KR20220035404A - 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물 - Google Patents

핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20220035404A
KR20220035404A KR1020227003919A KR20227003919A KR20220035404A KR 20220035404 A KR20220035404 A KR 20220035404A KR 1020227003919 A KR1020227003919 A KR 1020227003919A KR 20227003919 A KR20227003919 A KR 20227003919A KR 20220035404 A KR20220035404 A KR 20220035404A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
region
formulation
nucleic acid
buffer
test composition
Prior art date
Application number
KR1020227003919A
Other languages
English (en)
Inventor
타이무 야마다
히데카즈 토요후쿠
Original Assignee
가부시키가이샤 보낙
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 가부시키가이샤 보낙 filed Critical 가부시키가이샤 보낙
Publication of KR20220035404A publication Critical patent/KR20220035404A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3519—Fusion with another nucleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/50—Methods for regulating/modulating their activity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 핵산 분자 및 버퍼를 포함하며, (a) 주위 온도에서 용액의 형태를 나타내고; (b) 25℃, 상대습도 60%에서 4주간 보관 후의 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상인 특성을 갖는 조성물을 제공한다.

Description

핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물{COMPOSITION CONTAINING NUCLEIC ACID MOLECULE STABLY}
본 발명은 생물학적 활성을 갖는 핵산 분자, 예를 들어, 타겟 유전자의 발현 또는 타겟 단백질의 기능을 조절하는 핵산 분자를 포함하는 조성물, 이의 제조 방법, 및 액상 조성물 내 상기 핵산 분자를 안정화시키는 방법-에 관한 것으로, 이는 핵산 분자의 안정성이 향상된 신규한 조성물, 특히 약학 조성물이다.
생물학적 활성을 갖는 짧은 사슬 핵산 분자로서, 안티센스 핵산, siRNA, shRNA, 마이크로RNA (miRNA), 디코이 핵산, 리보자인, 앱타머, 및 이의 유사체가 알려져 있음에 따라, 이들을 이용한 약학 제품의 개발이 지속되고 있다 (예: 특허문헌 1 내지 3).
상기 핵산들이 용액 상에서 잘 분해되고 불안정하기 때문에, 주위 온도에서 이를 다루는 것은 극히 어렵다. 그러므로, 동결-건조법 및 Tris-EDTA (TE) 버퍼에 50% 에탄올을 첨가하고 이를 -20℃에서 동결시키지 않고 보관하는 방법이 일반적으로 사용되고 있다.
JP-B-2708960 JP-B-3626503 미국 등록특허 7,511,131호
이러한 배경 하에, 조작능 면에서 우수하고, 주위 온도에서 핵산을 유효 성분으로서 안정하게 유지할 수 있는 안정한 핵산 제조 방법의 개발이 요구되고 있다.
본 발명의 과제는 핵산을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물 및 이의 제조 방법을 제공하는 것으로, 이는 유효 성분의 안정성이 향상된 신규한 약학 조성물이다.
본 발명자들은 상기한 문제를 해결하고자 집중적인 연구를 수행한 결과, 핵산 분자 용액의 pH를 특정 범위에 들어가도록 조절할 수 있는 버퍼를 사용함으로써 핵산의 안정성이 현저히 예기치 않게 향상될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
이에 따라, 본 발명은 다음과 같다.
[1] 핵산 분자 및 버퍼를 포함하며, 하기 특성들을 갖는 조성물:
(a) 주위 온도에서 용액의 형태를 나타냄; 및
(b) 25℃, 상대습도 60%에서 4주간 보관 후의 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상임.
[2] [1]의 조성물에 있어서, 40℃, 상대습도 75%에서 4주간 보관 후 핵산 분자의 함량은 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상인 조성물.
[3] [1] 또는 [2]의 조성물에 있어서, 60℃에서 4주간 보관 후 핵산 분자의 함량은 보관 시작 시의 함량 대비 60% 이상인 조성물.
[4] [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 조성물의 pH를 4.0 이상 9.0 이하로 조정하는 조성물.
[5] [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 조성물의 pH를 5.5 이상 7.5 이하로 조정하는 조성물.
[6] [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 조성물의 pH를 6.0 이상 7.0 이하로 조정하는 조성물.
[7] [1] 내지 [6] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 디히드로겐 포스페이트, 디소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 아르기닌 히드로클로라이드, 소듐 시트레이트, 트리소듐 시트레이트 이수화물, 모노소듐 L-글루타메이트, 소듐 아세테이트, 소듐 카보네이트, 소듐 히드로겐 카보네이트, 소듐 락테이트, 모노포타슘 포스페이트, 소듐 히드록시드, 메글루민, 글리신, 시트르산, 및 아세트산에서 선택되는 하나 이상의 완충제를 포함하는 조성물.
[8] [1] 내지 [7] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 시트르산 및/또는 인산을 포함하는 조성물.
[9] [1] 내지 [8] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 핵산 분자는 단일 가닥 핵산 분자 또는 이중 가닥 핵산 분자인 조성물.
[10] [1] 내지 [9] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 핵산 분자는 DNA 분자, RNA 분자, 또는 DNA 및 RNA의 키메릭 핵산 분자인 조성물.
[11] [1] 내지 [10] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 핵산 분자의 뉴클레오티드 수는 10 내지 300인 조성물.
[12] [1] 내지 [11] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 핵산 분자는 타겟 유전자의 발현 또는 타겟 단백질의 기능을 조절하는 서열을 포함하는 조성물.
[13] [1] 내지 [11] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 조성물.
[14] [1] 내지 [13] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 핵산 분자는 안티센스 핵산, siRNA 또는 shRNA, miRNA, 리보자임, 디코이 핵산 또는 앱타머인 조성물.
[15] [1] 내지 [14] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인 조성물.
[16] 조성물의 pH를 6.0 이상 7.0 이하로 조정하는 버퍼에 상기 핵산 분자를 용해시키는 단계, 및 상기 용액을 주위 온도에서 보관하는 단계를 포함하는, [1] 내지 [15] 중 어느 하나의 조성물의 제조 방법.
[17] 조성물의 pH를 6.0 이상 7.0 이하로 조정하는 버퍼에 핵산 분자를 용해시키는 단계, 및 상기 용액을 주위 온도에서 보관하는 단계를 포함하는, 조성물 내 핵산 분자의 안정화 방법.
[18] [16] 또는 [17]의 조성물에 있어서, 상기 버퍼는 시트르산 및/또는 인산을 포함하는 방법.
[19] [16] 내지 [18] 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인 조성물.
본 발명에 따르면, 유효 성분인 핵산 분자의 안정성이 증가되며 조작능에서 우수한 신규 조성물로서, 구체적으로 약학 조성물이 제공될 수 있다.
도 1은 각 pH의 버퍼를 이용하여 제조한 PH-0009에 대한 25℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 2는 각 pH의 버퍼를 이용하여 제조한 PH-0009에 대한 40℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 3은 각 pH의 버퍼를 이용하여 제조한 PH-0009에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 4는 각 농도의 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PH-0009에 대한 40℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 5는 각 농도의 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PH-0009에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 6은 10 mg/mL PH-0009 용액의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 7은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 NK-7006 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 8은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 NK-7007 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 9는 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PK-7006 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 10은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PK-7015 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 11은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PH-7069 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 12는 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 Kynamro-7001 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 13은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 PH-7081 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 14는 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 NI-7001 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 15는 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 NM-7001 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 16은 0.05 M 시트레이트 버퍼를 이용하여 제조한 Macugen-7001 용액에 대한 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 17은 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 PK-7006 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 18은 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 NK-7006 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 19는 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 PH-7069 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 20은 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 NI-7001 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 21은 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 NM-7001 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 22는 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 Kynamro-7001 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
도 23은 각 pH의 0.05 M 시트레이트 버퍼, 0.05 M 포스페이트 버퍼, 및 0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼를 이용하여 제조한 Macugen-7001 용액에 대한 60℃에서의 안정성 시험 결과를 보여주는 것이다.
본 발명은 주위 온도에서 용액의 형태로 생물학적 활성을 가지는 핵산 분자를 안정적으로 보관할 수 있는 조성물을 포함하는 핵산 분자를 제공한다(이하 “본 발명의 조성물”이라고 함). 이하 사용되는, “주위 온도”는 15 내지 30℃를 의미하고, “안정적으로 보관되는 것”은 보관 시작 시 (조성물의 제조 시)의 핵산 분자의 80% 이상이 분해되지 않고 (1) 4주 이상, 바람직하게 (2) 12주 이상 (약 3개월), 보다 바람직하게 (3) 200주 이상 (약 3.7년) 동안 보관되는 것을 의미한다. 상기 보관 안정성은 하기 안정성 시험의 결과로부터 확인되거나 예측될 수 있다.
(1) 25℃, 상대 습도 60%에서 4주간 보관 후 조성물 내 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상이다.
(2) 40℃, 상대 습도 75%에서 4주간 보관 후 조성물 내 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상이다.
(3) 60℃에서 4주간 보관 후 조성물 내 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 60% 이상, 바람직하게 70% 이상, 보다 바람직하게 80% 이상이다.
여기서 사용되는, 조성물 내 핵산 분자의 함량은, 시험 시료와 동량의 핵산 분자를 주사용수에 용해시켜 얻은 용액 (100%)과 검정 곡선 시료로서 상기 용액과 주사용수를 9:1, 8:2, 7:3, 6:4 (각각 90%, 80%, 70%, 60%)로 혼합하여 얻은 용액을 사용하여, 피크 면적을 측정하기 위하여 각 검정 곡선 시료 10 μL를 HPLC에 적용시킨 후, 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 통하여 측정된 각 검정 곡선 시료의 값으로 그래프를 그리고 (plotting), 회귀곡선 (Y=aX+b) (검정 곡선)을 최소 제곱법에 의해 얻고, 이론적 함량(%)을 얻기 위하여 검정 곡선과 동일한 조건 하에서 HPLC로 측정한 시험 시료의 피크 면적을 적용하여, 결정된다. 상기 HPLC의 측정 조건은 다음과 같다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다.
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
바람직하게, 본 발명의 조성물은, 60℃에서 4주간 보관 후 조성물 내의 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 60% 이상, 바람직하게 70% 이상, 더욱 바람직하게 80% 이상, 더욱 더 바람직하게 85% 이상, 특히 바람직하게 90% 이상이다.
1. 핵산 분자
본 발명의 조성물에 포함된 핵산 분자는 디옥시리보뉴클레오티드 (DNA) 및/또는 리보뉴클레오티드 (RNA)를 구성 단위(들)로 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드인 이상 특별히 제한되지 않으며, DNA 또는 RNA 단독, 또는 DNA 및 RNA의 키메릭 핵산으로 구성될 수 있다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 이중 가닥일 경우, 이는 DNA 이중 가닥, RNA 이중 가닥, DNA-RNA 하이브리드 중 어느 것이든 상관없다. 또한, 핵산-유래 구조 (LNA, DNA, RNA 등과 같은 핵산으로 구성되는 분자적 미립자, 특히 키메릭 핵산, 헤테로 이중 가닥 핵산 또는 삼중 가닥 핵산 구조 등)가 널리 적용될 수 있다.
본 발명의 조성물 내 핵산 분자의 염기 수는 일반적으로 10 내지 300개, 바람직하게 10 내지 200개, 더욱 바람직하게 10 내지 150개, 더욱 더 바람직하게 15 내지 100개, 특히 바람직하게 20 내지 80개이다. 본 발명의 상세한 설명에서, “siRNA”, “shRNA”, “miRNA”, 및 “리보자임”은, 다르게 기술하지 않는 한, 기능에 기초한 명칭으로, RNA 단독으로 구성될 수 있거나, 1 이상(예: 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 5 (1, 2, 3, 4, 5))의 뉴클레오티드는 DNA로 선택적으로 치환된다.
본 발명의 조성물 내 핵산 분자는, 타겟 유전자의 발현 또는 타겟 단백질의 기능 등을 조절하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분자와 같은, 생물학적 활성을 갖는 분자인 것이 바람직하다. 여기서 사용되는, “조절”은 상향 조절 (발현 또는 기능의 촉진) 및 하향 조절 (발현 또는 기능의 억제)을 모두 포함한다. 타겟 유전자의 발현을 조절하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자의 예로는 안티센스 핵산, siRNA, shRNA, miRNA, 리보자임 등이 포함된다. 타겟 단백질의 기능을 억제하는 핵산 분자의 예로는 앱타머, 디코이 핵산 등이 포함된다.
안티센스 핵산은 타겟 mRNA (또는 그의 초기 전사 산물)를 구성하는 핵산, 또는 타겟 mRNA 또는 타겟 miRNA를 발현하는 세포의 생리학적 조건 하에서 타겟 miRNA (또는 그의 초기 전사 산물)와 혼성화할 수 있고, mRNA에 의해 코딩되는 단백질로의 번역을 입체 장애 또는 타겟 mRNA의 분해에 의하여 저해할 수 있고 (또는 그의 초기 전사 산물의 스플라이싱을 저해), 또는 타겟 miRNA를 저해 또는 분해시킴으로써 miRNA에 의한 유전자 발현 조절을 억제할 수 있는, 염기 서열을 말한다.
안티센스 핵산의 타겟 영역의 길이는 안티센스 핵산의 혼성화에 따라 단백질로의 번역 및 miRNA에 의한 유전자 발현의 조절이 저해될 수 있는 한 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어 짧은 것으로는 약 10 염기, 긴 것으로는 mRNA 또는 그의 초기 전사 산물의 전체 서열이다. 용이한 합성, 항원성, 세포내 수송 등의 문제를 고려할 때, 약 10 내지 약 40 염기 길이, 구체적으로 약 15 내지 30 염기 길이가 바람직하나, 그 길이는 이에 제한되지 않는다.
안티센스 핵산으로는 알려진 어느 mRNA를 표적하는 핵산이든지 사용될 수 있다. 바람직한 예로는 인간의 질환에 대한 약물 개발 표적으로서 가능성이 있는 단백질을 코딩하는 mRNA에 대한 안티센스 핵산이 있다. 인간의 질환과 관련이 있는 안티센스 핵산의 구체적인 예로는 ApoB100 (고콜레스테롤혈증), dystrophin (근위축병), STAT3 (악성림프종) 등의 mRNA (또는 그의 초기 전사 산물)를 표적으로 하는 안티센스 핵산, miR-122 (C형 간염)와 같은 miRNA 등을 표적으로 하는 안티센스 핵산 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 구체적인 예로는 서열번호 1로 표시되는 미포멀슨 (mipomersen) (상품명: Kynamro; 단, 시판되는 약품 중 RNA는 2'-O-메톡시에틸화되고, 사이토신 및 우라실은 5-메틸화됨) (ApoB100 mRNA에 대한 안티센스 핵산)이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (서열번호 1)
(대문자는 RNA를, 소문자는 DNA를 나타낸다)
안티센스 핵산은 cDNA 서열 또는 게놈 DNA 서열에 기초하여 타겟 서열을 결정하고, 시판되는 DNA/RNA 자동 합성기 (Applied Biosystems, Beckman Instruments 등)를 사용하여 그에 상보적인 서열을 합성함으로써 제조될 수 있다.
siRNA는 타겟 유전자 또는 그의 일부 서열의 mRNA 뉴클레오티드 서열 (이하 타겟 뉴클레오티드 서열)에 상보적인 서열을 갖는 RNA, 및 이에 상보적인 가닥으로 구성되는 이중 가닥 올리고 RNA이다. 또한, 타겟 뉴클레오티드 서열에 상보적인 서열 (제1 서열) 및 이에 상보적인 서열 (제2 서열)이 헤어핀 루프 영역을 통해 연결되어 있고, 제1 서열 및 제2 서열의 이중 가닥 구조는 헤어핀 루프 형태의 구조 (작은 헤어핀 RNA: shRNA)로 형성되어 있는 단일 가닥 RNA는 siRNA의 바람직한 실시예 중 하나이다. 나아가, 제1 서열 및 제2 서열의 이중 가닥 구조의 양 말단이 루프 구조로 닫혀 있는 덤벨 타입 핵산 또한 바람직한 실시예 중 하나이다.
siRNA/shRNA는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 중 하나 또는 모두의 5' 말단 또는 3' 말단에 돌출부를 가질 수 있다. 돌출부는 센스 가닥 및/또는 안티센스 가닥의 말단에 1 내지 여러 개 (예: 1, 2, 또는 3)의 염기를 첨가하여 형성된다.
RNA 간섭이 유도될 수 있는 한 siRNA/shRNA의 염기 길이는 특별히 제한되지 않으나, 예를 들어, 한쪽 가닥은 10 내지 50 염기 길이, 바람직하게 15 내지 30 염기 길이, 더욱 바람직하게 21 내지 27 염기 길이를 가진다.
siRNA/shRNA로는, 알려진 어느 mRNA를 표적하는 siRNA/shRNA이든지 사용될 수 있고, 예를 들어, 인간의 질환에 대한 약물 개발 표적으로서 가능성이 있는 단백질을 코딩하는 mRNA에 대한 siRNA/shRNA가 바람직하다. 인간의 질환과 관련이 있는 siRNA/shRNA의 구체적인 예로는 결합 조직 성장 인자 (CTGF) (섬유증), 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 뉴클레오캡시드 (RSV 감염), RTP801 (당뇨병성 황반부종), 트란스시레틴 (아밀로이드증), 콜라겐-특이적 샤페론 (HSP47) (간경화) 등을 표적으로 하는 siRNA/shRNA 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
siRNA는 유전자 재조합 기술을 이용한 종래 알려진 방법 또는 제품을 사용하여 화학 합성에 의해 수득될 수 있다. 시판되는 핵산을 적절하게 사용하는 것 또한 가능하다.
예를 들어, siRNA는 표적하고자 하는 mRNA의 염기 서열 정보에 기초하여 시판되는 소프트웨어 (예: RNAi Designer; Invitrogen)를 사용하여 적절하게 디자인될 수 있다. 이는 mRNA 상 타겟 서열의 각 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 시판되는 DNA/RNA 자동 합성기 (Applied Biosystems, Beckman Instruments 등)로 합성한 후, 이를 약 90 내지 약 95℃에서 약 1분간 적절한 어닐링 버퍼에서 변성시키고, 이를 약 30 내지 약 70℃에서 약 1 내지 약 8시간 동안 어닐링 시켜 제조될 수 있다.
miRNA는 약 20 내지 25 염기를 갖는 내인성 비-암호화 RNA (ncRNA)로, 게놈 상에서 코딩된다. 이는 siRNA 처럼 타겟 mRNA을 절단하지는 않으나, 타겟 mRNA의 3' 비번역 영역 (UTR)을 인식함으로써 번역을 조절한다. 본 발명에서 miRNA는 세포질 내 타겟 mRNA에 작용하며 단백질로의 번역을 저해하는 내인성 miRNA와, 핵 내에서 작용하며 양 말단에 RNA 올리고머를 갖고 중앙부에 DNA 올리고머를 갖는 갭머 (gapmer) 구조에 의하여 RNase H-의존성 방식으로 mRNA를 분해하는 miRNA를 포함한다.
miRNA로는 알려진 어느 miRNA든지 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간의 질환에 대한 약물 개발 표적 또는 그의 전구체로서 가능성이 있는 단백질을 코딩하는 mRNA를 표적하는 miRNA가 바람직하다. 인간의 질환과 관련이 있는 miRNA의 구체적인 예로는 let-7 (폐암), miR-15a (B-세포 만성 림프구 백혈병), miR-143 (직장암), miR-139 (췌장암), 및 그의 전구체 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
miRNA의 더욱 구체적인 예로는 서열번호 2로 표시되는 인간 let7a-1 전구체가 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
5'-UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (서열번호 2)
miRNA는 유전자 재조합 기술을 이용한 종래 알려진 방법, 또는 화학 합성, 또는 제품을 이용하여 포유류 세포 (인간 세포 등)로부터 분리하여 수득될 수 있다. 시판되는 핵산을 적절하게 사용하는 것 또한 가능하다.
miRNA로서, 예를 들어, miRbase 데이터 베이스 등에서 얻은 목적 miRNA의 염기 서열 정보를 바탕으로 siRNA의 화학 합성에 사용된 것과 동일한 방법으로 이중 가닥 miRNA 또는 그의 단일 가닥 전구체가 제작될 수 있다.
앱타머는 단백질 등과 같은 타겟 분자에 결합하여 그의 기능을 조절 (일반적으로는 저해)하는 활성을 가지는 핵산 분자이다.
앱타머의 길이는 특별히 제한된 것은 아니나, 일반적으로 약 16 내지 약 200 뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, 약 100 미만의 뉴클레오티드일 수 있고, 바람직하게는 약 50 미만의 뉴클레오티드, 더욱 바람직하게는 약 40 미만의 뉴클레오티드일 수 있다.
앱타머로는, 알려진 어느 단백질이든지 표적하는 앱타머라면 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간의 질환에 대한 약물 개발 표적으로서 가능성이 있는 단백질을 표적하는 앱타머가 바람직하다. 인간의 질환과 관련이 있는 단백질에 대한 앱타머의 구체적인 예로는 혈관 내피 성장인자 (VEGF) (연령-관련 황반변성), factor IXa (관상 동맥 질환에서 혈액 응고를 억제), 신경 성장 인자 (NGF) (통증), 염기성 섬유아세포 성장 인자 (FGF2) (류마티스 관절염) 등에 대한 앱타머 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
앱타머의 더욱 구체적인 예로는 서열번호 3으로 표시되는 페갑타닙 (상품명: 마쿠젠 (등록상표); 모든 피리미딘 뉴클레오티드는 2'-플로린화되어 있고, 일부 퓨린 뉴클레오티드는 2'-메톡시화되어 있다) (VEGF 단백질에 대한 앱타머)이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (서열번호 3)
(t 는 3',3'-dT 이다.)
앱타머는 예를 들어 하기 방법에 의해 수득될 수 있다. 즉, 먼저 올리고뉴클레오티드 (예: 약 60 염기)를 DNA/RNA 자동 합성기로 무작위로 합성하여 올리고뉴클레오티드 풀을 만든다. 그 후, 목적 단백질에 결합하는 올리고뉴클레오티드들을 친화 컬럼으로 분리한다. 분리된 올리고뉴클레오티드를 PCR로 증폭한 후, 상기 선별 과정을 다시 수행한다. 상기 과정을 약 5회 이상 반복하여 목적 단백질에 강한 친화력을 갖는 앱타머를 선별한다.
리보자임은 핵산을 절단하는 효소 활성을 갖는 핵산 분자이다. 가장 넓은 활용도를 가지는 리보자임은 바이로이드, 바이러소이드 등과 같은 전염성 RNA에서 발견되는 자가 스플라이싱 RNA이며, 망치머리형, 헤어핀형 등이 알려져 있다. 망치머리 구조를 갖는 부분에 인접한 양 말단의 몇개의 염기 (총 약 10 염기)와 함께, mRNA 상의 목적하는 절단 부위에 상보적인 서열을 형성함으로써 타겟 mRNA 단독을 특이적으로 절단할 수 있다.
리보자임은 cDNA 서열 또는 게놈 DNA 서열에 기초하여 타겟 서열을 결정하고, 시판되는 DNA/RNA 자동 합성기 (Applied Biosystems, Beckman Instruments 등)를 사용하여 그에 상보적인 서열을 합성함으로써 제조될 수 있다.
디코이 핵산은 약 20 염기의 염기 길이를 가지며, 전사인자가 특이적으로 결합하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 이중 가닥 DNA 분자로, 전사인자를 유인하여 전사인자에 의한 타겟 유전자 발현을 조절 (전사 활성 인자의 경우 억제, 전사 억제 인자의 경우 촉진)한다.
디코이 핵산으로는, 알려진 어느 전사인자이든지 표적하는 디코이 핵산이라면 사용될 수 있다. 예를 들어, 인간의 질환에 대한 약물 개발 표적으로서 가능성이 있는 전사인자를 표적하는 디코이 핵산이 바람직하다. 인간의 질환과 관련이 있는 전사인자에 대한 디코이 핵산의 구체적인 예로는 NFκB (아토피 피부염, 혈관 협착증, 류마티스 관절염) 등에 대한 디코이 핵산 등이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
디코이 핵산은 종래 알려진 방법을 이용하여 화학 합성에 의해 수득될 수 있다.
예를 들어, 디코이 핵산은 표적하고자 하는 전사인자에 공통적으로 결합하는 서열 (binding consensus sequence)의 염기 서열 정보에 기초하여 적절하게 디자인될 수 있다. 이는 각 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 시판되는 DNA/RNA 자동 합성기 (Applied Biosystems, Beckman Instruments 등)로 합성한 후, 이를 약 90 내지 약 95℃에서 약 1분간 적절한 어닐링 버퍼에서 변성시키고, 이를 약 30 내지 약 70℃에서 약 1 내지 8시간 동안 어닐링 시켜 제조될 수 있다.
바람직한 일 실시예로서, 본 발명의 조성물에 포함되는 핵산 분자는 WO 2012/017919, WO 2013/103146, WO 2012/005368, WO 2013/077446, WO 2013/133393 등에 기술된 단일 가닥 핵산 분자일 수 있다.
이러한 단일 가닥 핵산 분자는, 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열을 포함하는 영역과 상기 서열에 상보적인 서열을 포함하는 영역이 직접 연결되거나 링커를 통해 연결된 핵산 분자이다. 상기 링커의 구체적인 예는, 이에 제한되지 않으나, 피롤리딘 골격 및 피페리딘 골격 중 적어도 하나를 포함하는 비-뉴클레오티드 구조를 갖는 링커, 뉴클레오티드 잔기 및/또는 비-뉴클레오티드 잔기로 구성되는 링커, 아미노산 잔기, 폴리아민 잔기, 폴리카복실산 잔기 등과 같은 비-뉴클레오티드 구조를 갖는 링커 등을 포함한다. 링커를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자의 구체적인 예는 이에 제한되지 않으나 다음과 같다.
I. 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열 (이하 때때로 발현 조절 서열로 약칭됨)을 포함하며, 피롤리딘 골격 및 피페리딘 골격 중 적어도 하나를 포함하는 비-뉴클레오티드 구조를 갖는 링커를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자
(1) ssPN 분자
상기 단일 가닥 핵산 분자의 일 실시예로서, WO 2012/017919에 기술되어 있는, 영역 (X), 링커 영역 (Lx), 및 영역 (Xc)를 갖는 단일 가닥 핵산 분자 (이하 “ssPN 분자”라고도 함)를 들 수 있고, 여기서 상기 링커 영역 (Lx)는 상기 영역 (X)와 영역 (Xc)를 연결하고, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)에 상보적이고, 상기 영역 (X)와 영역 (Xc) 중 적어도 하나는 상기 발현 조절 서열을 포함하고, 상기 링커 영역 (Lx)는 피롤리딘 골격 및 피페리딘 골격 중 적어도 하나를 포함하는 비-뉴클레오티드 구조를 포함하는, 단일 가닥 핵산 분자가 언급될 수 있다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 발현 조절 서열은, 예를 들어 인 비보 또는 인 비트로에서 ssPN 분자가 세포로 도입될 때 상기 타겟 유전자의 발현을 조절하는 활성을 나타내는 서열이다. 상기 발현 조절 서열은 특별히 제한되는 것은 아니나, 타겟 유전자의 종류에 따라 적절히 설정할 수 있다. 상기 발현 조절 서열로서, 예를 들어 siRNA에 의해 유발되는 RNA 간섭에 관여하는 서열을 적절히 사용할 수 있다. 즉, 타겟 mRNA에 결합하는 상기 siRNA 가닥의 RNA 서열을 상기 발현 조절 서열로 사용할 수 있다.
