RU2671472C1 - Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток - Google Patents
Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2671472C1 RU2671472C1 RU2018105093A RU2018105093A RU2671472C1 RU 2671472 C1 RU2671472 C1 RU 2671472C1 RU 2018105093 A RU2018105093 A RU 2018105093A RU 2018105093 A RU2018105093 A RU 2018105093A RU 2671472 C1 RU2671472 C1 RU 2671472C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- container
- fluororubber
- copolymer
- end groups
- Prior art date
Links
- 238000003860 storage Methods 0.000 title abstract description 43
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 229920001973 fluoroelastomer Polymers 0.000 claims abstract description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 121
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 57
- BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N tetrafluoroethene Chemical group FC(F)=C(F)F BFKJFAAPBSQJPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- HCDGVLDPFQMKDK-UHFFFAOYSA-N hexafluoropropylene Chemical group FC(F)=C(F)C(F)(F)F HCDGVLDPFQMKDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 23
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 20
- -1 perfluoroalkyl vinyl ether Chemical compound 0.000 claims description 16
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 19
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 description 16
- BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 1,1-Difluoroethene Chemical compound FC(F)=C BQCIDUSAKPWEOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 14
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 13
- 239000005060 rubber Substances 0.000 description 13
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 11
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 10
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 10
- YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N Fluorine atom Chemical compound [F] YCKRFDGAMUMZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 9
- XUCNUKMRBVNAPB-UHFFFAOYSA-N fluoroethene Chemical compound FC=C XUCNUKMRBVNAPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 8
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- UUAGAQFQZIEFAH-UHFFFAOYSA-N chlorotrifluoroethylene Chemical group FC(F)=C(F)Cl UUAGAQFQZIEFAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 4
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 3
- 238000003682 fluorination reaction Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- KHXKESCWFMPTFT-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,2,2,3,3-heptafluoro-3-(1,2,2-trifluoroethenoxy)propane Chemical compound FC(F)=C(F)OC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F KHXKESCWFMPTFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BLTXWCKMNMYXEA-UHFFFAOYSA-N 1,1,2-trifluoro-2-(trifluoromethoxy)ethene Chemical compound FC(F)=C(F)OC(F)(F)F BLTXWCKMNMYXEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- FJKIXWOMBXYWOQ-UHFFFAOYSA-N ethenoxyethane Chemical compound CCOC=C FJKIXWOMBXYWOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004334 fluoridation Methods 0.000 description 2
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 2
- 238000001746 injection moulding Methods 0.000 description 2
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 2
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003746 surface roughness Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- PEVRKKOYEFPFMN-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,3,3,3-hexafluoroprop-1-ene;1,1,2,2-tetrafluoroethene Chemical group FC(F)=C(F)F.FC(F)=C(F)C(F)(F)F PEVRKKOYEFPFMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWZSKZZXXULJHU-UHFFFAOYSA-N 1-ethenoxyheptane Chemical compound CCCCCCCOC=C SWZSKZZXXULJHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YAOJJEJGPZRYJF-UHFFFAOYSA-N 1-ethenoxyhexane Chemical compound CCCCCCOC=C YAOJJEJGPZRYJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOSXLUZXMXORMX-UHFFFAOYSA-N 1-ethenoxypentane Chemical compound CCCCCOC=C IOSXLUZXMXORMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QZKXQTNTOFJROU-UHFFFAOYSA-N 7-aminooxepan-2-one Chemical compound NC1CCCCC(=O)O1 QZKXQTNTOFJROU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100037369 Nidogen-1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001774 Perfluoroether Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 238000004026 adhesive bonding Methods 0.000 description 1
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 1
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000000071 blow moulding Methods 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000424 bronchial epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- PBLYVZBCFDFCTO-UHFFFAOYSA-N butyl hypofluorite Chemical compound CCCCOF PBLYVZBCFDFCTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000012986 chain transfer agent Substances 0.000 description 1
- 238000010073 coating (rubber) Methods 0.000 description 1
- 239000011247 coating layer Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 238000003851 corona treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000009503 electrostatic coating Methods 0.000 description 1
- 238000007720 emulsion polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003631 expected effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N fenoxycarb Chemical compound C1=CC(OCCNC(=O)OCC)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 HJUFTIJOISQSKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004742 high temperature nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- 238000007731 hot pressing Methods 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005073 lymphatic endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 108010008217 nidogen Proteins 0.000 description 1
- 210000004416 odontoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002959 polymer blend Polymers 0.000 description 1
- 239000002685 polymerization catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006124 polyolefin elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 238000007761 roller coating Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 238000004544 sputter deposition Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000010557 suspension polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920003051 synthetic elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000005061 synthetic rubber Substances 0.000 description 1
- 229920000208 temperature-responsive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000002444 unipotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
- C09D127/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers
- C09D127/02—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment
- C09D127/12—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment containing fluorine atoms
- C09D127/18—Homopolymers or copolymers of tetrafluoroethene
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
- C09D127/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers
- C09D127/02—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment
- C09D127/12—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a halogen; Coating compositions based on derivatives of such polymers not modified by chemical after-treatment containing fluorine atoms
- C09D127/20—Homopolymers or copolymers of hexafluoropropene
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
- C09D129/00—Coating compositions based on homopolymers or copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by an alcohol, ether, aldehydo, ketonic, acetal, or ketal radical; Coating compositions based on hydrolysed polymers of esters of unsaturated alcohols with saturated carboxylic acids; Coating compositions based on derivatives of such polymers
- C09D129/10—Homopolymers or copolymers of unsaturated ethers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/14—Bags
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medical Preparation Storing Or Oral Administration Devices (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Предложен контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих. Контейнер имеет образованную из фторкаучука с общим числом нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H во фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода соприкасающуюся с клетками млекопитающих поверхность. Изобретение обеспечивает эффективное предотвращение адгезии клеток и повышение коэффициента выживаемости клеток. 4 з.п. ф-лы, 12 табл.
Description
Область техники
[0001] Настоящее изобретение относится к контейнеру, используемому для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, причем поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с одной или более концевыми группами -CF3, или фторкаучука с общим числом не содержащих фтор концевых групп и концевых групп -CF2H во фторкаучуке не более 70×106 атомов углерода.
Уровень техники
[0002] Плюрипотентные стволовые клетки (ПСК), такие как эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) являются клетками с неограниченными способностями пролиферации и мультипотентностью, по отношению к клеткам различных тканей. Ожидается, что человеческие ПСК будут применяться в регенеративной медицине, причем человеческие ПСК индуцируются дифференцированием in-vitro в клетки, обладающие различными типами функций, которые затем вводятся пациентам с целью получения предположительного эффекта от такого введения. Кроме того, ожидается, что соматические стволовые клетки (ССК), такие как мезенхимальные стволовые клетки (МСК), проявляют терапевтический эффект, получаемый за счет выброса трофических факторов и цитокинов, и эффект самонаведения на поврежденные участки тканей с последующим дифференцированием в составные клетки и дополнением / восстановлением участков, и потому попытки клинических исследований этих явлений были предприняты. Для достижения этого требуется стабильное культивирование или хранение большого количества высококачественных клеток, а также введения при сохранении качества.
