RU2733431C2 - Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella - Google Patents
Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella Download PDFInfo
- Publication number
- RU2733431C2 RU2733431C2 RU2019100109A RU2019100109A RU2733431C2 RU 2733431 C2 RU2733431 C2 RU 2733431C2 RU 2019100109 A RU2019100109 A RU 2019100109A RU 2019100109 A RU2019100109 A RU 2019100109A RU 2733431 C2 RU2733431 C2 RU 2733431C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- brucella
- test
- nutrient medium
- medium
- inhibitory properties
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/22—Testing for sterility conditions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской, санитарной и ветеринарной микробиологии и может быть использовано при контроле качества питательной среды для выделения бруцелл из контаминированного посторонними микроорганизмами материала. С этой целью на поверхность плотной питательно среды засевают микробные взвеси тест-штаммов Staphylococcus aureus АТСС 25923, Streptococcus faecalis 602 и Proteus vulgaris HX 19 222, с последующим культивированием и учетом результатов посева.The invention relates to medical, sanitary and veterinary microbiology and can be used to control the quality of the nutrient medium for the isolation of brucella from material contaminated with foreign microorganisms. For this purpose, microbial suspensions of the test strains Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus faecalis 602 and Proteus vulgaris HX 19 222 are inoculated on the surface of a dense nutrient medium, followed by cultivation and taking into account the results of inoculation.
Для успешного выделения бруцелл из загрязненных посторонней микрофлорой объектов необходимо выполнение двух условий. Во-первых, среда должна быть высокопитательной, т.к. бруцеллы требовательны к источникам питания и растут медленнее большинства других микроорганизмов. Во-вторых, необходимо максимально подавить рост микробов-ассоциантов, как правило, быстрорастущих. В противном случае питательные вещества будут исчерпаны, кроме того, некоторые представители посторонней микрофлоры обладают антимикробной активностью. В средах для выделения бруцелл в качестве ингибиторов посторонних грамотрицательных микроорганизмов наиболее часто применяются антибиотик полимиксин В и антибактериальное вещество - налидиксовая кислота, грамположительной - антибиотики ванкомицин и бацитрацин, а также красители - генцианвиолет и малахитовый зеленый. Подавление роста микробов-ассоциантов должно проводиться аккуратно, т.к. бруцеллы чувствительны к большинству антимикробных веществ: практически отсутствуют селективные агенты, к которым эти микроорганизмы не были бы чувствительны в той или иной мере. Вышеизложенные обстоятельства обуславливают значимость контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл.For successful isolation of brucella from objects contaminated with foreign microflora, two conditions must be met. First, the environment must be highly nutritious, because Brucella are demanding on food sources and grow slower than most other microorganisms. Secondly, it is necessary to suppress as much as possible the growth of associate microbes, usually fast growing. Otherwise, nutrients will be depleted, in addition, some representatives of foreign microflora have antimicrobial activity. In media for the isolation of brucella, the antibiotic polymyxin B and the antibacterial substance nalidixic acid are most often used as inhibitors of extraneous gram-negative microorganisms, the antibiotics vancomycin and bacitracin, as well as the dyes gentian violet and malachite green, are used in gram-positive media. Suppression of the growth of microbes-associates should be carried out carefully, because Brucella are sensitive to most antimicrobial substances: there are practically no selective agents to which these microorganisms would not be sensitive to one degree or another. The above circumstances determine the importance of controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of brucella.
Известен способ контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл из материала, содержащего сопутствующую микрофлору, с помощью тест-штамма Staphylococcus aureus АТСС 25923 [1]. Основа данной среды включает г/л: пептон - 10,0; мясной экстракт - 5,0; глюкозу - 10,0; натрия хлорид - 5,0; агар микробиологический - 15,0; воду дистиллированную - до 1 л. После регидратации и автоклавирования основы среды в нее вводится селективная добавка, содержащая полимиксин В - 5000 ME; бацитрацин - 25000 ME; циклогексимид - 0,1 г; налидиксовую кислоту -0,005 г; нистатин - 100000 ME; ванкомицин - 0,02 г. A known method of controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of brucella from a material containing an accompanying microflora using the test strain Staphylococcus aureus ATCC 25923 [1]. The basis of this medium includes g / l: peptone - 10.0; meat extract - 5.0; glucose - 10.0; sodium chloride - 5.0; microbiological agar - 15.0; distilled water - up to 1 liter. After rehydration and autoclaving of the base medium, a selective additive containing polymyxin B - 5000 ME is introduced into it; bacitracin - 25,000 ME; cycloheximide - 0.1 g; nalidixic acid -0.005 g; nystatin - 100,000 ME; vancomycin - 0.02 g
При проведении контроля на поверхность питательной среды засевается микробная взвесь тест-штамма стафилококков с последующим культивированием при температуре 37°С. Рост тест-штамма должен отсутствовать.During the control, a microbial suspension of the staphylococcus test strain is inoculated on the surface of the nutrient medium, followed by cultivation at a temperature of 37 ° C. No growth of the test strain should be observed.
