RU2580002C1 - Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli - Google Patents
Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli Download PDFInfo
- Publication number
- RU2580002C1 RU2580002C1 RU2015118890/10A RU2015118890A RU2580002C1 RU 2580002 C1 RU2580002 C1 RU 2580002C1 RU 2015118890/10 A RU2015118890/10 A RU 2015118890/10A RU 2015118890 A RU2015118890 A RU 2015118890A RU 2580002 C1 RU2580002 C1 RU 2580002C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bifidobacteria
- lactobacilli
- bacteria
- biomass
- strains
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к производству биопрепаратов - пробиотиков, и применяется для лечения и профилактики дисбактериозов.The invention relates to biotechnology, namely to the production of biological products - probiotics, and is used for the treatment and prevention of dysbiosis.
Известно, что клинические проявления дисбактериоза кишечника, как правило, отмечаются на фоне отсутствия или дефицита бифидобактерий и лактобактерий, которые в норме являются основой микрофлоры кишечника людей всех возрастов. Именно бифидобактериям и лактобациллам принадлежит ведущая роль в поддержании барьерных функций кишечника и в жизнедеятельности организма в целом (1). Отсутствие или резкое снижение уровня бифидобактерий и лактобацилл в кишечнике детей и взрослых является одним из патогенетических факторов длительных кишечных дисфункций и одной из причин, осложняющих течение ряда заболеваний (2).It is known that the clinical manifestations of intestinal dysbiosis are usually observed against the background of the absence or deficiency of bifidobacteria and lactobacilli, which are normally the basis of the intestinal microflora of people of all ages. It is bifidobacteria and lactobacilli that play a leading role in maintaining the barrier functions of the intestine and in the life of the organism as a whole (1). The absence or sharp decrease in the level of bifidobacteria and lactobacilli in the intestines of children and adults is one of the pathogenetic factors of long-term intestinal dysfunctions and one of the reasons complicating the course of a number of diseases (2).
К настоящему времени арсенал биопрепаратов, предназначенных для восстановления нормофлоры, включает монопрепараты из основных представителей нормофлоры - бифидумбактерин, бифидумбактерин форте, лактобактерии (3). Для того чтобы оказать свое лечебно-профилактическое действие, эти бактерии должны прижиться в кишечнике человека, и чем большее количество их адгезируется с эпителиоцитами кишечника, тем более стойкий клинический эффект будет от применения препарата.To date, the arsenal of biological products designed to restore normoflora includes mono products from the main representatives of normoflora - bifidumbacterin, bifidumbacterin forte, lactobacillus (3). In order to exert their therapeutic and prophylactic effect, these bacteria must take root in the human intestines, and the more they adhere to intestinal epithelial cells, the more persistent clinical effect will be from the use of the drug.
Снижение количества бифидо- и лактобактерий при дисбактериозе ведет к повышению содержания в кишечнике условно-патогенных микроорганизмов (стафилококков, протея, гемолитической кишечной палочки и др.), а также снижает уровень неспецифического иммунитета (4). Поэтому в состав комплексных препаратов-пробиотиков помимо штаммов бифидо- и лактобактерий вводят биологически активные ингредиенты - лизоцим, интерферон, иммуноглобулины, биологически активные пептиды, факторы роста бифидобактерий (5), повышающих уровень иммунитета и элиминирующих условно-патогенные бактерии. Эти бактерийные препараты-пробиотики являются достаточно эффективными лечебно-профилактическими средствами, однако их эффективность в значительной степени ограничена тем, что используемые в их составе в качестве основного действующего начала производственные штаммы бифидо- и лактобактерий, являются чужеродными для каждого конкретного человека.A decrease in the number of bifidobacteria and lactobacilli with dysbiosis leads to an increase in the content of opportunistic microorganisms in the intestines (staphylococci, protea, hemolytic E. coli, etc.), and also reduces the level of non-specific immunity (4). Therefore, in addition to strains of bifidobacteria and lactobacilli, biologically active ingredients are introduced into the composition of complex probiotic preparations - lysozyme, interferon, immunoglobulins, biologically active peptides, growth factors of bifidobacteria (5), which increase the level of immunity and eliminate conditionally pathogenic bacteria. These bacterial probiotic preparations are quite effective therapeutic and prophylactic agents, however, their effectiveness is largely limited by the fact that the industrial strains of bifidobacteria and lactobacilli used in their composition as the main active principle are foreign to each individual person.
Известно, что становление нормофлоры кишечника человека начинается с первых дней жизни и от момента заселения кишечника штаммами бифидо- и лактобактерий (чаще всего материнскими), происходит «генетическая детерминация» штаммов в процессе жизни человека. То есть в процессе жизни штаммы становятся строго индивидуальными у каждого человека. Находясь в тесном контакте с клетками эпителиоцитов кишечника, штаммы бифидо-, лактобактерий обмениваются с клетками кишечника генетической информацией и становятся «генетически детерминированными» для данного человека и не приживаются в кишечнике другого человека, даже однояйцевого близнеца (6).It is known that the formation of normoflora of the human intestine begins from the first days of life and from the moment of colonization of the intestine with strains of bifidobacteria and lactobacilli (most often maternal), there is a “genetic determination” of the strains in the process of human life. That is, in the process of life, strains become strictly individual in each person. Being in close contact with intestinal epithelial cells, strains of bifidobacteria and lactobacilli exchange genetic information with intestinal cells and become “genetically determined” for a given person and do not take root in the intestines of another person, even an identical twin (6).
