RU2757428C1 - Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev - Google Patents
Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev Download PDFInfo
- Publication number
- RU2757428C1 RU2757428C1 RU2021101304A RU2021101304A RU2757428C1 RU 2757428 C1 RU2757428 C1 RU 2757428C1 RU 2021101304 A RU2021101304 A RU 2021101304A RU 2021101304 A RU2021101304 A RU 2021101304A RU 2757428 C1 RU2757428 C1 RU 2757428C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pestis
- nutrient medium
- sodium
- vaccine strain
- liquid nutrient
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии, именно к приготовлению микробиологических питательных сред жидких для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV и может быть использовано в получении питательной среды, обеспечивающей высокий процент живых микробных клеток в биомассе.The invention relates to microbiology, namely to the preparation of microbiological nutrient media for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV and can be used to obtain a nutrient medium that provides a high percentage of living microbial cells in the biomass.
Известна питательная среда жидкая, включающая ферментативный гидролизат говяжьего мяса 170,0-190,0 мл, натрий хлористый 3,0-5,0 г, натрий сернистокислый 3,0-5,0 г, натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0-5,0 г, стимулятор Карпузиди 0,01-0,06 г, очищенная вода до 1 л. (Патент РФ №2433170. Опубликовано: 10.11.2011 Бюл. №31).Known nutrient medium liquid, including enzymatic hydrolyzate of beef meat 170.0-190.0 ml, sodium chloride 3.0-5.0 g, sodium sulfate 3.0-5.0 g, sodium phosphate disubstituted 3.0-5, 0 g, Karpuzidi stimulant 0.01-0.06 g, purified water up to 1 liter. (RF patent No. 2433170. Published: 10.11.2011 Bull. No. 31).
Недостатком данной среды является высокая себестоимость сырья.The disadvantage of this environment is the high cost of raw materials.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является питательная среда для культивирования чумного микроба вакцинного штамма EV, включающая в качестве питательной основы ферментативный гидролизат бобов сои 320,0-420,0 мл, натрий хлористый 4,0-6,0 г, натрий фосфорнокислый двузамещенный 3,0-5,0 г, натрий сернистокислый 0,3-0,5 г, липоевую кислоту 0,4-0,6 г, 20% раствор натрия гидроокиси 2,5-3,5 мл, дистиллированную воду до 1 л (патент РФ №2260620. Опубл. 20.09.2005. Бюл. №26).Closest to the proposed invention is a nutrient medium for the cultivation of the plague microbe of the vaccine strain EV, comprising as a nutrient base an enzymatic hydrolyzate of soybeans 320.0-420.0 ml, sodium chloride 4.0-6.0 g, sodium phosphate disubstituted 3, 0-5.0 g, sodium sulfite 0.3-0.5 g, lipoic acid 0.4-0.6 g, 20% sodium hydroxide solution 2.5-3.5 ml, distilled water up to 1 l (patent RF No. 2260620. Publ. 20.09.2005. Bull. No. 26).
Недостатком данной среды является ее многокомпонентность и дефицит сырьевой базы.The disadvantage of this environment is its multicomponent nature and a shortage of raw materials.
Целью изобретения является приготовление питательной среды жидкой для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV, которая обеспечивает высокий процент живых микробных клеток в биомассе через 20 ч.The aim of the invention is to prepare a liquid nutrient medium for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV, which provides a high percentage of living microbial cells in the biomass after 20 hours.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что в качестве основного источника азота при приготовлении среды используется кислотный гидролизат кукурузной патоки, изготовленный из побочного продукта приготовления ферментативного гидролизата кукурузной патоки.The essence of the invention lies in the fact that as the main source of nitrogen in the preparation of the medium is used acid hydrolyzate of corn syrup, made from a by-product of the preparation of enzymatic hydrolyzate of corn syrup.
