RU2723032C2 - Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты - Google Patents
Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты Download PDFInfo
- Publication number
- RU2723032C2 RU2723032C2 RU2017126568A RU2017126568A RU2723032C2 RU 2723032 C2 RU2723032 C2 RU 2723032C2 RU 2017126568 A RU2017126568 A RU 2017126568A RU 2017126568 A RU2017126568 A RU 2017126568A RU 2723032 C2 RU2723032 C2 RU 2723032C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- region
- nucleic acid
- composition
- molecule
- buffer
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 974
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 200
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 200
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 200
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 209
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 126
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 107
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 83
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 81
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 79
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 22
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 21
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 claims description 18
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 18
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 claims description 17
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 14
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 4
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 claims description 3
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 claims description 3
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 claims description 3
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 2
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 63
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 493
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 248
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 185
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 183
- -1 bis (2-acetoxyethyloxy) methyl Chemical group 0.000 description 154
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 127
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 109
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 104
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 76
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 69
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 66
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 64
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 53
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 46
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 44
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 34
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 33
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 32
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 30
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 29
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 29
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 28
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 26
- 239000006171 Britton–Robinson buffer Substances 0.000 description 25
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 25
- 238000013097 stability assessment Methods 0.000 description 24
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 22
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 21
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 21
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 21
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 21
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 20
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 19
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 16
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 16
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 15
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 15
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 14
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 14
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 13
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 13
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 13
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 12
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 12
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 9
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 9
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 9
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 8
- 125000001316 cycloalkyl alkyl group Chemical group 0.000 description 8
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 8
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 8
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 8
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 7
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 7
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 7
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 7
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 7
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 7
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 7
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical group C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 6
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 6
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004183 alkoxy alkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 6
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 6
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 6
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 6
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N triethylammonium acetate Chemical compound CC(O)=O.CCN(CC)CC AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 5
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 5
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 5
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 5
- 125000004397 aminosulfonyl group Chemical group NS(=O)(=O)* 0.000 description 5
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 5
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 5
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 5
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 125000004446 heteroarylalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 4
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 4
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N terephthalic acid group Chemical group C(C1=CC=C(C(=O)O)C=C1)(=O)O KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 4
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 3
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 125000000298 cyclopropenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C1([H])* 0.000 description 3
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 125000004415 heterocyclylalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 108091045440 let-7a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 125000004184 methoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 125000005575 polycyclic aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001637 1-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(*)=C([H])C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 2
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 2
- OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrouracil Chemical class O=C1CCNC(=O)N1 OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 7-[[(2s)-2,6-bis(2-methoxyethoxycarbonylamino)hexanoyl]amino]heptoxy-methylphosphinic acid Chemical compound COCCOC(=O)NCCCC[C@H](NC(=O)OCCOC)C(=O)NCCCCCCCOP(C)(O)=O WLCZTRVUXYALDD-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 2
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 102000015225 Connective Tissue Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010039419 Connective Tissue Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100219978 Mus musculus Ccn2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101000835873 Mus musculus Mothers against decapentaplegic homolog 3 Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N N(6),N(6)-dimethyladenine Chemical compound CN(C)C1=NC=NC2=C1N=CN2 BVIAOQMSVZHOJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 2
- 125000000641 acridinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 2
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005213 alkyl heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 2
- 125000006615 aromatic heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 2
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001047 cyclobutenyl group Chemical group C1(=CCC1)* 0.000 description 2
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000004210 cyclohexylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002433 cyclopentenyl group Chemical group C1(=CCCC1)* 0.000 description 2
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 2
- CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(carboxymethyl)-2-hydroxybutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005745 ethoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004449 heterocyclylalkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004491 isohexyl group Chemical group C(CCC(C)C)* 0.000 description 2
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 2
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001971 neopentyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N nonadecane-1,2,3-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 description 2
- 150000002926 oxygen Chemical class 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005344 pyridylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C(=N1)C([H])([H])* 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002813 thiocarbonyl group Chemical group *C(*)=S 0.000 description 2
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CBOJBBMQJBVCMW-BTVCFUMJSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-amino-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal;hydrochloride Chemical compound Cl.O=C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO CBOJBBMQJBVCMW-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 1
- NAQWICRLNQSPPW-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4-tetrachloronaphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C21 NAQWICRLNQSPPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-triazine Chemical class C1=CN=NC=N1 FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003626 1,2,4-triazol-1-yl group Chemical group [*]N1N=C([H])N=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001305 1,2,4-triazol-3-yl group Chemical group [H]N1N=C([*])N=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001401 1,2,4-triazol-4-yl group Chemical group N=1N=C([H])N([*])C=1[H] 0.000 description 1
- 125000001376 1,2,4-triazolyl group Chemical class N1N=C(N=C1)* 0.000 description 1
- ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydrophenazine Chemical compound C1=CC=C2N=C(C=CCC3)C3=NC2=C1 ZIZMDHZLHJBNSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004509 1,3,4-oxadiazol-2-yl group Chemical group O1C(=NN=C1)* 0.000 description 1
- WZCQRUWWHSTZEM-UHFFFAOYSA-N 1,3-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC(N)=C1 WZCQRUWWHSTZEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 1,4-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=C(N)C=C1 CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CN1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O OHVLMTFVQDZYHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-2-[5-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]ethanone Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)C(CC=1OC(=NN=1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)=O KZEVSDGEBAJOTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-fluorophenyl)methyl]piperazine Chemical compound C1=CC(F)=CC=C1CN1CCNCC1 OOSZCNKVJAVHJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004173 1-benzimidazolyl group Chemical group [H]C1=NC2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N1* 0.000 description 1
- 125000004973 1-butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- 125000006017 1-propenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004214 1-pyrrolidinyl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001462 1-pyrrolyl group Chemical group [*]N1C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- 125000004206 2,2,2-trifluoroethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C(F)(F)F 0.000 description 1
- VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid (2S,3S)-3,4-dimethyl-2-phenylmorpholine Chemical compound OC(C(O)C(O)=O)C(O)=O.C[C@H]1[C@@H](OCCN1C)c1ccccc1 VEPOHXYIFQMVHW-XOZOLZJESA-N 0.000 description 1
- AOTQGWFNFTVXNQ-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)acetic acid Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(CC(=O)O)C3 AOTQGWFNFTVXNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 2-(1h-imidazol-2-yl)-1h-imidazole Chemical compound C1=CNC(C=2NC=CN=2)=N1 AZUHIVLOSAPWDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopropyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(N)CC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 2-[3-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,2,4-oxadiazol-5-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NOC(=N1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 SXAMGRAIZSSWIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-N-(2-oxo-3H-1,3-benzoxazol-6-yl)acetamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)NC1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 JQMFQLVAJGZSQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperidin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 IHCCLXNEEPMSIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C1=NN=C(O1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 YJLUBHOZZTYQIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKRFXNXJOJJPAO-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-3-yl)butanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCN1C(=O)C=CNC1=O VKRFXNXJOJJPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 2-aminopurine Chemical compound NC1=NC=C2N=CNC2=N1 MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWYOAMOZLZXDER-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylcyclopentane-1-carboxylate Chemical compound NC1CCCC1C(O)=O JWYOAMOZLZXDER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004174 2-benzimidazolyl group Chemical group [H]N1C(*)=NC2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 125000004974 2-butenyl group Chemical group C(C=CC)* 0.000 description 1
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000004485 2-pyrrolidinyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000000389 2-pyrrolyl group Chemical group [H]N1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000175 2-thienyl group Chemical group S1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOOMHTFCWOJWFO-UHFFFAOYSA-N 3-aminopyridine-2-carboxylic acid Chemical compound NC1=CC=CN=C1C(O)=O BOOMHTFCWOJWFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004975 3-butenyl group Chemical group C(CC=C)* 0.000 description 1
- 125000003682 3-furyl group Chemical group O1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- KOLPWZCZXAMXKS-UHFFFAOYSA-N 3-methylcytosine Chemical compound CN1C(N)=CC=NC1=O KOLPWZCZXAMXKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPLZGVOSFFCKFC-UHFFFAOYSA-N 3-methyluracil Chemical compound CN1C(=O)C=CNC1=O VPLZGVOSFFCKFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-1h-pyrrole Chemical class [O-][N+](=O)C=1C=CNC=1 LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000004575 3-pyrrolidinyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004364 3-pyrrolinyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])([H])N(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001397 3-pyrrolyl group Chemical group [H]N1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOMKYJPSVWEWPM-UHFFFAOYSA-N 4-(chloromethyl)-2-(4-methylphenyl)-1,3-thiazole Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=NC(CCl)=CS1 MOMKYJPSVWEWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMHSCWJIDIKGNZ-UHFFFAOYSA-N 4-carbamoylbenzoic acid Chemical group NC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 JMHSCWJIDIKGNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000590 4-methylphenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 4-pyren-1-ylbutanoic acid Chemical compound C1=C2C(CCCC(=O)O)=CC=C(C=C3)C2=C2C3=CC=CC2=C1 QXYRRCOJHNZVDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000339 4-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDDQRKBRJSGMQE-UHFFFAOYSA-N 4-thiazolyl Chemical group [C]1=CSC=N1 KDDQRKBRJSGMQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPQLFQWYPPALOX-UHFFFAOYSA-N 5-(2-aminopropyl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC(N)CC1=CNC(=O)NC1=O WPQLFQWYPPALOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMJJOANXHBRGST-UHFFFAOYSA-N 5-(methylamino)-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CNC1=CNC(=S)NC1=O RMJJOANXHBRGST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004539 5-benzimidazolyl group Chemical group N1=CNC2=C1C=CC(=C2)* 0.000 description 1
- KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical class COC1=CNC(=O)NC1=O KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-1h-indole Chemical class [O-][N+](=O)C1=CC=C2NC=CC2=C1 OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWDWFSXUQODZGW-UHFFFAOYSA-N 5-thiazolyl Chemical group [C]1=CN=CS1 CWDWFSXUQODZGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 6-[(5S)-5-[[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]methyl]-2-oxo-1,3-oxazolidin-3-yl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C[C@H]1CN(C(O1)=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 CONKBQPVFMXDOV-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 6-[2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]acetyl]-3H-1,3-benzoxazol-2-one Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)C1=CC2=C(NC(O2)=O)C=C1 DFGKGUXTPFWHIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100294115 Caenorhabditis elegans nhr-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical compound NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- OHOQEZWSNFNUSY-UHFFFAOYSA-N Cy3-bifunctional dye zwitterion Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C2=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(C)(C)C1=CC=CC(C(C1=CC(=CC=C11)S([O-])(=O)=O)(C)C)=[N+]1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O OHOQEZWSNFNUSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026139 DNA damage-inducible transcript 4 protein Human genes 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010012688 Diabetic retinal oedema Diseases 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical group FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 101000912753 Homo sapiens DNA damage-inducible transcript 4 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000879761 Homo sapiens Sarcospan Proteins 0.000 description 1
- 101000836383 Homo sapiens Serpin H1 Proteins 0.000 description 1
- 101500025614 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091007780 MiR-122 Proteins 0.000 description 1
- 108091030146 MiRBase Proteins 0.000 description 1
- 108091027766 Mir-143 Proteins 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 1
- 101100013786 Mus musculus Gapdh gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- IJCKBIINTQEGLY-UHFFFAOYSA-N N(4)-acetylcytosine Chemical compound CC(=O)NC1=CC=NC(=O)N1 IJCKBIINTQEGLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical group NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SYNHCENRCUAUNM-UHFFFAOYSA-N Nitrogen mustard N-oxide hydrochloride Chemical compound Cl.ClCC[N+]([O-])(C)CCCl SYNHCENRCUAUNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 1
- TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N O=P1OCO1 Chemical class O=P1OCO1 TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N Phenazine Natural products C1=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C21 PCNDJXKNXGMECE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010061603 Respiratory syncytial virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100037329 Sarcospan Human genes 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027287 Serpin H1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004902 Softening Agent Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 description 1
- SLINHMUFWFWBMU-UHFFFAOYSA-N Triisopropanolamine Chemical compound CC(O)CN(CC(C)O)CC(C)O SLINHMUFWFWBMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000726445 Viroids Species 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- FKCMADOPPWWGNZ-YUMQZZPRSA-N [(2r)-1-[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]pyrrolidin-2-yl]boronic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1B(O)O FKCMADOPPWWGNZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HVIZDNJSBDBEMN-UHFFFAOYSA-N [Na].[Na].[Na].O.O.O.O Chemical compound [Na].[Na].[Na].O.O.O.O HVIZDNJSBDBEMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003670 adamantan-2-yl group Chemical group [H]C1([H])C(C2([H])[H])([H])C([H])([H])C3([H])C([*])([H])C1([H])C([H])([H])C2([H])C3([H])[H] 0.000 description 1
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003302 alkenyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000278 alkyl amino alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- IYABWNGZIDDRAK-UHFFFAOYSA-N allene Chemical group C=C=C IYABWNGZIDDRAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005336 allyloxy group Chemical group 0.000 description 1
- KDKJYYNXYAZPIK-UHFFFAOYSA-J aluminum potassium disulfate hydrate Chemical compound O.[Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O KDKJYYNXYAZPIK-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 125000000089 arabinosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 125000002102 aryl alkyloxo group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- JRFMZTLWVBLNLM-UHFFFAOYSA-N benzene-1,3-dicarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(C(O)=O)=C1.OC(=O)C1=CC=CC(C(O)=O)=C1 JRFMZTLWVBLNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003785 benzimidazolyl group Chemical group N1=C(NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004618 benzofuryl group Chemical group O1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 125000004196 benzothienyl group Chemical group S1C(=CC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 125000004541 benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNTGVOIBBXFMLR-UHFFFAOYSA-N bicyclo[3.3.1]nonane Chemical compound C1CCC2CCCC1C2 WNTGVOIBBXFMLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 125000000480 butynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L calcium gluconate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000609 carbazolyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 125000000259 cinnolinyl group Chemical group N1=NC(=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000001162 cycloheptenyl group Chemical group C1(=CCCCCC1)* 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000640 cyclooctyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000011190 diabetic macular edema Diseases 0.000 description 1
- 125000004987 dibenzofuryl group Chemical group C1(=CC=CC=2OC3=C(C21)C=CC=C3)* 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006264 diethylaminomethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N(C([H])([H])*)C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000004683 dihydrates Chemical class 0.000 description 1
- LVTYICIALWPMFW-UHFFFAOYSA-N diisopropanolamine Chemical compound CC(O)CNCC(C)O LVTYICIALWPMFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043276 diisopropanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002526 disodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000019262 disodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MQRJBSHKWOFOGF-UHFFFAOYSA-L disodium;carbonate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O MQRJBSHKWOFOGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 125000005448 ethoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Chemical group 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001911 glucosamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229960004275 glycolic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229920000140 heteropolymer Polymers 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- YAMHXTCMCPHKLN-UHFFFAOYSA-N imidazolidin-2-one Chemical compound O=C1NCCN1 YAMHXTCMCPHKLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003949 imides Chemical group 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000904 isoindolyl group Chemical group C=1(NC=C2C=CC=CC12)* 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005956 isoquinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001786 isothiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940098262 kynamro Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 108091023663 let-7 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091063478 let-7-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049777 let-7-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940092110 macugen Drugs 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L magnesium;(2s)-2-amino-4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [H+].[H+].[Mg+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O.[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- DJLUSNAYRNFVSM-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-5-yl)acetate Chemical compound COC(=O)CC1=CNC(=O)NC1=O DJLUSNAYRNFVSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGRUIWRQODIJRI-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(4-oxo-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-5-yl)acetate Chemical compound COC(=O)CC1=CNC(=S)NC1=O DGRUIWRQODIJRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091051828 miR-122 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091029379 miR-139 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060283 mipomersen Proteins 0.000 description 1
- OSGPYAHSKOGBFY-KMHHXCEHSA-A mipomersen sodium Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].N1([C@H]2C[C@@H]([C@H](O2)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=O)S[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP([O-])(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP([O-])(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP([O-])(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP([O-])(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2COP([O-])(=O)S[C@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]2CO)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP([O-])(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP([O-])(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP([O-])(=O)OC[C@H]2O[C@H](C[C@@H]2SP([O-])(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H]([C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OCCOC)SP([O-])(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP([O-])(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OCCOC)SP([O-])(=O)OC[C@H]2[C@@H]([C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)SP([O-])(=O)OC[C@H]2[C@H](O)[C@@H]([C@H](O2)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)OCCOC)N2C(N=C(N)C(C)=C2)=O)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)C=C(C)C(N)=NC1=O OSGPYAHSKOGBFY-KMHHXCEHSA-A 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- VRVKOZSIJXBAJG-TYYBGVCCSA-M monosodium fumarate Chemical compound [Na+].OC(=O)\C=C\C([O-])=O VRVKOZSIJXBAJG-TYYBGVCCSA-M 0.000 description 1
- 125000004312 morpholin-2-yl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])OC([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004572 morpholin-3-yl group Chemical group N1C(COCC1)* 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- XJVXMWNLQRTRGH-UHFFFAOYSA-N n-(3-methylbut-3-enyl)-2-methylsulfanyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CSC1=NC(NCCC(C)=C)=C2NC=NC2=N1 XJVXMWNLQRTRGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZQMZXGTZAPBAK-UHFFFAOYSA-N n-(3-methylbutyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(C)CCNC1=NC=NC2=C1NC=N2 FZQMZXGTZAPBAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006606 n-butoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000017570 negative regulation of blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229960003407 pegaptanib Drugs 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 125000004934 phenanthridinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC=C3C=CC=CC3=C12)* 0.000 description 1
- 125000001791 phenazinyl group Chemical group C1(=CC=CC2=NC3=CC=CC=C3N=C12)* 0.000 description 1
- 125000001484 phenothiazinyl group Chemical group C1(=CC=CC=2SC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- GJSGGHOYGKMUPT-UHFFFAOYSA-N phenoxathiine Chemical compound C1=CC=C2OC3=CC=CC=C3SC2=C1 GJSGGHOYGKMUPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004592 phthalazinyl group Chemical group C1(=NN=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- ZFACJPAPCXRZMQ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O.OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O ZFACJPAPCXRZMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- IWELDVXSEVIIGI-UHFFFAOYSA-N piperazin-2-one Chemical compound O=C1CNCCN1 IWELDVXSEVIIGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N piperidin-2-one Chemical compound O=C1CCCCN1 XUWHAWMETYGRKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003053 piperidines Chemical class 0.000 description 1
- 125000005936 piperidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004109 potassium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- KVMLCRQYXDYXDX-UHFFFAOYSA-M potassium;chloride;hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].[K+] KVMLCRQYXDYXDX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001844 prenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001042 pteridinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=NC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000004307 pyrazin-2-yl group Chemical group [H]C1=C([H])N=C(*)C([H])=N1 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002206 pyridazin-3-yl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)N=N1 0.000 description 1
- 125000004940 pyridazin-4-yl group Chemical group N1=NC=C(C=C1)* 0.000 description 1
- 125000002098 pyridazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical class OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000246 pyrimidin-2-yl group Chemical group [H]C1=NC(*)=NC([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000004528 pyrimidin-5-yl group Chemical group N1=CN=CC(=C1)* 0.000 description 1
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002294 quinazolinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N selenophosphoric acid Chemical class OP(O)([SeH])=O JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 125000004469 siloxy group Chemical group [SiH3]O* 0.000 description 1
- HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940074545 sodium dihydrogen phosphate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940083608 sodium hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 235000019983 sodium metaphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- DGPIGKCOQYBCJH-UHFFFAOYSA-M sodium;acetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].CC([O-])=O DGPIGKCOQYBCJH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940032330 sulfuric acid Drugs 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- MHSKRLJMQQNJNC-UHFFFAOYSA-N terephthalamide Chemical group NC(=O)C1=CC=C(C(N)=O)C=C1 MHSKRLJMQQNJNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWPWUVNMFVVHHE-UHFFFAOYSA-N terephthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1.OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ZWPWUVNMFVVHHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N tert-butyl(dimethyl)silicon Chemical compound C[Si](C)C(C)(C)C ILMRJRBKQSSXGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 125000003718 tetrahydrofuranyl group Chemical group 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDVLCTOFEIEUDH-UHFFFAOYSA-K tetrasodium;phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O CDVLCTOFEIEUDH-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- WYXIGTJNYDDFFH-UHFFFAOYSA-Q triazanium;borate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]B([O-])[O-] WYXIGTJNYDDFFH-UHFFFAOYSA-Q 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000876 trifluoromethoxy group Chemical group FC(F)(F)O* 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004418 trolamine Drugs 0.000 description 1
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3519—Fusion with another nucleic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к стабильной композиции нуклеиновой кислоты. Изобретение позволяет стабильно сохранять нуклеиновую кислоту в качестве активного ингредиента в форме раствора в интервале pH от 4 до 11 при температуре окружающей среды в течение длительного срока. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 16 табл., 7 пр. , 23 ил.
Description
Область техники
[0001]
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты, обладающую биологической активностью, например, молекулу нуклеиновой кислоты, которая контролирует экспрессию гена-мишени или функцию белка-мишени, которая представляет новую композицию, в частности, фармацевтическую композицию, обеспечивающую улучшенную стабильность молекулы нуклеиновой кислоты, и также к способу ее получения и способу стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в жидкой композиции.
Уровень техники
[0002]
Известны короткие молекулы нуклеиновой кислоты, обладающие биологической активностью, такие как антисмысловая нуклеиновая кислота, siРНК, shРНК, микроРНК (миRNA), нуклеиновая кислота-ловушка, рибозим, аптамер и т.п., и продолжается разработка фармацевтических продуктов, с их использованием (например, патентные документы 1-3).
Поскольку данные нуклеиновые кислоты склонны к разложению в растворах и нестабильны, то манипулирование с ними при температуре окружающей среды является чрезвычайно сложным. Таким образом, обычно применяют лиофилизацию и способ, включающий добавление 50% этанола в буфер Трис-ЭДТА (TЭ), и хранение без замораживания при -20°С.
Список документов
Патентные документы
[0003]
патентный документ 1: JP-B-2708960
патентный документ 2: JP-B-3626503
патентный документ 3: патент США № 7511131
Сущность изобретения
Проблемы, решаемые изобретением
[0004]
В таких обстоятельствах требуется разработка стабильного препарата нуклеиновой кислоты, с которым легко манипулировать, и способного стабильно сохранять нуклеиновую кислоту в качестве активного ингредиента при температуре окружающей среды.
Проблема настоящего изобретения заключается в обеспечении фармацевтической композиции, содержащей нуклеиновую кислоту в качестве активного ингредиента, которая представляет новую фармацевтическую композицию с улучшенной стабильностью активного ингредиента, и способа ее получения.
Способы решения проблем
Заявители настоящего изобретения провели интенсивные исследования в попытке решить вышеуказанную проблему и установили, что стабильность нуклеиновой кислоты можно существенно и неожиданно повысить с использованием буфера, способного доводить значение рН раствора молекулы нуклеиновой кислоты для попадания в определенный диапазон, что привело к завершению настоящего изобретения.
Следовательно, настоящее изобретение представляет следующее.
[1] Композиция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты и буфер и имеющая следующие признаки:
(а) находится в форме раствора при температуре окружающей среды; и
(b) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°С, 60% относительной влажности в течение 4 недель, составляет не ниже 80% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
[2] Композиция по п. [1], где содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 40°С, 75% относительной влажности в течение 4 недель составляет не ниже 80% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
[3] Композиция по пп. [1] или [2], где содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 60°С в течение 4 недель составляет не ниже 60% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
[4] Композиция по любому из пп. [1]-[3], где буфер доводит рН композиции до значения не ниже 4,0 и не выше 9,0.
[5] Композиция по любому из пп. [1]-[3], где буфер доводит рН композиции до значения не ниже 5,5 и не выше 7,5.
[6] Композиция по любому из пп. [1]-[3], где буфер доводит рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0.
[7] Композиция по любому из пп. [1]-[6], где буфер содержит один или более буферных агентов, выбранных из гидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, динатрия гидрофосфата, хлорида натрия, аргинина гидрохлорида, цитрата натрия, тринатрия цитрата дигидрата, L-глутамата мононатрия, ацетата натрия, карбоната натрия, гидрокарбоната натрия, лактата натрия, фосфата монокалия, гидроксида натрия, меглюмина, глицина, лимонной кислоты и уксусной кислоты.
[8] Композиция по любому из пп. [1]-[7], где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
[9] Композиция по любому из пп. [1]-[8], где вышеуказанная молекула нуклеиновой кислоты представляет молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты или молекулу двухцепочечной нуклеиновой кислоты.
[10] Композиция по любому из пп. [1]-[9], где вышеуказанная молекула нуклеиновой кислоты представляет молекулу ДНК, молекулу РНК или молекулу химерной нуклеиновой кислоты ДНК и РНК.
[11] Композиция по любому из пп. [1]-[10], где число нуклеотидов в вышеуказанной молекуле нуклеиновой кислоты составляет 10-300.
[12] Композиция по любому из пп. [1]-[11], где вышеуказанная молекула нуклеиновой кислоты включает последовательность, которая контролирует экспрессию гена-мишени или функцию белка-мишени.
[13] Композиция по любому из пп. [1]-[11], содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, включающую последовательность, которая контролирует экспрессию гена-мишени.
[14] Композиция по любому из пп. [1]-[13], где вышеуказанная молекула нуклеиновой кислоты представляет антисмысловую нуклеиновую кислоту, siРНК или shРНК, миРНК, рибозим, нуклеиновую кислоту-ловушку или аптамер.
[15] Композиция по любому из пп. [1]-[14], которая представляет фармацевтическую композицию.
[16] Способ получения композиции по любому из пп. [1]-[15], включающий растворение вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, доведение рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[17] Способ стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции, включающий растворение вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, доведение рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[18] Способ по любому из пп. [16] или [17], где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
[19] Способ по любому из пп. [16]-[18], где композиция представляет фармацевтическую композицию.
Эффект изобретения
[0007]
Согласно настоящему изобретению может быть обеспечена новая композиция, в частности, фармацевтическая композиция, с которой проще манипулировать, где молекула нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента имеет повышенную стабильность.
Краткое описание фигур
[0008]
На фиг. 1 представлены результаты теста оценки стабильности при 25°С раствора PH-0009, приготовленного с использованием буфера при каждом значении рН.
На фиг.2 представлены результаты теста оценки стабильности при 40°С раствора PH-0009, приготовленного с использованием буфера при каждом значении рН.
На фиг. 3 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С раствора PH-0009, приготовленного с использованием буфера при каждом значении рН.
На фиг.4 представлены результаты теста оценки стабильности при 40°С раствора PH-0009, приготовленного с использованием цитратного буфера при каждой концентрации.
На фиг.5 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С раствора PH-0009, приготовленного с использованием цитратного буфера при каждой концентрации.
На фиг.6 представлены результаты теста оценки стабильности раствора PH-0009 с концентрацией 10 мг/мл.
На фиг. 7 представлены результаты теста оценки стабильности раствора NK-7006, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг.8 представлены результаты теста оценки стабильности раствора NK-7007, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг.9 представлены результаты теста оценки стабильности раствора PK-7006, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг.10 представлены результаты теста оценки стабильности PK-7015, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 11 представлены результаты теста оценки стабильности раствора PH-7069, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 12 представлены результаты теста оценки стабильности раствора Kynamro-7001, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 13 представлены результаты теста оценки стабильности раствора PH-7081, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг.14 представлены результаты теста оценки стабильности раствора NI-7001, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 15 представлены результаты теста оценки стабильности раствора NM-7001, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 16 представлены результаты теста оценки стабильности раствора Macugen-7001, приготовленного с использованием 0,05 М цитратного буфера.
На фиг. 17 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов PK-7006, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 18 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов NK-7006, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 19 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов PH-7069, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 20 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов NI-7001, полученных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 21 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов NM-7001, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 22 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов Kynamro-7001, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
На фиг. 23 представлены результаты теста оценки стабильности при 60°С растворов Macugen-7001, приготовленных с использованием 0,05 М цитратного буфера, 0,05 М фосфатного буфера и 0,05 М цитратно-фосфатного (5:5) буфера при каждом значении рН.
Описание вариантов осуществления
[0009]
Настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, способную стабильно сохранять молекулу нуклеиновой кислоты, обладающую биологической активностью, в форме раствора при температуре окружающей среды (далее также относится к «композиции по настоящему изобретению»). Как здесь используется, термин «температура окружающей среды» означает диапазон температур 15-30°С, и «стабильно сохранять» означает, что не ниже 80% молекулы нуклеиновой кислоты относительно содержания на время начала закладки на хранение (при приготовлении композиции) сохраняется без разложения в течение (1) не менее 4 недель, предпочтительно (2) не менее 12 недель (примерно 3 месяца), более предпочтительно (3) не менее 200 недель (примерно 3,7 года). Такая стабильность при хранении может быть подтверждена или прогнозирована по результатам следующего теста оценки стабильности.
(1) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 25°С, 60% относительной влажности в течение 4 недель составляет не ниже 80% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
(2) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 40°С, 75% относительной влажности в течение 4 недель составляет не ниже 80% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
(3) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 60°С в течение 4 недель составляет не ниже 60%, предпочтительно не ниже 70%, более предпочтительно не ниже 80% относительно содержания на время начала закладки на хранение.
Как здесь используется, содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции определяют с использованием раствора (100%), полученного растворением молекулы нуклеиновой кислоты в таком же количестве, что и испытуемый образец в воде для инъекций, и раствора, полученного смешиванием указанного раствора и воды для инъекций в соотношении 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4 (90%, 80%, 70% и 60% соответственно) в качестве образцов для построения калибровочной кривой с использованием 10 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой для ВЭЖХ для измерения площадей пиков, построения графиков измеренных значений соответствующих образцов калибровочной кривой с теоретическим содержанием (%) по горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), получения линейной регрессии (Y=aX+b) (калибровочная кривая) методом наименьших квадратов, и наложением площади пика исследуемого образца, измеренной ВЭЖХ в тех же условиях, к калибровочной кривой, чтобы дать теоретическое содержание (%). Условия измерения вышеуказанной ВЭЖХ следующие:
детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
температура колонки: 40°C
подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрила
подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
подача подвижной фазы: градиент концентрации контролируется путем изменения соотношения смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В следующим образом.