Поскольку сайты адгезии (места прикрепления к слизистой кишечника) для нормофлоры генетически детерминированы, производственные штаммы бифидо- и лактобактерий имеют низкую степень адгезии в кишечнике человека. В результате приема препаратов-пробиотиков из производственных штаммов бифидо- и лактобактерий не происходит приживления бактерий на слизистых кишечника, и бифидо- и лактобактерии транзитом выводятся из организма. Поэтому применять такие препараты нужно длительное время и эффект от их применения часто бывает кратковременным.Since the adhesion sites (places of attachment to the intestinal mucosa) for normoflora are genetically determined, production strains of bifidobacteria and lactobacilli have a low degree of adhesion in the human intestine. As a result of taking probiotic preparations from production strains of bifidobacteria and lactobacilli, bacteria do not engraft on the intestinal mucosa, and bifidobacteria and lactobacilli are excreted in transit. Therefore, it is necessary to use such drugs for a long time and the effect of their use is often short-lived.
Собственные штаммы бактерий (аутоштаммы), выделенные из кишечника отдельного человека и размноженные в производственных условиях, приживаются в кишечнике у данного индивида с эффективностью до 100% и могут за короткое время полностью восстановить микробиоценоз кишечника. Для ускорения лечения дисбактериозов кишечника используется введение аутоштаммов бифидобактерий и лактобацилл. Даже кратковременный курс введения аутоштаммов бифидобактерий и лактобактерий способствует быстрому и эффективному восстановлению микрофлоры кишечника при дисбактериозе. Например, известен способ ускорения лечения дисбактериозов кишечника путем введения аутоштаммов бифидобактерий и лактобацилл [А.с. СССР 1286212, кл. А61К 35/74, опубл. 30.01.1987]. Аутоштаммы выделяли из фекалий путем последовательных десятикратных разведений физиологическим раствором исследуемого материала до 10-8. Исследуемый материал из различных разведений засевали на соответствующие питательные среды для определения исходных уровней энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, лактобактерий, бифидобактерий. Через двое суток материал из изолированных колоний лактобактерий, выросших на среде MPC-4 в наибольшем разведении (103), и из изолированных колоний бифидобактерий, выросших на питательной среде Блаурокка в наибольшем разведении (107), вновь пересевали на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через 2 суток после второго пассажа изолированные колонии бифидобактерий и лактобактерий пересевали на жидкие среды МРС-4 и Блаурокка для получения биомассы микроорганизмов, которая была использована в виде аутоштаммов для лечения дисбактериоза кишечника.Own bacterial strains (auto-strains), isolated from the intestines of an individual person and propagated under production conditions, take root in the intestines of this individual with an efficiency of up to 100% and can completely restore intestinal microbiocenosis in a short time. To accelerate the treatment of intestinal dysbiosis, the introduction of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli is used. Even a short-term course of administration of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli contributes to the rapid and effective restoration of intestinal microflora in case of dysbiosis. For example, there is a method for accelerating the treatment of intestinal dysbiosis by administering auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli [A.S. USSR 1286212, class A61K 35/74, publ. 01/30/1987]. Autostrains were isolated from feces by ten-fold successive dilutions with physiological saline of the test material to 10 -8 . The studied material from various dilutions was seeded on appropriate nutrient media to determine the initial levels of enterobacteria, enterococci, staphylococci, lactobacilli, bifidobacteria. Two days later, material from isolated colonies of lactobacilli grown on MPC-4 medium in the highest dilution (10 3 ), and from isolated colonies of bifidobacteria grown on medium Blaurock in the highest dilution (10 7 ), were again subcultured to the corresponding selective nutrient media. Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, grown 2 days after the second passage, were subcultured onto liquid media MPC-4 and Blaurock to obtain biomass of microorganisms, which was used as auto-strains for the treatment of intestinal dysbiosis.
Недостатком известного способа является то, что выделенные аутоштаммы бифидо- и лактобактерий обладают низкой физиологической активностью.The disadvantage of this method is that the selected auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli have low physiological activity.
Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату является известный способ получения аутопробиотика [патент РФ 2139070, кл. А61К 35/74, C12N 1/20, опубл. 10.10.1999], содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии с повышенной физиологической активностью, предусматривающий их выделение из фекалий хозяина и использование в виде аутоштаммов для лечения дисбактериозов, при этом бифидобактерии и лактобациллы выделяют одновременно в виде естественного комплекса индигенных микроорганизмов путем разведения содержимого толстой кишки хозяина жидкой селективной питательной средой для выделения и культивирования бифидобактерий и лактобацилл, добавления в него сыворотки крови того же хозяина, культивирования смеси и последующего пересева на питательную среду для культивирования бифидобактерий и лактобацилл без добавления селективных агентов.Closest to the proposed technical essence and the achieved result is a known method of obtaining autoprobiotic [RF patent 2139070, class. A61K 35/74, C12N 1/20, publ. 10.10.1999], containing live bifidobacteria and lactobacilli with increased physiological activity, providing for their isolation from the feces of the host and use as auto-strains for the treatment of dysbacterioses, while bifidobacteria and lactobacilli are isolated simultaneously as a natural complex of indigenous microorganisms by diluting the contents of a thick intestine selective nutrient medium for the isolation and cultivation of bifidobacteria and lactobacilli, adding to it blood serum of the same host, to ultivation of the mixture and subsequent reseeding on a nutrient medium for the cultivation of bifidobacteria and lactobacilli without the addition of selective agents.
