taken in the required proportions, for example, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Applied Microbiology, Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), a growth stimulant for hemophilic microorganisms, for example, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Microbiology, Ob. Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-28-93), sodium chloride, for example, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, for example, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), agar, for example, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”, (India), potassium tellurite - 2% solution, for example, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, and distilled water, for example, produced by LLC MC“ Ellara ”, Pokrov (GOST 6709-72).

Указанные компоненты, кроме теллурита калия - 2% раствора, смешивают в эмалированной посуде в 1 л воды дистиллированной, кипятят до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, помещают в стерилизатор, например "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдерживают при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охлаждают до температуры плюс 45°C, добавляют необходимый объем теллурита калия - 2% раствор, смешивают и разливают по 30 мл в стерильные флаконы. Флаконы закупоривают и оставляют в наклонном положении до застывания.These components, in addition to potassium tellurite - 2% solution, are mixed in an enamel bowl in 1 liter of distilled water, boiled until the ingredients are completely dissolved for 2 minutes, placed in a sterilizer, for example, Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico ”, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, add the required volume of potassium tellurite - 2% solution, mix and pour into 30 ml sterile vials. Vials are corked and left in an inclined position until solidified.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открывают, вносят в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрывают. Готовую питательную среду хранят в холодильном шкафу при температуре плюс 4°C.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, are opened sterile above the torch, 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium are introduced into them and closed. The prepared medium is stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Практическая реализуемость использования предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов иллюстрируется следующими примерами.The practical feasibility of using the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes is illustrated by the following examples.

Пример 1: для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (ФБУН ГНЦ ПМБ), п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), пептон ферментативный, производства ООО НПО «Порт-Петровск», г. Курск (ГОСТ 13805-76), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), натрий хлористый, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), сыворотка крови крупного рогатого скота, производства ООО «Биолот», г. Санкт-Петербург, теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):Example 1: to prepare the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" (FBUN SSC PMB), p. Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), enzyme peptone, manufactured by NPO Port-Petrovsk LLC, Kursk (GOST 13805-76), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, produced by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), agar, manufactured by the company HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), cattle blood serum, produced by Biolot LLC, St. Petersburg, potassium tellurite - 2% solution, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,80.8 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,80.8 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,30.3 глюкоза, гglucose g 0,30.3 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,040.04 агар, гagar, g 0,0750,075 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 8,08.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,31.3

Указанные компоненты, кроме сыворотки крупного рогатого скота и теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр (Завод «Химреактивкомплект», ТУ 6-09-1706-82), поместили в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанные выше объемы теллурита калия - 2% раствора, сыворотки крупного рогатого скота и смешали.These components, in addition to cattle serum and potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, filtered through a paper filter (Chemreaktivkomplekt Plant, TU 6-09 -1706-82), placed in the Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C , added the above volumes of potassium tellurite - 2% solution, serum and cattle and mixed.

Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-28-93), натрий хлористый, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, a pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Applied Microbiology, Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), a growth stimulator of hemophilic microorganisms, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Microbiology, Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-28-93), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), agar, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), potassium tellurite - 2% solution, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,02.0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,01,0 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,40.4 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,30.3 глюкоза, гglucose g 0,30.3 агар, гagar, g 1,01,0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,31.3

Указанные компоненты, кроме теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, поместили в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанный выше объем теллурита калия - 2% раствор, смешали и разлили по 30 мл в стерильные флаконы. Флаконы закупорили и оставили в наклонном положении до застывания.These components, in addition to potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, placed in a Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, added the above volume of potassium tellurite - 2% solution, mixed and poured into 30 ml into sterile vials. The bottles were corked and left in an inclined position until solidified.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открыли, внесли в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрыли. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°C.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ингибирующих свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, а именно для определения «показателя ингибиции двухфазной питательной среды» (ПИ), относительно микробов-ассоциантов: стафилококков, нами были проведены три повтора культивирования при вышеуказанном составе фаз питательной среды, результаты которых приведены в таблице 1.To determine the inhibitory properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, namely, to determine the “inhibition of two-phase nutrient medium” (PI 2F ), relative to the microbes associates: staphylococci, we carried out three repetitions of cultivation with the above composition of the phases of the nutrient medium, the results of which are given in table 1.

Результаты, полученные при исследовании ингибирующих свойств питательных сред для культивирования дифтерийных микробов. The results obtained in the study of the inhibitory properties of culture media for the cultivation of diphtheria microbes.