[0010]
Таблица 1 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
[0011]
Предпочтительно композиция по настоящему изобретению имеет содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 60°С в течение 4 недель не ниже 60%, предпочтительно не ниже 70%, более предпочтительно не ниже 80%, еще более предпочтительно не ниже 85%, особенно предпочтительно не ниже 90%, относительно содержания на время начала закладки на хранение.
[0012]
1. Молекула нуклеиновой кислоты
Молекула нуклеиновой кислоты, содержащаяся в композиции по настоящему изобретению, особым образом не ограничивается, при условии, что она представляет олигонуклеотид или полинуклеотид, содержащий дезоксирибонуклеотид (ДНК) и/или рибонуклеотид (РНК) в качестве составляющего звена(ев), и может состоять только из ДНК или РНК, или химерной нуклеиновой кислоты ДНК и РНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть одноцепочечной или двухцепочечной. Когда это двухцепочечная молекула, то она может представлять любую из двухцепочечной ДНК, двухцепочечной РНК, гибрида ДНК-РНК. Кроме того, данный термин широко применим к структурам, полученным из нуклеиновой кислоты (молекулярная частица, состоящая из нуклеиновой кислоты, такой как LNA, ДНК, РНК и тому подобное, в частности, химерная нуклеиновая кислота, гетерополимерная двухцепочечная нуклеиновая кислота или структура с тройной цепью нуклеиновой кислоты и т.д.).
[0013]
Количество оснований в молекуле нуклеиновой кислоты, содержащейся в композиции по настоящему изобретению, обычно составляет 10-300, предпочтительно 10-200, более предпочтительно 10-150, еще более предпочтительно 15-100, наиболее предпочтительно 20-80. В настоящем описании «siРНК», «shРНК», «миРНК» и «рибозим», если не указано иное, получили свои названия на основе функции, которые могут состоять исключительно из РНК, или один или более (например, 1-30, 1-20, 1-10, 1-5 (1, 2, 3, 4, 5)) нуклеотидов необязательно замещены ДНК.
[0014]
Предпочтительно молекула нуклеиновой кислоты, содержащаяся в композиции по настоящему изобретению, представляет молекулу, обладающую биологической активностью, такую как молекула, содержащая нуклеотидную последовательность, которая контролирует экспрессию гена-мишени или функцию белка-мишени и тому подобное. Как здесь используется, термин «контроль» включает как повышающую регуляцию (усиление экспрессии или функции), так и понижающую регуляцию (подавление экспрессии или функции). Примеры молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, которая контролирует экспрессию гена-мишени, включают антисмысловую нуклеиновую кислоту, siРНК, shРНК, миРНК, рибозим и тому подобное. Примеры молекулы нуклеиновой кислоты, которая подавляет функцию белка-мишени, включают аптамер, нуклеиновую кислоту-ловушку и тому подобное.
[0015]
Антисмысловая нуклеиновая кислота относится к нуклеиновой кислоте, состоящей из мРНК-мишени (или ее первичного продукта транскрипции), или последовательности оснований, способной гибридизоваться с миРНК-мишенью (или ее первичным продуктом транскрипции) в физиологических условиях клетки, которая экспрессирует мРНК-мишень или миРНК-мишень, и способной ингибировать трансляцию в белок, кодируемый мРНК, стерическим препятствием или разложением мРНК-мишени (или ингибированием сплайсинга первичного продукта транскрипции) или способной ингибировать контроль экспрессии гена миРНК путем ингибирования или разложение миРНК-мишени.
[0016]
Длина области-мишени антисмысловой нуклеиновой кислоты особым образом не ограничивается, при условии, что трансляция в белок и контроль экспрессии гена под действием миРНК могут ингибироваться гибридизацией антисмысловой нуклеиновой кислоты и, например, короткая длина составляет примерно 10 оснований, и длинная длина представляет собой полную последовательность мРНК или первичного продукта транскрипции. С учетом простого синтеза, антигенности, переноса внутрь клеток и тому подобное, предпочтительной является длина примерно 10-40 оснований, в частности, в пределах примерно от 15 до примерно 30 оснований, хотя, длина не ограничивается этими значениями.
[0017]
В качестве антисмысловой нуклеиновой кислоты можно использовать нуклеиновую кислоту, нацеленную на любую известную мРНК. Предпочтительным примером является антисмысловая нуклеиновая кислота против мРНК, кодирующей белок, который потенциально становится мишенью для поиска препарата для лечения заболевания человека. Конкретные примеры антисмысловой нуклеиновой кислоты, относящиеся к заболеванию человека, включают, не ограничиваясь этим, антисмысловую нуклеиновую кислоту, нацеленную на мРНК (или ее первичный продукт транскрипции) ApoB100 (гиперхолестеринемия), дистрофин (мышечная дистрофия), STAT3 (злокачественная лимфома) и тому подобное, и антисмысловую нуклеиновую кислоту, нацеленную на миРНК и подобно miR-122 (гепатит С), и тому подобное.
[0018]
Более конкретные примеры антисмысловой нуклеиновой кислоты включают, не ограничиваясь этим, мипомерсен, последовательность которого показана в SEQ ID NO: 1 (торговое название: Kynamro; при условии, что РНК является 2'-O-метоксиэтилированной, и цитозин и урацил являются 5-метилированными в поступающих на рынок лекарственных препаратах) (антисмысловая нуклеиновая кислота против мРНК ApoB100).
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (SEQ ID NO: 1)
(прописные буквы показывают РНК, и строчные буквы - ДНК)
[0019]
Антисмысловую нуклеиновую кислоту можно получить определением последовательности-мишени на основе последовательности кДНК или последовательности геномной ДНК и синтезом комплементарной ей последовательности с использованием коммерчески доступного автоматического синтезатора ДНК/РНК (Applied Biosystems, Beckman Instruments и т.д.).
[0020]
siРНК представляет собой двухцепочечную олиго-РНК, состоящую из РНК, имеющую последовательность, комплементарную нуклеотидной последовательности мРНК гена-мишени или ее частичной последовательности (далее по тексту нуклеотидная последовательность-мишень), и ее комплементарную цепь. Кроме того, одноцепочечная РНК, в которой последовательность, комплементарная нуклеотидной последовательности-мишени (первая последовательность) и ее комплементарная последовательность (вторая последовательность), связаны посредством участка «петля-шпилька», и двухцепочечная структура первой последовательности и второй последовательности образована структурой типа «петли-шпильки» (короткая РНК, образующая шпильку: shРНК), также является одним из предпочтительных вариантов осуществления siРНК. Кроме того, нуклеиновая кислота типа «гантели», в которой оба конца двухцепочечной структуры первой последовательности и второй последовательности замкнуты петлевой структурой, также является одним из предпочтительных вариантов осуществления.
[0021]
siРНК/shРНК может иметь «свисающий конец» на 5'-конце или 3'-конце одной или обеих смысловой цепи и антисмысловой цепи. «Свисающий конец» образуется добавлением от одного до нескольких (например, 1, 2 или 3) оснований к концу смысловой цепи и/или антисмысловой цепи.
[0022]
Несмотря на то, что длина оснований siРНК/shРНК особым образом не ограничивается, при условии, что может быть индуцирована РНК-интерференция, например, одна боковая цепь имеет длину из 10-50 оснований, предпочтительно 15-30 оснований, более предпочтительно длину 21-27 оснований.
[0023]
В качестве siРНК/shРНК может быть использована siРНК/shРНК, нацеленная на любую известную мРНК, и, например, siРНК/shРНК против мРНК, кодирующей белок, который потенциально становится мишенью для поиска препарата для лечения заболевания человека, является предпочтительной. Конкретные примеры siРНК/shРНК, относящиеся к заболеваниям человека, включают, не ограничиваясь этим, siРНК/shРНК и т.п., нацеленные на фактор роста соединительной ткани (CTGF) (фиброз), нуклеокапсид респираторно-синцитиального вируса (RSV) (RSV-инфекции), RTP801 (диабетический макулярный отек), транстиретин (амилоидоз), коллагенспецифический молекулярный шаперон (HSP47) (цирроз) и тому подобное.
[0024]
siРНК может быть получена химическим синтезом с использованием обычного известного способа или получением с использованием технологии рекомбинации генов. Также возможно использовать коммерчески доступную нуклеиновую кислоту, если это подходит.
[0025]
Например, siРНК может быть соответствующим образом сконструирована с использованием коммерчески доступного программного обеспечения (например, RNAi Designer, Invitrogen) на основе информации о последовательности оснований мРНК, которая является мишенью. Она может быть получена синтезом каждой из смысловой цепи и антисмысловой цепи последовательности-мишени в мРНК с использованием коммерчески доступного автоматического синтезатора ДНК/РНК (Applied Biosystems, Beckman Instruments и др.), их денатурирацией в подходящем буфере для отжига при температуре примерно от 90°С до примерно 95°С в течение примерно 1 мин и их отжига при температуре примерно от 30 до 70°С в течение примерно от 1 до примерно 8 ч.
[0026]
миРНК представляет собой эндогенную некодирующую РНК (нк РНК) примерно из 20-25 оснований, которая кодируется в геноме. Она не расщепляет мРНК-мишень, как это делает siРНК, но контролирует трансляцию путем распознавания 3'-нетранслируемой области (UTR) мРНК-мишени. миРНК в настоящем изобретении включает эндогенную миРНК, которая воздействует на мРНК-мишень в цитоплазме и ингибирует трансляцию в белок, и, которая действует в ядре и разлагает мРНК подобно H-зависимой РНКазе с помощью гапмерной структуры, содержащей олигомеры РНК на обоих концах и олигомер ДНК в центральной части.
В качестве миРНК можно использовать любую известную миРНК. Предпочтительной является, например, миРНК, нацеленная на мРНК, кодирующую белок, которая потенциально становится мишенью для поиска препарата для лечения заболевания человека, или ее предшественник. Конкретные примеры миРНК, относящиеся к заболеванию человека, включают, не ограничиваясь этим, let-7 (рак легких), miR-15a (В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз), miR-143 (колоректальный рак), miR-139 (рак поджелудочной железы) и их предшественники и тому подобное.
[0028]
Более конкретные примеры миРНК включают, не ограничиваясь этим, предшественник let7a-1 человека, последовательность которого показана в SEQ ID NO: 2.
5'-UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCA
CCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (SEQ ID NO: 2)
[0029]
миРНК можно получить выделением из клетки млекопитающего (клетки человека и т.д.) с использованием обычного известного метода или химическим синтезом, или получением с использованием технологии рекомбинации генов. Также возможно использовать коммерчески доступную нуклеиновую кислоту, если это подходит.
[0030]
В отношение миРНК, то например, двухцепочечную миРНК или ее одноцепочечный предшественник можно получить на основе информации о последовательности оснований целевой миРНК из базы данных miRBase и т.д. и, основываясь на информации, таким же образом, как было описано выше для химического синтеза siРНК.
[0031]
Аптамер представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, обладающую активностью связываться с молекулой-мишенью, такой как белок и тому подобное, и контролировать (как правило, ингибировать) его функции.
[0032]
Длина аптамера особым образом не ограничивается и, как правило, может составлять примерно от 16 до примерно 200 нуклеотидов. Например, она может составлять не более 100 нуклеотидов, предпочтительно не более примерно 50 нуклеотидов, более предпочтительно не более примерно 40 нуклеотидов.
[0033]
В качестве аптамера можно использовать аптамер, нацеленный на любой известный белок. Предпочтительным является, например, аптамер, нацеленный на белок, который потенциально становится мишенью для поиска препарата для лечения заболевания человека. Конкретные примеры аптамера к белку, связанному с заболеванием человека, включают, не ограничиваясь этим, аптамеры к фактору роста сосудистого эндотелия (VEGF) (возрастная макулярная дегенерация), фактору IXa (ингибирование свертывания крови при болезни коронарных артерий), фактору роста нервов (NGF) (боль), основному фактору роста фибробластов (FGF2) (ревматоидный артрит) и тому подобное, и тому подобное.
[0034]
Более конкретные примеры аптамера включают, не ограничиваясь этим, пегаптаниб, последовательность которого показана в SEQ ID NO: 3 (торговое название: макуген (зарегистрированная торговая марка); все пиримидиновые нуклеотиды являются 2'-фторированными, и часть пуриновых нуклеотидов является 2'-метоксилированными) (аптамер к белку VEGF).
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (SEQ ID NO: 3)
(t представляет 3',3'-dT)
[0035]
Аптамер может быть получен, например, с использованием следующих процедур. То есть олигонуклеотиды (например, примерно 60 оснований) вначале синтезируют произвольно с использованием автоматического синтезатора ДНК/РНК и получают пул олигонуклеотидов. Затем олигонуклеотиды, связанные с целевым белком, разделяют на аффинной колонке. Разделенные олигонуклеотиды амплифицируют с помощью ПЦР, и вышеуказанный процесс отбора выполняют вновь. Данный процесс повторяют примерно 5 раз или более для выбора аптамеров, обладающих высокой аффинностью к целевому белку.
[0036]
Рибозим представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, обладающую ферментативной активностью для расщепления нуклеиновой кислоты. Самосплайсирующаяся РНК, найденная в инфекционной РНК, такой как РНК вироида, вирусоида и т.п., и типа «головки молотка», типа «шпильки» и тому подобное, являются известными рибозимами, имеющими самую широкую применимость. Может быть специфически расщеплена только сама мРНК-мишень образованием последовательности, комплементарной желаемому сайту расщепления мРНК, с несколькими основаниями каждого на обоих концах (всего примерно 10 оснований), смежных с фрагментом, имеющим структуру «головки молотка».
[0037]
Рибозим можно получить определением последовательности-мишени на основе последовательности кДНК или последовательности геномной ДНК и синтезом последовательности, комплементарной им, с использованием коммерчески доступного автоматического синтезатора ДНК/РНК (Applied Biosystems, Beckman Instruments и т.д.).
[0038]
Нуклеиновая кислота-ловушка представляет двухцепочечную молекулу ДНК, имеющую длину примерно 20 оснований и имеющую нуклеотидную последовательность, с которой специфически связывается фактор транскрипции, и контролирует (подавляет в случае фактора активации транскрипции, активирует в случае ингибирующего фактора транскрипции) экспрессию гена-мишени фактора транскрипции путем захвата фактора транскрипции.
[0039]
В качестве нуклеиновой кислоты-ловушки можно использовать нуклеиновую кислоту-ловушку, нацеленную на любой известный фактор транскрипции. Предпочтительной является, например, нуклеиновая кислота-ловушка, нацеленная на фактор транскрипции, который потенциально становится мишенью для поиска препарата для лечения заболевания человека. Конкретные примеры нуклеиновой кислоты-ловушки к фактору транскрипции, относящемуся к заболеванию человека, включают, не ограничиваясь этим, нуклеиновую кислоту-ловушку к NFκB (атопический дерматит, сосудистый рестеноз, ревматоидный артрит) и тому подобное, и тому подобное.
[0040]
Нуклеиновая кислота-ловушка может быть получена химическим синтезом с использованием обычного известного метода.
[0041]
Например, нуклеиновая кислота-ловушка может быть соответствующим образом сконструирована на основе информации о последовательности оснований консенсусной последовательности связывания фактора транскрипции, который является мишенью. Она может быть получена синтезом каждой из смысловой цепи и антисмысловой цепи с использованием коммерчески доступного автоматического синтезатора ДНК/РНК (Applied Biosystems, Beckman Instruments и т.д.), их денатурацией в подходящем буфере для отжига примерно при 90-195°C в течение примерно 1 мин и их отжигом при температуре примерно от 30 до 70°С в течение примерно от 1 до примерно 8 ч.
[0042]
В одном предпочтительном варианте осуществления молекула нуклеиновой кислоты, содержащаяся в композиции по настоящему изобретению, может представлять молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты, описанную в WO 2012/017919, WO 2013/103146, WO 2012/005368, WO 2013/077446, WO 2013/133393 и тому подобное.
[0043]
Данные молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты представляют молекулы нуклеиновых кислот, в которых область, содержащая последовательность, которая контролирует экспрессию гена-мишени, и область, содержащая последовательность, комплементарную последовательности, связаны непосредственно или через линкер. Конкретные примеры линкера включают, не ограничиваясь этим, линкер, имеющий ненуклеотидную структуру, содержащую, по меньшей мере, одно из пирролидинового скелета и пиперидинового скелета, линкер, состоящий из нуклеотидного остатка и/или ненуклеотидного остатка, линкер, имеющий ненуклеотидную структуру, такую как аминокислотный остаток, остаток полиамина, остаток поликарбоновой кислоты и тому подобное, и тому подобное. Конкретные примеры вышеуказанной молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты, содержащей линкер, включают, не ограничиваясь этим, следующие.
[0044]
I. Молекула одноцепочечной нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, контролирующую экспрессию гена-мишени (далее в некоторых случаях сокращенно «контрольная последовательность экспрессии»), которая содержит линкер, имеющий ненуклеотидную структуру, содержащую, по меньшей мере, одно из пирролидинового скелета и пиперидинового скелета.
(1) молекула ssPN
В качестве одного варианта осуществления вышеуказанной молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты, является молекула одноцепочечной нуклеиновой кислоты (далее по тексту также «молекула ssPN»), содержащая область (X), линкерную область (Lx) и область (Xc), где вышеуказанная линкерная область (Lx) связана с вышеуказанной областью (X) и вышеуказанной областью (Xc),
вышеуказанная область (Xc) является комплементарной вышеуказанной области (X),
по меньшей мере, одна из вышеуказанной области (X) и вышеуказанной области (Xc) содержит вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, и вышеуказанная линкерная область (Lx) содержит ненуклеотидную структуру, содержащую, по меньшей мере, одно из пирролидинового скелета и пиперидинового скелета, которые описаны в WO 2012/017919.
[0045]
В вышеуказанной молекуле ssPN вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии представляет последовательность, которая проявляет, например, активность контролирования экспрессии вышеуказанного гена-мишени, когда молекулу ssPN вводят в клетку in vivo или in vitro. Вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии особым образом не ограничивается и может быть установлена в зависимости от типа гена-мишени. В качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, например, может быть использована последовательность, участвующая в РНК-интерференции, вызванной siРНК. То есть последовательность РНК цепи вышеуказанной siРНК, которая связывается с мРНК-мишенью, может быть использована в качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии.
[0046]
Вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии представляет собой, например, предпочтительно, комплементарную, по меньшей мере, на 90%, более предпочтительно комплементарную, на 95%, еще более предпочтительно комплементарную на 98% и наиболее предпочтительно комплементарную на 100% заранее определенной области вышеуказанного гена-мишени. Когда такая комплементарность выполняется, то, например, нецелевой эффект может быть в достаточной степени снижен.
[0047]
В качестве конкретных примеров, когда геном-мишенью является ген TGF-β1, то, например, в качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, может использоваться последовательность длиной 18 оснований, показанная в SEQ ID NO: 4.
5'-UAUGCUGUGUGUACUCUG-3' (SEQ ID NO: 4)
[0048]
В вышеуказанной молекуле ssPN вышеуказанная линкерная область (Lx) может иметь, например, ненуклеотидную структуру, содержащую вышеуказанный пирролидиновый скелет, или ненуклеотидную структуру, содержащую вышеуказанный пиперидиновый скелет, или обе ненуклеотидную структуру, содержащую вышеуказанный пирролидиновый скелет, и ненуклеотидную структуру, содержащую вышеуказанный пиперидиновый скелет. Вышеуказанная молекула ssPN может подавлять, например, побочные эффекты, такие как индукция интерферона in vivo, и обладает превосходной устойчивостью к нуклеазе.
[0049]
В вышеуказанной молекуле ssPN вышеуказанный пирролидиновый скелет может представлять, например, скелет производного пирролидина, где один или более атомов углерода, составляющих 5-членное кольцо пирролидина, являются замещенными, и при замещении, например, атом углерода, отличный от углерода С-2, является предпочтительным. Вышеуказанной атом углерода может быть замещен, например, атомом азота, атомом кислорода или атомом серы. Вышеуказанный пирролидиновый скелет может содержать, например, двойную углерод-углеродную связь или двойную связь углерод-азот в 5-членном кольце пирролидина. В вышеуказанном пирролидиновом скелете атом углерода и атом азота, составляющие 5-членное пирролидиновое кольцо, могут быть связаны, например, с атомом водорода или с указанным ниже заместителем. Вышеуказанная линкерная область (Lx) может быть связана, например, с вышеуказанной областью (X) и вышеуказанной областью (Xc) через любую группу в вышеуказанном пирролидиновом скелете, которая предпочтительно представляет собой любой атом углерода или любой атом азота вышеуказанного 5-членного кольца, предпочтительно атом углерода в положении 2 (С-2) или атом азота вышеуказанного 5-членного кольца. Примеры вышеуказанного пирролидинового скелета включают пролиновый скелет, пролиноловый скелет и тому подобное. Поскольку вышеуказанный пролиновый скелет, пролиноловый скелет и тому подобное представляют, например, вещества и их восстановленная форма, имеющиеся in vivo и, то они также являются более безопасными.
[0050]
В вышеуказанной молекуле ssPN, в качестве вышеуказанного пиперидинового скелета можно указать, например, скелет производного пиперидина, где один или более атомов углерода, составляющих 6-членное кольцо пиперидина, могут быть замещены. Когда замещение имеет место, то, например, предпочтительным является атом углерода, отличный от углерода С-2. Вышеуказанный атом углерода может быть замещен, например, атомом азота, атомом кислорода или атомом серы. Вышеуказанный пиперидиновый скелет может также содержать, например, в 6-членном кольце пиперидина, например, двойную углерод-углеродную связь или двойную связь углерод-азот. В вышеуказанном пиперидиновом скелете атом углерода и атом азота, составляющие 6-членное кольцо пиперидина, могут быть связаны, например, с атомом водорода или с указанным ниже заместителем. Вышеуказанная линкерная область (Lx) также может быть связана, например, с вышеуказанной областью (X) и вышеуказанной областью (Xc) через любую группу вышеуказанного пиперидинового скелета и предпочтительно с атомом углерода в положении 2 (C-2) и атомом азота вышеуказанного 6-членного кольца.
[0051]
Вышеуказанные линкерные области могут состоять, например, только из ненуклеотидного остатка(ов), имеющего вышеуказанную ненуклеотидную структуру, или могут содержать ненуклеотидный остаток(и), имеющий вышеуказанную ненуклеотидную структуру, и нуклеотидный остаток (и).
[0052]
В вышеуказанной молекуле ssPN вышеуказанная линкерная область представлена, например, следующей формулой (I):
[0053]
[0054]
в вышеуказанной формуле (I), например,
X1 и X2 каждый независимо представляет H2, O, S или NH;
Y1 и Y2 каждый независимо представляет простую связь, CH2, NH, O или S;
R3 представляет атом водорода или заместитель, который связан с C-3, C-4, C-5 или C-6 в кольце A;
L1 представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен ОН, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH или SRa; или
L1 представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
при условии, что: когда Y1 представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y1 в L1, представляет атом углерода, атом, связанный с OR1 в L1, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
L2 представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH или SRc; или
L2 представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
при условии, что: когда Y2 представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y2 в L2, является атомом углерода, атом, связанный с OR2 в L2, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
Ra, Rb, Rc и Rd каждый независимо является заместителем или защитной группой;
l равно 1 или 2;
m равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
n равно целому числу в диапазоне от 0 до 30; и
в кольце А один атом углерода, отличный от вышеуказанного С-2 в кольце А, может быть замещен атомом азота, кислорода или серы, и может содержать в вышеуказанном кольце А двойную углерод-углеродную связь или двойную связь углерод-азот;
вышеуказанные области (Yc) и (Y) каждая связаны с вышеуказанной линкерной областью (Ly) через -OR1- или -OR2-,
где R1 и R2 могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R1 и R2 каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или вышеуказанную структуру (I).
[0055]
В вышеуказанной формуле (I), например, X1 и X2 каждый независимо представляет H2, O, S или NH. В вышеуказанной формуле (I) «X1 представляет H2» означает, что X1 образует CH2 (метиленовую группу) вместе с атомом углерода, с которым связан X1. То же самое относится к X2.
[0056]
В вышеуказанной формуле (II) Y1 и Y2 каждый независимо представляет простую связь, CH2, NH, O или S.
[0057]
В вышеуказанной формуле (I) l в кольце A равно 1 или 2; когда l=1, то кольцо A представляет собой 5-членное кольцо, например, вышеуказанный пирролидиновый скелет. Вышеуказанный пирролидиновый скелет представляет, например, пролиновый скелет, пролиноловый скелет или тому подобное, и иллюстрируется его двухвалентными структурами. Когда l=2, то кольцо A представляет 6-членное кольцо, например, вышеуказанный пиперидиновый скелет. В кольце А один атом углерода, отличный от С-2 в кольце А, может быть замещен атомом азота, кислорода или серы. Кольцо А может содержать, в кольце А, двойную углерод-углеродную связь или двойную связь углерод-азот. Кольцо A представляет, например, тип L или тип D.
[0058]
В вышеуказанной формуле (I) R3 представляет атом водорода или заместитель, связанный с C-3, C-4, C-5 или C-6 в кольце A. Когда R3 является вышеуказанным заместителем, то заместитель R3 может быть одним или несколькими, или может отсутствовать. Когда присутствует несколько R3, то они могут быть одинаковыми или различными.
[0059]
Заместитель R3 представляет, например, атом галогена, OH, OR4, NH2, NHR4, NR4R5, SH, SR4, оксогруппу (=O) и тому подобное.
[0060]
R4 и R5 каждый независимо представляют, например, заместитель или защитную группу и могут быть одинаковыми или различными. Примеры вышеуказанного заместителя включают атом галогена, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, арил, гетероарил, арилалкил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклоалкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, гетероциклилалкенил, гетероциклилалкил, гетероарилалкил, силил, силилоксиалкил и тому подобное. То же самое относится и далее. Заместитель R3 может быть выбран из заместителей, указанных выше.
[0061]
Вышеуказанная защитная группа представляет функциональную группу, которая инактивирует, например, высокореакционноспособную функциональную группу. Примеры защитной группы включают известные защитные группы и тому подобное. В отношение вышеуказанной защитной группы, то, например, здесь может быть включено описание, имеющееся в литературе (J.F.W. McOmie, «Protecting Groups in Organic Chemistry», Prenum Press, London and New York, 1973). Вышеуказанная защитная группа особым образом не ограничивается, и ее примеры включают трет-бутилдиметилсилил (TBDMS), бис(2-ацетоксиэтилокси)метил (АСЕ), триизопропилсилилоксиметил (ТОМ), 1-(2-цианоэтокси)этил (CEE), 2-цианоэтоксиметил (CEM), толилсульфонилэтоксиметил (TEM), диметокситритил (DMTr) и тому подобное. Когда R3 представляет OR4, то вышеуказанная защитная группа особым образом не ограничивается, и ее примеры включают группу TBDMS, группу ACE, группу TOM, группу CEE, группу CEM, группу TEM. Другие примеры защитной группы включают силилсодержащие группы, которые будут описаны ниже. То же самое относится и далее.
[0062]
В вышеуказанной формуле (I) L1 представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов. Атом(ы) водорода при вышеуказанном атоме(ам) углерода алкилена может быть замещен или не замещен, например, OH, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH или SRa. Альтернативно, L1 может представлять полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода. Вышеуказанная полиэфирная цепь представляет, например, полиэтиленгликоль. Когда Y1 представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y1 в L1, является атомом углерода, атом, связанный с OR1 в L1, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом. То есть, например, когда Y1 представляет О, то этот атом кислорода и атом кислорода в L1 не являются смежными друг с другом, и атом кислорода в OR1 и атом кислорода в L1 не являются смежными друг с другом.
[0063]
В вышеуказанной формуле (I) L2 представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов. Атом(ы) водорода при вышеуказанном атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен, например, OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH или SRc. Альтернативно, L2 может представлять полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода. Когда Y2 представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y2 в L2, является атомом углерода, атом, связанный с OR2 в L2, представляет атом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом. То есть, например, когда Y2 представляет О, то этот атом кислорода и атом кислорода в L2 не являются смежными друг с другом, и атом кислорода в OR2 и атом кислорода в L2 не являются смежными друг с другом.
[0064]
n в L1 и m в L2 особым образом не ограничиваются, и нижний предел каждого из них может составлять, например, 0, и также верхний предел того же особым образом не ограничивается. Например, n и m могут быть установлены как соответствующие в зависимости от желаемой длины вышеуказанной ненуклеотидной структуры. Например, с точки зрения стоимости производства, выхода и т.п., n и m предпочтительно равны от 0 до 30, более предпочтительно от 0 до 20 и еще более предпочтительно от 0 до 15. Значения n и m могут быть одинаковыми (n=m) или различными. n+m представляет, например, от 0 до 30, предпочтительно от 0 до 20 и более предпочтительно от 0 до 15.
[0065]
Например, Ra, Rb, Rc и Rd каждый независимо представляет заместитель или защитную группу. Примеры вышеуказанного заместителя и вышеуказанной защитной группы являются такими же, как определено выше.
[0066]
В вышеуказанной формуле (I) каждый атом водорода может быть независимо замещен, например, атомом галогена, таким как Cl, Br, F, I и тому подобное.