Для этого проводят многократные разведения исследуемого образца жидкой селективной питательной средой, пригодной для выделения и культивирования бифидобактерий и лактобацилл путем последовательных десятикратных разведений физиологическим раствором исследуемого материала до 10-8. Исследуемый материал из различных разведений засевают на соответствующие питательные среды для определения исходных уровней энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, лактобактерий и бифидобактерий. Через двое суток материал из изолированных колоний лактобактерий, выросших на среде МРС-4 в наибольшем разведении (103), и из изолированных колоний бифидобактерий, выросших на питательной среде Блаурокка в наибольшем разведении (107), вновь пересевают на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через 2 суток после второго пассажа изолированные колонии бифидобактерий и лактобактерий пересевают на жидкие среды МРС-4 и Блаурокка для получения биомассы микроорганизмов, которая используется в виде аутоштаммов для лечения дисбактериоза кишечника у конкретного человека, от которого был получен биоматериал.To do this, repeated dilutions of the test sample are carried out with a liquid selective nutrient medium suitable for isolation and cultivation of bifidobacteria and lactobacilli by successive ten-fold dilutions with physiological saline of the test material to 10 -8 . The studied material from various dilutions is seeded on appropriate nutrient media to determine the initial levels of enterobacteria, enterococci, staphylococci, lactobacilli and bifidobacteria. Two days later, the material from isolated colonies of lactobacilli grown on MPC-4 medium in the highest dilution (10 3 ), and from isolated colonies of bifidobacteria grown on medium Blaurock in the highest dilution (10 7 ), are again subcultured to the corresponding selective nutrient media. Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, grown 2 days after the second passage, are subcultured on liquid media MPC-4 and Blaurock to obtain biomass of microorganisms, which is used as auto-strains for the treatment of intestinal dysbiosis from a particular person from whom the biomaterial was obtained.
Недостатком известного способа получения аутоштаммов является то, что популяция бифидо- и лактобактерий выделяется непосредственно из фекалий, где они сосуществуют с большим количеством условно-патогенных микроорганизмов и, как правило, особенно при выраженном дисбиозе кишечника, имеют низкую физиологическую активность (уровень кислотообразования, продукция биомассы). Поэтому при известном способе выделения бифидо- и лактобактерий трудно получить биомассу в достаточном количестве, а также с высоким уровнем кислотообразующей и физиологической активности. Кроме этого, при выделении аутоштаммов в кишечнике, как правило, имеется дисбактериоз, поскольку он обнаруживается у 90% населения (7). При дисбактериозе сайты адгезии (места прикрепления микроорганизмов к слизистой кишечника) заняты условно-патогенными бактериями. Для устранения условно-патогенных бактерий и освобождения рецепторов адгезии для бифидо- и лактобактерий назначаются антибиотики, которые в то же время могут привести к усилению степени выраженности дисбактериоза.A disadvantage of the known method for producing auto-strains is that a population of bifidobacteria and lactobacilli is isolated directly from feces, where they coexist with a large number of opportunistic microorganisms and, as a rule, especially with severe intestinal dysbiosis, have low physiological activity (acid formation, biomass production ) Therefore, with the known method for isolating bifidobacteria and lactobacilli, it is difficult to obtain biomass in sufficient quantities, as well as with a high level of acid-forming and physiological activity. In addition, with the release of auto-strains in the intestine, as a rule, there is dysbiosis, since it is found in 90% of the population (7). In case of dysbiosis, the adhesion sites (the places of attachment of microorganisms to the intestinal mucosa) are occupied by opportunistic bacteria. To eliminate opportunistic bacteria and release adhesion receptors for bifidobacteria and lactobacilli, antibiotics are prescribed, which at the same time can lead to an increase in the severity of dysbiosis.
Для повышения эффективности лечения дисбиозов важным арсеналом являются препараты из бактерий рода Bacillus, обладающие широким спектром антагонистической активности против патогенных и условно-патогенных бактерий и грибов. Они могут заменить антибиотики, не причинив организму никакого вреда (8). Известна также способность бактерий рода Bacillus стимулировать рост и размножение бифидобактерий, а также повышать их физиологическую активность (9).To increase the effectiveness of the treatment of dysbiosis, an important arsenal is preparations from bacteria of the genus Bacillus, which have a wide spectrum of antagonistic activity against pathogenic and conditionally pathogenic bacteria and fungi. They can replace antibiotics without causing any harm to the body (8). The ability of bacteria of the genus Bacillus to stimulate the growth and reproduction of bifidobacteria, as well as increase their physiological activity, is also known (9).
Задачей изобретения является разработка способа получения аутопробиотика, содержащего биомассу живых бифидобактерий и лактобактерий с повышенной физиологической активностью.The objective of the invention is to develop a method for producing autoprobiotic containing biomass of live bifidobacteria and lactobacilli with increased physiological activity.
Поставленная задача достигается в предлагаемом способе получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобактерии с повышенной физиологической активностью, предусматривающем их выделение из фекалий хозяина и использование в виде аутоштаммов для лечения дисбактериозов, при этом после выделения изолированных колоний бифидобактерий и лактобактерий их пересевают на жидкие накопительные питательные среды и вносят биомассу бактерий рода Bacillus в количестве 1×108-1×1010 живых клеток на 1,0 л питательной среды.The problem is achieved in the proposed method for the production of an autoprobiotic containing live bifidobacteria and lactobacilli with increased physiological activity, providing for their isolation from the feces of the host and the use of auto-strains for the treatment of dysbacterioses, while after isolating isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, they are transferred to liquid stocks and add the biomass of bacteria of the genus Bacillus in the amount of 1 × 10 8 -1 × 10 10 living cells per 1.0 l of culture medium.
