RU2505304C2 - Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli - Google Patents
Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli Download PDFInfo
- Publication number
- RU2505304C2 RU2505304C2 RU2010125576/15A RU2010125576A RU2505304C2 RU 2505304 C2 RU2505304 C2 RU 2505304C2 RU 2010125576/15 A RU2010125576/15 A RU 2010125576/15A RU 2010125576 A RU2010125576 A RU 2010125576A RU 2505304 C2 RU2505304 C2 RU 2505304C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactic acid
- bifidobacteria
- bifidus bacteria
- lactobacilli
- acid bacilli
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний, связанных с нарушениями состава и функций нормальной микрофлоры человека и животных.The invention relates to medicine, namely to microbiology, and can be used for the treatment and prevention of diseases associated with violations of the composition and functions of the normal microflora of humans and animals.
Микрофлора человека и животных является результирующей совокупностью множества микробиоценозов, занимающих многочисленные экологические ниши на коже и слизистых открытых полостей макроорганизма.The microflora of humans and animals is the resulting combination of many microbiocenoses, occupying numerous ecological niches on the skin and mucous membranes of the open cavities of the macroorganism.
В любом микробиоценозе всегда регистрируются постоянно обитающие виды бактерий (автохтонная, индигенная микрофлора), а также транзиторные, случайные виды (аллохтонная микрофлора). Нормальная микрофлора в организме хозяина выполняет многообразные функции - и одной из них является неспецифическая защита. Кроме того, нормальная микрофлора выступает как постоянный действующий тренер нашей иммунной системы, вызывая активацию специфических факторов защиты. При нарушениях неспецифической и специфической защиты происходит возникновение различных патологических процессов. В ходе данных процессов происходит нарушение в составе нормальных микробиоценозов, закрепление в их структуре патогенных и несвойственных для данных микробиоценозов условно-патогенных микроорганизмов, способных привести макроорганизм к возникновению инфекционной болезни. В перечне заболеваний и патологических состояний, связанных с такими микроэкологическими нарушениями, можно отметить инфекционные и неинфекционные заболевания, в том числе так называемые "болезни цивилизации" (атеросклероз, мочекаменная болезнь, аллергические и онкологические заболевания и др.).In any microbiocenosis, constantly living species of bacteria (autochthonous, indigenous microflora), as well as transient, random species (allochthonous microflora) are always recorded. The normal microflora in the host body performs diverse functions - and one of them is nonspecific protection. In addition, normal microflora acts as a permanent acting trainer of our immune system, causing activation of specific defense factors. With violations of nonspecific and specific protection, various pathological processes occur. In the course of these processes, a disturbance occurs in the composition of normal microbiocenoses, fixing in their structure pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms unusual for these microbiocenoses that can lead the macroorganism to the occurrence of an infectious disease. In the list of diseases and pathological conditions associated with such microecological disorders, one can note infectious and non-infectious diseases, including the so-called "diseases of civilization" (atherosclerosis, urolithiasis, allergic and oncological diseases, etc.).
В настоящее время в арсенале восстановления нарушенного микробиоценоза человека и животных используются разнообразные приемы, прежде всего - это введение в больших количествах в составе пробиотиков (фармакопейных препаратов или продуктов функционального питания) антагонистических штаммов бактерий - представителей нормальной микрофлоры (бифидобактерий, лактобацилл и др.). Эти бактерийные препараты и продукты функционального питания являются достаточно эффективным лечебно-профилактическим средством, но их эффективность в значительной степени ограничена тем, что используемые в их составе в качестве действующего начала штаммы микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры являются привносимыми (пусть даже и в больших количествах) и чужеродными для организма реципиента. Как результат - вносимые штаммы микроорганизмов из состава пробиотиков, не приживаются на слизистых кишечника и транзитом выводятся из организма. В связи с этим для достижения положительных результатов от введения в макроорганизм пробиотических штаммов требуется их довольно длительное и регулярное применение в высоких концентрациях жизнеспособных клеток бактерий (не менее 107 КОЕ бактерий в 1 дозе) (Шендеров Б.А., Манвелова М.А. Патент РФ №2139070, Бюлл. изобр. №28 от 10.10.1999.).Currently, various methods are used in the arsenal of restoring the disturbed microbiocenosis of humans and animals, first of all, this is the introduction of large amounts of probiotics (pharmacopeia drugs or functional food products) of antagonistic bacterial strains that are representatives of the normal microflora (bifidobacteria, lactobacilli, etc.). These bacterial preparations and functional nutrition products are quite effective therapeutic and prophylactic, but their effectiveness is largely limited by the fact that the strains of microorganisms used in their composition as an active principle are representatives of normal microflora and are introduced (even in large quantities) and alien to the recipient's body. As a result, introduced microbial strains from the composition of probiotics do not take root on the intestinal mucosa and are excreted in transit from the body. In this regard, to achieve positive results from the introduction of probiotic strains into the macroorganism, their rather long and regular use in high concentrations of viable bacterial cells (at least 10 7 CFU of bacteria in 1 dose) is required (B. Shenderov, MA Manvelova RF patent No. 2139070, Bull. Image No. 28 from 10.10.1999.).