[0067]
Вышеуказанные области (Хс) и (X) каждая связана с вышеуказанной линкерной областью (Lx), например, через -OR1- или -OR2-. R1 и R2 могут присутствовать или отсутствовать. Когда R1 и R2 присутствуют, то R1 и R2 каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или структуру, представленную вышеуказанной формулой (I). Когда R1 и/или R2 представляют/представляет вышеуказанный нуклеотидный остаток, то вышеуказанная линкерная область (Lx) образована, например, вышеуказанным ненуклеотидным остатком, имеющим структуру вышеуказанной формулы (I), исключая нуклеотидный остаток R1 и/или R2, и вышеуказанный нуклеотидный остаток(и). Когда R1 и/или R2 представляют/представляет структуру, представленную вышеуказанной формулой (I), то структура вышеуказанной линкерной области (Lx) такова, что, например, два или более из вышеуказанных ненуклеотидных остатков, имеющих структуру вышеуказанной формулы (I), связаны друг с другом. Количество структур вышеуказанной формулы (I) может составлять, например, 1, 2, 3 или 4. Когда вышеуказанная линкерная область (Lx) включает несколько вышеуказанных структур, то структуры вышеуказанной формулы (I) могут быть связаны, например, либо непосредственно, либо посредством вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов). С другой стороны, когда R1 и R2 отсутствуют, то вышеуказанная линкерная область (Lx) образована, например, только вышеуказанным ненуклеотидным остатком, имеющим структуру вышеуказанной формулы (I).
[0068]
Комбинация вышеуказанных областей (Xc) и (X) с -OR1- и -OR2- особым образом не ограничивается и может представлять, например, любое из следующих условий.
Условие (1):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно.
Условие (2):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR1- и -OR2-, соответственно.
[0069]
Примеры структуры вышеуказанной формулы (I) включают структуры следующих формул (II-1)-(II-9). В следующих формулах n и m являются такими же, как в вышеуказанной формуле (I). В следующих формулах q равно целому числу от 0 до 10.
[0070]
[0071]
В вышеприведенных формулах (I-1)-(I-9) значения n, m и q особым образом не ограничиваются и являются такими, как определено выше. Конкретным примером этого является вышеуказанная формула (I-1), где n=8, n=3 в вышеуказанной формуле (I-2), n=4 или 8 в вышеуказанной формуле (I-3), n=7 или 8 в вышеуказанной формуле (I-4), n=3 и m=4 в вышеуказанной формуле (I-5), n=8 и m=4 в вышеуказанной формуле (I-6), n=8 и m=4 в вышеуказанной формуле (I-7), n=5 и m=4 в вышеуказанной формуле (I-8), и q=1 и m=4 в вышеуказанной формуле (I-9). Один вариант осуществления (n=8) вышеуказанной формулы (II-4) показан в следующей формуле (I-4a), и один вариант осуществления (n=5, m=4) вышеуказанной формулы (I-8) показан в следующей формуле (I-8а).
[0072]
[0073]
В вышеуказанной молекуле ssPN вышеуказанная область (Xc) является комплементарной вышеуказанной области (X). Таким образом, в вышеуказанной молекуле ssPN двойная цепь может образоваться обратным фолдингом вышеуказанной области (Xc) к области (X) и самоотжигом вышеуказанных областей (Xc) и (X).
[0074]
В вышеуказанной молекуле ssPN, например, только вышеуказанная область (Xc) может подвергаться обратному фолдингу с образованием двойной цепи с вышеуказанной областью (X), или другая двойная цепь может образоваться в другой области. Ниже первая молекула ssPN, то есть молекула ssPN, в которой происходит образование двойной цепи в одном месте, упоминается как «первая молекула ssPN», и последняя молекула ssPN, т. е. молекула ssPN, в которой происходит образование двойной цепи в двух положениях, называется «второй молекулой ssPN». Примеры вышеуказанной первой и второй молекул ssPN приведены ниже. Следует, однако, отметить, что настоящее изобретение не ограничивается этими иллюстративными примерами.
[0075]
(1-1) Первая молекула ssPN
Вышеуказанная первая молекула ssPN представляет собой, например, молекулу, включающую вышеуказанную область (X), вышеуказанную область (Xc) и вышеуказанную линкерную область (Lx).
[0076]
Вышеуказанная первая молекула ssPN может включать вышеуказанную область (Xc), вышеуказанную линкерную область (Lx) и вышеуказанную область (X) в таком порядке, например, от 5'-конца к 3'-концу, или может включать вышеуказанную область (Xc), вышеуказанную линкерную область (Lx) и вышеуказанную область (X) в таком порядке от 3'-конца к 5'-концу.
[0077]
В вышеуказанной первой молекуле ssPN вышеуказанная область (Xc) является комплементарной вышеуказанной области (X). Необходимо только, чтобы вышеуказанная область (Xc) имела последовательность, комплементарную всей области или участку вышеуказанной области (X). Предпочтительно вышеуказанная область (Xc) включает или состоит из последовательности, комплементарной всей области или участку области (X). Вышеуказанная область (Xc) может быть, например, полностью комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (X), или одно или более оснований в области (Xc) могут быть не комплементарными им. Предпочтительно область (Xc) является полностью комплементарной ей. Вышеуказанное выражение «одно или несколько оснований» означает, например, 1-3 основания, предпочтительно 1 основание или 2 основания.
[0078]
В вышеуказанной первой молекуле ssPN вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии вставлена, по меньшей мере, в одну из вышеуказанных областей (Xc) и (X), как описано выше. Вышеуказанная первая молекула ssPN может включать, например, одну контрольную последовательность экспрессии или две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше.
[0079]
В последнем случае вышеуказанная первая молекула ssPN может включать, например: две или более одинаковых контрольных последовательностей экспрессии для одного и того же гена-мишени; две или более различных контрольных последовательностей экспрессии для одного и того же гена-мишени; или две или более различных контрольных последовательностей экспрессии для разных генов-мишеней. Когда вышеуказанная первая молекула ssPN включает две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше, то положения соответствующих контрольных последовательностей экспрессии особым образом не ограничиваются, и они могут находиться в одной области или в разных областях, выбранных из вышеуказанных областей (X) и (Xc). Когда вышеуказанная первая молекула ssPN включает две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше, для разных генов-мишеней, то, например, вышеуказанная первая молекула ssPN может контролировать экспрессию двух или более видов различных генов-мишеней.
[0080]
Один вариант осуществления вышеуказанной первой молекулы ssPN описан в WO 2012/017919, фиг. 1, и может быть отнесен к этому.
[0081]
В вышеуказанной первой молекуле ssPN число оснований в каждой из вышеуказанных областей (Xc) и (X) особым образом не ограничивается. Примеры длин соответствующих областей приведены ниже. Однако следует отметить, что настоящее изобретение никоим образом не ограничивается этим. В настоящем изобретении «число оснований» означает, например, «длину», и его также можно назвать «длиной оснований». В настоящем изобретении цифровой диапазон числа оснований раскрывает все положительные целые числа, которые попадают в этот диапазон. Например, описание «1-4 основания» означает все «1, 2, 3, 4 основания» (ниже то же самое).
[0082]
Вышеуказанная область (Xc) может представлять, например, полностью комплементарную всей области вышеуказанной области (X). В этом случае это означает, например, что вышеуказанная область (Xc) состоит из последовательности оснований, комплементарной всей области, простирающейся от 5'-конца до 3'-конца вышеуказанной области (X). Другими словами, это означает, что вышеуказанная область (Xc) имеет такую же длину оснований, что и вышеуказанная область (X), и все основания в вышеуказанной области (Xc) являются комплементарными всем основаниям в вышеуказанной области (X).
[0083]
Кроме того, вышеуказанная область (Xc) может быть, например, полностью комплементарной участку вышеуказанной области (X). В данном случае это означает, например, что вышеуказанная область (Xc) состоит из последовательности оснований, комплементарной участку вышеуказанной области (X). Другими словами, это означает, что вышеуказанная область (Xc) состоит из последовательности оснований, длина оснований которой меньше длины оснований вышеуказанной области (X) на одно или более оснований, и все основания в вышеуказанной области (Xc) комплементарны всем основаниям в части вышеуказанной области (X). Вышеуказанный участок области (X) предпочтительно представляет область, имеющую последовательность оснований, состоящую, например, из последовательных оснований, начиная с основания на конце (1-ое основание) в вышеуказанной области (Xc) в вышеуказанной области (X).
[0084]
В вышеуказанной первой молекуле ssPN соотношение между числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Xc) в вышеуказанной области (Xc) удовлетворяет, например, следующему условию (3) или (5). Например, в первом случае, в частности, выполняется следующее условие (11):
X > Xc (3)
X - Xc=1-10, предпочтительно 1, 2 или 3,
более предпочтительно 1 или 2 (11)
X=Xc (5)
[0085]
Когда вышеуказанная область (X) и/или вышеуказанная область (Xc) включают(ет) вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная область может представлять, например, область, состоящую только из вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, или область, включающую вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Число оснований в вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии составляет, например, 19-30, предпочтительно 19, 20 или 21. В области(х), включающей вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, например, вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии также может включать дополнительную последовательность на 5'-конце и/или 3'-конце. Число оснований в вышеуказанной дополнительной последовательности составляет, например, от 1 до 31, предпочтительно от 1 до 21 и более предпочтительно от 1 до 11.
[0086]
Число оснований в вышеуказанной области (X) особым образом не ограничивается. Когда вышеуказанная область (X) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то нижний предел числа оснований в вышеуказанной области (X) составляет, например, 19, и его верхний предел составляет, например, 50, предпочтительно 30 и более предпочтительно 25. В частности, число оснований в вышеуказанной области (Х) составляет, например, от 19 до 50, предпочтительно от 19 до 30 и более предпочтительно от 19 до 25.
[0087]
Число оснований в вышеуказанной области (Xc) особым образом не ограничивается. Нижний предел числа оснований в вышеуказанной области (Xc) составляет, например, 19, предпочтительно 20 и более предпочтительно 21, и его верхний предел составляет, например, 50, более предпочтительно 40, и еще более предпочтительно 30.
[0088]
В вышеуказанной молекуле ssPN длина вышеуказанной линкерной области (Lx) особым образом не ограничивается. Длина вышеуказанной линкерной области (Lx) предпочтительно такова, что, например, вышеуказанные области (X) и (Xc) могли образовывать двойную цепь. Когда вышеуказанная линкерная область (Lx) включает вышеуказанный нуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанному ненуклеотидному остатку(ам), то нижний предел числа оснований в вышеуказанной линкерной области (Lx) составляет, например, 1, предпочтительно 2 и более предпочтительно 3, и его верхний предел составляет, например, 100, предпочтительно 80 и более предпочтительно 50.
[0089]
Полная длина вышеуказанной первой молекулы ssPN особым образом не ограничивается. В вышеуказанной первой молекуле ssPN нижний предел общего числа оснований (число оснований в полноразмерной молекуле ssPN) составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51, и, наиболее предпочтительно 52, и его верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80. В вышеуказанной первой молекуле ssPN нижний предел общего числа оснований, исключая число в вышеуказанной линкерной области (Lx), составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51 и наиболее предпочтительно 52, и его верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80.
[0090]
(1-2) Вторая молекула ssPN
Вышеуказанная вторая молекула ssPN представляет молекулу, которая дополнительно включает область (Y) и область (Yc), которая является комплементарной вышеуказанной области (Y), в дополнение, например, к вышеуказанной области (X), вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной области (Xc). В вышеуказанной второй молекуле ssPN внутренняя область (Z) состоит из вышеуказанной области (X) и вышеуказанной области (Y), которые связаны друг с другом. Описание вышеуказанной первой молекулы ssPN также относится к вышеуказанной второй молекуле ssPN, если не указано иное.
[0091]
Вышеуказанная вторая молекула ssPN может включать, например, вышеуказанную область (Xc), вышеуказанную линкерную область (Lx), вышеуказанную область (X), вышеуказанную область (Y) и вышеуказанную область (Yc) в таком порядке от 5'-конца к 3'-концу. В этом случае вышеуказанная область (Xc) также относится к «5'-концевой области (Xc)»; вышеуказанная область (X) в вышеуказанной внутренней области (Z) также относится к «внутренней 5'-концевой области (X)»; вышеуказанная область (Y) в вышеуказанной внутренней области (Z) также относится к «внутренней 3'-концевой области (Y)»; и вышеуказанная область (Yc) также относится к «3'-концевой области (Yc)». Альтернативно, вышеуказанная вторая молекула ssPN может включать, например, вышеуказанную область (Xc), вышеуказанную линкерную область (Lx), вышеуказанную область (X), вышеуказанную область (Y) и вышеуказанную область (Yc) в таком порядке от 3'-конца к 5'-концу. В этом случае вышеуказанная область (Xc) также относится к «3'-концевой области (Xc)»; вышеуказанная область (X) в вышеуказанной внутренней области (Z) также относится к «внутренней 3'-концевой области (X)»; вышеуказанная область (Y) в вышеуказанной внутренней области (Z) также относится к «внутренней 5'-концевой области (Y)»; и вышеуказанная область (Yc) также относится к «5'-концевой области (Yc)».
[0092]
Как описано выше, вышеуказанная внутренняя область (Z) состоит, например, из вышеуказанных областей (X) и (Y), которые связаны друг с другом. Например, вышеуказанные области (X) и (Y) связаны непосредственно друг с другом без промежуточной последовательности между ними. Вышеуказанная внутренняя область (Z) определяется как «состоящая из вышеуказанных областей (X) и (Y), которые связаны друг с другом» просто для обозначения статуса последовательности между вышеуказанными областями (Xc) и (Yc). Данное определение не предназначено для ограничения того, что при использовании вышеуказанной молекулы ssPN вышеуказанные области (X) и (Y) в вышеуказанной внутренней области (Z) являются дискретными независимыми областями. То есть, например, когда вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии включается в вышеуказанную внутреннюю область (Z), то вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии может быть расположена таким образом, чтобы простираться через вышеуказанные области (X) и (Y) в вышеуказанной внутренней области (Z).
[0093]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN вышеуказанная область (Xc) является комплементарной вышеуказанной области (X). Необходимо только, чтобы вышеуказанная область (Xc) имела последовательность, комплементарную всей области или участку вышеуказанной области (X). Предпочтительно вышеуказанная область (Xc) включает или состоит из последовательности, комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (X). Вышеуказанная область (Xc) может быть, например, полностью комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (X), или одно или несколько оснований в вышеуказанной области (Xc) могут не быть комплементарными тому же. Предпочтительно вышеуказанная область (Xc) является полностью комплементарной ей. Вышеуказанное выражение «одно или несколько оснований» означает, например, 1-3 основания, предпочтительно 1 основание или 2 основания.
[0094]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN вышеуказанная область (Yc) является комплементарной вышеуказанной области (Y). Необходимо только, чтобы вышеуказанная область (Yc) имела последовательность, комплементарную всей области или участку вышеуказанной области (Y). Предпочтительно вышеуказанная область (Yc) включает или состоит из последовательности, комплементарной всей области или участку области (Y). Вышеуказанная область (Yc) может быть, например, полностью комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (Y), или одно или несколько оснований в области (Yc) могут быть не комплементарными им. Предпочтительно область (Yc) является полностью комплементарной ей. Вышеуказанное выражение «одно или несколько оснований» означает, например, 1-3 основания, предпочтительно 1 основание или 2 основания.
[0095]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN, по меньшей мере, одна из вышеуказанной внутренней области (Z), которая состоит из вышеуказанных областей (X) и (Y), и вышеуказанной области (Xc) включает, например, вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Кроме того, вышеуказанная область (Yc) также может включать вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то например, любая из вышеуказанных областей (X) и (Y) может включать вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, или вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии может быть включена таким образом, чтобы простираться через вышеуказанные области (X) и (Y). Вышеуказанная вторая молекула ssPN может включать, например, одну вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии или две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше.
[0096]
Когда вышеуказанная вторая молекула ssPN включает две или более контрольных последовательностей экспрессии, то упомянутых выше, то положения соответствующих контрольных последовательностей экспрессии особым образом не ограничиваются. Они могут находиться в одной из вышеуказанной внутренней области (Z) и вышеуказанной области (Xc) или могут находиться в одной из вышеуказанной внутренней области (Z) и вышеуказанной области (Xc), и любой другой области, помимо этих областей.
[0097]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN, например, вышеуказанные области (Yc) и (Y) могут быть связаны друг с другом прямо или опосредованно. В первом случае, например, вышеуказанные области (Yc) и (Y) могут быть связаны непосредственно фосфодиэфирной связью или тому подобное. В последнем случае, например, вышеуказанная вторая молекула ssPN может быть сконфигурирована таким образом, что она имеет линкерную область (Ly) между вышеуказанными областями (Yc) и (Y), и вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны посредством вышеуказанной линкерной области (Ly).
[0098]
Когда вышеуказанная вторая молекула ssPN содержит вышеуказанную линкерную область (Ly), то, например, вышеуказанная линкерная область (Ly) может представлять линкер, состоящий из вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов), или линкер, имеющий ненуклеотидную структуру, включающую, по меньшей мере, одно из пирролидинового скелета и пиперидинового скелета, такого как описан выше. В последнем случае вышеуказанная линкерная область (Ly) может быть представлена, например, вышеуказанной формулой (I), и все описания, относящиеся к вышеуказанной формуле (I), указанные выше для вышеуказанной линкерной области (Lx), также относятся к вышеуказанной линкерной области (Ly).
[0099]
Вышеуказанные области (Yс) и (Y) каждая связана с вышеуказанной линкерной областью (Ly) через -OR1- или -OR2-. В вышеуказанной линкерной области (Ly) R1 и R2 могут присутствовать или отсутствовать, как в вышеуказанной линкерной области (Lx).
[0100]
Комбинация вышеуказанных областей (Xc) и (X) с вышеуказанными -OR1- и -OR2- и комбинация вышеуказанных областей (Yc) и (Y) с вышеуказанными -OR1- и -OR2- особым образом не ограничивается, и может представлять, например, любое из следующих условий:
Условие (1):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно; и
вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно.
Условие (2):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно; и
вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно.
Условие (3):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно; и
вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно.
Условие (4):
вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно; и
вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2- и -OR1-, соответственно.
[0101]
В отношение вышеуказанной второй молекулы ssPN, то один вариант осуществления молекулы ssPN, содержащий вышеуказанную линкерную область (Ly), описан в WO 2012/017919, фиг. 2, и ее можно отнести к этому.
[0102]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN число оснований в каждой из вышеуказанных областей (Xc), (X), (Y) и (Yc) особым образом не ограничивается. Примеры длин соответствующих областей приведены ниже. Следует, однако, отметить, что настоящее изобретение никоим образом не ограничивается этими значениями.
[0103]
Как описано выше, например, вышеуказанная область (Xc) может быть комплементарной всей области вышеуказанной области (X). В этом случае предпочтительно, чтобы, например, вышеуказанная область (Xc) имела ту же длину оснований, что и вышеуказанная область (X), и состояла из последовательности оснований, комплементарной всей области вышеуказанной области (X). Более предпочтительно, чтобы вышеуказанная область (Xc) имела ту же длину оснований, что и вышеуказанная область (X), и все основания в вышеуказанной области (Xc) были комплементарными всем основаниям в вышеуказанной области (X), т.е., например, область (Xc) является полностью комплементарной области (X). Следует, однако, отметить, что конфигурация области (Xc) не ограничивается этим, и одно или несколько оснований в области (Xc) могут быть не комплементарны соответствующим основаниям в области (X), например, как описано выше.
[0104]
Кроме того, как описано выше, вышеуказанная область (Xc) может быть комплементарной, например, участку вышеуказанной области (X). В этом случае предпочтительно, чтобы, например, вышеуказанная область (Xc) имела ту же длину оснований, что и участок вышеуказанной области (X), т.е. вышеуказанная область (Xc) состояла из последовательности оснований, длина оснований которой меньше длины оснований вышеуказанной области (X) на одно или более оснований. Более предпочтительно, чтобы вышеуказанная область (Xc) имела ту же длину оснований, что и участок вышеуказанной области (X), и все основания в вышеуказанной области (Xc) были комплементарными всем основаниям в участке вышеуказанной области (X), т.е., например, область (Xc) была полностью комплементарной участку области (X). Участок вышеуказанной области (X) предпочтительно представляет область, имеющую последовательность оснований, состоящую, например, из последовательных оснований, начиная от основания на конце (1-ое основание) в вышеуказанной области (Xc) в вышеуказанной области (X).
[0105]
Как описано выше, вышеуказанная область (Yc) может быть комплементарной, например, всей области вышеуказанной области (Y). В этом случае предпочтительно, чтобы, например, вышеуказанная область (Yc) имела ту же длину оснований, что и вышеуказанная область (Y), и состояла из последовательности оснований, комплементарной всей области вышеуказанной области (Y). Более предпочтительно, чтобы вышеуказанная область (Yc) имела ту же длину оснований, что и вышеуказанная область (Y), и все основания в вышеуказанной области (Yc) были комплементарными всем основаниям в вышеуказанной области (Y), т.е., например, область (Yc) была полностью комплементарной области (Y). Следует, однако, отметить, что конфигурация области (Yc) не ограничивается этим, и одно или несколько оснований в области (Yc) могут быть не комплементарны соответствующим основаниям в области (Y), например, как описано выше.
[0106]
Кроме того, как описано выше, вышеуказанная область (Yc) может быть комплементарной, например, участку вышеуказанной области (Y). В этом случае предпочтительно, чтобы, например, вышеуказанная область (Yc) имела ту же длину оснований, что и участок вышеуказанной области (Y), т.е. вышеуказанная область (Yc) состояла из последовательности оснований, длина которой короче длины оснований вышеуказанной области (Y) на одно или более оснований. Более предпочтительно, чтобы вышеуказанная область (Yc) имела ту же длину оснований, что и участок вышеуказанной области (Y), и все основания в вышеуказанной области (Yc) были комплементарными всем основаниям в участке вышеуказанной области (Y), т.е., например, область (Yc) является полностью комплементарной участку области (Y). Участок вышеуказанной области (Y) предпочтительно представляет область, имеющую последовательность оснований, состоящую, например, из последовательных оснований, начиная от основания на конце (1-е основание) в вышеуказанной области (Yc) в вышеуказанной области (Y).
[0107]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN соотношение между числом оснований (Z) в вышеуказанной внутренней области (Z) и числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Y) в вышеуказанной области (Y), и соотношение между числом оснований (Z) в вышеуказанной внутренней области (Z) и числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Xc) в вышеуказанной области (Xc) удовлетворяет, например, условиям следующих уравнений (1) и (2).
Z=X+Y (1)
Z≥Xc+Yc (2)
[0108]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN соотношение между числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Y) в вышеуказанной области (Y) особым образом не ограничивается и удовлетворяет, например, любому условию следующих уравнений:
X=Y (19)
X < Y (20)
X > Y (21).
[0109]
Во второй молекуле ssPN соотношение между числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Xc) в вышеуказанной области (Xc) и соотношение между числом оснований (Y) в вышеуказанной области (Y) и числом оснований (Yc) в вышеуказанной области (Yc) удовлетворяют, например, любому из следующих условий уравнений (a)-(d):
(а) Условия следующих уравнений (3) и (4) удовлетворяются.
X > Xc (3)
Y=Yc (4)
(b) Условия следующих уравнений (5) и (6) удовлетворяются.
X=Xc (5)
Y > Yc (6)
(с) Условия следующих уравнений (7) и (8) удовлетворяются.
X > Xc (7)
Y > Yc (8)
(d) Условия следующих уравнений (9) и (10) выполняются.
X=Xc (9)
Y=Yc (10)
[0110]
В вышеописанных условиях уравнений (а)-(d), например, разница между числом оснований (X) в вышеуказанной области (X) и числом оснований (Xc) в вышеуказанной области (Xc), и разница между числом оснований (Y) в вышеуказанной области (Y) и числом оснований (Yc) в вышеуказанной области (Yc) предпочтительно удовлетворяет следующим условиям.
(а) Условия следующих уравнений (11) и (12) удовлетворяются.
X - Xc=1-10, предпочтительно 1, 2, 3 или 4,
более предпочтительно 1, 2 или 3 (11)
Y - Yc=0 (12)
(b) Условия следующих уравнений (13) и (14) удовлетворяются.
X - Xc=0 (13)
Y - Yc=1-10, предпочтительно 1, 2, 3 или 4,
более предпочтительно 1, 2 или 3 (14)
(с) Условия следующих уравнений (15) и (16) удовлетворяются.
X - Xc=1-10, предпочтительно 1, 2 или 3,
более предпочтительно 1 или 2 (15)
Y - Yc=1-10, предпочтительно 1, 2 или 3,
более предпочтительно 1 или 2 (16)
(d) Условия следующих уравнений (17) и (18) удовлетворяются.
X - Xc=0 (17)
Y - Yc=0 (18)
[0111]
В отношении вторых молекул ssPN вышеуказанных (а)-(d), то один вариант осуществления каждой структуры описан в WO 2012/017919, фиг. 3, и их можно отнести к этому.
[0112]
Молекулы ssPN вышеуказанных (а)-(с) представляют конфигурации, имеющие основание, не выравненное с обеими вышеупомянутыми областями (Xc) и (Yc) в вышеуказанной внутренней области (Z), поскольку, например, вышеуказанные области (Xc) и (X), и области (Yc) и (Y) образуют двойную цепь. Также они могут иметь указанные конфигурации, содержащими основание, не образующее двойную цепь. В вышеуказанной внутренней области (Z) вышеуказанное основание, которое не выравнивается (также относится к основанию, которое не образует двойную цепь), в дальнейшем упоминается как «непарное основание». На фиг. 3 в WO 2012/017919, область вышеуказанного непарного основания показана «F». Число оснований в вышеуказанной области (F) особым образом не ограничивается. Число оснований (F) в вышеуказанной области (F) представляет, например, число оснований «X-Xc» для молекулы ssPN согласно вышеуказанному (a); число оснований «Y-Yc» для молекулы ssPN согласно вышеуказанному (b); и общее число оснований «X-Xc» и число оснований «Y-Yc» для молекулы ssPN согласно вышеуказанному (c).
[0113]
С другой стороны, молекула ssPN, удовлетворяющая вышеуказанному условию (d), сконфигурирована таким образом, что, например, вся область вышеуказанной внутренней области (Z) выравнивается с вышеуказанными областями (Xc) и (Yc), другими словами, вся область вышеуказанной внутренней области (Z) образует двойную цепь. В молекуле ssPN, удовлетворяющей вышеуказанному условию (d), 5'-конец вышеуказанной области (Xc) и 3'-конец вышеуказанной области (Yc) не связаны друг с другом.
[0114]
Общее число оснований в вышеуказанной области (Xc), оснований в вышеуказанной области (Yc), и вышеуказанных неспаренных оснований (F) в вышеуказанной внутренней области (Z) равно числу оснований в вышеуказанной внутренней области (Z). Таким образом, длина вышеуказанной области (Xc) и длина вышеуказанной области (Yc) могут быть определены как соответствующие, в зависимости, например, от длины вышеуказанной внутренней области (Z), числа вышеуказанных неспаренных оснований и положений непарных оснований.
[0115]
Число оснований в вышеуказанной внутренней области (Z) составляет, например, 19 или более. Нижний предел числа оснований составляет, например, 19, предпочтительно 20 и более предпочтительно 21. Верхний предел числа вышеуказанных оснований составляет, например, 50, предпочтительно 40 и более предпочтительно 30. Конкретный пример числа оснований в вышеуказанной внутренней области (Z) равен 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30. Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то, например, такие условия являются предпочтительными.
[0116]
Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная внутренняя область (Z) может представлять, например, область, состоящую только из вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, или область, включающую вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Число оснований вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии составляет, например, 19-30, предпочтительно 19, 20 или 21. Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии также может иметь дополнительную последовательность на ее 5'-конце и/или 3'-конце. Число оснований в вышеуказанной дополнительной последовательности составляет, например, от 1 до 31, предпочтительно от 1 до 21, более предпочтительно от 1 до 11 и еще более предпочтительно от 1 до 7.
[0117]
Число оснований в вышеуказанной области (Xc) составляет, например, от 1 до 29, предпочтительно от 1 до 11, более предпочтительно от 1 до 7, еще более предпочтительно от 1 до 4 и наиболее предпочтительно 1, 2 или 3. Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) или вышеуказанная область (Yc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то, например, число оснований, как описано выше, является предпочтительным. Конкретным примером является следующее: когда число оснований в вышеуказанной внутренней области (Z) составляет от 19 до 30 (например, 19), то число оснований в вышеуказанной области (Xc) составляет, например, от 1 до 11, предпочтительно от 1 до 7, более предпочтительно от 1 до 4 и еще более предпочтительно 1, 2 или 3.
[0118]
Когда вышеуказанная область (Xc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная область (Xc) может представлять, например, область, состоящую только из вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, или область, включающую вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Например, длина вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии является такой, как описано выше. Когда вышеуказанная область (Xc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии также может иметь дополнительную последовательность на ее 5'-конце и/или 3'-конце. Число оснований в вышеуказанной дополнительной последовательности составляет, например, от 1 до 11, предпочтительно от 1 до 7.
[0119]
Число оснований в вышеуказанной области (Yc) составляет, например, от 1 до 29, предпочтительно от 1 до 11, более предпочтительно от 1 до 7, еще более предпочтительно от 1 до 4 и особенно предпочтительно 1, 2 или 3. Когда вышеуказанная внутренняя область (Z) или вышеуказанная область (Xc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то, например, число оснований, как описано выше, является предпочтительным. Конкретным примером является следующее: когда число оснований в вышеуказанной внутренней области (Z) составляет от 19 до 30 (например, 19), то число оснований в вышеуказанной области (Yc) составляет, например, от 1 до 11, предпочтительно от 1 до 7, более предпочтительно 1, 2, 3 или 4 и еще более предпочтительно 1, 2 или 3.
[0120]
Когда вышеуказанная область (Yc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная область (Yc) может представлять, например, область, состоящую только из вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, или область, включающую вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии. Длина вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии представляет, например, описанную выше. Когда вышеуказанная область (Yc) включает вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии, то вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии также может иметь дополнительную последовательность на ее 5'-конце и/или 3'-конце. Число оснований в вышеуказанной дополнительной последовательности составляет, например, от 1 до 11, предпочтительно от 1 до 7.