Табл. 1Tab. one Разведения микробной взвесиMicrobial suspension dilutions Количество колоний стафилококков на предлагаемой питательной средеThe number of staphylococcus colonies in the proposed nutrient medium Количество колоний стафилококков на 5% кровяном агареThe number of staphylococcus colonies on 5% blood agar Показатель ингибиции ПИ PI 2F inhibition rate 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay средн знач.average 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay сред. знач.wednesday value 10-1 10 -1 55 55 77 5,75.7 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-2 10 -2 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-3 10 -3 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-4 10 -4 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-5 10 -5 00 00 00 00 380380 364364 371371 371,7371.7 00 10-6 10 -6 00 00 00 00 4848 5454 5151 5151 00 Примечание: при сплошном росте значение ПИ не вычисляется.Note: with continuous growth, the value of PI 2f is not calculated.

Пример 2: для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (ФБУН ГНЦ ПМБ), п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), пептон ферментативный, производства ООО НПО «Порт-Петровск», г. Курск (ГОСТ 13805-76), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), натрий хлористый, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), сыворотка крови крупного рогатого скота, производства ООО «Биолот», г. Санкт-Петербург, теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):Example 2: for the preparation of the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" (FBUN SSC PMB), p. Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), enzyme peptone, manufactured by NPO Port-Petrovsk LLC, Kursk (GOST 13805-76), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, produced by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), agar, manufactured by the company HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), cattle blood serum, produced by Biolot LLC, St. Petersburg, potassium tellurite - 2% solution, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,90.9 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,90.9 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,50.5 глюкоза, гglucose g 0,50.5 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,450.45 агар, гagar, g 0,10.1 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 10,010.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,51,5

Указанные компоненты, кроме сыворотки крупного рогатого скота и теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр (Завод «Химреактивкомплект», ТУ 6-09-1706-82), поместили в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанные выше объемы теллурита калия - 2% раствора, сыворотки крупного рогатого скота и смешали.These components, in addition to cattle serum and potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, filtered through a paper filter (Chemreaktivkomplekt Plant, TU 6-09 -1706-82), placed in the Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C , added the above volumes of potassium tellurite - 2% solution, serum and cattle and mixed.

Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-28-93), натрий хлористый, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, a pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Applied Microbiology, Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), a growth stimulator of hemophilic microorganisms, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Microbiology, Obolensk, Moscow Region (TU 480-00001927-28-93), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), agar, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), potassium tellurite - 2% solution, manufactured by ZAO Moskhimpharmpreparat im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,52,5 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,21,2 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,450.45 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,50.5 глюкоза, гglucose g 0,50.5 агар, гagar, g 1,21,2 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,51,5

Указанные компоненты, кроме теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, поместили в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанный выше объем теллурита калия - 2% раствор, смешали и разлили по 30 мл в стерильные флаконы. Флаконы закупорили и оставили в наклонном положении до застывания.These components, in addition to potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, placed in a Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, added the above volume of potassium tellurite - 2% solution, mixed and poured into 30 ml into sterile vials. The bottles were corked and left in an inclined position until solidified.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открыли, внесли в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрыли. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°C.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ингибирующих свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, а именно для определения «показателя ингибиции двухфазной питательной среды» (ПИ), относительно микробов-ассоциантов: стафилококков, нами были проведены три повтора культивирования при вышеуказанном составе фаз питательной среды, результаты которых приведены в таблице 2.To determine the inhibitory properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, namely, to determine the "inhibition of two-phase nutrient medium" (PI 2F ), relative to the microbes associates: staphylococci, we carried out three repetitions of cultivation with the above composition of the phases of the nutrient medium, the results of which are given in table 2.

Пример 3: для приготовления жидкой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» (ФБУН ГНЦ ПМБ), п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), пептон ферментативный, производства ООО НПО «Порт-Петровск», г. Курск (ГОСТ 13805-76), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), натрий хлористый, производства ООО Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), сыворотка крови крупного рогатого скота, производства ООО «Биолот», г. Санкт-Петербург, теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):Example 3: for the preparation of the liquid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science "State Scientific Center for Applied Microbiology and Biotechnology" (FBUN SSC PMB), Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), enzyme peptone, manufactured by NPO Port-Petrovsk LLC, Kursk (GOST 13805-76), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, produced by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), agar, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), cattle blood serum, produced by Biolot LLC, St. Petersburg, potassium tellurite - 2% solution, manufactured by Moskhimpharmpreparaty im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 0,850.85 пептон ферментативный, гpeptone enzymatic, g 0,850.85 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,40.4 глюкоза, гglucose g 0,40.4 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,420.42 агар, гagar, g 0,080.08 сыворотка крови крупного рогатого скота, млcattle blood serum, ml 9,09.0 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,41.4

