RU2692645C2 - Микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, и способ получения L-триптофана с его использованием - Google Patents
Микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, и способ получения L-триптофана с его использованием Download PDFInfo
- Publication number
- RU2692645C2 RU2692645C2 RU2017141773A RU2017141773A RU2692645C2 RU 2692645 C2 RU2692645 C2 RU 2692645C2 RU 2017141773 A RU2017141773 A RU 2017141773A RU 2017141773 A RU2017141773 A RU 2017141773A RU 2692645 C2 RU2692645 C2 RU 2692645C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tryptophan
- gene
- producing
- microorganism
- activity
- Prior art date
Links
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 title claims abstract description 112
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 title claims abstract description 25
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 14
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims abstract description 79
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 44
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims abstract description 16
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 54
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 29
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 29
- 101150042919 yigL gene Proteins 0.000 description 25
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 12
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 12
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 8
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 5
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 4
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 4
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 101150023849 pheA gene Proteins 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010075344 Tryptophan synthase Proteins 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 101150012186 mtr gene Proteins 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 101150006320 trpR gene Proteins 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100030289 Chronophin Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- -1 phosphohydroxy Chemical group 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710200500 Chronophin Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010015724 Prephenate Dehydratase Proteins 0.000 description 1
- 241000588768 Providencia Species 0.000 description 1
- 101710151412 Pyridoxal phosphate phosphatase YigL Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 1
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102100040653 Tryptophan 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 101710136122 Tryptophan 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008713 feedback mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014786 phosphorus Nutrition 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 108010081045 pyridoxine phosphate phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 101150003830 serC gene Proteins 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000006491 synthase reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 101150099895 tnaA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150037435 tnaB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/227—Tryptophan
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03074—Pyridoxal phosphatase (3.1.3.74)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен модифицированный микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, где активность фосфатазы, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, инактивирована. Предложен способ получения L-триптофана с использованием указанного модифицированного микроорганизма. Группа изобретений позволяет повысить продуктивность L-триптофана в модифицированном микроорганизме по сравнению с родительским немодифицированным микроорганизмом. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к модифицированному микроорганизму рода Escherichia, продуцирующему L-триптофан, где активность фосфатазы инактивирована, и к способу получения L-триптофана с использованием микроорганизма рода Escherichia.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
L-триптофан, являющийся незаменимой аминокислотой, широко применяется в качестве кормовой добавки, основного вещества для лекарственных средств, таких как трансфузионные агенты и так далее, и в качестве основного вещества для функциональных пищевых продуктов для оздоровления (health functional foods) и так далее. Несмотря на то, что L-триптофан может быть получен химическим синтезом, ферментативной реакцией, ферментационными способами и так далее, в настоящее время L-триптофан получают преимущественно прямой ферментацией с использованием микроорганизмов. На ранних стадиях разработку штаммов, продуцирующих L-триптофан, проводили посредством мутационной селекции (публикация заявки на патент Кореи №1987-0001813). По мере развития генной инженерии разработку штаммов, продуцирующих триптофан, начали проводить способом, позволяющим преодолеть ингибирование ферментов биосинтетических путей триптофаном по механизму обратной связи посредством усиления ферментативного синтеза в метаболических процессах, как при усилении экспрессии ферментов биосинтеза триптофана. Тем не менее, все еще существует потребность в разработке штаммов, продуцирующих триптофан, которые обеспечивают высокоэффективное получение триптофана для использования в промышленности.
В частности, известно, что триптофансинтаза (ЕС 4.2.1.20), принимающая участие в последних реакционных стадиях при биосинтезе триптофана микроорганизмами, использует пиридоксальфосфат (PLP) в качестве кофермента. Кроме того, в случае серина, используемого в качестве субстрата триптофансинтазной реакции, фосфогидрокситреонинаминотрансфераза (ЕС 2.6.1.52), кодируемая геном serC, использует PLP в качестве кофермента, и поэтому PLP считают важным коферментом для биосинтеза триптофана.
Таким образом, ожидают, что поддержание подходящей концентрации PLP будет играть важную роль в эффективных реакциях для соответствующих ферментов и биосинтетических реакциях для получения требуемых продуктов. Тем не менее, коферменты участвуют в различных реакциях помимо синтеза триптофана, и по этой причине способ надлежащего поддержания уровня PLP пока не открыт.Кроме того, до сих пор не выяснено, может ли поддержание уровня PLP у микроорганизмов, продуцирующих триптофан, приводить к повышению продуктивности L-триптофана.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Техническая проблема
Авторы настоящего изобретения приложили значительные усилия для разработки высокоэффективного способа получения L-триптофана. Они инактивировали активность белка, представленного аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, кодируемого геном yigL, функция которого на данный момент неясна, для повышения продуктивности триптофана посредством ингибирования распада PLP, являющегося коферментом, и поддержания надлежащей внутриклеточной концентрации PLP. В результате они подтвердили, что продуктивность L-триптофана была улучшена, тем самым завершив настоящее изобретение.
Техническое решение
Задачей настоящего изобретения является обеспечение микроорганизма рода Escherichia, продуцирующего L-триптофан.
Другой задачей настоящего изобретения является обеспечение способа получения L-триптофана с использованием микроорганизмов, продуцирующих L-триптофан.