Технический результат заключается в том, что в состав питательной среды входят натрий хлористый, натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, дистиллированная вода и ростостимулирующие добавки: соль Мора (двойная сернокислая соль железа и аммония) и натрий сернистокислый.The technical result consists in the fact that the composition of the nutrient medium includes sodium chloride, sodium phosphate disubstituted 12-water, distilled water and growth-stimulating additives: Mohr's salt (double sulfate salt of iron and ammonium) and sodium sulfate.
В результате получают биомассу вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV с высоким количеством живых микробных клеток на жидкой питательной среде со следующим соотношением ингредиентов:The result is a biomass of the vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV with a high number of living microbial cells on a liquid nutrient medium with the following ratio of ingredients:
В качестве исходного сырья используют кукурузную патоку жидкую, содержащую около 9,4% белка. Благодаря высокому содержанию в сухом остатке азотистых веществ (до 45%) и углеводов (до 25%), патока является хорошей питательной средой для производства антибиотиков и витаминов. В своем составе она содержит микроэлементы (мг/кг): цинк 22,0, марганец 5,0, медь 5,0, кобальт 0,02, йод 0,30; макроэлементы (%): фосфор 0,25, натрий 0,04, кальций 0,59, калий 0,36, магний 0,12, сера 0,11, хлор 0,04; аминокислоты (%): аргинин 90,0, гистидин 72,0, лейцин 72,0, изолейцин 89,0, фенилаланин 59,0, треонин 95,0, валин 12,7, лизин 0,96, метионин 0,56, триптофан 0,22, метионин + цистин 0,27 и витамины (мг/кг): каротин (витамин А) 8,0, B1 4,0, В2 1,0, В3 (пантотеновая кислота) 6,5, В4 (холин) 400, В5 17, В6 2,9. (М.Ф. Нестерин, И.М. Скурихин. Химический состав пищевых продуктов. Москва. «Пищевая промышленность». 1979. 247 с.).Liquid corn syrup containing about 9.4% protein is used as a raw material. Due to the high content of nitrogenous substances in the dry residue (up to 45%) and carbohydrates (up to 25%), molasses is a good breeding ground for the production of antibiotics and vitamins. In its composition, it contains trace elements (mg / kg): zinc 22.0, manganese 5.0, copper 5.0, cobalt 0.02, iodine 0.30; macronutrients (%): phosphorus 0.25, sodium 0.04, calcium 0.59, potassium 0.36, magnesium 0.12, sulfur 0.11, chlorine 0.04; amino acids (%): arginine 90.0, histidine 72.0, leucine 72.0, isoleucine 89.0, phenylalanine 59.0, threonine 95.0, valine 12.7, lysine 0.96, methionine 0.56, tryptophan 0.22, methionine + cystine 0.27 and vitamins (mg / kg): carotene (vitamin A) 8.0, B1 4.0, B2 1.0, B3 (pantothenic acid) 6.5, B4 (choline ) 400, B5 17, B6 2.9. (MF Nesterin, IM Skurikhin. Chemical composition of food products. Moscow. "Food industry". 1979. 247 p.).
Натрий хлористый (хч), ГОСТ 4233-77. Необходим для поддержания изотоничности среды и окислительно-восстановительного потенциала. Является катализатором химических процессов, происходящих в микробной клетке.Sodium chloride (chemically pure), GOST 4233-77. It is necessary to maintain the isotonicity of the medium and the redox potential. It is a catalyst for chemical processes in the microbial cell.
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный (чда), ГОСТ 4172-76. Используется в качестве источника фосфатов при приготовлении питательных сред для обеспечения буферного действия.Sodium phosphate disubstituted 12-water (analytical grade), GOST 4172-76. Used as a source of phosphates in the preparation of culture media to provide a buffering effect.
Натрий сернистокислый (чда), ГОСТ 195-77. Используется в качестве стимулятора роста микроорганизмов, является источником серы. Регулирует окислительно-восстановительный потенциал среды, увеличивает ее прозрачность.Sodium sulfate (analytical grade), GOST 195-77. It is used as a stimulant for the growth of microorganisms, it is a source of sulfur. Regulates the redox potential of the medium, increases its transparency.