Результаты, полученные при исследовании ингибирующих свойств питательных сред для культивирования дифтерийных микробов The results obtained in the study of the inhibitory properties of culture media for the cultivation of diphtheria microbes

Табл.2Table 2 Разведения микробной взвесиMicrobial suspension dilutions Количество колоний стафилококков на предлагаемой питательной средеThe number of staphylococcus colonies in the proposed nutrient medium Количество колоний стафилококков на 5% кровяном агареThe number of staphylococcus colonies on 5% blood agar Показатель ингибиции ПИ PI 2F inhibition rate 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay среди знач.among the mean. 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay сред. знач.wednesday value 10-1 10 -1 1212 15fifteen 11eleven 12,712.7 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-2 10 -2 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-3 10 -3 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-4 10 -4 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-5 10 -5 00 00 00 00 375375 370370 381381 375,3375.3 00 10-6 10 -6 00 00 00 00 4747 5151 5353 50,350.3 00 Примечание: при сплошном росте значение ПИ не вычисляется.Note: with continuous growth, the value of PI 2f is not calculated.

Указанные компоненты, кроме сыворотки крупного рогатого скота и теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, фильтровали через бумажный фильтр (Завод «Химреактивкомплект», ТУ 6-09-1706-82), поместили в "Стерилизатор паровой ГК-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанные выше объемы теллурита калия - 2% раствора, сыворотки крупного рогатого скота и смешали.These components, in addition to cattle serum and potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, filtered through a paper filter (Chemreaktivkomplekt Plant, TU 6-09 -1706-82), placed in the Steam Sterilizer GK-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C , added the above volumes of potassium tellurite - 2% solution, serum and cattle and mixed.

Для приготовления твердой фазы заявляемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов были взяты гидролизат панкреатический рыбной муки, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-27-93), стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, производства ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск, Московская обл. (ТУ 480-00001927-28-93), натрий хлористый, производства ООО «Агат-Мед», г. Москва (ГОСТ 4233-77), экстракт дрожжевой, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), глюкоза, производства ООО «Вита Реактив», г. Дзержинск (ГОСТ 975-88), агар, производства фирмы «HiMedia Laboratories Pvt. Limited» (Индия), теллурит калия - 2% раствор, производства ЗАО «Мосхимфармпрепараты им. Н.А. Семашко», г. Москва, при следующем соотношении компонентов на 100 мл воды дистиллированной, производства ООО МЦ «Эллара», г. Покров (ГОСТ 6709-72):To prepare the solid phase of the claimed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, a pancreatic hydrolyzate of fish meal was taken, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Applied Microbiology, Obolensk, Moscow Region. (TU 480-00001927-27-93), a growth stimulator of hemophilic microorganisms, produced by the Federal State Institution of Science and Science of the Center for Microbiology, Obolensk, Moscow Region (TU 480-00001927-28-93), sodium chloride, produced by Agat-Med LLC, Moscow (GOST 4233-77), yeast extract, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), glucose, manufactured by Vita Reaktiv LLC, Dzerzhinsk (GOST 975-88), agar, manufactured by HiMedia Laboratories Pvt. Limited ”(India), potassium tellurite - 2% solution, manufactured by ZAO Moskhimpharmpreparat im. ON. Semashko ”, Moscow, with the following ratio of components per 100 ml of distilled water, produced by MC Ellara LLC, Pokrov (GOST 6709-72):

гидролизат панкреатический рыбной муки, гpancreatic hydrolyzate of fish meal, g 2,22.2 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, гgrowth stimulator of hemophilic microorganisms, g 1,11,1 натрий хлористый, гsodium chloride, g 0,420.42 экстракт дрожжевой, гyeast extract, g 0,40.4 глюкоза, гglucose g 0,40.4 агар, гagar, g 1,11,1 теллурит калия - 2% раствор, млpotassium tellurite - 2% solution, ml 1,41.4