Полезные эффекты
Согласно настоящему изобретению предложен модифицированный микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, где активность фосфатазы, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, инактивирована. Настоящее изобретение демонстрирует эффекты эффективного и экономичного получения L-триптофана, приводящие к более высокому выходу, с использованием микроорганизмов рода Escherichia. L-триптофан, полученный, как описано выше, может быть использован не только в кормах для животных или кормовых добавках, но также в различных продуктах, таких как продукты питания или пищевые добавки для человека, лекарственные средства и так далее.
НАИЛУЧШИЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для выполнения указанных выше задач в одном аспекте предложен модифицированный микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, где активность фосфатазы, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, инактивирована. Например, модифицированный микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, может представлять собой микроорганизм, продуктивность триптофана которого повышена, по сравнению с немодифицированными микроорганизмами рода Escherichia.
При использовании в настоящем описании термин «L-триптофан», относящийся к α-аминокислоте, представляет собой незаменимую аминокислоту, не синтезируемую in vivo и являющуюся L-аминокислотой с химической формулой C11H12N2O2. Для повышения продуктивности L-триптофана в микроорганизмах ранее применялись способы, включающие усиление экспрессии биосинтетических ферментов метаболических путей синтеза триптофана и блокаду путей метаболизма боковой цепи.
При использовании в настоящем описании термин «фосфатаза» может относиться к белку, катализирующему реакции удаления фосфатных групп из субстратов. В настоящем изобретении предполагают, что «фосфатаза, содержащая аминокислоты SEQ ID NO:1», представляющая собой белок, кодируемый геном yigL, катализирует реакции распада PLP, являющегося субстратом, до пиридоксаля и фосфорной кислоты. Поскольку в базе данных NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) белок, кодируемый yigL, назван пиридоксальфосфатфосфатазой (идентификатор гена в NCBI: 12930615), а в базе данных ЕсоСус (http://www.ecocyc.org) он назван фосфатазой фосфосахаров, неизвестно, какая из этих функций является основной функцией данного белка. Согласно недавним исследованиям, сообщалось, что экспрессия yigL индуцируется тепловым шоком (J. Gen. Appl. Microbiol., (2005) V 51, pp. 93-103), и есть результаты исследований, согласно которым трансляцию yigL активирует sgrS, являющийся разновидностью sRNA, что приводит к распаду внутриклеточных фосфосахаров (J. Bacterid. (2013) V 195, pp. 4804-4815). Тем не менее, четкие функции все еще требуют уточнения.
Как таковые, ферменты представляют собой, помимо аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1, аминокислоты, на 70% или более, конкретно на 80% или более, конкретнее на 90% или более, еще конкретнее на 95% или более, еще конкретнее на 98% или более и еще конкретнее на 99% или более гомологичные указанным выше последовательностям, и ферменты могут быть включены, без ограничений, при условии, что они оказывают эффект, по существу идентичный или соответствующий эффекту указанных выше ферментов. Кроме того, в случае аминокислотных последовательностей, имеющих указанную выше гомологию и демонстрирующих эффект, соответствующий указанному ферменту, очевидно, что объем настоящего изобретения включает любой модифицированный фермент, имеющий аминокислотную последовательность с частичной(ым) делецией, модификацией, заменой или добавлением.
Гены, кодирующие фосфатазу, представленную SEQ ID NO: 1, могут быть включены, без ограничений, при условии, что они представляют собой последовательности, которые могут кодировать ферменты, и они могут быть обозначены как ген yigL. Конкретно, гены, кодирующие ферменты, представляют собой, помимо нуклеотидных последовательностей, представленных SEQ ID NO: 2, нуклеотидные последовательности, на 80% или более, конкретно на 90% или более, конкретнее на 95% или более, еще конкретнее на 98% или более и еще конкретнее на 99% или более гомологичные указанным выше последовательностям. Последовательности генов могут быть включены без ограничений при условии, что они кодируют ферменты, оказывающие эффект, по существу идентичный или соответствующий эффекту указанных выше ферментов. Кроме того, в случае нуклеотидных последовательностей, имеющих указанную выше гомологию, очевидно, что объем настоящего изобретения включает нуклеотидные последовательности с частичной(ым) делецией, модификацией, заменой или добавлением.
При использовании в настоящем описании термин «гомология» относится к проценту идентичности двух полинуклеотидных или полипептидных группировок. Гомология последовательностей одной группировки другой группировке может быть определена методикой, известной в данной области техники. Например, гомология может быть определена непосредственной систематизацией информации о последовательностях (то есть таких параметров, как балльная оценка, идентичность, сходство и так далее) двух полинуклеотидных молекул или двух полипептидных молекул с применением легкодоступной компьютерной программы (пример: BLAST 2.0), позволяющей систематизировать информацию о последовательностях. Кроме того, гомология полинуклеотидов может быть определена посредством гибридизации полинуклеотидов в условиях, при которых между гомологичными областями образуются стабильные двойные цепи, и разъединением нуклеазой, специфичной в отношении одиночных цепей, с последующим определением размера разъединенных фрагментов.
При использовании в настоящем описании термин «эндогенная активность» относится к активному состоянию фермента, присутствующего у микроорганизма, в естественном состоянии или до модификации.
Термин «инактивация» относится к случаю, когда ген, кодирующий фермент, не экспрессирован вовсе, по сравнению с штаммом в естественном состоянии или до модификации, и/или к случаю, когда активность фермента снижена или отсутствует, даже при экспрессии гена.