Соль Мора, ГОСТ 4208-72. Двойная сернокислая соль железа и аммония (Fe(NH4)2(SO4)2⋅6H2O), которые в совокупности повышают накопительные свойства питательных сред.Mohr's salt, GOST 4208-72. Double sulfate salt of iron and ammonium (Fe (NH 4 ) 2 (SO 4 ) 2 ⋅6H 2 O), which together increase the storage properties of nutrient media.
Дистиллированная вода, ГОСТ 8-51-232-98. Важнейший компонент всех питательных сред. При отсутствии воды замедляются или полностью прекращаются процессы жизнедеятельности микроорганизмов. Вода составляет 80-90% от клеточной массы микроорганизмов и играет важную роль в их физиологических функциях - входит в состав структурных элементов клетки, служит средой для биохимических реакций, источником кислорода в процессах метаболизма, непосредственно участвует в метаболических реакциях.Distilled water, GOST 8-51-232-98. The most important component of all culture media. In the absence of water, the vital processes of microorganisms slow down or completely stop. Water makes up 80-90% of the cell mass of microorganisms and plays an important role in their physiological functions - it is part of the structural elements of the cell, serves as a medium for biochemical reactions, a source of oxygen in metabolic processes, and directly participates in metabolic reactions.
Приготовление ферментативного гидролизата кукурузной патоки жидкойPreparation of liquid corn syrup enzymatic hydrolyzate
Кукурузную патоку жидкую (ГОСТ 5194-50) в количестве 12,0 кг помещают в варочный котел, добавляют 36,0 л питьевой воды кипятят в течение 15 минут. 40% раствором натрия гидроокиси устанавливают рН 8,2-8,5. Полученный настой охлаждают до 42°С, вносят эмульсию поджелудочной железы крупного рогатого скота (КРС) из расчета 100,0 г на 1 л, добавляют хлороформ до концентрации 1,5%. Гидролиз ведут в термокамере при температуре 42°С в течение 10 сут. В первые 6 ч смесь перемешивают каждые 15 мин по 5 мин, в последующем - по 5 мин каждые 2 ч. Ежедневно измеряют уровень аминного азота. С прекращением нарастания аминного азота - на 7-10 сутки - прекращают перемешивание и убирают в прохладное место. Дают отстояться в течение 2 суток, затем отфильтровывают, разливают по бутылям с добавлением 1% хлороформа от объема, пробкуют стерильными резиновыми пробками и хранят при температуре (4±2)°С.Liquid corn syrup (GOST 5194-50) in an amount of 12.0 kg is placed in a digester, 36.0 liters of drinking water is added and boiled for 15 minutes. The pH is adjusted to 8.2-8.5 with 40% sodium hydroxide solution. The resulting infusion is cooled to 42 ° C, an emulsion of the pancreas of cattle (cattle) is introduced at the rate of 100.0 g per 1 liter, chloroform is added to a concentration of 1.5%. The hydrolysis is carried out in a heat chamber at a temperature of 42 ° C for 10 days. In the first 6 hours, the mixture is stirred every 15 minutes for 5 minutes, then for 5 minutes every 2 hours. The amine nitrogen level is measured daily. With the cessation of the growth of amine nitrogen - on the 7-10th day - the stirring is stopped and removed to a cool place. Allow to settle for 2 days, then filter, pour into bottles with addition of 1% chloroform by volume, cork with sterile rubber stoppers and store at a temperature of (4 ± 2) ° C.