[0003] В качестве контейнера для культивирования плавающих клеток разработан контейнер для культивирования в форме мешка (далее - мешок) (патентный документ 1). Такой мешок состоит из полимерного сплава, в котором смесь полимеров, состоящая из блок-сополимера поли(этиленбутилен)полистирола с полипропиленом, смешана с сополимером этилена и акриловой кислоты, который обладает превосходными свойствами в части прозрачности и газопроницаемости. С другой стороны, разработаны мешки для культивирования адгезивных клеток (патентные документы 2, 3). Мешок, раскрытый в патентном документе 2, представляет собой усовершенствованный мешок, в котором клетки с легкостью прикрепляются к его внутренней поверхности за счет улучшенной гидрофильности, создаваемой посредством обработки поверхности коронным разрядом. Кроме того, мешок, раскрытый в патентном документе 3, состоит из листа синтетического каучука с заранее заданной жесткостью при изгибе, чтобы исключить легкую деформацию мешка во время культивирования, также он обладает отличительной характеристикой, состоящей в предотвращении отслаивания и смерти клеток из-за деформации контейнера при его перемещении.
Далее, на рынке известны и имеются в наличии мешки, например, CultiLife® Spin (производитель «Takara Рас Ltd.»), изготовленные из сополимера этилена (Э) и винилацетата (ВА) - ЭВА; VueLife FEP Bag 32-С (производитель «American Fluoroseal Corp.») из сополимера тетрафторэтилена (ТФЭ) и гексафторпропилена (ГФП) - ФЭП, т.е. из фторкаучука; и культуральный мешок A-1000NL (производитель «Nipro Corp.»).
Однако, все эти мешки не предотвращают адгезию адгезивных клеток к внутренней поверхности мешка и не поддерживают культивируемые клетки в плавающем состоянии.
[0004] В то же время известно, что поверхности бытовых приборов, используемых для разогрева и приготовления пищи, покрываются фторкаучуковой пленкой, в которой нестабильные концевые группы сополимера ТФЭ и перфторалкил-винилового эфира (ПФАВЭ) - ПФА - фторированы для удаления нестабильных концевых групп, улучшается возможность избежать пригорания (патентный документ 4). Однако адгезионные свойства клетки, проявляемые по отношению к фторкаучуку, концевые группы которого фторированы, не известны.
Документы уровня техники
Патентные документы
[0005]
Патентный документ 1: Японская нерассмотренная патентная заявка, публикация №03-65177
Патентный документ 2: Японская нерассмотренная патентная заявка, публикация №06-98756
Патентный документ 3: Японская нерассмотренная патентная заявка, публикация №2008-17839
Патентный документ 4: Патент Японии №3962153
Сущность изобретения
Проблема, которую должно решить изобретение
[0006] Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предложить контейнер, пригодный для введения, хранения или приготовления раствора, содержащего клетки млекопитающих, с высокой концентрацией и с высокой долей живых клеток.
Средства решения указанных проблем
[0007] В результате исчерпывающего исследования, направленного на поиск решения проблемы, авторы настоящего изобретения обнаружили, что когда введение клеток млекопитающих осуществляется с использованием контейнера, поверхность которого, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с одной или более концевыми группами -CF3 или фторкаучука, имеющего общее число нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H в фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода, и в таком контейнере хранятся или культивируются клетки млекопитающих, адгезия клеток к внутренней поверхности контейнера эффективно предотвращается, и коэффициент выживаемости клеток повышается; контейнеры могут использоваться для введения, хранения или приготовления раствора, содержащего клетки млекопитающих с высокой концентрацией и с высокой долей живых клеток. Этот результат привел к совершению настоящего изобретения.
[0008] Настоящее изобретение состоит в следующем.
(1) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, в котором поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с общим числом нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H в фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода.
(2) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, в котором поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с одной или более концевыми группами -CF3.
(3) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по п. (2), в котором поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с числом нефторированных концевых групп не более 70 на 1×106 атомов углерода.
(4) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по любому из п. (1)-(3), в котором фторкаучук представляет собой один из фторкаучуков, выбранных из следующей группы: сополимер на основе тетрафторэтилена и гексафторпропилена, сополимер на основе тетрафторэтилена и перфторалкил-винилового эфира.
(5) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по любому из п. (1)-(4), при этом контейнер представляет собой мешок.
(6) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по любому из п. (1)-(5), при этом клетки млекопитающих представляют собой адгезивные клетки.
(7) Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по любому из п. (1)-(6), при этом клетки млекопитающих представляют собой мезенхимальные стволовые клетки.
Технический результат изобретения
[0009] Когда при использовании контейнера для введения, хранения и культивирования в соответствии с настоящим изобретением выполняется введение или хранение жидкой среды, содержащей клетки млекопитающих, или осуществляется культивирование клеток млекопитающих, поскольку возможно эффективное предотвращение адгезии к внутренней поверхности контейнера и повышение коэффициента выживаемости клеток, обеспечивается введение, хранение или приготовление среды, содержащей клетки млекопитающих, с высокой концентрацией и высокой долей живых клеток, что способствует регенеративной медицине с использованием жидкой среды, содержащей клетки млекопитающих (суспензии).
Осуществление изобретения
[0010] Контейнер для введения, хранения или культивирования в соответствии с настоящим изобретением (далее в некоторых случаях «контейнер в соответствии с настоящим изобретением») не ограничен, при условии, что в контейнере для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих поверхность, соприкасающаяся с клетками млекопитающих (жидкой средой, содержащей клетки млекопитающих), образована из фторкаучука с одной или более концевыми группами -CF3 или фторкаучука с общим числом нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H в фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода (далее - «предлагаемый фторкаучук»); и контейнер в целом в некоторых случаях образован из предлагаемого фторкаучука. Контейнер в соответствии с настоящим изобретением обладает отличительной характеристикой, состоящей в том, что поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из предлагаемого фторкаучука. Когда выполняется введение или хранение жидкой среды, содержащей клетки млекопитающих, или культивирование клеток млекопитающих с использованием контейнера с такими признаками, поскольку клеточная адгезия эффективно предотвращена и коэффициент выживаемости клеток эффективно повышается, контейнер в соответствии с настоящим изобретением пригоден для использования для введения и/или хранения жидкой среды, содержащей плавающие клетки, и культивирования плавающих клеток, а также для введения и/или хранения жидкой среды, содержащей адгезивные клетки, и для плавающего культивирования адгезивных клеток. В случае с использованием для введения и/или хранения среды, содержащей клетки, и плавающего культивирования клеток, в предпочтительном варианте контейнер представляет собой контейнер, в котором внутренняя поверхность не покрыта веществом, демонстрирующим адгезивные свойства к клеткам, таким как матригель, энтактин, фибронектин, полимер, реагирующий на температуру (ПИПАА и т.д.), поликатион (полилизин и т.д.), желатин, лектин, полисахариды (гиалуроновая кислота и т.д.), полимолочная кислота, полигликолевая кислота, ε-аминокапролактон, коллаген I типа, коллаген IV типа, хитозан и ламинин. В данном случае, в настоящем изобретении «хранение» включает в себя хранение во время транспортировки.
[0011] Плавающие клетки включают в себя такие клетки, как красные кровяные тельца (эритроциты) и (получаемые из периферической крови) белые кровяные тельца (нейтрофильные лейкоциты, мононуклеарные лейкоциты (моноциты и лимфоциты), макрофаги и т.д.).