Известен способ ускорения лечения дисбактериозов кишечника путем введения аутоштаммов бифидобактерий и лактобацилл (Авторское свидетельство СССР N 1286212, A61K 35/74, 30.01.87.).There is a method of accelerating the treatment of intestinal dysbacterioses by the introduction of auto-strains of bifidobacteria and lactobacilli (USSR Author's Certificate N 1286212, A61K 35/74, 01.30.87.).
Аутоштаммы выделяли из фекалий следующим образом: первоначально готовили последовательные десятикратные разведения исследуемого материала до 10-8 физиологическим раствором. Исследуемый материал из различных разведении засевали на соответствующие питательные среды для определения исходных уровней энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, лактобактерий, бифидобактерий. Затем через двое суток материал из изолированных колоний лактобактерий, выросших на среде МРС-4, в наибольшем разведении (103) и из изолированных колоний бифидобактерий, выросших на питательной среде Блаурокка в наибольшем разведении (107), вновь пересевали на соответствующие селективные питательные среды. Выросшие через 2 суток после второго пассажа изолированные колонии бифидобактерий и лактобактерий пересевали на жидкие среды МРС-4 и Блаурокка для получения биомассы микроорганизмов, которая была использована в виде аутоштаммов для лечения дисбактериоза кишечника.Autostrain was isolated from feces as follows: initially ten-fold serial dilutions of the test material were prepared up to 10 -8 with physiological saline. The studied material from various dilutions was seeded on appropriate nutrient media to determine the initial levels of enterobacteria, enterococci, staphylococci, lactobacilli, bifidobacteria. Then, after two days, the material from isolated colonies of lactobacilli grown on MPC-4 medium, in the highest dilution (10 3 ) and from isolated colonies of bifidobacteria, grown on the medium of Blaurock in the highest dilution (10 7 ), were again reseeded to the corresponding selective nutrient media . Isolated colonies of bifidobacteria and lactobacilli, grown 2 days after the second passage, were subcultured onto liquid media MPC-4 and Blaurock to obtain biomass of microorganisms, which was used as auto-strains for the treatment of intestinal dysbiosis.
Недостатками данного способа было использование всего по одному штамму выделенных отдельно бифидобактерий и лактобацилл из всего многообразия видов этих индигенных микроорганизмов (до 5 видов бифидобактерий и более 10 видов лактобацилл). Кроме того, при данном способе выделения аутоштаммов велика вероятность того, что выделенные культуры являются клонами чужеродных для хозяина микроорганизмов, случайно попавших в пищеварительный тракт с пищей и водой, а также возможность случайного отбора среди культур лактобактерий и бифидобактерий не самых активных в антагонистическом отношении штаммов.The disadvantages of this method were the use of only one strain of separately isolated bifidobacteria and lactobacilli from the entire variety of species of these indigenous microorganisms (up to 5 species of bifidobacteria and more than 10 types of lactobacilli). In addition, with this method of isolating auto-strains, it is highly probable that the isolated cultures are clones of microorganisms alien to the host that accidentally enter the digestive tract with food and water, as well as the possibility of random selection among cultures of lactobacilli and bifidobacteria that are not the most antagonistic strains.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является «Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерий и лактобациллы» Шендерова Б.А. и Манвеловой М.А. - Патент РФ №2139070, Бюлл. изобр. №28 от 10.10.1999.Closest to the claimed invention is the "Method of obtaining autoprobiotic containing live bifidobacteria and lactobacilli" B. Shenderova and Manvelova M.A. - RF patent №2139070, Bull. fig. No. 28 dated 10/10/1999.