Сущность изобретения заключается в том, что после выделения изолированных колоний аутоштаммов бифидобактерий и лактобактерий из биологического материала, их пересевали на жидкие среды МРС-4 и Блаурокка и в среды вносили биомассу бактерий рода Bacillus (10) в количестве 1×108-1×1010 живых клеток на 1,0 л среды.The essence of the invention lies in the fact that after isolation of isolated colonies of autostrain of bifidobacteria and lactobacilli from biological material, they were subcultured onto liquid media MPC-4 and Blaurock and the biomass of bacteria of the genus Bacillus (10) in the amount of 1 × 10 8 -1 × 10 10 living cells per 1.0 l of medium.
В отличие от близкого аналога при выращивании биомассы аутоштаммов бифидо- и лактобактерий с целью повышения их физиологической активности в среду выращивания дополнительно вносили биомассу бактерий рода Bacillus, которая выделяла метаболиты, стимулирующие рост и уровень физиологической активности штаммов бифидо- и лактобактерий.In contrast to a close analogue, when growing biomass of autostrains of bifidobacteria and lactobacilli, in order to increase their physiological activity, a biomass of bacteria of the genus Bacillus was added to the growing medium, which isolated metabolites that stimulate the growth and level of physiological activity of strains of bifidobacteria and lactobacilli.
Способ осуществляют следующим образом.The method is as follows.
Пример 1 (по аналогу).Example 1 (by analogy).
Пробу содержимого толстой кишки отбирают в предварительно взвешенную стерильную емкость. Определяют количество отобранной пробы путем повторного взвешивания контейнера. Для декантаминации биоматериала от транзиторной микрофлоры проводят последовательные десятикратные разведения испытуемого образца физиологическим раствором до 10-8.A sample of the contents of the colon is taken in a pre-weighed sterile container. The amount of sample taken is determined by re-weighing the container. For decantation of biomaterial from transient microflora, sequential ten-fold dilutions of the test sample with physiological saline are carried out up to 10 -8 .
Для выделения бифидобактерий готовят 1 ряд из 10 пробирок со средой Блаурокка. Для выделения лактобактерий готовят 7 пробирок со средой МРС-4. Исследуемый материал из разведений 10-6 засевают на соответствующие питательные среды для выделения лактобактерий и бифидобактерий. Через двое суток материал из изолированных колоний лактобактерий, выросших на среде МРС-4 в наибольшем разведении (103), и из изолированных колоний бифидобактерий, выросших на питательной среде Блаурокка в наибольшем разведении (107), вновь пересевают на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через 2 суток после второго пассажа изолированные колонии бифидобактерий и лактобактерий пересевают на жидкие среды МРС-4 и Блаурокка для получения биомассы микроорганизмов, которая используется в виде аутоштаммов для лечения дисбактериоза кишечника.To isolate bifidobacteria, 1 row of 10 tubes with Blaurock medium is prepared. To isolate lactobacilli, 7 tubes with MPC-4 medium are prepared. The studied material from dilutions of 10 -6 is seeded on the appropriate nutrient medium to isolate lactobacilli and bifidobacteria. Two days later, the material from isolated colonies of lactobacilli grown on MPC-4 medium in the highest dilution (10 3 ), and from isolated colonies of bifidobacteria grown on medium Blaurock in the highest dilution (10 7 ), are again subcultured to the corresponding selective nutrient media. Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, grown 2 days after the second passage, are subcultured onto liquid media MPC-4 and Blaurock to obtain biomass of microorganisms, which is used as auto-strains for the treatment of intestinal dysbiosis.
Контроль полученного аутопробиотика осуществляют общепринятыми методами посева на селективные питательные среды: Эндо, Плоскирева, ΜΠΑ для определения посторонней микрофлоры - на этих средах в аэробных условиях рост бактерий отсутствует.The control of the obtained autoprobiotic is carried out by conventional methods of seeding on selective nutrient media: Endo, Ploskireva, ΜΠΑ to determine extraneous microflora - there is no bacterial growth on these media under aerobic conditions.
Оценку количественного содержания бактерий аутоштаммов в биомассе аутопробиотика бифидобактерий проводят на среде Блаурокка и лактобактерий на агаризованной среде МРС-4 (путем подсчета колоний в среде Блаурокка в 10-8, 10-9 разведениях, на агаризованной среде МРС-4 в 10-6, 10-7 разведениях и выражают в КОЕ/ г кишечного содержимого). В биомассе аутопробиотика содержание бифидобактерий составило (1,0-2,4)×109 КОЕ/г, содержание лактобактерий - (1,0-2,5)×107 КОЕ/г. Уровень кислотообразующей активности бифидобактерий составил (104±4) Т° (единиц Тернера).The quantitative content of autostrain bacteria in the biomass of the autoprobiotic of bifidobacteria is assessed on Blaurock and Lactobacilli medium on agar medium MPS-4 (by counting colonies in Blaurock medium in 10 -8 , 10 -9 dilutions, on agarized medium MPC-4 in 10 -6 , 10 -7 dilutions and expressed in CFU / g of intestinal contents). In the autoprobiotic biomass, the content of bifidobacteria was (1.0-2.4) × 10 9 CFU / g, the content of lactobacilli was (1.0-2.5) × 10 7 CFU / g. The level of acid-forming activity of bifidobacteria was (104 ± 4) T ° (Turner units).
Пример 2 (по предлагаемому способу).Example 2 (by the proposed method).