[0012] Примеры адгезивных клеток включают: стволовые клетки, в том числе плюрипотентные стволовые клетки, такие как эмбриональные стволовые клетки (ЭСК), эмбриональные половые клетки (ЭПК), зародышевые стволовые клетки (ЗСК) и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК); мультипотентные стволовые клетки, такие как мезенхимальные стволовые клетки, гемопоэтические стволовые клетки и нервные стволовые клетки, и унипотентные стволовые клетки (клетки-предшественники), такие как клетки - предшественники миокарда, клетки - предшественники эндотелия сосудов, нейрональные клетки - предшественники; клетки - предшественники жировых клеток, фибробласты кожи, миобласты скелетной мускулатуры, остеобласты и одонтобласты; и зрелые клетки, такие как клетки миокарда, васкулярные эндотелиальные клетки, нервные клетки, жировые клетки, кожные фиброциты, скелетные миоциты, остеоциты, гепатоциты (клетки печени), эндотелиальные клетки пупочной вены; лимфатические эндотелиальные клетки кожных микроструктур, кератиноциты, бронхиальные эпителиальные клетки, меланоциты, гладкомышечные клетки и клетки зубов. В предпочтительном варианте имеются ввиду мезенхимальные стволовые клетки.
[0013] Предлагаемый фторкаучук предпочтительно представляет собой каучук, не содержащий концевых групп -CF2H, с общим числом нефторированных концевых групп в каучуке (например, функциональных групп типа -COF, -СООН, связанная с водой -СООН, -СН2ОН, -CONH2 и -COOCH3) и концевых групп -CF2H не более 70 на 1×106 атомов углерода, и в более предпочтительном варианте не более 35 на 1×106 атомов углерода. Далее, в еще более предпочтительном варианте их число составляет не более 20 на 1×106 атомов углерода, и в наиболее предпочтительном варианте не более 10 на 1×106 атомов углерода.
Т.е. один из объектов настоящего изобретения представляет собой контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, в котором поверхность, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с общим числом нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H во фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода.
[0014] Число групп -COF, -СООН, связанная с водой -СООН, -СН2ОН, -CONH2, -СООСН3 и -CF2H на 1×106 атомов углерода может быть рассчитано посредством инфракрасной спектроскопии на основе преобразования Фурье.
[0015] Кроме того, предлагаемый фторкаучук достаточен, если он содержит одну или более концевых групп -CF3 имеет более стабилизированную концевую структуру; и предлагаемый фторкаучук включает в себя фторкаучук, в котором часть нефторированных концевых групп фторирована и имеют -CF3.
[0016] Анализ концевой группы -CF3 может быть выполнен посредством высокотемпературных измерений ядер 19F путем ядерно-магнитного резонанса (ЯМР).
[0017] В настоящем изобретении «нефторированная концевая группа» означает концевой элемент, обладающий некоторой степенью реакционной способности и, как правило, называемый «нестабильным концевым элементом», и в частности содержащий такие функциональные группы как -COF, -СООН, связанная с водой -СООН, -СН2ОН, -CONH2 и -СООСН3.
[0018] Общее число нефторированных концевых групп (например функциональных групп, таких, как -COF, -СООН, связанная с водой -СООН, -СН2ОН, -CONH2 и -СООСН3) в предлагаемом фторкаучуке в предпочтительном варианте составляет не более 70 на 1×106 атомов углерода, в более предпочтительном варианте не более 50 на 1×106 атомов углерода, в еще более предпочтительном варианте не более 35 на 1×106 атомов углерода, в еще более предпочтительном варианте не более 15 на 1×106 атомов углерода, в еще более предпочтительном варианте не более 10 на 1×106 атомов углерода, в еще более предпочтительном варианте не более 5 на 1×106 атомов углерода, в наиболее предпочтительном варианте не более 2 на 1×106 атомов углерода.
Т.е. один из объектов настоящего изобретения представляет собой контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, в котором поверхность, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с одной или более концевыми группами -CF3, в котором число нефторированных концевых групп не более 70 на 1×106 атомов углерода.
[0019] Предлагаемый фторкаучук, в частности, включает в себя политетрафторэтилен (ПТФЭ), сополимер (ФЭП - сополимер фтор-этилен-пропилена) на основе тетрафторэтилена (ТФЭ) и гексафторпропилена (ГФП) и перфторалкокси сополимер (ПФА) на основе ТФЭ-перфторалкилвинилового эфира (ПФАВЭ); среди них ФЭП и ПФА могут быть использованы в предпочтительном примере, и ФЭП в менее предпочтительном примере.
[0020] «Сополимер на основе ТФЭ-ГФП» означает сополимер, содержащий по меньшей мере ТФЭ и ГФП. Т.е. «сополимер на основе ТФЭ-ГФП» содержит, в дополнение к двухкомпонентному сополимеру (сополимер ТФЭ / ГФП; ФЭП) ТФЭ и ГФП и к трехкомпонентному сополимеру, такому, как сополимер на основе ТФЭ, ГФП и винилфторида (ВФ) (сополимер ТФЭ/ГФП/ВФ), сополимер на основе ТФЭ, ГФП и винилиденфторида (ВДФ) (сополимер ТФЭ / ГФП / ВДФ) и сополимер на основе ТФЭ, ГФП и перфторалкил-винилового эфира (ПФАВЭ) (сополимер ТФЭ / ГФП / ПФАВЭ), а также к четырехкомпонентному сополимеру, такому как сополимер на основе ТФЭ, ГФП, ВФ и ВДФ (сополимер ТФЭ / ГФП / ВФ / ВДФ), сополимер на основе ТФЭ, ГФП, ВФ и ПФАВЭ (сополимер ТФЭ / ГФП / ВФ / ПФАВЭ) и к пятикомпонентному сополимеру, такому, как сополимер на основе ТФЭ, ГФП, ВФ, ВДФ и ПФАВЭ (сополимер ТФЭ / ГФП / ВФ / ВДФ / ПФАВЭ).
[0021] В предпочтительном варианте сополимер на основе ТФЭ и ГФП представляет собой сополимер ТФЭ / ГФП или сополимер ТФЭ / ГФП / ПФАВЭ. Соотношение масс ТФЭ и ГФП в таком сополимере ТФЭ / ГФП в предпочтительном варианте составляет от 80 до 97 / от 3 до 20, в более предпочтительном варианте от 84 до 92 / от 8 до 16. Далее, соотношение масс ТФЭ, ГФП и ПФАВЭ в сополимере ТФЭ / ГФП / ПФАВЭ в предпочтительном варианте составляет от 70 до 97 / от 3 до 20 / от 0,1 до 10, в более предпочтительном варианте от 81 до 92 / от 5 до 16 / от 0,3 до 5.
[0022] «Сополимер на основе ТФЭ-ПФАВЭ» означает сополимер, содержащий по меньшей мере ТФЭ и ПФАВЭ. Т.е. понятие «сополимер на основе ТФЭ-ПФАВЭ» охватывает, в дополнение к двухкомпонентному сополимеру ТФЭ и ПФАВЭ (сополимер ТФЭ/ПФАВЭ; ПФА), также и трехкомпонентный сополимер, такой как сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ и гексафторпропилена (ГФП) (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ГФП), сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ и винилиденфторида (ВДФ) (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ВДФ) и сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ и хлортрифторэтилена (ХТФЭ) (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ХТФЭ), четырехкомпонентный сополимер, такой, как сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ, ГФП и ВДФ (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ГФП / ВДФ), сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ, ГФП и ХТФЭ (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ГФП / ХТФЭ) и сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ, ВДФ и ХТФЭ (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ВДФ / ХТФЭ), и пятикомпонентный сополимер, такой как сополимер на основе ТФЭ, ПФАВЭ, ГФП, ВДФ и ХТФЭ (сополимер ТФЭ / ПФАВЭ / ГФП / ВДФ / ХТФЭ).