Таким образом, применительно к эндогенной активности инактивация относится к снижению или отсутствию активности, по сравнению с активностью фермента, исходно присутствующего у микроорганизма, в естественном состоянии или до модификации. Снижение является комплексным понятием, включающим: случай, когда активность самого фермента ниже активности этого фермента, исходно присутствующего у микроорганизма, за счет модификации гена, кодирующего ферменты, и так далее; случай, когда общий уровень внутриклеточной ферментативной активности ниже соответствующего уровня у штамма в естественном состоянии или до модификации за счет ингибирования экспрессии гена, кодирующего фермент, или ингибирования трансляции; и комбинацию таких случаев.
Способ модификации для инактивации ферментативной активности может быть осуществлен с применением различных способов, хорошо известных в данной области. Примеры таких способов могут включать, без ограничений: способ замены кодирующего фермент гена на хромосоме геном, мутированным с целью снижения ферментативной активности, включая случай, когда ферментативная активность устранена; способ удаления части или всего кодирующего фермент гена; способ замены последовательности контроля экспрессии кодирующего фермент гена последовательностью со слабой активностью или без активности; способ включения модификации в последовательность контроля экспрессии кодирующего фермент гена на хромосоме; способ удаления части или всего кодирующего фермент гена на хромосоме; способ включения антисмыслового олигонуклеотида (например, антисмысловой РНК), ингибирующего трансляцию фермента с мРНК посредством комплементарного связывания с транскриптом гена на хромосоме; способ искусственного включения последовательности, комплементарной последовательности SD (последовательности Шайна-Дальгарно), выше последовательности SD кодирующего фермент гена с образованием вторичной структуры и ингибированием посредством этого присоединение к рибосоме; способ обратно-транскрипционной инженерии (RTE) с включением промотора в 3'-конец открытой рамки считывания (ORF) соответствующей последовательности для обратной транскрипции; и их комбинации.
Конкретно, способ удаления части или всего кодирующего фермент гена может быть осуществлен путем замены полинуклеотида, кодирующего эндогенный белок-мишень, на хромосоме полинуклеотидом или маркерным геном, в котором удалена часть последовательности нуклеиновой кислоты, с использованием векторов для вставки в бактериальные хромосомы. В качестве способа удаления части или всего гена может быть применен способ удаления генов гомологичной рекомбинацией.
Как указано выше, термин «часть» может варьировать в зависимости от типов полинуклеотидов, но может составлять, без ограничений, конкретно от 1 до 300, конкретнее от 1 до 100 и еще конкретнее от 1 до 50.
Как указано выше, термин «гомологичная рекомбинация» относится к генетической рекомбинации, происходящей посредством кроссинговера в локусах гомологичных друг другу цепей генов.
Конкретно, способ модификации последовательностей контроля экспрессии может быть осуществлен путем внесения модификаций в нуклеотидные последовательности контроля экспрессии путем делеции, вставки, неконсервативной или консервативной замены или их комбинации, или заменой на существенно более слабые промоторы и так далее. Последовательности контроля экспрессии могут включать промоторы, операторные последовательности, последовательности, кодирующие области связывания рибосом, и последовательности, контролирующие терминацию транскрипции и трансляции.
Кроме того, способ модификации последовательности гена на хромосоме может быть осуществлен путем внесения модификации в последовательность путем делеции, вставки, неконсервативной или консервативной замены либо их комбинации для дополнительного снижения ферментативной активности или путем замены на последовательность гена, улучшенную для ослабления активности, или на последовательность гена, улучшенную для устранения активности.
В типичном воплощении настоящего изобретения было подтверждено, что у различных Escherichia coli, продуцирующих триптофан, с делецией гена yigL, кодирующего соответствующую фосфатазу, для инактивации эндогенной активности фосфатазы, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, продуктивность L-триптофана повышена по сравнению с исходными штаммами, без делеции yigL, посредством чего подтверждено, что микроорганизмы рода Escherichia, продуцирующие L-триптофан, модифицированные для инактивации эндогенной фосфатазной активности, могут эффективно продуцировать L-триптофан.
В настоящем изобретении микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, относится к микроорганизму, способному продуцировать L-триптофан из источников углерода, присутствующих в среде. Кроме того, микроорганизм, продуцирующий L-триптофан, может представлять собой рекомбинантный микроорганизм. Конкретных ограничений по типам нет, при условии наличия способности продуцировать L-триптофан, однако микроорганизм может принадлежать к роду Enterbacter, роду Escherichia, роду Erwinia, роду Serratia, роду Providencia, роду Corynebacterium, роду Brevibacterium и, конкретно, к роду Escherichia.
Более конкретно, микроорганизм рода Escherichia может представлять собой Escherichia coli, однако возможно включение, без ограничений, микроорганизма рода Escherichia, продуктивность L-триптофана у которого повышена, благодаря инактивации фосфатазной активности.