Приготовление кислотного гидролизата кукурузной патоки из осадкаPreparation of acid hydrolyzate of corn syrup from sludge
Ретентант (осадок, оставшийся после фильтрации ферментативного гидролизата кукурузной патоки) в количестве 20,0 кг загружают в варочный котел, добавляют соляную кислоту в разведении 1:1 до установления рН 4,5, кипятят в течение 15 мин. После охлаждения до температуры (42±1)°С переливают в бутыли, остужают и добавляют 1,0% хлороформа от объема. Содержимое тщательно перемешивают, плотно закрывают стерильными резиновыми пробками и хранят при температуре (4±2)°С.The retentant (sediment remaining after filtration of the enzymatic hydrolyzate of corn syrup) in the amount of 20.0 kg is loaded into a digester, hydrochloric acid is added at a dilution of 1: 1 until a pH of 4.5 is established, and boiled for 15 minutes. After cooling to a temperature of (42 ± 1) ° С, pour into bottles, cool and add 1.0% chloroform by volume. The contents are thoroughly mixed, tightly closed with sterile rubber stoppers and stored at a temperature of (4 ± 2) ° C.
Приготовление питательной среды жидкой для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EVPreparation of liquid nutrient medium for submerged cultivation of the vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV
Питательную среду на основе кислотного гидролизата кукурузной патоки для глубинного выращиванияи вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV готовят следующим способом. Кислотный гидролизат разбавляют дистиллированной водой до показаний аминного азота 0,12%. Смешивают 88,0 мл гидролизата, 5,0 г натрия хлористого, 4,0 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного, добавляют дистиллированную воду до 1 литра. Среду кипятят до полного растворения ингредиентов, устанавливают рН 7,2±0,1 с помощью 20% раствора натрия гидроокиси. Вносят стимулирующие добавки: соль Мора 0,04 г и натрий сернистокислый 0,35 г, стерилизуют при температуре (115±1)°С, давлении 1,25-1,3 bar в течение 20 мин. Среду закачивают в биореактор с соблюдением условий асептики и охлаждают до (27±1)°С.A nutrient medium based on acid hydrolyzate of corn syrup for submerged cultivation and a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV is prepared in the following way. The acid hydrolyzate is diluted with distilled water until the amine nitrogen reading is 0.12%. 88.0 ml of hydrolyzate, 5.0 g of sodium chloride, 4.0 g of sodium phosphate disubstituted 12-aqueous are mixed, distilled water is added to 1 liter. The medium is boiled until the ingredients are completely dissolved, the pH is set to 7.2 ± 0.1 using a 20% sodium hydroxide solution. Stimulating additives are introduced: Mohr's salt 0.04 g and sodium sulfite 0.35 g, sterilized at a temperature of (115 ± 1) ° C, a pressure of 1.25-1.3 bar for 20 minutes. The medium is pumped into the bioreactor under aseptic conditions and cooled to (27 ± 1) ° C.
В качестве контроля используют бульон Хоттингера рН 7,1±0,1 приготовленную по ПР 01897080-09-16.As a control, use Hottinger's broth pH 7.1 ± 0.1 prepared according to PR 01897080-09-16.
Ампулу с производственной культурой штамма Y. pestis EV вскрывают с соблюдением правил асептики, восстанавливают 1,8 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Полученной суспензией засевают ряд пробирок со скошенным агаром Хоттингера рН 7,1±0,1 (культура I генерации). Посевы инкубируют при (27±1)°С в течение 48 ч. Культуру I генерации пересевают в матрацы с бульоном Хоттингера рН 7,1±0,1 (культура II генерации). Посевы инкубируют при (27±1)°С. Через 48 ч культурой II генерации засевают бутыли с бульоном Хоттингера рН 7,1±0,1. Выращивают 24 ч при температуре (27±1)°С и непрерывной аэрации в объеме 1,0-1,5 л воздуха на 1 л бульона. Полученную посевную культуру используют для засева биореактора BIOSTAT A (SARTORIUS, Германия) объемом 5 л с автоматической регулировкой мешалки. Посевная доза составляет не менее 20 млн. м.