상기 발현 조절 서열은, 예를 들어, 상기 타겟 유전자에서 지정된 영역에 대하여 바람직하게 적어도 90%의 상보성, 더욱 바람직하게 95%의 상보성, 더욱 더 바람직하게 98%의 상보성, 그리고 특히 바람직하게 100%의 상보성을 가진다. 이러한 상보성이 만족될 경우, 예를 들어 오프-타겟 효과를 충분히 감소시킬 수 있다.
구체적인 예로서, 타겟 유전자가 TGF-β1일 때, 예를 들어 서열번호 4로 표시되는 18-염기 길이의 서열이 상기 발현 조절 서열로 사용될 수 있다.
5'-UAUGCUGUGUGUACUCUG-3' (서열번호 4)
상기 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx)는 예를 들어, 상기 피롤리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조, 또는 상기 피페리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조, 또는 상기 피롤리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조 및 상기 피페리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조 모두를 가질 수 있다. 상기 ssPN 분자는, 예를 들어, 인 비보 상의 인터페론 유도와 같은 부작용을 억제할 수 있고, 뉴클레아제에 대한 우수한 저항성을 나타낼 수 있다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 피롤리딘 골격은, 예를 들어 피롤리딘의 5원자 고리를 구성하는 1 이상의 탄소 원자가 치환된 피롤리딘 유도체의 골격일 수 있는데, 치환 시에는, 예를 들어 C-2 탄소 외의 탄소 원자가 치환되는 것이 바람직하다. 상기 탄소는, 예를 들어 질소 원자, 산소 원자, 또는 황 원자에 의해 치환될 수 있다. 상기 피롤리딘 골격은, 예를 들어 피롤리딘 5원자 고리에 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-질소 이중 결합을 포함할 수 있다. 상기 피롤리딘 골격에서, 피롤리딘 5원자 고리를 구성하는 탄소 원자 및 질소 원자는, 예를 들어 수소 원자 또는 후술되는 치환기에 결합될 수 있다. 상기 링커 영역 (Lx)는, 예를 들어 상기 피롤리딘 골격의 어느 기를 통하여든 결합될 수 있으며, 바람직하게는 상기 5원자 고리의 어느 하나의 탄소 원자 또는 어느 하나의 질소 원자, 바람직하게는 상기 5원자 고리의 2-위치의 탄소 (C-2) 원자 또는 질소 원자를 통하여 상기 영역 (X)와 영역 (Xc)에 결합될 수 있다. 상기 피롤리딘 골격의 예로는 프롤린 골격, 프롤리놀 골격 등이 포함된다. 상기 프롤린 골격, 프롤리놀 골격 등은, 예를 들어 인 비보 물질 또는 그의 환원형이기 때문에, 이들은 안전성도 매우 우수하다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 피페리딘 골격으로는, 예를 들어 피페리딘의 6원자 고리를 구성하는 1 이상의 탄소 원자가 치환된 피페리딘 유도체의 골격을 들 수 있다. 치환 시에는, 예를 들어 C-2 탄소 외의 탄소 원자가 치환되는 것이 바람직하다. 상기 탄소 원자는, 예를 들어 질소 원자, 산소 원자, 또는 황 원자에 의해 치환될 수 있다. 상기 피페리딘 골격은, 예를 들어 피페리딘 6원자 고리에, 예를 들어 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-질소 이중 결합을 또한 포함할 수 있다. 상기 피페리딘 골격에서, 피페리딘 6원자 고리를 구성하는 탄소 원자 및 질소 원자는, 예를 들어 수소 원자 또는 후술되는 치환기에 결합될 수 있다. 상기 링커 영역 (Lx)는 또한, 예를 들어 상기 피페리딘 골격의 어느 기를 통하여든 결합될 수 있으며, 바람직하게는 상기 6원자 고리의 2-위치의 탄소 (C-2) 원자 및 질소 원자를 통하여 상기 영역 (X)와 영역 (Xc)에 결합될 수 있다.
상기 링커 영역은, 예를 들어 상기 비-뉴클레오티드 구조만을 가지는 비-뉴클레오티드 잔기(들)로 구성될 수 있거나, 비-뉴클레오티드 구조 및 뉴클레오티드 잔기(들)를 가지는 비-뉴클레오티드 잔기(들)를 포함할 수 있다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역은, 예를 들어 하기 구조식 (I)로 표시될 수 있다.
상기 구조식 (I)에서, 예를 들어,
X1 및 X2는 각각 독립적으로 H2, O, S, 또는 NH이거나;
Y1 및 Y2는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2, NH, O, 또는 S이고;
R3는 수소 원자 또는 고리 A 상의 C-3, C-4, C-5 또는 C-6에 결합되는 치환기이고,
L1 은 n개의 원자를 갖는 알킬렌 사슬이고, 알킬렌 탄소 원자 상의 수소 원자는 OH, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH, 또는 SRa 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있으며, 또는,
L1 은 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소 원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬이고,
단, Y1 이 NH, O, 또는 S인 경우, Y1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이고, OR1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않으며;
L2 는 m개의 원자를 갖는 알킬렌 사슬이고, 알킬렌 탄소 원자 상의 수소 원자는 OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH, 또는 SRc 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있으며, 또는,
L2 는 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬이고,
단, Y2 가 NH, O, 또는 S인 경우, Y2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이고, OR2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않으며;
Ra, Rb, Rc, 및 Rd 는 각각 독립적으로 치환기 또는 보호기이고;
l 은 1 또는 2이고;
m은 0 내지 30 범위의 정수이고;
n은 0 내지 30 범위의 정수이고;
고리 A에서, 고리 A 상의 상기 C-2 외의 하나의 탄소 원자는 질소 원자, 산소 원자 또는 황 원자로 치환될 수 있고, 상기 고리 A 상에 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-질소 이중 결합을 포함할 수 있고,
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 각각 상기 링커 영역 (Ly)에 -OR1- 또는 -OR2- 를 통해 연결될 수 있고,
상기 R1 및 R2 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우, R1 및 R2 는 각각 독립적으로 뉴클레오티드 잔기 또는 상기 구조 (I)이다.
상기 구조식 (I)에서, 예를 들어, X1 및 X2 는 각각 독립적으로 H2, O, S, 또는 NH이다. 상기 구조식 (I)에 있어서, “X1 는 H2 이다”의 의미는 X1 이 X1 이 결합하는 탄소 원자와 함께 CH2 (메틸렌기)를 형성한다는 의미이다. 이는 X2 에도 동일하게 적용된다.
상기 구조식 (I)에서, Y1 및 Y2 는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2, NH, O, 또는 S이다.
상기 구조식 (I)에서, 고리 A의 l은 1 또는 2이다; l이 1일 때, 고리 A는 5원자 고리, 예를 들어 상기 피롤리딘 골격이다. 상기 피롤리딘 골격은, 예를 들어 프롤린 골격, 프롤리놀 골격 등이고, 그의 2가 구조로 예시될 수 있다. l이 2일 때, 고리 A는 6원자 고리, 예를 들어 상기 피페리딘 골격이다. 고리 A에서, 고리 A 상의 C-2 외의 하나의 탄소 원자는 질소 원자, 산소 원자 또는 황 원자로 치환될 수 있다. 고리 A는 탄소-탄소 이중 결합 또는 탄소-질소 이중 결합을 고리 A 상에 포함할 수 있다. 고리 A는, 예를 들어 L 형 또는 D 형일 수 있다.
상기 구조식 (I)에서, R3 는 수소 원자 또는 고리 A 상의 C-3, C-4, C-5 또는 C-6에 결합되는 치환기이다. R3 가 상기 치환기일 때, 치환기 R3 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. R3 가 복수개로 존재할 때, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다.
치환기 R3 는, 예를 들어, 할로겐, OH, OR4, NH2, NHR4, NR4R5, SH, SR4, 옥소 기 (=O) 등이다.
R4 및 R5 는, 예를 들어 각각 독립적으로 치환기 또는 보호기이고, 동일하거나 상이할 수 있다. 상기 치환기의 예로는 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아릴알킬, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 헤테로시클릴알케닐, 헤테로시클릴알킬, 헤테로아릴알킬, 실릴, 실릴옥시알킬 등이 포함된다. 이하 동일하게 적용된다. 치환기 R3 는 상기 나열된 치환기 중에서 선택될 수 있다.
상기 보호기는 예를 들어, 고-반응성 기능기를 비활성화시키는 기능기이다. 보호기의 예로는 알려진 보호기가 포함된다. 상기 보호기와 관련하여, 예를 들어 문헌 (J. F. W. McOmie, “Protecting groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York, 1973) 의 기술이 여기에 포함될 수 있다. 상기 보호기는 특별히 제한되는 것은 아니나, 그의 예에는 tert-부틸디메틸실릴기 (TBDMS), bis(2-아세톡시에틸옥시)메틸기 (ACE), 트리이소프로필실릴옥시메틸기 (TOM), 1-(2-시아노에톡시)에틸기 (CEE), 2-시아노에톡시메틸기 (CEM), 톨릴설포닐에톡시메틸기 (TEM), 및 디메톡시트리틸기 (DMTr)가 포함된다. R3 가 OR4 일 때, 상기 보호기는 특별히 제한되는 것은 아니나, 그의 예에는 TBDMS 기, ACE 기, TOM 기, CEE 기, CEM 기, 및 TEM 기가 포함된다. 보호기의 다른 예에는 후술될 실릴-포함 기가 포함된다. 이하 동일하게 적용된다.
상기 구조식 (I)에서, L1 은 n개의 원자를 갖는 알킬렌 사슬이다. 상기 알킬렌 탄소 원자(들) 상의 수소 원자(들)는 예를 들어 OH, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH, 또는 SRa 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있다. 또는, L1 은 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소 원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬일 수 있다. 상기 폴리에테르 사슬은 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜이다. Y1 이 NH, O, 또는 S인 경우, Y1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이고, OR1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않는다. 즉, 예를 들어, Y1 이 산소 원자인 경우, 그 산소 원자 및 L1 의 산소 원자는 서로 인접하지 않고, OR1 의 산소 원자와 L1 의 산소 원자는 서로 인접하지 않는다.
상기 구조식 (I)에서, L2 는 m개의 원자를 갖는 알킬렌 사슬이다. 상기 알킬렌 탄소 원자(들) 상의 수소 원자(들)는 OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH, 또는 SRc 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있다. 또는, L2 는 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬일 수 있다. Y2 가 NH, O, 또는 S인 경우, Y2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이고, OR2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않는다. 즉, 예를 들어, Y2 가 산소인 경우, 그 산소 원자 및 L2 의 산소 원자는 서로 인접하지 않고, OR2 의 산소 원자와 L2 의 산소 원자는 서로 인접하지 않는다.
L1 의 n과 L2 의 m은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 각각의 하한은 0일 수 있고, 그의 상한은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, n과 m은 원하는 상기 링커 영역 (Lx)의 길이에 따라 적절히 설정될 수 있다. 예를 들어, 제조 단가, 수율 등의 관점에서, n 및 m은 각각 0 내지 30이고, 바람직하게는 0 내지 20, 더욱 바람직하게는 0 내지 15이다. n 및 m은 동일하거나 (n = m) 상이할 수 있다. n + m 은, 예를 들어 0 내지 30이고, 바람직하게는 0 내지 20, 더욱 바람직하게는 0 내지 15이다.
예를 들어, Ra, Rb, Rc, 및 Rd 는 각각 독립적으로 치환기 또는 보호기이다. 상기 치환기 및 상기 보호기의 예는 상기한 것과 같다.
상기 구조식 (I)에서, 수소 원자는 각각 독립적으로 예를 들어 Cl, Br, F, 또는 I 과 같은 할로겐으로 치환될 수 있다.
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 예를 들어, 각각 링커 영역 (Lx)에 -OR1- 또는 -OR2- 를 통해 각각 연결된다. R1 및 R2 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. R1 및 R2 가 존재하는 경우, R1 및 R2 는 각각 독립적으로 뉴클레오티드 잔기 또는 상기 구조식 (I)로 표시되는 구조이다. R1 및/또는 R2 가 상기 뉴클레오티드 잔기인 경우, 예를 들어 상기 링커 영역 (Lx)는 뉴클레오티드 잔기 R1 및/또는 R2 를 제외한 상기 구조식 (I)의 구조를 갖는 상기 비-뉴클레오티드 잔기, 및 상기 뉴클레오티드 잔기(들)로 구성된다. R1 및/또는 R2 가 상기 구조식 (I)로 표시되는 구조인 경우, 상기 링커 영역 (Xc)의 구조는 예를 들어 상기 구조식 (I)의 구조를 갖는 2 이상의 상기 비-뉴클레오티드 잔기가 서로 연결된 것과 같다. 상기 구조식 (I)의 구조의 수는, 예를 들어 1, 2, 3 또는 4일 수 있다. 링커 영역 (Lx)가 상기 구조들을 복수개 포함하는 경우, 상기 (I)의 구조는, 예를 들어 직접 또는 상기 뉴클레오티드 잔기(들)를 통하여 연결될 수 있다. 반면, R1 및 R2 가 존재하지 않는 경우, 상기 링커 영역 (Lx)는 예를 들어 상기 구조식 (I)의 구조만을 갖는 상기 비-뉴클레오티드 잔기로 구성된다.
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)와 -OR1- 및 -OR2- 의 조합은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 하기 조건 중 어느 것일 수 있다.
조건 (1):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR2- 와 -OR1- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
조건 (2):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR1- 과 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
상기 구조식 (I)의 구조의 예로는 하기 구조식 (I-1) 내지 (I-9)의 구조가 포함된다. 하기 구조식에서, n과 m은 상기 구조식 (I)에서와 동일하다. 하기 구조식에서, q는 0 내지 10의 정수이다.
상기 구조식 (I-1) 내지 (I-9)에서, n, m, 및 q는 특별히 제한되지 않고, 전술한 바와 같다. 이의 구체적인 예로, 상기 구조식 (I-1)에서 n은 8, 상기 구조식 (I-2)에서 n은 3, 상기 구조식 (I-3)에서 n은 4 또는 8, 상기 구조식 (I-4)에서 n은 7 또는 8, 상기 구조식 (I-5)에서 n은 3, m은 4, 상기 구조식 (I-6)에서 n은 8, m은 4, 상기 구조식 (I-7)에서 n은 8, m은 4, 상기 구조식 (I-8)에서 n은 5, m은 4, 상기 구조식 (I-9)에서 q는 1, m은 4이다. 상기 구조식 (I-4)의 일 실시예 (n은 8)는 하기 구조식 (I-4a)로 나타내었고, 상기 구조식 (I-8)의 일 실시예 (n은 5, m은 4)는 하기 구조식 (I-8a)로 나타내었다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)에 상보적이다. 따라서, 상기 ssPN 분자에서 이중 가닥은, 상기 영역 (X)에 대해 상기 영역 (Xc)가 꺾여지고, 상기 영역 (Xc)와 영역 (X)가 자가-어닐링하여 형성될 수 있다.
상기 ssPN 분자에서, 예를 들어, 상기 영역 (X)와 이중 가닥을 형성하기 위해 상기 영역 (Xc)만 꺾여질 수도 있고, 또는 다른 이중 가닥이 다른 영역에 형성될 수 있다. 이하, 전자의 ssPN 분자, 즉, 하나의 위치에서 이중 가닥이 형성되는 ssPN 분자를 “제1 ssPN 분자”라 하고, 후자의 ssPN, 즉, 2개의 위치에서 이중 가닥이 형성되는 ssPN 분자를 “제2 ssPN 분자”라 한다. 상기 제1 및 제2 ssPN 분자의 예는 하기와 같다. 그러나, 본 발명이 이러한 실시예에 제한되는 것은 아님을 유의하여야 한다.
(1-1) 제1 ssPN 분자
상기 제1 ssPN 분자는, 예를 들어 상기 영역 (X), 상기 영역 (Xc), 및 상기 링커 영역 (Lx)를 포함하는 분자이다.
상기 제1 ssPN 분자는, 예를 들어 5' 측에서 3' 측 방향 순으로 상기 영역 (Xc), 상기 링커 영역 (Lx), 및 상기 영역 (X)를 포함하거나, 3' 측에서 5' 측 방향 순으로 상기 영역 (Xc), 상기 링커 영역 (Lx), 및 상기 영역 (X)를 포함할 수 있다.
상기 제1 ssPN 분자에서, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)에 상보적이다. 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 가지기만 하면 된다. 바람직하게, 상기 영역 (Xc)는 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 포함하거나 이로 구성된다. 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 완벽히 상보적이거나, 영역 (Xc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 이에 비상보적일 수 있다. 바람직하게, 영역 (Xc)는 이에 완벽히 상보적인 것이 바람직하다. 상기 표현 “하나 또는 몇 개의 염기”는, 예를 들어 1 내지 3개의 염기, 바람직하게 1 염기 또는 2 염기를 의미한다.
전술한 것과 같이, 상기 제1 ssPN 분자에서, 상기 발현 조절 서열은 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X) 중 적어도 하나에 포함될 수 있다. 상기 제1 ssPN 분자는 예를 들어 전술한 발현 조절 서열을 1, 또는 2 이상 포함할 수 있다.
후자의 경우, 전술한 제1 ssPN 분자는, 예를 들어 동일한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 동일한 발현 조절 서열; 동일한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 상이한 발현 조절 서열; 또는 상이한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 상이한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 상기 제1 ssPN 분자가 2 이상의 전술한 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 각 발현 조절 서열의 위치는 특별히 제한되는 것은 아니나, 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)에서 선택되는 하나의 영역 또는 다른 영역에 위치할 수 있다. 상기 제1 ssPN 분자가, 상이한 타겟 유전자에 대한 전술한 발현 조절 서열을 2 이상 포함하는 경우, 예를 들어, 상기 제1 ssPN 분자는 2종류 이상의 상이한 타겟 유전자의 발현을 조절할 수 있다.
상기 제1 ssPN 분자의 일 실시예는 WO 2012/017919, 도 1에 나타나며, 이를 참조할 수 있다.
상기 제1 ssPN 분자에서, 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X) 각각의 염기 수는 특별히 제한되지 않는다. 각 영역의 길이에 대한 예는 후술된다. 그러나, 본 발명이 결코 이에 제한되는 것은 아님을 유의하여야 한다. 본 발명에 있어서, “염기 수”는 “길이”를 의미하고, 예를 들어 이는 “염기 길이”라고도 나타낼 수 있다. 본 발명에서, 예를 들어, 염기 수와 관련된 수치 범위는 범위에 해당하는 양의 정수로 모두 기재된다. 예를 들어, “1 내지 4 염기”의 기재는 모두 “1,2, 3, 및 4 염기”를 개시하는 것이다 (이하 동일).
상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 전체 영역에 완벽히 상보적일 수 있다. 이 경우, 이는 예를 들어 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 5' 말단부터 3' 말단으로 이어지는 전체 영역에 상보적인 염기 서열로 구성됨을 의미한다. 달리 말해, 이는 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)와 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Xc)의 모든 염기가 상기 영역 (X)의 모든 염기에 상보적임을 의미한다.
나아가, 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 일부분에 완벽히 상보적일 수 있다. 이 경우, 이는 예를 들어 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 일부분에 상보적인 염기 서열로 구성됨을 의미한다. 달리 말해, 이는 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 염기 길이보다 1 염기 이상 짧은 염기 길이의 염기 서열로 구성되며, 상기 영역 (Xc)의 모든 염기가 상기 영역 (X) 일부분의 모든 염기에 상보적임을 의미한다. 상기 영역 (X)의 일부분은, 예를 들어 영역 (Xc) 측으로 상기 영역 (X) 내 마지막 염기 (첫번째 염기)로부터 연속되는 염기들로 구성되는 염기 서열을 갖는 영역인 것이 바람직하다.
상기 제1 ssPN 분자에서, 상기 영역 (X) 내 염기 (X) 수와, 상기 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수 간의 관계는 예를 들어 하기 조건 (3) 또는 (5)를 만족한다. 예를 들어, 전자의 경우, 특히 조건 (11)이 만족된다.
X> Xc 이다 (3)
X - Xc = 1 내지 10, 바람직하게는 1, 2, 또는 3이고,
더욱 바람직하게는 1 또는 2이다 (11)
X = Xc 이다 (5)
상기 영역 (X) 및/또는 영역 (Xc)가 상기 발현 조절 서열을 포함할 경우, 상기 영역은, 예를 들어 상기 발현 조절 서열 단독으로 구성되거나 상기 발현 조절 서열을 포함하는 영역일 수 있다. 상기 발현 조절 서열의 염기 수는, 예를 들어 19 내지 30이고, 바람직하게는 19, 20, 또는 21이다. 상기 발현 조절 서열을 포함하는 영역에서, 예를 들어 상기 발현 조절 서열은 추가적인 서열을 그의 5' 방향 및/또는 3' 방향으로 더 포함할 수 있다. 상기 추가적인 서열의 염기 수는, 예를 들어 1 내지 31이고, 바람직하게는 1 내지 21, 더욱 바람직하게는 1 내지 11이다.
상기 영역 (X)의 염기 수는 특별히 제한되지 않는다. 상기 영역 (X)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 영역 (X)의 염기 수의 하한은 예를 들어 19이고, 그 상한은 예를 들어 50이고, 바람직하게는 30, 더욱 바람직하게는 25이다. 구체적으로, 상기 영역 (X)의 염기 수는 예를 들어 19 내지 50이고, 바람직하게는 19 내지 30, 더욱 바람직하게는 19 내지 25이다.
상기 영역 (Xc)의 염기 수는 특별히 제한되지 않는다. 상기 영역 (Xc)의 염기 수의 하한은 예를 들어 19이고, 바람직하게는 20, 더욱 바람직하게는 21이고, 그 상한은 예를 들어 50이고, 더욱 바람직하게는 40, 더욱 더 바람직하게는 30이다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx)의 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 링커 영역 (Lx)의 길이는, 예를 들어 상기 영역 (X) 및 영역 (Xc)가 이중 가닥을 형성할 수 있을 정도가 바람직하다. 상기 링커 영역 (Lx)가 상기 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 상기 뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 상기 링커 영역 (Lx)의 염기 수의 하한은 예를 들어 1이고, 바람직하게는 2, 더욱 바람직하게는 3이고, 그의 상한은 예를 들어 100이고, 바람직하게는 80, 더욱 바람직하게는 50이다.
상기 제1 ssPN 분자의 전체 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 제1 ssPN 분자에서, 전체 염기 수 (ssPN 분자 전체 길이 중 염기의 수)의 하한은 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은, 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다. 상기 제1 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx)의 염기를 제외한 전체 염기 수의 하한은, 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다.
(1-2) 제2 ssPN 분자
상기 제2 ssPN 분자는, 예를 들어 상기 영역 (X), 상기 링커 영역 (Lx), 및 상기 영역 (Xc)에 더하여, 영역 (Y)와 상기 영역 (Y)에 상보적인 영역 (Yc)를 추가로 포함하는 분자이다. 상기 제2 ssPN 분자에서, 내부 영역 (Z)는 서로 연결된 상기 영역 (X) 및 영역 (Y)로 구성된다. 별도로 언급하지 않는 한, 상기 제1 ssPN 분자에 대한 설명은 제2 ssPN 분자에 대해서도 적용된다.
상기 제2 ssPN 분자는, 예를 들어 5' 측에서 3' 측 방향 순으로 상기 영역 (Xc), 상기 링커 영역 (Lx), 상기 영역 (X), 상기 영역 (Y), 및 상기 영역 (Yc)를 포함할 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Xc)는 “5' 측 영역 (Xc)"; 상기 내부 영역 (Z)의 영역 (X)는 “내부 5' 측 영역 (X)"; 상기 내부 영역 (Z)의 영역 (Y)는 “내부 3' 측 영역 (Y)"; 그리고 상기 영역 (Yc)는 “3' 측 영역 (Yc)”라고도 지칭한다. 또는, 상기 제2 ssPN 분자는, 예를 들어 3' 측에서 5' 측 방향 순으로 상기 영역 (Xc), 상기 링커 영역 (Lx), 상기 영역 (X), 상기 영역 (Y), 및 상기 영역 (Yc)를 포함할 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Xc)는 “3' 측 영역 (Xc)"; 상기 내부 영역 (Z)의 영역 (X)는 “내부 3' 측 영역 (X)"; 상기 내부 영역 (Z)의 영역 (Y)는 “내부 5' 측 영역 (Y)"; 그리고 상기 영역 (Yc)는 “5' 측 영역 (Yc)”라고도 지칭한다.
전술한 것과 같이, 상기 내부 영역 (Z)는, 예를 들어 서로 연결된 상기 영역 (X) 및 영역 (Y)로 구성된다. 예를 들어, 상기 영역 (X) 및 영역 (Y)는 그 사이에 어떠한 서열의 개입이 없이 서로 직접적으로 연결된다. 상기 내부 영역 (Z)는 단지 상기 영역 (Xc) 및 영역 (Yc) 간의 서열 컨텍스트를 지칭하기 위하여, “서로 연결된 상기 영역 (X) 및 영역 (Y)로 구성된” 것으로 정의된다. 상기 정의는, 상기 ssPN 분자의 이용에 있어, 상기 내부 영역 (Z) 내 영역 (X)와 영역 (Y)를 별개의 독립적인 영역인 것으로 제한하는 것을 의도하는 것은 아니다. 즉, 예를 들어, 상기 발현 조절 서열이 상기 내부 영역 (Z)에 포함될 경우, 상기 발현 조절 서열은 상기 내부 영역 (Z) 내에 영역 (X)와 영역 (Y)를 가로질러 배열될 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)에 상보적이다. 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 가지기만 하면 된다. 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열로 구성되거나, 이를 포함하는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 완벽히 상보적이거나, 영역 (Xc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 이에 비상보적일 수 있다. 영역 (Xc)는 이에 완벽히 상보적인 것이 바람직하다. 상기 표현 “하나 또는 몇 개의 염기”는, 예를 들어 1 내지 3개의 염기이고, 바람직하게는 1 염기 또는 2 염기를 의미한다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 영역 (Yc)는 상기 영역 (Y)에 상보적이다. 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 가지기만 하면 된다. 상기 영역 (Yc)는 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열로 구성되거나, 이를 포함하는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 완벽히 상보적이거나, 영역 (Yc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 이에 비상보적일 수 있다. 바람직하게, 영역 (Yc)는 이에 완벽히 상보적인 것이 바람직하다. 상기 표현 “하나 또는 몇 개의 염기”는, 예를 들어 1 내지 3개의 염기이고, 바람직하게는 1 염기 또는 2 염기를 의미한다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 영역 (X) 및 영역 (Y) 로 구성되는 상기 내부 영역 (Z), 및 영역 (Xc) 중 적어도 어느 하나는, 예를 들어 상기 발현 조절 서열을 포함한다. 나아가, 상기 영역 (Yc) 또한 상기 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 상기 내부 영역 (Z)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 예를 들어 상기 영역 (X) 및 영역 (Y) 중 하나는 상기 발현 조절 서열을 포함하거나, 상기 발현 조절 서열이 영역 (X)와 영역 (Y)에 걸쳐지도록 포함될 수 있다. 상기 제2 ssPN 분자는 예를 들어 전술한 하나의 발현 조절 서열, 또는 2 이상의 발현 조절 서열을 포함할 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자가 전술한 2 이상의 발현 조절 서열을 포함할 경우, 각 발현 조절 서열들의 위치는 특별히 제한되지 않는다. 이들은 상기 내부 영역 (Z) 및 영역 (Xc) 어느 하나에 위치하거나, 상기 내부 영역 (Z) 및 영역 (Xc) 중 어느 하나에 위치하거나, 이들 영역 외의 어느 영역이든지 위치할 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 예를 들어 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 서로 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 전자의 경우, 예를 들어 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 포스포디에스테르 결합 등에 의해 직접적으로 연결될 수 있다. 후자의 경우, 예를 들어 상기 제2 ssPN 분자는, 링커 영역 (Ly)가 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y) 사이에 위치하고, 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 링커 영역 (Ly)를 통해 연결될 수 있도록 설정될 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자가 상기 링커 영역 (Ly)를 가질 경우, 예를 들어 상기 링커 영역 (Ly)는 상기 뉴클레오티드 잔기(들)로 구성되는 링커, 또는 전술한 피롤리딘 골격 및 피페리딘 골격 중 적어도 하나를 포함하는 비-뉴클레오티드 구조를 갖는 링커일 수 있다. 후자의 경우, 상기 링커 영역 (Ly)는 예를 들어 상기 구조식 (I)로 나타낼 수 있고, 상기 링커 영역 (Lx)와 관련하여 전술한 구조식 (I)과 관련된 모든 설명은 링커 영역 (Ly)에도 적용된다.