Конкретно, в настоящем изобретении нет конкретных ограничений относительно исходного штамма микроорганизма рода Escherichia, имеющего продуктивность L-триптофана за счет инактивации фосфатазной активности, при условии, что он представляет собой микроорганизм, продуцирующий триптофан. Например, микроорганизм, продуцирующий триптофан, может быть модифицирован для ослабления или инактивации активности гена в конкурирующих метаболических путях, активности регуляторов в метаболических путях, управляющих триптофановым опероном, активности импортера триптофана и активности гена транспорта и распада триптофана и/или для сверхэкспрессии активности триптофанового оперона. Способ ослабления или инактивации активности идентичен описанному выше и может включать, без ограничений, известные способы. Кроме того, включены, без ограничений, известные способы сверхэкспрессии активности триптофанового оперона, однако примеры могут включать, без ограничений: способ дополнительного включения частей или целых последовательностей генов оперона или полинуклеотидов, содержащих области контроля экспрессии, вводимые в хромосомы извне; способ увеличения числа копий за счет включения в векторную систему; замену областей контроля экспрессии, контролирующих экспрессию генов, другими контрольными последовательностями; модификацию частей или целых последовательностей генов в областях контроля экспрессии; и усиление активности оперона посредством включения модификаций в сам ген. Конкретно, он может представлять собой Escherichia coli с делецией частей или целых генов pheA, trpR, mtr и/или tnaAB и/или сверхэкспрессией триптофанового оперона.
В настоящем изобретении, помимо генов pheA, trpR, mtr и tnaAB, триптофановых оперонов и кодируемых ими белковых последовательностей, генные последовательности и белковые последовательности, используемые для настоящего изобретения, могут быть получены из известных баз данных (то есть GenBank NCBI и так далее), однако примеры не ограничены этими последовательностями. Кроме того, подробная информация о генах pheA, trpR, mtr и tnaAB и так далее может быть получена из патента Кореи №10-0792095 и публикации патента Кореи №10-2013-0082121, и настоящее изобретение может включать все их описание посредством ссылки.
Относительно типичного воплощения настоящего изобретения, в результате инактивации фосфатазной активности у различных исходных штаммов, в случае микроорганизма рода Escherichia, продуцирующего L-триптофан, было подтверждено, что при инактивации фосфатазной активности продуктивность L-триптофана была существенно улучшена независимо от типов исходных штаммов.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения L-триптофана, включающий: культивирование модифицированного микроорганизма рода Escherichia, продуцирующего L-триптофан в среде, где активность фосфатазы, представленной аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, инактивирована; и выделение L-триптофана из культивированного микроорганизма и среды.
Для культивирования микроорганизма по настоящему изобретению могут быть использованы любые среды или условия культивирования, без ограничений, при условии, что они представляют собой типичные среды, используемые для культивирования микроорганизма рода Escherichia, однако, конкретно, микроорганизм по настоящему изобретению можно культивировать в типичных средах, содержащих подходящие источники углерода, источники азота, источники фосфора, неорганические соединения, аминокислоты и/или витамины и так далее, в аэробных условиях с контролем температуры, рН и так далее.
В настоящем изобретении источники углерода могут включать углеводы, такие как глюкоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, маннит, сорбит и так далее; спирты, такие как сахарные спирты, глицерин, пировиноградная кислота, молочная кислота, лимонная кислота и так далее; и аминокислоты, такие как органические кислоты, глутаминовой кислота, метионин, лизин и так далее. Кроме того, могут быть использованы природные органические источники питательных веществ, такие как гидролизаты кукурузного крахмала, мелассы, черная патока, рисовые отруби, маниока, остатки сахарного тростника и жидкий кукурузный экстракт, и, конкретно, могут быть использованы углеводы, такие как глюкоза, стерильные предварительно обработанные мелассы (то есть мелассы, преобразованные в восстанавливающие сахара, и так далее), и возможно широкое применение, без ограничений, подходящих количеств источников углерода, не включенных в приведенный выше список. Эти источники углерода могут быть использованы, без ограничений, по отдельности или в комбинации из по меньшей мере двух типов.
В качестве источников азота могут быть использованы неорганические источники азота, такие как аммиак, сульфат аммония, хлорид аммония, ацетат аммония, фосфат аммония, карбонат аммония, нитрат аммония и так далее; аминокислоты, такие как глутаминовая кислота, метионин, глутамин и так далее; и органические источники азота, такие как пептон, NZ-амин, мясные экстракты, дрожжевые экстракты, солодовые экстракты, жидкий кукурузный экстракт, казеиновые гидролизаты, рыба или продукты ее разложения и соевый жмых и продукты его разложения. Эти источники азота могут быть использованы, без ограничений, по отдельности или в комбинации из по меньшей мере двух типов.
В качестве источников фосфора могут быть включены дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, соответствующие натрийсодержащие соли и так далее. В качестве неорганических соединений могут быть использованы хлорид натрия, хлорид кальция, хлорид железа, сульфат магния, сульфат железа, сульфат марганца, карбонат кальция и так далее, и, кроме того, могут быть включены аминокислоты, витамины, подходящие предшественники и так далее. Эти среды или предшественники могут быть добавлены в культуральные продукты в форме периодической культуры или непрерывной культуры.
В настоящем изобретении во время культивирования микроорганизмов в культуральные продукты могут подходящими способами быть добавлены такие соединения, как гидроксид аммония, гидроксид калия, аммиак, фосфорная кислота, серная кислота и так далее, для регуляции рН культуральных продуктов. Кроме того, в процессе культивирования могут быть использованы пеногасители, такие как простой эфир полигликоля и жирных кислот, для подавления пенообразования. Кроме того, в культуральный продукт может вводиться кислород или кислородсодержащий газ для поддержания аэробных условий культуральных продуктов, или, для поддержания анаэробных и микроаэрофильных условий, можно вводить газообразные азот, водород и диоксид углерода, или не вводить газы.