Недостатком данного способа является возможность осуществления контроля ингибиции только в отношении ограниченного числа грамположительных микроорганизмов, в средах, содержащих в качестве единственного селективного агента грамположительной микрофлоры бацитрацин. Эффективность подавления большинства видов грамположительных микроорганизмов в средах, включающих другие селективные агенты, а также грамотрицательных микроорганизмов данным способом определить нельзя. Контроль с помощью только одного тест-штамма Staphylococcus aureus АТСС 25923 будет неэффективным и в случае сочетанного применения ингибиторов грамположительной микрофлоры. Так в случае совместного использования бацитрацина с малахитовым зеленым достаточно концентрации последнего 0,00025 г в 1 литре среды при малом содержании и даже полном отсутствии бацитрацина для подавления роста стафилококков. Эффективная концентрация малахитового зеленого, подавляющая рост большинства грамположительных микроорганизмов составляет 0,001 г/л. Аналогичный результат наблюдается при использовании генцианвиолета и ряда других ингибиторов грамположительной микрофлоры. Следует также учесть, что бацитрацин является дефицитным и дорогим антибиотиком, стоимость которого ограничивает его применение даже в терапевтических целях [2]. Вследствие дефицитности и высокой стоимости бацитрацина в питательных средах для выделения бруцелл в Российской Федерации используют другие ингибиторы грамположительной микрофлоры.The disadvantage of this method is the ability to control the inhibition only with respect to a limited number of gram-positive microorganisms, in media containing bacitracin as the only selective agent of gram-positive microflora. The efficiency of suppression of most types of gram-positive microorganisms in media containing other selective agents, as well as gram-negative microorganisms, cannot be determined by this method. Control with only one Staphylococcus aureus ATCC 25923 test strain will be ineffective even in the case of combined use of inhibitors of gram-positive microflora. So in the case of the joint use of bacitracin with malachite green, the concentration of the latter 0.00025 g in 1 liter of medium is sufficient with a low content and even complete absence of bacitracin to suppress the growth of staphylococci. The effective concentration of malachite green, which suppresses the growth of most gram-positive microorganisms, is 0.001 g / l. A similar result is observed when using gentian violet and a number of other inhibitors of gram-positive microflora. It should also be noted that bacitracin is a scarce and expensive antibiotic, the cost of which limits its use even for therapeutic purposes [2]. Due to the scarcity and high cost of bacitracin in nutrient media, other inhibitors of gram-positive microflora are used for the isolation of brucella in the Russian Federation.
Известна методика контроля ингибирующих свойств в отношении бактериальной флоры питательного агара для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза сухого (бруцеллагара), выпускаемого по ТУ 9398-170-78095326-2012 ФГУН ГНЦ ПМБ (Оболенск) и содержащего г/л: панкреатического гидролизата рыбной муки - 7,5; пептона мясного - 7,5; панкреатического гидролизата казеина - 10,0; стимулятора роста гемофильных микроорганизмов - 5,0; дрожжевого экстракта - 3,0; D-глюкозы - 2,0; натрия хлорида - 3,5; тиамина хлорида - 0,005; эритрита - 0,01; натрия пиросерни-стокислого - 0,1; агара микробиологического - 10,0±3,0. Для подавления бактериальной флоры к 1 л бруцеллагара прибавляют селективную добавку, включающую 5 мг полимиксина В. Методика предполагает использование штамма Escherichia coli АТСС 25922, рост которого должен полностью подавляться при посеве на поверхность среды, разлитой в чашки Петри по 0,1 мл микробной взвеси из разведения 10-4 не позднее 48-72 ч инкубации при температуре (37±1)°С [3].A known technique for controlling the inhibitory properties in relation to the bacterial flora of nutrient agar for cultivation and isolation of the causative agent of dry brucellosis (brucellagara), produced according to TU 9398-170-78095326-2012 FGUN GNTs PMB (Obolensk) and containing g / l: pancreatic hydrolyzate of fish meal - 7 ,five; meat peptone - 7.5; pancreatic hydrolyzate of casein - 10.0; a growth stimulator of hemophilic microorganisms - 5.0; yeast extract - 3.0; D-glucose - 2.0; sodium chloride - 3.5; thiamine chloride - 0.005; erythritol - 0.01; sodium pyrosulfuric acid - 0.1; microbiological agar - 10.0 ± 3.0. To suppress the bacterial flora, a selective additive containing 5 mg of polymyxin B is added to 1 liter of brucellar. dilutions 10 -4 no later than 48-72 hours of incubation at a temperature of (37 ± 1) ° С [3].