Указанные компоненты, кроме теллурита калия - 2% раствора, смешали в эмалированной посуде в 100 мл воды дистиллированной, кипятили до полного растворения ингредиентов в течение 2 минут, поместили в "Стерилизатор паровой ПС-100-3", производства фирмы «Тюмень Медико», выдержали при температуре плюс 121°C и давлении 1,0 атм в течение 15 минут, охладили до температуры плюс 45°C, добавили указанный выше объем теллурита калия - 2% раствор, смешали и разлили по 30 мл в стерильные флаконы. Флаконы закупорили и оставили в наклонном положении до застывания.These components, in addition to potassium tellurite - 2% solution, were mixed in an enamel bowl in 100 ml of distilled water, boiled until the ingredients were completely dissolved for 2 minutes, placed in a Steam Sterilizer PS-100-3, manufactured by Tyumen Medico, kept at a temperature of plus 121 ° C and a pressure of 1.0 atm for 15 minutes, cooled to a temperature of plus 45 ° C, added the above volume of potassium tellurite - 2% solution, mixed and poured into 30 ml into sterile vials. The bottles were corked and left in an inclined position until solidified.

Флаконы с твердой фазой питательной среды с соблюдением правил асептики, стерильно, над факелом открыли, внесли в них по 10 мл жидкой фазы питательной среды и закрыли. Готовую питательную среду хранили в холодильном шкафу при температуре плюс 4°C.Vials with a solid phase of the nutrient medium, following aseptic rules, were opened sterile above the torch, introduced into them 10 ml of the liquid phase of the nutrient medium and closed. The prepared medium was stored in a refrigerator at a temperature of + 4 ° C.

Для определения ингибирующих свойств предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, а именно для определения «показателя ингибиции двухфазной питательной среды» (ПИ2Ф), относительно микробов-ассоциантов: стафилококков, нами были проведены три повтора культивирования при вышеуказанном составе фаз питательной среды, результаты которых приведены в таблице 3.To determine the inhibitory properties of the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, namely, to determine the "inhibition of two-phase nutrient medium" (PI2F), relative to the microbes associates: staphylococci, we carried out three repetitions of cultivation with the above composition of the phases of the nutrient medium, the results of which are given in table 3.

Для сравнения ингибирующих свойств прототипа и предлагаемой питательной среды для культивирования дифтерийных микробов, а именно для определения показателей ингибиции вышеуказанных двухфазных питательных сред относительно микробов-ассоциантов: стафилококков, нами было проведено 17 исследований ингибирующих свойств заявляемой питательной среды и среды-прототипа, для различных соотношений компонентов фаз указанных выше питательных сред. Каждое исследование состояло из трех повторов культивирования. Итоговые результаты исследований приведены в таблице 4.To compare the inhibitory properties of the prototype and the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, namely, to determine the inhibition indicators of the above two-phase nutrient media against microbes-associates: staphylococci, we conducted 17 studies of the inhibitory properties of the claimed nutrient medium and the prototype medium for various ratios of components phases of the above nutrient media. Each study consisted of three repetitions of cultivation. The final research results are shown in table 4.

Табл.3
Результаты, полученные при исследовании ингибирующих свойств питательных сред для культивирования дифтерийных микробов
Table 3
The results obtained in the study of the inhibitory properties of culture media for the cultivation of diphtheria microbes
Разведения микробной взвесиMicrobial suspension dilutions Количество колоний стафилококков на предлагаемой питательной средеThe number of staphylococcus colonies in the proposed nutrient medium Количество колоний стафилококков на 5% кровяном агареThe number of staphylococcus colonies on 5% blood agar Показатель ингибиции ПИ PI 2F inhibition rate 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay среди знач.among the mean. 1-й повтор1st repeat 2-й повтор2nd replay 3-й повтор3rd replay сред. знач.wednesday value 10-1 10 -1 88 11eleven 1212 10,310.3 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-2 10 -2 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-3 10 -3 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-4 10 -4 00 00 00 00 сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth сплошной ростsolid growth -- -- 10-5 10 -5 00 00 00 00 390390 360360 393393 381,0381.0 00 10-6 10 -6 00 00 00 00 50fifty 5252 5858 53,353.3 00 Примечание: при сплошном росте значение ПИ не вычисляется.Note: with continuous growth, the value of PI 2f is not calculated.

Полученные результаты показали, что предлагаемая питательная среда для культивирования дифтерийных микробов обладает улучшенными ингибирующими свойствами по сравнению со средой-прототипом: значения ПИ у предлагаемой питательной среды (равные 0) много меньше соответствующих значений ПИ питательной среды-прототипа.The results showed that the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes has improved inhibitory properties compared to the prototype medium: the PI 2F values of the proposed nutrient medium (0) are much less than the corresponding PI 2F values of the prototype nutrient medium.