Подготовку биоматериала и выделение изолированных колоний бифидобактерий и лактобактерий ведут, как в примере 1, но при пересеве изолированных колоний бифидо- и лактобактерий на накопительные жидкие питательные среды (МРС-4 и Блаурокка), добавляют биомассу бактерий штамма Bacillus subtilis 3Н (микробная основа препарата - пробиотика «Бактоспорин») в количестве 1×1010 клеток на 1,0 л питательной среды и помещают в термостат при 38°С в течение 48 часов. По истечении указанного времени на поверхности среды образуется пленка из бактерий Bacillus subtilis, под ней, в культуральной жидкости, содержится биомасса бифидобактерий или лактобактерий. С поверхности накопительных сред, содержащих биомассу аутоштаммов бифидо- и лактобактерий, убирают пленку с биомассой бактерий Bacillus subtilis. После этого используют биомассу бифидо- или лактобактерий в качестве аутоштаммов.Preparation of biomaterial and isolation of isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli is carried out, as in example 1, but when reseeding isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli on accumulating liquid nutrient media (MPC-4 and Blaurock), add the biomass of bacteria of the Bacillus subtilis 3H strain (the microbial basis of the drug is probiotic "Bactosporin") in an amount of 1 × 10 10 cells per 1.0 l of culture medium and placed in a thermostat at 38 ° C for 48 hours. After this time, a film of Bacillus subtilis bacteria forms on the surface of the medium, beneath it, in the culture fluid, contains the biomass of bifidobacteria or lactobacilli. A film with the biomass of Bacillus subtilis bacteria is removed from the surface of the storage media containing the biomass of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli. After that, the biomass of bifidobacteria or lactobacilli is used as auto-strains.
Контроль полученного аутопробиотика осуществляют путем посева на селективные питательные среды: Эндо, Плоскирева, ΜΠΑ для определения посторонней микрофлоры. На средах Эндо и Плоскирева в аэробных условиях рост бактерий отсутствует. На среде ΜΠΑ вырастают колонии бактерий Bacillus subtilis. Наличие колоний Bacillus subtilis в аутопробиотике бифидо- или лактобактерий является желательным явлением. Обладая бифидогенной активностью (Патент №2174400, опубл. 10.10.2001) бактерии Bacillus subtilis увеличивают количество биомассы бифидобактерий в накопительной среде, что способствует приживлению и размножению аутоштаммов в кишечнике. Bacillus subtilis, обладая антагонистической активностью, осуществляют декантаминацию посторонней микрофлоры в кишечнике, что также облегчает приживление аутоштаммов.The control of the obtained autoprobiotic is carried out by seeding on selective nutrient media: Endo, Ploskirev, ΜΠΑ to determine extraneous microflora. On Endo and Ploskirev media under aerobic conditions, bacterial growth is absent. Colonies of Bacillus subtilis bacteria grow on medium ΜΠΑ. The presence of Bacillus subtilis colonies in the autoprobiotic of bifidobacteria or lactobacilli is a desirable phenomenon. Having bifidogenic activity (Patent No. 2174400, publ. 10.10.2001), the bacteria Bacillus subtilis increase the amount of biomass of bifidobacteria in the storage medium, which contributes to the healing and reproduction of auto-strains in the intestine. Having antagonistic activity, Bacillus subtilis decantinates extraneous microflora in the intestine, which also facilitates the healing of auto-strains.
Оценку количественного содержания бактерий аутоштаммов в биомассе аутопробиотика бифидобактерий проводили на среде Блаурокка и лактобактерий на среде МРС-4. В биомассе аутопробиотика содержание бифидобактерий составляет (5,0-7,4)×109, содержание лактобактерий - (7,0-9,5)×107. Уровень кислотообразования бифидобактерий составляет (118±3)°Т.The quantitative content of autostrain bacteria in the biomass of the autoprobiotic of bifidobacteria was assessed in Blaurock and Lactobacillus in MPC-4. In the biomass of autoprobiotics, the content of bifidobacteria is (5.0-7.4) × 10 9 , the content of lactobacilli is (7.0-9.5) × 10 7 . The level of acidification of bifidobacteria is (118 ± 3) ° T.
Получение аутоштаммов по примеру №2 позволило повысить количество биомассы бифидо- и лактобактерий в накопительных средах и повысить уровень кислотообразующей активности бифидобактерий по сравнению с примером №1.Obtaining auto-strains according to example No. 2 made it possible to increase the amount of biomass of bifidobacteria and lactobacilli in storage media and to increase the level of acid-forming activity of bifidobacteria in comparison with example No. 1.
Пример 3 (по предлагаемому способу).Example 3 (by the proposed method).
Подготовку биоматериала и выделение изолированных колоний бифидобактерий и лактобактерий ведут, как в примере 1, при пересеве изолированных колоний бифидо- и лактобактерий на накопительные жидкие питательные среды (МРС-4 и Блаурокка), добавляют биомассу бактерий штамма Bacillus subtilis 11B (микробная основа препарата-пробиотика «Витоспорин») в количестве 1×109 клеток на 1,0 л питательной среды и помещают в термостат при 38°С в течение 48 часов. По истечении указанного времени на поверхности среды образуется пленка из бактерий Bacillus subtilis 11В, под ней в культуральной жидкости содержится биомасса бифидобактерий или лактобактерий. С поверхности накопительных сред, содержащих биомассу аутоштаммов бифидо- и лактобактерий, убирают пленку с биомассой бактерий Bacillus subtilis. В биомассе аутопробиотика содержание бифидобактерий составляет (8,5-9,2)×109, содержание лактобактерий - (8,0-10,0)×107. Уровень кислотообразования бифидобактерий составляет (121±3)Т°. После этого используют биомассу бифидо- или лактобактерий в качестве аутоштаммов.The preparation of biomaterial and the isolation of isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli is carried out, as in example 1, when the isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli are reseeded on accumulating liquid nutrient media (MPC-4 and Blaurock), add the biomass of bacteria of the strain Bacillus subtilis 11B (the microbial basis of the probiotic preparation "Vitosporin") in an amount of 1 × 10 9 cells per 1.0 l of culture medium and placed in a thermostat at 38 ° C for 48 hours. After this time, a film of Bacillus subtilis 11B bacteria forms on the surface of the medium, under it in the culture fluid contains the biomass of bifidobacteria or lactobacilli. A film with the biomass of Bacillus subtilis bacteria is removed from the surface of the storage media containing the biomass of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli. In the biomass of autoprobiotics, the content of bifidobacteria is (8.5-9.2) × 10 9 , the content of lactobacilli is (8.0-10.0) × 10 7 . The level of acidification of bifidobacteria is (121 ± 3) T °. After that, the biomass of bifidobacteria or lactobacilli is used as auto-strains.