к. на 1 мл питательной среды. Культивируют 16-20 ч при (27±1)°С, непрерывной аэрации, подкормке 40% раствором глюкозы. рН поддерживают на уровне 7,0-7,4. Через 10 ч выращивания и в последующем каждые 2 ч отбирают пробы для определения количества микробных клеток. При наступлении стационарной фазы (прекращение нарастания оптической концентрации взвеси и сохранение рН на одном уровне) процесс культивирования останавливают. В полученной биомассе определяют количество микробных клеток по ОСО мутности 10 единиц соответствующего года выпуска, рН, процент живых микробных клеток.The ampoule with a production culture of the Y. pestis EV strain is opened in compliance with the rules of asepsis, and 1.8 ml of 0.9% sodium chloride solution is restored. The resulting suspension is inoculated with a number of tubes with Hottinger's agar slant pH 7.1 ± 0.1 (culture of the first generation). The inoculations are incubated at (27 ± 1) ° C for 48 hours. The culture of the first generation is subcultured into mattresses with Hottinger's broth pH 7.1 ± 0.1 (culture of the second generation). Crops are incubated at (27 ± 1) ° C. After 48 hours, the culture of the second generation is inoculated into bottles with Hottinger's broth, pH 7.1 ± 0.1. Grow for 24 h at a temperature of (27 ± 1) ° С and continuous aeration in a volume of 1.0-1.5 l of air per 1 l of broth. The resulting seed culture is used for seeding a bioreactor BIOSTAT A (SARTORIUS, Germany) with a volume of 5 liters with automatic stirrer control. The sowing dose is at least 20 million m. per 1 ml of culture medium. Cultivated for 16-20 hours at (27 ± 1) ° C, continuous aeration, feeding with 40% glucose solution. The pH is maintained at 7.0-7.4. After 10 hours of cultivation and then every 2 hours, samples are taken to determine the number of microbial cells. At the onset of the stationary phase (stopping the increase in the optical concentration of the suspension and maintaining the pH at the same level), the cultivation process is stopped. In the resulting biomass, the number of microbial cells is determined by the TOC of turbidity of 10 units of the corresponding year of release, pH, and the percentage of living microbial cells.
Методика подсчета процента живых микробных клетокMethod for calculating the percentage of living microbial cells
Из полученной биомассы делают последовательные десятикратные разведения от 10-1 до 10-8 пипеткой вместимостью 1 мл. Из пробирок с разведениями 10-7 и 10-8 высевают по 0,1 мл взвеси на 2 чашки Петри с питательной средой для контроля жизнеспособности. Через 72 ч инкубации при температуре (27±1)°С подсчитывают количество колоний для каждого образца. За количество живых микробных клеток (БК), содержащихся в 1 мл взвеси одного образца, принимают среднее значение количества живых микробных клеток, полученное из двух разведений. Для этого количество выросших колоний умножают на степень разведения взвеси, из которого производили высев и увеличивают в 10 раз.From the biomass obtained, successive tenfold dilutions from 10 -1 to 10 -8 are made with a pipette with a capacity of 1 ml. From test tubes with dilutions of 10 -7 and 10 -8 , 0.1 ml of suspension is inoculated into 2 Petri dishes with a nutrient medium to control viability. After 72 h of incubation at a temperature of (27 ± 1) ° C, the number of colonies is counted for each sample. For the number of living microbial cells (BC) contained in 1 ml of suspension of one sample, the average value of the number of living microbial cells obtained from two dilutions is taken. To do this, the number of grown colonies is multiplied by the degree of dilution of the suspension from which the sowing was carried out and increased by 10 times.
Методика подсчета процента живых микробных клетокMethod for calculating the percentage of living microbial cells
Количество живых микробных клеток в процентах (% живых м.к.) вычисляют для каждого образца отдельно по формуле:The number of living microbial cells as a percentage (% of live microbial cells) is calculated for each sample separately according to the formula:
где:where:
БК - количество живых м.к. в 1 мл;BC - the number of living m.c. in 1 ml;
ОК - общая концентрация.OK - total concentration.
Возможность практического применения заявляемого способа иллюстрируется примерами его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.The possibility of practical application of the proposed method is illustrated by examples of its specific implementation using the totality of the claimed features.