Конкретная температура культуральных продуктов может составлять, без ограничений, от 27°С до 40°С, конкретнее от 30°С до 37°С. Культивирование можно продолжать до получения требуемого количества полезных продуктов и, конкретно, без ограничений, можно продолжать от 10 часов до 100 часов.
Указанная выше стадия выделения L-триптофана может обеспечивать выделение требуемого L-триптофана из культивированного микроорганизма и культуральной среды с использованием способов культивирования по настоящему изобретению, например, с использованием периодической культуры, непрерывной культуры, подпитываемой культуры и так далее, на основе подходящих способов, известных в данной области. Стадия выделения может включать процесс очистки. Процесс очистки может обеспечивать очистку выделенного L-триптофана с использованием подходящих способов, известных в данной области техники.
ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Далее настоящее изобретение будет подробно описано со ссылкой на следующие Примеры. Тем не менее, эти Примеры приведены лишь в иллюстративных целях, и объем настоящего изобретения не ограничен этими Примерами.
Пример 1: Получение фосфатазодефицитного штамма дикого типа
В данном примере из штамма, продуцирующего триптофан, получали штамм с инактивированной фосфатазной активностью.
У штамма W3110trpΔ2 (публикация заявки на патент Кореи №10-2013-0082121), полученного из штамма W3110, являющегося штаммом Escherichia coli дикого типа, типичного микроорганизма рода Escherichia, у которого удалены ген pheA (идентификатор гена в NCBI: 12934467), кодирующий хоризматмутазу/префенатдегидратазу (CM-PDT), ген tnaA (идентификатор гена в NCBI: 12933600), кодирующий триптофаназу, и ген tnaAB, являющиеся оперонными формами гена tnaB (идентификатор гена в NCBI: 12933602), кодирующего импортер триптофана, гомологичной рекомбинацией удаляли ген yigL, предположительно кодирующий фосфатазу, для повышения продуктивности триптофана.
Конкретно, для удаления гена yigL, содержащего генные последовательности SEQ ID NO: 2, применяли одностадийный способ инактивации, в который была вовлечена Red-рекомбиназа фага лямбда, разработанный Datsenko К.А. и соавт.(Proc Natl Acad Sci USA, (2000) V97, pp6640-6645). В качестве маркеров для подтверждения вставки в гены промоторы rmf лигировали с pUC19 (New England Biolabs (США)) и использовали хлорамфениколовые гены вектора pUCprmfmloxP, который получали лигированием мутантной кас сеты loxP-CmR-loxP, полученной с использованием pACYC184 (New England Biolab) (публикация патента Кореи №10-2009-0075549).
Сначала pUCprmfmloxP использовали в качестве матрицы с комбинацией праймеров с SEQ ID NO: 3 и 4, содержащей часть гена yigL и часть последовательностей гена резистентности к хлорамфениколу pUCprmfmloxP. Затем ΔyigL1st, представляющий собой продукт полимеразной цепной реакции (далее PCR) размером приблизительно 1,2 тысячи пар оснований (т.п.о.), получали путем первичной PCR с повторением 30 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжига при 55°С в течение 30 секунд и полимеризации при 72°С в течение 1 минуты. После этого ΔyigL1st, PCR-продукт размером приблизительно 1,2 т.п.о., полученный путем PCR, подвергали электрофорезу в 0,8% агарозном геле, элюировали и использовали в качестве матрицы для вторичной PCR. Во время вторичной PCR с повторением 30 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжига при 55°С в течение 30 секунд и полимеризации при 72°С в течение 1 минуты с использованием комбинации праймеров с SEQ ID NO: 5 и 6 получали ΔyigL, представляющий собой PCR-продукт размером приблизительно 1,3 т.п.о., содержащий 20 пар оснований (п.о.) генных последовательностей 5'- и 3'-областей PCR-продуктов, полученных при первичной PCR, при использовании элюированных продуктов первичной PCR в качестве матрицы. Полученный таким образом PCR-продукт подвергали электрофорезу в 0,8% агарозном геле, элюировали и использовали для рекомбинации.
Escherichia coli W3110trpΔ2, трансформированные вектором pKD46, получали в компетентном состоянии в соответствии с одностадийным способом инактивации (Proc Natl Acad Sci USA., (2000) V97, pp.6640-6645), разработанным Datsenko К.А. и соавт., и затем трансформировали их фрагментами ΔyigL размером 1,3 т.п.о, полученными первичной и вторичной PCR. Затем их культивировали в средах LB, содержащих хлорамфеникол, и отбирали первичные трансфектанты, резистентные к хлорамфениколу.
После удаления pKD46 из полученных таким образом первичных рекомбинантных штаммов, резистентных к хлорамфениколу, из бактерий удаляли маркерные гены (Gene, (2000) V247, pp. 255-264) посредством включения векторов pJW168 (Gene, (2000) V247, рр255-264). PCR-продукты размером приблизительно 0,6 т.п.о., полученные из выделенных в итоге бактерий посредством PCR с использованием праймеров SEQ ID NO: 7 и 8, позволили подтвердить делецию гена yigL, и полученный штамм был назван W3110 trpΔ2 yigL.
Последовательности праймеров, использованных в данном Примере, показаны в Таблице 1 ниже.