[0121]
Как описано выше, соотношение между числом оснований в вышеуказанной внутренней области (Z), числом оснований в вышеуказанной области (Xc) и числом оснований в вышеуказанной области (Yc) может быть выражено, например, вышеуказанным уравнением (2): «Z≥Xc+Yc». В частности, число оснований, представленных «Xc+Yc», например, равно числу оснований в вышеуказанной внутренней области (Z) или меньше числа оснований в вышеуказанной внутренней области (Z). В последнем случае «Z - (Xc+Yc)» составляет, например, от 1 до 10, предпочтительно от 1 до 4 и более предпочтительно 1, 2 или 3. Вышеуказанное «Z - (Xc+Yc)» соответствует, например, числу оснований (F) в области непарных оснований (F) в вышеуказанной внутренней области (Z).
[0122]
В вышеуказанной второй молекуле ssPN длины вышеуказанных линкерных областей (Lx) и (Ly) особым образом не ограничиваются. Вышеуказанная линкерная область (Lx) является такой, как описано выше. Когда составляющее звено вышеуказанной линкерной области (Ly) включает основание(я), то нижний предел числа оснований в вышеуказанной линкерной области (Ly) составляет, например, 1, предпочтительно 2 и более предпочтительно 3, и его верхний предел составляет, например, 100, предпочтительно 80 и более предпочтительно 50. Число оснований в каждой из вышеуказанных линкерных областей составляет, в частности, от 1 до 50, от 1 до 30, от 1 до 20, от 1 до 10, от 1 до 7 или от 1 до 4, например, но оно не ограничивается данными примерами.
[0123]
Вышеуказанная линкерная область (Ly) может быть, например, такой же или отличной от вышеуказанной линкерной области (Lx).
[0124]
Полная длина вышеуказанной второй молекулы ssPN особым образом не ограничивается. В вышеуказанной второй молекуле ssPN нижний предел общего числа оснований (число оснований в молекуле ssPN полноразмерной длины) составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51, и наиболее предпочтительно 52, и его верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80. В вышеуказанной второй молекуле ssPN нижний предел общего числа оснований (Lx) и (Ly) составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51 и наиболее предпочтительно 52, и его верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80.
[0125]
В вышеуказанной молекуле ssPN необходимо только, чтобы вышеуказанная линкерная область (Lx) имела вышеуказанную ненуклеотидную структуру, как описано выше, и другие составляющие звенья особым образом не ограничиваются. Примеры вышеуказанных нуклеотидных остатков включают рибонуклеотидный остаток и дезоксирибонуклеотидный остаток. Вышеуказанной нуклеотидный остаток может представлять, например, остаток, который не является модифицированным (немодифицированный нуклеотидный остаток), или остаток, который был модифицирован (модифицированный нуклеотидный остаток). Можно сконструировать вышеуказанную молекулу ssPN с включением вышеуказанного модифицированного нуклеотидного остатка, например, для повышения устойчивости миРНК природного типа к нуклеазе, что позволит повысить стабильность молекулы ssPN. Кроме того, молекула ssPN дополнительно может включать, например, ненуклеотидный остаток в дополнение к вышеуказанному нуклеотидному остатку.
[0126]
Вышеуказанный нуклеотидный остаток является предпочтительным в качестве составляющего звена каждой из вышеуказанной области (Xc), вышеуказанной области (X), вышеуказанной (Y) и вышеуказанной области (Yc). Каждая из вышеуказанных областей состоит, например, из любого из следующих остатков (1)-(3):
(1) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(2) модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(3) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов).
[0127]
Вышеуказанная линкерная область (Lx) может состоять, например, только из вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов) или может состоять из вышеуказанного ненуклеотидного и вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов). Вышеуказанная линкерная область (Lx) состоит, например, из любого из следующих остатков (4)-(7):
(4) ненуклеотидного остатка(ов)
(5) ненуклеотидного остатка(ов) и немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(6) ненуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка (ов)
(7) ненуклеотидного остатка(ов), немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов).
[0128]
Конкретные составляющие звенья вышеуказанной линкерной области (Ly) особым образом не ограничиваются, и их примеры включают вышеуказанные нуклеотидные остатки и вышеуказанные ненуклеотидные остатки, как описано выше. Каждая из вышеуказанных линкерных областей (Ly) может состоять, например, только из вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов), только из вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов) или обоих вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов) и вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов). Каждая из вышеуказанных линкерных областей (Ly) состоит, например, из любого из следующих остатков (1)-(7):
(1) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(2) модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(3) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(4) ненуклеотидного остатка(ов)
(5) ненуклеотидного остатка(ов) и немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(6) ненуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка (ов)
(7) ненуклеотидного остатка(ов), немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов).
[0129]
Примеры вышеуказанной молекулы ssPN, исключая вышеуказанную линкерную область (Lx), включают молекулы, состоящие только из вышеуказанных нуклеотидных остатков; и молекулы, включающие вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанным нуклеотидным остаткам. В вышеуказанной молекуле ssPN, например, вышеуказанные нуклеотидные остатки могут представлять только вышеуказанные немодифицированные нуклеотидные остатки; только вышеуказанные модифицированные нуклеотидные остатки; или оба вышеуказанный немодифицированный нуклеотидный остаток(и) и вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток(и), как описано выше. Когда вышеуказанная молекула ssPN включает как вышеуказанный немодифицированный нуклеотидный остаток(и), так и вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток(и), то число вышеуказанного модифицированного нуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается и, например, в частности, равно, «от одного до нескольких», в частности, например, 1-5, предпочтительно 1-4, более предпочтительно 1-3 и наиболее предпочтительно 1-2. Когда вышеуказанная молекула ssPN включает вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и), то число вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается и, например, составляет «от одного до нескольких», в частности, например, 1 или 2.
[0130]
В вышеуказанной молекуле ssPN, например, вышеуказанный нуклеотидный остаток предпочтительно представляет рибонуклеотидный остаток. В этом случае, например, вышеуказанная молекула ssPN также относится к «молекуле ssRNA» или «молекуле P-ssRNA». Примеры вышеуказанной молекулы ssRNA, исключая вышеуказанную линкерную область (Lx), включают молекулы, состоящие только из вышеуказанных рибонуклеотидных остатков; и молекулу, включающую вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанным рибонуклеотидным остаткам. Как описано выше, в качестве вышеуказанных рибонуклеотидных остатков, например, вышеуказанная молекула ssRNA может включать: только вышеуказанные немодифицированные рибонуклеотидные остатки; только вышеуказанные модифицированные рибонуклеотидные остатки; или оба вышеуказанный немодифицированный рибонуклеотидный остаток(и) и вышеуказанный модифицированный рибонуклеотидный остаток(и).
[0131]
Когда вышеуказанная молекула ssRNA включает, например, вышеуказанный модифицированный рибонуклеотидный остаток в дополнение к вышеуказанным немодифицированным рибонуклеотидным остаткам, то число вышеуказанного модифицированного рибонуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается и представляет, например, от «одного до нескольких», в частности, от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 4, более предпочтительно от 1 до 3 и наиболее предпочтительно 1 или 2. Вышеуказанный модифицированный рибонуклеотидный остаток в противоположность немодифицированному рибонуклеотидному остатку может представлять, например, вышеуказанный дезоксирибонуклеотидный остаток, полученный замещением остатка рибозы на остаток дезоксирибозы. Когда вышеуказанная молекула ssRNA включает, например, вышеуказанный дезоксирибонуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанному немодифицированному рибонуклеотидному остатку(ам), то число вышеуказанного дезоксирибонуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается, и равно, например, «от одного до нескольких», в частности, например, 1-5, предпочтительно 1-4, более предпочтительно 1-3 и наиболее предпочтительно 1 или 2.
[0132]
Вышеуказанная молекула SSPN может включать, например, вещество для введения метки, и может быть помечена вышеуказанным веществом для мечения. Вышеуказанное вещество для введения метки особым образом не ограничивается и может представлять собой, например, флуоресцентное вещество, краситель, изотоп и тому подобное. Примеры вышеуказанного вещества для введения метки включают: флуорофоры, такие как пирен, TAMRA, флуоресцеин, краситель Cy3 и краситель Cy5. Примеры вышеуказанного красителя включают красители Alexa, такие как Alexa 488, и тому подобное. Примеры вышеуказанного изотопа включают стабильные изотопы и радиоизотопы. Среди них предпочтительными являются стабильные изотопы. Например, вышеуказанные стабильные изотопы имеют низкий риск радиационного облучения и при работе не требуют специальных средств. Таким образом, со стабильными изотопами легко обращаться, и это может способствовать снижению затрат. Кроме того, например, вышеуказанный стабильный изотоп не изменяет физических свойств соединения, помеченного им, и, таким образом, обладает отличным свойством в качестве индикатора. Вышеуказанный стабильный изотоп особым образом не ограничивается, и его примеры включают 2H, 13C, 15N, 17O, 18O, 33S, 34S и 36S.
[0133]
В настоящем изобретении термин «алкил» включает, например, алкильные группы с прямой или разветвленной цепью. Количество атомов углерода в вышеуказанном алкиле особым образом не ограничивается и составляет, например, от 1 до 30, предпочтительно от 1 до 6, более предпочтительно от 1 до 4. Примеры вышеуказанной алкильной группы включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, изогексил, н-гептил, н-октил, н-нонил и н-децил. Среди них, например, предпочтительными являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, н-гексил, изогексил и тому подобное.
[0134]
В настоящем изобретении термин «алкенил» включает, например, алкенильные группы с прямой и разветвленной цепью. Примеры вышеуказанного алкенила включают вышеуказанные алкильные группы, содержащие одну или несколько двойных связей и тому подобное. Количество атомов углерода в вышеуказанном алкениле особым образом не ограничивается и равно, например, такому же, как в вышеуказанном алкиле, предпочтительно от 2 до 8. Примеры вышеуказанного алкенила включают винил, 1-пропенил, 2-пропенил, 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил, 1,3-бутадиенил и 3-метил-2-бутенил.
[0135]
В настоящем изобретении термин «алкинил» включает, например, алкинильные с прямой и разветвленной цепью. Примеры вышеуказанного алкинила включают вышеуказанные алкильные группы, содержащие одну или несколько тройных связей и тому подобное. Количество атомов углерода в вышеуказанном алкиниле особым образом не ограничивается и равно, например, такому же, как в вышеуказанном алкиле, предпочтительно от 2 до 8. Примеры вышеуказанного алкинила включают этинил, пропинил и бутинил. Вышеуказанный алкинил может дополнительно содержать, например, одну или несколько двойных связей.
[0136]
В настоящем изобретении термин «арил» включает, например, моноциклические ароматические углеводородные группы и полициклические ароматические углеводородные группы. Примеры вышеуказанной моноциклической ароматической углеводородной группы включают фенил и тому подобное. Примеры вышеуказанной полициклической ароматической углеводородной группы включают 1-нафтил, 2-нафтил, 1-антрил, 2-антрил, 9-антрил, 1-фенантрил, 2-фенантрил, 3-фенантрил, 4-фенантрил и 9-фенантрил. Среди них, например, предпочтительными являются фенил, нафтилы, такие как 1-нафтил и 2-нафтил, и подобные.
[0137]
В настоящем изобретении термин «гетероарил» включает, например, моноциклические ароматические гетероциклические группы и конденсированные ароматические гетероциклические группы. Примеры вышеуказанного гетероарила включают фурилы (например, 2-фурил, 3-фурил), тиенилы (например, 2-тиенил, 3-тиенил), пирролилы (например, 1-пирролил, 2-пирролил, 3-пирролил), имидазолилы (например, 1-имидазолил, 2-имидазолил, 4-имидазолил), пиразолилы (например, 1-пиразолил, 3-пиразолил, 4-пиразолил), триазолилы (например, 1,2,4-триазол-1-ил, 1,2,4-триазол-3-ил, 1,2,4-триазол-4-ил), тетразолилы (например, 1-тетразолил, 2-тетразолил, 5-тетразолил), оксазолилы (например, 2-оксазолил, 4 -оксазолил, 5-оксазолил), изоксазолилы (например, 3-изоксазолил, 4-изоксазолил, 5-изоксазолил), тиазолилы (например, 2-тиазолил, 4-тиазолил, 5-тиазолил), тиадиазолилы, изотиазолилы (например, 3-изотиазолил, 4-изотиазолил, 5-изотиазолил), пиридилы (например, 2-пиридил, 3-пиридил, 4-пиридил), пиридазинилы (например, 3-пиридазинил, 4-пиридазинил), пиримидинилы (например, 2-пиримидинил, 4-пиримидинил, 5-пиримидинил), фуразанилы (например, 3-фуразанил), пиразинилы (например, 2-пиразинил), оксадиазолилы (например, 1,3,4-оксадиазол-2-ил), бензофурилы (например, 2-бензо[b]фурил, 3-бензо[b]фурил, 4-бензо[b]фурил, 5-бензо[b]фурил, 6-бензо[b]фурил, 7-бензо[b]фурил), бензотиенилы (например, 2-бензо[b]тиенил, 3-бензо[b]тиенил, 4-бензо[b]тиенил, 5-бензо[b]тиенил, 6-бензо[b]тиенил, 7-бензо[b]тиенил), бензимидазолилы (например, 1-бензимидазолил, 2-бензимидазолил, 4-бензимидазолил, 5-бензимидазолил), дибензофурилы, бензоксазолилы, бензотиазолилы, хиноксалинилилы (например, 2-хиноксалинил, 5-хиноксалинил, 6-хиноксалинил), циннолинилы (например, 3-циннолинил, 4-циннолинил, 5-циннолинил, 6-циннолинил, 7-циннолинил, 8-циннолинил), хиназолинилы (например, 2-хиназолинил, 4-хиназолинил, 5-хиназолинил, 6-хиназолинил, 7-хиназолинил, 8-хиназолинил), хинолилы (например, 2-хинолил, 3-хинолил, 4-хинолил, 5-хинолил, 6-хинолил, 7-хинолил, 8-хинолил), фталазинилы (например, 1-фталазинил, 5-фталазинил, 6-фталазинил), изохинолилы (например, 1-изохинолил, 3-изохинолил, 4-изохинолил, 5-изохинолил, 6-изохинолил, 7-изохинолил, 8-изохинолил), пурилы, птеридинилы (например, 2-птеридинил, 4-птеридинил, 6-птеридинил, 7-птеридинил), карбазолилы, фенантридинилы, акридинилы (например, 1-акридинил, 2-акридинил, 3-акридинил, 4-акридинил, 9-акридинил), индолилы (например, 1-индолил, 2-индолил, 3-индолил, 4-индолил, 5-индолил, 6-индолил, 7-индолил), изоиндолилы, феназинилы (например, 1-феназинил, 2-феназинил) и фенотиазинилы (например, 1-фенотиазинил, 2-фенотиазинил, 3-фенотиазинил, 4-фенотиазинил).
[0138]
В настоящем изобретении, например, термин «циклоалкил» относится к циклическим насыщенным углеводородным группам, и число атомов углерода в циклоалкиле равно, например, от 3 до 15. Примеры вышеуказанного циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, мостиковые циклические углеводородные группы, спирановые углеводородные группы и тому подобное. Среди них предпочтительными являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, мостиковые циклические углеводородные группы и тому подобное.
[0139]
В настоящем изобретении примеры «мостиковых циклических углеводородных групп» включают бицикло[2.1.0]пентил, бицикло[2.2.1]гептил, бицикло[2.2.2]октил и бицикло[3.2.1]октил, трицикло[2.2.1.0]гептил, бицикло[3.3.1]нонан, 1-адамантил, 2-адамантил.
[0140]
В настоящем изобретении примеры «спирановых углеводородных групп» включают спиро[3,4]октил.
[0141]
В настоящем изобретении термин «циклоалкенил» включает, например, ненасыщенные циклические алифатические углеводородные группы, и число атомов углерода в циклоалкениле равно, например, от 3 до 7. Примеры вышеуказанного циклоалкенила включают циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил и циклогептенил. Среди них предпочтительными являются циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил и циклогексенил. Вышеуказанный термин «циклоалкенил» также включает, например, мостиковые циклические углеводородные группы и спирановые углеводородные группы, имеющие ненасыщенную связь в их кольцах.
[0142]
В настоящем изобретении примеры «арилалкила» включают бензил, 2-фенэтил и нафталинилметил. Примеры «циклоалкилалкила» и «циклилалкила» включают циклогексилметил и адамантилметил. Примеры «гидроксиалкила» включают гидроксиметил и 2-гидроксиэтил.
[0143]
В настоящем изобретении «алкокси» включает, например, группы, состоящие из любой вышеуказанной алкильной группы и кислорода (алкил-О-группы), и их примеры включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси и н-бутокси. Примеры «алкоксиалкила» включают метоксиметил и тому подобное. Примеры «аминоалкила» включают 2-аминоэтил.
[0144]
В настоящем изобретении примеры «гетероциклила» включают 1-пирролинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, 1-пирролидинил, 2-пирролидинил, 3-пирролидинил, пирролидинон, 1-имидазолинил, 2-имидазолинил, 4-имидазолинил, 1-имидазолидинил, 2-имидазолидинил, 4-имидазолидинил, имидазолидинон, 1-пиразолинил, 3-пиразолинил, 4-пиразолинил, 1-пиразолидинил, 3-пиразолидинил, 4-пиразолидинил, пиперидинон, пиперидино, 2-пиперидинил, 3-пиперидинил, 4-пиперидинил, 1-пиперазинил, 2-пиперазинил, пиперазинон, 2-морфолинил, 3-морфолинил, морфолино, тетрагидропиранил и тетрагидрофуранил.
[0145]
В настоящем изобретении примеры «гетероциклилалкила» включают пиперидинилметил и пиперазинилметил. Примеры «гетероциклилалкенила» включают 2-пиперидинилэтенил. Примеры «гетероарилалкила» включают пиридилметил и хинолин-3-илметил.
[0146]
В настоящем изобретении термин «силил» включает группы, представленные химической формулой R3Si-, где R независимо может быть выбран из вышеуказанных алкилов, арилов и циклоалкилов. Примеры силила включают триметилсилильную группу и трет-бутилдиметилсилильную группу. Примеры «силилокси» включают триметилсилилоксигруппу. Примерами «силилоксиалкила» являются триметилсилилоксиметил.
[0147]
В настоящем изобретении примеры «алкилена» включают метилен, этилен и пропилен.
[0148]
В настоящем изобретении вышеописанные различные группы могут быть замещены. Примеры вышеуказанного заместителя включают гидрокси, карбокси, сульфо, атом галогена, алкилгалогенид (галогеналкил, например, CF3, CH2CF3, CH2CCl3), нитро, нитрозо, циано, алкил (например, метил, этил, изопропил, трет-бутил), алкенил (например, винил), алкинил (например, этинил), циклоалкил (например, циклопропил, адамантил), циклоалкилалкил (например, циклогексилметил, адамантилметил), циклоалкенил (например, циклопропенил), циклолалкил, гидроксиалкил (например, гидроксиметил, гидроксиэтил), алкоксиалкил (например, метоксиметил, этоксиметил, этоксиэтил), арил (например, фенил, нафтил), арилалкил (например, бензил, фенэтил), алкиларил (например, п-метилфенил), гетероарил (например, пиридил, фурил), гетероарилалкил (например, пиридилметил), гетероциклил (например, пиперидил), гетероциклилалкенил, гетероциклилалкил (например, морфолилметил), алкокси (например, метокси, этокси, пропокси, бутокси), галогенированный алкокси (например, OCF3), алкенилокси (например, винилокси, аллилокси), арилокси (например, фенилокси), алкилоксикарбонил (например, метоксикарбонил, этоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил), арилалкилокси (например, бензилокси), амино [алкиламино (например, метиламино, этиламино, диметиламино), ациламино (например, ацетиламино, бензоиламино), арилалкиламино (например, бензиламино, тритиламино), гидроксиамино], аминометил), алкиламиноалкил (например, диэтиламинометил), карбамоил, сульфамоил, оксо и тому подобное.
[0149]
(2) Нуклеотидный остаток
Нуклеотидный остаток, составляющий вышеуказанную молекулу нуклеиновую кислоту, содержащуюся в композиции по настоящему изобретению, включает, например, сахар, основание и фосфат в качестве его компонентов. Вышеуказанный нуклеотидный остаток может представлять, например, рибонуклеотидный остаток или дезоксирибонуклеотидный остаток, как описано выше. Вышеуказанный рибонуклеотидный остаток содержит, например, остаток рибозы в качестве сахара; и аденин (А), гуанин (G), цитозин (С) или урацил (U) в качестве основания. Вышеуказанный дезоксирибонуклеотидный остаток содержит, например, остаток дезоксирибозы в качестве сахара; и аденин (А), гуанин (G), цитозин (С) или тимин (T) в качестве основания.
[0150]
Вышеуказанный нуклеотидный остаток может представлять, например, немодифицированный нуклеотидный остаток или модифицированный нуклеотидный остаток. Вышеуказанные компоненты вышеуказанного немодифицированного нуклеотидного остатка являются такими же или, по существу, такими же, как, например, компоненты встречающегося в природе нуклеотидного остатка. Предпочтительно компоненты являются такими же или по существу такими же, как компоненты нуклеотидного остатка, встречающегося в природе в организме человека.
[0151]
Вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток представляет, например, нуклеотидный остаток, полученный модификацией вышеуказанного немодифицированного нуклеотидного остатка. Например, вышеуказанный модифицированный нуклеотид может быть таким, в котором модифицирован любой из компонентов вышеуказанного немодифицированного нуклеотидного остатка. В настоящем изобретении «модификация» означает, например, замещение, добавление и/или делецию любого из вышеуказанных компонентов; и замещение, добавление и/или делецию атома(ов) и/или функциональной группы(групп) в вышеуказанном компоненте (ах). Его также можно назвать «изменением». Примеры вышеуказанного модифицированного нуклеотидного остатка включают встречающиеся в природе нуклеотидные остатки и искусственно модифицированные нуклеотидные остатки. В отношение вышеуказанных модифицированных нуклеотидных остатков, полученных из природы, то, например, они описаны в публикации Limbach et al. (Limbach et al., 1994, Summary: the modified nucleosides of RNA, Nucleic Acids Res. 22: pp. 2183 to 2196, Nucleic Acids Res. 22: pp. 2183-2196). Вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток может представлять, например, остаток альтернативы вышеуказанного нуклеотида.
[0152]
Примеры модификации вышеуказанного нуклеотидного остатка включают модификацию рибозо-фосфатного остова (далее именуемого «рибофосфатным остовом»).
[0153]
В вышеуказанном рибофосфатном остове, например, может быть модифицирован остаток рибозы. В вышеуказанном остатке рибозы, например, может быть модифицирован атом углерода в 2'-положении. В частности, гидроксильная группа, связанная, например, с атомом углерода в 2'-положении, может быть замещена водородом или фтором. Путем замещения гидроксильной группы, связанной с вышеуказанным атомом углерода в 2'-положении, водородом, можно заменить остаток рибозы дезоксирибозой. Вышеуказанный остаток рибозы может быть замещен, например, его стереоизомером, и может быть замещен, например, остатком арабинозы.
[0154]
Вышеуказанный рибофосфатный остов может быть замещен, например, нерибофосфатным остовом, содержащим нерибозный остаток и/или нефосфат. Вышеуказанный нерибофосфатный остов может представлять, например, вышеуказанный рибофосфатный остов, модифицированный таким образом, чтобы он был незаряженным. Примеры альтернативы, полученной замещением нерибофосфатного остова в вышеуказанном нуклеотиде, включают морфолино, циклобутил и пирролидин. Другие примеры вышеуказанной альтернативы включают мономерные остатки искусственной нуклеиновой кислоты. Конкретные примеры включают PNA (пептидную нуклеиновую кислоту), LNA (замкнутую нуклеиновую кислоту) и ENA (нуклеиновые кислоты с 2'-O,4'-этиленовыми мостиками). Среди них PNA является предпочтительной.
[0155]
В вышеуказанном рибофосфатном остове, например, может быть модифицирована фосфатная группа. В вышеуказанном рибофосфатном остове фосфатная группа, находящаяся в ближайшей близости к остатку сахара, называется «α-фосфатной группой». Вышеуказанная α-фосфатная группа заряжена отрицательно, и электрические заряды распределяются равномерно по двум атомам кислорода, которые не связаны с остатком сахара. Среди четырех атомов кислорода в вышеуказанной α-фосфатной группе два атома кислорода, не связанные с остатком сахара в фосфодиэфирной связи между нуклеотидными остатками в дальнейшем, называются «несвязывающими атомами кислорода». С другой стороны, два атома кислорода, которые связаны с остатком сахара в фосфодиэфирной связи между вышеуказанными нуклеотидными остатками в дальнейшем, называются «связывающими атомами кислорода». Например, вышеуказанная α-фосфатная группа предпочтительно модифицируется, чтобы стать незаряженной, или чтобы распределение заряда между вышеуказанными несвязывающими атомами было асимметричным.
[0156]
В вышеуказанной фосфатной группе, например, вышеуказанный несвязывающий атом(ы) кислорода может быть замещен. Вышеуказанный атом(ы) кислорода может быть замещен, например, любым атомом, выбранным из S (серы), Se (селена), B (бора), C (углерода), H (водорода), N (азота) и OR (R представляет, например, алкильную группу или арильную группу), и замещение атомом S является предпочтительным. Предпочтительно, чтобы оба вышеуказанных несвязывающих атома кислорода были замещены, например, и более предпочтительно, чтобы оба несвязывающих атома кислорода были замещены атомом S. Примеры вышеуказанной модифицированной фосфатной группы включают фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, фосфороселенаты, боранофосфаты, боранофосфатные эфиры, гидрофосфонаты, фосфороамидаты, алкилфосфонаты или арилфосфонаты и фосфотриэфиры. В частности, предпочтительным является фосфородитиоат, в котором два вышеуказанных несвязывающих атома кислорода замещены S.
[0157]
В вышеуказанной фосфатной группе, например, вышеуказанный связывающий атом(ы) кислорода может быть замещен. Вышеуказанный атом(ы) кислорода может быть замещен, например, любым атомом, выбранным из S (серы), C (углерода) и N (азота). Примеры вышеуказанной модифицированной фосфатной группы включают: мостиковые фосфорамидаты, полученные в результате замещения N; мостиковые фосфоротиоаты, образующиеся в результате замещения S; и мостиковые метиленфосфонаты, образующиеся в результате замещения С. Предпочтительно замещение вышеуказанного связывающего атома(в) кислорода осуществляют, например, по меньшей мере, в одном из 5'-концевого нуклеотидного остатка и 3'-концевого нуклеотидного остатка вышеуказанной молекулы ssPN. Когда замещение выполняется на 5'-конце, то предпочтительным является замещение на атом С. Когда замещение выполняется на 3'-конце, то предпочтительной является замещение на атом N.
[0158]
Вышеуказанная фосфатная группа может быть замещена, например, вышеуказанным линкером, не содержащим фосфат. Вышеуказанный линкер может включать силоксан, карбонат, карбоксиметил, карбамат, амид, тиоэфир, этиленоксидный линкер, сульфонат, сульфонамид, тиоформацеталь, формацеталь, оксим, метиленимино, метиленметилимино, метиленгидразо, метилендиметилгидразо, метиленоксиметилимино или тому подобное. Предпочтительно линкер может содержать метиленкарбониламино и метиленметилимино.
[0159]
В вышеуказанной молекуле ssPN, например, может быть модифицирован, по меньшей мере, один нуклеотидный остаток на 3'-конце и нуклеотидный остаток на 5'-конце. Например, нуклеотидный остаток может быть модифицирован на любом из 3'-конца и 5'-конца, или нуклеотидные остатки могут быть модифицированы как на 3'-конце, так и на 5'-конце. Вышеуказанная модификация может представлять, например, как описано выше, и предпочтительно модифицируется фосфатная группа(ы) на конце(ах). Например, может быть модифицирована вся вышеуказанная фосфатная группа, или модификации подвергается один или более атомов в вышеуказанной фосфатной группе. В первом случае, например, вся фосфатная группа может быть замещена или делетирована.
[0160]
Модификация вышеуказанного нуклеотидного остатка(ов) на конце(ах) может представлять, например, добавление любой другой молекулы. Примеры вышеуказанной другой молекулы включают функциональные молекулы, такие как вещества для введения метки, описанные выше, и защитные группы. Примеры вышеуказанных защитных групп включают S (серу), Si (кремний), B (бор) и сложноэфирные группы. Функциональные молекулы, такие как вышеуказанные вещества для введения метки, могут быть использованы, например, в детектировании и т.п. вышеуказанной молекулы ssPN.
[0161]
Вышеуказанная другая молекула может быть, например, добавлена к фосфатной группе вышеуказанного нуклеотидного остатка или может быть добавлена к вышеуказанной фосфатной группе, или к вышеуказанному остатку сахара через спейсер. Например, концевой атом вышеуказанного спейсера может быть добавлен или замещен одним из вышеуказанных связывающих атомов кислорода вышеуказанной фосфатной группы или O, N, S или C остатка сахара. Связывающий сайт в вышеуказанном сахарном остатке предпочтительно представляет, например, С в 3'-положении, С в 5'-положении или любой связанный с ним атом. Например, вышеуказанный спейсер также может быть добавлен или замещен концевым атомом вышеуказанной альтернативы нуклеотида, такой как PNA.
[0162]
Вышеуказанный спейсер особым образом не ограничивается, и его примеры включают: (CH2)n-, -(CH2)nN-, -(CH2)nO-, -(CH2)nS-, O(CH2CH2O)nCH2CH2OH, сахара без основания, амид, карбокси, амин, оксиамин, оксимимин, тиоэфир, дисульфид, тиомочевину, сульфонамид и морфолино, и также биотиновые реагенты и флуоресцеиновые реагенты. В вышеуказанных формулах n является положительным целым числом, и n=3 или 6 является предпочтительным.