Однако данная методика не позволяет контролировать подавление грамположительных микроорганизмов и части грамотрицательной микрофлоры, в том числе часто встречающихся во внешней среде микроорганизмов рода Proteus. Контроль ингибирующих свойств среды в отношении микроорганизмов данного рода имеет большую практическую значимость, т.к. во-первых - протеи достаточно широко распространены в объектах внешней среды, в частности они, присутствуют в кишечнике здорового человека и многих животных, обнаруживаются в навозе, почве и загрязненных водах, а во-вторых - на плотных питательных средах многие штаммы протея растут в виде «роения» т.е., в виде сплошной пленки способной распространяться на всю поверхность плотной питательной среды покрывая колонии других микроорганизмов, и делая невозможным выделение чистой культуры.However, this technique does not allow to control the suppression of gram-positive microorganisms and part of the gram-negative microflora, including microorganisms of the genus Proteus that are often found in the external environment. The control of the inhibitory properties of the medium against microorganisms of this genus is of great practical importance, because firstly, proteas are quite widespread in objects of the external environment, in particular, they are present in the intestines of a healthy person and many animals, are found in manure, soil and polluted waters, and secondly, on dense nutrient media, many strains of proteus grow in the form "Swarming" ie, in the form of a continuous film capable of spreading over the entire surface of a dense nutrient medium, covering the colonies of other microorganisms, and making it impossible to isolate a pure culture.
Наиболее близкой к предлагаемому изобретению является процедура контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл, включающей (г/л): питательный бульон для культивирования микроорганизмов - 14,0-16,0; пептон ферментативный - 9,0-11,0; витаминный препарат "ЭКД" - 4,0-6,0; D(+) глюкоза - 0,5-1,5; натрия хлорид - 4,0-6,0; метабисульфит натрия - 0,05-0,15; кристаллический фиолетовый - 0,0005-0,0015; налидиксовая кислота - 0,015-0,025; агар микробиологический - 10,0-12,0 [4]. Процедура предполагает использование тест-штаммов S. aureus 209-Р, Е. coli 168/59, P. vulgaris НХ19 222, рост которых при посеве по 0,1 мл микробных взвесей из разведения 10" на контролируемую среду должен отсутствовать.Closest to the proposed invention is the procedure for controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of Brucella, including (g / l): nutrient broth for the cultivation of microorganisms - 14.0-16.0; enzymatic peptone - 9.0-11.0; vitamin preparation "EKD" - 4.0-6.0; D (+) glucose - 0.5-1.5; sodium chloride - 4.0-6.0; sodium metabisulfite - 0.05-0.15; crystal violet - 0.0005-0.0015; nalidixic acid - 0.015-0.025; microbiological agar - 10.0-12.0 [4]. The procedure involves the use of test strains S. aureus 209-P, E. coli 168/59, P. vulgaris HX19 222, the growth of which when inoculated with 0.1 ml of microbial suspensions from a dilution of 10 "on a controlled environment should be absent.
Следует отметить, что данная процедура более информативна, чем вышеперечисленные способы контроля. Ее недостатком является отсутствие контроля ингибиции грамположительных микроорганизмов большим количеством часто применяемых антимикробных агентов.It should be noted that this procedure is more informative than the above control methods. Its disadvantage is the lack of control over the inhibition of gram-positive microorganisms by a large number of frequently used antimicrobial agents.
Целью изобретения является повышение информативности способа контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл за счет использования тест-штаммов грамположительных микроорганизмов, отличающихся по спектру резистентности к различным антимикробным агентам.The aim of the invention is to increase the information content of the method for controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of brucella through the use of test strains of gram-positive microorganisms differing in the spectrum of resistance to various antimicrobial agents.