Пример 2: Получение штаммов, продуцирующих триптофан с инактивированной фосфатазой
В этом примере ген yigL, предположительно кодирующий фосфатазу, удаляли путем гомологичной рекомбинации, как описано в способе согласно Примеру 1, имея в качестве родительского штамма КССМ11166Р (патент Кореи №10-1261147), являющийся еще одним типичным штаммом Escherichia coli, продуцирующим триптофан.
PCR-продукты размером приблизительно 0,6 т.п.о., полученные из выделенных в итоге бактерий посредством PCR с использованием праймеров с SEQ ID NO: 7 и 8, позволили подтвердить делецию гена yigL, и полученный штамм был назван СА04-2803.
Пример 3: Оценка продуктивности триптофана штаммами дикого типа,
дефицитных по гену yigL
В каждый штамм методами трансформации включали pCL-Dtrp_att-trpEDCBA и pBAC-Dtrp_att-trpDCBA для сравнения продуктивности триптофана W3110 trpΔ2 yigL, полученного в Примере 1, и W3110 trpΔ2, являющегося родительским штаммом. Включенные векторы представляли собой векторы с усиленной экспрессией триптофановых оперонов для сверхсинтеза триптофана посредством отключения контрольного механизма в контрольных областях триптофанового оперона (публикации патента Кореи №10-2013-0082121). Штаммы с включенными векторами культивировали в среде для оценки продукции триптофана, приготовленной в соответствии с составом, указанным в Таблице 2, и сравнивали их активность в отношении продукции L-триптофана.
Штаммы, культивированные в течение ночи в твердой среде LB в инкубаторе при 37°С, засевали в 25 мл тестовой среды согласно Таблице 2 одной платиновой петлей, соответственно, и культивировали в течение 48 часов в инкубаторе при 37°С и 200 об/мин. После этого сравнивали концентрации триптофана (Таблица 3).
Результаты, представленные выше, демонстрируют, что у штамма, где активность фосфатазы, кодируемой геном yigL, была инактивирована, продуктивность триптофана была на 60% выше, чем у штамма, где активность фосфатазы не была инактивирована. Было подтверждено, что продуктивность триптофана может быть улучшена инактивацией фосфатазы, кодируемой yigL. Это можно трактовать как усиление биосинтеза триптофана посредством повышения концентрации PLP, играющего ключевую роль в качестве кофермента, важного для биосинтеза триптофана, вследствие инактивации фосфатазы, кодируемой yigL.
Пример 4: Оценка продуктивности триптофана штаммов, дефицитных по гену yigL
Для измерения титров триптофана у yigL-дефицитного штамма (СА04-2803), полученного в Примере 2, и КССМ11166Р, являющегося родительским штаммом, штаммы культивировали в среде для измерения титров триптофана, приготовленной в соответствии с составом, указанным в Таблице 4, представленной ниже. После этого было подтверждено повышение эффективности продукции L-триптофана.
Таблица 4
Состав среды для измерения титров триптофана
Штаммы Escherichia coli KCCM11166P и CA04-2803, культивированные в течение ночи в твердой среде LB в инкубаторе при 37°С, засевали в 25 мл среды для измерения титров согласно Таблице 4 одной платиновой петлей, соответственно, и культивировали в течение 48 часов в инкубаторе при 37°С и 200 об/мин. После этого сравнивали скорость потребления глюкозы и концентрации триптофана.
В результате, как показано в Таблице 5, представленной ниже, у СА04-2803, являющегося штаммом с инактивированной фосфатазой, кодируемой геном yigL, концентрация триптофана была приблизительно на 30% выше, чем у контрольного КССМ11166Р.
Авторы настоящего изобретения подтвердили повышение продуктивности триптофана у инактивированных штаммов на основе КССМ11166Р, дефицитных по гену yigL, кодирующему фосфатазу. Штаммы были названы «СА04-2803» или «СА04-2803 (KCCM11166P_ΔyigL)» и депонированы в Корейском центре культур микроорганизмов (Korean Culture Center of Microorganisms), являющемся признанным международным органом по депонированию согласно Будапештскому договору, 5 декабря 2014 г. под регистрационным номером КССМ11635Р.
Представленные выше результаты демонстрируют, что продуктивность L-триптофана в микроорганизме рода Escherichia, продуцирующем L-триптофан, увеличивалась больше у штамма с инактивированной фосфатазой, чем у штамма без инактивации фосфатазы. Кроме того, такие результаты в отношении увеличения продуктивности триптофана являются следствием инактивации фосфатазы, кодируемой геном yigL, и их рассматривают как следствие инактивации функции фосфатазы PLP, предположительно являющейся одной из функций фосфатазы, кодируемой указанным геном. Это весьма вероятно ввиду повышенной концентрации внутриклеточного PLP.
Исходя из изложенного выше, специалисту в области техники, к которой относится настоящее изобретение, будет ясно, что настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без изменения технической концепции или существенных характеристик настоящего изобретения. В этом отношении, типичные воплощения раскрыты здесь исключительно в целях наглядности, и их не следует толковать как ограничение объема настоящего изобретения. Наоборот, подразумевается, что настоящее изобретение охватывает не только типичные воплощения, но также различные альтернативы, модификации, эквиваленты и другие воплощения, которые могут быть включены в сущность и объем настоящего изобретения, как определено в приложенной формуле изобретения.
Claims (5)
1. Модифицированный микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, где активность фосфатазы, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, инактивирована.