[0163]
Другие примеры вышеуказанной молекулы, добавляемой к концу, включают красители, интеркалирующие агенты (например, акридины), сшивающие агенты (например, псорален, митомицин С), порфирины (TPPC4, тексафирин, сапфирин), полициклические ароматические углеводороды (например, феназин, дигидрофеназин), искусственные эндонуклеазы (например, EDTA), липофильные носители (например, холестерин, холевая кислота, адамантан-1-уксусная кислота, 1-пиренмасляная кислота, дигидротестостерон, 1,3-бис-O(гексадецил) глицерин, геранилоксигексил, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадецил, пальмитиновую кислоту, миристиновую кислоту, O3-(олеоил)литохолевую кислоту, O3-(олеоил)холевую кислоту, диметокситритил или феноксатиин), пептидные комплексы (например, пептид Antennapedia, пептид Tat), алкилирующие агенты, фосфат, амино, меркапто, ПЭГ (например, ПЭГ-40К), MPEG, [MPEG]2, полиамино, алкил, замещенный алкил, меченые радиоактивным изотопом маркеры, ферменты, гаптены (например, биотин), усилители транспорта/всасывания (например, аспирин, витамин Е, фолиевая кислота) и синтетические рибонуклеазы (например, имидазол, бисимидазол, гистамин, имидазольные кластеры, комплексы акридин-имидазол, комплексы Eu3+ и тетраазамакроциклов).
[0164]
В вышеуказанной молекуле ssPN, например, вышеуказанный 5'-конец может быть модифицирован фосфатной группой или аналогом фосфатной группы. Примеры вышеуказанного фосфорилирования включают:
5'-монофосфат((HO)2(O)P-O-5'); 5'-дифосфат((HO)2(O)P-O-P(HO) (O)-O-5'); 5'-трифосфат ((HO)2(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-гуанозин кэп-группа (7-метилированный или неметилированный, 7 м-G-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-аденозин кэп-группу (Appp); любая модифицированная или немодифицированная нуклеотидная кэп-структура (N-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-монотиофосфат (фосфоротиоат: (HO)2(S)P-O-5'); 5'-монодитиофосфат (фосфородитиоат: (HO)(HS)(S)P-O-5'); 5'-фосфоротиолат ((HO)2(O)P-S-5'); замещенный серой монофосфат, дифосфат и трифосфат (например, 5'-α-тиотрифосфат, 5'-γ-тиотрифосфат и тому подобное); 5'-фосфорамидаты ((HO)2(O)P-NH-5', (HO)(NH2)(O) P-O-5'); 5'-алкилфосфонаты (например, RP(OH)(O)-O-5', (OH)2(O)P-5'-CH2, где R представляет алкил (например, метил, этил, изопропил, пропил или тому подобное)); и 5'-алкилэфирные фосфонаты (например, RP(OH)(O)-O-5', где R представляет алкиловый эфир (например, метоксиметил, этоксиметил или тому подобное)).
[0165]
В вышеуказанном нуклеотидном остатке вышеуказанное основание особым образом не ограничивается. Вышеуказанное основание может быть, например, природным основанием или неприродным основанием. Вышеуказанное основание может быть, например, основанием, полученным из природы, или синтетическим основанием. В качестве вышеуказанного основания, например, может использоваться обычное основание, его модифицированный аналог и тому подобное.
[0166]
Примеры вышеуказанного основания включают: пуриновые основания, такие как аденин и гуанин; и пиримидиновые основания, такие как цитозин, урацил и тимин. Другие примеры вышеуказанного основания включают инозин, тимин, ксантин, гипоксантин, нубуларин, изогуанинин и туберцидин. Примеры вышеуказанного основания также включают: 2-аминонаденин, алкильные производные, такие как 6-метилированный пурин; алкильные производные, такие как 2-пропилированный пурин; 5-галогенаурацил и 5-галогенцитозин; 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин; 6-азоурацил, 6-азоцитозин и 6-азотимин; 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 5-галогенурацил, 5-(2-аминопропил)урацил, 5-аминоаллилурацил; 8-галогенированные, аминированные, тиолированные, тиоалкилированные, гидроксилированные и другие 8-замещенные пурины; 5-трифторметилированный и другие 5-замещенные пиримидины; 7-метилгуанин; 5-замещенные пиримидины; 6-азапиримидины; N-2-, N-6- и O-6-замещенные пурины (включая 2-аминопропиладенин); 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин; дигидроурацил; 3-деаза-5-азацитозин; 2-аминопурин; 5-алкилурацил; 7-алкилгуанин; 5-алкилцитозин; 7-деазааденин; N6, N6-диметиладенин; 2,6-диаминопурин; 5-аминоаллилурацил; N3-метилурацил; замещенные 1,2,4-триазолы; 2-пиридинон; 5-нитроиндолы; 3-нитропиррол; 5-метоксиурацил; урацил-5-оксиуксусную кислоту; 5-метоксикарбонилметилурацил; 5-метил-2-тиоурацил; 5-метоксикарбонилметил-2-тиоурацил; 5-метиламино-2-тиоурацил; 3-(3-амино-3-карбоксипропил)урацил; 3-метилцитозин; 5-метилцитозин; N4-ацетилцитозин; 2-тиоцитозин; N6-метиладенин; N6-изопентиладенин; 2-метилтио-N6-изопентениладенин; N-метилгуанин; и O-алкилированные основания. Примеры пуринов и пиримидинов включают производные, которые описаны в патенте США № 3687808, «Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering», pp. 858-585, edited by Kroschwitz J. I, John Wiley & Sons, 1990, and Englisch et al., Angewandte Chemie, International Edition, 1991, vol. 30, p. 613.
[0167]
Конкретные примеры вышеуказанной молекулы ssPN, которые будут использоваться в настоящем изобретении, включают, не ограничиваясь этим, молекулы ssPN, показанные молекулами PH-0009, PK-7006, PK-7015, PH-7069 и PH-7081, приведенными ниже.
[0168]
II. Молекула одноцепочечной нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность, контролирующую экспрессию гена-мишени, которая содержит линкер, состоящий из нуклеотидного остатка и/или ненуклеотидного остатка
(1) молекула ssNc
В качестве вышеуказанной молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты можно упомянуть молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты, содержащую линкер, состоящий из нуклеотидного остатка(ов) и/или нуклеотидного остатка(ов). Один из вариантов осуществления представляет, например, молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты, описанную в WO 2012/005368, которая содержит от 5'-конца к 3'-концу 5'-концевую область (Xc), внутреннюю область (Z) и 3'-концевую область (Yc) в этом порядке, где:
вышеуказанная внутренняя область (Z) образована соединением внутренней 5'-концевой области (X) и внутренней 3'-концевой области (Y),
вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X),
вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y), и
по меньшей мере, одно из вышеуказанной внутренней области (Z), вышеуказанной 5'-концевой области (Xc) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc) содержит вышеуказанную контрольную последовательность экспрессии (далее также называемую «молекулой ssNc»). Нет необходимости говорить, что это только пример, и специалисты в данной области, очевидно, понимают, что может быть использована любая молекула нуклеиновой кислоты. Следовательно, специалисты в данной области техники могут соответствующим образом получить требуемую молекулу нуклеиновой кислоты на основе известного метода и общих технических знаний в этой области.
[0169]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии представляет последовательность, которая проявляет активность подавления экспрессии вышеуказанного гена-мишени, когда молекулу ssNc по настоящему изобретению вводят в клетку in vivo или in vitro. Вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии особым образом не ограничивается и может быть установлена в зависимости от типа гена-мишени. В качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, например, может быть использована последовательность, связанная с РНК-интерференцией, вызванной siРНК. То есть последовательность РНК цепи из вышеуказанной siРНК, которая связывается с мРНК-мишенью, может быть использована в качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии.
[0170]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X), и вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y). Таким образом, на 5'-конце двойная цепь может образоваться путем обратного фолдига вышеуказанной области (Xc) к области (X) и самоотжига вышеуказанных областей (Xc) и (X), и на 3'-конце двойная цепь может образоваться путем обратного фолдинга вышеуказанной области (Yc) к области (Y) и самоотжига вышеуказанных областей (Yc) и (Y). Таким образом, вышеуказанная молекула ssNc может образовывать двойную цепь в молекуле и представляет собой структуру, четко отличающуюся от структуры, в которой две отдельные одноцепочечные РНК образуют двухцепочечную РНК путем отжига, например, siРНК, используемую для обычной РНК-интерференции.
[0171]
Вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии представляет собой, например, предпочтительно, комплементарную, по меньшей мере, на 90%, более предпочтительно комплементарную, на 95%, еще более предпочтительно комплементарную на 98% и наиболее предпочтительно комплементарную на 100% заранее определенной области вышеуказанного гена-мишени. Когда такая комплементарность выполняется, то, например, немишеневый эффект может быть в достаточной степени снижен.
[0172]
В качестве конкретного примера, когда геном-мишенью является ген люциферазы, то, например, последовательность, показанная в SEQ ID NO: 5, может быть использована в качестве вышеуказанной контрольной последовательности экспрессии, и когда геном-мишенью является ген GAPDH мыши, то последовательность, показанная в SEQ ID NO: 6 может использоваться как вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии.
5'-UCGAAGUACUCGGCGUAGG-3' (SEQ ID NO: 5)
5'-GUUGUCAUAUUUCUCGUGG-3' (SEQ ID NO: 6)
[0173]
В вышеуказанной молекуле ssNC вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии включается, по меньшей мере, в одну из вышеуказанной внутренней области (Z), вышеуказанной 5'-концевой области (Xc) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc), как описано выше. Вышеуказанная молекула ssNc может включать, например, одну контрольную последовательность экспрессии или две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше.
[0174]
В последнем случае вышеуказанная молекула ssNc может включать, например: две или более идентичные контрольные последовательности экспрессии для одного и того же гена-мишени; две или более различных контрольных последовательностей экспрессии для одного и того же гена-мишени; или две или более различных контрольных последовательностей экспрессии для разных генов-мишеней. Когда вышеуказанная молекула ssNc включает две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше, то положения соответствующих контрольных последовательностей экспрессии особым образом не ограничиваются, и они могут находиться в одной области или разных областях, выбранных из вышеуказанной внутренней области (Z), вышеуказанной 5'-концевой области (Xc) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc). Когда вышеуказанная молекула ssNc включает две или более контрольных последовательностей экспрессии, упомянутых выше для разных генов-мишеней, то, например, вышеуказанная молекула ssNc может контролировать экспрессию двух или более видов различных генов-мишеней.
[0175]
Как описано выше, вышеуказанная внутренняя область (Z) состоит из вышеуказанной внутренней 5'-области (X) и вышеуказанной внутренней 3'-области (Y), которые связаны друг с другом. Например, вышеуказанные области (X) и (Y) связаны непосредственно друг с другом без промежуточной последовательности между ними. Вышеуказанная внутренняя область (Z) представляется как «состоящая из вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y), которые связаны друг с другом» просто для указания статуса последовательности между вышеуказанной 5'-концевой областью (Xc) и вышеуказанной 3'-концевой областью (Yc). Это определение не предназначено для ограничения того, например, что при использовании вышеуказанной молекулы ssNc, вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) и вышеуказанная 3'-концевая область (Xc) в вышеуказанной внутренней области (Z) являются дискретными независимыми областями. То есть, например, когда вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии включена в вышеуказанную внутреннюю область (Z), то вышеуказанная контрольная последовательность экспрессии может быть расположена таким образом, чтобы простираться через вышеуказанные области (X) и (Y) в вышеуказанной внутренней области (Z).
[0176]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X). Необходимо только, чтобы вышеуказанная область (Xc) имела последовательность, комплементарную всей области или участку вышеуказанной области (X). В частности, например, вышеуказанная область (Xc) включает или предпочтительно состоит из последовательности, комплементарной всей области или участку области (X). Вышеуказанная область (Xc) может быть, например, полностью комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (X), или одно или несколько оснований в области (Xc) могут быть не комплементарными тому же. Предпочтительно область (Xc) является полностью комплементарной тому же. В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) является комплементарной вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y). Необходимо только, чтобы вышеуказанная область (Yc) имела последовательность, комплементарную всей области или участку вышеуказанной области (Y). Конкретно, например, вышеуказанная область (Yc) включает или предпочтительно состоит из последовательности, комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (Y). Вышеуказанная область (Yc) может быть, например, полностью комплементарной всей области или участку вышеуказанной области (Y), или одно или несколько оснований в вышеуказанной области (Yc) могут быть не комплементарными тому же. Предпочтительно, вышеуказанная область (Yc) является полностью комплементарной тому же. Вышеуказанное выражение «одно или несколько оснований» означает, например, 1-3 основания, предпочтительно 1 основание или 2 основания.
[0177]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) и вышеуказанная внутренняя 5'-концевая область (X) могут быть связаны друг с другом, например, прямо или опосредованно. В первом случае, например, вышеуказанные области (Xc) и (X) могут быть связаны непосредственно посредством фосфодиэфирной связи или тому подобное. В последнем случае, например, можно упомянуть вариант осуществления, в котором линкерная область (Lx) сконфигурирована между вышеуказанной областью (Xc) и вышеуказанной областью (X), и вышеуказанные области (Xc) и (X) связаны посредством вышеуказанной линкерной области (Lx).
[0178]
В вышеуказанной молекуле ssNc, например, вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) и вышеуказанная внутренняя 3'-концевая область (Y) могут быть связаны друг с другом прямо или опосредованно. В первом случае, например, вышеуказанные области (Yc) и (Y) могут быть связаны непосредственно фосфодиэфирной связью или тому подобное. В последнем случае, например, линкерная область (Ly) находится между вышеуказанными областями (Yc) и (Y), и вышеуказанные области (Yc) и (Y) связаны посредством вышеуказанной линкерной области (Ly).
[0179]
Вышеуказанная молекула ssNc может иметь, например, обе или любую одну из вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (Ly). В последнем случае можно упомянуть, например, конфигурацию, имеющую вышеуказанную линкерную область (Lx) между вышеуказанной 5'-концевой областью (Xc) и вышеуказанной внутренней 5'-концевой областью (X), не содержащую вышеуказанную линкерную область (Ly) между вышеуказанной 3'-концевой областью (Yc) и вышеуказанной внутренней 3'-концевой областью (Y), где вышеуказанная область (Yc) и вышеуказанная область (Y) связаны непосредственно. В последнем случае можно упомянуть, например, конфигурацию, имеющую вышеуказанную линкерную область (Ly) между вышеуказанной 3'-концевой областью (Yc) и вышеуказанной внутренней 3'-концевой областью (Y), не содержащую вышеуказанную линкерную область (Lx) между вышеуказанной 5'-концевой областью (Xc) и вышеуказанной внутренней 5'-концевой областью (X), где вышеуказанная область (Xc) и вышеуказанная область (X) связаны непосредственно.
[0180]
Вышеуказанная линкерная область (Lx) и вышеуказанная линкерная область (Ly) каждая предпочтительно имеет структуру, не содержащую самоотжиг внутри самой области.
[0181]
В отношении вышеуказанной молекулы ssNc, то можно упомянуть один вариант осуществления молекулы ssNc, не содержащей вышеуказанной линкерной области, описанный в WO 2012/005368, фиг. 1.
[0182]
В отношении вышеуказанной молекулы ssNc, то один вариант осуществления молекулы ssNc, имеющей вышеуказанную линкерную область, описан в WO 2012/005368, фиг. 2, и ее можно отнести к этому.
[0183]
В вышеуказанной молекуле ssNc число оснований в вышеуказанной 5'-концевой области (Xc), вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X), вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc) особым образом не ограничивается, и оно составляет число, например, описанное ниже. В настоящем изобретении «число оснований» означает, например, «длину», и его также можно назвать «длиной оснований».
[0184]
Как описано выше, например, вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) может быть комплементарной всей области вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X). В этом случае вышеуказанная область (Xc) является такой же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0185]
Кроме того, как описано выше, вышеуказанная 5'-концевая область (Xc) может быть комплементарной, например, участку вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X). В этом случае вышеуказанная область (Xc) является такой же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0186]
Как описано выше, вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) может быть комплементарной, например, всей области вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y). В этом случае вышеуказанная область (Yc) является такой же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0187]
Кроме того, как описано выше, вышеуказанная 3'-концевая область (Yc) может быть комплементарной, например, участку вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y). В этом случае вышеуказанная область (Yc) является такой же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0188]
В вышеуказанной молекуле ssNc соотношение числа оснований (Z) в вышеуказанной внутренней области (Z) к числу оснований (X) в вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и числу оснований (Y) в вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y) и соотношение числа оснований (Z) в вышеуказанной внутренней области (Z) к числу оснований (X) в вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и числу оснований (Xc) в вышеуказанной 5'-концевой области (Xc), является таким же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0189]
В вышеуказанной молекуле ssNc соотношение между числом оснований (X) в вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и числом оснований (Y) в вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y) является таким же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0190]
В вышеуказанной молекуле ssNc соотношение между числом оснований (X) в вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и числом оснований (Xc) в вышеуказанной 5'-концевой области (Xc), числом оснований (Y) в вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y) и числом оснований (Yc) в вышеуказанной 3'-концевой области (Yc) является таким же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0191]
В вышеуказанной молекуле ssNc, несмотря на то, что длина каждой области является такой же, как определено для вышеупомянутой второй молекулы ssPN, настоящее изобретение не ограничивается этим. В настоящем изобретении, например, цифровой диапазон числа оснований раскрывает все положительные целые числа, которые попадают в диапазон, и, например, «1-4 основания» означает все «1, 2, 3, 4 основания» (ниже то же самое).
[0192]
В вышеуказанной молекуле ssNc длины вышеуказанных линкерных областей (Lx) и (Ly) особым образом не ограничиваются. Вышеуказанная линкерная область (Lx) предпочтительно имеет, например, длину, позволяющую вышеуказанной внутренней 5'-концевой области (X) и вышеуказанной 5'-концевой области (Xc) образовать двойную цепь, и вышеуказанная линкерная область (Ly) предпочтительно имеет, например, длину, позволяющую вышеуказанной внутренней 3'-концевой области (Y) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc) образовать двойную цепь. Когда составляющие звенья вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (Ly) включают основание(я), то число оснований вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (Ly) может быть одинаковым или различным, и также их последовательности оснований могут быть одинаковыми или разными. Нижний предел числа оснований в вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (Ly) составляет, например, 1, предпочтительно 2 и более предпочтительно 3, и верхний предел составляет, например, 100, предпочтительно 80 и более предпочтительно 50. Число оснований в каждой из вышеуказанных линкерных областей составляет, например, от 1 до 50, от 1 до 30, от 1 до 20, от 1 до 10, от 1 до 7 или от 1 до 4, не ограничиваясь этим.
[0193]
Полная длина вышеуказанной молекулы ssNc особым образом не ограничиваются. В вышеуказанной молекуле ssNc нижний предел общего числа оснований (числа оснований в полноразмерной молекуле ssPN) составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51 и наиболее предпочтительно 52, и их верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80. В вышеуказанной молекуле ssNc нижний предел общего числа оснований, исключая основания в вышеуказанных линкерных областях (Lx) и (Ly), составляет, например, 38, предпочтительно 42, более предпочтительно 50, еще более предпочтительно 51 и наиболее предпочтительно 52, и их верхний предел составляет, например, 300, предпочтительно 200, более предпочтительно 150, еще более предпочтительно 100 и наиболее предпочтительно 80.
[0194]
Примеры составляющих звеньев в вышеуказанной молекуле ssNc особым образом не ограничиваются и включают, например, нуклеотидные остатки. Вышеуказанный нуклеотидный остаток может представлять собой, например, рибонуклеотидный остаток или дезоксирибонуклеотидный остаток. Вышеуказанный нуклеотидный остаток может быть, например, нуклеотидным остатком, который не является модифицированным (немодифицированный нуклеотидный остаток), или нуклеотидным остатком, который был модифицирован (модифицированный нуклеотидный остаток). Можно сконструировать вышеуказанную молекулу ssNc с включением вышеуказанного модифицированного нуклеотидного остатка, например, для повышения устойчивости молекулы ssNc к нуклеазе, что позволит повысить стабильность молекулы ssNc. Кроме того, молекула ssNc дополнительно может включать, например, ненуклеотидный остаток в дополнение к вышеуказанному нуклеотидному остатку.
[0195]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанный нуклеотидный остаток является предпочтительным в качестве составляющего звена каждой из вышеуказанной внутренней области (Z), вышеуказанной 5'-концевой области (Xc) и вышеуказанной 3'-концевой области (Yc). Каждая из вышеуказанных областей состоит, например, из любого из следующих остатков (1)-(3):
(1) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(2) модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(3) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов).
[0196]
В вышеуказанной молекуле ssNc составляющие звенья вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (L) особоым образом не ограничиваются, и примеры включают вышеуказанные нуклеотидные остатки и вышеуказанные ненуклеотидные остатки. Каждая из вышеуказанных линкерных оластей может состоять, например, только из вышеуказанного нуклеотидного остатка(в), только из вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов), или обоих вышеуказанного нуклеотидного остатка(в) и вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов). Каждая из вышеуказанных линкерных областей состоит, например, из любого из следующих остатков (1)-(7):
(1) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(2) модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(3) немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(4) ненуклеотидного остатка(ов)
(5) ненуклеотидного остатка(ов) и немодифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(6) ненуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов)
(7) ненуклеотидного остатка(ов), немодифицированного нуклеотидного остатка(ов) и модифицированного нуклеотидного остатка(ов).
[0197]
Когда вышеуказанная молекула ssNc содержит как вышеуказанную линкерную область (Lx), так и вышеуказанную линкерную область (Ly), то, например, оба составляющих звена могут быть одинаковыми или различными. Конкретные примеры этого включают форму, в которой составляющее звено обеих линкерных областей представляет вышеуказанные нуклеотидные остатки, форму, в которой составляющее звено обеих линкерных областей представляет вышеуказанные ненуклеотидные остатки, форму, в которой составляющее звено одной области представляет вышеуказанные нуклеотидные остатки, и составляющее звено другой линкерной области представляет ненуклеотидные остатки и тому подобное.
[0198]
Примеры вышеуказанной молекулы ssNc включают молекулы, состоящие только из вышеуказанных нуклеотидных остатков; и молекулы, включающие вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанным нуклеотидным остаткам. В вышеуказанной молекуле ssNc, например, вышеуказанные нуклеотидные остатки могут представлять только вышеуказанные немодифицированные нуклеотидные остатки; только вышеуказанные модифицированные нуклеотидные остатки; или оба вышеуказанный немодифицированный нуклеотидный остаток(и) и вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток(ов), как описано выше. Когда вышеуказанная молекула ssNc включает как вышеуказанный немодифицированный нуклеотидный остаток(и), так и вышеуказанный модифицированный нуклеотидный остаток(и), то число вышеуказанного модифицированного нуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается и составляет, например, «от одного до нескольких», в частности, например, от 1 до 5, предпочтительно от 1 до 4, более предпочтительно от 1 до 3 и наиболее предпочтительно 1 или 2. Когда вышеуказанная молекула ssNc включает вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и), то число вышеуказанного ненуклеотидного остатка(ов) особым образом не ограничивается и составляет, например, «от одного до нескольких», в частности, например, 1-8, 1-6, 1-4, 1, 2 или 3.
[0199]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанный нуклеотидный остаток предпочтительно представляет, например, рибонуклеотидный остаток. В этом случае вышеуказанная молекула ssNc также относится к «молекуле RNA» или «молекуле ssRNA». Примеры вышеуказанной молекулы ssRNA включают молекулы, состоящие только из вышеуказанных рибонуклеотидных остатков; и молекулы, включающие вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) в дополнение к вышеуказанным рибонуклеотидным остаткам. Как описано выше, в качестве вышеуказанных рибонуклеотидных остатков, например, вышеуказанная молекула ssRNA может включать: вышеуказанные немодифицированные рибонуклеотидные остатки; вышеуказанные модифицированные рибонуклеотидные остатки; или оба вышеуказанный немодифицированный рибонуклеотидный остаток(и) и вышеуказанный модифицированный рибонуклеотидный остаток (и).
[0200]
Когда вышеуказанная молекула ssRNA включает, например, вышеуказанный модифицированный рибонуклеотидный остаток в дополнение к вышеуказанным немодифицированным рибонуклеотидным остаткам, то число вышеуказанного модифицированного рибонуклеотидного остатка(ов) является таким же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0201]
Вышеуказанная молекула ssNc может включать, например, вещество для введения метки и может быть помечена вышеуказанным веществом для введения метки. Вышеуказанное вещество для введения метки является таким же, как определено для вышеуказанной второй молекулы ssPN.
[0202]
(2) Нуклеотидный остаток
Вышеуказанный нуклеотидный остаток является таким же, как определено для вышеуказанной молекулы ssPN.
[0203]
(3) Ненуклеотидный остаток
Вышеуказанный ненуклеотидный остаток особым образом не ограничивается. Вышеуказанная молекула ssNc может содержать, как вышеуказанный ненуклеотидный остаток, например, ненуклеотидную структуру, содержащую пирролидиновый скелет или пиперидиновый скелет. Вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) предпочтительно присутствует, например, по меньшей мере, в одной из вышеуказанной линкерной области (Lx) и вышеуказанной линкерной области (Ly). Вышеуказанный ненуклеотидный остаток(и) может присутствовать, например, в вышеуказанной линкерной области (Lx) или вышеуказанной линкерной области (Ly) или в обеих вышеуказанных линкерных областях. Вышеуказанная линкерная область (Lx) и вышеуказанная линкерная область (Ly) могут быть, например, одинаковыми или различными.
[0204]
Вышеуказанный пирролидиновый скелет является таким же, как определено для пирролидинового скелета в вышеуказанной молекуле ssPN.
[0205]
Вышеуказанный пиперидиновый скелет является таким же, как определено для пиперидинового скелета в вышеуказанной молекуле ssPN.
[0206]
Вышеуказанные линкерные области могут состоять, например, только из ненуклеотидного остатка(ов), имеющего вышеуказанную ненуклеотидную структуру, или могут содержать ненуклеотидный остаток(и), имеющий вышеуказанную ненуклеотидную структуру, и нуклеотидный остаток(и).
[0207]
Вышеуказанная линкерная область представлена, например, следующей формулой (I). Вышеуказанная линкерная область является такой же, как определено для линкерной области в вышеуказанной молекуле ssPN.
[208]
[0209]
Когда вышеуказанная линкерная область (Ly) представлена вышеуказанной формулой (I), то, например, вышеуказанная линкерная область (Ly) является такой же, как определено для вышеуказанной линкерной области (Lx).
[0210]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанная линкерная область (Lx) может содержать, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из аминокислотного остатка, остатка полиамина и остатка поликарбоновой кислоты. Вышеуказанная линкерная область может содержать или не содержать остаток, отличный от аминокислотного остатка, остатка полиамина и остатка поликарбоновой кислоты. Например, вышеуказанная линкерная область может содержать любой остаток поликарбоновой кислоты, остаток терефталевой кислоты и аминокислотный остаток.
[0211]
В настоящем изобретении «полиамин» означает любое соединение, содержащее несколько (две, три или более) аминогрупп. Вышеуказанная «аминогруппа» не ограничивается группой -NH2 и также включает иминогруппу (-NH-). В настоящем изобретении вышеуказанный полиамин особым образом не ограничивается, и его примеры включают 1,4-диаминобензол, 1,3-диаминобензол, 1,2-диаминобензол и тому подобное. Кроме того, в настоящем изобретении «поликарбоновая кислота» означает любое соединение, содержащее несколько (две, три или более) карбоксильных групп. В настоящем изобретении вышеуказанная поликарбоновая кислота особым образом не ограничивается, и ее примеры включают 1,4-бензолдикарбоновую кислоту (терефталевая кислота), 1,3-бензолдикарбоновую кислоту (изофталевая кислота), 1,2-бензолдикарбоновую кислоту (фталевая кислота) и тому подобное. Кроме того, в настоящем изобретении «аминокислота» означает любое органическое соединение, содержащее одну или более аминогрупп и одну или более карбоксильных групп в молекуле, как указано ниже. Вышеуказанная «аминогруппа» не ограничивается группой -NH2 и также включает иминогруппу (-NH-).
[0212]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанный аминокислотный остаток может состоять из множества связанных между собой аминокислотных остатков. В настоящем изобретении аминокислотный остаток, который представляет собой множество связанных между собой аминокислотных остатков, представляет, например, остаток, содержащий пептидную структуру. Более конкретно, вышеуказанный аминокислотный остаток, который представляет собой множество связанных между собой аминокислотных остатков, представляет, например, аминокислотный остаток приведенной ниже химической формулы (I), где приведенная ниже химическая формула (Ia) представляет пептид (например, димер на основе глицина или тример на основе глицина и т.д.).
[0213]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанный аминокислотный остаток может представлять остаток глицина, остаток амида терефталевой кислоты, остаток пролина или остаток лизина. Вышеуказанный аминокислотный остаток может представлять модифицированный аминокислотный остаток или производное аминокислоты.
[0214]
В вышеуказанной молекуле ssNc вышеуказанный остаток линкерной области представлен, например, следующей химической формулой (I-0):
[0215]
[0216]
в вышеуказанной химической формуле (I-0),
Q11 и Q12 каждый независимо представляет простую связь, CH2 (метиленовую группу), NH (иминогруппу), C=O (карбонильную группу), C=S (тиокарбонильную группу), C=NH (иминометиленовую группу), O или S;
Q1 и Q2 каждый независимо представляет простую связь, CH2 (метиленовую группу), NH (иминогруппу), C=O (карбонильную группу), C=S (тиокарбонильную группу), C=NH (иминометиленовую группу), O или S;
Y1 и Y2 каждый независимо представляет простую связь, CH2, NH, O или S;
L1 представляет алкиленовую цепь, содержащую n атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или может быть не замещен ОН, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH или SRa; или
L1 представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
при условии, что: когда Y1 представляет NH, O или S, то атом, связанный с Y1 в L1, представляет углерод, атом, связанный с OR1 в L1, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
L2 представляет алкиленовую цепь, содержащую m атомов углерода, и атом водорода при атоме углерода алкилена может быть замещен или не замещен OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH или SRc; или
L2 представляет полиэфирную цепь, полученную замещением, по меньшей мере, одного атома углерода в вышеуказанной алкиленовой цепи атомом кислорода;
при условии, что: когда Y2 представляет NH, О или S, то атом, связанный с Y2 в L2, представляет атом углерода, атом, связанный с OR2 в L2, является атомом углерода, и атомы кислорода не являются смежными друг с другом;
Ra, Rb, Rc и Rd каждый независимо является заместителем или защитной группой;
m равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
n равно целому числу в диапазоне от 0 до 30;
вышеуказанная область X и вышеуказанная область Y связаны посредством вышеуказанного линкерного остатка через -OR1- или -OR2-,
где R1 и R2 могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R1 и R2 каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или вышеуказанную структуру (I-0);
А представляет любую атомную группу.