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는, 예를 들어 각각 링커 영역 (Ly)에 -OR1- 또는 -OR2- 를 통해 각각 연결된다. 전술한 링커 영역 (Lx)에서와 마찬가지로, 상기 링커 영역 (Ly)에서 R1 및 R2 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있다.
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)와 상기 -OR1- 및 -OR2- 의 조합, 및 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)와 상기 -OR1- 및 -OR2- 의 조합은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 하기 조건 중 어느 것일 수 있다.
조건 (1):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR2- 와 -OR1- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고;
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 각각 -OR1- 과 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
조건 (2):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR2- 와 -OR1- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고;
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 각각 -OR2- 와 -OR1- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
조건 (3):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR1- 과 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고;
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 각각 -OR1- 과 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
조건 (4):
상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 각각 -OR1- 과 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고;
상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 각각 -OR2- 와 -OR1- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
상기 제2 ssPN 분자와 관련하여, 상기 링커 영역 (Ly)를 갖는 ssPN 분자의 일 실시예는 WO 2012/017919, 도 2에 나타나며, 이를 참조할 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 영역 (Xc), 영역 (X), 영역 (Y), 및 영역 (Yc) 각각의 염기 수는 특별히 제한되지 않는다. 각 영역의 길이에 대한 예는 후술된다. 그러나, 본 발명이 결코 이에 제한되는 것은 아님을 유의하여야 한다.
전술한 것과 같이, 예를 들어 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)의 전체 영역에 상보적일 수 있다. 이 경우, 예를 들어 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)와 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (X)의 전체 영역에 상보적인 염기 서열로 구성되는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)와 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Xc) 상의 모든 염기가 영역 (X) 상의 모든 염기와 상보적으로, 예를 들어 영역 (Xc)가 영역 (X)에 완벽히 상보적인 것이 더욱 바람직하다. 그러나, 영역 (Xc)의 구성은 이에 제한되지 않음을 유의하여야 하며, 전술한 것과 같이 영역 (Xc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 영역 (X)에서 대응되는 염기에 비상보적일 수 있다.
나아가, 전술한 것과 같이 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 일부분에 상보적일 수 있다. 이 경우, 예를 들어 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 일부분과 동일한 염기 길이를 가지며, 즉, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)의 염기 길이보다 1 염기 이상 짧은 염기 길이의 염기 서열로 구성되는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 일부분과 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Xc) 상의 모든 염기가 영역 (X)의 일부분 상의 모든 염기와 상보적으로, 예를 들어 영역 (Xc)가 영역 (X)의 일부분에 완벽히 상보적인 것이 더욱 바람직하다. 상기 영역 (X)의 일부분은, 예를 들어 영역 (Xc) 측으로 상기 영역 (X) 내 마지막 염기 (첫번째 염기)로부터 연속되는 염기들로 구성되는 염기 서열을 갖는 영역인 것이 바람직하다.
전술한 것과 같이, 상기 영역 (Yc)는 예를 들어, 영역 (Y)의 전체 영역에 상보적일 수 있다. 이 경우, 예를 들어 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)와 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Y)의 전체 영역에 상보적인 염기 서열로 구성되는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)와 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Yc) 상의 모든 염기가 영역 (Y) 상의 모든 염기와 상보적으로, 예를 들어 영역 (Yc)가 영역 (Y)에 완벽히 상보적인 것이 더욱 바람직하다. 그러나, 영역 (Yc)의 구성은 이에 제한되지 않음을 유의하여야 하며, 전술한 것과 같이 영역 (Yc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 영역 (Y)에서 대응되는 염기에 비상보적일 수 있다.
나아가, 전술한 것과 같이 상기 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 영역 (Y)의 일부분에 상보적일 수 있다. 이 경우, 예를 들어 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)의 일부분과 동일한 염기 길이를 가지며, 즉, 상기 영역 (Yc)는 상기 영역 (Y)의 염기 길이보다 1 염기 이상 짧은 염기 길이의 염기 서열로 구성되는 것이 바람직하다. 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)의 일부분과 동일한 염기 길이를 가지며, 상기 영역 (Yc) 상의 모든 염기가 영역 (Y)의 일부분 상의 모든 염기와 상보적으로, 예를 들어 영역 (Yc)가 영역 (Y)의 일부분에 완벽히 상보적인 것이 더욱 바람직하다. 상기 영역 (Y)의 일부분은, 예를 들어 영역 (Yc) 측으로 상기 영역 (Y) 내 마지막 염기 (첫번째 염기)로부터 연속되는 염기들로 구성되는 염기 서열을 갖는 영역인 것이 바람직하다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 (Z) 수와, 상기 영역 (X) 내 염기 (X) 수, 및 상기 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수 간의 관계, 및 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 (Z) 수와, 상기 영역 (X) 내 염기 (X) 수 및 상기 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수 간의 관계는 예를 들어 하기 식 (1) 및 (2)의 조건을 만족한다.
Z = X + Y (1)
Z ≥ Xc + Yc (2)
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 영역 (X) 내 염기 (X) 수, 및 상기 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수 간의 관계는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 하기 식의 조건 중 어느 것을 만족한다.
X = Y (19)
X <Y (20)
X> Y (21)
상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 영역 (X) 내 염기 (X) 수, 및 상기 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수 간의 관계, 및 상기 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수, 및 상기 영역 (Yc) 내 염기 (Yc) 수 간의 관계는, 예를 들어 하기 조건 (a) 내지 (d) 중 어느 것을 만족한다:
(a) 하기 식 (3) 및 (4)의 조건을 만족한다.
X> Xc (3)
Y = Yc (4)
(b) 하기 식 (5) 및 (6)의 조건을 만족한다.
X = Xc (5)
Y> Yc (6)
(c) 하기 식 (7) 및 (8)의 조건을 만족한다.
X> Xc (7)
Y> Yc (8)
(d) 하기 식 (9) 및 (10)의 조건을 만족한다.
X = Xc (9)
Y = Yc (10)
전술한 조건 (a) 내지 (d)에서, 예를 들어 영역 (X) 내 염기 (X) 수와 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수의 차이, 및 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수와 영역 (Yc) 내 염기 (Yc) 수의 차이는 하기 조건들을 만족하는 것이 바람직하다.
(a) 하기 식 (11) 및 (12) 의 조건을 만족한다.
X - Xc = 1 내지 10, 바람직하게는 1, 2, 3, 또는 4,
더욱 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다. (11)
Y - Yc = 0 (12)
(b) 하기 식 (13) 및 (14)의 조건을 만족한다.
X - Xc = 0 (13)
Y - Yc = 1 내지 10, 바람직하게는 1, 2, 3, 또는 4,
더욱 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다. (14)
(c) 하기 식 (15) 및 (16)의 조건을 만족한다.
X - Xc = 1 내지 10, 바람직하게는 1, 2, 또는 3,
더욱 바람직하게는 1 또는 2이다. (15)
Y - Yc = 1 내지 10, 바람직하게는 1, 2, 또는 3,
더욱 바람직하게는 1 또는 2이다. (16)
(d) 하기 식 (17) 및 (18)의 조건을 만족한다.
X - Xc = 0 (17)
Y - Yc = 0 (18)
상기 (a) 내지 (d)의 제2 ssPN 분자들과 관련하여, 각 구조에 대한 일 실시예는 WO 2012/017919, 도 3에 나타나며, 이를 참조할 수 있다.
예를 들어 상기 영역 (Xc)와 영역 (X), 및 영역 (Yc)와 영역 (Y)는 각각 이중 가닥을 형성하기 때문에, 상기 (a) 내지 (c)의 ssPN 분자들은, 상기 내부 영역 (Z) 내 영역 (Xc) 및 영역 (Yc) 모두에 일직선으로 배치되지 않은 염기를 가지는 배열 형태이다. 이들은 또한 이중 가닥을 형성하지 않는 염기를 가지는 배열 형태일 수 있다. 상기 내부 영역 (Z)에서, 일직선으로 배치되지 않은 염기 (이중 가닥을 형성하지 않는 염기라고도 함)를 이하 “비쌍 염기”라고 한다. WO 2012/017919의 도 3에서, 상기 비쌍 염기의 영역은 “F”로 나타내었다. 상기 영역 (F) 내 염기 수는 특별히 제한되지 않는다. 상기 영역 (F) 내 염기 (F)의 수는, 예를 들어 상기 (a)의 ssPN 분자의 경우 “X - Xc" 염기 수; 상기 (b)의 ssPN 분자의 경우 “Y - Yc" 염기 수; 그리고 상기 (c)의 ssPN 분자의 경우 “X - Xc" 염기 수와 “Y - Yc" 염기 수의 합이다.
한편, 상기 조건 (d)를 만족하는 ssPN 분자는 상기 내부 영역 (Z)의 전체 영역이 영역 (Xc) 및 영역 (Yc)와 일직선이 되도록 배열된다. 즉, 상기 내부 영역 (Z)의 전체 영역은 이중 가닥을 형성한다. 상기 조건 (d)를 만족하는 ssPN 분자에서, 영역 (Xc)의 5' 말단과 영역 (Yc)의 3' 말단은 서로 연결되지 않는다.
상기 영역 (Xc)의 염기, 상기 영역 (Yc)의 염기, 상기 내부 영역 (Z) 내 비쌍 염기(F)의 전체 수는 내부 영역 (Z)의 염기 수와 동일하다. 따라서, 상기 영역 (Xc)의 길이와 상기 영역 (Yc)의 길이는, 예를 들어 상기 내부 영역 (Z)의 길이, 비쌍 염기의 수, 비쌍 염기의 위치에 따라 적절하게 결정될 수 있다.
상기 내부 영역 (Z)의 염기 수는, 예를 들어 19 이상이다. 그 염기 수의 하한은, 예를 들어 19이고, 바람직하게는 20, 더욱 바람직하게는 21이다. 그 염기 수의 상한은, 예를 들어 50이고, 바람직하게는 40, 더욱 바람직하게는 30이다. 상기 내부 영역 (Z)의 염기 수의 구체적인 예는 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30이다. 상기 내부 영역 (Z)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우에는, 예를 들어 상기 조건이 바람직할 수 있다.
상기 내부 영역 (Z)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 내부 영역 (Z)는, 예를 들어 상기 발현 조절 서열 단독으로 구성되거나 상기 발현 조절 서열을 포함하는 영역일 수 있다. 상기 발현 조절 서열의 염기 수는, 예를 들어 19 내지 30이고, 바람직하게는 19, 20, 또는 21이다. 상기 내부 영역 (Z)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 발현 조절 서열은 그의 5' 측 및/또는 3' 측에 추가적인 서열을 추가로 포함할 수 있다. 상기 추가적인 서열의 염기 수는, 예를 들어 1 내지 31이고, 바람직하게는 1 내지 21, 더욱 바람직하게는 1 내지 11, 그리고 더욱 더 바람직하게는 1 내지 7이다.
상기 영역 (Xc) 내 염기 수는, 예를 들어 1 내지 29이고, 바람직하게는 1 내지 11, 더욱 바람직하게는 1 내지 7, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4이고, 특히 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다. 상기 내부 영역 (Z) 또는 상기 영역 (Yc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우에는, 예를 들어 전술한 염기 수가 바람직하다. 구체적인 예는 다음과 같다: 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 수가 19 내지 30 (예: 19)인 경우, 상기 영역 (Xc) 내 염기 수는, 예를 들어 1 내지 11이고, 바람직하게는 1 내지 7, 더욱 바람직하게는 1 내지 4, 그리고 더욱 더 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다.
상기 영역 (Xc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 발현 조절 서열 단독으로 구성되거나 상기 발현 조절 서열을 포함하는 영역일 수 있다. 예를 들어, 상기 발현 조절 서열의 길이는 전술한 것과 같다. 상기 영역 (Xc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 발현 조절 서열은 그의 5' 측 및/또는 3' 측에 추가적인 서열을 추가로 포함할 수 있다. 상기 추가적인 서열의 염기 수는, 예를 들어 1 내지 11이고, 바람직하게는 1 내지 7이다.
상기 영역 (Yc) 내 염기 수는, 예를 들어 1 내지 29이고, 바람직하게는 1 내지 11, 더욱 바람직하게는 1 내지 7, 더욱 더 바람직하게는 1 내지 4이고, 특히 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다. 상기 내부 영역 (Z) 또는 상기 영역 (Xc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우에는, 예를 들어 전술한 염기 수가 바람직하다. 구체적인 예는 다음과 같다: 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 수가 19 내지 30 (예: 19)인 경우, 상기 영역 (Yc)내 염기 수는, 예를 들어 1 내지 11이고, 바람직하게는 1 내지 7, 더욱 바람직하게는 1, 2, 3, 또는 4, 그리고 더욱 더 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다.
상기 영역 (Yc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 발현 조절 서열 단독으로 구성되거나 상기 발현 조절 서열을 포함하는 영역일 수 있다. 예를 들어, 상기 발현 조절 서열의 길이는 전술한 것과 같다. 상기 영역 (Yc)가 상기 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 상기 발현 조절 서열은 그의 5' 측 및/또는 3' 측에 추가적인 서열을 추가로 포함할 수 있다. 상기 추가적인 서열의 염기 수는, 예를 들어 1 내지 11이고, 바람직하게는 1 내지 7이다.
전술한 바와 같이, 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 수, 상기 영역 (Xc) 내 염기 수, 및 상기 영역 (Yc) 내 염기 수 간의 관계는, 예를 들어 상기 식 (2): “Z ≥ Xc + Yc” 으로 표현될 수 있다. 구체적으로, “Xc + Yc”로 표시되는 염기 수는, 예를 들어 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 수와 동일하거나, 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 수보다 작다. 후자의 경우, “Z - (Xc + Yc)”는, 예를 들어 1 내지 10이고, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1, 2, 또는 3이다. 상기 “Z - (Xc + Yc)”는, 예를 들어 상기 내부 영역 (Z) 내 비쌍 영역 (F)의 염기 수 (F)에 대응된다.
상기 제2 ssPN 분자에서, 링커 영역 (Lx) 및 (Ly)의 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 링커 영역 (Lx)는 전술한 바와 같다. 상기 링커 영역 (Ly)의 구성단위에 염기(들)가 포함될 경우, 링커 영역 (Ly) 내 염기 수의 하한은, 예를 들어 1이고, 바람직하게는 2, 더욱 바람직하게는 3이고, 그 상한은, 예를 들어 100이고, 바람직하게는 80, 더욱 바람직하게는 50이다. 예를 들어, 상기 링커 영역들 각각의 염기 수는 구체적으로 1 내지 50, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 7, 또는 1 내지 4이나, 이러한 예에 제한되는 것은 아니다.
상기 링커 영역 (Ly)는, 예를 들어 상기 링커 영역 (Lx)와 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 제2 ssPN 분자의 전체 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 제2 ssPN 분자에서, 전체 염기 수 (ssPN 분자 전체 길이 중 염기의 수)의 하한은 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은, 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다. 상기 제2 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx) 및 (Ly)의 염기를 제외한 전체 염기 수의 하한은 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다.
상기 ssPN 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx)는 전술한 것과 같이 비-뉴클레오티드 구조를 가지기만 하면 되며, 다른 구성단위는 특별히 제한되지 않는다. 상기 구성단위의 예로는 뉴클레오티드 잔기가 포함된다. 상기 뉴클레오티드 잔기는 리보큐클레오티드 잔기와 디옥시리보뉴클레오티드 잔기를 포함한다. 상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 수정되지 않은 것 (수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기) 또는 수정된 것 (수정된 뉴클레오티드 잔기)일 수 있다. 상기 수정된 뉴클레오티드 잔기를 포함하도록 ssPN 분자를 구성함으로써, 예를 들어 뉴클레아제에 대한 ssPN 분자의 저항성이 개선될 수 있고, 이에 따라 ssPN 분자의 안정성이 개선될 수 있다. 나아가, 상기 ssPN 분자는 상기 뉴클레오티드 잔기에 더하여, 예를 들어 비-뉴클레오티드 잔기를 추가로 포함할 수 있다.
상기 뉴클레오티드 잔기는 상기 영역 (Xc), 영역 (X), 영역 (Y) 및 영역 (Yc)의 각 구성단위인 것이 바람직하다. 각 영역은, 예를 들어 하기 잔기 (1) 내지 (3) 중 어느 것으로 구성된다.
(1) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(2) 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(3) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
상기 링커 영역 (Lx)는, 예를 들어 비-뉴클레오티드 잔기(들) 단독으로 구성되거나, 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 뉴클레오티드 잔기(들)로 구성될 수 있다. 상기 링커 영역 (Lx)는, 예를 들어 하기 잔기 (4) 내지 (7) 중 어느 것으로 구성된다.
(4) 비-뉴클레오티드 잔기(들)
(5) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(6) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(7) 비-뉴클레오티드 잔기(들), 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들), 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
상기 링커 영역 (Ly)의 구성단위는 특별히 제한되지 않으나, 그의 예로는 전술한 것과 같이 뉴클레오티드 잔기 및 비-뉴클레오티드 잔기가 포함된다. 각 링커 영역 (Ly)는, 예를 들어 뉴클레오티드 잔기(들) 단독 또는 비-뉴클레오티드 잔기(들) 단독으로 구성되거나, 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 뉴클레오티드 잔기(들)로 구성될 수 있다. 각각의 상기 링커 영역 (Ly)는, 예를 들어 하기 잔기 (1) 내지 (7) 중 어느 것으로 구성된다.
(1) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(2) 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(3) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
(4) 비-뉴클레오티드 잔기(들)
(5) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(6) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(7) 비-뉴클레오티드 잔기(들), 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들), 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
상기 링커 영역 (Lx)를 제외한 ssPN 분자의 예에는, 뉴클레오티드 잔기 단독으로 구성되는 분자; 및 상기 뉴클레오티드 잔기에 더하여 비-뉴클레오티드 잔기를 포함하는 분자가 포함된다. 예를 들어, 상기 ssPN 분자에서 뉴클레오티드 잔기는, 전술한 것과 같이, 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기 단독; 수정된 뉴클레오티드 잔기 단독; 또는 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들) 둘 다일 수 있다. 상기 ssPN 분자가 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)를 모두 포함하는 경우, 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적으로 예를 들어, 1 내지 5이고, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1 내지 3, 가장 바람직하게는 1 또는 2이다. 상기 ssPN 분자가 비-뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 상기 비-뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적으로 1 또는 2이다.
상기 ssPN 분자에서, 예를 들어 상기 뉴클레오티드 잔기는 리보뉴클레오티드 잔기인 것이 바람직하다. 이 경우, 예를 들어 상기 ssPN 분자는 “ssRNA 분자” 또는 “P-ssRNA 분자”라고도 한다. 상기 링커 영역 (Lx)를 제외한 상기 ssRNA 분자의 예에는 리보뉴클레오티드 잔기만으로 구성되는 분자, 및 상기 리보뉴클레오티드 잔기에 더하여 비-뉴클레오티드 잔기를 포함하는 분자가 포함된다. 전술한 바와 같이, 상기 리보뉴클레오티드 잔기로서, 예를 들어 상기 ssRNA 분자는 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기 단독; 수정된 리보뉴클레오티드 잔기 단독; 또는 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기 및 수정된 리보뉴클레오티드 잔기 둘 다를 포함할 수 있다.
상기 ssRNA 분자가, 예를 들어 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기에 더하여 수정된 리보뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 수정된 리보뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적인 예로 1 내지 5이고, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1 내지 3, 가장 바람직하게는 1 또는 2이다. 상기 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기에 대조적으로, 수정된 리보뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 리보오스 잔기를 디옥시리보오스 잔기로 치환하여 얻은 디옥시리보뉴클레오티드 잔기일 수 있다. 상기 ssRNA 분자가, 예를 들어 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기(들)에 더하여 디옥시리보뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 디옥시리보뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적인 예로 1 내지 5이고, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1 내지 3, 가장 바람직하게는 1 또는 2이다.
상기 ssPN 분자는, 예를 들어 표지 물질을 포함하고 상기 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 형광 물질, 색소, 동위원소 등일 수 있다. 상기 표지 물질의 예로는: 피렌, TAMRA, 플루오레세인, Cy3 색소, Cy5 색소와 같은 형광단이 포함된다. 상기 색소의 예로는 Alexa488과 같은 Alexa 색소가 포함된다. 상기 동위 원소의 예로는 안정 동위 원소 및 방사성 동위 원소가 포함된다. 그 중 안정 동위 원소인 것이 바람직하다. 예를 들어 상기 안정 동위 원소의 경우, 방사능 노출의 위험이 적으므로 전용 시설이 필요하지 않다. 따라서, 안정 동위 원소는 조작능이 우수하고 비용 절감에 기여할 수 있다. 나아가, 예를 들어 상기 안정 동위 원소는 표지한 화합물의 물성을 변화시키지 않으므로, 추적자로서도 우수한 성질을 가진다. 상기 안정 동위 원소는 특별히 제한되지 않으나, 그 예에는 2H, 13C, 15N, 17O, 18O, 33S, 34S, 및 36S 가 포함된다.
본 발명에서, 용어 “알킬”은, 예를 들어, 직쇄상 또는 분지상의 알킬기를 포함한다. 상기 알킬의 탄소수는 특별히 제한되지는 않으나, 예를 들어 1 내지 30이고, 바람직하게는 1 내지 6, 또는 1 내지 4이다. 상기 알킬기의 예로는: 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 이소헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, 및 n-데실이 포함된다. 이 중, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 이소헥실 등이 바람직하다.
본 발명에서, 용어 “알케닐”은, 예를 들어, 직쇄상 또는 분지상의 알케닐을 포함한다. 상기 알케닐의 예로는 상기 알킬 중 1 이상의 이중 결합을 갖는 알킬이 포함된다. 상기 알케닐의 탄소수는 특별히 제한되지는 않으나, 예를 들어 상기 알킬과 동일하고, 바람직하게는 2 내지 8이다. 상기 알케닐의 예로는, 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-부테닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 1,3-부타디에닐, 및 3-메틸-2-부테닐이 포함된다.
본 발명에서, 용어 “알키닐”은, 예를 들어, 직쇄상 또는 분지상의 알케닐을 포함한다. 상기 알키닐의 예로는 상기 알킬 중 1 이상의 삼중 결합을 갖는 알킬이 포함된다. 상기 알키닐의 탄소수는 특별히 제한되지는 않으나, 예를 들어 상기 알킬과 동일하고, 바람직하게는 2 내지 8이다. 상기 알키닐의 예로는, 에티닐, 프로피닐, 및 부티닐이 포함된다. 상기 알키닐은, 예를 들어, 추가로 1 이상의 이중 결합을 포함할 수 있다.
본 발명에서, 용어 “아릴”은, 예를 들어 단환 방향족 탄화수소기 및 다환 방향족 탄화수소기를 포함한다. 상기 단환 방향족 탄화수소기의 예로는 페닐이 포함된다. 상기 다환 방향족 탄화수소기의 예로는 1-나프틸, 2-나프틸, 1-안트릴, 2-안트릴, 9-안트릴, 1-페난트릴, 2-페난트릴, 3-페난트릴, 4-페난트릴, 및 9-페난트릴이 포함된다. 이 중 예를 들어, 페닐, 1-나프틸 및 2-나프틸 등의 나프틸이 바람직하다.
본 발명에서, 용어 “헤테로아릴”은, 예를 들어 단환 방향족 복소환식기 (heterocyclic group) 및 축합 방향족 복소환식기가 포함된다. 상기 헤테로아릴의 예로는, 푸릴 (예: 2-푸릴, 3-푸릴), 티에닐 (예: 2-티에닐, 3-티에닐), 피롤릴 (예: 1-피롤릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴), 이미다졸릴 (예: 1-이미다졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴), 피라졸릴 (예: 1-피라졸릴, 3-피라졸릴, 4-피라졸릴), 트리아졸릴 (예: 1,2,4-트리아졸-1-일, 1,2,4-트리아졸-3-일, 1,2,4-트리아졸-4-일), 테트라졸릴 (예: 1-테트라졸릴, 2-테트라졸릴, 5-테트라졸릴), 옥사졸릴 (예: 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴), 이속사졸릴 (예: 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴), 티아졸릴 (예: 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴), 티아디아졸릴, 이소티아졸릴 (예: 3-이소티아졸릴, 4-이소티아졸릴, 5-이소티아졸릴), 피리딜 (예: 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜), 피리다지닐 (예: 3-피리다지닐, 4-피리다지닐), 피리미디닐 (예: 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-피리미디닐), 푸라자닐 (예: 3-푸라자닐), 피라지닐 (예: 2-피라지닐), 옥사디아졸릴 (예: 1,3,4-옥사디아졸-2-일), 벤조푸릴 (예: 2-벤조[b]푸릴, -벤조[b]푸릴, 4-벤조[b]푸릴, 5-벤조[b]푸릴, 6-벤조[b]푸릴, 7-벤조[b]푸릴), 벤조티에닐 (예: 2-벤조[b]티에닐, 3-벤조[b]티에닐, 4-벤조[b]티에닐, 5-벤조[b]티에닐, 6-벤조[b]티에닐, 7-벤조[b]티에닐), 벤즈이미다졸릴 (예: 1-벤즈이미다졸릴, 2-벤즈이미다졸릴, 4-벤즈이미다졸릴, 5-벤즈이미다졸릴), 디벤조푸릴, 벤조옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 퀴녹살리닐 (예: 2-퀴녹살리닐, 5-퀴녹살리닐, 6-퀴녹살리닐), 신놀리닐 (예: 3-신놀리닐, 4-신놀리닐, 5-신놀리닐, 6-신놀리닐, 7-신놀리닐, 8-신놀리닐), 퀴나졸리닐 (예: 2-퀴나졸리닐, 4-퀴나졸리닐, 5-퀴나졸리닐, 6-퀴나졸리닐, 7-퀴나졸리닐, 8-퀴나졸리닐), 퀴놀릴 (예: 2-퀴놀릴, 3-퀴놀릴, 4-퀴놀릴, 5-퀴놀릴, 6-퀴놀릴, 7-퀴놀릴, 8-퀴놀릴), 프탈라지닐 (예: 1-프탈라지닐, 5-프탈라지닐, 6-프탈라지닐), 이소퀴놀릴 (예: 1-이소퀴놀릴, 3-이소퀴놀릴, 4-이소퀴놀릴, 5-이소퀴놀릴, 6-이소퀴놀릴, 7-이소퀴놀릴, 8-이소퀴놀릴), 푸릴, 프테리디닐 (예: 2-프테리디닐, 4-프테리디닐, 6-프테리디닐, 7-프테리디닐), 카바졸릴, 페난트리디닐, 아크리디닐 (예: 1-아크리디닐, 2-아크리디닐, 3-아크리디닐, 4-아크리디닐, 9-아크리디닐), 인돌릴 (예: 1-인돌릴, 2-인돌릴, 3-인돌릴, 4-인돌릴, 5-인돌릴, 6-인돌릴, 7-인돌릴), 이소인돌릴, 페나지닐 (예: 1-페나지닐, 2-페나지닐), 및 페노티아지닐 (예: 1-페노티아지닐, 2-페노티아지닐, 3-페노티아지닐, 4-페노티아지닐)이 포함된다.