Пример 4 (по предлагаемому способу).Example 4 (by the proposed method).
Подготовку биоматериала и выделение изолированных колоний бифидобактерий и лактобактерий ведут как в примере 1, при пересеве изолированных колоний бифидо- и лактобактерий на накопительные жидкие питательные среды (МРС-4 и Блаурокка), добавляют биомассу бактерий штамма Bacillus cereus (микробная основа препарата-пробиотика «Бактисубтил») в количестве 1×108 клеток на 1,0 л питательной среды и помещают в термостат при 38°С в течение 48 часов. По истечении указанного времени на поверхности среды образуется пленка из бактерий Bacillus cereus, под ней в культуральной жидкости содержится биомасса бифидобактерий или лактобактерий. С поверхности накопительных сред, содержащих биомассу аутоштаммов бифидо- и лактобактерий, убирают пленку с биомассой бактерий Bacillus subtilis. В биомассе аутопробиотика содержание бифидобактерий составляет (6,0-7,8)×109, содержание лактобактерий - (7,5-9,5)×107. Уровень кислотообразования бифидобактерий составляет (120±3)Т°. После этого используют биомассу бифидо- или лактобактерий в качестве аутоштаммов.The preparation of biomaterial and the isolation of isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli are carried out as in example 1, when the isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli are reseeded on accumulative liquid nutrient media (MPC-4 and Blaurock), add the biomass of bacteria Bacillus cereus strain ") In an amount of 1 × 10 8 cells per 1.0 l of culture medium and placed in a thermostat at 38 ° C for 48 hours. After this time, a film of Bacillus cereus bacteria forms on the surface of the medium, under it in the culture fluid contains the biomass of bifidobacteria or lactobacilli. A film with the biomass of Bacillus subtilis bacteria is removed from the surface of the storage media containing the biomass of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli. In the biomass of autoprobiotics, the content of bifidobacteria is (6.0-7.8) × 10 9 , the content of lactobacilli is (7.5-9.5) × 10 7 . The level of acidification of bifidobacteria is (120 ± 3) T °. After that, the biomass of bifidobacteria or lactobacilli is used as auto-strains.
Внесение биомассы бактерий рода Bacillus в количестве менее 1×108 живых клеток на 1,0 л питательной среды не обеспечивает получение аутопробиотика с высокой физиологической активностью. А внесение биомассы бактерий рода Bacillus в количестве более 1×1010 живых клеток на 1,0 л питательной среды не приводит к дальнейшему росту физиологической активности получаемого аутопробиотика.The introduction of biomass of bacteria of the genus Bacillus in an amount of less than 1 × 10 8 living cells per 1.0 l of culture medium does not provide an autoprobiotic with high physiological activity. And the introduction of the biomass of bacteria of the genus Bacillus in an amount of more than 1 × 10 10 living cells per 1.0 l of culture medium does not lead to a further increase in the physiological activity of the resulting autoprobiotic.
Контроль полученного аутопробиотика по предлагаемому способу с использованием разных штаммов бактерий рода Bacillus осуществляют путем посева на селективные питательные среды: Эндо, Плоскирева, ΜΠΑ для определения посторонней микрофлоры. На средах Эндо и Плоскирева в аэробных условиях рост бактерий отсутствует. На среде ΜΠΑ вырастают колонии бактерий рода Bacillus.The control of the obtained autoprobiotic according to the proposed method using different strains of bacteria of the genus Bacillus is carried out by seeding on selective nutrient media: Endo, Ploskireva, ΜΠΑ to determine extraneous microflora. On Endo and Ploskirev media under aerobic conditions, bacterial growth is absent. Colonies of bacteria of the genus Bacillus grow on medium ΜΠΑ.
В биомассе аутопробиотика, полученному по предложенному способу (пример 2, 3, 4), содержание бифидобактерий составило (5,0-9,2)×109 КОЕ/г, содержание лактобактерий - (7,0-10)×107 КОЕ/г. Уровень кислотообразования бифидобактерий составил 118-121°Т. Данные показатели превышают физиологическую активность аутопробиотика - аналога.In the biomass of autoprobiotics obtained by the proposed method (example 2, 3, 4), the content of bifidobacteria was (5.0-9.2) × 10 9 CFU / g, the content of lactobacilli was (7.0-10) × 10 7 CFU / g The level of acidification of bifidobacteria was 118-121 ° T. These indicators exceed the physiological activity of an autoprobiotic analogue.