Пример 1. Штамм выращивали в питательной среде жидкой для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV, содержащей кислотный гидролизат кукурузной патоки 68 мл, натрий хлористый - 4,0 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 3,0 г; дистиллированную воду - до 1 литра и ростостимуляторы - натрий сернистокислый 0,3 г, соль Мора 0,01 г.Example 1. The strain was grown in a liquid nutrient medium for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV, containing acid hydrolyzate of corn syrup 68 ml, sodium chloride - 4.0 g; disubstituted sodium phosphate 12-aqueous - 3.0 g; distilled water - up to 1 liter and growth stimulants - sodium sulfate 0.3 g, Mohr's salt 0.01 g.
При таком соотношении ингредиентов получена биомасса Y. pestis EV со следующими параметрами: 7,2 млрд. м.к./мл, количество живых м. к. через 20 ч 25,8%. Тогда как на контрольной среде (агаре Хоттингера) параметры биомассы Y. pestis EV составили 8,3 млрд. м.к./мл, количество живых микробных клеток через 20 ч 29,9%.With this ratio of ingredients, the biomass of Y. pestis EV was obtained with the following parameters: 7.2 billion mc / ml, the amount of live m. To. 25.8% after 20 h. Whereas on the control medium (Hottinger's agar), the parameters of the biomass of Y. pestis EV were 8.3 billion mc / ml, the number of living microbial cells after 20 h was 29.9%.
Пример 2. Штамм выращивали в питательной среде жидкой для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV, содержащей кислотный гидролизат кукурузной патоки 88 мл, натрий хлористый - 5,0 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 4,0 г; дистиллированную воду - до 1 литра и ростостимуляторы - натрий сернистокислый 0,35 г, соль Мора 0,04 г.Example 2. The strain was grown in a liquid nutrient medium for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV, containing acid hydrolyzate of corn syrup 88 ml, sodium chloride - 5.0 g; disubstituted sodium phosphate 12-aqueous - 4.0 g; distilled water - up to 1 liter and growth stimulants - sodium sulfite 0.35 g, Mohr's salt 0.04 g.
При таком соотношении ингредиентов получена биомасса Y. pestis EV со следующими параметрами: 10,3 млрд. м.к./мл, количество живых м. к. через 20 ч 38,2%. Тогда как на контрольной среде (агаре Хоттингера) параметры биомассы Y. pestis EV составили 8,3 млрд. м.к./мл, количество живых микробных клеток через 20 ч 29,9%.With such a ratio of ingredients, the biomass of Y. pestis EV was obtained with the following parameters: 10.3 billion mc / ml, the amount of live m. After 20 h 38.2%. Whereas on the control medium (Hottinger's agar), the parameters of the biomass of Y. pestis EV were 8.3 billion mc / ml, the number of living microbial cells after 20 h was 29.9%.
Пример 3. Штамм выращивали в питательной среде жидкой для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV, содержащей кислотный гидролизат кукурузной патоки 108 мл, натрий хлористый - 6,0 г; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 5,0 г; дистиллированную воду - до 1 литра и ростостимуляторы - натрий сернистокислый 0,4 г, соль Мора 0,08 г.Example 3. The strain was grown in a liquid nutrient medium for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV, containing acid hydrolyzate of corn syrup 108 ml, sodium chloride - 6.0 g; disubstituted sodium phosphate 12-aqueous - 5.0 g; distilled water - up to 1 liter and growth stimulants - sodium sulfate 0.4 g, Mohr's salt 0.08 g.
При таком соотношении ингредиентов получена биомасса Y. pestis EV со следующими параметрами: 5,7 млрд. м.к./мл, количество живых м. к. через 20 ч 18,4%. Тогда как на контрольной среде (агаре Хоттингера) параметры биомассы Y. pestis EV составили 8,3 млрд. м.к./мл, количество живых микробных клеток через 20 ч 29,9%.With this ratio of ingredients, the biomass of Y. pestis EV was obtained with the following parameters: 5.7 billion m.c. / ml, the amount of live m.c. After 20 h 18.4%. Whereas on the control medium (Hottinger's agar), the parameters of the biomass of Y. pestis EV were 8.3 billion mc / ml, the number of living microbial cells after 20 h was 29.9%.