Предложенный способ позволяет использовать в качестве аутопробиотика полученную биомассу выделенных аутобактерий для восстановления микрофлоры кишечника человека и ценных экземпляров животных и птиц. Аутоштаммы бифидобактерий и лактобацилл выделяют одновременно в виде естественных комплексов кишечника человека и/или животных путем деконтаминации содержимого кишечника от посторонней микрофлоры за счет многократных разведении исследуемого материала жидкой питательной средой, содержащей селективные агенты, пригодной для выделения и культивирования бифидобактерий и лактобацилл, с последующим удалением аллохтонной микрофлоры путем добавления к биоматериалу, разведенному до 10-6, сыворотки крови того же индивидуума, у которого был взят образец кишечного содержимого, последующего его культивирования в течение 48 часов при 38°C и дальнейшего пересева полученной биомассы на жидкие питательные среды для культивирования бифидобактерий и лактобацилл без добавления селективных агентов.The proposed method allows using the obtained biomass of isolated autobacteria as an autoprobiotic to restore the microflora of the human intestine and valuable specimens of animals and birds. Autostrain of bifidobacteria and lactobacilli is isolated simultaneously in the form of natural complexes of the intestines of humans and / or animals by decontamination of intestinal contents from extraneous microflora due to repeated dilution of the test material with a liquid nutrient medium containing selective agents, suitable for isolation and cultivation of bifidobacteria and lactobacillon bacillonilone with microflora by adding to the biomaterial diluted to 10 -6 , the blood serum of the same individual who had a sample of intestinal contents was taken, followed by culturing for 48 hours at 38 ° C and further reseeding the obtained biomass on liquid nutrient media for culturing bifidobacteria and lactobacilli without the addition of selective agents.
Существенным недостатком данного способа является использование сыворотки крови исследуемых индивидуумов для последующего ее применения при выделении совокупного микробиценоза бифидобактерий и лактобацилл. Общеизвестно, что многие люди испытывают сильное стрессовое состояние в ходе процедуры взятия крови из вены. Именно данный факт заставляет их отказаться от выделения бактериальных штаммов аутобиотического препарата (его создания), и, в конечном счете, вообще от его использования в коррекции нарушений микрофлоры своего организма.A significant disadvantage of this method is the use of blood serum of the studied individuals for its subsequent use in isolation of the combined microbiocenosis of bifidobacteria and lactobacilli. It is well known that many people experience severe stress during the procedure for taking blood from a vein. It is this fact that makes them refuse to isolate bacterial strains of the autobiotic drug (its creation), and, ultimately, generally from its use in the correction of disorders of the microflora of their body.
Цель настоящего изобретения - получение аутопробиотика, содержащего комплекс живых бифидобактерий и лактобацилл - представителей индигенной микрофлоры кишечника хозяина, предназначенный для восстановления нарушенной микроэкологии его кишечника.The purpose of the present invention is to obtain an autoprobiotic containing a complex of live bifidobacteria and lactobacilli - representatives of the indigenous intestinal microflora of the host, designed to restore the disturbed microecology of his intestines.
Поставленная цель достигается тем, что бифидобактерий и лактобациллы выделяют одновременно в виде естественных комплексов кишечника человека и/или животных путем деконтаминации содержимого толстого кишечника от посторонней микрофлоры за счет многократных разведении исследуемого материала жидкой питательной средой, пригодной для выделения и культивирования бифидобактерий и лактобацилл, с последующим удалением аллохтонной микрофлоры путем добавления к биоматериалу, разведенному до 10-6, стерильного разведения на физиологическом растворе слюны того же индивидуума, у которого был взят образец кишечного содержимого, последующего его культивирования в течение 48 часов при 38°C и дальнейшего пересева полученной биомассы на жидкие питательные среды для культивирования бифидобактерий и лактобацилл без добавления селективных агентов.This goal is achieved by the fact that bifidobacteria and lactobacilli are isolated simultaneously in the form of natural complexes of the intestines of humans and / or animals by decontamination of the contents of the large intestine from extraneous microflora due to repeated dilution of the test material with a liquid nutrient medium suitable for isolation and cultivation of bifidobacteria and lactobacilli, followed by removing allochthonous microflora by adding a biomaterial, diluted to 10 -6 dilution in sterile physiological p alignment saliva same individual from whom the sample was taken of the intestinal contents, its subsequent culturing for 48 hours at 38 ° C and the further passaging obtained biomass on liquid culture media for the cultivation of bifidobacteria and lactobacilli without the addition of selective agents.