본 발명에서, 예를 들어, 용어 “시클로알킬”은 환상 포화 탄화수소기를 말하고, 시클로알킬의 탄소수는, 예를 들어 3 내지 15이다. 상기 시클로알킬의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 가교 환식 탄화수소기, 및 스피로탄화수소기가 포함된다. 이 중, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 가교 환식 탄화수소기 등이 바람직하다.
본 발명에서, “가교 환식 탄화수소기”의 예로는, 비시클로[2.1.0]펜틸, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.2]옥틸, 및 비시클로[3.2.1]옥틸, 트리시클로[2.2.1.0]헵틸, 비시클로[3.3.1]노난, 1-아다만틸, 및 2-아다만틸이 포함된다
본 발명에서, “스피로탄화수소기”의 예로는 스피로[3.4]옥틸이 포함된다.
본 발명에서, 용어 “시클로알케닐”은, 예를 들어 환상의 불포화 지방족 탄화수소기를 포함하고, 그 탄소수는, 예를 들어 3 내지 7이다. 상기 시클로알케닐의 예로는 시클로프로페닐, 시클로부테닐, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 및 시클로헵테닐이 포함된다. 그 중, 시클로프로페닐, 시클로부테닐, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐 등이 바람직하다. 상기 용어 “시클로알케닐”은, 예를 들어 고리 중에 불포화 결합을 갖는 가교 환식 탄화수소기 및 스피로탄화수소기도 포함한다.
본 발명에서, “아릴알킬”의 예로는, 벤질, 2-페네틸, 및 나프탈레닐메틸이 포함된다. “시클로알킬알킬” 또는 “시클릴알킬”의 예로는, 시클로헥실메틸 및 아다만틸메틸이 포함된다. “히드록시알킬”의 예로는, 히드록시메틸 및 2-히드록시에틸이 포함된다.
본 발명에서, “알콕시”는, 예를 들어 상기 알킬 중 어느 것 및 산소로 구성되는 기(알킬-O- 기)를 포함하고, 그 예로는, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시 및 n-부톡시가 포함된다. “알콕시알킬”의 예로는 메톡시메틸이 포함된다. “아미노알킬”이 예로는, 2-아미노에틸이 포함된다.
본 발명에서, “헤테로시클릴”의 예로는, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 1-피롤리디닐, 2-피롤리디닐, 3-피롤리디닐, 피롤리디논, 1-이미다졸리닐, 2-이미다졸리닐, 4-이미다졸리닐, 1-이미다졸리디닐, 2-이미다졸리디닐, 4-이미다졸리디닐, 이미다졸리디논, 1-피라졸리닐, 3-피라졸리닐, 4-피라졸리닐, 1-피라졸리디닐, 3-피라졸리디닐, 4-피라졸리디닐, 피페리디논, 피페리디노, 2-피페리디닐, 3-피페리디닐, 4-피페리디닐, 1-피페라지닐, 2-피페라지닐, 피페라지논, 2-모르폴리닐, 3-모르폴리닐, 모르폴리노, 테트라히드로피라닐, 및 테트라히드로푸라닐이 포함된다.
본 발명에서, “헤테로시클릴알킬”의 예로는, 피페리디닐메틸 및 피페라지닐메틸이 포함된다. “헤테로시클릴알케닐”의 예로는 2-피페리디닐에테닐이 포함된다. “헤테로아릴알킬”의 예로는, 피리딜메틸 및 퀴놀린-3-일메틸이 포함된다.
본 발명에서, 용어 “실릴”은, 화학식 R3Si- 로 표시되는 기를 포함하는데, 여기서 R 은 독립적으로, 상기 알킬, 아릴 및 시클로알킬로부터 선택될 수 있다. 실릴의 예로는 트리메틸실릴기 및 tert-부틸디메틸실릴기가 포함된다. “실릴옥시”의 예로는 트리메틸실릴옥시기가 포함된다. “실릴옥시알킬”의 예로는 트리메틸실릴옥시메틸이 포함된다.
본 발명에서 “알킬렌”의 예로는, 메틸렌, 에틸렌, 및 프로필렌이 포함된다.
본 발명에서, 전술한 각종 기는 치환될 수 있다. 상기 치환기의 예로는 히드록시, 카복시, 할로겐, 할로겐화알킬 (예: CF3, CH2CF3, CH2CCl3), 니트로, 니트로소, 시아노, 알킬 (예: 메틸, 에틸, 이소프로필, tert-부틸), 알케닐 (예: 비닐), 알키닐 (예: 에티닐), 시클로알킬 (예: 시클로프로필, 아다만틸), 시클로알킬알킬 (예: 시클로헥실메틸, 아다만틸메틸), 시클로알케닐 (예: 시클로프로페닐), 아릴 (예: 페닐, 나프틸), 아릴알킬 (예: 벤질, 페네틸), 헤테로아릴 (예: 피리딜, 푸릴), 헤테로아릴알킬 (예: 피리딜메틸), 헤테로시클릴 (예: 피페리딜), 헤테로시클릴알킬 (예: 모르폴릴메틸), 알콕시 (예: 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시), 할로겐화알콕시 (예: OCF3), 알케닐옥시 (예: 비닐옥시, 알릴옥시), 아릴옥시 (예: 페닐옥시), 알킬옥시카보닐 (예: 메톡시카보닐, 에톡시카보닐, tert-부톡시카보닐), 아릴알킬옥시 (예: 벤질옥시), 아미노 [알킬아미노 (예: 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노), 아실아미노 (예: 아세틸아미노, 벤조일아미노), 아릴알킬아미노 (예: 벤질아미노, 트리틸아미노), 히드록시아미노], 알킬아미노알킬 (예: 디에틸아미노메틸), 설파모일, 옥소 등이 포함된다.
(2) 뉴클레오티드 잔기
본 발명의 조성물에 포함되는 상기 핵산 분자로 구성되는 뉴클레오티드 잔기는 그의 구성요소로서, 예를 들어 당, 염기, 및 포스페이트를 포함한다. 전술한 것과 같이, 상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 리보뉴클레오티드 잔기 또는 디옥시리보뉴클레오티드 잔기일 수 있다. 상기 리보뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 당으로 리보오스 잔기를, 염기로 아데닌 (A), 구아닌 (G), 사이토신 (C), 또는 우라실 (U)을 가질 수 있다. 상기 디옥시리보오스 잔기는, 예를 들어 디옥시리보오스 잔기를 당으로, 아데닌 (A), 구아닌 (G), 사이토신 (C), 또는 티민 (T)을 염기로 가질 수 있다.
상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기 또는 수정된 뉴클레오티드 잔기일 수 있다. 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기의 구성요소는, 예를 들어 천연에 존재하는 뉴클레오티드 잔기의 구성요소와 동일하거나 실질적으로 동일할 수 있다. 상기 구성요소는 천연에 존재하는 인체 내 뉴클레오티드 잔기의 구성요소와 동일하거나 실질적으로 동일한 것이 바람직하다.
상기 수정된 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기를 수정하여 얻은 뉴클레오티드 잔기이다. 예를 들어, 상기 수정된 뉴클레오티드는 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기의 구성요소 중 어느 것이든지 수정된 것일 수 있다. 본 발명에 있어서, “수정”은, 예를 들어 상기 구성요소 중 어느 것에 대한 치환, 부가, 및/또는 제거; 및 상기 구성요소 내 원자(들) 및/또는 기능기(들)에 대한 치환, 부가, 및/또는 제거를 의미한다. 이는 “변경”으로도 지칭될 수 있다. 상기 수정된 뉴클레오티드 잔기의 예로는, 천연에 존재하는 뉴클레오티드 잔기와 인공적으로 수정된 뉴클레오티드 잔기가 포함된다. 예를 들어, 천연 유래의 수정된 뉴클레오티드 잔기에 대해서는, Limbach et al. (Limbach et al., 1994, Summary: the modified nucleosides of RNA, Nucleic Acids Res. 22: pp. 2183~2196)가 참조될 수 있다. 상기 수정된 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 상기 뉴클레오티드 대체물의 잔기일 수 있다.
상기 뉴클레오티드 잔기의 수정은, 예를 들어 리보오스-인산 골격 (이하 “리보인산 골격”이라고 함)에 대한 수정이다.
예를 들어, 상기 리보인산 골격에서 리보오스 잔기는 수정될 수 있다. 예를 들어, 상기 리보오스 잔기에서 2' 위치의 탄소는 수정될 수 있다. 구체적으로, 예를 들어 2' 위치의 탄소에 결합된 히드록시기는 수소 또는 플루오르로 치환될 수 있다. 히드록시기에 결합된 2' 위치의 탄소를 수소로 치환함으로써, 리보오스 잔기를 디옥시리보오스로 치환할 수 있다. 예를 들어, 상기 리보오스 잔기는 입체이성질체로 치환될 수 있고, 아라비노오스 잔기로 치환될 수 있다.
예를 들어, 상기 리보인산 골격은 비-리보오스 잔기 및/또는 비-인산을 갖는 비-리보인산 골격으로 치환될 수 있다. 상기 비-리보인산 골격은, 예를 들어 전하를 띄지 않도록 수정된 리보인산 골격일 수 있다. 상기 뉴클레오티드의 리보인산 골격을 비-리보인산 골격으로 치환함으로써 얻어진 대체물의 예로는, 모르폴리노, 시클로부틸, 및 피롤리딘이 포함된다. 상기 대체물의 다른 예로는, 인공 핵산 모노머 잔기가 포함된다. 구체적인 예로는, PNA (펩티드 핵산), LNA (잠금 핵산), 및 ENA (2'-O,4'-C-에틸렌가교 핵산)가 포함된다. 이 중, PNA가 바람직하다.
상기 리보인산 골격에서, 예를 들어 인산기는 수정될 수 있다. 상기 리보인산 골격에서, 당 잔기에 가장 가까운 인산기는 “α-인산기”라고 한다. 상기 α-인산기는 음전하를 띄며, 당 잔기에 연결되지 않은 2개의 산소 원자에 고르게 전하가 분포되어 있다. 상기 뉴클레오티드 잔기 간의 포스포디에스테르 결합에서, 상기 α-인산기의 4개의 산소 원자 중 당 잔기에 연결되지 않은 2개의 산소 원자에 대해서는 이하 “비-연결 산소”라고 한다. 한편, 상기 뉴클레오티드 잔기 간의 포스포디에스테르 결합에서, 당 잔기와 연결되어 있는 2개의 산소 원자에 대해서는 이하 “연결 산소”라고 한다. 예를 들어, 상기 α-인산기는 전하를 띄지 않거나, 상기 비-연결 원자 간의 전하 분포가 비대칭이 되도록 수정되는 것이 바람직하다.
예를 들어, 상기 인산기에서, 상기 비-연결 산소(들)는 치환될 수 있다. 상기 산소(들)는, 예를 들어 S (황), Se (셀레늄), B (붕소), C (탄소), H (수소), N (질소), 및 OR (R은 예를 들어 알킬기 또는 아릴기이다) 중에서 선택되는 어느 원자로도 치환될 수 있고, 황으로 치환되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 상기 비-연결 산소 모두가 치환되는 것이 바람직하며, 상기 비-연결 산소 모두가 황으로 치환되는 것이 더욱 바람직하다. 상기 수정된 인산기의 예로는, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레네이트, 보라노포스페이트, 보라노포스페이트 에스테르, 히드로겐 포스페이트, 포스포로아미데이트, 알킬 또는 아릴 포스포네이트, 및 포스포트리에스테르가 포함된다. 구체적으로, 상기 2개의 비-연결 산소들 모두가 황으로 치환된 포스포로디티오에이트가 바람직하다.
예를 들어, 상기 인산기에서 상기 연결 산소(들)는 치환될 수 있다. 상기 산소(들)는, 예를 들어 S (황), C (탄소), 및 N (질소)에서 선택되는 어느 원자로도 치환될 수 있다. 상기 수정된 인산기의 예로는, 질소로 치환시켜 얻은 가교 포스포로아미데이트; 황으로 치환시켜 얻은 가교 포스포로티오에이트; 및 탄소로 치환시켜 얻은 가교 메틸렌포스포네이트가 포함된다. 예를 들어, 상기 연결 산소(들)에 대한 치환은, 상기 ssPN 분자의 5' 말단 뉴클레오티드 잔기 및 3' 말단 뉴클레오티드 잔기 중 적어도 하나에서 이루어지는 것이 바람직하다. 5' 측에서 치환이 이루어지는 경우에는 탄소로 치환되는 것이 바람직하다. 3' 측에서 치환이 이루어지는 경우에는 질소로 치환되는 것이 바람직하다.
상기 인산기는, 예를 들어 상기 인산이 없는 링커로 치환될 수 있다. 상기 링커는 실록산, 카보네이트, 카복시메틸, 카바메이트, 아미드, 티오에테르, 에틸렌 옥시드 링커, 설포네이트, 설폰아미드, 티오포르마세탈, 포르마세탈, 옥심, 메틸렌이미노, 메틸렌메틸이미노, 메틸렌히드라조, 메틸렌디메틸히드라조, 메틸렌옥시메틸이미노 등을 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 링커는 메틸렌카보닐아미노기 및 메틸렌메틸이미노기를 포함할 수 있다.
상기 ssPN 분자에서, 예를 들어 3' 말단 뉴클레오티드 잔기 및 5' 말단 뉴클레오티드 잔기 중 적어도 하나의 뉴클레오티드 잔기가 수정될 수 있다. 예를 들어, 3' 말단 및 5' 말단 중 어느 하나의 뉴클레오티드 잔기가 수정되거나, 3' 말단 및 5' 말단의 뉴클레오티드 잔기 모두가 수정될 수 있다. 예를 들어, 상기 수정은 전술한 것과 같이 이루어질 수 있고, 말단(들)에 있는 인산기(들)가 수정되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 상기 인산기 전체가 수정되거나, 인산기의 1 이상의 원자가 수정될 수 있다. 전자의 경우, 예를 들어 인산기 전체는 치환되거나 제거될 수 있다.
말단(들)에 있는 뉴클레오티드 잔기(들)에 대한 수정은, 예를 들어 다른 어느 분자든지 부가되는 것일 수 있다. 다른 분자의 예로는, 전술한 것과 같은 표지 물질과 같은 기능적 분자와 보호기가 포함된다. 상기 보호기의 예로는, S (황), Si (실리콘), B (붕소), 및 에스테르-포함기가 포함된다. 상기 표지 물질과 같은 기능적 분자는, 예를 들어 상기 ssPN 분자에 대한 검출 등에 사용될 수 있다.
상기 다른 분자는, 예를 들어 상기 뉴클레오티드 잔기의 인산기에 부가되거나, 스페이서를 통해 상기 인산기 또는 당 잔기에 부가될 수 있다. 예를 들어, 스페이서의 말단 원자에는 상기 인산기의 연결 산소, 또는 당 잔기의 산소, 질소, 황, 또는 탄소 중 어느 하나가 부가되거나 이로 치환될 수 있다. 예를 들어, 상기 당 잔기의 결합 부위는, 바람직하게 3' 위치의 탄소, 5' 위치의 탄소, 또는 이에 결합된 어느 원자이든 상관없다. 예를 들어, 상기 스페이서는 PNA와 같은 상기 뉴클레오티드 대체물의 말단 원자에 부가되거나 이를 치환할 수 있다.
상기 스페이서는 특별히 제한되지는 않으나, 그의 예에는 -(CH2)n-, -(CH2)nN-, -(CH2)nO-, -(CH2)nS-, O(CH2CH2O)nCH2CH2OH, 비염기성 당, 아미드, 카복시, 아민, 옥시아민, 옥시이민, 티오에테르, 디설파이드, 티오우레아, 설폰아미드, 및 모르폴리노가 포함되며, 비오틴 시약 및 플루오레세인 시약 또한 포함된다. 상기 식들에서, n은 양의 정수이고, n은 3 또는 6인 것이 바람직하다.
말단에 부가되는 상기 분자의 다른 예로는, 색소, 삽입제 (예: 아크리딘), 가교제 (예: 소랄렌, 미토마이신 C), 포피린 (TPPC4, 텍사피린, 사피린), 다환 방향족 탄화수소 (예: 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클레아제 (예: EDTA), 친유성 운반체 (예: 콜레스테롤, 콜산, 아다만테인 아세트산, 1-피렌부틸산, 디히드로테스토스테론, 1,3-Bis-O (헥사데실)글리세롤, 게라닐옥시헥실기, 헥사데실글리세롤, 보르네올, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실기, 팔미트산, 미리스틴산, O3-(올레오일)리소콜린산, O3-(올레오일)콜린산, 디메톡시트리틸, 또는 페녹사틴), 펩티드 복합체 (예: 안테나페디아 펩티드, Tat 펩티드), 알킬화제, 포스페이트, 아미노, 메캅토, PEG (예: PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, 폴리아미노, 알킬, 치환된 알킬, 방사성표지 마커, 효소, 합텐 (예: 비오틴), 수송/흡수 촉진제 (예: 아스피린, 비타민 E, 엽산), 및 합성 리보뉴클레아제 (예: 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 복합체, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체)가 포함된다.
상기 ssPN 분자에서, 예를 들어 상기 5' 말단은 인산기 또는 인산기 유사체로 수정될 수 있다. 상기 인산화 반응의 예로는, 5'-일인산 ((HO)2(O)P-O-5'); 5'-이인산 ((HO)2(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-삼인산 ((HO)2(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-구아노신 캡 (7-메틸화 또는 메틸화되지 않은 것, 7m-G-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-아데노신 캡 (Appp); 수정된 또는 수정되지 않은 어느 뉴클레오티드 캡 구조 (N-O-5'-(HO)(O)P-O-(HO)(O)P-O-P(HO)(O)-O-5'); 5'-모노티오포스페이트 (포스포로티오에이트: (HO)2(S)P-O-5'); 5'-모노디티오포스페이트 (포스포로디티오에이트: (HO)(HS)(S)P-O-5'); 5'-포스포로티오레이트 ((HO)2(O)P-S-5'); 황 치환된 일인산, 이인산, 및 삼인산 (예: 5'-α-티오트리포스페이트, 5'-γ-티오트리포스페이트 등); 5'-포스포라미데이트 ((HO)2(O)P-NH-5', (HO)(NH2)(O)P-O-5'); 5'-알킬포스포네이트 (예: RP(OH)(O)-O-5', (OH)2(O)P-5'-CH2, 상기 R은 알킬이다 (예: 메틸, 에틸, 이소프로필, 프로필 등)); 및 5'-알킬에테르포스포네이트 (예: RP(OH)(O)-O-5', 상기 R은 알킬에테르이다 (예: 메톡시메틸, 에톡시메틸 등))가 포함된다.
상기 뉴클레오티드 잔기에서, 상기 염기는 특별히 제한되지 않는다. 상기 염기는, 예를 들어 천연 염기 또는 비-천연 염기일 수 있다. 상기 염기는, 예를 들어 천연 유래 염기 또는 합성 염기일 수 있다. 상기 염기로서, 예를 들어 일반적인 염기, 그의 수정된 유사체 등이 사용될 수 있다.
상기 염기의 예로는: 아데닌 및 구아닌과 같은 퓨린 염기; 및 사이토신, 우라실, 티민과 같은 피리미딘 염기가 포함된다. 상기 염기의 다른 예로는, 이노신, 티민, 잔틴, 히포잔틴, 누불라린, 이소구아니신, 및 투베르시딘이 포함된다. 또한 상기 염기의 예로는, 2-아미노아데닌, 6-메틸화된 퓨린과 같은 알킬 유도체; 2-프로필화된 퓨린과 같은 알킬 유도체; 5-할로우라실 및 5-할로시토신; 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신; 6-아조우라실, 6-아조시토신, 및 6-아조티민; 5-우라실 (슈도 우라실), 4-티오우라실, 5-할로우라실, 5-(2-아미노프로필)우라실, 5-아미노알릴우라실; 8-할로겐화된, 아민화된, 티올화된, 티오알킬화된, 히드록실화된, 및 다른 8-치환된 퓨린; 5-트리플루오로메틸화된, 및 다른 5-치환된 피리미딘; 7-메틸구아닌; 5-치환된 피리미딘; 6-아자피리미딘; N-2, N-6, 및 O-6 치환된 퓨린 (2-아미노프로필아데닌을 포함함); 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신; 디히드로우라실; 3-데아자-5-아자시토신; 2-아미노퓨린; 5-알킬우라실; 7-알킬구아닌; 5-알킬시토신; 7-데아자아데닌; N6,N6-디메틸아데닌; 2,6-디아미노퓨린; 5-아미노-알릴-우라실; N3-메틸우라실; 치환된 1,2,4-트리아졸; 2-피리디논; 5-니트로인돌; 3-니트로피롤; 5-메톡시우라실; 우라실-5-옥시아세트산; 5-메톡시카보닐메틸우라실; 5-메틸-2-티오우라실; 5-메톡시카보닐메틸-2-티오우라실; 5-메틸아미노메틸-2-티오우라실; 3-(3-아미노-3-카복시프로필)우라실; 3-메틸시토신; 5-메틸시토신; N4-아세틸시토신; 2-티오시토신; N6-메틸아데닌; N6-이소펜틸아데닌; 2-메틸티오-N6-이소펜틸아데닌; N-메틸구아닌; 및 O-알킬화된 염기가 포함된다. 퓨린 및 피리미딘의 예로는, 미국 특허 3,687,808, “Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering” (pp. 858~859, edited by Kroschwitz J. I, John Wiley & Sons, 1990) 및 Englisch et al. (Angewandte Chemie, International Edition, 1991, vol. 30, p. 613)에 개시된 것들이 포함된다.
본 발명에서 사용되는 ssPN 분자의 구체적인 예로는, 후술되는 PH-0009, PK-7006, PK-7015, PH-7069, 및 PH-7081이 포함되나, 이에 제한되는 것은 아니다.
II. 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열을 포함하며, 뉴클레오티드 잔기 및/또는 비-뉴클레오티드 잔기로 구성되는 링커를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자
(1) ssNc 분자
상기 단일 가닥 핵산 분자로서, 뉴클레오티드 잔기(들) 및/또는 비-뉴클레오티드 잔기(들)로 구성되는 링커를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자가 언급될 수 있다. 그의 일 실시예로는, 예를 들어 5' 측에서 3' 측의 순서로, 5' 측 영역 (Xc), 내부 영역 (Z), 및 3' 측 영역 (Yc)를 포함하는, WO 2012/005368에 개시된 단일 가닥 핵산 분자를 들 수 있는데, 여기서 상기 내부 영역 (Z)는 내부 5' 측 영역 (X) 및 내부 3' 측 영역 (Y)의 연결에 의하여 구성되고, 상기 5' 측 영역 (Xc)는 상기 내부 5' 측 영역 (X)에 상보적이고, 상기 3' 측 영역 (Yc)는 상기 내부 3' 측 영역 (Y)에 상보적이며, 상기 내부 영역 (Z), 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 상기 3' 측 영역 (Yc) 중 적어도 하나는 상기 발현 조절 서열을 포함한다 (이하 “ssNc 분자”라고도 함). 이는 단순히 예시에 지나지 않으며, 당업자라면 어떠한 핵산 분자든지 적용될 수 있음을 명백하게 알 수 있을 것이다. 따라서, 당업자라면 업계의 공지 기술과 기술상식에 근거하여 목적하는 핵산 분자를 적절하게 제조할 수 있을 것이다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 발현 조절 서열은, 예를 들어 인 비보 또는 인 비트로에서 본 발명의 ssNc 분자가 세포로 도입될 때 상기 타겟 유전자의 발현을 억제하는 활성을 나타내는 서열이다. 상기 발현 조절 서열은 특별히 제한되는 것은 아니나, 타겟 유전자의 종류에 따라 적절히 설정할 수 있다. 상기 발현 조절 서열로서, 예를 들어 siRNA에 의해 유발되는 RNA 간섭에 관여하는 서열을 적절히 사용할 수 있다. 즉, 타겟 mRNA에 결합하는 상기 siRNA 가닥의 RNA 서열을 상기 발현 조절 서열로 사용할 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 5' 측 영역 (Xc)는 내부 5' 측 영역 (X)에 상보적이고, 상기 3' 측 영역 (Yc)는 내부 3' 측 영역 (Y)에 상보적이다. 따라서, 5' 측 상에서 이중 가닥은, 상기 영역 (X)에 대해 상기 영역 (Xc)가 꺾여지고, 상기 영역 (Xc)와 영역 (X)가 자가-어닐링하여 형성될 수 있고, 3' 측 상에서 이중 가닥은, 상기 영역 (Y)에 대해 상기 영역 (Yc)가 꺾여지고, 상기 영역 (Yc)와 영역 (Y)가 자가-어닐링하여 형성될 수 있다. 따라서, 상기 ssNc 분자는 분자 내 이중 가닥을 형성할 수 있고, 종래 RNA 간섭에 사용되는 siRNA와 같이 어닐링에 의해 이중 가닥 RNA를 형성하는 2개의 서로 다른 단일 가닥 RNA 중 하나와는 분명하게 다른 구조를 가진다.
상기 발현 조절 서열은, 예를 들어 상기 타겟 유전자에서 지정된 영역에 대하여 바람직하게 적어도 90%의 상보성, 더욱 바람직하게 95%의 상보성, 더욱 더 바람직하게 98%의 상보성, 그리고 특히 바람직하게 100%의 상보성을 가진다. 이러한 상보성이 만족될 경우, 예를 들어 오프-타겟 효과를 충분히 감소시킬 수 있다.
구체적인 예로서, 타겟 유전자가 루시퍼라제 유전자일 때, 예를 들어 서열번호 5로 표시되는 서열이 상기 발현 조절 서열로 사용될 수 있고, 타겟 유전자가 ㅁ마우스 GAPDH 유전자일 때, 서열번호 6으로 표시되는 서열이 상기 발현 조절 서열로 사용될 수 있다.