Поставленная цель достигается тем, что для контроля ингибирующих свойств среды для выделения бруцелл в отношении бактериальной микрофлоры используются тест-штаммы Staphylococcus aureus АТСС 25923, Streptococcus faecalis 602 и Proteus vulgaris HX 19 222.This goal is achieved by the fact that the test strains Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus faecalis 602 and Proteus vulgaris HX 19 222 are used to control the inhibitory properties of the medium for the isolation of brucella in relation to bacterial microflora.
Предложенный способ заключается в том, что тест-культуры P. vulgaris НХ 19 222, S. aureus АТСС 25923 и S. faecalis 602 выращивают на поверхности скошенного питательного агара при температуре (37±1)°С в течение (22±2) ч. Выросшие культуры тест-штаммов смывают с поверхности скошенных агаров 0,9%-ным раствором натрия хлорида, доводят концентрацию микробных взвесей до 10 единиц по стандартному образцу мутности ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России ОСО 42-28-85П соответствующего года выпуска. Полученную взвесь культуры каждого штамма десятикратными разведениями (4,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида с 0,5 мл микробной взвеси) доводят до разведения 10-4. В процессе разведения перенос взвеси в следующую пробирку производят стерильной пипеткой объемом 1 мл, меняя пипетку для каждого разведения.The proposed method consists in the fact that the test cultures of P. vulgaris HX 19 222, S. aureus ATCC 25923 and S. faecalis 602 are grown on the surface of a slant nutrient agar at a temperature of (37 ± 1) ° C for (22 ± 2) h The grown cultures of the test strains are washed off the surface of the slant agars with 0.9% sodium chloride solution, the concentration of microbial suspensions is adjusted to 10 units according to the standard turbidity sample of the FGBU "SCESMP" of the Ministry of Health of Russia OSO 42-28-85P of the corresponding year of manufacture. The resulting culture suspension of each strain with tenfold dilutions (4.5 ml of 0.9% sodium chloride solution with 0.5 ml of microbial suspension) is brought to a dilution of 10 -4 . In the process of dilution, the suspension is transferred to the next tube using a sterile 1 ml pipette, changing the pipette for each dilution.
По 0,1 мл взвеси каждого тест-штамма из разведения 10-4 высевают на 3 чашки Петри испытываемой среды и равномерно распределяют покачиванием по всей поверхности. Посевы P. vulgaris НХ 19 222, S. aureus АТСС 25923 и S. faecalis 602 инкубируют при температуре (37±1)°С. Учет результатов посевов проводят ежедневно в течение 10 суток инкубации. Рост колоний микроорганизмов должен отсутствовать.0.1 ml of suspension of each test strain from a dilution of 10 -4 is sown on 3 Petri dishes of the test medium and evenly distributed by rocking over the entire surface. Inoculations of P. vulgaris HX 19 222, S. aureus ATCC 25923 and S. faecalis 602 are incubated at a temperature of (37 ± 1) ° C. The results of crops are recorded daily for 10 days of incubation. The growth of colonies of microorganisms should be absent.
Тест-штамм S. faecalis 602, существенно более резистентный к синтетическим красителям и некоторым другим веществам, применяемым для подавления грамположительных микроорганизмов, чем тест-штаммы стафилококков (5, 6). Рост последних прекращается, если концентрация наиболее часто применяемых кристаллического фиолетового, малахитового зеленого составляет 12,5-25% концентрации, ингибирующей рост S. faecalis 602, что не может гарантировать надлежащую ингибицию более устойчивой грамположительной микрофлоры. Так в соответствии с патентом РФ 2266956 содержание кристаллического фиолетового в среде варьируется в пределах от 0,0005 до 0,0015 г/л, а рост S. faecalis 602 ингибируется только при концентрации красителя 0,0025-0,005 г/л.The S. faecalis 602 test strain, which is significantly more resistant to synthetic dyes and some other substances used to suppress gram-positive microorganisms, than the staphylococcal test strains (5, 6). The growth of the latter stops if the concentration of the most commonly used crystal violet, malachite green, is 12.5-25% of the concentration inhibiting the growth of S. faecalis 602, which cannot guarantee proper inhibition of the more stable gram-positive microflora. So, in accordance with RF patent 2266956, the content of crystal violet in the medium varies from 0.0005 to 0.0015 g / l, and the growth of S. faecalis 602 is inhibited only at a dye concentration of 0.0025-0.005 g / l.