[0023] ПФАВЭ, представляющий собой фрагмент ПФАВЭ, не ограничен, и его примеры могут включать в себя перфтор(метилвиниловый эфир) (ПФМВЭ), перфтор(этилвиниловый эфир) (ПФЭВЭ), перфтор(пропилвиниловый эфир) (ПФПВЭ), перфтор(бутилвиниловый эфир), перфтор(пентилвиниловый эфир), перфтор(гексилвиниловый эфир) и перфтор(гептилвиниловый эфир).
[0024] Соотношение масс ТФЭ и ПФАВЭ в сополимере на основе ТФЭ-ПФАВЭ предпочтительно составляет от 90 до 98 / от 2 до 10, и в более предпочтительном варианте от 92 до 97 / от 3 до 8.
[0025] Предлагаемый фторкаучук может быть изготовлен посредством фторирования концевых групп фторкаучука, синтезированного в соответствии с обычным способом суспензионной полимеризации, эмульсионной полимеризации и т.д., используя известный способ, такой как способ фторирования, в котором перед тем, как фторкаучук экструдируют в расплаве, фторкаучук и фторсодержащее соединение (например, источник фтор-радикалов) контактируют друг с другом для выполнения стабилизационной обработки, и способ, в котором гранулы фторкаучука, полученные после того, как экструдированный в расплаве фторкаучук, и фторсодержащее соединение контактируют друг с другом для выполнения фторирования. Далее, предлагаемый фторкаучук также может быть получен с использованием агента передачи цепи и катализатора полимеризации, способного контролировать концевые группы, вместе с мономером фтора в производстве (реакция полимеризации) фторкаучука. Далее, в качестве предлагаемого фторкаучука могут быть использованы продукты, доступные на рынке. Фторирование также может быть выполнено посредством введения фторсодержащего вещества в контакт с отливками из фторкаучука, например, пленки, отлитые из расплава фторкаучука, контейнеры из пленок, контейнеры, отлитые из фторкаучука. Далее, возможно сочетание этих способов обработки.
Т.е. не требуется, чтобы общее число нефторированных концевых групп и общее число нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H было не более 70 на 1×106 атомов углерода на каждом этапе использования фторкаучуков, гранул или пленок в качестве сырья; достаточно, чтобы на поверхности готового контейнера, соприкасающейся с клетками, общее их число не превышало 70 на 1×106 атомов углерода. Кроме того, в случае с фторкаучуком с одной или более концевыми группами -CF3, отсутствует необходимость в том, чтобы число концевых групп -CF3 составляло один или более на каждом этапе использования фторкаучуков, гранул и пленок в качестве сырья; достаточно, чтобы на поверхности готового контейнера, соприкасающейся с клетками, фторкаучук содержал одну или более концевых групп -CF3.
[0026] Источник фтор-радикалов конкретно не ограничен, но примеры могут включать в себя фторгалогенид, такой как IF5, ClF3, газообразный F2, CoF3, AgF2, UF6, OF2, N2F2 и CF3OF. Газообразный F2 в некоторых случаях может быть использован в концентрации 100%, но из соображений безопасности используется в смеси с инертным газом и разбавляется до диапазона от 5 до 50 масс. %, предпочтительно от 15 до 30 масс. %. Примеры инертного газа включают в себя азот, гелий, аргон, но с точки зрения экономической эффективности предпочтительно использование азота.
[0027] Фторирование выполняют при температуре предпочтительно от 20 до 220°C, и более предпочтительно от 100 до 200°C. Фторирование выполняют предпочтительно в течение от 5 до 30 ч, и более предпочтительно - от 10 до 20 ч.
[0028] Контейнер, полученный в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой, как вариант, контейнер, в котором контролируются среднеарифметическая шероховатость (Ra) поверхности, среднеквадратическая шероховатость (RMS) поверхности и свободная энергия поверхности. Примеры контейнера включают в себя контейнеры с шероховатостью Ra внутренней поверхности контейнера от 3,5 до 6,5 нм, шероховатостью RMS поверхности от 4,5 до 8,0 нм, свободной энергией поверхности от 16,5 до 18,5 мДж/м2.
[0029] Примеры форм контейнера в соответствии с настоящим изобретением включают в себя чашку, луночный планшет, мешок, бутыль, центрифужную пробирку, колбу, шприц, трубку; при этом если контейнер, в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой контейнер для введения клеток, то он предпочтительно представляет собой шприц, мешок (для капельницы), бутыль (для капельницы) и трубка; если контейнер, в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой контейнер для хранения клеток, то он предпочтительно представляет собой чашку, луночный планшет, мешок, бутыль, центрифужную пробирку и колбу; если контейнер, в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой контейнер для культивирования клеток, то он предпочтительно представляет собой планшет, луночный планшет, мешок и бутыль. В частности, контейнер в соответствии с настоящим изобретением, в форме мешка можно привести в качестве примера, поскольку он может применяться для любой области: введение, хранение и культивирование.
[0030] Чашка, луночный планшет, мешок, бутыль, центрифужная пробирка, колба, шприц, трубка и т.д. могут быть изготовлены способами формования, в том числе литье под давлением, экструзия, трансферное прессование, прессование, литье с раздувом, инжекционное литье, центробежное литье, экструзия пенопласта в сочетании со средствами уплотнения, такими как заварка, запайка, ультразвуковая сварка.
[0031] В частности, мешок может быть изготовлен складыванием пленок (листов) из предлагаемого фторкаучука и нагревом краев с использованием машину для импульсной сварки.
[0032] В качестве пленки, используемой для изготовления мешка, может быть использована однослойная пленка или многослойная пленка, состоящая из двух или более слоев; при этом если пленка состоит из нескольких слоев, достаточно изготовить мешок так, чтобы, по меньшей мере, внутренняя поверхность, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, была слоем из предлагаемого фторкаучука, при этом остальные пленочные слои могут быть изготовлены из материала, отличного от предлагаемого фторкаучука (например, из полиолефинового каучука). Склеивание слоев выполняется с использованием таких способов, как способ горячего ламинирования, способ горячего прессования, способ высокочастотного нагрева, формование окунанием в раствор, ламинирование способом экструзии.
[0033] Кроме того, контейнер в соответствии с настоящим изобретением также может быть получен посредством обработки базового материала, такого как чашка, луночный планшет, мешок, бутыль, центрифужная пробирка, колба, шприц и трубка из стекла, металла, каучука и т.д. с нанесением покрытия, состоящего из предлагаемого фторкаучука. Любые способы могут быть применены в зависимости от формы базового материала. Примеры обработки с нанесением покрытия включают в себя нанесение покрытия методом центрифугирования, напыление, нанесение покрытия с удалением излишков с помощью планки, нанесение покрытий валиком, окунание, нанесение покрытия кистью, ротационная футеровка и электростатическое нанесение покрытия. На базовый материал наносится покрытие из фторкаучукового покрывающего агента, после этого выполняется сушка и высокотемпературная обработка для получения слоя покрытия. Толщина слоя подбирается по необходимости, с возможностью нанесения фторкаучукового покрытия из настоящего фторкаучука в два слоя.