5'-UCGAAGUACUCGGCGUAGG-3' (서열번호 5)
5'-GUUGUCAUAUUUCUCGUGG-3' (서열번호 6)
상기 ssNc 분자에서, 상기 발현 조절 서열은 전술한 것과 같이 상기 내부 영역 (Z), 5' 측 영역 (Xc), 및 상기 3' 측 영역 (Yc) 중 적어도 하나에 포함된다. 상기 ssNc 분자는, 예를 들어 전술한 발현 조절 서열을 1개 또는 2 이상 포함할 수 있다.
후자의 경우, 상기 ssNc 분자는, 예를 들어 동일한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 동일한 발현 조절 서열; 동일한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 상이한 발현 조절 서열; 또는 상이한 타겟 유전자에 대한 2 이상의 상이한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 상기 ssNc 분자가 2 이상의 전술한 발현 조절 서열을 포함하는 경우, 각 발현 조절 서열의 위치는 특별히 제한되는 것은 아니나, 상기 내부 영역 (Z), 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 상기 3' 측 영역 (Yc)에서 선택되는 하나의 영역 또는 다른 영역에 위치할 수 있다. 상기 ssNc 분자가, 상이한 타겟 유전자에 대한 전술한 발현 조절 서열을 2 이상 포함하는 경우, 예를 들어, 상기 ssNc 분자는 2종류 이상의 상이한 타겟 유전자의 발현을 조절할 수 있다.
전술한 것과 같이, 상기 내부 영역 (Z)는 서로 연결된 상기 내부 5' 영역 (X) 및 상기 내부 3' 영역 (Y)로 구성된다. 예를 들어, 상기 영역 (X) 및 영역 (Y)는 그 사이에 어떠한 서열의 개입이 없이 서로 직접적으로 연결된다. 상기 내부 영역 (Z)는 단지 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 3' 측 영역 (Yc) 간의 서열 컨텍스트를 지칭하기 위하여, “서로 연결된 상기 내부 5' 측 영역 (X) 및 내부 3' 측 영역 (Y)로 구성된” 것으로 정의된다. 상기 정의는, 예를 들어, 상기 ssNc 분자의 이용에 있어, 상기 내부 영역 (Z) 내 5' 측 영역 (Xc)와 3' 측 영역 (Xc)를 별개의 독립적인 영역인 것으로 제한하는 것을 의도하는 것은 아니다. 즉, 예를 들어, 상기 발현 조절 서열이 상기 내부 영역 (Z)에 포함될 경우, 상기 발현 조절 서열은 상기 내부 영역 (Z) 내에 영역 (X)와 영역 (Y)를 가로질러 배열될 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 5' 측 영역 (Xc)는 상기 내부 5' 측 영역 (X)에 상보적이다. 상기 영역 (Xc)가 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 가지기만 하면 된다. 구체적으로, 예를 들어 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 포함하거나, 바람직하게 이로 구성된다. 상기 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 영역 (X)의 전체 영역 또는 일부분에 완벽히 상보적이거나, 영역 (Xc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 이에 비상보적일 수 있다. 영역 (Xc)는 이에 완벽히 상보적인 것이 바람직하다. 상기 ssNc 분자에서, 상기 3' 측 영역 (Yc)는 상기 내부 3' 측 영역 (Y)에 상보적이다. 상기 영역 (Yc)가 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 가지기만 하면 된다. 구체적으로, 예를 들어 상기 영역 (Yc)는 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 상보적인 서열을 포함하거나, 바람직하게 이로 구성된다. 상기 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 영역 (Y)의 전체 영역 또는 일부분에 완벽히 상보적이거나, 영역 (Yc) 중 하나 또는 몇 개의 염기만이 이에 비상보적일 수 있다. 영역 (Yc)는 이에 완벽히 상보적인 것이 바람직하다. 상기 표현 “하나 또는 몇 개의 염기”는, 예를 들어 1 내지 3개의 염기, 바람직하게 1 염기 또는 2 염기를 의미한다
상기 ssNc 분자에서, 상기 5' 측 영역 (Xc)와 상기 내부 5' 측 영역 (X)는, 예를 들어 서로 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 전자의 경우, 예를 들어 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 포스포디에스테르 결합 등에 의해 직접적으로 연결될 수 있다. 후자의 경우, 예를 들어 링커 영역 (Lx)가 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X) 사이에 위치하고, 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 링커 영역 (Lx)를 통해 연결될 수 있도록 설정되는 일 실시예가 언급될 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 예를 들어 상기 3' 측 영역 (Yc) 및 상기 내부 3' 측 영역 (Y)는 서로 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 전자의 경우, 예를 들어 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 포스포디에스테르 결합 등에 의해 직접적으로 연결될 수 있다. 후자의 경우, 예를 들어 링커 영역 (Ly)가 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y) 사이에 위치하고, 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 링커 영역 (Ly)를 통해 연결된다.
상기 ssNc 분자는, 예를 들어 상기 링커 영역 (Lx) 및 상기 링커 영역 (Ly) 둘다 또는 이 중 하나를 가질 수 있다. 후자의 경우, 예를 들어 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 상기 내부 5' 측 영역 (X) 사이에는 링커 영역 (Lx)를 갖고, 상기 3' 측 영역 (Yc) 및 내부 3' 측 영역 (Y) 사이에는 링커 영역 (Ly)를 갖지 않는 배열을 들 수 있는데, 이 때 상기 영역 (Yc) 및 영역 (Y)는 직접적으로 연결된다. 후자의 경우, 예를 들어 상기 3' 측 영역 (Yc) 및 상기 내부 3' 측 영역 (Y) 사이에는 링커 영역 (Ly)를 갖고, 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 내부 5' 측 영역 (X) 사이에는 링커 영역 (Lx)를 갖지 않는 배열을 들 수 있는데, 이 때 상기 영역 (Xc) 및 영역 (X)는 직접적으로 연결된다.
상기 링커 영역 (Lx) 및 상기 링커 영역 (Ly) 각각은 해당 영역 내에서 자가-어닐링을 하지 않는 구조를 가지는 것이 바람직하다.
상기 ssNc 분자와 관련하여, 상기 링커 영역을 갖지 않는 ssNc 분자에 대한 일 실시예는 WO 2012/005368, 도 1에 나타나며, 이를 참조할 수 있다.
상기 ssNc 분자와 관련하여, 상기 링커 영역을 갖는 ssNc 분자에 대한 일 실시예는 WO 2012/005368, 도 2에 나타나며, 이를 참조할 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 5' 측 영역 (Xc), 내부 5' 측 영역 (X), 내부 3' 측 영역 (Y) 및 3' 측 영역 (Yc)의 염기수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 후술되는 것과 같다. 본 발명에 있어서, “염기 수”는 “길이”를 의미하고, 예를 들어 이는 “염기 길이”라고도 나타낼 수 있다.
전술한 것과 같이, 상기 5' 측 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 내부 5' 측 영역 (X)의 전체 영역에 상보적일 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Xc)는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
나아가, 전술한 것과 같이, 상기 5' 측 영역 (Xc)는, 예를 들어 상기 내부 5' 측 영역 (X)의 일부분에 상보적일 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Xc)는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
전술한 것과 같이, 상기 3' 측 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 내부 3' 측 영역 (Y)의 전체 영역에 상보적일 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Yc)는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
나아가, 전술한 것과 같이, 상기 3' 측 영역 (Yc)는, 예를 들어 상기 내부 3' 측 영역 (Y)의 일부분에 상보적일 수 있다. 이 경우, 상기 영역 (Yc)는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 (Z) 수와, 상기 내부 5' 측 영역 (X) 내 염기 (X) 수 및 상기 내부 3' 측 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수 간의 관계, 및 상기 내부 영역 (Z) 내 염기 (Z) 수와, 상기 내부 5' 측 영역 (X) 내 염기 (X) 수 및 상기 5' 측 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수 간의 관계는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 내부 5' 측 영역 (X) 내 염기 (X) 수, 및 상기 내부 3' 측 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수 간의 관계는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 내부 5' 측 영역 (X) 내 염기 (X) 수, 및 상기 5' 측 영역 (Xc) 내 염기 (Xc) 수 간의 관계, 및 상기 내부 3' 측 영역 (Y) 내 염기 (Y) 수, 및 상기 3' 측 영역 (Yc) 내 염기 (Yc) 수 간의 관계는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자에서, 각 영역의 길이는 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같으나, 본 발명은 이에 제한되지 않는다. 본 발명에서, 예를 들어 염기 수에 대한 수치 범위는 범위에 해당하는 양의 정수로 모두 기재된다. 예를 들어, “1 내지 4 염기”는 모두 “1, 2, 3, 및 4 염기”를 의미하는 것이다 (이하 동일).
상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx) 및 (Ly)의 길이는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 링커 영역 (Lx)는 상기 내부 5' 측 영역 (X) 및 5' 측 영역 (Xc)가 이중 가닥을 형성하도록 하는 길이를 가지는 것이 바람직하며, 예를 들어, 상기 링커 영역 (Ly)는 상기 내부 3' 측 영역 (Y) 및 3' 측 영역 (Yc)가 이중 가닥을 형성하도록 하는 길이를 가지는 것이 바람직하다. 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly)의 구성 단위가 염기(들)를 포함하는 경우, 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly)의 염기 수는 동일하거나 상이할 수 있고, 또한 그 염기 서열은 동일하거나 상이할 수 있다. 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly) 내 염기 수의 하한은, 예를 들어 1이고, 바람직하게는 2, 더욱 바람직하게는 3이고, 그 상한은, 예를 들어 100이고, 바람직하게는 80, 더욱 바람직하게는 50이다. 예를 들어, 상기 링커 영역들 각각의 염기 수는 구체적으로 1 내지 50, 1 내지 30, 1 내지 20, 1 내지 10, 1 내지 7, 또는 1 내지 4이나, 이러한 예에 제한되는 것은 아니다.
상기 ssNc 분자의 전체 길이는 특별히 제한되지 않는다. 상기 ssNc 분자에서, 전체 염기 수 (ssNc 분자 전체 길이 중 염기의 수)의 하한은 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은, 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다. 상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx) 및 (Ly)의 염기를 제외한 전체 염기 수의 하한은, 예를 들어 38이고, 바람직하게는 42, 더욱 바람직하게는 50, 더욱 더 바람직하게는 51, 특히 바람직하게는 52이고, 그의 상한은 예를 들어 300이고, 바람직하게는 200, 더욱 바람직하게는 150, 더욱 더 바람직하게는 100, 특히 바람직하게는 80이다.
상기 ssNc 분자의 구성 단위의 예시들은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 뉴클레오티드 잔기가 포함된다. 상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 리보뉴클레오티드 잔기 또는 디옥시리보뉴클레오티드 잔기일 수 있다. 상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 수정되지 않은 것 (수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기) 또는 수정된 것 (수정된 뉴클레오티드 잔기)일 수 있다. 상기 수정된 뉴클레오티드 잔기를 포함하도록 ssNc 분자를 구성함으로써, 예를 들어 뉴클레아제에 대한 ssNc 분자의 저항성이 개선될 수 있고, 이에 따라 ssNc 분자의 안정성이 개선될 수 있다. 나아가, 상기 ssNc 분자는 상기 뉴클레오티드 잔기에 더하여, 예를 들어 비-뉴클레오티드 잔기를 추가로 포함할 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 뉴클레오티드 잔기는 상기 내부 영역 (Z), 5' 측 영역 (Xc) 및 상기 3' 측 영역 (Yc)의 각 구성단위인 것이 바람직하다. 각 영역은, 예를 들어 하기 잔기 (1) 내지 (3) 중 어느 것으로 구성된다.
(1) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(2) 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(3) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly)의 구성단위는 특별히 제한되지 않으나, 그의 예로는 뉴클레오티드 잔기 및 비-뉴클레오티드 잔기가 포함된다. 각 링커 영역은, 예를 들어 뉴클레오티드 잔기(들) 단독 또는 비-뉴클레오티드 잔기(들) 단독으로 구성되거나, 뉴클레오티드 잔기(들) 및 비-뉴클레오티드 잔기(들)로 구성될 수 있다. 각 링커 영역은, 예를 들어 하기 잔기 (1) 내지 (7) 중 어느 것으로 구성된다.
(1) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(2) 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(3) 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(4) 비-뉴클레오티드 잔기(들)
(5) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들)
(6) 비-뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)
(7) 비-뉴클레오티드 잔기(들), 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들), 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들).
상기 ssNc 분자가 상기 링커 영역 (Lx)와 링커 영역 (Ly)를 모두 갖는 경우, 예를 들어 각 구성 단위는 동일하거나 상이할 수 있다. 그의 구체적인 예로는, 두 링커 영역의 구성 단위가 뉴클레오티드 잔기인 형태, 두 링커 영역의 구성 단위가 비-뉴클레오티드 잔기인 형태, 하나의 링커 영역의 구성 단위는 뉴클레오티드 잔기이고 다른 하나의 링커 영역의 구성 단위는 비-뉴클레오티드 잔기인 형태 등이 있다.
상기 ssNc 분자의 예로는, 뉴클레오티드 잔기 단독으로 구성되는 분자; 및 상기뉴클레오티드 잔기(들)에 더하여 비-뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 분자가 포함된다. 전술한 것과 같이, 예를 들어 상기 ssNc 분자에서 뉴클레오티드 잔기는, 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기 단독; 상기 수정된 뉴클레오티드 잔기 단독; 또는 상기 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들) 모두를 포함할 수 있다. ssNc 분자가 수정되지 않은 뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 뉴클레오티드 잔기(들) 모두를 포함하는 경우, 수정된 뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적인 예로 1 내지 5이고, 바람직하게는 1 내지 4, 더욱 바람직하게는 1 내지 3, 가장 바람직하게는 1 또는 2이다. 상기 ssNc 분자가 비-뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 상기 비-뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 “1 내지 여러 개”, 구체적으로 1 내지 8, 1 내지 6, 1 내지 4, 1, 2 또는 3이다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 뉴클레오티드 잔기는, 예를 들어 리보뉴클레오티드 잔기인 것이 바람직하다. 이 경우, 상기 ssNc 분자를 “RNA 분자” 또는 “ssRNA 분자”라고도 한다. 상기 ssRNA 분자의 예로는, 리보뉴클레오티드 잔기 단독으로 구성되는 분자; 및 상기 리보뉴클레오티드 잔기에 더하여 비-뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 분자가 포함된다. 전술한 것과 같이, 상기 리보뉴클레오티드 잔기로서, 예를 들어 상기 ssRNA 분자는 상기 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기 단독; 상기 수정된 리보뉴클레오티드 잔기 단독; 또는 상기 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기(들) 및 수정된 리보뉴클레오티드 잔기(들) 모두를 포함할 수 있다.
상기 ssRNA 분자가, 예를 들어 상기 수정되지 않은 리보뉴클레오티드 잔기에 더하여 수정된 리보뉴클레오티드 잔기(들)를 포함하는 경우, 상기 수정된 리보뉴클레오티드 잔기(들)의 수는 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자는, 예를 들어 표지 물질을 포함하고 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 상기 제2 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
(2) 뉴클레오티드 잔기
상기 뉴클레오티드 잔기는 상기 ssPN 분자에 대해 설명된 것과 같다.
(3) 비-뉴클레오티드 잔기
상기 비-뉴클레오티드 잔기는 특별히 제한되는 것은 아니다. 상기 ssNc 분자는 비-뉴클레오티드 잔기로서, 예를 들어 피롤리딘 골격 또는 피페리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조를 가질 수 있다. 상기 비-뉴클레오티드 잔기(들)는 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly) 중 적어도 하나에 존재하는 것이 바람직하다. 상기 비-뉴클레오티드 잔기(들)는, 예를 들어 상기 링커 영역 (Lx) 또는 링커 영역 (Ly), 또는 둘 다에 존재할 수 있다. 상기 링커 영역 (Lx) 및 링커 영역 (Ly)는, 예를 들어 동일하거나 상이할 수 있다.
상기 피롤리딘 골격은 상기 ssPN 분자 내 피롤리딘 골격에 대해 설명된 것과 같다.
상기 피페리딘 골격은 상기 ssPN 분자 내 피페리딘 골격에 대해 설명된 것과 같다.
상기 링커 영역은, 예를 들어 상기 비-뉴클레오티드 구조 단독을 갖는 비-뉴클레오티드 잔기(들)로 구성되거나, 또는 비-뉴클레오티드 구조를 갖는 비-뉴클레오티드 잔기(들)와 뉴클레오티드 잔기(들)를 포함할 수 있다.
상기 링커 영역은, 예를 들어 하기 구조식 (I)로 표시된다. 상기 링커 영역은 상기 ssPN 분자 내 링커 영역에 대해 설명된 것과 같다.
상기 링커 영역 (Ly)가 상기 구조식 (I)로 표시되는 경우, 예를 들어 상기 링커 영역 (Ly)는 상기 링커 영역 (Lx)에 대해 설명된 것과 같다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 영역 (Lx)는 아미노산 잔기, 폴리아민 잔기, 폴리카복실산 잔기로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나를 포함할 수 있다. 상기 링커 영역은 아미노산 잔기, 폴리아민 잔기, 폴리카복실산 잔기 외의 잔기를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 예를 들어 상기 링커 영역은 폴리카복실산 잔기, 테레프탈산 잔기, 및 아미노산 잔기 중 어느 것이든지 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서, “폴리아민”은 복수개 (2, 3, 또는 그 이상)의 아미노기를 포함하는 어느 화합물을 의미한다. 상기 “아미노기”는 -NH2 기에 제한되는 것은 아니며, 이미노기 (-NH-) 또한 포함한다. 본 발명에서, 상기 폴리아민은 특별히 제한되는 것은 아니나, 그 예로 1,4-디아미노벤젠, 1,3-디아미노벤젠, 1,2-디아미노벤젠 등이 포함된다. 나아가, 본 발명에 있어서, “폴리카복실산”은 복수개 (2, 3, 또는 그 이상)의 카복시기를 포함하는 어느 화합물을 의미한다. 본 발명에서, 상기 폴리카복실산은 특별히 제한되는 것은 아니나, 그 예로 1,4-디카복시벤젠 (테레프탈산), 1,3-디카복시벤젠 (이소프탈산), 1,2-디카복시벤젠 (프탈산) 등이 포함된다. 나아가, 본 발명에 있어서, “아미노산”은 후술되는 것과 같이, 1 이상의 아미노기 및 1 이상의 카복시기를 분자 내에 포함하고 있는 어느 화합물을 의미한다. 상기 “아미노기”는 -NH2 기에 제한되는 것은 아니며, 이미노기 (-NH-) 또한 포함한다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 아미노산 잔기는 복수개의 연결된 아미노산 잔기일 수 있다. 본 발명에서, 복수개의 연결된 아미노산 잔기인 아미노산 잔기는, 예를 들어 펩티드 구조를 포함하는 잔기이다. 더욱 구체적으로, 복수개의 연결된 아미노산 잔기인 아미노산 잔기는, 예를 들어 후술되는 화학식 (I)의 아미노산 잔기로, 여기서 후술되는 화학식 (Ia)는 펩티드 (예: 글리신 이량체 또는 글리신 삼량체 등)이다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 아미노산 잔기는 글리신 잔기, 테레프탈아미드 잔기, 프롤린 잔기 또는 라이신 잔기일 수 있다. 또한, 상기 아미노산 잔기는 수정된 아미노산 잔기 또는 아미노산 유도체일 수 있다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 영역 잔기는, 예를 들어 하기 화학식 (I-0)으로 표시된다.
상기 화학식 (I-0)에서,
Q11 및 Q12 는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2 (메틸렌기), NH (이미노기), C=O (카보닐기), C=S (티오카보닐기), C=NH (이미노메틸렌기), O, 또는 S,
Q1 및 Q2 는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2 (메틸렌기), NH (이미노기), C=O (카보닐기), C=S (티오카보닐기), C=NH (이미노메틸렌기), O, 또는 S,
Y1 및 Y2 는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2, NH, O, 또는 S;
Y1 및 Y2 는 각각 독립적으로 단일 결합, CH2, NH, O, 또는 S;
L1 은 n개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌 사슬이고, 알킬렌 탄소 원자 상의 수소 원자는 OH, ORa, NH2, NHRa, NRaRb, SH, 또는 SRa 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있으며, 또는,
L1 은 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소 원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬이고,
단, Y1 이 NH, O, 또는 S인 경우, Y1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이고, OR1 에 결합하는 L1 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않으며;
L2 는 m 개의 탄소 원자를 갖는 알킬렌 사슬이고, 알킬렌 탄소 원자 상의 수소 원자는 OH, ORc, NH2, NHRc, NRcRd, SH, 또는 SRc 로 치환되거나 치환되어 있지 않을 수 있으며, 또는,
L2 는 상기 알킬렌 사슬 상의 적어도 하나의 탄소원자를 산소 원자로 치환하여 얻은 폴리에테르 사슬이고,
단, Y2 가 NH, O, 또는 S인 경우, Y2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이고, OR2 에 결합하는 L2 원자는 탄소이며, 산소 원자끼리는 서로 인접하지 않으며;
Ra, Rb, Rc, 및 Rd 는 각각 독립적으로 치환기 또는 보호기이고;
m은 0 내지 30 범위의 정수이고;
n은 0 내지 30 범위의 정수이고;
상기 X 영역 및 Y 영역은 각각 상기 링커 잔기에 -OR1- 또는 -OR2- 를 통해 연결될 수 있고,
상기 R1 및 R2 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 존재하는 경우, R1 및 R2 는 각각 독립적으로 뉴클레오티드 잔기 또는 상기 구조 (I-0)이며,
A는 어느 원자단이든지 상관없다.
상기 X 영역 및 Y 영역과 -OR1- 및 -OR2- 의 조합은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 하기 조건 중 어느 것일 수 있다.
조건 (1):
상기 X 영역은 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고, 상기 Y 영역은 -OR1- 을 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
조건 (2):
상기 X 영역은 -OR1- 을 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결되고, 상기 Y 영역은 -OR2- 를 통하여 상기 구조식 (I)의 구조와 연결된다.
상기 화학식 (I-0)에서, 예를 들어 Q11 은 C=O (카보닐기)일 수 있고, Q1 은 NH (이미노기)일 수 있다. 나아가, 예를 들어 Q11 은 NH (이미노기)일 수 있고, Q1 은 C=O (카보닐기)일 수 있다. 뿐만 아니라, 예를 들어 Q12 는 C=O (카보닐기)일 수 있고, Q2 는 NH (이미노기)일 수 있다. 나아가, 예를 들어 Q12 는 NH (이미노기)일 수 있고, Q2 는 C=O (카보닐기)일 수 있다.
상기 화학식 (I-0)에서, 각 Q11 과 Q12 는, 예를 들어 카보닐기일 수 있다. 이 경우, 각 Q1 과 Q2 는 바람직하게 이미노기일 수 있다. 나아가, 이 경우, 하기 화학식 (Iα)의 구조는 더욱 바람직하게 화학식 (Iα2)로 표시된다.
상기 화학식 (Iα2)에서,
R100 은 어느 치환기든지 상관없으며, 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 존재하는 경우, 이는 단수 또는 복수로 존재할 수 있다. 복수로 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 상기 R100 에 사용되는 치환기의 예로는, Ra, Rb, Rc 및 Rd 로 예시되는 후술되는 치환기들이 포함된다. 더욱 구체적인 예로는, 할로겐, 히드록시, 알콕시, 아미노, 카복시, 설포, 니트로, 카바모일, 설파모일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 아릴, 아릴알킬, 알킬아릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 실릴, 실릴옥시알킬, 피롤릴, 이미다졸릴 등이 포함된다. 상기 화학식 (Iα2)의 구조는 더욱 바람직하게는 하기 화학식 (Iα3)으로 표시된다.
Q11 및 Q12 가 카보닐기이고, Q1 및 Q2 가 이미노기인 경우, 상기 화학식 (I-0)의 링커 잔기는 카복실산 아미드 잔기 또는 카복실산 잔기일 수 있다. 예를 들어, “TPA” 구조는 상기 화학식 (Iα3)으로 표시되는 테레프탈아미드 잔기 또는 테레프탈산 잔기일 수 있다.
상기 화학식 (I-0)에서, 각 Q11 및 Q12 는 이미노기일 수 있다. 이 경우, 각 Q1 및 Q2 는 바람직하게 카보닐기일 수 있다. 이 경우, 상기 화학식 (Iβ)의 구조는 더욱 바람직하게는 하기 화학식 (Iβ2)로 표시된다.
상기 화학식 (Iβ2)에서,
R100 은 어느 치환기든지 상관없으며, 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 존재하는 경우, 이는 단수 또는 복수로 존재할 수 있다. 복수로 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 구체적으로, 예를 들어 R100 은 상기 화학식 (Iα2)와 동일하다. 나아가, 상기 화학식 (Iβ2)의 구조는 더욱 바람직하게는 하기 화학식 (Iβ3)으로 표시된다.
상기 ssNc 분자에서, 상기 링커 잔기가 아미노산 잔기인 경우, 상기 아미노산 잔기는, 예를 들어 하기 화학식 (I)로 표시된다. 하기 화학식 (I)의 구조는 상기 화학식 (I-0)으로 표시되는 구조의 일 예이다.
상기 구조식 (I)에서, 예를 들어 X1, X2, Y1, Y2, L1 및 L2 는 상기 정의된 바와 같다.
발현 조절 서열에 상보적인 서열이 각각 -OR1- 또는 -OR2- 를 통해 상기 아미노산 잔기에 결합한다.
R1 과 R2 는 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 존재하는 경우, R1 과 R2 는 각각 독립적으로 뉴클레오티드 잔기 또는 상기 구조 (I)이고,
A는 원자단으로, 하기 화학식 (Ia)는 아미노산 또는 펩티드이다.
상기 화학식 (I), (Iα) 또는 (Ia)의 원자단 A는, 예를 들어 사슬 원자단, 지환식 원자단, 방향족 원자단, 복소방향족 원자단, 및 복소지환식 원자단으로 이루어지는 기에서 선택되는 적어도 하나를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 상기 사슬 원자단은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 실릴, 실릴옥시알킬 등을 들 수 있다. 상기 지환족 원자단은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬 등을 들 수 있다. 상기 방향족 원자단은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 아릴, 아릴알킬, 알킬아릴, 축합-환 아릴, 축합-환 아릴알킬, 축합-환 알킬아릴 등을 들 수 있다. 상기 복소방향족 원자단은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 헤테로아릴, 헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴, 축합 환 시스템 헤테로아릴, 축합 환 시스템 헤테로아릴알킬, 축합 환 시스템 알킬헤테로아릴 등을 들 수 있다. 상기 화학식 (I), (Iα) 또는 (Ia)의 원자단 A에서, 각 원자단은 치환기 또는 보호기를 추가로 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 상기 치환기 또는 보호기가 복수개 있는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 상기 치환기는, 예를 들어 상기 Ra, Rb, Rc 및 Rd 로 예시되는 치환기이고, 더욱 구체적으로, 예를 들어 할로겐, 히드록시, 알콕시, 아미노, 카복시, 설포, 니트로, 카바모일, 설파모일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 아릴, 아릴알킬, 알킬아릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 실릴, 실릴옥시알킬, 피롤릴, 이미다졸릴 등이다. 상기 보호기는, 예를 들어 상기 Ra, Rb, Rc 및 Rd 로 예시되는 것과 동일하다.