2. Микроорганизм по п. 1, где микроорганизм рода Escherichia представляет собой Escherichia coli.
3. Способ получения L-триптофана, включающий:
(1) культивирование микроорганизма рода Escherichia по п. 1 или 2 в среде; и
(2) выделение L-триптофана из культивированного микроорганизма и среды.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150067660A KR101704199B1 (ko) | 2015-05-14 | 2015-05-14 | L-트립토판 생산능을 갖는 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용한 l-트립토판의 제조 방법 |
| KR10-2015-0067660 | 2015-05-14 | ||
| PCT/KR2016/004893 WO2016182321A1 (ko) | 2015-05-14 | 2016-05-10 | L-트립토판 생산능을 갖는 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용한 l-트립토판의 제조 방법 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017141773A RU2017141773A (ru) | 2019-06-17 |
| RU2017141773A3 RU2017141773A3 (ru) | 2019-06-17 |
| RU2692645C2 true RU2692645C2 (ru) | 2019-06-25 |
Family
ID=57249238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017141773A RU2692645C2 (ru) | 2015-05-14 | 2016-05-10 | Микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, и способ получения L-триптофана с его использованием |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10081822B2 (ru) |
| EP (1) | EP3296400B1 (ru) |
| JP (1) | JP6596105B2 (ru) |
| KR (1) | KR101704199B1 (ru) |
| CN (1) | CN106604987B (ru) |
| BR (1) | BR112017024401A2 (ru) |
| DK (1) | DK3296400T3 (ru) |
| ES (1) | ES2876949T3 (ru) |
| HU (1) | HUE054774T2 (ru) |
| MY (1) | MY175834A (ru) |
| RU (1) | RU2692645C2 (ru) |
| WO (1) | WO2016182321A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2743745C1 (ru) * | 2018-11-29 | 2021-02-25 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Вариант белка рецептора цАМФ и способ получения L-аминокислоты с его применением |
| RU2791193C1 (ru) * | 2021-01-25 | 2023-03-03 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Новый вариант феррохелатазы и способ получения l-триптофана с его применением |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2020009840A (es) | 2018-03-23 | 2020-10-14 | Cj Cheiljedang Corp | Granulos que comprenden l-aminoacido y procedimiento de preparacion de los mismos. |
| KR101991207B1 (ko) | 2018-11-29 | 2019-06-19 | 씨제이제일제당 (주) | cAMP 수용 단백질 변이체 및 이를 이용한 L-아미노산 제조방법 |
| KR101996767B1 (ko) | 2018-11-29 | 2019-07-04 | 씨제이제일제당 (주) | cAMP 수용 단백질 변이체 및 이를 이용한 L-아미노산 제조방법 |
| KR102284726B1 (ko) * | 2021-01-25 | 2021-08-02 | 씨제이제일제당 주식회사 | 신규한 타우토머레이즈 pptA 변이체 및 이를 이용한 L-트립토판 생산 방법 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20050059685A (ko) * | 2003-12-15 | 2005-06-21 | 씨제이 주식회사 | 트립토판 생합성 관련 변이유전자를 함유한 대장균 변이주및 이를 이용한 트립토판 제조방법 |
| US8435765B2 (en) * | 2002-04-23 | 2013-05-07 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of monatin and its precursors |
| KR20130082121A (ko) * | 2012-01-10 | 2013-07-18 | 씨제이제일제당 (주) | L-트립토판 생산능이 강화된 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용하여 l-트립토판을 생산하는 방법 |
| RU2013144250A (ru) * | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR870001813B1 (ko) | 1985-05-20 | 1987-10-13 | 한국과학기술원 | 발효법에 의한 l-트립토판의 제조방법 |
| KR970001533B1 (en) | 1987-01-30 | 1997-02-11 | American Cyanamid Co | Dihydro derivatives and pseudoaglycons of ll-e33288 antibiotics and anticancer ages, preparation and purification method thereof |
| JPH08103283A (ja) * | 1994-10-06 | 1996-04-23 | Mitsubishi Chem Corp | トリプトファンの製造法 |
| KR100792095B1 (ko) * | 2006-12-29 | 2008-01-04 | 씨제이 주식회사 | Ｌ-페닐알라닌 생산능을 갖는 대장균 변이주로부터유전자조작된 ｌ-트립토판 생산능을 갖는 재조합 대장균균주 및 이를 이용한 트립토판 제조방법 |
| KR20090075549A (ko) | 2008-01-04 | 2009-07-08 | 씨제이제일제당 (주) | 향상된 ｌ-쓰레오닌 생산능을 갖는 대장균 및 이를 이용한ｌ-쓰레오닌의 생산 방법 |
| KR101261147B1 (ko) | 2011-01-18 | 2013-05-06 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-아미노산의 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법 |
| KR101327093B1 (ko) * | 2012-01-06 | 2013-11-07 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-아미노산을 생산할 수 있는 미생물 및 이를 이용하여 ｌ-아미노산을 생산하는 방법 |
| RU2013118637A (ru) * | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
-
2015
- 2015-05-14 KR KR1020150067660A patent/KR101704199B1/ko active IP Right Grant
-
2016
- 2016-05-10 RU RU2017141773A patent/RU2692645C2/ru active
- 2016-05-10 ES ES16792967T patent/ES2876949T3/es active Active
- 2016-05-10 DK DK16792967.8T patent/DK3296400T3/da active
- 2016-05-10 EP EP16792967.8A patent/EP3296400B1/en active Active
- 2016-05-10 MY MYPI2017704222A patent/MY175834A/en unknown