[0034] Контейнер в соответствии с настоящим изобретением может быть использован, например, для криоконсервации жидкой среды, содержащей клетки млекопитающих, при этом среда, содержащая клетки млекопитающих, хранится (по меньшей мере 6 ч) при температуре, при которой жидкая среда на замерзает (обычно в диапазоне от 0 до 37°C, предпочтительно от 0 до 25°C (комнатная температура)), для производства культуры плавающих или адгезивных клеток млекопитающих в больших количествах посредством способа суспензионной культивации, или для ввода (трансплантации) жидкой среды, содержащей клетки млекопитающих, без перемещения в другой контейнер после ее хранения при температуре, при которой жидкая среда не замерзает.
[0035] Далее настоящее изобретение будет раскрыто более подробно на примерах, однако объем настоящего изобретения не ограничен этими примерами.
Пример 1
[0036] 1. Изготовление культуральных мешков
Три вида пленки размером 16 см × 15 см, толщиной 100 мкм запаивают посредством машины для импульсной сварки в условиях выдержки в течение 50 с, давления 0,2 МПа, с шириной свариваемой области 5 мм, чтобы получить 12 видов культуральных мешков (мешки от А до С (образцы сравнительных примеров 1-3), мешки от D до G (образцы примеров 1-4), мешок Н (образец сравнительного примера 4), мешки от I до K (образцы примеров 5-7) и мешок L (образец сравнительного примера 5)) (см. таблицу 2). В данном случае для культурального мешка М (образец сравнительного примера 6) используется культуральный мешок из поливинилхлорида (полученный посредством обработки квадратного мешка АСР-АМР Kawasumi, изготовленного компанией «Kawasumi Laboratories, Inc.») (см. таблицу 2).
[0037] 1.1. Измерение числа нефторированных концевых групп и числа концевых групп -CF2H
Образцы соответствующих каучуков толщиной около 250-300 мкм были изготовлены и проанализированы инфракрасной спектроскопией с использованием преобразования Фурье на спектрометре 1760Х (изготовлен компанией «PerkinElmer, Inc.»).
Образцы соответствующих каучуков толщиной около 250-300 мкм изготовлены посредством «раскатывания» гранул в гидравлическом прессе. Измерения были выполнены с использованием пленок (изготовленных из гранул посредством формования из расплава), представляющих собой культуральные мешки как они есть, если при этом толщина оказывалась недостаточной, то пленки накладывались друг на друга в несколько слоев.
[0038] Получены дифференциальные спектры стандартных образцов (образцов, фторированных достаточно до тех пор, пока по существу не исчезнет разность спектров); зафиксированы поглощения каждого пика; и рассчитано число нефторированных концевых групп и число концевых групп -CF2H на 1×106 атомов углерода для каждого образца с использованием следующего уравнения. Число нефторированных концевых групп и число концевых групп -CF2H в каждом культуральном мешке А-М показано в таблице 2.
k: поправочный коэффициент (см. таблицу 1),
t: толщина образца (мм).
Столбец «До изготовления культурального мешка» в таблице означает, что образцы получены посредством «раскатывания» фторкаучуковых гранул, используемых для изготовления культурального мешка.
Столбец «После изготовления культурального мешка» в таблице означает, что образцы получены из пленок (изготовленных посредством формования из расплава из гранул), образующих культуральные мешки.
[0042] 1.2. Измерение наличия / отсутствия концевой группы -CF3
Соответствующие каучуковые пленки были расплавлены при температуре 370°C, и из них изготовили нити; затем их спектры были измерены посредством высокотемпературного ядерно-магнитного резонанса на ядрах 19F на ЯМР-спектрометре AVANCE 300WB (изготовлен компанией «Bruker Corp.»).
[0043] Получены разностные спектры от нитей, изготовленных посредством расплава каучуков с тем же самым составным соотношением, как и у соответствующих смол, и в которых отсутствуют концевые группы -CF3; когда пик наблюдался при δ=-82 ppm, принималось решение о присутствии концевых групп -CF3, и когда пик не наблюдался при δ=-82 ppm, принималось решение об отсутствии концевых групп -CF3. Наличие / отсутствие концевых групп -CF3 в каждом из культуральных мешков А-М показано в таблице 3.
Пример 2
[0045] 2. Хранение в культуральном мешке человеческих костномозговых мезенхимальных стволовых клеток (чМСК)
В случае хранения клеток в культуральном мешке, изготовленном по примеру 1, было проанализировано, происходит ли предотвращение адгезии, чтобы обеспечить возможность хранения клеток в плавающем состоянии.
[0046] 2.1. Способ
2.1.1. Приготовление жидкой среды для хранения клеток
Инъекция Lactec®, содержащая 6,0 масс. / об. % трегалозу (изготовлена компанией «Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.») и инъекция низкомолекулярного декстрана L (инъекция Lactec, содержащая 10 масс. / об. % декстрана) (изготовлена компанией «Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc.») были смешаны в соотношении 1:1 для приготовления жидкой среды для хранения клеток.
[0047] 2.1.2. Приготовление клеток млекопитающих
[1] 4×105 чМСК (изготовлены компанией «Lonza Ltd.», РТ-2501) были культивированы в присутствии культуральной среды мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (МСК) (изготовлена компанией Lonza Ltd.», РТ-3001) в колбе 75 см2, в инкубаторе при температуре 37°C в 5% CO2, и субкультивированы с конфлюэнтностью ок. 90% обычным способом.
[2] Культуральную среду для субкультивированных чМСК (клетки субкультивированы три раза, конфлюэнтность ок. 100%) был удален аспиратором; чМСК промыли фосфатно-солевым буферным раствором (ФСБР, изготовлен компанией «Invitrogen Corp.») в количестве 8 мл на колбу.
[3] ФСБР был удален аспиратором; и был добавлен трипсин-ЭДТА (изготовлен компанией «Lonza Ltd.», СС-3232) в количестве 3,75 мл на колбу и выдержан при комнатной температуре в течение 5 мин.
[4] Полученное было медленно встряхивали, пока ок. 90% чМСК не было очищено под наблюдением под микроскопом.
[5] Культуральная среда МСК в количестве 3,75 мл на колбу была добавлена, чтобы остановить реакцию с трипсином; чМСК извлекли капельно и перенесли в центрифужную пробирку объемом 50 мл.
[6] Полученное было подвергнуто центрифугированию при 600×g в течение 5 мин. при температуре 25°C.
[7] Надосадочную жидкость была удаена аспиратором; добавлена жидкая среда для хранения клеток в количестве 3 мл на колбу, и осадочные чМСК были суспензиронаны.
[8] Было отобрано 10 мкл жидкой суспензии чМСК-КМ; количество клеток было измерено с использованием пластины для подсчета клеток; жидкая среда для хранения клеток была добавлена так, что количество клеток доведено до 5×105 клеток/мл, затем полученное было охлаждено льдом.
[0048] 2.1.3. Хранение клеток млекопитающих
[1] Был выполнен посев 3 мл жидкой среды для хранения клеток, содержащей 5×105 клеток чМСК / мл в каждый из 13 типов культуральных мешков А-М.