본 발명에 있어서, “아미노산”은 전술한 것과 같이, 적어도 하나의 아미노기와 적어도 하나의 카복시기를 분자 내에 포함하고 있는 유기 화합물을 말한다. 상기 “아미노기”는 -NH2 기에 제한되는 것은 아니며, 이미노기 (-NH-) 또한 포함한다. 예를 들어 프롤린, 히드록시프롤린 등은 분자에 -NH2 기를 포함하지 않으나 이미노기 (-NH-)를 포함하여, 본 발명에서의 “아미노산”의 정의에 포함된다. 본 발명에서, 상기 “아미노산”은 전술한 것과 같이, 천연 아미노산 또는 인공 아미노산일 수 있다. 예를 들어 전술한 화학식 (Ia2) 또는 화학식 (Ia3)으로 표시되는 화합물 또한 분자 내에 아미노기와 카복시기를 포함하므로, 이들도 본 발명에서의 “아미노산”의 정의에 포함된다. 따라서, 예를 들어 화학식 (I)의 구조는 그 원자단 A가 하기 화학식 (A2) 또는 화학식 (A2a)로 표시되므로, 본 발명에서의 “아미노산 잔기”의 정의에 포함된다. 나아가, 예를 들어 후술되는 실시예에서 “TPA” 구조 또한 본 발명에서의 “아미노산 잔기”의 정의에 포함된다. 또한, 본 발명에 있어서, “펩티드”는 2 분자 이상의 아미노산이 펩티드 결합에 의해 결합한 구조의 유기 화합물을 말한다. 상기 펩티드결합은 산 아미드 구조 또는 산 이미드 구조일 수 있다. 상기 화학식 (Ia) 로 표시되는 아미노산 또는 펩티드 분자 내에 아미노기가 복수개 존재하는 경우, 상기 화학식 (Ia)에 명시되는 아미노기는 어느 아미노기여도 상관없다. 또한, 상기 화학식 (Ia) 로 표시되는 아미노산 또는 펩티드 분자 내에 카복시기가 복수개 존재하는 경우에는, 화학식 (Ia)에 명시되는 카복시기는, 어느 카복시기여도 상관없다.
상기 ssNc 분자 내 아미노산 잔기에 있어서, 상기 아미노산은 예를 들어, 전술한 바와 같이 천연 아미노산 또는 인공 아미노산일 수 있다. 본 발명에 있어서, “천연 아미노산”은, 천연에 존재하는 구조의 아미노산 또는 그 광학이성질체를 말한다. 상기 천연 아미노산의 제조 방법은 특별히 제한되는 것은 아니나, 예를 들어, 천연으로부터 추출되거나 합성된 것일 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, “인공 아미노산”은, 천연에 존재하지 않는 구조의 아미노산을 말한다. 즉, 상기 인공 아미노산은 아미노산, 즉, 아미노기를 포함하는 카복실산 유도체 (분자 중에 적어도 하나의 아미노기 및 적어도 하나의 카복시기를 포함하는 유기 화합물)로서, 천연에 존재하지 않는 구조의 카복실산 유도체를 말한다. 상기 인공 아미노산은, 예를 들어, 복소환을 포함하지 않는 것이 바람직하다. 상기 아미노산은, 예를 들어, 단백질을 구성하는 아미노산일 수 있다. 상기 아미노산은, 예를 들어, 글리신, α-알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 시스틴, 글루타민, 글루탐산, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 히드록시리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 세린, 트레오닌, 티로신, 발린, 프롤린, 4-히드록시프롤린, 트립토판, β-알라닌, 1-아미노-2-카복시시클로펜탄, 아미노벤조산, 아미노피리딘카복실산 및 하기 화학식 (Ia2)로 표시되는 아미노산으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1 종류일 수 있고, 추가로 치환기 또는 보호기를 갖거나 갖고 있지 않을 수 있다. 상기 치환기의 예로는, 상기 Ra, Rb, Rc 및 Rd로 예시된 치환기가 포함될 수 있다. 보다 구체적으로는, 예를 들어, 할로겐, 히드록시, 알콕시, 아미노, 카복시, 설포, 니트로, 카바모일, 설파모일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 아릴, 아릴알킬, 알킬아릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 실릴, 실릴옥시알킬, 피롤릴, 이미다졸릴 등을 들 수 있다. 상기 보호기는, 예를 들어, 상기 Ra, Rb, Rc 및 Rd로 예시된 보호기와 동일하다. 또한, 상기 화학식 (Ia) 의 펩티드가 아닌 아미노산에, 광학이성질체, 기하이성질체, 입체이성질체 등의 이성질체가 포함되는 경우에는, 어느 이성질체든지 상관없이 사용될 수 있다.
상기 화학식 (Ia2)에서,
R100 은 어느 치환기든지 상관없으며, 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 존재하는 경우, 이는 단수 또는 복수로 존재할 수 있다. 복수로 존재하는 경우, 이들은 동일하거나 상이할 수 있다. 상기 R100 에 사용되는 치환기의 예로는, Ra, Rb, Rc 및 Rd 로 예시되는 치환기들이 포함된다. 더욱 구체적인 예로는, 할로겐, 히드록시, 알콕시, 아미노, 카복시, 설포, 니트로, 카바모일, 설파모일, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 아릴, 아릴알킬, 알킬아릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알킬알킬, 시클릴알킬, 히드록시알킬, 알콕시알킬, 아미노알킬, 실릴, 실릴옥시알킬, 피롤릴, 이미다졸릴 등이 포함된다. 상기 화학식 (Ia2)의 구조는 더욱 바람직하게는 하기 화학식 (Ia3)으로 표시될 수 있다.
상기 화학식 (Ia)의 구조가 상기 화학식 (Ia2)인 경우, 상기 화학식 (I)에서 원자단 A의 구조는 하기 화학식 (A2)로 표시된다. 하기 화학식 (A2)에서 R100 는 상기 화학식 (Ia2)에서의 R100 와 동일하다. 나아가, 상기 화학식 (Ia)의 구조가 상기 화학식 (Ia3)인 경우, 상기 화학식 (I)에서 원자단 A의 구조는 하기 화학식 (A2a)로 표시된다
상기 화학식 (I) 의 구조는 하기 화학식 (I-1) 내지 (I-7)을 포함한다. 하기 화학식 (I-1) 내지 (I-7)에서 n과 m은 상기 화학식 (I)과 동일하다.
상기 화학식 (I-1) 내지 (I-7)에서, n과 m은 특별히 제한되는 것은 아니며, 전술한 바와 같다. 이의 구체적인 예로, 상기 화학식 (I-1)에서 n은 11, m은 12, 또는 n은 5, m은 4이고, 상기 화학식 (I-4)에서 n은 5, m은 4이고, 상기 화학식 (I-6)에서 n은 4, m은 4, 상기 화학식 (I-7)에서 n은 5, m은 4이다. 그 구조는 하기 화학식 (I-1a), (I-1b), (I-4a), (I-6a) 및 (I-7a)로 나타내었다.
본 발명에서 사용되는 ssNc 분자의 예로는 후술되는 NK-7006 및 NK-7007로 표시되는 ssNc가 포함된다.
본 발명의 조성물에 포함되는 핵산 분자 그 자체는 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 이는 WO 2012/017919, WO 2013/103146, WO 2012/005368 또는 WO 2013/077446에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다.
본 발명의 조성물에서 핵산 분자의 함량은 특별히 제한되는 것은 아니나, 조성물이 약학 조성물인 경우, 그 함량은 일반적으로 전체 약학 조성물에 대하여 0.0001 내지 60 중량%이며, 바람직하게는 0.001 내지 15 중량%, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 1 중량%이다.
2. 버퍼 (Buffer)
본 발명의 조성물은 버퍼를 포함한다. 본 발명에서, 버퍼는 완충 작용을 하는 용액 (특히 수용액)을 말하며, 완충제를 포함하여 구성된다. 본 발명에서 완충제는 수용액 pH의 안정화제를 의미하며, 의약 제조 업계에서 일반적으로 사용되는 것을 선택할 수 있다.
본 발명의 조성물에서, 핵산 분자의 분해는 버퍼의 사용에 의하여 예방될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 버퍼로는, 조성물의 pH를 4.0 이상 9.0 이하로 조정하는 버퍼를 들 수 있다. 조성물의 pH를 pH 5.5 이상 7.5 이하로 조정하는 버퍼가 바람직하며, 조성물의 pH를 6.0 이상 7.0 이하로 조정하는 버퍼가 보다 바람직하다. 나아가, 조성물의 pH를 6.1 이상 6.9 이하로 조정하는 버퍼가 바람직하며, 조성물의 pH를 6.2 이상 6.8 이하로 조정하는 버퍼가 바람직하고, 조성물의 pH를 6.3 이상 6.7 이하로 조정하는 버퍼가 더욱 바람직하며, 조성물의 pH를 6.4 이상 6.6 이하로 조정하는 버퍼가 더욱 더 바람직하고, 조성물의 pH를 6.5로 조정하는 버퍼가 특히 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 완충제로는, 구체적으로 아스코르브산, 마그네슘 L-아스파테이트, 소듐 설파이트, L-아르기닌, L-아르기닌 히드로클로라이드, 벤조산, 소듐 벤조에이트, 엡실론-아미노카프로산, 암모늄 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 소듐 클로라이드, 글루코사민 클로라이드, 히드로클로르산 트리에탄올아민, 희석 염산, 시트르산, 무수 시트르산, 무수 소듐 시트레이트, 시트르산, 소듐 시트레이트 수화물, 소듐 디히드로겐 시트레이트, 디소듐 시트레이트, 트리소듐 시트레이트, 트리소듐 시트레이트 이수화물, 포타슘 시트레이트, 글리실글리신, 글리신, 글루코노-σ-락톤, 글루콘산, 칼슘 글루코네이트 수화물, L-글루탐산, 모노소듐 L-글루타메이트, 크레아티닌, 클로로부탄올, 디소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 디히드로겐 포스페이트, 숙신산, 디소듐 숙시네이트 육수화물, 아세트산, 암모늄 아세테이트, 포타슘 아세테이트, 소듐 아세테이트 수화물, 디이소프로판올아민, 디에탄올아민, 타르타르산, 소듐 L-타르타레이트, 포타슘 히드록시드, 소듐 히드록시드, 타우린, 소듐 카보네이트, 소듐 카보네이트 수화물, 소듐 히드로겐 카보네이트, 트리이소프로판올아민, 트리에탄올아민, 트로메타몰, 카본 디옥시드, 락트산, 칼슘 락테이트 수화물, 소듐 락테이트 용액, L-히스티딘, 4-(2-히드록시에틸), 빙초산, 글루코스, 모노소듐 푸마레이트, 소듐 프로피오네이트, 벤즈알코늄 클로라이드, 방향족 탄화수소 혼합 용매, 암모늄 보레이트, 말레산, 무수 소듐 아세테이트, 무수 소듐 카보네이트, 디소듐 히드로겐 포스페이트 무수화물, 트리소듐 포스페이트 무수화물, 소듐 디히드로겐 포스페이트 무수화물, 소듐 메타포스페이트, 메탄설폰산, 황산, 알루미늄 설페이트 포타슘 수화물, 인산, 소듐 모노히드로겐 포스페이트 칠수화물, 트리소듐 포스페이트, 제2소듐 포스페이트 수화물, 디소듐 히드로겐 포스페이트 수화물, 소듐 디히드로겐 포스페이트수화물, 포타슘 디히드로겐 포스페이트, 소듐 디히드로겐 포스페이트, 및 소듐 디히드로겐 포스페이트 일수화물에서 선택되는 하나 이상의 완충제를 들 수 있다. 이 중, 시트르산이 바람직하다.
따라서, 본 발명의 조성물에 사용되는 버퍼로서, 시트르산을 포함하는 버퍼가 바람직하게 언급될 수 있다.
본 발명에서, 버퍼는 전술된 완충제로 예시되는 산 및 그의 염, 또는 전술된 완충제로 예시되는 2 종류 이상의 산의 염을 포함하는 것이 바람직하다. 시트르산 및 그의 염 (예: 시트르산 및 소듐 시트레이트, 시트르산, 트리소듐 시트레이트 등)을 포함하는 버퍼, 인산 및 그의 염 (예: 인산, 소듐 디히드로겐 포스페이트 등)을 포함하는 버퍼, 및 2 종류의 포스페이트 (예: 디소듐 히드로겐 포스페이트 및 소듐 디히드로겐 포스페이트)를 포함하는 버퍼가 더욱 바람직하다. 시트르산 및 그의 염을 포함하는 버퍼가 특히 바람직하다.
본 발명의 조성물에 사용되는 버퍼의 양은 목적하는 pH 범위로 조정할 수 있는 한 제한되지 않는다. 예를 들어, 조성물 내 완충제의 함량은 하기의 범위에 들어가도록 적절하게 결정될 수 있다. 즉, 본 발명의 조성물 내 완충제의 함량은 일반적으로 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 40 중량%이고, 바람직하게는 0.0005 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 10 중량%이다.
3. 기타 첨가제
본 발명의 조성물은 용매를 추가로 포함할 수 있다. 용매의 예로는 약학적으로 허용가능한 유기 용매 (예: 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤 등), 물, 주사용수, 식염수, 글루코스 용액 등이 포함된다. 1 이상의 용매는 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명에서, 핵산 분자는 짧은 시간 동안 용해가 가능하므로, 용매에 용해시키고 버퍼에 혼합하는 것이 바람직하다. 용매로서, 물이 바람직하다. 본 발명의 상세한 설명에서, 별도로 특정하지 않는 한, “핵산 분자가 버퍼에 용해되었다”는 핵산 분자가 고체로서 버퍼에 직접적으로 용해되었다는 것뿐만 아니라, 전술한 것과 같이 핵산 분자가 물 등과 같은 용매에 한번 용해된 후 그 용액이 버퍼와 혼합된 것 또한 의미한다.
본 발명에서, 용매의 함량은 전체 조성물에 대하여 총 함량으로서, 일반적으로0.0001 중량% 이상 100 중량% 미만이고, 바람직하게는 0.001 중량% 이상 100 중량% 미만, 더욱 바람직하게는 0.005 중량% 이상 100 중량% 미만이다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 상기 조성물은, 알려진 방법에 의하여 예를 들어 흡입액제, 주사제, 액체 등으로 제형화될 수 있고, 비경구 투여 (예: 경비강 투여, 정맥내 투여, 점적, 근육내 투여, 피하 투여 등) 될 수 있다. 나아가, 이는 적절한 복약량 제형 (예: 캡슐 등)으로 경구 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 전술한 성분 외에, 필요에 따라 약학적으로 허용가능한 첨가제 또한 포함할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물이 주사제인 경우, 첨가제의 예로는 등장화제 (예: 글루코스, D-솔비톨, 소듐 클로라이드, 글리세롤, D-만니톨 등), 수딩제 (예: 벤질 알코올 등), 보존제 (예: 메틸 벤조에이트, 파라옥시벤조에이트, 클로로부탄올, 벤질 알코올 등) 등이 포함된다. 바람직한 첨가제로는 메틸 벤조에이트를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물이 주사제인 경우, 이는 핵산 분자를 버퍼에 용해시킨 후 얻은 용액을 지질막의 구성 분자와 접촉시킴으로써, 핵산 분자를 캡슐화한 리포좀 제제로도 제조될 수 있다. 바람직하게 리포좀 제제는 정맥 주사, 근육내 주사 등과 같은 전신 투여용 주사제로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물이 흡입제로 제형화되는 경우, 예를 들어, 핵산 분자를 물 등과 같은 용매에 용해시켜 얻은 용액을 완충화제 (예: 시트르산 및 그의 염, 인산 및 그의 염)를 첨가한 수용액과 혼합하고, 그 혼합물을 세균 제거를 위하여 여과시킨 후, 얻은 약물 용액을 유리병, 앰플 등의 밀폐 용기에 채워 흡입제를 제조할 수 있다. 예를 들어, 핵산 분자는 물 및 완충화제 (예: 시트르산 및 그의 염, 인산 및 그의 염)를 포함하는 수용액과 혼합한 후, 초음파 처리 등으로 용해시키고, 세균 제거를 위하여 여과시킨 후, 얻은 약물 용액을 유리병, 앰플 등의 밀폐 용기에 채워 흡입제를 제조할 수 있다. 사용될 수 있는 밀폐 용기는 일반적으로 무색의 투명한 붕규산 유리 용기이나, 액체가 닿는 용기 내부의 유리가 석영과 같은 표면 특성을 가지는 용기도 사용할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물에서, 유효 성분인 핵산 분자는 다양한 질환의 치료 또는 예방에 유용하다.
예를 들어, 유전자에 의한 질환을 가진 환자에게 투여할 경우, 상기 유전자의 발현을 조절함으로써 질환을 치료할 수 있다. 본 발명에 있어서, 용어 “치료”는, 전술한 바와 같이, 예를 들어 상기 질환의 예방, 질환의 개선, 예후의 개선의 의미를 포함하고, 이 중 어느 것이어도 된다.
구체적인 예는 다음과 같다. TGF-β1 유전자를 상기 타겟 유전자로 설정하고 상기 유전자에 대한 발현 억제 서열 (서열번호 4로 표시되는 뉴클레오티드 서열)을 상기 ssPN 분자 내에 포함시키는 경우, 이는 TGF-β1를 억제함으로써 치료 효과가 나타나는 것으로 기대되는 질환 또는 병리의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 사용 방법은 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 약학 조성물은 상기 타겟 유전자를 갖는 개체에 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물이 투여되는 개체의 예로는, 세포, 조직 또는 기관 등을 들 수 있다. 상기 개체의 예로는 인간, 및 비인간 포유류, 즉, 인간을 제외한 포유류와 같은 비인간 동물 등을 들 수 있다. 상기 투여는, 예를 들어, 인 비보 또는 인 비트로에서 수행될 수 있다. 상기 세포는 특별히 제한되지 않으나, 그 예로 HeLa 세포, 293 세포, NIH3T3 세포, COS 세포와 같은 다양한 배양 세포; 배아줄기(ES) 세포, 조혈 줄기 세포와 같은 줄기 세포; 초대 배양 세포와 같이 생체로부터 단리한 세포를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 독성이 매우 낮으므로, 포유류 (예: 인간, 마우스, 랫트, 토끼, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 원숭이), 특히 인간에게 안전하게 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량 또한 투여 개체, 투여 경로, 질환 등에 따라 변화될 수 있다. 예를 들어, 성인에게 특발성 폐섬유증의 치료제로서 흡입액제가 투여되는 경우, 유효성분인 핵산 분자의 투여량은 0.001 내지 약 20 mg/kg 체중이고, 바람직하게는 0.005 내지 약 5 mg/kg 체중, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 약 1 mg/kg 체중이며, 하루에 1 내지 여러 회 투여될 수 있다.
본 발명은 또한, 핵산 분자에 버퍼를 첨가하는 단계를 포함하는 조성물 내 핵산 분자의 안정화 방법, 또는 핵산 분자를 포함하는 안정한 조성물의 제조 방법에 대한 것이다. 본 방법에 사용되는 버퍼로서, 본 발명의 조성물의 상기 예들을 들 수 있으며, 유사한 것이 바람직하다.
본 발명의 안정화/제조 방법에서 첨가되는 버퍼의 양은 원하는 범위로 pH를 조정할 수 있는 한 제한되지 않는다. 예를 들어, 완충화제의 양은 이하의 범위에 포함되도록 적절히 결정될 수 있다. 즉, 본 발명의 안정화/제조 방법에서 첨가되는 완충화제의 양은, 상기 방법으로 얻어진 전체 조성물에 대하여, 일반적으로 0.0001 내지 40 중량%, 바람직하게는 0.0005 내지 20 중량%, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 10 중량%이다.
이하 실시예들을 참조하여 본 발명을 자세히 설명하지만, 이에 한정되는 것으로 해석되어서는 안된다.
제조예 1 (단일 가닥 핵산 분자의 합성)
아래에 나타나는 단일 가닥 핵산 분자를 포스포라미디트법에 기초하여 핵산 합성기 (상품명: ABI Expedite (등록상표) 8909 핵산 합성 시스템, Applied Biosystems)로 합성하였다. 상기 합성을 위하여, RNA 포스포라미디트 (2'-O-TBDMSi, 상품명, Samchully Pharm. Co., Ltd.)를 RNA 아미디트로 사용하였다 (이하 동일). 상기 아미디트를 종래의 방법으로 탈보호하고, 합성된 RNA를 HPLC로 정제하였다. 정제 후 각 RNA는 동결건조하였다.
실시예 1 내지 4의 단일 가닥 핵산 분자로서, PH-0009 (PshRNA)를 상기와 같이 합성하였다. PshRNA에서 Lx는 링커 영역 Lx이고, 이하의 구조식은 L-프롤린 디아미드 아미디트를 사용하여 구성하였다. 밑줄 부분은 인간 TGF-β1 유전자의 발현 억제 서열을 나타낸 것이다.
PshRNA (PH-0009)
5'-GCAGAGUACACACAGCAUAUACC-Lx-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUU-3' (서열번호 7)
실시예 1 (보관 온도에서의 pH의 영향 평가)
실시예 1-1 (시험 조성물의 제조)
핵산 흡입제의 프로토타입으로서 PH-0009를 포함하는 조성물의 열적 안정성을 평가하였다. 하기 시험 조성물 1 내지 12는 본 분야에서 일반적으로 사용되는 방법에 의해 제조하였다.
시험 조성물 1: PH-0009 제형 19 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 2.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 2: PH-0009 제형 20 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 3.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 3: PH-0009 제형 21 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 4: PH-0009 제형 22 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 5: PH-0009 제형 23 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 6: PH-0009 제형 24 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 7: PH-0009 제형 25 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 8: PH-0009 제형 26 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 9.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 9: PH-0009 제형 27 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 10.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 10: PH-0009 제형 28 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 11.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 11: PH-0009 제형 29 (0.04 M Britton-Robinson 버퍼 (pH 12.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 12: PH-0009 제형 30 (0.04 M 염산-포타슘 클로라이드 버퍼 (pH 1.5)), (0.1 mg/mL)
실시예 1-2 (시험 방법 및 진단 기준)
상기 시험 조성물 1 내지 12를 각각 25℃/60%RH(상대습도), 40℃/75%RH 및 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 보관된 각 물질을 매주 꺼내어 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다. 보관 시기 및 보관된 물질들의 수는 표 2 내지 표 5에 나타내었다.
보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 변화를 각 보관 조건 하에서 4주까지 확인한 후, 안정성 면에서 우수한 것으로 평가된 제형들에 대하여 평가를 계속하였다.
1주, 2주, 3주, 및 4주 동안 25℃/60%RH, 40℃/75%RH 및 60℃에서 보관된 상기 시험 조성물 1 내지 12를 각각 보관 시료로 사용하였다.
별개로, 주사용수를 이용하여 0.1 mg/ml의 PH-0009를 제조하고, 이를 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 90 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (10 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (90%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 80 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (20 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (80%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 70 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (30 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (70%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 60 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (40 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (60%)로 사용하였다.
각 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 10 μL)를 HPLC를 이용하여 측정하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)에 의해 얻은 피크 면적에 있어서, 회귀곡선 (Y=aX+b) 및 그의 상관계수 (r)는 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 이용한 최소 제곱법에 의하여 결정하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 각 시료의 함량 (%)을 계산하였다 (excel 2013).
보관 시기 및 보관된 물질들의 물질들의 수
시료 제형 제형 19 제형 20 제형 21
0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 2.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 3.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 4.0)
핵산 PH-0009 PH-0009 BPH-0009
mg/mL 0.1 0.1 0.1
시험 조성물 번호 1 2 3
확인 0 1 1 1
40℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
60℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
시료 제형 제형 22 제형 23 제형 24
0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 5.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 6.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 7.0)
핵산 PH-0009 PH-0009 PH-0009
mg/mL 0.1 0.1 0.1
시험 조성물 번호 4 5 6
확인 0 1 1 1
40℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
60℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
시료 제형 제형 25 제형 26 제형 27
0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 8.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 9.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 10.0)
핵산 B B B
PH-0009 PH-0009 PH-0009
mg/mL 0.1 0.1 0.1
시험 조성물 번호 7 8 9
확인 0 1 1 1
40℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
60℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
시료 제형 제형 28 제형 29 제형 30
0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 11.0)		 0.04 M Britton-Robinson
버퍼 (pH 12.0)		 0.04 M 염산-염화칼슘
버퍼
(pH 1.5)
핵산 PH-0009 PH-0009 PH-0009
mg/mL 0.1 0.1 0.1
시험 조성물 번호 10 11 12
확인 0 1 1 1
40℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
60℃ 1 주 1 1 1
2 주 1 1 1
3 주 1 1 1
4 주 1 1 1
측정 방법
검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 시료를 하기 측정 조건 하에서 측정하였다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다 (표 6).
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
실시예 1-3 (결과)
결과를 도 1 내지 도 3에 나타내었다. 60℃에서 4주 동안 보관하는 가장 가혹한 조건 하, pH 5 내지 pH 7 범위에서는 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소가 뚜렷하게 나타나지 않았기 때문에, PH-0009를 포함하는 조성물의 pH 범위를 5 내지 7로 설정하였다.
일반적으로, 핵산은 온도에 쉽게 영향을 받아, 주위 온도 또는 그 이상의 온도에서 이를 보관하거나 장기간 보관하는 것은 불가능하다고 한다. 본 결과들은 용액의 pH를 조정함으로써, 심지어 주위 온도 또는 그 이상의 온도에서도 단일 가닥 핵산을 장기간 보관할 수 있음을 보여준다.
실시예 2 (시트레이트 버퍼 및 그의 농도에 따른 안정성 평가)
실시예 2-1 (시험 조성물)
핵산 흡입제의 프로토타입으로서 PH-0009를 포함하는 조성물의 열적 안정성을 평가하였다.
0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8) 및 0.005 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)를 기본 제형으로 사용하여, 각 용액 내 하기 시험 조성물 13 및 14의 열적 안정성을 평가하였다.
시험 조성물 13은 하기와 같이 제조하였다.
시트르산 수화물 (21.0 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 시트르산 용액을 제조하였다. 유사하게, 트리소듐 시트레이트 이수화물 (29.4 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 소듐 시트레이트 용액을 제조하였다. 상기 0.1 M 시트르산 용액을 0.1 M 소듐 시트레이트 용액에 첨가하여 pH를 6.8로 조정하고, 상기 혼합물을 0.1 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)로 사용하였다.
별개로, 핵산 (PH-0009) (10 mg)을 주사용수 (0.5 mL)에 용해시켰다. 상기 용액 (0.2 mL)을 주사용수 (20 mL)와 혼합하였다. 이에 0.1 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8) (20 mL)를 가하고, 상기 혼합물을 저은 후 0.22 μm 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 필터에 통과시켜 4 mg/40 mL (0.1 mg/mL)의 PH-0009를 포함하는 조성물을 제조하였다.
시험 조성물 14는 하기와 같이 제조하였다.
시트르산 수화물 (21.0 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 시트르산 용액을 제조하였다. 유사하게, 트리소듐 시트레이트 이수화물 (29.4 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 소듐 시트레이트 용액을 제조하였다. 상기 0.1 M 시트르산 용액을 0.1 M 소듐 시트레이트 용액에 첨가하여 pH를 6.8로 조정하고, 상기 혼합물을 0.1 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)로 사용하였다. 0.1 M 시트르산 용액 (18 mL), 0.1 M 소듐 시트레이트 용액 (82 mL), 및 주사용수 (900 mL)를 혼합한 후 1N NaOH를 이용하여 pH를 6.8로 조정하여, 0.01 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)를 제조하였다.