Касаясь применения при контроле ингибирующих свойств среды штаммов P. vulgaris НХ 19 222 и Е. coli 168/59 следует принять во внимание различие спектров антимикробного действия полимиксина В и налидиксовой кислоты, наиболее часто применяемых в составе сред для выделения бруцелл. (7, 8). Оба вещества проявляют активность в отношении большинства грамотрицательных бактерий (кишечной палочки, сальмонелл, шигелл, клеб-сиелл, энтеробактера и др.), однако полимиксин В практически не ингибирует микроорганизмы рода Proteus, в то время как налидиксовая кислота весьма интенсивно подавляет рост данных микроорганизмов. При проведении контроля троля с помощью штамма Е. coli АТСС 25922 и оптимальной в среде концентрации полимиксина В недостаточное содержание налидиксовой кислоты может быть не обнаружено.Regarding the use of P. vulgaris HX 19 222 and E. coli 168/59 strains in controlling the inhibitory properties of the medium, one should take into account the difference in the spectra of antimicrobial action of polymyxin B and nalidixic acid, which are most often used in the composition of media for the isolation of brucella. (7, 8). Both substances are active against most gram-negative bacteria (Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Enterobacter, etc.), however, polymyxin B practically does not inhibit microorganisms of the Proteus genus, while nalidixic acid very intensively inhibits the growth of these microorganisms. When carrying out control of trolls using the E. coli ATCC 25922 strain and the optimal concentration of polymyxin B in the medium, insufficient content of nalidixic acid may not be detected.
Из вышесказанного следует, что контроль ингибиции грамотрицательной микрофлоры с помощью штамма кишечной палочки не дает дополнительной информации, избыточен и в то же время ведет к увеличению трудозатрат.From the above, it follows that the control of the inhibition of gram-negative microflora using the E. coli strain does not provide additional information, is redundant and at the same time leads to an increase in labor costs.
Информативность применения предложенного способа контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл, по сравнению с известными, оценивали путем посева по 0,1 мл микробных взвесей из разведения 10-4 тест-штаммов Е. coli 168/59, P. vulgaris ИХ 19 222, S. aureus АТСС 25923 и S. faecalis 602 на чашки Петри со средой культивирования бруцелл следующего состава (г/л): ферментативный гидролизат желатина (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 8,0; ферментативный гидролизат рыбной муки (из расчета содержания в 1 л среды сухих веществ) 4,0; дрожжевой экстракт 2,0; натрий хлористый 5,0; глюкоза 1,0; натрий сернисто-кислый пиро 0,1; агар микробиологический 9,0. В среду культивирования вводили селективную добавку, содержащую 4 антимикробных агента в концентрациях полностью подавляющих рост посторонних микроорганизмов, и добавки, в которых один из агентов отсутствовал или его концентрация была уменьшена.The informative value of using the proposed method for controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of brucella, in comparison with the known ones, was assessed by inoculating 0.1 ml of microbial suspensions from a dilution of 10 -4 test strains of E. coli 168/59, P. vulgaris ИХ 19 222, S. aureus ATCC 25923 and S. faecalis 602 on Petri dishes with brucella culture medium of the following composition (g / l): enzymatic hydrolyzate of gelatin (based on the content of dry substances in 1 liter of medium) 8.0; enzymatic hydrolyzate of fish meal (based on the content of dry substances in 1 liter of medium) 4.0; yeast extract 2.0; sodium chloride 5.0; glucose 1.0; sodium sulphide pyro 0.1; microbiological agar 9.0. A selective additive containing 4 antimicrobial agents in concentrations completely suppressing the growth of foreign microorganisms, and additives in which one of the agents was absent or its concentration was reduced, was introduced into the cultivation medium.
С целью контроля жизнеспособности тест-штаммов применяли питательную среду для культивирования бруцелл без добавления селективных агентов. Для оценки степени ингибиции бруцелл на все среды проводили параллельный посев тест-штамма Brucella abortus 19 В А в дозе 100 микробных клеток на чашку Петри (по 0,1 мл из разведения 10-6). За приемлемый уровень ингибиции бруцелл принимали рост не менее 50% колоний, от числа, выросших на среде без ингибиторов.In order to control the viability of the test strains, a nutrient medium for the cultivation of Brucella was used without the addition of selective agents. To assess the degree of inhibition of brucella on all media, a parallel inoculation of the test strain Brucella abortus 19 B A was carried out at a dose of 100 microbial cells per Petri dish (0.1 ml from a 10 -6 dilution). The growth of at least 50% of the colonies, of the number grown on the medium without inhibitors, was taken as an acceptable level of inhibition of brucella.