[0217]
Комбинация вышеуказанной области (X) и вышеуказанной области (Y) с -OR1- и -OR2- особым образом не ограничивается и может представлять, например, любое из следующих условий.
Условие (1):
вышеуказанная область X связана со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2-, и вышеуказанная область Y связана с ней через -OR1-.
Условие (2):
вышеуказанная область X связана со структурой вышеуказанной формулы (I) через -OR2-, и вышеуказанная область Y связана с ней через -OR1-.
[0218]
В вышеуказанной химической формуле (I-0), например, Q11 может представлять C=O (карбонильную группу), и Q1 может представлять NH (иминогруппу). Кроме того, например, Q11 может представлять NH (иминогруппу), и Q1 может представлять C=O (карбонильную группу). Кроме того, например, Q12 может представлять C=O (карбонильную группу), и Q2 может представлять NH (иминогруппу). Кроме того, например, Q12 может представлять NH (иминогруппу), и Q2 может представлять C=O (карбонильную группу).
[0219]
В вышеуказанной химической формуле (I-0) каждый из Q11 и Q12 может представлять, например, карбонильную группу. В этом случае каждый из Q1 и Q2 предпочтительно является иминогруппой. Кроме того, в этом случае структура следующей химической формулы (Iα) более предпочтительно представлена следующей химической формулой (Iα2).
[0220]
[0221]
В вышеуказанной химической формуле (Iα2), R100 представляет любой заместитель, который может присутствовать или отсутствовать. Когда он присутствует, то может присутствовать один или несколько. Когда присутствует несколько, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга. Примеры вышеуказанного любого заместителя для R100 включают указанные ниже заместители, примеры которых приведены для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd. Более конкретные примеры включают атом галогена, гидрокси, алкокси, амино, карбокси, сульфо, нитро, карбамоил, сульфамоил, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, арил, арилалкил, алкиларил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклоалкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, силил, силилоксиалкил, пирролил, имидазолил и тому подобное. Структура вышеуказанной химической формулы (Iα2) более предпочтительно представлена следующей химической формулой (Iα3).
[0222]
[0223]
Когда Q11 и Q12 являются карбонильными группами, и Q1 и Q2 представляют иминогруппы, то линкерный остаток вышеуказанной химической формулы (I-0) может представлять остаток амида карбоновой кислоты или остаток карбоновой кислоты. Например, структура «ТРА» в приведенном ниже примере может представлять остаток терефталамида или остаток терефталевой кислоты, представленный вышеуказанной химической формулой (Iα3).
[0224]
В вышеуказанной химической формуле (I-0) каждый из Q11 и Q12 может быть иминогруппой. В этом случае каждый из Q1 и Q2 предпочтительно представляет карбонильную группу. В этом случае структура следующей химической формулы (Iβ) более предпочтительно представлена следующей химической формулой (Iβ2).
[0225]
[0226]
В вышеуказанной химической формуле (Iβ2), R100 представляет любой заместитель, который может присутствовать или отсутствовать. Когда он присутствует, то может присутствовать один или несколько заместителей. Когда присутствует несколько, то они могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга. В частности, например, он является таким же как R100 в вышеуказанной химической формуле (Iα2). Кроме того, структура вышеуказанной химической формулы (Iβ2) более предпочтительно представлена следующей химической формулой (Iβ3).
[0227]
[0228]
В вышеуказанной молекуле ssNc, когда вышеуказанный линкерный остаток представляет аминокислотный остаток, то вышеуказанный аминокислотный остаток представлен, например, следующей химической формулой (I). Структура следующей химической формулы (I) является одним из примеров структуры, представленной вышеуказанной химической формулой (I-0).
[0229]
[0230]
В вышеуказанной формуле (I), например, X1, X2, Y1, Y2, L1 и L2 имеют значения, определенные выше.
Последовательность, комплементарная контрольной последовательности экспрессии, каждая связана с вышеуказанным аминокислотным остатком через -OR1- или -OR2-,
где R1 и R2 могут присутствовать или отсутствовать, и когда они присутствуют, то R1 и R2 каждый независимо представляет нуклеотидный остаток или вышеуказанную структуру (I); и
А представляет любую атомную группу, при условии, что следующая химическая формула (Ia) представляет аминокислоту или пептид.
[0231]
[0232]
Атомная группа А в вышеуказанной химической формуле (I), (Iα) или (Ia) может содержать или не содержать, например, по меньшей мере, одно, выбранное из группы, состоящей из атомной группы с цепью, алициклической атомной группы, ароматической атомной группы, гетероароматической атомной группы и гетероалициклической атомной группы. Несмотря на то, что вышеуказанная атомная группа с цепью особым образом не ограничивается, можно упомянуть, например, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, силил, силилоксиалкил и тому подобное. Несмотря на то, что вышеуказанная алициклическая атомная группа особым образом не ограничивается, можно упомянуть, например, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклилалкил и тому подобное. Несмотря на то, что вышеуказанная ароматическая атомная группа особым образом не ограничивается, можно упомянуть, например, арил, арилалкил, алкиларил, арил, конденсированный с кольцом арил, конденсированный с кольцом арилалкил, конденсированный с кольцом алкиларил и тому подобное. Несмотря на то, что вышеуказанная гетероароматическая атомная группа особым образом не ограничивается, и ее примеры включают гетероарил, гетероарилалкил, алкилгетероарил, конденсированный с кольцом гетероарил, конденсированный с кольцом гетероарилалкил, конденсированный с кольцом арил, конденсированный с кольцом алкилгетероарил и тому подобное. В атомной группе А в вышеуказанной химической формуле (I), (Iα) или (Ia) каждая из вышеуказанных атомных групп может или может дополнительно не содержать заместитель или защитную группу. Когда имеется несколько вышеуказанных заместителей или защитных групп, то они могут быть одинаковыми или различными. Вышеуказанные заместители представляют, например, заместители, которые были приведены для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd, более конкретно, например, атом галогена, гидрокси, алкокси, амино, карбокси, сульфо, нитро, карбамоил, сульфамоил, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, арил, арилалкил, алкиларил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклилалкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, силил, силилоксиалкил, пирролил, имидазолил и тому подобное. Вышеуказанные защитные группы являются, например, такими же, как те, которые были приведены в качестве примера для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd.
[0233]
В настоящем изобретении «аминокислота» относится, как было упомянуто выше, к любому органическому соединению, содержащему, по меньшей мере, одну аминогруппу и, по меньшей мере, одну карбоксильную группу в молекуле. Вышеуказанная «аминогруппа» особым образом не ограничивается группой -NH2, и также включает иминогруппу (-NH-). Например, пролин, гидроксипролин и тому подобное, не содержащие -NH2-группу в молекуле, но содержащие иминогруппу (-NH-), включаются в определение «аминокислоты» в настоящем изобретении. В настоящем изобретении вышеуказанная «аминокислота» может быть, как упомянуто ниже, природной аминокислотой или искусственной аминокислотой. Например, поскольку соединение, представленное приведенной ниже химической формулой (Ia2) или (Ia3), содержит аминогруппу и карбоксильную группу в молекуле, то оно включается в определение «аминокислоты» в настоящем изобретении. Следовательно, например, вышеуказанная химическая формула (I), в которой атомная группа А представляет собой структуру, показанную приведенной ниже химической формулой (А2) или химической формулой (А2а), включается в определение «аминокислотного остатка» в настоящем изобретении. Например, структура «ТРА» в приведенном ниже примере также включается в определение «аминокислотного остатка» в настоящем изобретении. «Пептид» в настоящем изобретении относится к органическому соединению, имеющему структуру, в которой не менее 2 молекул аминокислоты связаны пептидной связью. Вышеуказанная пептидная связь может представлять структуру амида кислоты или структуру имида кислоты. Когда присутствуют многочисленные аминогруппы в молекуле аминокислоты или пептида, представленной вышеуказанной химической формулой (Ia), то аминогруппа, четко показанная в вышеуказанной химической формуле (Ia), может представлять любую аминогруппу. Кроме того, когда в молекуле аминокислоты или пептида, представленной вышеуказанной химической формулой (Ia), присутствуют многочисленные карбоксильные группы, то карбоксильная группа, четко показанная в вышеуказанной химической формуле (Ia), может представлять любую карбоксильную группу.
[0234]
В вышеуказанном аминокислотном остатке миРНК природного типа по настоящему изобретению, то вышеуказанная аминокислота может быть, как упомянуто выше, природной аминокислотой или искусственной аминокислотой. В настоящем изобретении «природная аминокислота» относится к аминокислоте, имеющей встречающуюся в природе структуру или ее оптическому изомеру. Способ получения вышеуказанной природной аминокислоты особым образом не ограничивается и, например, она может быть получена из природы или может быть синтезирована. В настоящем изобретении, кроме того, «искусственная аминокислота» относится к аминокислоте, имеющей структуру, не встречающуюся в природе. То есть вышеуказанная искусственная аминокислота представляет аминокислоту, то есть производное карбоновой кислоты, содержащее аминогруппу (органическое соединение, содержащее, по меньшей мере, одну аминогруппу и, по меньшей мере, одну карбоксильную группу в молекуле) и имеющую структуру, не встречающуюся в природе. Вышеуказанная искусственная аминокислота предпочтительно не содержит, например, гетероцикл. Вышеуказанная аминокислота может быть аминокислотой, составляющей, например, белок. Вышеуказанная аминокислота может представлять, например, по меньшей мере, один вид, выбранный из группы, состоящей из глицина, α-аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, цистина, глутамина, глутаминовой кислоты, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, гидроксилизина, метионина, фенилаланина, серина, треонина, тирозина, валина, пролина, 4-гидроксипролина, триптофана, β-аланина, 1-амино-2-карбоксициклопентана, аминобензойной кислоты, аминопиридинкарбоновой кислоты и аминокислоты, представленной следующей химической формулой (Ia2) и может или может дополнительно не содержать заместитель или защитную группу. Примеры вышеуказанного заместителя включают заместители, примеры которых приведены для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd. Более конкретно, можно упомянуть, например, атом галогена, гидрокси, алкокси, амино, карбокси, сульфо, нитро, карбамоил, сульфамоил, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, арил, арилалкил, алкиларил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклилалкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, силил, силилоксиалкил, пирролил, имидазолил и тому подобное. Вышеуказанная защитная группа является такой же, как, например, защитные группы, примеры которых приведены для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd. Когда аминокислота вышеуказанной химической формулы (Ia), которая не является пептидом, содержит изомеры, такие как оптический изомер, геометрический изомер, стереоизомер и тому подобное, то может быть использован любой изомер.
[0235]
[0236]
В вышеуказанной химической формуле (Ia2) R100 является необязательным заместителем и может присутствовать или отсутствовать. Когда он присутствует, то его число может составлять один или более, и, когда присутствует несколько заместителей, то они могут быть одинаковыми или различными. Примеры вышеуказанного необязательного заместителя для R100 включают заместители, примеры которых приведены для вышеуказанных Ra, Rb, Rc и Rd, более конкретно, например, атом галогена, гидрокси, алкокси, амино, карбокси, сульфо, нитро, карбамоил, сульфамоил, алкил, алкенил, алкинил, галогеналкил, арил, арилалкил, алкиларил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклилалкил, гидроксиалкил, алкоксиалкил, аминоалкил, силил, силилоксиалкил, пирролил, имидазолил и тому подобное. Структура вышеуказанной химической формулы (Ia2) может представлять, например, следующую химическую формулу (Ia3).
[0237]
[0238]
Когда структура вышеуказанной химической формулы (Ia) представляет вышеуказанную химическую формулу (Ia2), то структура атомной группы A в вышеуказанной химической формуле (I) представлена следующей химической формулой (A2). R100 в следующей химической формуле (А2) является таким же, как в вышеуказанной химической формуле (Ia2). Когда структура вышеуказанной химической формулы (Ia) представляет вышеуказанную химическую формулу (Ia3), то структура атомной группы A в вышеуказанной химической формуле (I) представлена следующей химической формулой (A2a).
[0239]
[0240]
Примеры структуры вышеуказанной химической формулы (I) включают следующие химические формулы (I-1)-(I-7). В следующих химических формулах (I-1)-(I-7) n и m являются такими же, как определено для вышеуказанной химической формулы (I).
[0241]
[0242]
В вышеуказанных химических формулах (I-1)-(I-7) n и m особым образом не ограничиваются, и имеют значения, определенные выше. Конкретные примеры включают n=11 и m=12 или n=5 и m=4 в вышеуказанной химической формуле (I-1), n=5 и m=4 в вышеуказанной химической формуле (I-4), n=4 и m=4 в вышеуказанной химической формуле (I-6), и n=5 и m=4 в вышеуказанной химической формуле (1-7). Их структуры показаны в следующих химических формулах (I-1a), (I-1b), (I-4a), (I-6a) и (I-7a).
[0243]
[0244]
Примеры вышеуказанной молекулы ssNc, которая предназначена для применения в настоящем изобретении, включают молекулы ssNc, показанные NK-7006 и NK-7007, которые приводятся ниже.
[0245]
Молекула нуклеиновой кислоты, которая должна содержаться в композиции по настоящему изобретению, может быть получена известным способом. Например, она может быть получена согласно способу, описанному в WO 2012/017919, WO 2013/103146, WO 2012/005368 или WO 2013/077446.
[0246]
Несмотря на то, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции по настоящему изобретению особым образом не ограничивается, когда композиция представляет фармацевтическую композицию, то обычно оно составляет 0,0001-60 мас.%, предпочтительно 0,001-15 мас.%, более предпочтительно 0,01-1 мас.% в расчете на массу всей фармацевтической композиции.
[0247]
2. Буфер
Композиция по настоящему изобретению содержит буфер. В настоящем изобретении буфер относится к раствору (в частности, водному раствору), обладающему буферным действием, и обеспечивается содержащимся буферным агентом. Буферный агент в настоящем изобретении означает стабилизатор рН водного раствора, и может быть выбран из обычно используемого в области производства лекарственных средств.
В настоящем изобретении разрушение молекулы нуклеиновой кислоты в композиции может быть предотвращено с использованием буфера.
В качестве буфера, предназначенного для применения в настоящем изобретении, можно упомянуть буфер, который доводит рН композиции не ниже 4,0 и не выше 9,0. Предпочтительным является буфер, который доводит рН композиции не ниже 5,5 и не выше 7,5, и более предпочтительным является буфер, который доводит рН композиции не ниже 6,0 и не выше 7,0. Кроме того, предпочтительным является буфер, который доводит рН композиции не ниже 6,1 и не выше 6,9, предпочтительным является буфер, который доводит рН композиции не ниже 6,2 и не выше 6,8, буфер, который доводит рН композиции не ниже 6,3 и не выше 6,7 является более предпочтительным, буфер, который доводит рН композиции не ниже 6,4 и не выше 6,6 является еще более предпочтительным, и буфер, который устанавливает рН композиции на значении 6,5, является особенно предпочтительным.
[0248]
В качестве буферного агента, который предназначен для применения в настоящем изобретении, можно упомянуть, в частности, один или более буферных агентов, выбранных из аскорбиновой кислоты, L-аспартата магния, сульфита натрия, L-аргинина, L-аргинина гидрохлорида, бензойной кислоты, бензоата натрия, эпсилон-аминокапроновой кислоты, хлорида аммония, хлорида калия, хлорида натрия, глюкозамина гидрохлорида, соляной кислоты, триэтаноламина, разбавленной соляной кислоты, лимонной кислоты, безводной лимонной кислоты, безводного цитрата натрия, лимонной кислоты, цитрата натрия гидрата, гидроцитрата натрия, динатрия цитрата, тринатрия цитрата, тринатрия цитрата дигидрата, цитрата калия, глицилглицина, глицина, глюконо-σ-лактона, глюконовой кислоты, глюконата кальция гидрата, L-глутаминовой кислоты, L-глутамата мононатрия, креатинина, хлорбутанола, динатрия гидрофосфата, дигидрофосфата натрия, янтарной кислоты, динатрия сукцината гексагидрата, уксусной кислоты, ацетата аммония, ацетата калия, ацетата натрия гидрата, диизопропаноламина, диэтаноламина, винной кислоты, L-тартрата натрия, гидроксида калия, гидроксида натрия, таурина, карбоната натрия, карбоната натрия гидрата, гидрокарбоната натрия, триизопропаноламина, триэтаноламина, трометамола, диоксида углерода, молочной кислоты, лактата кальция гидрата, раствора лактата натрия, L-гистидина, 4-(2-гидроксиэтила), ледяной уксусной кислоты, глюкозы, фумарата мононатрия, пропионата натрия, бензалкония хлорида, смешанного растворителя группы ароматических углеводородов, бората аммония, малеиновой кислоты, безводного ацетата натрия, безводного карбоната натрия, динатрия гидрофосфата ангидрата, тринатрия фосфата ангидрата, дигидрофосфата натрия ангидрата, метафосфата натрия, метансульфоновой кислоты, серной кислоты, калийалюминия сульфата гидрата, фосфорной кислоты, моногидрофосфата натрия гептагидрата, тринатрия фосфата, двухосновного фосфата натрия гидрата, динатрия гидрофосфата натрия гидрата, дигидрофосфата натрия гидрата, дигидрофосфата калия, дигидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия моногидрата. Из них предпочтительной является лимонная кислота.
Следовательно, в качестве буфера, который предназначен для применения для композиции по настоящему изобретению, предпочтительно можно упомянуть буфер, содержащий лимонную кислоту.
В настоящем изобретении буфер предпочтительно содержит кислоту, приведенную в качестве примера вышеуказанного буферного агента и ее соль, или соли двух или более видов кислот, приведенных в качестве примера вышеуказанного буферного агента. Более предпочтительно можно упомянуть буфер, содержащий лимонную кислоту и ее соль (например, лимонную кислоту и цитрат натрия, лимонную кислоту, тринатрия цитрат и тому подобное), буфер, содержащий фосфорную кислоту и ее соль (например, фосфорную кислоту, дигидрофосфат натрия и тому подобное), и буфер, содержащий два вида фосфатов (например, динатрия гидрофосфат и дигидрофосфат натрия). Особенно предпочтительным является буфер, содержащий лимонную кислоту и ее соль.
[0249]
Количество буфера, используемого для композиции по настоящему изобретению, может быть любым при условии, что оно может довести значение рН до требуемого диапазона. Например, его можно соответствующим образом определить, чтобы содержание буферного агента в композиции находилось в следующем диапазоне. То есть, содержание буферного агента в композиции по настоящему изобретению обычно составляет 0,0001-040 мас.%, предпочтительно 0,0005-20 мас.%, еще более предпочтительно 0,001-10 мас.% в рачете на массу всей композиции.
[0250]
3. Другие добавки
Композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать растворитель. Примеры растворителя включают фармацевтически приемлемые органические растворители (например, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, глицерин и т. д.), воду, воду для инъекций, физиологический раствор, раствор глюкозы и тому подобное. Один или более видов растворителей могут использоваться в комбинации.
В настоящем изобретении молекулу нуклеиновой кислоты предпочтительно растворяют в растворителе и смешивают с буфером, поскольку молекулу нуклеиновой кислоты можно растворить за короткое время. В качестве растворителя вода является предпочтительной. В настоящем описании, если не указано иначе, что «молекула нуклеиновой кислоты растворяется в буфере» означает не только то, что молекула нуклеиновой кислоты в виде твердого вещества непосредственно растворяется в буфере, но, как упоминалось выше, молекулу нуклеиновой кислоты иногда растворяют в растворителе, таком как вода, и тому подобное, и полученный раствор смешивают с буфером.
В настоящем изобретении содержание растворителя обычно составляет не ниже 0,0001 мас.% и ниже 100 мас.%, предпочтительно не ниже 0,001 мас.% и ниже 100 мас.%, еще более предпочтительно не ниже 0,005 мас.% и ниже 100 мас.%, в виде общего количества в расчете на массу всей композиции.
[0251]
Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, композицию можно формулировать в виде, например, ингаляционного жидкого препарата, раствора для инъекций, жидкости и т.п. известным способом, и вводить парентеральным введением (например, трансназальным введением, внутривенным введением, инстилляцией, внутримышечным введением, подкожным введением и т.д.). Кроме того, ее можно вводить перорально в подходящей лекарственной форме (например, в капсуле и т.д.).
[0252]
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может также содержать, помимо вышеуказанных компонентов, фармацевтически приемлемую добавку при необходимости. Когда фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой инъекционный раствор, то примеры добавки включают агент, обеспечивающий изотоничность (например, глюкозу, D-сорбит, хлорид натрия, глицерин, D-маннит и т.д.), смячающее средство (например, бензиловый спирт и т.д.), консервант (например, метилбензоат, параоксибензоаты, хлорбутанол, бензиловый спирт и т.д.) и тому подобное. Предпочтительной добавкой является метилбензоат.
Когда фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой инъекционный раствор, то ее можно также приготовить в виде липосомального препарата, инкапсулирующего молекулу нуклеиновой кислоты, путем растворения молекулы нуклеиновой кислоты в буфере и контактирования полученного раствора с составляющей молекулой липидной мембраны. Липосомальный препарат может предпочтительно использоваться в качестве инъекционного препарата для системного введения, такого как внутривенная инъекция, внутримышечная инъекция и тому подобное.
[0253]
Когда фармацевтическая композиция по настоящему изобретению формулируется в виде ингаляционного препарата, например, раствора, полученного путем растворения молекулы нуклеиновой кислоты в растворителе, таком как вода и тому подобное, то ее смешивают с водным раствором, с добавлением буферного агента (например, лимонной кислоты и ее соли, фосфорной кислоты и ее соли), смесь фильтруют для удаления бактерий, и полученный лекарственный раствор разливают в плотно закрывающиеся контейнеры, такие как флакон, ампула и тому подобное, с получением ингаляционного препарата. Например, молекулу нуклеиновой кислоты смешивают с водным раствором, содержащим воду и буферный агент (например, лимонную кислоту и ее соль, фосфорную кислоту и ее соль), растворяют при обработке ультразвуком и т.п., фильтруют для удаления бактерий и полученный лекарственный раствор разливают в плотно закрывающиеся контейнеры, такие как флакон, ампула и тому подобное, с получением ингаляционного препарата. Несмотря на то, что плотно закрывающийся контейнер, который предназначен для применения, обычно представляет собой бесцветный и прозрачный контейнер из боросиликатного стекла, также можно использовать контейнер, в котором часть, контактирующая с жидкостью на внутренней части стекла, имеет свойство кварцеподобной поверхности.
[0254]
В фармацевтической композиции по настоящему изобретению молекула нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента пригодна для лечения или профилактики различных заболеваний.
Например, введение пациенту с заболеванием, вызванным геном, может обеспечить контролирование экспрессии вышеуказанного гена, тем самым обеспечивая лечение вышеуказанного заболевания. В настоящем изобретении термин «лечение» включает профилактику вышеуказанных заболеваний; ослабление заболеваний; и улучшение прогноза, как указывалось выше, и этот термин может означать любое из них.
[0255]
Конкретным примером является следующее. Установив ген TGF-β1 в качестве вышеуказанного гена-мишени и включив ингибирующую экспрессию последовательность (например, нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4) для вышеуказанного гена в вышеуказанную молекулу ssPN, она может быть использована для лечения заболеваний или патологии, для которых ожидается лечебный эффект путем подавления TGF-β1.
[0256]
Способ применения фармацевтической композиции по настоящему изобретению особым образом не ограничивается. Например, вышеуказанную фармацевтическую композицию можно вводить субъекту, имеющему вышеуказанный ген-мишень.
[0257]
Примерами вышеуказанного субъекта, которым вводится фармацевтическая композиция по настоящему изобретению, являются клетки, ткани, органы и тому подобное. Примеры вышеуказанного субъекта также включают людей, животных, отличных от человека, и т.п., таких как млекопитающие, отличные от человека, то есть млекопитающие, исключая людей. Вышеуказанное введение может быть осуществлено, например, in vivo или in vitro. Вышеуказанные клетки особым образом не ограничиваются, и их примеры включают: различные культивируемые клетки, такие как клетки HeLa, клетки 293, клетки NIH3T3, клетки COS и тому подобное; стволовые клетки, такие как клетки ES, гемопоэтические стволовые клетки и тому подобное; и клетки, выделенные из живых организмов, такие как первичные культивируемые клетки.
[0258]
Поскольку фармацевтическая композиция по настоящему изобретению является низкотоксичной, то ее можно безопасно вводить млекопитающим (например, человеку, мыши, крысы, кролику, собаке, кошке, корове, лошади, свиньям, обезьянам), особенно человеку.
[0259]
Доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению также варьируется в зависимости от субъекта введения, пути введения, заболевания и тому подобного. Например, когда она вводится в качестве терапевтического агента для идиопатического фиброза легких в виде ингаляционной жидкости для взрослого человека, то доза молекулы нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента составляет примерно от 0,001 до примерно 20 мг/кг массы тела, предпочтительно примерно от 0,005 до примерно 5 мг/кг массы тела, более предпочтительно примерно от 0,01 до примерно 1 мг/кг массы тела, которую можно вводить в одной или нескольких порциях в день.
[0260]
Настоящее изобретение также относится к способу стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции, который включает добавление буфера к молекуле нуклеиновой кислоты, или способу получения стабильной композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты. В качестве буфера, используемого для данного способа, можно упомянуть буферы, которые аналогичны вышеуказанным примерам композиции по настоящему изобретению, и аналогичный вариант является предпочтительным.
Количество буфера, добавляемого в способе стабилизации/получения по настоящему изобретению, может быть любым, при условии, что рН можно довести до требуемого диапазона. Например, количество буферного агента можно соответствующим образом определить для попадания в следующий диапазон. То есть, количество буферного агента, добавляемое в способе стабилизации/получения по настоящему изобретению, обычно составляет 0,0001-040 мас.%, предпочтительно 0,0005-20 мас.%, более предпочтительно 0,001-10 мас.% в расчете на массу всей композиции, полученной способом.
[0261]
В дальнейшем настоящее изобретение будет подробно описано со ссылкой на примеры и тому подобное. Следует, однако, отметить, что настоящее изобретение никоим образом не ограничивается этим.
Примеры
[0262]
Пример получения 1 (синтез молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты)
Молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты, приведенную ниже, синтезировали с использованием синтезатора нуклеиновых кислот (торговое название: ABI Expedite (зарегистрированная торговая марка) 8909 Nucleic Acid Synthesis System, Applied Biosystems) на основе фосфорамидитного метода. Для вышеуказанного синтеза использовали РНК фосфорамидиты (2'-O-TBDMSi, торговое название, Samchully Pharm. Co., Ltd.) в качестве РНК амидита. С вышеуказанного амидита снимали защиту обычным способом и синтезированную РНК очищали с помощью ВЭЖХ. Каждую РНК после очистки лиофилизовали.
[0263]
В качестве молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты для примеров 1-4, синтезировали PH-0009 (PshRNA), как описано выше. В PshRNA Lx обозначает линкерную область Lx, и следующая структурная формула образуется с использованием амидита диамида L-пролина. Подчеркнутый участок показывает ингибирующую последовательность экспрессии человеческого гена TGF-β1.
PshRNA (PH-0009)
5'-GCAGAGUACACACAGCAUAUACC-Lx-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUU-3' (SEQ ID NO: 7)
[0264]
[0265]
Пример 1 (оценка влияния рН на температуру хранения)
Пример 1-1 (получение испытуемой композиции)
Оценивали термостабильность композиции, содержащей PH-0009, прототипа ингаляционного препарата на основе нуклеиновой кислоты. Следующие испытуемые композиции 1-12 готовили способом, обычно используемым в данной области.
Испытуемая композиция 1: состав 19, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (рН 2,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 2: состав 20, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (рН 3,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 3: состав 21, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 4: состав 22, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 5: состав 23, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 6: состав 24, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 7: состав 25, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 8: состав 26, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 9,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 9: состав 27, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 10,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 10: состав 28, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (рН 11,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 11: состав 29, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер Бриттона-Робинсона (pH 12,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 12: состав 30, содержащий PH-0009 (0,04 М буфер на основе соляной кислоты-хлорида калия (рН 1,5)), (0,1 мг/мл)
[0266]
Пример 1-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Испытуемые композиции 1-12 каждую закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 25°С/60% относительной влажности, 40°С/75% относительной влажности и 60°С. Образец каждого продукта, заложенного на хранение, отбирали каждую неделю, содержание определяли с использованием ионообменной ВЭЖХ и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение. Период хранения и номер заложенных на хранение продуктов показаны в таблицах 2-5.
Изменения в отношении содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение подтверждали до 4 недель при каждом условии хранения, и оценку продолжали для композиций, которые, как полагали, превосходили другие по стабильности.
В качестве образцов, заложенных на хранение, использовали испытуемые композиции 1-12, которые хранили в течение 1 недели, 2 недель, 3 недель и 4 недель при 25°С/60% относительной влажности, 40°С/75% относительной влажности и 60°С.
Отдельно готовили раствор PH-0009 в концентрации 0,1 мг/мл с использованием воды для инъекций и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%). Отбирали 90 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (10 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (90%). Отбирали 80 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (20 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (80%). Отбирали 70 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (30 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (70%). Отбирали 60 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (40 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (60%).