[2] После успокоения клеточной суспензионной массы и выдержки в течение 6 ч в инкубаторе (25°C, 5% CO2) (изготовлен компанией «As One Co., Ltd.», PIC 100), часть ее (20 мкл) была извлечена и смешана с 20 мкл 0,4% трипанового синего (изготовлен компанией «Gibco»); концентрацию клеток и число живых клеток в клеточной суспензии измерили под микроскопом (ECLIPSE TS100, изготовлен компанией «Nikon Corp.») с использованием пластин для подсчета клеток; рассчитали соответствующие коэффициент извлечения клеток (см. таблицу 4, 7 и 10) и коэффициент выживаемости клеток (см. таблицу 5, 8 и 11). Затем часть мешка была разрезана ножницами и положена на 6-луночный планшет; и было выполнено наблюдение за адгезией клеток к мешку под микроскопом (IX-70, изготовлен компанией «Olympus Corp.»). В данном случае результаты, представленные в таблицах 4-6, 7-9 и 10-12, были получены в результате независимых экспериментов (с различным временем приготовления чМСК).
Коэффициент извлечения клеток (%) обозначает отношение общего числа клеток в суспензии после хранения и общего числа клеток в суспензии сразу после начала хранения («До») ([общее число клеток в суспензии после хранения / общее число клеток в суспензии сразу после начала хранения («До») × 100]) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в этой таблице значки «**» и «***» указывают на статистически значимое расхождение (р<0,01 и р<0,001 соответственно) от культурального мешка L (образец сравнительного примера 5) по методу Даннетта.
Коэффициент выживаемости клеток (%) указан как отношение числа живых клеток и общего числа клеток в клеточной суспензии ([число живых клеток в клеточной суспензии / общее число клеток в клеточной суспензии × 100]) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в этой таблице значок «*» указывает на статистически значимое расхождение (р<0,05) от культурального мешка L (образец сравнительного примера 5) по методу Даннетта.
Коэффициент извлечения живых клеток указан как значение коэффициента извлечения клеток, умноженное на значение коэффициента выживаемости клеток (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в этой таблице значки «**» и «***» указывают на статистически значимое расхождение (р<0,01 и р<0,001 соответственно) от культурального мешка L (образец сравнительного примера 5) по методу Даннетта.
[0052] 2.2. Результаты
Коэффициент извлечения чМСК после хранения, как показано в таблице 4, в случае с использованием культуральных мешков А, В, С, Н, L и М (образцы сравнительных примеров 1, 2, 3, 4, 5 и 6), составил 39%, 43%, 34%, 40%, 38%) и 36% соответственно, а при использовании культуральных мешков D, F, G, J и K (образцы примеров 1, 3, 4, 6 и 7) соответственно 50%, 69%, 99%, 70% и 80%.
[0053] Далее, коэффициент выживаемости чМСК после хранения, как показано в таблице 5, в случае использования культуральных мешков D, F, G, J и K (образцы примеров 1, 3, 4, 6 и 7), составил соответственно 93%, 96%, 93%, 95% и 96%, в любом случае показатель достиг значения 90% и выше.
[0054] Следовательно, коэффициенты извлечения (коэффициент выживаемости клеток × коэффициент извлечения клеток) чМСК после хранения, как показано в таблице 6, оказались выше (46%, 66%, 92%, 66% и 77% соответственно) при хранении в культуральных мешках D, F, G, J и K (примерные образцы 1, 3, 4, 6 и 7) по сравнению с (34%, 37%, 31%, 37%, 31% и 32% соответственно) хранением в культуральных мешках А, В, С, Н, L и М (образец сравнительного примера 1, 2, 3, 4, 5 и 6).
Коэффициент извлечения клеток (%) указан как отношение общего числа клеток в клеточной суспензии после хранения и общего числа клеток в суспензии сразу после начала хранения («До») ([общее число клеток в клеточной суспензии после хранения / общее число клеток в суспензии сразу после начала хранения («До») × 100]) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в этой таблице значок «***» указывает на статистически значимое расхождение (р<0,001) относительно культурального мешка L (образец сравнительного примера 5) по методу Даннетта.
Коэффициент выживаемости клеток (%) указан как отношение числа живых клеток и общего числа клеток в клеточной суспензии ([число живых клеток в клеточной суспензии / общее число клеток в клеточной суспензии × 100]) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3).
Коэффициент извлечения живых клеток указан как значение коэффициента извлечения клеток, умноженное на значение коэффициента выживаемости (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в этой таблице значок «***» указывает на статистически значимое расхождение (р<0,001) относительно культурального мешка L (образец сравнительного примера 5) по методу Даннетта.
[0058] 2.3. Результаты
Коэффициент извлечения чМСК после хранения, как показано в таблице 7, составил в случае использования культуральных мешков В и L (образцы сравнительных примеров 2 и 5) 30% и 25% соответственно, а при использовании культурального мешка G (образец примера 4) - 80%.
[0059] Кроме того, коэффициент выживаемости чМСК после хранения, как показано в таблице 8, при использовании культурального мешка G (образец примера 4) составил 95%.
[0060] Следовательно, коэффициенты извлечения (коэффициент выживаемости клеток × коэффициент извлечения клеток) чМСК, выживших после хранения, как показано в таблице 9, оказались выше (76%) при хранении в культуральном мешке G (образец примера 4), чем при хранении в культуральном мешке В и L (27% × 22% соответственно) (образцы сравнительных примеров 2 и 5).
Коэффициент извлечения клеток (%) указан как отношение общего числа клеток в клеточной суспензии после хранения к общему числу клеток в клеточной суспензии сразу после начала хранения («До») (общее число клеток в клеточной суспензии после хранения / общее число клеток в клеточной суспензии сразу после начала хранения («До») × 100) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в таблице «*» указывает на статистически значимое расхождение (р<0,05) относительно культурального мешка В (образец сравнительного примера 2) по методу Даннетта.
Коэффициент выживаемости клеток (%) указан как отношение числа живых клеток и общего числа клеток в клеточной суспензии (число живых клеток в клеточной суспензии / общее число клеток в клеточной суспензии × 100) (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3).
Коэффициент извлечения живых клеток указан как значение коэффициента извлечения клеток, умноженное на значение коэффициента выживаемости клеток (среднее значение ± стандартное отклонение, n=3). В данном случае в таблице «*» указывает на статистически значимое расхождение (р<0,05) относительно культурального мешка В (образец сравнительного примера 2) по методу Даннетта.
[0064] 2-4 Результаты
Коэффициент извлечения чМСК после хранения, как показано в таблице 10, при использовании культурального мешка В (образец сравнительного примера 2), составил 49%, а при использовании культуральных мешков Е, F, I и K (образцы примеров 2, 3, 5 и 7) - 83%, 75%, 84% и 67% соответственно.
[0065] Кроме того, коэффициенты выживаемости чМСК после хранения, как показано в таблице 11, в случае использования культуральных мешков Е, F, I и K (образцы примеров 2, 3, 5 и 7), были равны 93%, 93%, 91% и 92% соответственно, в любом случае показатель достиг значения 90% и выше.
[0066] Следовательно, коэффициенты извлечения (коэффициент выживаемости клеток × коэффициент извлечения клеток) чМСК, выживших после хранения, как показано в таблице 12, оказались выше (77%, 69%, 76% и 61% соответственно) при хранении в культуральных мешках Е, F, I и K (образцы примеров 2, 3, 5 и 7), чем при хранении в культуральном мешке В (45%) (образец сравнительного примера 2).
[0067] Кроме того, чМСК после хранения прилипают к внутренней поверхности культуральных мешков А-С, Н, L и М (образцы сравнительных примеров 1-3, 4, 5 и 6), и, наоборот, адгезивность к внутренней поверхности культуральных мешков D-G и I-K предотвращена (образцы примеров 1-4, 5-7); в частности, чМСК практически не прилипали к внутренней поверхности культуральных мешков Е-G и I-K (образцы примеров 2-4 и 5-7).