Полученная после культивирования биомасса представляет собой аутопробиотик, содержащий бифидобактерий и лактобациллы, являющиеся истинными представителями индигенной микрофлоры хозяина и он может быть использован как препарат для восстановления и коррекции микроэкологических нарушений кишечника макроорганизма (человека и животных).The biomass obtained after cultivation is an autoprobiotic containing bifidobacteria and lactobacilli, which are true representatives of the indigenous host microflora and can be used as a drug for the restoration and correction of microecological intestinal disorders of a macroorganism (humans and animals).
Способ осуществляют поэтапно следующим образом:The method is carried out in stages as follows:
Этап 1. Пробоподготовка.Stage 1. Sample preparation.
Для получения аутопробиотика необходимо отобрать у одного и того же организма фекалии и слюну. Особенности отбора проб описаны ниже.To obtain an autoprobiotic, feces and saliva must be taken from the same organism. Sampling features are described below.
Взятие материала для последующего выделения аутокультур микроорганизмов из содержимого толстой кишки выполняют от последнего приема пище не менее 8 часов. Накануне исследования необходимо соблюдать диету без употребления в составе пищи раздражающих компонентов (перец, горчица, алкоголь и т.п.), а также других способных повлиять на качественный и количественный состав микробиоценоза кишечника. Проба фекалий отбирается в стерильный контейнер, который до и после отбора взвешивается. Это необходимо знать для последующих расчетов по количественной оценке концентраций микроорганизмов.Taking material for the subsequent isolation of autocultures of microorganisms from the contents of the colon is performed from the last meal for at least 8 hours. On the eve of the study, it is necessary to follow a diet without eating irritating components (pepper, mustard, alcohol, etc.), as well as others that can affect the qualitative and quantitative composition of intestinal microbiocenosis. A feces sample is taken in a sterile container, which is weighed before and after collection. This is necessary to know for subsequent calculations to quantify the concentration of microorganisms.
Слюну забирают утром, через час после еды. Перед забором слюны ротовую полость ополаскивают дистиллированной водой или теплым бледно-розовым раствором перманганата калия, затем через 5-10 минут начинают отбор слюны в чистую пробирку или флакон в объеме 1,0-5,0 мл. Впоследствии весь объем полученной слюны переносят в пробирку с физиологическим раствором в соотношении 1:1 до общего объема до 5 мл, центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин.Saliva is taken in the morning, an hour after eating. Before taking saliva, the oral cavity is rinsed with distilled water or a warm pale pink solution of potassium permanganate, then after 5-10 minutes, saliva is taken into a clean tube or vial in a volume of 1.0-5.0 ml. Subsequently, the entire volume of the obtained saliva is transferred into a test tube with saline in a ratio of 1: 1 to a total volume of up to 5 ml, centrifuged for 10 minutes at 1500 rpm.
После центрифугирования аккуратно, стараясь не взмутить осадок, надосадочную часть отбирают в чистую емкость. Затем выполняют ультрафильтрацию полученного раствора слюны через мелкопористые фильтры с диаметром пор не более 0,22 мкм для получения стерильного раствора слюны.After centrifugation, carefully, trying not to stir up the sediment, the supernatant is taken into a clean container. Then perform the ultrafiltration of the resulting saliva solution through fine-porous filters with a pore diameter of not more than 0.22 μm to obtain a sterile saliva solution.
Этап 2. Деконтаминация биоматериала от транзиторной микрофлоры.Stage 2. Decontamination of biomaterial from transient microflora.
Первоначально делают последовательную десятикратную раститровку исследуемого образца отобранного биоматериала любой жидкой питательной средой, пригодной для выделения и культивирования бифидобактерий и лактобацилл, например МРС или БС-средой, с добавлением селективных агентов.Initially, a ten-fold sequential trituration of the test sample of the selected biomaterial is done with any liquid nutrient medium suitable for isolation and cultivation of bifidobacteria and lactobacilli, for example, MPC or BS medium, with the addition of selective agents.