Таким образом, предложен способ получения аутопробиотика из естественного микробиоценоза бифидобактерий и лактобацилл толстого кишечника, в котором с целью стимуляции роста и размножения бифидо- и лактобактерий, повышения их физиологическую активности и лучшего приживления в кишечнике аутоштаммов, в накопительные среды биомасс бифидо- и лактобактерий вносят биомассу бактерий рода Bacillus.Thus, a method is proposed for producing an autoprobiotic from a natural microbiocenosis of bifidobacteria and large intestine lactobacilli, in which, with the aim of stimulating the growth and reproduction of bifidobacteria and lactobacilli, increasing their physiological activity and better engraftment of auto-strains in the intestine, bifidobacteria are added to the biomass storage media bacteria of the genus Bacillus.
ЛитератураLiterature
1. Воробьев А.А., Лыкова Е.Л. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Микробиология. 1999, №6. С. 102-105.1. Vorobyov A.A., Lykova E.L. Bacteria of normal microflora: biological properties and protective functions // Microbiology. 1999, No. 6. S. 102-105.
2. Гончарова Г.И. и др. Микробная экология кишечника в норме и при патологии // Антибиотики и химиотерапия, 1989, т. 34, №6. С. 462-465.2. Goncharova G.I. and other Microbial ecology of the intestine is normal and pathological // Antibiotics and chemotherapy, 1989, v. 34, No. 6. S. 462-465.
3. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. М.: Медицина. 1978. С. 94-101.3. A guide to vaccine and serum. M .: Medicine. 1978. S. 94-101.
4. Шендеров Б.А. «Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. /Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокталогии, 1998, №1. С. 61-65.4. Shenderov B.A. “Normal microflora and its role in maintaining human health. / Russian Journal of Gastroenterology, Hepatology, Coloproctology, 1998, No. 1. S. 61-65.
5. Бондаренко А.В. и др. Пути совершенствования этиопатогенетической терапии дисбактериозов // Микробиология. 1998, N 5. С. 96-101.5. Bondarenko A.V. et al. Ways to improve the etiopathogenetic therapy of dysbacteriosis // Microbiology. 1998, N 5. S. 96-101.
6. Коршунов В.М. и др. «Коррекция микрофлоры кишечника при химиотерапевтических дисбактериозах с помощью аутоштаммов бифидобактерий и лактобактерий // ЖМЭИ, 1985, №9. С. 20-25.6. Korshunov V.M. et al. “Correction of intestinal microflora in chemotherapeutic dysbacterioses using auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli // ZhMEI, 1985, No. 9. S. 20-25.
7. Воробьев А.А. и др. Дисбактериозы - актуальная проблема медицины// Вестник РАМН, 1997, №2. С. 4-6.7. Vorobyov A.A. and others. Dysbacteriosis - an urgent problem of medicine // Vestnik RAMS, 1997, No. 2. S. 4-6.
8. Осипова И.Г. и др. Споровые пробиотики // Микробиология, 2002 г., №3. С. 113-119.8. Osipova I.G. and other Spore probiotics // Microbiology, 2002, No. 3. S. 113-119.
9. Нуртдинова А.Н. «Разработка и изучение биологических свойств комплексного препарата - бифидоспорина». Автореферат канд. дис., Уфа, 2003, 22 с. 9. Nurtdinova A.N. "Development and study of the biological properties of the complex drug - bifidosporin." Abstract of Cand. dis., Ufa, 2003, 22 p.
10. Патент РФ №2182172 «Штамм бактерий Bacillus subtilis, обладающий широким спектром антагонистической активности», опубл. 13.10.2002. БИ №29.10. RF patent No. 2182172 "The strain of bacteria Bacillus subtilis with a wide spectrum of antagonistic activity", publ. 10/13/2002. BI No. 29.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015118890/10A RU2580002C1 (en) | 2015-05-19 | 2015-05-19 | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015118890/10A RU2580002C1 (en) | 2015-05-19 | 2015-05-19 | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2580002C1 true RU2580002C1 (en) | 2016-04-10 |
Family
ID=55793840
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015118890/10A RU2580002C1 (en) | 2015-05-19 | 2015-05-19 | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2580002C1 (en) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2675315C1 (en) * | 2018-04-17 | 2018-12-18 | Общество с ограниченной ответственностью Торговый дом "ЭкоФарм сервис" | Method of selective allocation of auto strains of lactobacillus speciales from clinical material |
| RU2727444C1 (en) * | 2019-10-24 | 2020-07-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of isolating and preserving total intestinal microbiota for transplantation |
| RU2734896C2 (en) * | 2018-12-28 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Method for preparing an autoprobiotic based on an anaerobic consortium of bacteria |
| US11123383B2 (en) | 2016-05-25 | 2021-09-21 | Mybiotics Pharma Ltd. | Composition and methods for microbiota therapy |
| RU2771136C1 (en) * | 2021-02-08 | 2022-04-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Микробные нутриенты иммунокорректоры" | Strain of meyerozyma (pichia) guilliermondii (variants), used for producing pre-, pro-, and autoprobiotic agents and products for humans and animals, therapeutic and preventive agent based thereon, and method for production thereof (variants) |
| RU2772351C1 (en) * | 2021-09-18 | 2022-05-19 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Донской государственный технический университет», (ДГТУ) | Method for identifying promising probiotic strains from natural media |
| US11680257B2 (en) | 2015-05-11 | 2023-06-20 | Mybiotics Pharma Ltd. | Systems and methods for growing a biofilm of probiotic bacteria on solid particles for colonization of bacteria in the gut |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139070C1 (en) * | 1999-03-31 | 1999-10-10 | Шендеров Борис Аркадьевич | Method of preparing autoprobiotic containing living bifid bacteria and lactobacilli |