Таким образом, по сравнению с прототипом предлагаемая питательная среда для культивирования дифтерийных микробов позволяет значительно повысить ингибирующие свойства питательной среды для культивирования дифтерийных микробов относительно микробов-ассоциантов: стафилококков.Thus, in comparison with the prototype, the proposed nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes can significantly increase the inhibitory properties of the nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes relative to microbes-associates: staphylococci.

Табл.4
Результаты, полученные при характеристике ингибирующих свойств питательных сред для культивирования дифтерийных микробов
Table 4
The results obtained by characterizing the inhibitory properties of culture media for the cultivation of diphtheria microbes
Разведения микробной взвеси стафилококков Dilution of microbial suspension of staphylococci Среднее количество колоний стафилококков на предлагаемой питательной средеThe average number of staphylococcus colonies in the proposed nutrient medium Среднее количество колоний на питательной среде-прототипеThe average number of colonies on a nutrient medium prototype Среднее количество колоний стафилококков на 5% кровяном агареThe average number of staphylococcus colonies on 5% blood agar Показатель ингибиции ПИ предлагаемой питательной средыThe inhibition of PI 2F of the proposed nutrient medium Показатель ингибиции ПИ питательной среды-прототипаThe inhibition rate of PI 2F nutrient medium of the prototype 10-1 10 -1 9,59.5 180,2180.2 сплошной ростsolid growth -- ~~ 10-2 10 -2 00 130,5130.5 сплошной ростsolid growth -- -- 10-3 10 -3 00 87,887.8 сплошной ростsolid growth -- -- 10-4 10 -4 00 58,658.6 сплошной ростsolid growth -- -- 10-5 10 -5 00 42,442,4 376,1376.1 00 0,110.11 10-6 10 -6 00 2,02.0 51,451,4 00 0,040.04 Примечание: при сплошном росте значение ПИ не вычисляется.Note: in case of continuous growth, the value of PI 2F is not calculated.

Claims (1)

Питательная среда для культивирования дифтерийных микробов, содержащая твердую фазу, в состав которой входят гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкоза, агар, теллурит калия - 2% раствор и вода дистиллированная, при следующем соотношении компонентов твердой фазы на каждый литр воды дистиллированной:
гидролизат панкреатический рыбной муки, г 20,0-25,0 стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, г 10,0-12,0 натрий хлористый, г 4,0-4,5 экстракт дрожжевой, г 3,0-5,0 глюкоза, г 3,0-5,0 агар, г 10,0-12,0 теллурит калия - 2% раствор, мл 13,0-15,0

и жидкую фазу, в состав которой входят гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, экстракт дрожжевой, глюкоза, натрий хлористый, сыворотка крови крупного рогатого скота и вода дистиллированная, отличающаяся тем, что жидкая фаза дополнительно содержит агар и теллурит калия - 2% раствор, при следующем соотношении компонентов жидкой фазы фазы на каждый литр воды дистиллированной:
гидролизат панкреатический рыбной муки, г 8,0-9,0 пептон ферментативный, г 8,0-9,0 экстракт дрожжевой, г 3,0-5,0 глюкоза, г 3,0-5,0 натрий хлористый, г 4,0-4,5 агар, г 0,75-1,0 сыворотка крови крупного рогатого скота, мл 80,0-100,0 теллурит калия - 2% раствор, мл 13,0-15,0
Nutrient medium for the cultivation of diphtheria microbes, containing a solid phase, which includes pancreatic fish meal hydrolyzate, a growth stimulator of hemophilic microorganisms, sodium chloride, yeast extract, glucose, agar, potassium tellurite - 2% solution and distilled water, in the following ratio of solid components phase for each liter of distilled water:
pancreatic hydrolyzate of fish meal, g 20.0-25.0 growth stimulator of hemophilic microorganisms, g 10.0-12.0 sodium chloride, g 4.0-4.5 yeast extract, g 3.0-5.0 glucose g 3.0-5.0 agar, g 10.0-12.0 potassium tellurite - 2% solution, ml 13.0-15.0

and the liquid phase, which includes pancreatic fish meal hydrolyzate, enzyme peptone, yeast extract, glucose, sodium chloride, cattle blood serum and distilled water, characterized in that the liquid phase additionally contains agar and potassium tellurite - 2% solution, in the following ratio of the components of the liquid phase phase for each liter of distilled water:
pancreatic hydrolyzate of fish meal, g 8.0-9.0 peptone enzymatic, g 8.0-9.0 yeast extract, g 3.0-5.0 glucose g 3.0-5.0 sodium chloride, g 4.0-4.5 agar, g 0.75-1.0 cattle blood serum, ml 80.0-100.0 potassium tellurite - 2% solution, ml 13.0-15.0
RU2014101552/10A 2014-01-20 2014-01-20 Nutrient medium for culturing diphtheria microbes RU2549707C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014101552/10A RU2549707C1 (en) 2014-01-20 2014-01-20 Nutrient medium for culturing diphtheria microbes