Результаты показывают, что адгезивность живых клеток в значительной степени снижена при хранении клеток в культуральных мешках D-G и I-K (образцы примеров 1-4 и 5-7) по сравнению с хранением клеток в культуральных мешках А-С, Н, L и М (образцы сравнительных примеров 1-3, 4, 5 и 6).
Пример 3
[0068] 3. Культивирование клеток 10Т1/2, полученных из мезенхимальных стволовых клеток мышей, с использованием культурального мешка
При выполнении культивирования клеток с использованием культуральных мешков, изготовленных по примеру 1, проанализирована возможность предотвращения адгезии, чтобы обеспечить культивирование клеток в плавающем состоянии.
[0069] 3.1. Способ
[1] Клетки 10Т1/2, полученные из мезенхимальных стволовых клеток мышей, взвесили в культуральной среде DMEM (изготовлена компанией «Nacalai Tesque, Inc.», 08458-45), содержащей 10% FBS (изготовлено компанией technologies Corp.» по стандарту компании «Gibco»), с доведением концентрации до уровня 1,0×105 клеток / мл; выполнили посев 3 мл суспензии в два вида культуральных мешков: В (образец сравнительного примера 2) и G (образец примера 4).
[2] Культивирование выполняли в инкубаторе (37°C, 5% CO2); часть (10 мкл) каждой клеточной суспензии извлекли через 4 ч, 1, 2, 3 и 6 дней и смешали с 10 мкл 0,4%-го трипанового синего (изготовлен компанией «Gibco»); число живых клеток измерили с использованием пластины для подсчета клеток, рассчитали коэффициент выживаемости клеток. Далее, наблюдение за клетками, прилипшими к культуральным мешкам, выполняли через оптический микроскоп (изготовлен компанией «Nikon Corp.»).
[0070] 3.2. Результаты
Коэффициент выживаемости клеток 10Т1/2 после культивирования составил 70% и выше в обоих случаях с использованием культурального мешка G (образец примера 4) и культурального мешка В (образец сравнительного примера 2). А доля клеток 10Т1/2, прилипших к внутренней поверхности мешка после культивирования, оказалась ниже при использовании культурального мешка G по сравнению с культуральным мешком В.
Результат показывает, что адгезивность живых клеток может быть значительно снижена при культивировании клеток в культуральном мешке G (образец примера 4) по сравнению с культивированием клеток в культуральном мешке В (образец сравнительного примера 2).
[0071] Результаты примеров 1-3 показывают, что при введении, хранении или культивировании с использованием культуральных мешков D-G и I-K (образцы примеров 1-7) клеточная адгезия к внутренней поверхности контейнера может быть эффективно предотвращена, и коэффициент выживаемости клеток может быть эффективно улучшен, при этом возможно введение, хранение или приготовление среды, содержащей клетки, с высокой концентрацией клеток и с высокой долей живых клеток.
Промышленная применимость
[0072] В соответствии с настоящим изобретением возможно введение, хранение или приготовление среды, содержащей высокую концентрацию клеток и высокую долю живых клеток, что способствует регенеративной медицине с использованием сред (суспензий), содержащих клетки млекопитающих.
Claims (5)
1. Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих, в котором поверхность контейнера, соприкасающаяся с клетками млекопитающих, образована из фторкаучука с общим числом нефторированных концевых групп и концевых групп -CF2H во фторкаучуке не более 70 на 1×106 атомов углерода.
2. Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по п. 1, в котором фторкаучук представляет собой один из фторкаучуков, выбранных из следующей группы: сополимер на основе тетрафторэтилена и гексафторпропилена, сополимер на основе тетрафторэтилена и перфторалкил-винилового эфира.
3. Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по п. 1 или 2, причем контейнер представляет собой мешок.
4. Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по п. 3, причем клетки млекопитающих представляют собой адгезивные клетки.
5. Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток млекопитающих по п. 3, причем клетки млекопитающих представляют собой мезенхимальные стволовые клетки.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015-142201 | 2015-07-16 | ||
JP2015142201 | 2015-07-16 | ||
JP2016-004339 | 2016-01-13 | ||
JP2016004339 | 2016-01-13 | ||
PCT/JP2016/003319 WO2017010100A1 (ja) | 2015-07-16 | 2016-07-14 | 細胞投与用、保存用、又は培養用容器 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2671472C1 true RU2671472C1 (ru) | 2018-10-31 |
Family
ID=57757256
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018105093A RU2671472C1 (ru) | 2015-07-16 | 2016-07-14 | Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10961493B2 (ru) |
EP (1) | EP3323878A4 (ru) |
JP (2) | JP6872481B2 (ru) |
KR (1) | KR102040736B1 (ru) |
CN (1) | CN107849511B (ru) |
AU (1) | AU2016293661B2 (ru) |
BR (1) | BR112018000658B1 (ru) |
CA (1) | CA2991291C (ru) |
HK (2) | HK1247235A1 (ru) |
MX (1) | MX2018000589A (ru) |
MY (1) | MY182101A (ru) |
NZ (1) | NZ738915A (ru) |
PH (1) | PH12018550003A1 (ru) |
RU (1) | RU2671472C1 (ru) |
SG (1) | SG11201800273PA (ru) |
TW (2) | TWI725977B (ru) |
WO (1) | WO2017010100A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102600965B1 (ko) * | 2017-01-18 | 2023-11-13 | 다이킨 고교 가부시키가이샤 | 단백질 저흡착성을 갖는 단백질 혹은 단백질을 포함하는 조성물의 투여용, 보존용, 운반용 또는 수송용 용기 및 단백질 혹은 단백질 조성물의 제조용 기재 |
JPWO2020122225A1 (ja) | 2018-12-13 | 2021-10-21 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 | 細胞培養器具および細胞の処理方法 |
CN113321835B (zh) * | 2021-05-21 | 2024-04-05 | 江苏康进医疗器材有限公司 | 一种用于细胞培养袋的薄膜、制备工艺及细胞培养袋 |
WO2023162943A1 (ja) * | 2022-02-25 | 2023-08-31 | ダイキン工業株式会社 | 細胞、核酸、又はタンパク質の凍結保存用のシリンジ |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070020754A1 (en) * | 2003-10-20 | 2007-01-25 | Rui Yuge | Cell handling device, human tissue regeneration composition, and human tissue regeneration method |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2726708B2 (ja) | 1989-08-01 | 1998-03-11 | 株式会社ニッショー | 細胞培養用バッグ |