Заявляемый способ контроля ингибирующих свойств питательной среды для выделения бруцелл из контаминированного посторонней микрофлорой материала иллюстрируется нижеследующими примерами его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.The inventive method for controlling the inhibitory properties of the nutrient medium for the isolation of brucella from material contaminated with foreign microflora is illustrated by the following examples of its specific implementation using a combination of the claimed features.
Пример 1 (эталон - рецептура, содержащая 4 антимикробных агента).Example 1 (reference is a formulation containing 4 antimicrobial agents).
К 1 л питательной среды для культивирования бруцелл добавляли бацитрацина 3000 ME, малахитового зеленого 0,001 г, полимиксина В 3000 ME, налидиксовой кислоты 0,0025 г. Bacitracin 3000 ME, malachite green 0.001 g, polymyxin B 3000 ME, nalidixic acid 0.0025 g were added to 1 l of the nutrient medium for cultivating brucella.
Пример 2 (исключен бацитрацин).Example 2 (excluded bacitracin).
К 1 л питательной среды для культивирования бруцелл добавляли малахитового зеленого 0,001 г, полимиксина В 3000 ME, налидиксовой кислоты 0,0025 г. Malachite green 0.001 g, polymyxin B 3000 ME, nalidixic acid 0.0025 g were added to 1 l of the nutrient medium for cultivating brucella.
Пример 3 (исключен малахитовый зеленый).Example 3 (Malachite green excluded).
К 1 л питательной среды для культивирования бруцелл добавляли бацитрацина 3000 ME, полимиксина В 3000 ME, налидиксовой кислоты 0,0025 г. Bacitracin 3000 IU, polymyxin B 3000 IU, nalidixic acid 0.0025 g were added to 1 l of the nutrient medium for the cultivation of brucella.
Пример 4 (уменьшено содержание полимиксина В).Example 4 (reduced content of polymyxin B).
К 1 л питательной среды для культивирования бруцелл добавляли бацитрацина 3000 ME, малахитового зеленого 0,001 г, полимиксина В 750 ME, налидиксовой кислоты 0,0025 г. Bacitracin 3000 ME, malachite green 0.001 g, polymyxin B 750 ME, nalidixic acid 0.0025 g were added to 1 l of the nutrient medium for the cultivation of brucella.
Пример 5 (уменьшено содержание налидиксовой кислоты).Example 5 (reduced nalidixic acid content).
К 1 л питательной среды для культивирования бруцелл добавляли бацитрацина 3000 ME, малахитового зеленого 0,001 г, полимиксина В 3000 ME, налидиксовой кислоты 0,000625 г. Bacitracin 3000 ME, malachite green 0.001 g, polymyxin B 3000 ME, nalidixic acid 0.000625 g were added to 1 l of the nutrient medium for the cultivation of brucella.
Полученные в примерах результаты обобщены в табл.1.The results obtained in the examples are summarized in Table 1.
Как видно из таблицы, использование тест-штамма Streptococcus faecalis 602 позволило обнаружить отсутствие в примере №2 бацитрацина, в то время как применение Staphylococcus aureus АТСС 25923 оказалось неэффективным. В то же время последний штамм выявил отсутствие малахитового зеленого (пример №3).As can be seen from the table, the use of the test strain Streptococcus faecalis 602 revealed the absence of bacitracin in example No. 2, while the use of Staphylococcus aureus ATCC 25923 was ineffective. At the same time, the latter strain revealed the absence of malachite green (example No. 3).
Аналогичным образом с помощью тест-штамма P. vulgaris НХ 19 222 выявлена малая концентрация налидиксовой кислоты в примере №5. Контроль тест-штаммом Е. coli АТСС 25922 в данном примере был неинформативным, из-за ингибиции микроорганизмов полимиксином В.Similarly, using the test strain P. vulgaris HX 19 222, a low concentration of nalidixic acid was detected in example No. 5. The control by the test strain E. coli ATCC 25922 in this example was uninformative, due to the inhibition of microorganisms by polymyxin B.