| RU2231271C1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-06-27 | Борисенко Евгений Георгиевич | Method for obtaining of edible biologically active semi-finished product and edible biologically active semi-finished product obtained by method |
| RU2460778C1 (en) * | 2010-12-30 | 2012-09-10 | Александр Николаевич Суворов | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora |
| RU2505304C2 (en) * | 2010-06-22 | 2014-01-27 | Олег Ювенальевич Кузнецов | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
-
2015
- 2015-05-19 RU RU2015118890/10A patent/RU2580002C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139070C1 (en) * | 1999-03-31 | 1999-10-10 | Шендеров Борис Аркадьевич | Method of preparing autoprobiotic containing living bifid bacteria and lactobacilli |
| RU2231271C1 (en) * | 2002-12-17 | 2004-06-27 | Борисенко Евгений Георгиевич | Method for obtaining of edible biologically active semi-finished product and edible biologically active semi-finished product obtained by method |
| RU2505304C2 (en) * | 2010-06-22 | 2014-01-27 | Олег Ювенальевич Кузнецов | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
| RU2460778C1 (en) * | 2010-12-30 | 2012-09-10 | Александр Николаевич Суворов | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11680257B2 (en) | 2015-05-11 | 2023-06-20 | Mybiotics Pharma Ltd. | Systems and methods for growing a biofilm of probiotic bacteria on solid particles for colonization of bacteria in the gut |
| US11123383B2 (en) | 2016-05-25 | 2021-09-21 | Mybiotics Pharma Ltd. | Composition and methods for microbiota therapy |
| US11679136B2 (en) | 2016-05-25 | 2023-06-20 | Mybiotics Pharma Ltd. | Composition and methods for microbiota therapy |
| RU2675315C1 (en) * | 2018-04-17 | 2018-12-18 | Общество с ограниченной ответственностью Торговый дом "ЭкоФарм сервис" | Method of selective allocation of auto strains of lactobacillus speciales from clinical material |
| RU2734896C2 (en) * | 2018-12-28 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Method for preparing an autoprobiotic based on an anaerobic consortium of bacteria |
| RU2727444C1 (en) * | 2019-10-24 | 2020-07-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of isolating and preserving total intestinal microbiota for transplantation |
| RU2771136C1 (en) * | 2021-02-08 | 2022-04-26 | Общество с ограниченной ответственностью "Микробные нутриенты иммунокорректоры" | Strain of meyerozyma (pichia) guilliermondii (variants), used for producing pre-, pro-, and autoprobiotic agents and products for humans and animals, therapeutic and preventive agent based thereon, and method for production thereof (variants) |
| RU2772351C1 (en) * | 2021-09-18 | 2022-05-19 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Донской государственный технический университет», (ДГТУ) | Method for identifying promising probiotic strains from natural media |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2580002C1 (en) | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| CN100378214C (en) | Probiotic bacterium: lactobacillus fermentum | |
| RU2465320C2 (en) | Composition of lactobacillus strains for preparing therapeutic agent | |
| RU2661102C2 (en) | Lactobacillus crispatus strain for treatment or prevention of sexual and urogenital infections, such as vaginosis and candidiasis, and use thereof | |
| US11000558B2 (en) | Vaginal preparations for maintaining and/or restoring healthy female microbiota | |
| RU2738803C2 (en) | Composition and method of treating and preventing intestinal infection and inflammation | |
| CN110577912B (en) | Lactobacillus gasseri and application thereof in preparing fermented milk | |
| RU2460778C1 (en) | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora | |
| RU2667122C2 (en) | Use of thiosulphate in order to potentiate anti-pathogen effect of lactobacillus | |
| CN114806978B (en) | Lactobacillus johnsonii SXDT-23 and application thereof | |
| CN109414463A (en) | The composition and method for treating chronic infectious disease | |
| RU2553372C1 (en) | Method of prevention post-infectious irritable bowel syndrome | |
| SASAKI et al. | Monoassociation with bacteria in the intestines of germfree mice | |
| RU2546253C2 (en) | Method of obtaining personified autoprobiotic product and method of treating syndrome of irritable bowl with thereof application | |
| RU2391395C1 (en) | Lactobacillus fermentum TS3-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES | |
| RU2500411C2 (en) | Method for individual selection of preparations containing probiotic lactic bacterial strains for effective intravaginal therapy | |
| RU2528862C1 (en) | STRAIN Lactobacillus fermentum HAVING BROAD SPECTRUM OF ANTAGONISTIC ACTIVITY AND PROBIOTIC LACTOBACTERIUM CONSORTIUM FOR MANUFACTURING BACTERIAL PREPARATIONS | |
| RU2505304C2 (en) | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| Tareq et al. | An application of Bacteriocin-Producing Vaginal Lactobacillus Crispatus IS30 in A Gel Formula Against Some Vaginal Pathogens | |
| RU2663720C1 (en) | Probiotic based on bacterial strain bacillus subtilis mg-8 vkpm v-12476 and method of application probiotic for prevention of gastrointestinal diseases in agricultural animals and poultry | |
| RU2410031C1 (en) | Method of controlling effectiveness of correcting intestinal microbiocenosis disturbances | |
| RU2639569C1 (en) | Probiotic bacillus megaterium strain - producer of antibacterial substances, immunomodulators and proteolytic enzymes | |
| RU2602696C1 (en) | Method of treating intestinal dysbacteriosis | |
| RU2734896C2 (en) | Method for preparing an autoprobiotic based on an anaerobic consortium of bacteria | |
| Kalinichenko | MODERN ASPECTS OF DEVELOPMENT OF ANTI-STAPHYLOCOCCAL DRUGS OF A NEW GENERATION BASED ON S. AUREUS ADHESINS AND PROBIOTIC STRAINS OF LACTOBACILLI |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180520 |