EP0447539A1 (en) * | 1989-10-06 | 1991-09-25 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Extrusion process for difficultly-melt-processible polymers |
JPH0698756A (ja) | 1992-09-18 | 1994-04-12 | Nissho Corp | 付着性細胞培養用バツグ |
JP3962153B2 (ja) | 1998-03-25 | 2007-08-22 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 改良された防汚性を有する食品加熱加工器具 |
CN100497580C (zh) * | 2003-10-20 | 2009-06-10 | 株式会社Jms | 细胞处理装置、组织再生用组合物及组织再生方法 |
DE602004027068D1 (de) * | 2003-11-20 | 2010-06-17 | Daikin Ind Ltd | Verfahren zur herstellung von fluorhaltigen polymeren und fluorhaltige polymere |
US20070292945A1 (en) | 2004-03-25 | 2007-12-20 | Lin Wenglong R | Cell Culture Apparatus and Methods |
JP4887222B2 (ja) | 2006-06-16 | 2012-02-29 | ニプロ株式会社 | 細胞培養容器、その製造方法、及び細胞培養方法 |
CN107306937A (zh) * | 2011-02-18 | 2017-11-03 | 永生细胞公司 | 干细胞的包装和运输 |
US10280390B2 (en) | 2014-12-22 | 2019-05-07 | Saint-Gobain Performance Plastics Corporation | System for culture of cells in a controlled environment |
US10655097B2 (en) | 2014-12-22 | 2020-05-19 | Saint-Gobain Performance Plastics Corporation | T-cell culture double bag assembly |
WO2016121994A1 (ja) | 2015-01-29 | 2016-08-04 | ダイキン工業株式会社 | 細胞培養器材 |
JP2016146777A (ja) | 2015-02-12 | 2016-08-18 | ダイキン工業株式会社 | 細胞培養用バッグ及びそれを用いた細胞培養方法 |
-
2016
- 2016-07-14 AU AU2016293661A patent/AU2016293661B2/en active Active
- 2016-07-14 JP JP2017528293A patent/JP6872481B2/ja active Active
- 2016-07-14 NZ NZ738915A patent/NZ738915A/en unknown
- 2016-07-14 CA CA2991291A patent/CA2991291C/en active Active
- 2016-07-14 WO PCT/JP2016/003319 patent/WO2017010100A1/ja active Application Filing
- 2016-07-14 TW TW105122219A patent/TWI725977B/zh active
- 2016-07-14 BR BR112018000658-0A patent/BR112018000658B1/pt active IP Right Grant
- 2016-07-14 RU RU2018105093A patent/RU2671472C1/ru active
- 2016-07-14 KR KR1020187003059A patent/KR102040736B1/ko active IP Right Grant
- 2016-07-14 EP EP16824084.4A patent/EP3323878A4/en active Pending
- 2016-07-14 MX MX2018000589A patent/MX2018000589A/es unknown
- 2016-07-14 MY MYPI2018700168A patent/MY182101A/en unknown
- 2016-07-14 SG SG11201800273PA patent/SG11201800273PA/en unknown
- 2016-07-14 US US15/743,913 patent/US10961493B2/en active Active
- 2016-07-14 CN CN201680041189.6A patent/CN107849511B/zh active Active
- 2016-07-14 TW TW110104805A patent/TW202126803A/zh unknown
-
2018
- 2018-01-15 PH PH12018550003A patent/PH12018550003A1/en unknown
- 2018-05-28 HK HK18106932.8A patent/HK1247235A1/zh unknown
- 2018-07-06 HK HK18108812.9A patent/HK1249129A1/zh unknown
-
2021
- 2021-03-03 JP JP2021033697A patent/JP2021078525A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070020754A1 (en) * | 2003-10-20 | 2007-01-25 | Rui Yuge | Cell handling device, human tissue regeneration composition, and human tissue regeneration method |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
БЕЙДЕР Э.Я., ДОНСКОЙ А.А. и др., Опыт применения фторполимерных материалов в авиационной технике // Российский химический журнал, т. LII, N 3, 2008, стр.1-44. ЕВСЮКОВА Н.В., Влияние технологических факторов и структуры модификаторов на гидрофобные свойства волокнистых материалов и изделий легкой промышленности // АВТО, Москва, 2010, стр.1-24. * |
БЕЙДЕР Э.Я., ДОНСКОЙ А.А. и др., Опыт применения фторполимерных материалов в авиационной технике // Российский химический журнал, т. LII, N 3, 2008, стр.1-44. ЕВСЮКОВА Н.В., Влияние технологических факторов и структуры модификаторов на гидрофобные свойства волокнистых материалов и изделий легкой промышленности // АВТОРЕФЕРАТ, Москва, 2010, стр.1-24. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PH12018550003A1 (en) | 2018-07-09 |
WO2017010100A1 (ja) | 2017-01-19 |
EP3323878A1 (en) | 2018-05-23 |
EP3323878A4 (en) | 2019-03-27 |
SG11201800273PA (en) | 2018-02-27 |
BR112018000658A2 (pt) | 2018-09-18 |
CA2991291A1 (en) | 2017-01-19 |
MY182101A (en) | 2021-01-18 |
TW202126803A (zh) | 2021-07-16 |
HK1249129A1 (zh) | 2018-10-26 |
JP2021078525A (ja) | 2021-05-27 |
CN107849511A (zh) | 2018-03-27 |
NZ738915A (en) | 2018-12-21 |
TWI725977B (zh) | 2021-05-01 |
BR112018000658B1 (pt) | 2022-05-24 |
US20180201890A1 (en) | 2018-07-19 |
CA2991291C (en) | 2022-06-21 |
JP6872481B2 (ja) | 2021-05-19 |
AU2016293661B2 (en) | 2018-11-08 |
HK1247235A1 (zh) | 2018-09-21 |
CN107849511B (zh) | 2021-06-18 |
JPWO2017010100A1 (ja) | 2018-04-26 |
AU2016293661A1 (en) | 2018-02-01 |
KR102040736B1 (ko) | 2019-11-05 |
KR20180022965A (ko) | 2018-03-06 |
US10961493B2 (en) | 2021-03-30 |
MX2018000589A (es) | 2018-09-06 |
TW201706405A (zh) | 2017-02-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2671472C1 (ru) | Контейнер для введения, хранения или культивирования клеток | |
US9770470B2 (en) | Closed system separation of adherent bone marrow stem cells for regenerative medicine applications | |
JP4907824B2 (ja) | ヒドロゲル | |
CN112118849A (zh) | 交联透明质酸及与prp/bmc的组合 | |
JPWO2016002796A1 (ja) | タンパク質付着防止剤 | |
JP2017025335A (ja) | 温度応答性基材、その製造方法及びその評価方法 | |
JP6214583B2 (ja) | 高分子基材、その用途及びその製造方法 | |
JP6165280B2 (ja) | 細胞培養器材 | |
JPWO2017204306A1 (ja) | タンパク質付着防止剤、硬化物、硬化物の製造方法、および物品 | |
JP6810386B2 (ja) | 低タンパク質吸着性材料、低タンパク質吸着性物品、低細胞付着性材料および低細胞付着性物品 | |
JP2020127439A (ja) | 分化細胞の製造方法、及びその製造方法のために使用する培養バッグ | |
WO2016010147A1 (ja) | タンパク質付着防止剤 | |
JP2016026520A (ja) | タンパク質付着防止用化合物、塗布液および医療用デバイス | |
AU2017395082B2 (en) | Container for administration, storage, delivery or transportation of protein having low protein adsorbability or protein-containing composition, and apparatus for producing protein or protein composition | |
WO2016129220A1 (ja) | 細胞培養用バッグ及びそれを用いた細胞培養方法 | |
JP2017077241A (ja) | 接着性細胞培養用基材、ならびにこれを利用した細胞培養容器および細胞培養方法 | |
WO2023162945A1 (ja) | 凍結保存用のシリンジ | |
WO2023162943A1 (ja) | 細胞、核酸、又はタンパク質の凍結保存用のシリンジ | |
TW202042823A (zh) | 交聯玻尿酸及與prp/bmc的組合 | |
JP2017077240A (ja) | 接着性細胞培養用基材、ならびにこれを利用した細胞培養容器および細胞培養方法 |