Обнаружить низкое содержание полимиксина В в примере №4 не удалось ни одним из использованных тест-штаммов, т.к. они оба ингибируются налидиксовой кислотой. Данный результат свидетельствует о неэффективности проведения контроля с помощью тест-штамма Е. coli АТССNone of the used test strains were able to detect a low content of polymyxin B in example no. they are both inhibited by nalidixic acid. This result indicates the ineffectiveness of the control using the test strain E. coli ATCC
Таким образом, заявленный способ определения ингибирующих свойств в отношении бактериальной флоры питательного агара для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза по сравнению с известными более информативен, т.к. позволяет обнаружить недостаточное подавление более широкого спектра микроорганизмов, в том числе резистентных к большинству антимикробных агентов грамположительных микроорганизмов.Thus, the claimed method for determining the inhibitory properties against the bacterial flora of nutrient agar for cultivation and isolation of the pathogen of brucellosis is more informative in comparison with the known ones, since allows detecting insufficient suppression of a wider range of microorganisms, including gram-positive microorganisms resistant to most antimicrobial agents.
Его использование позволит улучшить контроль биологических свойств питательной среды для выделения бруцелл из контаминированного материала и тем самым повысить эффективность обнаружения возбудителей бруцеллеза при бактериологических исследованиях.Its use will improve the control of the biological properties of the nutrient medium for the isolation of brucella from contaminated material and thereby increase the efficiency of detection of pathogens of brucellosis in bacteriological studies.
Список используемой литературыBibliography
1. The OXOID Manual, 9th Edition, 2006. P. 2-781. The OXOID Manual, 9th Edition, 2006. P. 2-78
2. Циммерман Я.С. Клиническая гастроэнтерология: избранные разделы. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009, - С. 225.2. Zimmerman Y.S. Clinical gastroenterology: selected sections. -M .: GEOTAR-Media, 2009, - S. 225.
3. Инструкция по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательный агар для культивирования и выделения возбудителя бруцеллеза сухой (Бруцеллагар)» Утверждена Приказом Росздрав-надзора №7031 -Пр/13 от 06.12.2013 г. 3. Instructions for the use of a set of reagents for bacteriological research "Nutrient agar for cultivation and isolation of the causative agent of brucellosis dry (Brucellagar)" Approved by Order of Roszdrav-Nadzor No. 7031-Pr / 13 of 06.12.2013
4. Патент РФ №2266956. Опубл. 27.12.2005, Бюл. №36.4. RF patent No. 2266956. Publ. 27.12.2005, Bul. No. 36.
5. Сычева М.В., Карташева О.Л., Щепитова Н.Е., Сафронов Ал.А. Антибио-тикорезистентность бактерий рода Enterococcus, выделенных из организма человека в норме и при патологии. Антибиотики и химиотерапия. 2016; 61; 7-8: 27-32.5. Sycheva MV, Kartasheva OL, Shchepitova N.Ye., Safronov Al.A. Antibiotic resistance of bacteria of the genus Enterococcus, isolated from the human body in health and disease. Antibiotics and chemotherapy. 2016; 61; 7-8: 27-32.
6. Красная Ю.В., Нестеров А.С., Потатуркина-Нестерова Н.И. Значение бактерий рода Enterococcus в жизнедеятельности человека. Современные проблемы науки и образования. 2014. №6.; [Электронный ресурс] URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=l6620 (дата обращения: 16.10.2018).6. Krasnaya Yu.V., Nesterov A.S., Potaturkina-Nesterova N.I. The importance of bacteria of the genus Enterococcus in human life. Modern problems of science and education. 2014. No. 6 .; [Electronic resource] URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=l6620 (date of access: 16.10.2018).
7. Группа хинолонов/фторхинолонов. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии. Под редакцией Страчунский Л.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. 2007; [Электронный ресурс] URL: http://www.antibiotic.ru/ab/038-42.shtml (дата обращения: 16.10.2018).7. Group of quinolones / fluoroquinolones. A practical guide to anti-infective chemotherapy. Edited by L.S. Strachunsky, Yu.B. Belousov, S.N. Kozlov 2007; [Electronic resource] URL: http://www.antibiotic.ru/ab/038-42.shtml (date of access: 16.10.2018).