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2014101552/10A RU2549707C1 (en) 2014-01-20 2014-01-20 Nutrient medium for culturing diphtheria microbes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2549707C1 true RU2549707C1 (en) 2015-04-27

Family

ID=53289851

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014101552/10A RU2549707C1 (en) 2014-01-20 2014-01-20 Nutrient medium for culturing diphtheria microbes

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2549707C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1065475A1 (en) * 1981-02-11 1984-01-07 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Culture medium for culturing corinobacteria
RU2041947C1 (en) * 1992-03-04 1995-08-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Culture medium for isolation of diphtheritic microbe
RU2455351C1 (en) * 2011-06-08 2012-07-10 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России) Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1065475A1 (en) * 1981-02-11 1984-01-07 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Culture medium for culturing corinobacteria
RU2041947C1 (en) * 1992-03-04 1995-08-20 Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии Culture medium for isolation of diphtheritic microbe
RU2455351C1 (en) * 2011-06-08 2012-07-10 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО РостГМУ Минздравсоцразвития России) Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ВОРОБЬЕВ А.А., КРИВОШЕЙН Ю.С., ШИРОБОКОВ В.П., Медицинская и санитарная микробиология, М, "Академия", 2003, стр.201-203 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Giebink et al. The microbiology of serous and mucoid otitis media
Pittman A study of bacteria implicated in transfusion reactions and of bacteria isolated from blood products
Egwuatu et al. Effect of blood agar from different animal blood on growth rates and morphology of common pathogenic bacteria
RU2580002C1 (en) Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli
Dawei et al. In vitro biofilm forming potential of Streptococcus suis isolated from human and swine in China
Yadufashije et al. Antibacterial activity of ginger extracts on bacteria isolated from digestive tract infection patients attended Muhoza Health Center
Seth Use of trimethoprim to prevent overgrowth by Proteus in the cultivation of N. gonorrhoeae.
CN110151752A (en) A kind of tea polyphenols composition and its preparing the application in anti-streptococcus suis drug
CN107743519A (en) For separate include can not cultivating in conventional medium as mycoplasma species clinical sample culture medium
Ramos et al. Differences between Pseudomonas aeruginosa in a clinical sample and in a colony isolated from it: comparison of virulence capacity and susceptibility of biofilm to inhibitors
RU2455351C1 (en) Nutrient medium for cultivation of diphtheria bacteria
RU2549707C1 (en) Nutrient medium for culturing diphtheria microbes
Castellani et al. Fate of pathogenic bacteria in microcosms mimicking human body sites
Sparham et al. Isolation of Staphylococcus aureus from sputum in cystic fibrosis.
JP2010075145A (en) Culture medium for measuring number of general living bacteria
Siam et al. Determination of the antibiotic susceptibility pattern of clinical isolates of Staphylococcus aureus collected from various diagnostic centers of Dhaka City, Bangladesh
Wang et al. Multiple skin abscesses associated with bacteremia caused by Burkholderia gladioli: A case report
Isola et al. Isolation and identification of microorganisms from surfaces in science laboratories
Sampson et al. Incidence of Staphylococcus aureus Wound Infection amongst Patients Attending University of Port Harcourt Teaching Hospital, Rivers State, Nigeria
RU2738858C1 (en) Method of extracting uncultivated forms of staphylococci
RU2580227C1 (en) Medium for isolation of legionella pneumophila
Phair et al. Attempts to isolate wall-defective microbial variants from clinical specimens
Al-Hilli Study of bacterial isolates and their susceptibility pattern in chronic suppurative otitis media
Hessan et al. PHENOTYPIC DETECTION OF SOME VIRULENCE FACTORS AMONG STREPTOCOCCUS ANGINOSUS ISOLATED FROM PATIENTS SUFFERING FROM ACUTE INFLAMMATION AFTER SURGICAL TOOTH EXTRACTION
RU2733431C2 (en) Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200121