Готовят два ряда таких разведении с соблюдением правил асептики. Первый ряд состоит из пробирок до разведения 10-9 и он предназначен для оценки общего количественного содержания бифидобактерий и лактобацилл в исходном биоматериале. Второй ряд состоит из пробирок с биоматериалом до разведения 10-6 и он предназначен для получения аутопробиотика.Two rows of such dilutions are prepared in compliance with aseptic rules. The first row consists of tubes before dilution of 10 -9 and it is designed to assess the total quantitative content of bifidobacteria and lactobacilli in the original biomaterial. The second row consists of tubes with biomaterial before dilution of 10 -6 and it is designed to obtain autoprobiotic.
Причины конечного выбора данного титра (10-6) определяются следующим. Установлено, что иммуноглобулины (и, прежде всего IgA) препятствуют адгезии к стенкам кишечника и тем самым способствуют выведению чужеродных микроорганизмов во внешнюю среду. Подтверждением роли IgA в предотвращении колонизации слизистых посторонними микроорганизмами является тот факт, что 99% бактерий - представителей индигенной анаэробной флоры не покрыты секреторными иммуноглобулинами.The reasons for the final choice of this titer (10 -6 ) are determined as follows. It was found that immunoglobulins (and, above all, IgA) inhibit adhesion to the intestinal wall and thereby contribute to the removal of foreign microorganisms into the external environment. Confirmation of the role of IgA in preventing colonization of mucous membranes by foreign microorganisms is the fact that 99% of bacteria - representatives of indigenous anaerobic flora are not covered with secretory immunoglobulins.
В то же время обнаружен феномен иммунологической толерантности к индигенной микрофлоре (Van der Vaaij D. Evidence of imminoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical consequences. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1988, vol. 7.), когда энтеробактерии, энтерококки и другие аэробные бактерии кишечника полностью покрыты IgA. Обнаружено, что слизистые желуд очно-кишечного тракта начинают реагировать на вводимые микроорганизмы синтезом IgA только тогда, когда количество микроорганизмов составляет 106 и более клеток на грамм содержимого тонкой кишки (Lorenz A. Interaction of some species of the gut microflora and their influence on the amount of IgA in the gut lumen of gnotobiotic rats. Abstr. XII Intern. Sympos. Gnotobiology, Honolulu, June 23-28, 1966.).At the same time, the phenomenon of immunological tolerance to indigenous microflora was discovered (Van der Vaaij D. Evidence of imminoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical consequences. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1988, vol. 7. ) when enterobacteria, enterococci and other aerobic bacteria of the intestine are completely coated with IgA. It was found that the mucous membranes of the gastrointestinal tract begin to react to the introduced microorganisms by IgA synthesis only when the number of microorganisms is 10 6 or more cells per gram of the contents of the small intestine (Lorenz A. Interaction of some species of the gut microflora and their influence on the amount of IgA in the gut lumen of gnotobiotic rats. Abstr. XII Intern. Sympos. Gnotobiology, Honolulu, June 23-28, 1966.).
Учитывая этот факт можно считать, что микроорганизмы в концентрациях менее 106 КОЕ/мл являются малозначимыми для оказания воздействия на физиологические изменения в организме данного живого организма.Given this fact, we can assume that microorganisms in concentrations of less than 10 6 CFU / ml are insignificant for influencing the physiological changes in the body of this living organism.
Использование слюны исследуемого макроорганизма в процессе пробоподготовки определяется более высокой концентрацией секреторного иммуноглобулина IgA (115,3-299,7 мг/мл) по сравнению с содержанием его в других биологических жидкостях (сыворотка крови 1,69-5,67 мг/мл, моча 5,2-24,2 мг/мл, слезная жидкость 58,46-93,62, вагинальный секрет 57,87-112,19 мг/мл, программа Медиалог для оценки клинических результатов исследования). (www.medialog.ru, Справочник по иммунотерапии для практического врача. Под ред. Симбирева А.С., изд-во "Диалог" Санкт-Петербург, 2002, 479 с.), а также пониженной биологической опасностью при получении и использовании.The use of saliva of the studied macroorganism in the process of sample preparation is determined by a higher concentration of IgA secretory immunoglobulin (115.3-299.7 mg / ml) compared with its content in other biological fluids (blood serum 1.69-5.67 mg / ml, urine 5.2-24.2 mg / ml, tear fluid 58.46-93.62, vaginal secretion 57.87-112.19 mg / ml, Medialog program for evaluating the clinical results of the study). (www.medialog.ru, Handbook of immunotherapy for a practitioner. Edited by A. Simbirev, Dialog Publishing House St. Petersburg, 2002, 479 pp.), as well as reduced biological hazard in preparation and use.