8. Щетинин Н.В. Полимиксины новый взгляд на известные антибиотики. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2000, Т. 2. - №3: 68-73.8. Shchetinin N.V. Polymyxins are a new look at known antibiotics. Clinical microbiology and antimicrobial chemotherapy. 2000, T. 2. - No. 3: 68-73.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019100109A RU2733431C2 (en) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019100109A RU2733431C2 (en) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019100109A3 RU2019100109A3 (en) | 2020-07-09 |
| RU2019100109A RU2019100109A (en) | 2020-07-09 |
| RU2733431C2 true RU2733431C2 (en) | 2020-10-01 |
Family
ID=71509314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019100109A RU2733431C2 (en) | 2019-01-09 | 2019-01-09 | Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2733431C2 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2266956C2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-12-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Broth for brucelle isolation |
| RU2415918C2 (en) * | 2009-02-09 | 2011-04-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУЗ "ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ" Роспо | Nutrient medium for brucella l-forms recovery and cultivation |
-
2019
- 2019-01-09 RU RU2019100109A patent/RU2733431C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2266956C2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-12-27 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Broth for brucelle isolation |
| RU2415918C2 (en) * | 2009-02-09 | 2011-04-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУЗ "ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ" Роспо | Nutrient medium for brucella l-forms recovery and cultivation |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BRIDSON E.Y. The oxid manual. 2006, v.9, c.2-78. BRIDSON E.Y. The oxid manual. 2006, v.9, c 118-129. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2019100109A3 (en) | 2020-07-09 |
| RU2019100109A (en) | 2020-07-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109055268B (en) | Composite microecological preparation and application thereof in bee breeding process | |
| US10221440B2 (en) | Method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances | |
| CN114134083B (en) | Bacillus bailii and application thereof | |
| WO2016046706A1 (en) | Probiotic fermented feed additives | |
| CN114437964B (en) | Bacillus belicus strain and application thereof | |
| CN102911901A (en) | Bacillus pumilus strain and application thereof | |
| CN117904007B (en) | Bacillus subtilis strain SKLAN202311D and application thereof | |
| CN116478873B (en) | Bacillus bailii capable of inhibiting growth of various harmful bacteria in intestinal tracts of Min pigs | |
| RU2733431C2 (en) | Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella | |
| CN105104712B (en) | A kind of additive for microbe feedstuff and preparation method thereof | |
| RU2398872C1 (en) | Bacillus licheniformis BACTERIA STRAIN USED FOR MAKING PROBIOTIC SUPPLEMENT FEED USED FOR PRODUCING HIGH-QUALITY FODDER IMPROVING PERFORMANCE AND REDUCING RISK OF GASTROINTESTINAL DISTURBANCES IN ANIMALS, BIRDS AND FISHES | |
| CN117801981A (en) | Screening and application of probiotics lactic acid bacteria for promoting growth of broiler chickens | |
| CN114410514B (en) | Bacillus stereiensis and application thereof | |
| CN113604387B (en) | Salt-tolerant and high-temperature-resistant lactobacillus reuteri and application thereof in prevention and treatment of pathogenic bacteria in livestock and poultry aquaculture | |
| Manguntungi et al. | The profile analysis of lactic acid bacteria (LAB) from Sumbawa white honey and its potential producing antibacterial compounds | |
| TWI729523B (en) | Bacillus amyloliquefaciens and use of the bacillus amyloliquefaciens for manufacturing compositions to inhibit or kill pathogenic bacteria and its metabolites for manufacturing compositions to inhibit or kill pathogenic bacteria | |
| RU2451085C2 (en) | Method for estimating antibacterial activity of aerobic sporous microorganisms bacillus subtilis | |
| CN113528375A (en) | Min swine bacillus subtilis capable of inhibiting growth of various pathogenic bacteria microorganisms | |
| RU2203947C1 (en) | Strain of bacterium bacillus licheniformis used for preparing probiotic preparation designated for prophylaxis and treatment of gastroenteric diseases in animals, poultry and fishes | |
| RU2571852C2 (en) | BACTERIA Enterococcus faecium STRAIN HAVING ANTAGONIST ACTIVITY IN RELATION TO BACTERIA OF Listeria GENUS AND Enterococcus faecalis SPECIES | |
| RU2184774C1 (en) | Strain of bacterium bacillus subtilis used for preparing probiotic preparation designated for prophylaxis and treatment of gastroenteric diseases in animals, poultry and piscine | |
| Rakovskaya et al. | Anti mycoplasmal activity of the concentrate from Trichoderma | |
| RU2756201C1 (en) | Storage nutrient medium for transportation of biomaterial and environmental objects contaminated with foreign microflora to be examined for brucellosis | |
| CN116463248B (en) | Lactic acid bacteria capable of inhibiting growth of water mould and application thereof | |
| Fitriadi et al. | Antibacterial activity of Proteus spp. isolated from the rice-fish farming system cultivation area against A. hydrophila |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210110 |