별개로, 핵산 (PH-0009) (13.9 mg)을 주사용수 (1 mL)에 용해시켰다. 상기 용액 (0.0719 mL)을 주사용수 (4.9281 mL)와 혼합하였다. 이에 0.01 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8) (5 mL)를 가하고, 상기 혼합물을 저은 후 0.22 μm 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 필터에 통과시켜 1 mg/10 mL (0.1 mg/mL)의 PH-0009를 포함하는 조성물을 제조하였다.
시험 조성물 13: PH-0009 제형 3 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 14: PH-0009 제형 7 (0.005 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
실시예 2-2 (시험 방법 및 진단 기준)
상기 시험 조성물 13 및 14를 각각 40℃/75%RH 및 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 보관된 각 물질을 매주 꺼내어 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다. 보관 시기 및 보관된 물질들의 수는 표 7에 나타내었다.
보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 변화를 각 보관 조건 하에서 4주까지 확인한 후, 안정성 면에서 우수한 것으로 평가된 제형들에 대하여 평가를 계속하였다.
1주, 2주, 3주, 및 4주 동안 40℃/75%RH 및 60℃에서 보관된 상기 시험 조성물 13 및 14를 각각 보관 시료로 사용하였다.
별개로, 주사용수를 이용하여 0.1 mg/ml의 PH-0009를 제조하고, 이를 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 90 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (10 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (90%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 80 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (20 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (80%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 70 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (30 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (70%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 60 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (40 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (60%)로 사용하였다.
각 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 10 μL)를 HPLC를 이용하여 측정하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)에 의해 얻은 피크 면적에 있어서, 회귀곡선 (Y=aX+b) 및 그의 상관계수(r)는 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 이용한 최소 제곱법에 의하여 결정하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 각 시료의 함량 (%)을 계산하였다 (excel 2013).
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
시료 제형 제형 3 제형 7
0.05 M 시트레이트 버퍼(pH 6.8) 0.005 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)
핵산 PH-0009 PH-0009
mg/mL 0.1 0.1
시험 조성물 번호 13 14
확인 0 1 1
40℃ 1 주 1 1
2 주 1 1
3 주 1 1
4 주 1 1
60℃ 1 주 1 1
2 주 1 1
3 주 1 1
4 주 1 1
측정 방법
검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 시료를 하기 측정 조건 하에서 측정하였다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다 (표 8).
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
실시예 2-3 (결과)
결과를 도 4 및 도 5에 나타내었다. 단일 가닥 핵산을 0.1 mg/mL로 제조하였을 때는, 60℃에서 4주 동안 보관 시 0.005 M 내지 0.05 M의 시트레이트 버퍼 농도 범위에서 조차 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 변화가 뚜렷하게 나타나지 않았다. 이로부터, 단일 가닥 핵산의 농도가 증가되었을 경우에도 시트레이트 버퍼의 농도를 조절함으로써 핵산의 안정성을 유지할 수 있는 효과가 있다는 것이 시사된다.
실시예 3 (PH-0009 포함 조성물 (10 mg/mL)의 제조)
10 mg/mL의 PH-0009를 포함하는 조성물을 제조하였다. 1 mg/mL의 PH-0009를 포함하는 조성물은 핵산의 기준양을 1.0 g으로 변화시켜 제조할 수 있다. 0.1 mg/mL의 경우에는 기준양을 0.10 g으로 변화시킨다.
시트르산 수화물 (21.0 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 시트르산 용액을 제조하였다. 유사하게, 트리소듐 시트레이트 이수화물 (29.4 g)을 주사용수 (1 L)에 용해시켜 0.1 M 소듐 시트레이트 용액을 제조하였다. 상기 0.1 M 시트르산 용액을 0.1 M 소듐 시트레이트 용액에 첨가하여 pH를 6.5로 조정하여 0.1 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)를 제조하였다.
별개로, 핵산 (PH-0009) (10 g)을 주사용수 (500 mL)에 용해시켰다. 이에 0.1 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5) (500 mL)를 가하고, 상기 혼합물을 저은 후 0.22 μm 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 필터에 통과시켜 10 g/L (10 mg/mL)의 PH-0009를 포함하는 조성물을 제조하였다. 상기 조성물을 특발성 폐섬유증(IPF)의 흡입제 또는 그 유사체로 사용하였다.
성분명 (상품명 또는 등급) 기준양
PH-0009 (단일 가닥 핵산) 10.0 g
시트르산 수화물 (일본약전) 0.914 g
트리소듐 시트레이트 이수화물 (일본공업표준) 29.4 g
주사용수 (일본약전) 1 L
실시예 4 (PH-0009 포함 조성물의 온도 안정성 평가)
실시예 4-1 (시험 조성물)
단일 가닥 핵산의 제조의 개발 과정에서, PH-0009 포함 조성물의 안정성을 다양한 제형에서 평가하였다. 그 결과, 시험 조성물 15 및 16이 핵산 약학 제품으로써 가장 뛰어난 제형으로 평가되어, 이들의 열적 안정성을 평가하였다.
시험 조성물 15 및 16은 실시예 3 및 시험 조성물 13 및 14와 동일한 방법으로 수득하였다.
시험 조성물 15: PH-0009 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (1 mg/mL)
시험 조성물 16: PH-0009 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (10 mg/mL)
실시예 4-2 (시험 방법 및 진단 기준)
상기 시험 조성물 15 및 16을 각각 25℃/60%RH, 40℃/75%RH 및 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 보관된 각 물질을 매주 꺼내어 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다. 보관 시기 및 보관된 물질들의 수는 표 10에 나타내었다.
보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 변화를 각 보관 조건 하에서 4주까지 확인한 후, 안정성 면에서 우수한 것으로 평가된 제형들에 대하여 평가를 계속하였다.
1주, 2주, 3주, 및 4주 동안 40℃/75%RH 및 60℃에서 보관된 상기 시험 조성물 15 및 16을 각각 보관 시료로 사용하였다.
별개로, 주사용수를 이용하여 1 mg/mL의 PH-0009를 제조하고, 이를 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 90 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (10 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (90%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 80 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (20 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (80%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 70 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (30 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (70%)로 사용하였다. 상기 검정 곡선 시료 (100%)를 60 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (40 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (60%)로 사용하였다.
각 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 10 μL)를 HPLC를 이용하여 측정하였다. 10 mg/mL 시료에 있어서, 1 μL 는 HPLC로 측정하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)에 의해 얻은 피크 면적에 있어서, 회귀곡선 (Y=aX+b) 및 그의 상관계수(r)는 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 이용한 최소 제곱법에 의하여 결정하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 각 시료의 함량 (%)을 계산하였다 (excel 2013).
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
시료 제형 제형 44
0.05 M 시트레이트 버퍼(pH 6.5)
핵산 PH-0009
mg/mL 1 10
시험 조성물 번호 15 16
확인 0 1 1
40℃ 1 주 1 1
2 주 1 1
3 주 1 1
4 주 1 1
60℃ 1 주 1 1
2 주 1 1
3 주 1 1
4 주 1 1
측정 방법
검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 시료를 하기 측정 조건 하에서 측정하였다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다 (표 11).
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
실시예 4-3 (결과)
시험 조성물 16에 대한 결과를 도 6에 나타내었다. 60℃에서 4주 동안 보관하였을 때 조차 10 mg/mL PH-0009 포함 조성물에 있어서 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 변화가 뚜렷하게 나타나지 않았다. 유사한 결과가 시험 조성물 15 (1 mg/mL PH-0009 포함 조성물)에서도 얻어졌다. 본 제형에 따라 제조된 PH-0009 포함 조성물 (액상 단일 가닥 핵산 흡입제 또는 그 유사체)은 높은 보관 안정성을 나타내었다.
제조예 2
실시예 5의 핵산 분자로서, 하기의 가닥 핵산 분자를 포스포라미디트법에 기초하여 핵산 합성기 (상품명: ABI Expedite (등록상표) 8909 핵산 합성 시스템, Applied Biosystems)로 합성하였다. 상기 합성을 위하여, RNA 포스포라미디트 (2'-O-TBDMSi, 상품명, Samchully Pharm. Co., Ltd.)를 RNA 아미디트로 사용하였다. 상기 아미디트를 종래의 방법으로 탈보호하고, 합성된 RNA를 HPLC로 정제하였다. 정제 후 각 RNA는 동결건조하였다.
실시예 5의 단일 가닥 핵산 분자 및 이중 가닥 핵산 분자 (siRNA)를 상기와 같이 합성하였다. NK-7006 및 NK-7007에서, 괄호 안에 기재된 부분은 링커 영역이다. NK-7006, NK-7007, PK-7006, PK-7015, PH-7069, 및 PH-7081에서 밑줄 부분은 각 타겟 유전자의 발현 억제 서열을 나타내며, Lx는 링커 영역 Lx이다. 하기 구조식을 가지는 링커 영역 Lx는 L-프롤린 디아미드 아미디트를 사용하여 구성하였다.
NkRNA (NK-7006) (타겟 유전자: 루시퍼라제)
5'-ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC(CCACACC)GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC(UUCG)G-3' (서열번호 8)
NkRNA (NK-7007) (타겟 유전자: 마우스 GAPDH)
5'-ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC(CCACACC)GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC(UUCG)G-3' (서열번호 9)
PnkRNA (PK-7006) (타겟 유전자: 마우스 TGF-β1)
5'-GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Lx-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Lx-G-3' (서열번호 10)
PnkRNA (PK-7015) (타겟 유전자: 마우스 CCR3)
5'-AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Lx-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Lx-G-3' (서열번호 11)
PshRNA (PH-7069) (타겟 유전자: 마우스 Smad3)
5'-GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Lx-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA-3'
(서열번호 12)
안티센스 핵산 (Kynamro-7001) (ApoB100 mRNA에 대한 안티센스 DNA)
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (서열번호 1)
(소문자는 DNA를 나타냄)
PshRNA (PH-7081) (타겟 유전자: 반딧불 루시퍼라제)
5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Lx-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG-3' (서열번호 13)
siRNA (NI-7001) (마우스 CTGF)
5'-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3' (서열번호 14)
5'-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3' (서열번호 15)
miRNA (NM-7001) (인간 let7a-1 전구체)
5'- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (서열번호 2)
앱타머 (Macugen-7001) (VEGF 단백질에 대한 앱타머)
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (서열번호 3)
(t 는 3'3'-dT 이다)
실시예 5 (시트레이트 버퍼에 의한 다양한 핵산의 안정성 평가)
실시예 5-1 (시험 조성물의 제조)
실시예 3과 시험 조성물 13 및 14와 동일한 방법으로 하기의 시험 조성물 17 내지 36을 수득하였다.
시험 조성물 17: NK-7006 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 18: NK-7006 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 19: NK-7007 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 20: NK-7007 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 21: PK-7006 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 22: PK-7006 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 23: PK-7015 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 24: PK-7015 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 25: PH-7069 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 26: PH-7069 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 27: Kynamro-7001 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 28: Kynamro-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 29: PH-7081 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 30: PH-7081 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 31: NI-7001 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 32: NI-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 33: NM-7001 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 34: NM-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 35: Macugen-7001 제형 44 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 36: Macugen-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
실시예 5-2 (시험 방법 및 진단 기준)
시험 조성물 17 내지 36을 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 보관된 각 물질을 매주 꺼내어 역상 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다. 보관 시기 및 보관된 물질들의 수는 표 12에 나타내었다.
1주, 2주, 3주, 및 4주 동안 60℃에서 보관된 상기 시험 조성물 17 내지 36을 각각 보관 시료로 사용하였다.
별개로, 4℃에서 보관한 시험 조성물 17 내지 36의 산물을 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 90 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (10 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (90%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 80 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (20 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (80%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 70 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (30 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (70%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 60 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (40 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (60%)로 사용하였다. 검정 곡선 시료의 제조사항은 표 13에 나타내었다.
각 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 10 μL)를 HPLC로 측정하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)에 의해 얻은 피크 면적에 있어서, 회귀곡선 (Y=aX+b) 및 그의 상관계수 (r)는 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 이용한 최소 제곱법에 의하여 결정하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 각 시료의 함량비 (%)를 계산하였다.
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
보관 시료 4℃ 60℃
시작 시 1 내지 4 주
시험 물질 번호 이름 1 4
17 NK-7006 제형 44 1 4
18 NK-7006 주사용수 1 4
19 NK-7007 제형 44 1 4
20 NK-7007 주사용수 1 4
21 PK-7006 제형 44 1 4
22 PK-7006 주사용수 1 4
23 PK-7015 제형 44 1 4
24 PK-7015 주사용수 1 4
25 PH-7069 제형 44 1 4
26 PH-7069 주사용수 1 4
27 Kynamro-7001 제형 44 1 4
28 Kynamro-7001 주사용수 1 4
29 PH-7081 제형 44 1 4
30 PH-7081 주사용수 1 4
31 NI-7001 제형 44 1 4
32 NI-7001 주사용수 1 4
33 NM-0001 제형 44 1 4
34 NM-0001 주사용수 1 4
35 Macugen-7001 제형 44 1 4
36 Macugen-7001 주사용수 1 4
분석 곡선 시료 제조사항
각 분석 곡선 시료 (60% 내지 100%)
100% 90% 80% 70% 60%
제조방법 시험 물질 시험 물질
90 μL +
주사용수
10 μL		 시험 물질
80 μL +
주사용수
20 μL		 시험 물질
70 μL +
주사용수
30 μL		 시험 물질
60 μL +
주사용수
40 μL
측정 방법
검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 시료를 하기 측정 조건 하에서 측정하였다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다.
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
실시예 5-3 (결과)
그 결과를 도 7 내지 16에 나타내었다.
본 결과는 주사용수(WFI)와 비교할 때, 핵산의 종류에 상관없이, 0.05 M 시트레이트 버퍼 제형 (pH 6.5)이 열적 안정성에 기여함을 나타낸다.
제조예 3
실시예 6의 핵산 분자로서, 하기의 가닥 핵산 분자를 포스포라미디트법에 기초하여 핵산 합성기 (상품명: ABI Expedite (등록상표) 8909 핵산 합성 시스템, Applied Biosystems)로 합성하였다. 상기 합성을 위하여, RNA 포스포라미디트 (2'-O-TBDMSi, 상품명, Samchully Pharm. Co., Ltd.)를 RNA 아미디트로 사용하였다. 상기 아미디트를 종래의 방법으로 탈보호하고, 합성된 RNA를 HPLC로 정제하였다. 정제 후 각 RNA는 동결건조하였다.
실시예 6의 단일 가닥 핵산 분자 및 이중 가닥 핵산 분자 (siRNA)를 상기와 같이 합성하였다. NK-7006 및 NK-7007에서, 괄호 안에 기재된 부분은 링커 영역이다. NK-7006, NK-7007, PK-7006, PK-7015, PH-7069, 및 PH-7081에서 밑줄 부분은 각 타겟 유전자의 발현 억제 서열을 나타내며, Lx는 링커 영역 Lx이다. 하기 구조식을 가지는 링커 영역 Lx는 L-프롤린 디아미드 아미디트를 사용하여 구성하였다.
NkRNA (NK-7006) (타겟 유전자: 루시퍼라제)
5'-ACCUACGCCGAGUACUUCGAUUCC(CCACACC)GGAAUCGAAGUACUCGGCGUAGGUUC(UUCG)G-3' (서열번호 8)
NkRNA (NK-7007) (타겟 유전자: 마우스 GAPDH)
5'-ACCACGAGAAAUAUGACAACUCCC(CCACACC)GGGAGUUGUCAUAUUUCUCGUGGUUC(UUCG)G-3' (서열번호 9)
PnkRNA (PK-7006) (타겟 유전자: 마우스 TGF-β1)
5'-GGAACUCUACCAGAAAUAUAGCCC-Lx-GGGCUAUAUUUCUGGUAGAGUUCCAC-Lx-G-3' (서열번호 10)
PnkRNA (PK-7015) (타겟 유전자: 마우스 CCR3)
5'-AGCCUUGUACAGCGAGAUCUUUCC-Lx-GGAAAGAUCUCGCUGUACAAGGCUUC-Lx-G-3' (서열번호 11)
PshRNA (PH-7069) (타겟 유전자: 마우스 Smad3)
5'-GGUGCUCCAUCUCCUACUACGACC-Lx-GGUCGUAGUAGGAGAUGGAGCACCA-3'
(서열번호 12)
안티센스 핵산 (Kynamro-7001) (ApoB100 mRNA에 대한 안티센스 DNA)
5'-GCCUCagtctgcttcGCACC-3' (서열번호 1)
(소문자는 DNA를 나타냄)
PshRNA (PH-7081) (타겟 유전자: 반딧불 루시퍼라제)
5'-CUUACGCUGAGUACUUCGAAACC-Lx-GGUUUCGAAGUACUCAGCGUAAGUG-3' (서열번호 13)
siRNA (NI-7001) (마우스 CTGF)
5'-GUGUGACCAAAAGUUACAUGU-3' (서열번호 14)
5'-AUGUAACUUUUGGUCACACUC-3' (서열번호 15)
miRNA (NM-7001) (인간 let7a-1 전구체)
5'- UGGGAUGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUUAGGGUCACACCCACCACUGGGAGAUAACUAUACAAUCUACUGUCUUUCCUA-3' (서열번호 2)
앱타머 (Macugen-7001) (VEGF 단백질에 대한 앱타머)
5'-CGGAAUCAGUGAAUGCUUAUACAUCCGt-3' (서열번호 3)
(t 는 3'3'-dT 이다)
실시예 6 (포스페이트 버퍼에 의한 다양한 핵산의 안정성 평가)
실시예 6-1 (시험 조성물의 제조)
시험 조성물 37 내지 56을 하기와 같이 제조하였다.
소듐 디히드로겐 포스페이트 이수화물 (13.006 g)과 디소듐 히드로겐 포스페이트 십이수화물 (6.017 g)을 혼합하고 이를 1L로 희석시켜 0.1 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)를 제조하였다.
핵산 (0.1 g)을 주사용수에 용해시켰다 (500 mL). 이에 0.1 M 포스페이트 버퍼(pH 6.5) (500 mL)를 가하고, 상기 혼합물을 저은 후 0.22 μm 폴리비닐리덴 디플루오라이드 (PVDF) 필터에 통과시켜 0.1 g/L (0.1 mg/mL)의 핵산을 포함하는 조성물을 제조하였다.
시험 조성물 37: NK-7006 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 38: NK-7006 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 39: NK-7007 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 40: NK-7007 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 41: PK-7006 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 42: PK-7006 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 43: PK-7015 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 44: PK-7015 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 45: PH-7069 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 46: PH-7069 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 47: Kynamro-7001 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 48: Kynamro-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 49: PH-7081 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 50: PH-7081 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 51: NI-7001 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 52: NI-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 53: NM-7001 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 54: NM-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
시험 조성물 55: Macugen-7001 제형 44 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.5)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 56: Macugen-7001 주사용수, (0.1 mg/mL)
실시예 6-2 (시험 방법 및 진단 기준)
시험 조성물 37 내지 56을 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 보관된 각 물질을 매주 꺼내어 역상 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다. 보관 시기 및 보관된 물질들의 수는 표에 나타내었다.
1주, 2주, 3주, 및 4주 동안 60℃에서 보관된 상기 시험 조성물 37 내지 56을 각각 보관 시료로 사용하였다.
별개로, 4℃에서 보관한 시험 조성물 17 내지 36의 산물을 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 90 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (10 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (90%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 80 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (20 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (80%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 70 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (30 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (70%)로 사용하였다. 각 검정 곡선 시료 (100%)를 60 μL 취한 후, 100 μL이 되도록 주사용수 (40 μL)를 첨가하여 이를 검정 곡선 시료 (60%)로 사용하였다.
각 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 10 μL)를 HPLC로 측정하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)에 의해 얻은 피크 면적에 있어서, 회귀곡선 (Y=aX+b) 및 그의 상관계수 (r)는 가로축 (X) 상의 이론적 함량 (%) 및 세로축 (Y) 상의 피크 면적을 이용한 최소 제곱법에 의하여 결정하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 각 시료의 함량 (%)을 계산하였다(excel 2013).
보관 시기 및 보관된 물질들의 수
보관 시료 4℃ 60℃
시작 시 1 내지 4 주
시험 물질 번호 이름 1 4
37 NK-7006 제형 44 1 4
38 NK-7006 주사용수 1 4
39 NK-7007 제형 44 1 4
40 NK-7007 주사용수 1 4
41 PK-7006 제형 44 1 4
42 PK-7006 주사용수 1 4
43 PK-7015 제형 44 1 4
44 PK-7015 주사용수 1 4
45 PH-7069 제형 44 1 4
46 PH-7069 주사용수 1 4
47 Kynamro-7001 제형 44 1 4
48 Kynamro-7001 주사용수 1 4
49 PH-7081 제형 44 1 4
50 PH-7081 주사용수 1 4
51 NI-7001 제형 44 1 4
52 NI-7001 주사용수 1 4
53 NM-0001 제형 44 1 4
54 NM-0001 주사용수 1 4
55 Macugen-7001 제형 44 1 4
56 Macugen-7001 주사용수 1 4
측정 방법
검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 시료를 하기 측정 조건 하에서 측정하였다.
검출기: UV 흡광계 (측정 파장: 254 nm)
컬럼: X-Bridge OST C18 (2.5 μm, 4.6×50 mm)
컬럼 온도: 40℃
이동상 A: 50 mM TEAA (pH 7.0), 0.5% 아세토니트릴
이동상 B: 100% 아세토니트릴
이동상 주입: 이동상 A와 이동상 B의 혼합비를 하기와 같이 변화시킴으로써 농도 구배를 조절하였다.
주입 후 시간 (min) 이동상 A (부피%) 이동상 B (부피%)
0→12 100→60 0→40
유속: 1.0 mL/min
제조예 4
실시예 7의 핵산 분자로서, PK-7006, NK-7006, PH-7069, NI-7001, NM-7001, Kynamro-7001 및 Macugen-7001를 제조예 2와 유사한 방법으로 합성하였다.
실시예 7 (시트레이트 버퍼 및/또는 포스페이트 버퍼에 의한 다양한 핵산의 안정성 평가)
실시예 7-1 (시험 조성물의 제조)
시험 조성물 57 내지 74, 105 내지 122, 및 153 내지 170을 하기와 같이 제조하였다.
0.1 M 시트르산 수용액 및 0.1 M 트리소듐 시트레이트 이수화물 용액을 혼합하고 pH 4.0 내지 8.0로 조정하여 각 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼를 제조하였다.
주사용수로 제조한 25 mg/mL 시험 조성물 (0.02 mL), 주사용수 (2.48 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 201 내지 218을 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 시트레이트 버퍼를 제조하였다. 주사용수로 제조한 10 mg/mL 시험 조성물 (0.05 mL), 주사용수 (2.45 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 249 내지 266, 297 내지 314, 및 345 내지 362를 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 시트레이트 버퍼를 제조하였다. 주사용수로 제조한 20 mg/mL 시험 조성물 (0.025 mL), 주사용수 (2.475 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 75 내지 95, 123 내지 143, 및 171 내지 191을 하기와 같이 제조하였다.
0.1 M 소듐 디히드로겐 포스페이트 수용액 및 0.1 M 디소듐 히드로겐 포스페이트 용액을 혼합하고 pH 4.0 내지 8.0으로 조정하여 각 pH의 0.1 M 포스페이트 버퍼를 제조하였다.
주사용수로 제조한 25 mg/mL 시험 조성물 (0.02 mL), 주사용수 (2.48 mL), 및 각 pH의 0.1 M 포스페이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 219 내지 239를 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 포스페이트 버퍼를 제조하였다. 주사용수로 제조한 10 mg/mL 시험 조성물 (0.05 mL), 주사용수 (2.45 mL), 및 각 pH의 0.1 M 포스페이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 267 내지 287, 315 내지 335, 및 363 내지 383을 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 포스페이트 버퍼를 제조하였다. 주사용수로 제조한 20 mg/mL 시험 조성물 (0.025 mL), 주사용수 (2.475 mL), 및 각 pH의 0.1 M 포스페이트 버퍼 (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 96 내지 104, 144 내지 152, 및 192 내지 200을 하기와 같이 제조하였다.
0.1 M 소듐 시트레이트 수용액 및 0.1 M 시트르산 수용액을 혼합하고 pH 4.2 내지 7.6으로 조정하여 각 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼를 제조하였다. 유사하게, 0.1 M 소듐 디히드로겐 포스페이트 수용액 및 0.1 M 디소듐 히드로겐 포스페이트 용액을 혼합하고 pH 4.2 내지 7.6으로 조정하여 각 pH의 0.1 M 포스페이트 버퍼를 제조하였다. 동일한 pH의 0.1 M 시트레이트 버퍼 및 0.1 M 포스페이트 버퍼를 5:5 (3 mL:3 mL)로 혼합하여 각 pH의 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5)를 제조하였다.
주사용수로 제조한 25 mg/mL 시험 조성물 (0.02 mL), 주사용수 (2.48 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5) (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 240 내지 248을 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5)를 제조하였다. 주사용수로 제조한 10 mg/mL 시험 조성물 (0.05 mL), 주사용수 (2.45 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5) (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
시험 조성물 288 내지 296, 336 내지 344, 및 384 내지 392를 하기와 같이 제조하였다.
상기와 유사한 방법으로, 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5)를 제조하였다. 주사용수로 제조한 20 mg/mL 시험 조성물 (0.025 mL), 주사용수 (2.475 mL), 및 각 pH의 0.1 M 시트레이트-포스페이트 버퍼 (5:5) (2.50 mL)를 혼합하여 각 0.1 mg/mL의 시험 조성물을 5 mL씩 제조하였다.