Этап 3. Деконтаминации биоматериала от чужеродных микроорганизмов и получение аутопробиотика.Stage 3. Decontamination of biomaterial from foreign microorganisms and obtaining autoprobiotic.
В составе микробиоценоза кишечника возможно существование в большом количестве (превышающем разведения 106 КОЕ/г) аллохтонных (транзиторных) микроорганизмов, в том числе и патогенных видов. Для того, чтобы исключить их накопление впоследствии выполняют следующие манипуляции. В пробирку с биоматериалом второго ряда разведения 10-6 добавляют стерильный раствор слюны того же индивидуума, подготовленный согласно пробоподготовке по этапу 1 (добавляемый объем 50% объема исследуемого образца). Полученную пробу перемешивают и помещают на инкубацию при 38°C на 48 часов. Затем пробу вынимают из термостата, определяют количество бифидобактерий, лактобацилл и наличия посторонней микрофлоры, делая контрольные высевы. После проверки при отсутствии посторонней микрофлоры проводят пересев материала (1:10) в жидкую питательную среду для культивирования бифидобактерий и лактобацилл без добавления селективных агентов и культивируют при 38°C в течение 48 часов. Полученная биомасса является аутопробиотиком, содержащим комплекс штаммов бифидобактерий и лактобактерий, характерных для данного индивидуального организма. Контроль за микробным представительством штаммов полученного аутопробиотика осуществляют согласно общепринятом методом посева на различные селективные питательные среды Эндо, Плоскирева, МПА и ТГС для определения посторонней микрофлоры - на этих средах рост в аэробных условиях должен отсутствовать. Для оценки количественного содержания бифидобактерий и лактобацилл в полученном аутопробиотике отдельно делают посевы на среды МРС и бифидум - среду с добавлением соответствующих селективных агентов. Все определения ведут общепринятыми методами. Таким образом, предложен способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерий и лактобациллы на основе естественного комплексного микробиоценоза бифидобактерий и лактобацилл толстой кишки человека и животных. Полученный по данному способу аутопробиотик может быть использован для лечения дисбактериоза и заболеваний, связанных с нарушениями нормальной микрофлоры кишечника у человека, а также ценных экземпляров животных и птиц.As part of the intestinal microbiocenosis, there may be a large number (exceeding 10 6 CFU / g dilution) of allochthonous (transient) microorganisms, including pathogenic species. In order to exclude their accumulation, the following manipulations are subsequently performed. A sterile saliva solution of the same individual prepared according to the sample preparation in step 1 (50% volume of the test sample is added) is added to a test tube with biomaterial of the second row of dilution 10-6 . The resulting sample was stirred and placed on an incubation at 38 ° C for 48 hours. Then the sample is removed from the thermostat, the number of bifidobacteria, lactobacilli and the presence of extraneous microflora is determined, making control seeding. After checking, in the absence of extraneous microflora, the material is transplanted (1:10) into a liquid nutrient medium for the cultivation of bifidobacteria and lactobacilli without the addition of selective agents and cultivated at 38 ° C for 48 hours. The resulting biomass is an autoprobiotic containing a complex of strains of bifidobacteria and lactobacilli, characteristic of this individual organism. The microbial representation of the obtained autoprobiotic strains is controlled according to the generally accepted method of seeding on various selective nutrient media Endo, Ploskirev, MPA and TGS to determine extraneous microflora - growth on aerobic conditions should be absent on these media. To assess the quantitative content of bifidobacteria and lactobacilli in the obtained autoprobiotics, inoculations on MPC and bifidum media are separately done with the addition of appropriate selective agents. All definitions are generally accepted methods. Thus, a method for producing an autoprobiotic containing live bifidobacteria and lactobacilli based on the natural complex microbiocenosis of bifidobacteria and lactobacilli of the colon of humans and animals is proposed. The autoprobiotic obtained by this method can be used to treat dysbiosis and diseases associated with disorders of the normal intestinal microflora in humans, as well as valuable specimens of animals and birds.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010125576/15A RU2505304C2 (en) | 2010-06-22 | 2010-06-22 | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010125576/15A RU2505304C2 (en) | 2010-06-22 | 2010-06-22 | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2010125576A RU2010125576A (en) | 2011-12-27 |