Каждый образец для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый образец, заложенный на хранения (каждый 10 мкл) анализировали ВЭЖХ. В отношение площадей пиков, полученных с образцами для построения калибровочной кривой (60%-100%), определяли линейную регрессию (Y=aX+b) и коэффициент корреляции (r) методом наименьших квадратов с теоретическим содержанием (%) на горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), и рассчитывали отношение содержания (%) каждого образца к содержанию на время начала закладки на хранение (excel 2013).
[0267]
Таблица 2 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
||||
образец | состав | состав 19 | состав 20 | состав 21 |
0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 2,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 3,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 4,0) | ||
нуклеиновая кислота | PH-0009 | PH-0009 | BPH-0009 | |
мг/мл | 0,1 | 0,1 | 0,1 | |
испытуемая композиция № | 1 | 2 | 3 | |
Найдено | 0 | 1 | 1 | 1 |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 | |
60°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 |
[0268]
Таблица 3 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
|||||
образец | состав | состав 22 | состав 23 | состав 24 | |
0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 2,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 3,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 4,0) | |||
нуклеиновая кислота | PH-0009 | PH-0009 | PH-0009 | ||
мг/мл | 0,1 | 0,1 | 0,1 | ||
испытуемая композиция № | 4 | 5 | 6 | ||
Найдено | 0 | 1 | 1 | 1 | |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 | |
2 недели | 1 | 1 | 1 | ||
3 недели | 1 | 1 | 1 | ||
4 недели | 1 | 1 | 1 | ||
60°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 | |
2 недели | 1 | 1 | 1 | ||
3 недели | 1 | 1 | 1 | ||
4 недели | 1 | 1 | 1 |
[0269]
Таблица 4 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
||||
образец | состав | состав 25 | состав 26 | состав 27 |
0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 8,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 9,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 10,0) | ||
нуклеиновая кислота | B | B | B | |
PH-0009 | PH-0009 | PH-0009 | ||
мг/мл | 0,1 | 0,1 | 0,1 | |
испытуемая композиция № | 7 | 8 | 9 | |
Найдено | 0 | 1 | 1 | 1 |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 | |
60°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 |
[0270]
Таблица 5 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
||||
образец | состав | состав 28 | состав 29 | состав 30 |
0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 11,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 12,0) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 1,5) | ||
нуклеиновая кислота | PH-0009 | PH-0009 | PH-0009 | |
мг/мл | 0,1 | 0,1 | 0,1 | |
испытуемая композиция № | 10 | 11 | 12 | |
Найдено | 0 | 1 | 1 | 1 |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 | |
60°C | 1 неделя | 1 | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | 1 |
[0271]
Метод анализа
Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и соответствующие опытные образцы анализировали в следующих условиях анализа.
Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрил
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
Подача подвижной фазы: соотношение смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (таблица 6).
[0272]
Таблица 6 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
скорость потока: 1,0 мл/мин
[0273]
Пример 1-3 (результаты)
Результаты показаны на фиг. 1-3. Поскольку четкого снижения отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение не наблюдали в диапазоне значений рН 5-7 в самых жестких условиях хранения при 60°С, в течение 4 недели, то диапазон значений рН был установлен равным 5-7 для композиций, содержащих PH-0009.
В общем, на нуклеиновую кислоту прямое влияние оказывает температура, и ее хранение при температуре окружающей среды или выше в течение длительного времени считается невозможным. Результаты показали, что одноцепочечную нуклеиновую кислоту можно хранить в течение длительного периода времени даже при температуре окружающей среды или выше, контролируя pH раствора.
[0274]
Пример 2 (цитратный буфер и оценка стабильности в зависимости от его концентрации)
Пример 2-1 (испытуемая композиция)
Была оценена термостабильность композиции, содержащей PH-0009, прототипа ингаляционного препарата на основе нуклеиновой кислоты.
Используя 0,05 М цитратный буфер (рН 6,8) и 0,005 М цитратный буфер (рН 6,8) в качестве базовых композиций, оценивали термостабильность следующих испытуемых композиций 13 и 14 в каждом растворе.
Испытуемую композицию 13 готовили следующим образом.
Гидрат лимонной кислоты (21,0 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора лимонной кислоты. Аналогичным образом тринатрия цитрат дигидрат (29,4 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора цитрата натрия. 0,1 М раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 М раствору цитрата натрия для доведения рН до 6,8 и смесь использовали в качестве 0,1 М цитратного буфера (рН 6,8).
Отдельно нуклеиновую кислоту (PH-0009) (10 мг) растворяли в воде для инъекций (0,5 мл). Этот раствор (0,2 мл) смешивали с водой для инъекций (20 мл). К нему добавляли 0,1 М цитратный буфер (рН 6,8) (20 мл), смесь перемешивали и пропускали через фильтр из поливинилидендифторида (PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм, с получением 4 мг/40 мл (0,1 мг/мл) композиции, содержащей PH-0009.
Испытуемую композицию 14 готовили следующим образом.
Гидрат лимонной кислоты (21,0 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора лимонной кислоты. Аналогичным образом тринатрия цитрат дигидрат (29,4 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора цитрата натрия. 0,1 М раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 М раствору цитрата натрия для доведения рН до 6,8 и смесь использовали в качестве 0,1 М цитратного буфера (рН 6,8). 0,1 М раствор лимонной кислоты (18 мл), 0,1 М раствор цитрата натрия (82 мл) и воду для инъекций (900 мл) смешивали и доводили до рН 6,8 1Н раствором NaOH с получением 0,01 М цитратного буфера (рН 6,8).
Отдельно нуклеиновую кислоту (PH-0009) (10 мг) растворяли в воде для инъекций (0,5 мл). Данный раствор (0,0719 мл) смешивали с водой для инъекций (4,9281 мл). К нему добавляли 0,01 М цитратный буфер (рН 6,8) (5 мл), смесь перемешивали и пропускали через фильтр из поливинилидендифторида (PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм, с получением 1 мг/10 мл (0,1 мг/мл) композиции, содержащей PH-0009.
Испытуемая композиция 13: состав 3, содержащий PH-0009, (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 14: состав 7, содержащий PH-0009, (0,005 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
[0275]
Пример 2-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Испытуемые композиции 13 и 14 каждую закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 40°С/75% относительной влажности и 60°С. Образец каждого продукта, заложенного на хранение, отбирали каждую неделю, содержание определяли с использованием ионообменной ВЭЖХ и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение. Период хранения и номер заложенных на хранение продуктов показаны в таблице 7.
Изменения в отношении содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение подтверждали до 4 недель при каждом условии хранения, и оценку продолжали для композиций, которые, как полагали, превосходили другие по стабильности.
В качестве образцов, заложенных на хранение, использовали испытуемые композиции 13 и 14, которые хранили в течение 1 недели, 2 недель, 3 недель и 4 недель при 40°С/75% относительной влажности и 60°С.
Отдельно готовили раствор PH-0009 в концентрации 0,1 мг/мл с использованием воды для инъекций и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%). Отбирали 90 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (10 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (90%). Отбирали 80 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (20 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (80%). Отбирали 70 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (30 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (70%). Отбирали 60 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (40 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (60%).
Каждый образец для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый опытный образец, заложенный на хранение (каждый 10 мкл) анализировали ВЭЖХ. В отношение площадей пиков, полученных с образцами для построения калибровочной кривой (60%-100%), определяли линейную регрессию (Y=aX+b) и коэффициент корреляции (r) методом наименьших квадратов с теоретическим содержанием (%) на горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), и рассчитывали отношение содержания (%) каждого образца к содержанию на время начала закладки на хранение (excel 2013).
[0276]
Таблица 7 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
|||
образец | состав | состав 3 | состав 7 |
0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 6,8) | 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 6,8) | ||
нуклеиновая кислота | PH-0009 | PH-0009 | |
мг/мл | 0,1 | 0,1 | |
испытуемая композиция № | 13 | 14 | |
найдено | 0 | 1 | 1 |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | |
60°C | 1 неделя | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 |
[0277]
Метод анализа
Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и соответствующие опытные образцы анализировали в следующих условиях анализа.
Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрил
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
Подача подвижной фазы: соотношение смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (таблица 6).
[0278]
Таблица 8 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
скорость потока: 1,0 мл/мин
[0279]
Пример 2-3 (результаты)
Результаты показаны на фиг. 4 и фиг. 5. Результаты показывают, что четкое изменение отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение отсутствовало даже в диапазоне концентраций цитратного буфера от 0,005 М до 0,05 М при 60°С в течение 4 недель, когда одноцепочечную нуклеиновую кислоту готовили с концентрацией 0,1 мг/мл. На основании этого можно предположить, что эффект обеспечения стабильности нуклеиновой кислоты можно сохранять, контролируя концентрацию цитратного буфера, даже когда концентрация одноцепочечной нуклеиновой кислоты повышается.
[0280]
Пример 3 (получение композиции, содержащей PH-0009 (10 мг/мл))
Проводили способ получения композиции, содержащей 10 мг/мл PH-0009. Композицию, содержащую 1 мг/мл PH-0009, можно получить изменением стандартного количества нуклеиновой кислоты, подлежащей загрузке, до 1,0 г. В случае концентрации 0,1 мг/мл количество уменьшают до 0,10 г.
Гидрат лимонной кислоты (21,0 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора лимонной кислоты. Аналогичным образом тринатрия цитрат дигидрат (29,4 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), с получением 0,1 М раствора цитрата натрия. 0,1 М раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 М раствору цитрата натрия для доведения рН до 6,5 с получением 0,1 М цитратного буфера (рН 6,5).
Отдельно нуклеиновую кислоту (PH-0009) (10 г) растворяли в воде для инъекций (500 мл). К раствору добавляли 0,1 М цитратный буфер (рН 6,8) (500 мл), смесь перемешивали, и пропускали через фильтр из поливинилидендифторида (PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм, с получением 10 г/л (10 мг/мл) композиции, содержащей PH-0009. Композицию можно использовать в качестве ингаляционного препарата для IPF и тому подобное.
Таблица 9 | |
Название компонента
(торговое название или категория) |
Стандартное количество загрузки |
PH-0009 (одноцепочечная нуклеиновая кислота) | |
Гидрат лимонной кислоты (the Japanese Pharmacopoeia) | |
Тринатрий цитрат дигидрат (JIS standard) | |
Вода для инъекций (the Japanese Pharmacopoeia) |
[0282]
Пример 4 (оценка термостабильности композиции, содержащей PH-0009)
Пример 4-1 (испытуемая композиция)
При разработке препарата одноцепочечной нуклеиновой кислоты оценивали различные составыв отношении стабильности композиции, содержащей PH-0009. В результате испытуемые композиции 15 и 16 оценивали, как наилучшие препараты, которые можно использовать в качестве фармацевтических продуктов на основе нуклеиновой кислоты, и оценивали их термостабильность.
Испытуемые композиции 15 и 16 получали аналогично тому, как описано в примере 3, для испытуемых композиций 13, 14.
Испытуемая композиция 15: состав 44, содержащий PH-0009 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5), (1 мг/мл)
Испытуемая композиция 16: состав 44, содержащий PH-0009 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5), (10 мг/мл)
[0283]
Пример 4-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Испытуемые композиции 15 и 16 каждую закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 25°С/60% относительной влажности, 40°С/75% относительной влажности и 60°С. Образец каждого продукта, заложенного на хранение, отбирали каждую неделю, содержание определяли с использованием ионообменной ВЭЖХ и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение. Период хранения и номер заложенных на хранение продуктов показаны в таблице 10.
Изменения в отношении содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение подтверждали до 4 недель при каждом условии хранения, и оценку продолжали для композиций, которые, как полагали, превосходили другие по стабильности.
В качестве образцов, заложенных на хранение, использовали испытуемые композиции 15 и 16, которые хранили в течение 1 недели, 2 недель, 3 недель и 4 недель при 40°С/75% относительной влажности и 60°С.
Отдельно готовили раствор PH-0009 в концентрации 0,1 мг/мл с использованием воды для инъекций и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%). Отбирали 90 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (10 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (90%). Отбирали 80 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (20 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (80%). Отбирали 70 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (30 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (70%). Отбирали 60 мкл образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (40 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (60%).
Каждый образец для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый образец, заложенный на хранения (каждый 10 мкл) анализировали ВЭЖХ. В отношение площадей пиков, полученных с образцами для построения калибровочной кривой (60%-100%), определяли линейную регрессию (Y=aX+b) и коэффициент корреляции (r) методом наименьших квадратов с теоретическим содержанием (%) на горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), и рассчитывали отношение содержания (%) каждого образца к содержанию на время начала закладки на хранение (excel 2013).
[0284]
Таблица 10 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
|||
образец | состав | состав 44 | |
0,05 M цитратный буфер
(pH 6,5) |
|||
нуклеиновая кислота | PH-0009 | ||
мг/мл | 1 | 10 | |
испытуемая композиция № | 15 | 16 | |
найдено | 0 | 1 | 1 |
40°C | 1 неделя | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 | |
60°C | 1 неделя | 1 | 1 |
2 недели | 1 | 1 | |
3 недели | 1 | 1 | |
4 недели | 1 | 1 |
[0285]
Метод анализа
Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и соответствующие опытные образцы анализировали в следующих условиях анализа.
Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрил
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
Подача подвижной фазы: соотношение смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (таблица 11).
[0286]
Таблица 11 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
скорость потока: 1,0 мл/мин
[0287]
Пример 4-3 (результаты)
Результаты по испытуемой композиции 16 показаны на фиг. 6. Результаты свидетельствуют о том, что четкое изменение отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение отсутствовало для 10 мг/мл композиции, содержащей PH-0009, даже при 60°С в течение 4 недель. Аналогичные результаты были получены с испытуемой композицией 15 (1 мг/мл композиция, содержащая PH-0009). Таким образом, было показано, что композиция, содержащая PH-0009 (жидкой ингаляционный препарат на основе одноцепочечной нуклеиновой кислоты и т.п.), полученный согласно этомусоставу, имеет высокую стабильность при хранении.
[0280]
Пример получения 2
В качестве молекулы нуклеиновой кислоты для примера 5 синтезировали молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты с использованием синтезатора нуклеиновых кислот (торговое название: ABI Expedite (зарегистрированная торговая марка) 8909 Nucleic Acid Synthesis System, Applied Biosystems) на основе фосфорамидитного метода. Для вышеуказанного синтеза использовали РНК фосфорамидиты (2'-O-TBDMSi, торговое название, Samchully Pharm. Co., Ltd.) в качестве РНК амидита. С вышеуказанного амидита снимали защиту обычным способом и синтезированную РНК очищали с помощью ВЭЖХ. Каждую РНК после очистки лиофилизовали.
[0289]
Синтезировали молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты и молекулу двухцепочечной нуклеиновой кислоты (siРНК) для примера 5, как описано выше. В NK-7006 и NK-7007 участки, заключенные в скобки, представляют линкерные области. В NK-7006, NK-7007, PK-7006, PK-7015, PK-7069 и PH-7081 подчеркнутые участки показывают ингибирующие последовательности экспрессии соответствующих генов-мишеней, и Lx обозначает линкерную область. Линкерную область Lx, имеющую следующую структурную формулу, получали с использованием амидита диамида L-пролина.
NKRNA (NK-7006) (ген-мишень: люцифераза)
5'-ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC(CCACACC)GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC(UUCG)G-3' (SEQ ID NO: 8)
NKRNA (NK-7007) (ген-мишень: мышиная GAPDH)
5'-ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC(CCACACC)GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC(UUCG)G-3' (SEQ ID NO: 9)
PnkRNA (PK-7006) (ген-мишень: мышиный TGF-β1)
5'-GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Lx-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Lx-G-3' (SEQ ID NO: 10)
PnkRNA (PK-7015) (ген-мишень: мышиный CCR3)
5'-AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Lx-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Lx-G-3' (SEQ ID NO: 11)
PshRNA (PH-7069) (ген-мишень: мышиный Smad3)
5'-GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Lx-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA-3'
(SEQ ID NO: 12)
антисмысловая нуклеиновая кислота (Kynamro-7001) (антисмысловая ДНК против мРНК ApoB100)
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (SEQ ID NO: 1)
(строчными буквами показана ДНК)
PshRNA (PH-7081) (ген-мишень: люцифераза светлячков)
5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Lx-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG-3' (SEQ ID NO: 13)
siРНК (NI-7001) (мышиный CTGF)
5'-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3' (SEQ ID NO: 14)
5'-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3' (SEQ ID NO: 15)
миРНК (NM-7001) (предшественник let7a-1 человека)
5'- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (SEQ ID NO: 2)
аптамер (Macugen-7001) (аптамер к белку VEGF)
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (SEQ ID NO: 3)
(t представляет 3'3'-dT)
[0290]
[0291]
Пример 5 (оценка стабильности различных нуклеиновых кислот с цитратным буфером)
Пример 5-1 (получение испытуемой композиции)
Следующие испытуемые композиции 17-36 готовили аналогично тому, как описано в примере 3 для испытуемых композиций 13, 14.
Испытуемая композиция 17: состав 44, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 18: NK-7006 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 19: состав 44, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 20: NK-7007 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 21: состав 44, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 22: PK-7006 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 23: состав 44, содержащий PK-7015 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 24: PK-7015 в воде для инъекций, (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 25: состав 44, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 26: PH-7069 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 27: состав 44, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 28: Kynamro-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 29: состав 44, содержащий PH-7081 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 30: PH-7081 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 31: состав 44, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 32: NI-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 33: состав 44, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 34: NM-7001 в воде для инъекций, (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 35: состав 44, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 36: Macugen-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
[0292]
Пример 5-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Испытуемые композиции 17-36 каждую закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 60°С. Образец каждого заложенного на хранение продукта отбирали каждую неделю, содержание определяли с использованием ионообменной ВЭЖХ и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время закладки на хранение. Период хранения и номер заложенных на хранение продуктов показаны в таблице 12.
В качестве образцов, заложенных на хранение, использовали испытуемые композиции 17-36, которые хранили в течение 1 недели, 2 недель, 3 недель и 4 недель при 60°С.
Отдельно продукты испытуемых композиций 17-36, которые подвергались хранению при 4°С, использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%). Отбирали 90 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (10 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (90%). Отбирали 80 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (20 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (80%). Отбирали 70 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (30 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (70%). Отбирали 60 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (40 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (60%). Приготовление образцов для построения калибровочной кривой смотри в таблице 13.
Каждый образец для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый опытный образец, заложенный на хранения (каждый 10 мкл) анализировали ВЭЖХ. В отношение площадей пиков, полученных с образцами для построения калибровочной кривой (60%-100%), определяли линейную регрессию (Y=aX+b) и коэффициент корреляции (r) методом наименьших квадратов с теоретическим содержанием (%) на горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), и рассчитывали отношение содержания (%) каждого образца к содержанию на время начала закладки на хранение (excel 2013).
Таблица 12 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
|||
заложенный на хранение образец | 4°C | 60°C | |
время начала | 1-4 недели | ||
испытуемое соединение № | название | 1 | 4 |
17 | состав 44 с NK-7006 | 1 | 4 |
18 | NK-7006 в воде для инъекций | 1 | 4 |
19 | состав 44 с NK-7007 | 1 | 4 |
20 | NK-7007 в воде для инъекций | 1 | 4 |
21 | состав 44 с PK-7006 | 1 | 4 |
22 | PK-7006 в воде для инъекций | 1 | 4 |
23 | состав 44 с PK-7015 | 1 | 4 |
24 | PK-7015 в воде для инъекций | 1 | 4 |
25 | состав 44 с PH-7069 | 1 | 4 |
26 | PH-7069 в воде для инъекций | 1 | 4 |
27 | состав 44 с Kynamro-7001 | 1 | 4 |
28 | Kynamro-7001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
29 | состав 44 с PH-7081 | 1 | 4 |
30 | PH-7081 в воде для инъекций | 1 | 4 |
31 | состав 44 с NI-7001 | 1 | 4 |
32 | NI-7001в воде для инъекций | 1 | 4 |
33 | состав 44 с NM-0001 | 1 | 4 |
34 | NM-0001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
35 | состав 44 с Macugen-7001 | 1 | 4 |
36 | Macugen-7001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
[0294]
Таблица 13 Приготовление образцов для аналитической кривой |
|||||
каждый образец для аналитической кривой (60%-100%) | |||||
100% | 90% | 80% | 70% | 60% | |
способ получения |
испытуемое соединение | испытуемое соединение 90 мкл + вода для инъекций 10 мкл |
испытуемое соединение 80 мкл + вода для инъекций 20 мкл |
испытуемое соединение 70 мкл + вода для инъекций 30 мкл |
испытуемое соединение 60 мкл + вода для инъекций 40 мкл |
[0295]
Метод анализа
Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и соответствующие опытные образцы анализировали в следующих условиях анализа.
Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрил
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
Подача подвижной фазы: соотношение смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (таблица 11).
[0296]
Таблица 14 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
скорость потока: 1,0 мл/мин
[0297]
Пример 5-3 (результаты)
Результаты показаны на фиг. 7-16.
Результаты свидетельствуют о том, что состав (pH 6,5) 0,05 М цитратного буфера обеспечивает термостабильность независимо от типа нуклеиновой кислоты по сравнению с водой для инъекций (WFI).
[0298]
Пример получения 3
В качестве молекулы нуклеиновой кислоты для примера 6 синтезировали молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты с использованием синтезатора нуклеиновых кислот (торговое название: ABI Expedite (зарегистрированная торговая марка) 8909 Nucleic Acid Synthesis System, Applied Biosystems) на основе фосфорамидитного метода. Для вышеуказанного синтеза использовали РНК фосфорамидиты (2'-O-TBDMSi, торговое название, Samchully Pharm. Co., Ltd.) в качестве РНК амидита. С вышеуказанного амидита снимали защиту обычным способом и синтезированную РНК очищали с помощью ВЭЖХ. Каждую РНК после очистки лиофилизовали.
[0299]
Синтезировали молекулу одноцепочечной нуклеиновой кислоты и молекулу двухцепочечной нуклеиновой кислоты (siРНК) для примера 6, как описано выше. В NK-7006 и NK-7007 участки, заключенные в скобки, представляют линкерные области. В NK-7006, NK-7007, PK-7006, PH-7069 и PH-7081 подчеркнутые участки показывает ингибирующие последовательности экспрессии соответствующих генов-мишеней, и Lx обозначает линкерную область. Линкерную область Lx, имеющую следующую структурную формулу, получали с использованием амидита диамида L-пролина.
NkRNA (NK-7006) (ген-мишень: люцифераза)
5'-ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC(CCACACC)GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC(UUCG)G-3' (SEQ ID NO: 8)
NkRNA (NK-7007) (ген-мишень: мышиная GAPDH)
5'-ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC(CCACACC)GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC(UUCG)G-3' (SEQ ID NO: 9)
PnkRNA (PK-7006) (ген-мишень: мышиный TGF-β1)
5'-GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Lx-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Lx-G-3'(SEQ ID NO: 10)
PnkRNA (PK-7015) (ген-мишень: мышиный CCR3)
5'-AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Lx-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Lx-G-3'(SEQ ID NO: 11)
PshRNA (PH-7069) (ген-мишень: мышиный Smad3)
5'-GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Lx-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA-3'
(SEQ ID NO: 12)
антисмысловая нуклеиновая кислота (Kynamro-7001) (антисмысловая ДНК против мРНК ApoB100)
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (SEQ ID NO: 1)
(строчные буквы показывают ДНК)
PshRNA (PH-7081) (ген-мишень: люцифераза светлячков)
5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Lx-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG-3' (SEQ ID NO: 13)
siРНК (NI-7001) (мышиный CTGF)
5'-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3' (SEQ ID NO: 14)
5'-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3' (SEQ ID NO: 15)
миРНК (NM-7001) (предшественник let7a-1 человека)
5'- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (SEQ ID NO: 2)
аптамер (Macugen-7001) (аптамер к белку VEGF)
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (SEQ ID NO: 3)
(t представляет 3'3'-dT)
[0300]
[0301]
Пример 6 (оценка стабильности различных нуклеиновых кислот с фосфатным буфером)
Пример 6-1 (получение испытуемой композиции)
Следующие испытуемые композиции 37-56 получали следующим образом.
0,1 М фосфатный буфер (рН 6,5) готовили смешиванием дигидрофосфата натрия дигидрата (13,006 г) и динатрия гидрофосфата додекагидрата (6,017 г) и его разведением до 1 л.
Нуклеиновую кислоту (0,1 г) растворяли в воде для инъекций (500 мл). К раствору добавляли 0,1 М фосфатный буфер (рН 6,5) (500 мл), смесь перемешивали, и пропускали через фильтр из поливинилидендифторида (PVDF) с диаметром пор 0,22 мкм с получением 0,1 г/л (0,1 мг/мл) композиции, содержащей нуклеиновую кислоту.
Испытуемая композиция 37: композиция 44, содержащая NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 38: NK-7006 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 39: композиция 44, содержащая NK-7007 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 40: NK-7007 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 41: композиция 44, содержащая PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 42: PK-7006 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 43: композиция 44, содержащая PK-7015 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 44: PK-7015 в воде для инъекций, (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 45: композиция 44, содержащая PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 46: PH-7069 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 47: композиция 44, содержащая Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 48: Kynamro-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 49: композиция 44, содержащая PH-7081 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 50: PH-7081 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 51: композиция 44, содержащая NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 52: NI-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 53: композиция 44, содержащая NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 54: NM-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 55: композиция 44, содержащая Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,5)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 56: Macugen-7001 в воде для инъекций (0,1 мг/мл)
[0302]
Пример 6-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Испытуемые композиции 37-56 закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 60°С. Образец каждого заложенного на хранение продукта отбирали каждую неделю, содержание определяли с использованием ионообменной ВЭЖХ и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время закладки на хранение. Период хранения и номер заложенных на хранение продуктов показаны в таблице 12.
В качестве образцов, заложенных на хранение, использовали испытуемые композиции 37-56, которые хранили в течение 1 недели, 2 недель, 3 недель и 4 недель при 60°С.
Отдельно продукты испытуемых композиций 17-36, которые подвергались хранению при 4°С, использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%). Отбирали 90 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (10 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (90%). Отбирали 80 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (20 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (80%). Отбирали 70 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (30 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (70%). Отбирали 60 мкл каждого образца для построения калибровочной кривой (100%), добавляли воду для инъекций (40 мкл) до 100 мкл и использовали в качестве образца для построения калибровочной кривой (60%).
Каждый образец для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый опытный образец, заложенный на хранения (каждый 10 мкл) анализировали ВЭЖХ. В отношение площадей пиков, полученных с образцами для построения калибровочной кривой (60%-100%), определяли линейную регрессию (Y=aX+b) и коэффициент корреляции (r) методом наименьших квадратов с теоретическим содержанием (%) на горизонтальной оси (X) и площадью пика на вертикальной оси (Y), и рассчитывали отношение содержания (%) каждого образца к содержанию на время начала закладки на хранение (excel 2013).
[303]
Таблица 15 Период хранения и номер продуктов, заложенных на хранение |
|||
заложенный на хранение образец | 4°C | 60°C | |
время начала | 1-4 недели | ||
испытуемое соединение № | название | 1 | 4 |
37 | состав 44 с NK-7006 | 1 | 4 |
38 | NK-7006 в воде для инъекций | 1 | 4 |
39 | состав 44 с NK-7007 | 1 | 4 |
40 | NK-7007 в воде для инъекций | 1 | 4 |
41 | состав 44 с PK-7006 | 1 | 4 |
42 | PK-7006 в воде для инъекций | 1 | 4 |
43 | состав 44 с PK-7015 | 1 | 4 |
44 | PK-7015 в воде для инъекций | 1 | 4 |
45 | состав 44 с PH-7069 | 1 | 4 |
46 | PH-7069 в воде для инъекций | 1 | 4 |
47 | состав 44 с Kynamro-7001 | 1 | 4 |
48 | Kynamro-7001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
49 | состав 44 с PH-7081 | 1 | 4 |
50 | PH-7081 в воде для инъекций | 1 | 4 |
51 | состав 44 с NI-7001 | 1 | 4 |
52 | NI-7001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
53 | состав 44 с NM-0001 | 1 | 4 |
54 | NM-0001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
55 | состав 44 с Macugen-7001 | 1 | 4 |
56 | Macugen-7001 в воде для инъекций | 1 | 4 |
[0304]
Метод анализа
Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и соответствующие опытные образцы анализировали в следующих условиях анализа.
Детектор: ультрафиолетовый абсорбциометр (длина волны анализа: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ TEAA (pH 7,0), 0,5% ацетонитрил
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрил
Подача подвижной фазы: соотношение смешивания подвижной фазы А и подвижной фазы В изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (таблица 16).
[0305]
Таблица 16 | ||
Время после инжектирования (мин) | подвижная фаза A (об.%) | подвижная фаза B (об.%) |
0→12 | 100→60 | 0→40 |
скорость потока: 1,0 мл/мин
[0306]
Пример получения 4
В качестве молекул нуклеиновой кислоты для примера 7 синтезировали PK-7006, NK-7006, PH-7069, NI-7001, NM-7001, Kynamro-7001 и Macugen-7001 способом, аналогичным способу, описанному в примере получения 2.
[0307]
Пример 7 (оценка стабильности различных нуклеиновых кислот с цитратным буфером и/или фосфатным буфером)
Пример 7-1 (получение испытуемой композиции)
Испытуемые композиции 57-74, 105-122, 153-170 готовили следующим образом.
0,1 М водный раствор лимонной кислоты и 0,1 М раствор тринатрия цитрата дигидрата смешивали и доводили до рН 4,0-8,0 с получением 0,1 М цитратного буфера при каждом значении рН.
25 мг/мл испытуемой композиции (0,02 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,48 мл) и 0,1 М цитратный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 201-218 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М цитратный буфер. 10 мг/мл испытуемой композиции (0,05 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,45 мл) и 0,1 М цитратный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 249-266, 297-314, 345-362 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М цитратный буфер. 20 мг/мл испытуемой композиции (0,025 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,475 мл) и 0,1 М цитратный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 75-95, 123-143, 171-191 готовили следующим образом.