핵산 분자: PK-7006
시험 조성물 57: PK-7006 제형 199 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 58: PK-7006 제형 200 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 59: PK-7006 제형 201 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 60: PK-7006 제형 202 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 61: PK-7006 제형 203 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 62: PK-7006 제형 204 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 63: PK-7006 제형 205 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 64: PK-7006 제형 206 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 65: PK-7006 제형 207 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 66: PK-7006 제형 208 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 67: PK-7006 제형 209 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 68: PK-7006 제형 210 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 69: PK-7006 제형 211 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 70: PK-7006 제형 212 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 71: PK-7006 제형 213 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 72: PK-7006 제형 214 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 73: PK-7006 제형 215 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 74: PK-7006 제형 216 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 75: PK-7006 제형 217 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 76: PK-7006 제형 218 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 77: PK-7006 제형 219 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 78: PK-7006 제형 220 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 79: PK-7006 제형 221 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 80: PK-7006 제형 222 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 81: PK-7006 제형 223 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 82: PK-7006 제형 224 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 83: PK-7006 제형 225 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 84: PK-7006 제형 226 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 85: PK-7006 제형 227 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 86: PK-7006 제형 228 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 87: PK-7006 제형 229 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 88: PK-7006 제형 230 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 89: PK-7006 제형 231 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 90: PK-7006 제형 232 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 91: PK-7006 제형 233 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 92: PK-7006 제형 234 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 93: PK-7006 제형 235 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 94: PK-7006 제형 236 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 95: PK-7006 제형 237 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 96: PK-7006 제형 238 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 97: PK-7006 제형 239 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 98: PK-7006 제형 240 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 99: PK-7006 제형 241 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 100: PK-7006 제형 242 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 101: PK-7006 제형 243 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 102: PK-7006 제형 244 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 103: PK-7006 제형 245 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 104: PK-7006 제형 246 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: NK-7006
시험 조성물 105: NK-7006 제형 247 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 106: NK-7006 제형 248 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 107: NK-7006 제형 249 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 108: NK-7006 제형 250 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 109: NK-7006 제형 251 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 110: NK-7006 제형 252 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 111: NK-7006 제형 253 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 112: NK-7006 제형 254 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 113: NK-7006 제형 255 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 114: NK-7006 제형 256 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 115: NK-7006 제형 257 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 116: NK-7006 제형 258 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 117: NK-7006 제형 259 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 118: NK-7006 제형 260 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 119: NK-7006 제형 261 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 120: NK-7006 제형 262 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 121: NK-7006 제형 263 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 122: NK-7006 제형 264 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 123: NK-7006 제형 265 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 124: NK-7006 제형 266 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 125: NK-7006 제형 267 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 126: NK-7006 제형 268 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 127: NK-7006 제형 269 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 128: NK-7006 제형 270 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 129: NK-7006 제형 271 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 130: NK-7006 제형 272 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 131: NK-7006 제형 273 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 132: NK-7006 제형 274 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 133: NK-7006 제형 275 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 134: NK-7006 제형 276 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 135: NK-7006 제형 277 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 136: NK-7006 제형 278 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 137: NK-7006 제형 279 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 138: NK-7006 제형 280 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 139: NK-7006 제형 281 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 140: NK-7006 제형 282 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 141: NK-7006 제형 283 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 142: NK-7006 제형 284 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 143: NK-7006 제형 285 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 144: NK-7006 제형 286 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 145: NK-7006 제형 287 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 146: NK-7006 제형 288 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 147: NK-7006 제형 289 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 148: NK-7006 제형 290 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 149: NK-7006 제형 291 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 150: NK-7006 제형 292 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 151: NK-7006 제형 293 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 152: NK-7006 제형 294 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: PH-7069
시험 조성물 153: PH-7069 제형 295 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 154: PH-7069 제형 296 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 155: PH-7069 제형 297 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 156: PH-7069 제형 298 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 157: PH-7069 제형 299 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 158: PH-7069 제형 300 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 159: PH-7069 제형 301 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 160: PH-7069 제형 302 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 161: PH-7069 제형 303 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 162: PH-7069 제형 304 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 163: PH-7069 제형 305 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 164: PH-7069 제형 306 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 165: PH-7069 제형 307 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 166: PH-7069 제형 308 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 167: PH-7069 제형 309 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 168: PH-7069 제형 310 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 169: PH-7069 제형 311 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 170: PH-7069 제형 312 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 171: PH-7069 제형 313 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 172: PH-7069 제형 314 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 173: PH-7069 제형 315 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 174: PH-7069 제형 316 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 175: PH-7069 제형 317 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 176: PH-7069 제형 318 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 177: PH-7069 제형 319 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 178: PH-7069 제형 320 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 179: PH-7069 제형 321 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 180: PH-7069 제형 322 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 181: PH-7069 제형 323 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 182: PH-7069 제형 324 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 183: PH-7069 제형 325 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 184: PH-7069 제형 326 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 185: PH-7069 제형 327 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 186: PH-7069 제형 328 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 187: PH-7069 제형 329 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 188: PH-7069 제형 330 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 189: PH-7069 제형 331 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 190: PH-7069 제형 332 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 191: PH-7069 제형 333 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 192: PH-7069 제형 334 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 193: PH-7069 제형 335 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 194: PH-7069 제형 336 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 195: PH-7069 제형 337 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 196: PH-7069 제형 338 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 197: PH-7069 제형 339 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 198: PH-7069 제형 340 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 199: PH-7069 제형 341 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 200: PH-7069 제형 342 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: NI-7001
시험 조성물 201: NI-7001 제형 343 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 202: NI-7001 제형 344 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 203: NI-7001 제형 345 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 204: NI-7001 제형 346 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 205: NI-7001 제형 347 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 206: NI-7001 제형 348 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 207: NI-7001 제형 349 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 208: NI-7001 제형 350 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 209: NI-7001 제형 351 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 210: NI-7001 제형 352 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 211: NI-7001 제형 353 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 212: NI-7001 제형 354 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 213: NI-7001 제형 355 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 214: NI-7001 제형 356 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 215: NI-7001 제형 357 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 216: NI-7001 제형 358 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 217: NI-7001 제형 359 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 218: NI-7001 제형 360 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 219: NI-7001 제형 361 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 220: NI-7001 제형 362 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 221: NI-7001 제형 363 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 222: NI-7001 제형 364 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 223: NI-7001 제형 365 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 224: NI-7001 제형 366 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 225: NI-7001 제형 367 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 226: NI-7001 제형 368 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 227: NI-7001 제형 369 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 228: NI-7001 제형 370 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 229: NI-7001 제형 371 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 230: NI-7001 제형 372 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 231: NI-7001 제형 373 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 232: NI-7001 제형 374 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 233: NI-7001 제형 375 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 234: NI-7001 제형 376 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 235: NI-7001 제형 377 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 236: NI-7001 제형 378 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 237: NI-7001 제형 379 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 238: NI-7001 제형 380 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 239: NI-7001 제형 381 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 240: NI-7001 제형 382 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 241: NI-7001 제형 383 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 242: NI-7001 제형 384 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 243: NI-7001 제형 385 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 244: NI-7001 제형 386 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 245: NI-7001 제형 387 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 246: NI-7001 제형 388 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 247: NI-7001 제형 389 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 248: NI-7001 제형 390 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: NM-7001
시험 조성물 249: NM-7001 제형 391 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 250: NM-7001 제형 392 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 251: NM-7001 제형 393 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 252: NM-7001 제형 394 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 253: NM-7001 제형 395 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 254: NM-7001 제형 396 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 255: NM-7001 제형 397 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 256: NM-7001 제형 398 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 257: NM-7001 제형 399 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 258: NM-7001 제형 400 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 259: NM-7001 제형 401 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 260: NM-7001 제형 402 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 261: NM-7001 제형 403 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 262: NM-7001 제형 404 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 263: NM-7001 제형 405 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 264: NM-7001 제형 406 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 265: NM-7001 제형 407 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 266: NM-7001 제형 408 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 267: NM-7001 제형 409 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 268: NM-7001 제형 410 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 269: NM-7001 제형 411 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 270: NM-7001 제형 412 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 271: NM-7001 제형 413 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 272: NM-7001 제형 414 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 273: NM-7001 제형 415 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 274: NM-7001 제형 416 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 275: NM-7001 제형 417 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 276: NM-7001 제형 418 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 277: NM-7001 제형 419 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 278: NM-7001 제형 420 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 279: NM-7001 제형 421 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 280: NM-7001 제형 422 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 281: NM-7001 제형 423 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 282: NM-7001 제형 424 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 283: NM-7001 제형 425 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 284: NM-7001 제형 426 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 285: NM-7001 제형 427 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 286: NM-7001 제형 428 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 287: NM-7001 제형 429 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 288: NM-7001 제형 430 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 289: NM-7001 제형 431 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 290: NM-7001 제형 432 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 291: NM-7001 제형 433 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 292: NM-7001 제형 434 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 293: NM-7001 제형 435 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 294: NM-7001 제형 436 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 295: NM-7001 제형 437 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 296: NM-7001 제형 438 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: Kynamro-7001
시험 조성물 297: Kynamro-7001 제형 439 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 298: Kynamro-7001 제형 440 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 299: Kynamro-7001 제형 441 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 300: Kynamro-7001 제형 442 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 301: Kynamro-7001 제형 443 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 302: Kynamro-7001 제형 444 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 303: Kynamro-7001 제형 445 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 304: Kynamro-7001 제형 446 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 305: Kynamro-7001 제형 447 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 306: Kynamro-7001 제형 448 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 307: Kynamro-7001 제형 449 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 308: Kynamro-7001 제형 450 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 309: Kynamro-7001 제형 451 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 310: Kynamro-7001 제형 452 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 311: Kynamro-7001 제형 453 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 312: Kynamro-7001 제형 454 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 313: Kynamro-7001 제형 455 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 314: Kynamro-7001 제형 456 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 315: Kynamro-7001 제형 457 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 316: Kynamro-7001 제형 458 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 317: Kynamro-7001 제형 459 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 318: Kynamro-7001 제형 460 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 319: Kynamro-7001 제형 461 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 320: Kynamro-7001 제형 462 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 321: Kynamro-7001 제형 463 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 322: Kynamro-7001 제형 464 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 323: Kynamro-7001 제형 465 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 324: Kynamro-7001 제형 466 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 325: Kynamro-7001 제형 467 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 326: Kynamro-7001 제형 468 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 327: Kynamro-7001 제형 469 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 328: Kynamro-7001 제형 470 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 329: Kynamro-7001 제형 471 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 330: Kynamro-7001 제형 472 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 331: Kynamro-7001 제형 473 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 332: Kynamro-7001 제형 474 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 333: Kynamro- 7001 제형 475 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 334: Kynamro-7001 제형 476 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 335: Kynamro-7001 제형 477 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 336: Kynamro-7001 제형 478 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 337: Kynamro-7001 제형 479 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 338: Kynamro-7001 제형 480 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 339: Kynamro-7001 제형 481 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 340: Kynamro-7001 제형 482 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 341: Kynamro-7001 제형 483 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 342: Kynamro-7001 제형 484 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 343: Kynamro-7001 제형 485 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 344: Kynamro-7001 제형 486 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
핵산 분자: Macugen-700
시험 조성물 345: Macugen-7001 제형 487 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 346: Macugen-7001 제형 488 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 347: Macugen-7001 제형 489 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 348: Macugen-7001 제형 490 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 349: Macugen-7001 제형 491 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 350: Macugen-7001 제형 492 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 351: Macugen-7001 제형 493 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 352: Macugen-7001 제형 494 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 353: Macugen-7001 제형 495 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 354: Macugen-7001 제형 496 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 355: Macugen-7001 제형 497 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 356: Macugen-7001 제형 498 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 357: Macugen-7001 제형 499 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 358: Macugen-7001 제형 500 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 359: Macugen-7001 제형 501 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 360: Macugen-7001 제형 502 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 361: Macugen-7001 제형 503 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 362: Macugen-7001 제형 504 (0.05 M 시트레이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 363: Macugen-7001 제형 505 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 364: Macugen-7001 제형 506 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 365: Macugen-7001 제형 507 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 366: Macugen-7001 제형 508 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 367: Macugen-7001 제형 509 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 4.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 368: Macugen-7001 제형 510 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 369: Macugen-7001 제형 511 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 370: Macugen-7001 제형 512 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 371: Macugen-7001 제형 513 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 372: Macugen-7001 제형 514 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 5.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 373: Macugen-7001 제형 515 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 374: Macugen-7001 제형 516 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 375: Macugen-7001 제형 517 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 376: Macugen-7001 제형 518 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 377: Macugen-7001 제형 519 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 6.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 378: Macugen-7001 제형 520 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 379: Macugen-7001 제형 521 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 380: Macugen-7001 제형 522 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 381: Macugen-7001 제형 523 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 382: Macugen-7001 제형 524 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 7.8)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 383: Macugen-7001 제형 525 (0.05 M 포스페이트 버퍼 (pH 8.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 384: Macugen-7001 제형 526 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.2)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 385: Macugen-7001 제형 527 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 386: Macugen-7001 제형 528 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 4.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 387: Macugen-7001 제형 529 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 5.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 388: Macugen-7001 제형 530 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 389: Macugen-7001 제형 531 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 6.6)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 390: Macugen-7001 제형 532 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.0)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 391: Macugen-7001 제형 533 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.4)), (0.1 mg/mL)
시험 조성물 392: Macugen-7001 제형 534 (0.05 M 시트레이트-포스페이트 (5:5) 버퍼 (pH 7.6)), (0.1 mg/mL)
실시예 7-2 (시험 방법 및 진단 기준)
각 시험 조성물 57 내지 392의 하나씩을 4℃에 보관하고, 그의 4개씩을 60℃의 안정성 시험 챔버에서 보관하였다. 4℃에 보관된 각 물질을 시작 시에 꺼내고, 60℃에 보관된 각 물질을 매주 꺼내어, 역상 이온 교환 HPLC로 함량을 계산하였고, 보관 시작 시의 함량 대비 함량비 (%)의 감소치에 기초하여 그 안정성을 평가하였다.
시작 시의 각 시험 조성물을 검정 곡선 시료 (100%)로 사용하고, 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%)를 실시예 1 및 2와 유사한 방법으로 제조하였다. 검정 곡선 시료 (60% 내지 100%) 및 각 보관 시료 (각 30 μL)를 실시예 1 및 2와 유사한 방법에 따라 HPLC로 측정하였다.
실시예 7-3 (결과)
그 결과를 도 17 내지 23에 나타내었다. 본 결과는 60℃, 4주에서도 PK-7006, NK-7006 및 PH-7069가 높은 보관 안정성을 가짐을 보여주는 것이다.
본 발명에 따르면, 핵산 분자의 안정성이 개선된 신규한 액상 핵산 포함 조성물, 특히 약학 조성물을 제공할 수 있다. 따라서, 주위 온도에서의 보관, 수송 등이 가능해지며, 뛰어난 조작능을 가지는 핵산 포함 조성물을 제공할 수 있으므로 상기 조성물은 매우 유용하다.
본 출원은 일본에 출원된 특허출원번호 2014-267087 (출원일자: 2014년 12월 29일) 및 2015-081298 (출원일자: 2015년 4월 10일)에 기초한 것으로, 여기서 언급함으로써 그 내용은 모두 본 명세서에 포함된다.
<110> BONAC CORPORATION <120> Composition containing nucleic acid molecule stably <130> IPA170646-JP-D1 <150> JP 2014-267087 <151> 2014-12-29 <150> JP 2015-081298 <151> 2015-04-10 <160> 15 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense, Nucleotide at positions 1-5 and 16-20 are RNA. <400> 1 gccucagtct gcttcgcacc 20 <210> 2 <211> 80 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miRNA <400> 2 ugggaugagg uaguagguug uauaguuuua gggucacacc caccacuggg agauaacuau 60 acaaucuacu gucuuuccua 80 <210> 3 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> aptamer, T in position 28 is a 3'-3'-linked deoxythymidine. <400> 3 cggaaucagu gaaugcuuau acauccgt 28 <210> 4 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> expression controling region <400> 4 uaugcugugu guacucug 18 <210> 5 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> expression controling region <400> 5 ucgaaguacu cggcguagg 19 <210> 6 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> expression controling region <400> 6 guugucauau uucucgugg 19 <210> 7 <211> 48 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 7 gcagaguaca cacagcauau accgguauau gcugugugua cucugcuu 48 <210> 8 <211> 62 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 8 accuacgccg aguacuucga uuccccacac cggaaucgaa guacucggcg uagguucuuc 60 gg 62 <210> 9 <211> 62 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 9 accacgagaa auaugacaac ucccccacac cgggaguugu cauauuucuc gugguucuuc 60 gg 62 <210> 10 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 10 ggaacucuac cagaaauaua gcccgggcua uauuucuggu agaguuccac g 51 <210> 11 <211> 51 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 11 agccuuguac agcgagaucu uuccggaaag aucucgcugu acaaggcuuc g 51 <210> 12 <211> 49 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 12 ggugcuccau cuccuacuac gaccggucgu aguaggagau ggagcacca 49 <210> 13 <211> 48 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleic acid molecule <400> 13 cuuacgcuga guacuucgaa accgguuucg aaguacucag cguaagug 48 <210> 14 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 14 gugugaccaa aaguuacaug u 21 <210> 15 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 15 auguaacuuu uggucacacu c 21

Claims (6)

  1. 핵산 분자 및 버퍼를 포함하며, 하기 특성들을 갖는 조성물:
    (a) 15 내지 30℃의 온도에서 용액의 형태를 나타내고;
    (b) 60℃에서 4주간 보관 후 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 60% 이상이고;
    상기 버퍼는 인산, 또는 인산과 시트르산의 혼합물을 포함하고,
    상기 버퍼는 조성물의 pH를 5.8 이상 6.8 이하로 조정하고,
    상기 핵산 분자의 농도는 0.1 내지 10 mg/mL이고,
    상기 핵산 분자의 뉴클레오티드 수는 20 내지 150이고,
    상기 핵산 분자는,
    (1) 영역 (X), 링커 영역 (Lx), 및 영역 (Xc)를 갖고,
    여기서 상기 링커 영역 (Lx)는 상기 영역 (X)와 영역 (Xc)를 연결하고, 상기 영역 (Xc)는 상기 영역 (X)에 상보적이며,
    상기 영역 (X) 및 상기 영역 (Xc) 중 적어도 하나는 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열을 포함하고,
    상기 링커 영역 (Lx)는 아미노산 잔기; 폴리아민 잔기; 폴리카복실산 잔기; 또는 피롤리딘 골격 및 피페리딘 골격 중 적어도 하나를 포함하는 비-뉴클레오티드 구조;를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자, 또는
    (2) 5' 측에서 3' 측의 순서로, 5' 측 영역 (Xc), 링커 영역 (Lx), 내부 영역 (Z), 링커 영역 (Ly) 및 3' 측 영역 (Yc)을 포함하고,
    여기서 상기 내부 영역 (Z)는 내부 5' 측 영역 (X) 및 내부 3' 측 영역 (Y)의 연결에 의하여 구성되고, 상기 5' 측 영역 (Xc)는 상기 내부 5' 측 영역 (X)에 상보적이고, 상기 3' 측 영역 (Yc)는 상기 내부 3' 측 영역 (Y)에 상보적이며,
    상기 내부 영역 (Z), 상기 5' 측 영역 (Xc) 및 상기 3' 측 영역 (Yc) 중 적어도 하나는 타겟 유전자의 발현을 조절하는 서열을 포함하고,
    상기 링커 영역 (Lx) 및 상기 링커 영역 (Ly) 각각은 뉴클레오티드 잔기; 아미노산 잔기; 폴리아민 잔기; 폴리카복실산 잔기; 또는 피롤리딘 골격 또는 피페리딘 골격을 포함하는 비-뉴클레오티드 구조;를 포함하는 단일 가닥 핵산 분자임.
  2. 제1항에 있어서, 40℃, 상대습도 75%에서 4주간 보관 후 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상인 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 25℃, 상대습도 60%에서 4주간 보관 후의 핵산 분자의 함량이, 보관 시작 시의 함량 대비 80% 이상인 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 버퍼는 소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 디히드로겐 포스페이트, 디소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 아르기닌 히드로클로라이드, 소듐 시트레이트, 트리소듐 시트레이트 이수화물, 모노소듐 L-글루타메이트, 소듐 아세테이트, 소듐 카보네이트, 소듐 히드로겐 카보네이트, 소듐 락테이트, 모노포타슘 포스페이트, 소듐 히드록시드, 메글루민, 글리신, 시트르산, 및 아세트산에서 선택되는 하나 이상의 완충제를 포함하는 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 핵산 분자는 DNA 분자, RNA 분자, 또는 DNA 및 RNA의 키메릭 핵산 분자인 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 핵산 분자는 안티센스 핵산, siRNA 또는 shRNA, miRNA, 리보자임, 디코이 핵산 또는 앱타머인 조성물.
KR1020227003919A 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물 KR20220035404A (ko)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2014-267087 2014-12-29
JP2014267087 2014-12-29
JPJP-P-2015-081298 2015-04-10
JP2015081298 2015-04-10
PCT/JP2015/080849 WO2016108264A1 (ja) 2014-12-29 2015-10-30 核酸分子を安定に含有する組成物
KR1020177020431A KR102585112B1 (ko) 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177020431A Division KR102585112B1 (ko) 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220035404A true KR20220035404A (ko) 2022-03-22

Family

ID=56284418

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227003919A KR20220035404A (ko) 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물
KR1020177020431A KR102585112B1 (ko) 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177020431A KR102585112B1 (ko) 2014-12-29 2015-10-30 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20180036409A1 (ko)
EP (1) EP3241903A4 (ko)
JP (2) JP6462723B2 (ko)
KR (2) KR20220035404A (ko)
CN (1) CN107208094A (ko)
AU (2) AU2015373071B2 (ko)
BR (1) BR112017014090A2 (ko)
CA (1) CA2971830A1 (ko)
HK (1) HK1244030A1 (ko)
IL (1) IL252905B (ko)
MX (1) MX2017008730A (ko)
RU (1) RU2723032C2 (ko)
SG (1) SG11201705312PA (ko)
WO (1) WO2016108264A1 (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2016346703B2 (en) 2015-10-30 2020-07-02 Hirofumi Takeuchi Composition stably containing single-stranded nucleic acid molecule that suppresses expression of TGF-β1 gene
FR3058061A1 (fr) * 2016-10-27 2018-05-04 Selexel Nouvelle utilisation d'oligonucleotides double brin
US20210292755A1 (en) * 2016-10-27 2021-09-23 Selexel Novel double-stranded oligonucleotides for the treatment of cancer
CN106857502A (zh) * 2017-03-03 2017-06-20 湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司 一种防止rna降解的样品保存液以及保存方法
US11326163B2 (en) 2017-07-28 2022-05-10 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for fibrosis
US20210188895A1 (en) 2017-10-13 2021-06-24 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule, and production method therefor
EP3765476A2 (en) * 2018-03-13 2021-01-20 Janssen Pharmaceutica NV Modified oligonucleotides for use in treatment of tauopathies
CN109402127B (zh) * 2018-09-29 2021-12-10 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院 一组与结缔组织生长因子特异性结合的高亲和力核酸适配体及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2708960B2 (ja) 1990-08-16 1998-02-04 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド サイトメガウイルス感染の作用を変調するオリゴヌクレオチド
JP3626503B2 (ja) 1996-10-25 2005-03-09 ギリード・サイエンシズ・インコーポレーテッド 血管内皮増殖因子（ｖｅｇｆ）核酸リガンド複合体
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58102724A (ja) 1981-12-15 1983-06-18 Mitsubishi Chem Ind Ltd 防滑性ポリプロピレン成形品
DE69732029T2 (de) * 1996-04-26 2006-02-23 Merck & Co., Inc. Dna enthaltende impfstoffen
ZA99493B (en) * 1998-01-30 1999-07-22 Akzo Nobel Nv Method for the isolation of nucleic acid.
CA2322232A1 (en) * 1998-03-13 1999-09-16 American Home Products Corporation Lyophilized polynucleotide composition, method of preparation, and uses thereof
DE19836559A1 (de) * 1998-08-12 2000-03-23 Antigen Gmbh Gefäß zur Entnahme von Blut
AU769771B2 (en) * 1999-12-02 2004-02-05 Hymo Corporation Polyacrylamide precast gels for electrophoresis, process for producing the same and electrophoresis method by using the gels
JP3967516B2 (ja) * 2000-02-29 2007-08-29 ハイモ株式会社 Ｄｎａの電気泳動法
DE10006662A1 (de) * 2000-02-15 2001-08-23 Antigen Produktions Gmbh Gefäß zur Nukleinsäureanalytik
US20040058886A1 (en) * 2002-08-08 2004-03-25 Dharmacon, Inc. Short interfering RNAs having a hairpin structure containing a non-nucleotide loop
BRPI0411505A (pt) * 2003-06-18 2006-07-25 Yissum Res Dev Co uso de um composto, método para modular a resposta imune de um indivìduo, composição farmacêutica, vacina, complexo, e, kit para a captura de uma molécula biologicamente ativa
EA009447B1 (ru) * 2003-09-17 2007-12-28 Сентельон Способ получения плазмидной днк фармацевтического качества
BRPI0515553A (pt) * 2004-09-17 2008-07-29 Centelion formulações lìquidas estáveis de dna de plasmìdeo
DE102005023170A1 (de) * 2005-05-19 2006-11-23 Curevac Gmbh Optimierte Formulierung für mRNA
TW201336514A (zh) * 2006-04-13 2013-09-16 Alcon Res Ltd ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）所媒介之與脾酪胺酸激酶相關之發炎症狀的抑制作用（二）
CA2709875C (en) * 2008-01-02 2019-07-16 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids
JP5608998B2 (ja) * 2009-03-31 2014-10-22 東洋紡株式会社 保存安定性に優れた核酸増幅検出試薬キット
US8691782B2 (en) * 2010-08-03 2014-04-08 Bonac Corporation Single-stranded nucleic acid molecule having nitrogen-containing alicyclic skeleton
DK3202760T3 (da) * 2011-01-11 2019-11-25 Alnylam Pharmaceuticals Inc Pegylerede lipider og deres anvendelse til lægemiddelfremføring
JP6133883B2 (ja) * 2011-11-04 2017-05-24 日東電工株式会社 薬物送達用の脂質ナノ粒子の生成方法
GEP201606581B (en) * 2012-03-15 2016-11-25 Acraf Glycogen-based cationic polymers
EP2846839B1 (en) * 2012-05-10 2019-02-20 Adynxx, Inc. Formulations for the delivery of active ingredients
WO2014134797A1 (zh) * 2013-03-06 2014-09-12 百奥迈科生物技术有限公司 脂质体制剂、制备方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2708960B2 (ja) 1990-08-16 1998-02-04 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド サイトメガウイルス感染の作用を変調するオリゴヌクレオチド
JP3626503B2 (ja) 1996-10-25 2005-03-09 ギリード・サイエンシズ・インコーポレーテッド 血管内皮増殖因子（ｖｅｇｆ）核酸リガンド複合体
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression

Also Published As

Publication number Publication date
IL252905B (en) 2020-09-30
JP2019077696A (ja) 2019-05-23
IL252905A0 (en) 2017-08-31
HK1244030A1 (zh) 2018-07-27
WO2016108264A1 (ja) 2016-07-07
JPWO2016108264A1 (ja) 2017-08-31
KR102585112B1 (ko) 2023-10-10
JP6462723B2 (ja) 2019-01-30
AU2022204391A1 (en) 2022-07-14
RU2017126568A3 (ko) 2019-05-20
AU2015373071B2 (en) 2022-03-31
KR20170094797A (ko) 2017-08-21
CN107208094A (zh) 2017-09-26
US20240016937A1 (en) 2024-01-18
RU2723032C2 (ru) 2020-06-08
JP6808710B2 (ja) 2021-01-06
US20180036409A1 (en) 2018-02-08
CA2971830A1 (en) 2016-07-07
EP3241903A4 (en) 2018-07-04
RU2017126568A (ru) 2019-01-31
BR112017014090A2 (pt) 2018-03-06
EP3241903A1 (en) 2017-11-08
AU2015373071A1 (en) 2017-07-13
SG11201705312PA (en) 2017-07-28
MX2017008730A (es) 2017-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102585112B1 (ko) 핵산 분자를 안정하게 포함하는 조성물
KR101894702B1 (ko) 함질소 지환식 골격을 갖는 일본쇄 핵산 분자
JP4968811B2 (ja) 遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子
US11027023B2 (en) Natural type miRNA for controlling gene expression, and use of same
US20200038427A1 (en) Cyclic nucleic acid molecule having gene expression control function
JP2013153736A (ja) ペプチド骨格を有する一本鎖核酸分子
JP7204649B2 (ja) 線維症治療剤

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X601 Decision of rejection after re-examination