Таким образом, исходя из ряда проведенных экспериментов, заявленная питательная среда жидкая для глубинного выращивания вакцинного штамма чумного микроба Y. pestis EV (пример 2) обеспечивает накопительный эффект 10,3 млрд м.к./мл с высоким процентом живых микробных клеток - 38,2%.Thus, based on a number of experiments, the declared liquid nutrient medium for deep cultivation of a vaccine strain of the plague microbe Y. pestis EV (example 2) provides a cumulative effect of 10.3 billion m.c / ml with a high percentage of living microbial cells - 38, 2%.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021101304A RU2757428C1 (en) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021101304A RU2757428C1 (en) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2757428C1 true RU2757428C1 (en) | 2021-10-15 |
Family
ID=78286638
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021101304A RU2757428C1 (en) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2757428C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2260620C1 (en) * | 2004-02-16 | 2005-09-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Liquid nutrient medium for culturing plague microorganism of vaccine strain eb |
| RU2433170C1 (en) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb |
-
2021
- 2021-01-21 RU RU2021101304A patent/RU2757428C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2260620C1 (en) * | 2004-02-16 | 2005-09-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Liquid nutrient medium for culturing plague microorganism of vaccine strain eb |
| RU2433170C1 (en) * | 2010-06-21 | 2011-11-10 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ROCHENMACHER M., et al, The nutrition and physiology of P.pestis.l.A chemically defined culture medium for P. pestis, J.Bacteriol.-1952.-Vol.63. -P.788-794. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2764994C2 (en) | New fermentation medium for growth of methanotrophic bacteria and methods for obtaining this medium | |
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| CN104073463A (en) | Serum-free protein-free culture medium supporting CHO (Chinese Hamster Ovary Cell) high density suspension culture | |
| Rouf et al. | An overview of microbial cell culture | |
| CN110982750A (en) | High-density fermentation method for rhodopseudomonas palustris and application of high-density fermentation method | |
| CN109234215B (en) | Lactobacillus rhamnosus low-salt culture medium and culture method | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| CN110205350A (en) | One kind improving vitamin B based on the regulation of ammonia nitrogen index12The method of yield | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2757428C1 (en) | Liquid nutrient medium for deep cultivation of vaccine strain of plague microbe y. pestis ev | |
| CN110241170A (en) | A kind of pure chemistry synthetic proteins peptone water reference culture medium and its preparation method and application | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| RU2352136C2 (en) | Feed additive based on beet pulp and method of producing feed additive through fermentation of beet pulp | |
| RU2720121C1 (en) | Method of producing microbial protein based on hydrocarbon material | |
| RU2708029C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev | |
| RU2785826C1 (en) | Liquid nutrient medium with increased storage properties for obtaining biomass yersinia pestis ev | |
| RU2745504C1 (en) | Liquid nutritional medium for cultivation and discharge of biomass of vaccine strain of plague microbe (yersinia pestis ev) | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| RU2748492C1 (en) | Dense nutrient medium for monitoring the number of live microbial cells of the vaccine strain of the plague microbe y.pestis ev | |
| CN101591616A (en) | A kind of cultural method of beneficial microbe colony | |
| RU2681116C2 (en) | Dense nutrient medium for storage of plague microbe | |
| RU2728217C1 (en) | Liquid nutrient medium for cultivation of vibrio cholerae in matrasses and bottles | |
| RU2333948C2 (en) | Nutritional medium for growing causative agent of tularemia | |
| RU2380409C1 (en) | Nutrient medium for pestilential microbe cultivation | |
| Khayum et al. | A Summary of The Use of Microbial Cell Culture |