| RU2505304C2 true RU2505304C2 (en) | 2014-01-27 |
Family
ID=45782289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010125576/15A RU2505304C2 (en) | 2010-06-22 | 2010-06-22 | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2505304C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2580002C1 (en) * | 2015-05-19 | 2016-04-10 | Дмитрий Евгеньевич Денисов | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
| RU2734896C2 (en) * | 2018-12-28 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Method for preparing an autoprobiotic based on an anaerobic consortium of bacteria |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139070C1 (en) * | 1999-03-31 | 1999-10-10 | Шендеров Борис Аркадьевич | Method of preparing autoprobiotic containing living bifid bacteria and lactobacilli |
| RU2460778C1 (en) * | 2010-12-30 | 2012-09-10 | Александр Николаевич Суворов | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora |
-
2010
- 2010-06-22 RU RU2010125576/15A patent/RU2505304C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2139070C1 (en) * | 1999-03-31 | 1999-10-10 | Шендеров Борис Аркадьевич | Method of preparing autoprobiotic containing living bifid bacteria and lactobacilli |
| RU2460778C1 (en) * | 2010-12-30 | 2012-09-10 | Александр Николаевич Суворов | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Lorenz A. Interaction of some species of the gut microflora and their influence on the amount of IgA in the gut lumen of gnotobiotic rats. Abstr. XII Intern. Sympos. Gnotobiology, Honolulu, June 23-28, 1966. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2580002C1 (en) * | 2015-05-19 | 2016-04-10 | Дмитрий Евгеньевич Денисов | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli |
| RU2734896C2 (en) * | 2018-12-28 | 2020-10-26 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Method for preparing an autoprobiotic based on an anaerobic consortium of bacteria |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2010125576A (en) | 2011-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Santos Rocha et al. | Anti-inflammatory properties of dairy lactobacilli | |
| Martín et al. | Gnotobiotic rodents: an in vivo model for the study of microbe–microbe interactions | |
| JP6306507B2 (en) | Human-derived bacteria that induce proliferation or accumulation of regulatory T cells | |
| EP0577904B1 (en) | Lactic bacteria | |
| CN102548566B (en) | Lactobacillus plantarum strains as hypocholesterolemic agents | |
| DE60028003T2 (en) | BIFIDOBACTERIUM FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATORY DISEASES | |
| Barba-Vidal et al. | Evaluation of the probiotic strain Bifidobacterium longum subsp. infantis CECT 7210 capacities to improve health status and fight digestive pathogens in a piglet model | |
| Tannock | Probiotics: time for a dose of realism | |
| CN109414464A (en) | For improving the of short duration symbiotic microorganism of intestinal health | |
| BR112012011315A2 (en) | probiotic bifidobacterial strain | |
| US11213553B2 (en) | Hypolipidemic effects of Bacillus coagulans | |
| RU2580002C1 (en) | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| TW202120111A (en) | Compositions and methods for treating autism spectrum disorder | |
| WO2020063531A1 (en) | Lactobacillus paracasei et-22 and use thereof | |
| RU2460778C1 (en) | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora | |
| AL-Saadi | Estimation of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of cell-free extracts of Bifidobacterium species against methicillin-resistant Staphylococcus aureus in vitro | |
| CN116024131A (en) | Lactobacillus plantarum strain GOLDGUT-LP101 and application thereof | |
| CN116121128A (en) | Bifidobacterium animalis subspecies lactis strain GOLDGUT-BB69 and application thereof | |
| RU2553372C1 (en) | Method of prevention post-infectious irritable bowel syndrome | |
| RU2505304C2 (en) | Method for preparing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| RU2139070C1 (en) | Method of preparing autoprobiotic containing living bifid bacteria and lactobacilli | |
| Karime et al. | Lactobacillus rhamnosus sepsis, endocarditis and septic emboli in a patient with ulcerative colitis taking probiotics | |
| RU2546253C2 (en) | Method of obtaining personified autoprobiotic product and method of treating syndrome of irritable bowl with thereof application | |
| JP4308481B2 (en) | Antiallergic agent | |
| Taranto et al. | Animal model for in vivo evaluation of cholesterol reduction by lactic acid bacteria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 3-2014 FOR TAG: (72) |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20131127 |