- 2016-05-10 HU HUE16792967A patent/HUE054774T2/hu unknown
- 2016-05-10 BR BR112017024401-2A patent/BR112017024401A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-05-10 JP JP2017559098A patent/JP6596105B2/ja active Active
- 2016-05-10 US US15/573,236 patent/US10081822B2/en active Active
- 2016-05-10 CN CN201680000670.0A patent/CN106604987B/zh active Active
- 2016-05-10 WO PCT/KR2016/004893 patent/WO2016182321A1/ko active Application Filing
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8435765B2 (en) * | 2002-04-23 | 2013-05-07 | Cargill, Incorporated | Polypeptides and biosynthetic pathways for the production of monatin and its precursors |
| KR20050059685A (ko) * | 2003-12-15 | 2005-06-21 | 씨제이 주식회사 | 트립토판 생합성 관련 변이유전자를 함유한 대장균 변이주및 이를 이용한 트립토판 제조방법 |
| KR20130082121A (ko) * | 2012-01-10 | 2013-07-18 | 씨제이제일제당 (주) | L-트립토판 생산능이 강화된 에스케리키아속 미생물 및 이를 이용하여 l-트립토판을 생산하는 방법 |
| RU2013144250A (ru) * | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| KUZNETSOVA EKATERINA et al., Genome-wide Analysis of Substrate Specificities of the Escherichia coli Haloacid Dehalogenase-like Phosphatase Family, THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 281, NO. 47, pp. 36149 -36161, 2006. * |
| NCBI, GenBank Accession No. CDP77019, Putative hydrolase [Escherichia coli D6-117.29], 11.05.2014. NCBI, GenBank Accession No. WP_000285362.1, MULTISPECIES: pyridoxal phosphate phosphatase YigL [Enterobacteriaceae], 22.03.2015. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2743745C1 (ru) * | 2018-11-29 | 2021-02-25 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Вариант белка рецептора цАМФ и способ получения L-аминокислоты с его применением |
| RU2806731C1 (ru) * | 2019-09-03 | 2023-11-03 | Нинся Эппэнь Биотек Ко., Лтд | Применение гена транспортного переносчика, который улучшает эффективность продуцирования l-триптофана у escherichia coli |
| RU2791193C1 (ru) * | 2021-01-25 | 2023-03-03 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Новый вариант феррохелатазы и способ получения l-триптофана с его применением |
| RU2797499C1 (ru) * | 2021-01-29 | 2023-06-06 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Новый вариант белка семейства транспортера цианата и способ получения L-триптофана с его применением |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3296400B1 (en) | 2021-04-07 |
| HUE054774T2 (hu) | 2021-09-28 |
| DK3296400T3 (da) | 2021-06-28 |
| US10081822B2 (en) | 2018-09-25 |
| MY175834A (en) | 2020-07-13 |
| WO2016182321A1 (ko) | 2016-11-17 |
| RU2017141773A (ru) | 2019-06-17 |
| KR101704199B1 (ko) | 2017-02-08 |
| KR20160135026A (ko) | 2016-11-24 |
| JP2018519799A (ja) | 2018-07-26 |
| CN106604987B (zh) | 2020-08-18 |
| US20180087077A1 (en) | 2018-03-29 |
| JP6596105B2 (ja) | 2019-10-23 |
| RU2017141773A3 (ru) | 2019-06-17 |
| CN106604987A (zh) | 2017-04-26 |
| ES2876949T3 (es) | 2021-11-15 |
| BR112017024401A2 (pt) | 2018-07-24 |
| EP3296400A4 (en) | 2018-10-10 |
| EP3296400A1 (en) | 2018-03-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2588665C2 (ru) | Способ получения l-лизина с использованием микроорганизмов, обладающих способностью продуцировать l-лизин | |
| RU2692645C2 (ru) | Микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, и способ получения L-триптофана с его использованием | |
| RU2711981C2 (ru) | Микроорганизм рода Escherichia, обладающий продуктивностью по L-триптофану, и способ получения L-триптофана с его использованием | |
| RU2683208C1 (ru) | Мутант пируватдегидрогеназы, микроорганизм, содержащий мутант, и способ получения L-аминокислоты с использованием микроорганизма | |
| RU2676137C2 (ru) | Микроорганизм для продуцирования О-ацетилгомосерина и способ получения О-ацетилгомосерина с использованием этого микроорганизма | |
| RU2681475C1 (ru) | Вариант репрессора глюконата, микроорганизм-продуцент L-лизина, содержащий его, и способ получения L-лизина с его использованием | |
| JP2019013256A (ja) | Ｌ−トリプトファン生産能を有するエシェリキア属微生物及びこれを用いたｌ−トリプトファンの製造方法 | |
| RU2458981C2 (ru) | Способ получения l-цистеина с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae | |
| JP6177995B2 (ja) | Ｌ−トリプトファン産生能を有する微生物およびこれを用いてｌ−トリプトファンを産生する方法 | |
| RU2706535C2 (ru) | Микроорганизм, продуцирующий O-ацетилгомосерин, и способ получения O-ацетилгомосерина с использованием этого микроорганизма | |
| KR101233666B1 (ko) | 박테리아 변이 균주를 이용한 이소루신 생산 |