0,1 М водный раствор дигидрофосфата натрия и 0,1 М раствор динатрия гидрофосфата смешивали и доводили до рН 4,0-8,0 с получением 0,1 М фосфатного буфера при каждом рН.
25 мг/мл испытуемой композиции (0,02 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,48 мл) и 0,1 М фосфатный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 219-239 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М фосфатный буфер. 10 мг/мл испытуемой композиции (0,05 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,45 мл) и 0,1 М фосфатный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 267-287, 315-335, 363-383 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М фосфатный буфер. 20 мг/мл испытуемой композиции (0,025 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,475 мл) и 0,1 М фосфатный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 96-104, 144-152, 192-200 готовили следующим образом.
0,1 М водный раствор цитрата натрия и 0,1 М водный раствор лимонной кислоты смешивали и доводили до рН 4,2-7,6 с получением 0,1 М цитратного буфера при каждом рН. Аналогично, 0,1 М водный раствор дигидрофосфата натрия и 0,1 М раствор динатрия гидрофосфата смешивали и доводили до рН 4,2-7,6 с получением 0,1 М фосфатного буфера при каждом рН. 0,1 М цитратный буфер и 0,1 М фосфатный буфер при одинаковом значении рН смешивали в соотношении 5:5 (3 мл:3 мл) с получением 0,1 М цитратно-фосфатного буфера (5:5) при каждом рН.
25 мг/мл испытуемой композиции (0,02 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,48 мл) и 0,1 М цитратно-фосфатный буфер (5:5) (2,50 мл) при каждом рН смешивали с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 240-248 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М цитратно-фосфатный буфер (5:5). 10 мг/мл испытуемой композиции (0,05 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,45 мл) и 0,1 М цитратно-фосфатный буфер (5:5) (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
Испытуемые композиции 288-296, 336-344, 384-392 готовили следующим образом.
Способом, аналогичным описанному выше, приготовили 0,1 М цитратно-фосфатный буфер (5:5). 20 мг/мл испытуемой композиции (0,025 мл), приготовленной на воде для инъекций, воду для инъекций (2,475 мл) и 0,1 М цитратно-фосфатный буфер (2,50 мл) смешивали при каждом значении рН с получением 5 мл каждой 0,1 мг/мл испытуемой композиции.
[0308]
Молекула нуклеиновой кислоты: PK-7006
Испытуемая композиция 57: состав 199, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 58: состав 200, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 59: состав 201, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 60: состав 202, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 61: состав 203, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 62: состав 204, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 63: состав 205, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 64: состав 206, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 65: состав я 207, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 66: состав 208, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 67: состав 209, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 68: состав 210, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 69: состав 211, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 70: состав 212, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 71: состав 213, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 72: состав 214, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 73: состав 215, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 74: состав 216, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 75: состав 217, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 76: состав 218, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 77: состав 219, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 78: состав 220, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 79: состав 221, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 80: состав 222, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 81: состав 223, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 82: состав 224, содержащий (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 83: состав 225, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 84: состав 226, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 85: состав 227, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 86: состав 228, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 87: состав 229, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 88: состав 230, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 89: состав 231, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 90: состав 232, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 91: состав 233, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 92: состав 234, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 93: состав 235, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 94: состав 236, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 95: состав 237, содержащий PK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 96: состав 238, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 97: состав 239, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 98: состав 240, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 99: состав 241, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 100: состав 242, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 101: состав 243, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 102: состав 244, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 103: состав 245, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 104: состав 246, содержащий PK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0309]
Молекула нуклеиновой кислоты: NK-7006
Испытуемая композиция 105: состав 247, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 106: состав 248, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 107: состав 249, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 108: состав 250, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 109: состав 251, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 110: состав 252, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 111: состав 253, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 112: состав я 254, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 113: состав 255, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 114: состав 256, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 115: состав 257, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 116: состав 258, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 117: состав 259, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 118: состав 260, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 119: состав 261, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 120: состав 262, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 121: состав 263, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 122: состав 264, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 123: состав 265, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 124: состав 266, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 125: состав 267, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 126: состав 267, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 127: состав 268, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 128: состав 270, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 129: состав 271, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 130: состав 272, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 131: состав 273, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 132: состав 274, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 133: состав 275, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 134: состав 276, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 135: состав 277, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 136: состав 278, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 137: состав 279, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 138: состав 280, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 139: состав 281, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 140: состав 282, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 141: состав 283, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 142: состав 284, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 143: состав 285, содержащий NK-7006 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 144: состав 286, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 145: состав 287, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 146: состав 288, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 147: состав 289, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 148: состав 290, содержащий NK-7006 (0,05 М) буферный раствор цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 149: состав 291, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 150: состав 292, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 151: состав 293, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 152: состав 294, содержащий NK-7006 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0310]
Молекула нуклеиновой кислоты: PH-7069
Испытуемая композиция 153: состав 295, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 154: состав 296, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 155: состав 297, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 156: состав 298, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 157: состав 299, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 158: состав 300, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 159: состав 301, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 160: состав 302, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 161: состав 303, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 162: состав 304, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 163: состав 305, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 164: состав 306, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 165: состав 307, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 166: состав 308, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 167: состав 309, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 168: состав 310, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 169: состав 311, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 170: состав 312, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 171: состав 313, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 172: состав 314, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 173: состав 315, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 174: состав 316, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 175: состав 317, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 176: состав 318, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 177: состав 319, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 178: состав 320, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 179: состав 321, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 180: состав 322, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 181: состав 323, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 182: состав 324, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 183: состав 325, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 184: состав 326, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 185: состав 327, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 186: состав 328, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 187: состав 329, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 188: состав 330, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 189: состав 331, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 190: состав 332, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 191: состав 333, содержащий PH-7069 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 192: состав 334, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 193: состав 335, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 194: состав 336, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 195: состав 337, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 196: состав 338, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 197: состав 339, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 198: состав 340, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 199: состав 341, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 200: состав 342, содержащий PH-7069 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0311]
Молекула нуклеиновой кислоты: NI-7001
Испытуемая композиция 201: состав 343, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 202: состав 344, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 203: состав 345, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 204: состав 346, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 205: состав 347, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 206: состав 348, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 207: состав 349, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 208: состав 350, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 209: состав 351, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 210: состав 352, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 211: состав 353, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 212: состав 354, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 213: состав 355, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 214: состав 356, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 215: состав 357, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 216: состав 358, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 217: состав 359, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 218: состав 360, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 219: состав 361, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 220: состав 362, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 221: состав 363, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 222: состав 364, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 2223: состав 365, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 224: состав 366, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 225: состав 367, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 226: состав 368, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 227: состав 369, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 228: состав 370, содержащаий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 229: состав 371, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 230: состав 372, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 231: состав 373, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 232: состав 374, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 233: состав 375, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 234: состав 376, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 235: состав 377, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 236: состав 378, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 237: состав 379, содержащаий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 238: состав 380, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 239: состав 381, содержащий NI-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 240: состав 382, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 241: состав 383, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 242: состав 384, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный буфер (5:5) (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 243: состав 385, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 244: состав 386, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный буфер (5:5) (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 245: состав 387, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 246: состав 388, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 247: состав 389, содержащий NI-7001 (0,05 М) цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 248: состав 390, содержащий NI-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0312]
Молекула нуклеиновой кислоты: NM-7001
Испытуемая композиция 249: состав 391, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 250: состав 392, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 251: состав 393, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 252: состав 394, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 253: состав 395, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 254: состав 396, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 255: состав 397, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 256: состав 398, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 257: состав 399, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 258: состав 400, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 259: состав 401, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 260: состав 402, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 261: состав 403, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 262: состав 404, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 263: состав 405, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 264: состав 406, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 265: состав 407, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 266: состав 408, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 267: состав 409, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 268: состав 410, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 269: состав 411, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 270: состав 412, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 271: состав 413, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 272: состав 414, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 273: состав 415, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 274: состав 416, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 275: состав 417, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 276: состав 418, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 277: состав 419, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 278: состав 420, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 279: состав 421, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 280: состав 422, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 281: состав 423, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 282: состав 424, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 283: состав 425, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 284: состав 426, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 285: состав 427, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 286: состав 428, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 287: состав 429, содержащий NM-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 288: состав 430, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный буфер (5:5) (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 289: состав 431, содержащий NM-7001 (0,05 М) цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 290: состав 432, содержащий NM-7001 (0,05 М) цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 291: состав 433, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 292: состав 434, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 293: состав 435, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 294: состав 436, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 295: состав 437, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 296: состав 438, содержащий NM-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0313]
Молекула нуклеиновой кислоты: Kynamro-7001
Испытуемая композиция 297: состав 439, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 298: состав 440, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 299: состав 441, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 300: состав 442, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 301: состав 443, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 302: состав 444, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 303: состав 445, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 304: состав 446, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 305: состав 447, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 306: состав 448, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 307: состав 449, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 308: состав 450, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 309: состав 451, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 310: состав 452, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 311: состав 453, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 312: состав 454, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 313: состав 455, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 314: состав 456, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 315: состав 457, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 316: состав 458, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 317: состав 459, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 318: состав 460, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 319: состав 461, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 320: состав 462, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 321: состав 463, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 322: состав 464, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 323: состав 465, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 324: состав 466, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 325: состав 467, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 326: состав 468, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 327: состав 469, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 328: состав 470, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 329: состав 471, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 330: состав 472, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 331: состав 473, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 332: состав 474, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 333: состав 475, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 334: состав 476, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 335: состав 477, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 336: состав я 478, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 337: состав 479, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М) буферный раствор цитратно-фосфат (5:5) (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 338: состав 480, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 339: состав 481, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 340: состав 482, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 341: состав 483, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 342: состав 484, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 343: состав 485, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 344: состав 486, содержащий Kynamro-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0314]
Молекула нуклеиновой кислоты: Macugen-700
Испытуемая композиция 345: состав 487, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 346: состав 488, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 347: состав 489, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 348: состав 490, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 349: состав 491, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 350: состав 492, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 351: состав я 493, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 352: состав 494, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 353: состав 495, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 354: состав 496, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 355: состав 497, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 356: состав я 498, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 357: состав 499, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 358: состав 500, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 359: состав 501, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 360: состав 502, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 361: состав 503, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 362: состав 504, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 363: состав 505, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 364: состав 506, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 365: состав 507, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 366: состав 508, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 367: состав 509, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 4,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 368: состав 510, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 369: состав 511, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 370: состав 512, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 371: состав 513, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 372: состав 514, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 5,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 373: состав 515, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 374: состав 516, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 375: состав 517, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 376: состав 518, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 377: состав 519, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 6,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 378: состав 520, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 379: состав 521, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 380: состав 522, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 381: состав 523, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 382: состав 524, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 7,8)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 383: состав 525, содержащий Macugen-7001 (0,05 М фосфатный буфер (рН 8,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 384: состав 526, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,2)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 385: состав 527, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 386: состав 528, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 4,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 387: состав 529, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 5,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 388: состав 530, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 389: состав 531, содержащий Macugen-7001 (0,05 М) цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 6,6)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 390: состав 532, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,0)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 391: состав 533, содержащий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5)) буфер (рН 7,4)), (0,1 мг/мл)
Испытуемая композиция 392: состав 534, содержащаий Macugen-7001 (0,05 М цитратно-фосфатный (5:5) буфер (рН 7,6)), (0,1 мг/мл)
[0315]
Пример 7-2 (метод испытаний и оценочные критерии)
Каждую из испытуемых композиций 57-392 закладывали на хранение при 4°С и каждую четвертую закладывали на хранение в испытательной камере для оценки стабильности при 60°С. Образец каждого заложенного на хранение продукта при 4°С отбирали на время начала закладки и образец каждого заложенного на хранение продукта при 60°С отбирали каждую неделю, содержание определяли с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ, и стабильность оценивали на основе снижения отношения содержания (%) к содержанию на время начала закладки на хранение.
Используя каждую испытуемую композицию на время начала закладки в качестве образца для построения калибровочной кривой (100%), готовили образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) способом, аналогичным, описанному в примере 1-2. Образцы для построения калибровочной кривой (60%-100%) и каждый подвергшийся хранению опытный образец (каждый 30 мкл) анализировали с помощью ВЭЖХ способом, аналогичным описанному в примере 1-2.
[0316]
Пример 7-3 (результаты)
Результаты показаны на фиг. 17-23. Результаты показывают, что PK-7006, NK-7006 и PH-7069 имеют высокую стабильность при хранении даже при 60°C, в течение 4 недель.
Промышленная применимость
[0317]
Согласно настоящему изобретению может быть обеспечена новая жидкая композиция, содержащая нуклеиновую кислоту, в частности фармацевтическая композиция, обеспечивающая улучшенную стабильность молекулы нуклеиновой кислоты. Следовательно, становится возможным хранение, транспортировка и т.п. при температуре окружающей среды, и композиция очень полезна, поскольку может быть обеспечена композиция, содержащая нуклеиновые кислоты с превосходной способностью к манипулированию с ними.
Данная заявка основана на заявке на патент № 2014-267087, поданной в Японии (дата подачи заявки: 29 декабря 2014 года) и 2015-081298, поданной в Японии (дата подачи заявки: 10 апреля 2015 года), содержание которых полностью включено в данное описание.
--->
Список последовательностей
<110> BONAC CORPORATION
<120> Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты
<130> 092374
<150> JP 2014-267087
<151> 2014-12-29
<150> JP 2015-081298
<151> 2015-04-10
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> антисмысловая, нуклеотид в положениях 1-5 и 16-20 представляет РНК.
<400> 1
gccucagtct gcttcgcacc 20
<210> 2
<211> 80
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> миРНК
<400> 2
ugggaugagg uaguagguug uauaguuuua gggucacacc caccacuggg agauaacuau 60
acaaucuacu gucuuuccua 80
<210> 3
<211> 28
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> аптамер, T в положении 28 представляет 3'-3'-связанный дезокситимидин.
<400> 3
cggaaucagu gaaugcuuau acauccgt 28
<210> 4
<211> 18
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> контролирующая экспрессию область
<400> 4
uaugcugugu guacucug 18
<210> 5
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> контролирующая экспрессию область
<400> 5
ucgaaguacu cggcguagg 19
<210> 6
<211> 19
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> контролирующая экспрессию область
<400> 6
guugucauau uucucgugg 19
<210> 7
<211> 48
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 7
gcagaguaca cacagcauau accgguauau gcugugugua cucugcuu 48
<210> 8
<211> 62
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 8
accuacgccg aguacuucga uuccccacac cggaaucgaa guacucggcg uagguucuuc 60
gg 62
<210> 9
<211> 62
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 9
accacgagaa auaugacaac ucccccacac cgggaguugu cauauuucuc gugguucuuc 60
gg 62
<210> 10
<211> 51
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 10
ggaacucuac cagaaauaua gcccgggcua uauuucuggu agaguuccac g 51
<210> 11
<211> 51
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 11
agccuuguac agcgagaucu uuccggaaag aucucgcugu acaaggcuuc g 51
<210> 12
<211> 49
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 12
ggugcuccau cuccuacuac gaccggucgu aguaggagau ggagcacca 49
<210> 13
<211> 48
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> молекула нуклеиновой кислоты
<400> 13
cuuacgcuga guacuucgaa accgguuucg aaguacucag cguaagug 48
<210> 14
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> siРНК
<400> 14
gugugaccaa aaguuacaug u 21
<210> 15
<211> 21
<212> РНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> siРНК
<400> 15
auguaacuuu uggucacacu c 21
<---
Claims (24)
1. Композиция для стабильного хранения молекулы нуклеиновой кислоты, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты и буфер, и которая обладает следующими признаками:
(а) находится в форме раствора при температуре окружающей среды,
(b) молекула нуклеиновой кислоты присутствует в композиции в концентрации от 0,1 до 10 мг/мл и
(с) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°С и относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания на момент начала хранения,
где молекула нуклеиновой кислоты представляет собой одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты
(1) с областью (X), линкерной областью (Lx) и областью (Xc), где линкерная область (Lx) соединяет область (X) и область (Xc), где область (Xc) комплементарна области (X), по меньшей мере одна область (X) и область (Xc) содержит последовательность контроля экспрессии, и где линкерная область (Lx) содержит аминокислотный остаток, полиаминовый остаток, остаток поликарбоновой кислоты или ненуклеотидную структуру, содержащую по меньшей мере пирролидиновый скелет или пиперидиновый скелет, или
(2) содержащую в направлении от 5’-конца к 3’-концу: 5’-концевую область (Xc), линкерную область (Lx), внутреннюю область (Z), линкерную область (Ly) и 3’-концевую область (Yc) в приведенном порядке, где внутренняя область (Z) образована соединением внутренней 5’-концевой области (X) и внутренней 3’-концевой области (Y), 5’-концевая область (Xc) комплементарна внутренней 5’-концевой области (X), 3’-концевая область (Yc) комплементарна внутренней 3’-концевой области (Y), по меньшей мере одна внутренняя область (Z), 5’-концевая область (Xc) и 3’-концевая область (Yc) содержит последовательность контроля экспрессии, и внутренняя область (Lx) и внутренняя область (Ly), соответственно, содержат нуклеотидный остаток, аминокислотных остаток, полиаминовый остаток и остаток поликарбоновой кислоты или ненуклеотидную структуру, содержащую пирролидиновый скелет или пиперидиновый скелет,
где буфер устанавливает значение рН композиции не менее 4,0 и не более 11,0.
2. Композиция по п.1, где содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 40°С и относительной влажности 75% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания на момент начала хранения,
где буфер устанавливает значение рН композиции не менее 4,0 и не более 10,0.
3. Композиция по п.1 или 2, где содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 60°С в течение 4 недель составляет не менее 60% относительно содержания на момент начала хранения,
где буфер устанавливает значение рН композиции не менее 5,0 и не более 8,0.
4. Композиция по п.1, где буфер устанавливает значение рН композиции до значения не ниже 4,0 и не выше 9,0.
5. Композиция по п.1, где буфер устанавливает значение рН композиции до значения не ниже 5,5 и не выше 7,5.
6. Композиция по п.1, где буфер устанавливает значение рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0.
7. Композиция по п.1, где буфер содержит один или более буферных агентов, выбранных из гидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, динатрия гидрофосфата, хлорида натрия, аргинина гидрохлорида, цитрата натрия, тринатрия цитрата дигидрата, L-глутамата мононатрия, ацетата натрия, карбоната натрия, гидрокарбоната натрия, лактата натрия, фосфата монокалия, гидроксида натрия, меглюмина, глицина, лимонной кислоты и уксусной кислоты.
8. Композиция по п.1, где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
9. Композиция по п.1, где указанная молекула нуклеиновой кислоты представляет молекулу ДНК, молекулу РНК или молекулу химерной нуклеиновой кислоты ДНК и РНК.
10. Композиция по п.1, где число нуклеотидов в указанной молекуле нуклеиновой кислоты составляет 10-300.
11. Композиция по п.1, где одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой терапевтический агент.
12. Способ получения композиции по любому из пп.1-11, включающий растворение указанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, доведение рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
13. Способ стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции по любому из пп.1-11, включающий растворение указанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, доведение рН композиции до значения не ниже 6,0 и не выше 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
14. Способ по любому из пп.12 или 13, где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
15. Способ по любому из пп.12-14, где одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой терапевтический агент.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014267087 | 2014-12-29 | ||
JP2014-267087 | 2014-12-29 | ||
JP2015-081298 | 2015-04-10 | ||
JP2015081298 | 2015-04-10 | ||
PCT/JP2015/080849 WO2016108264A1 (ja) | 2014-12-29 | 2015-10-30 | 核酸分子を安定に含有する組成物 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017126568A RU2017126568A (ru) | 2019-01-31 |
RU2017126568A3 RU2017126568A3 (ru) | 2019-05-20 |
RU2723032C2 true RU2723032C2 (ru) | 2020-06-08 |
Family
ID=56284418
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017126568A RU2723032C2 (ru) | 2014-12-29 | 2015-10-30 | Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20180036409A1 (ru) |
EP (1) | EP3241903A4 (ru) |
JP (2) | JP6462723B2 (ru) |
KR (2) | KR102585112B1 (ru) |
CN (1) | CN107208094A (ru) |
AU (2) | AU2015373071B2 (ru) |
BR (1) | BR112017014090A2 (ru) |
CA (1) | CA2971830A1 (ru) |
HK (1) | HK1244030A1 (ru) |
IL (1) | IL252905B (ru) |
MX (1) | MX2017008730A (ru) |
RU (1) | RU2723032C2 (ru) |
SG (1) | SG11201705312PA (ru) |
WO (1) | WO2016108264A1 (ru) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6609637B2 (ja) * | 2015-10-30 | 2019-11-20 | 株式会社ボナック | TGF−β1遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子を安定に含有する組成物 |
FR3058061A1 (fr) * | 2016-10-27 | 2018-05-04 | Selexel | Nouvelle utilisation d'oligonucleotides double brin |
JP2020500217A (ja) * | 2016-10-27 | 2020-01-09 | セレクセルSelexel | 癌治療用の新しい二本鎖オリゴヌクレオチド |
CN106857502A (zh) * | 2017-03-03 | 2017-06-20 | 湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司 | 一种防止rna降解的样品保存液以及保存方法 |
WO2019022257A1 (ja) | 2017-07-28 | 2019-01-31 | 杏林製薬株式会社 | 線維症治療剤 |
WO2019074110A1 (ja) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | 株式会社ボナック | 一本鎖核酸分子およびその製造方法 |
CN109402127B (zh) * | 2018-09-29 | 2021-12-10 | 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 | 一组与结缔组织生长因子特异性结合的高亲和力核酸适配体及其应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999039000A1 (en) * | 1998-01-30 | 1999-08-05 | Akzo Nobel N.V. | Improved method for the isolation of nucleic acid |
JP2002522092A (ja) * | 1998-08-12 | 2002-07-23 | アンティゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 血液を採取するための容器 |
US20070111221A1 (en) * | 2003-09-17 | 2007-05-17 | Francis Blanche | Method of preparation for pharmaceutical grade plasmid DNA |
WO2007121347A2 (en) * | 2006-04-13 | 2007-10-25 | Alcon Research, Ltd. | Rnai-mediated inhibition of spleen tyrosine kinase-related inflammatory conditions |
RU2418593C2 (ru) * | 2005-05-19 | 2011-05-20 | Кьюрвэк Гмбх | Оптимизированная композиция для инъекции рнк |
WO2014134797A1 (zh) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 脂质体制剂、制备方法及其应用 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS58102724A (ja) | 1981-12-15 | 1983-06-18 | Mitsubishi Chem Ind Ltd | 防滑性ポリプロピレン成形品 |
JP2708960B2 (ja) | 1990-08-16 | 1998-02-04 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | サイトメガウイルス感染の作用を変調するオリゴヌクレオチド |
ES2234018T3 (es) * | 1996-04-26 | 2005-06-16 | MERCK & CO., INC. | Formulaciones de vacunas de adn. |
EP0957929B1 (en) | 1996-10-25 | 2006-02-22 | Gilead Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor (vegf) nucleic acid ligand complexes |
CN100471522C (zh) * | 1998-03-13 | 2009-03-25 | 惠氏 | 聚核苷酸组合物及其制备方法与用途 |
US6726821B1 (en) * | 1999-12-02 | 2004-04-27 | Hymo Corporation | Polyacrylamide precast gels for electrophoresis, process for producing the same and electroporesis method by using the gels |
JP3967516B2 (ja) * | 2000-02-29 | 2007-08-29 | ハイモ株式会社 | Dnaの電気泳動法 |
DE10006662A1 (de) * | 2000-02-15 | 2001-08-23 | Antigen Produktions Gmbh | Gefäß zur Nukleinsäureanalytik |
WO2004015075A2 (en) * | 2002-08-08 | 2004-02-19 | Dharmacon, Inc. | Short interfering rnas having a hairpin structure containing a non-nucleotide loop |
US7511131B2 (en) | 2002-11-13 | 2009-03-31 | Genzyme Corporation | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
JP4695075B2 (ja) * | 2003-06-18 | 2011-06-08 | イッスム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム | トランスフェクションで使用するためのスフィンゴ脂質ポリアルキルアミン抱合体 |
EA011554B1 (ru) * | 2004-09-17 | 2009-04-28 | Сентелион | Стабильные жидкие композиции плазмидной днк |
WO2009086558A1 (en) * | 2008-01-02 | 2009-07-09 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
JP5608998B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2014-10-22 | 東洋紡株式会社 | 保存安定性に優れた核酸増幅検出試薬キット |
US8691782B2 (en) * | 2010-08-03 | 2014-04-08 | Bonac Corporation | Single-stranded nucleic acid molecule having nitrogen-containing alicyclic skeleton |
DK3202760T3 (da) * | 2011-01-11 | 2019-11-25 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Pegylerede lipider og deres anvendelse til lægemiddelfremføring |
RU2647476C2 (ru) * | 2011-11-04 | 2018-03-15 | Нитто Денко Корпорейшн | Способ получения липидных наночастиц для доставки лекарственного средства |
EP2825565B1 (en) * | 2012-03-15 | 2019-04-03 | Aziende Chimiche Riunite Angelini Francesco A.C.R. | Glycogen-based cationic polymers |
CN104487096B (zh) * | 2012-05-10 | 2020-09-15 | 埃迪恩克斯股份有限公司 | 用于活性成分递送的配制物 |
-
2015
- 2015-10-30 SG SG11201705312PA patent/SG11201705312PA/en unknown
- 2015-10-30 CA CA2971830A patent/CA2971830A1/en active Pending
- 2015-10-30 BR BR112017014090-0A patent/BR112017014090A2/pt active Search and Examination
- 2015-10-30 KR KR1020177020431A patent/KR102585112B1/ko active IP Right Grant
- 2015-10-30 RU RU2017126568A patent/RU2723032C2/ru active
- 2015-10-30 CN CN201580071781.6A patent/CN107208094A/zh active Pending
- 2015-10-30 KR KR1020227003919A patent/KR20220035404A/ko not_active IP Right Cessation
- 2015-10-30 EP EP15875390.5A patent/EP3241903A4/en active Pending
- 2015-10-30 JP JP2016567299A patent/JP6462723B2/ja active Active
- 2015-10-30 US US15/538,550 patent/US20180036409A1/en not_active Abandoned
- 2015-10-30 WO PCT/JP2015/080849 patent/WO2016108264A1/ja active Application Filing
- 2015-10-30 MX MX2017008730A patent/MX2017008730A/es unknown
- 2015-10-30 AU AU2015373071A patent/AU2015373071B2/en active Active
-
2017
- 2017-06-14 IL IL252905A patent/IL252905B/en active IP Right Grant
-
2018
- 2018-03-14 HK HK18103545.4A patent/HK1244030A1/zh unknown
- 2018-12-27 JP JP2018244851A patent/JP6808710B2/ja active Active
-
2022
- 2022-06-22 AU AU2022204391A patent/AU2022204391A1/en active Pending
-
2023
- 2023-08-30 US US18/458,317 patent/US20240016937A1/en active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1999039000A1 (en) * | 1998-01-30 | 1999-08-05 | Akzo Nobel N.V. | Improved method for the isolation of nucleic acid |
JP2002522092A (ja) * | 1998-08-12 | 2002-07-23 | アンティゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 血液を採取するための容器 |
US20070111221A1 (en) * | 2003-09-17 | 2007-05-17 | Francis Blanche | Method of preparation for pharmaceutical grade plasmid DNA |
RU2418593C2 (ru) * | 2005-05-19 | 2011-05-20 | Кьюрвэк Гмбх | Оптимизированная композиция для инъекции рнк |
WO2007121347A2 (en) * | 2006-04-13 | 2007-10-25 | Alcon Research, Ltd. | Rnai-mediated inhibition of spleen tyrosine kinase-related inflammatory conditions |
WO2014134797A1 (zh) * | 2013-03-06 | 2014-09-12 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 脂质体制剂、制备方法及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2017008730A (es) | 2017-11-17 |
JP2019077696A (ja) | 2019-05-23 |
IL252905B (en) | 2020-09-30 |
AU2022204391A1 (en) | 2022-07-14 |
CN107208094A (zh) | 2017-09-26 |
JP6808710B2 (ja) | 2021-01-06 |
KR20220035404A (ko) | 2022-03-22 |
SG11201705312PA (en) | 2017-07-28 |
JP6462723B2 (ja) | 2019-01-30 |
EP3241903A1 (en) | 2017-11-08 |
RU2017126568A (ru) | 2019-01-31 |
IL252905A0 (en) | 2017-08-31 |
RU2017126568A3 (ru) | 2019-05-20 |
AU2015373071A1 (en) | 2017-07-13 |
US20180036409A1 (en) | 2018-02-08 |
CA2971830A1 (en) | 2016-07-07 |
US20240016937A1 (en) | 2024-01-18 |
KR102585112B1 (ko) | 2023-10-10 |
JPWO2016108264A1 (ja) | 2017-08-31 |
EP3241903A4 (en) | 2018-07-04 |
AU2015373071B2 (en) | 2022-03-31 |
BR112017014090A2 (pt) | 2018-03-06 |
HK1244030A1 (zh) | 2018-07-27 |
KR20170094797A (ko) | 2017-08-21 |
WO2016108264A1 (ja) | 2016-07-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2723032C2 (ru) | Композиция, стабильно содержащая молекулу нуклеиновой кислоты | |
KR101894701B1 (ko) | 함질소 지환식 골격을 갖는 일본쇄 핵산 분자 | |
JP6162182B2 (ja) | 遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子 | |
JP5876890B2 (ja) | アミノ酸骨格を有する一本鎖核酸分子 | |
RU2740032C2 (ru) | ВСТРЕЧАЮЩИЕСЯ В ПРИРОДЕ миРНК ДЛЯ КОНТРОЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | |
WO2018182008A1 (ja) | 遺伝子発現制御機能を有する環状型核酸分子 | |
JP2013153736A (ja) | ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子 | |
WO2013133393A1 (ja) | Vegf遺伝子の発現抑制用一本鎖核酸分子 | |
JP7204649B2 (ja) | 線維症治療剤 |