RU2668135C1 - Фармацевтическая композиция для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит, в качестве активного ингредиента, смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки или его фракцию - Google Patents
Фармацевтическая композиция для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит, в качестве активного ингредиента, смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки или его фракцию Download PDFInfo
- Publication number
- RU2668135C1 RU2668135C1 RU2017108582A RU2017108582A RU2668135C1 RU 2668135 C1 RU2668135 C1 RU 2668135C1 RU 2017108582 A RU2017108582 A RU 2017108582A RU 2017108582 A RU2017108582 A RU 2017108582A RU 2668135 C1 RU2668135 C1 RU 2668135C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- root
- extract
- angelica
- shrub
- bark
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 498
- 244000061520 Angelica archangelica Species 0.000 title claims abstract description 323
- 235000001287 Guettarda speciosa Nutrition 0.000 title claims abstract description 323
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 title claims abstract description 45
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 16
- 240000005001 Paeonia suffruticosa Species 0.000 title abstract description 3
- 235000003889 Paeonia suffruticosa Nutrition 0.000 title abstract description 3
- 244000236521 Bupleurum rotundifolium Species 0.000 title abstract 3
- 235000015221 Bupleurum rotundifolium Nutrition 0.000 title abstract 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 296
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 190
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 36
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241000736199 Paeonia Species 0.000 claims description 340
- 235000006484 Paeonia officinalis Nutrition 0.000 claims description 340
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 178
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 claims description 54
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 claims description 52
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 39
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims description 29
- 241001466061 Nematomorpha Species 0.000 claims description 24
- UILPJVPSNHJFIK-UHFFFAOYSA-N Paeonol Chemical compound COC1=CC=C(C(C)=O)C(O)=C1 UILPJVPSNHJFIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N Paeoniflorin Chemical compound C([C@]12[C@H]3O[C@]4(O)C[C@](O3)([C@]1(C[C@@H]42)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)OC(=O)C1=CC=CC=C1 YKRGDOXKVOZESV-WRJNSLSBSA-N 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 5
- -1 [(2s, 3as, 5s, 7ar, 8s) -3a-hydroxy-7a-methyl-6-oxohexahydro-2,5-methano-1,3-benzodioxol-8-yl] methylbenzoate Chemical compound 0.000 claims description 4
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 3
- KYWSCMDFVARMPN-MSSMMRRTSA-N Saikosaponin A Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@]([C@H]3[C@]([C@@H]4[C@@]([C@@]5(C[C@H](O)[C@]67CO[C@]5([C@@H]6CC(C)(C)CC7)C=C4)C)(C)CC3)(C)CC2)(C)CO)O[C@@H]([C@@H]1O)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KYWSCMDFVARMPN-MSSMMRRTSA-N 0.000 claims description 3
- OWBAYUXZZWYTAO-UHFFFAOYSA-N (3b,4a,16a)-13,28-epoxy-16,23-dihydroxyolean-11-en-3-yl 6-deoxy-3-o-β-d-glucopyranosyl β-d-galactopyranoside Chemical compound O1C(C)CCCC1OC1C(CO)(C)C(CCC2C3C=CC45OCC6(C5CC(C)(C)CC6)CCC42)C3CC1 OWBAYUXZZWYTAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OLOOJGVNMBJLLR-UHFFFAOYSA-N imperatorin Chemical compound C1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=COC1=C2OCC=C(C)C OLOOJGVNMBJLLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 133
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 72
- 241000920340 Pion Species 0.000 abstract description 2
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 193
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 111
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 69
- PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine Chemical compound C1N(C)CCC(C=2C=CC=CC=2)=C1 PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 49
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 49
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 48
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 43
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 42
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 42
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 37
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 36
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 34
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 29
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 29
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 28
- DIVDFFZHCJEHGG-UHFFFAOYSA-N oxidopamine Chemical compound NCCC1=CC(O)=C(O)C=C1O DIVDFFZHCJEHGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 27
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 27
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 27
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 27
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 26
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 26
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 26
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 26
- 239000001180 angelica archangelica l. root extract Substances 0.000 description 23
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 23
- HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N Thapsigargin Natural products CCCCCCCC(=O)OC1C(OC(O)C(=C/C)C)C(=C2C3OC(=O)C(C)(O)C3(O)C(CC(C)(OC(=O)C)C12)OC(=O)CCC)C HATRDXDCPOXQJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 19
- MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N atrazine Chemical compound CCNC1=NC(Cl)=NC(NC(C)C)=N1 MXWJVTOOROXGIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N thapsigargin Chemical compound CCCC(=O)O[C@H]1C[C@](C)(OC(C)=O)[C@H]2[C@H](OC(=O)CCCCCCC)[C@@H](OC(=O)C(\C)=C/C)C(C)=C2[C@@H]2OC(=O)[C@@](C)(O)[C@]21O IXFPJGBNCFXKPI-FSIHEZPISA-N 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 18
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 17
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 16
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000037041 intracellular level Effects 0.000 description 16
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 15
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 15
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 15
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 15
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 15
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 14
- 230000006950 reactive oxygen species formation Effects 0.000 description 14
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000009227 behaviour therapy Methods 0.000 description 13
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 13
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 13
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 description 13
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 12
- FMGYKKMPNATWHP-UHFFFAOYSA-N Cyperquat Chemical compound C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=CC=C1 FMGYKKMPNATWHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 12
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 11
- 108700041152 Endoplasmic Reticulum Chaperone BiP Proteins 0.000 description 11
- 101150112743 HSPA5 gene Proteins 0.000 description 11
- 101100111629 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) KAR2 gene Proteins 0.000 description 11
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 101150028578 grp78 gene Proteins 0.000 description 11
- 230000006676 mitochondrial damage Effects 0.000 description 11
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 10
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical group N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 10
- ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N tunicamycin Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CC(O)[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)O1)O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N 0.000 description 10
- 102100021451 Endoplasmic reticulum chaperone BiP Human genes 0.000 description 9
- 102100037499 Parkinson disease protein 7 Human genes 0.000 description 9
- 108010032428 Protein Deglycase DJ-1 Proteins 0.000 description 9
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 description 9
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 9
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 8
- 102100035100 Transcription factor p65 Human genes 0.000 description 8
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 7
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N calcein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(O)=O)CC(O)=O)=C(O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(O)=O)CC(=O)O)C(O)=C1 DEGAKNSWVGKMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 7
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 7
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 7
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 229960002378 oftasceine Drugs 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 101150076419 MT-CO3 gene Proteins 0.000 description 6
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 230000034994 death Effects 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 6
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 5
- 101150071263 PARK7 gene Proteins 0.000 description 5
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 5
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 5
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 5
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 5
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 5
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 238000002672 stereotactic surgery Methods 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102100034533 Histone H2AX Human genes 0.000 description 4
- 101001067891 Homo sapiens Histone H2AX Proteins 0.000 description 4
- 101000835023 Homo sapiens Transcription factor A, mitochondrial Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- 102100026155 Transcription factor A, mitochondrial Human genes 0.000 description 4
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 4
- 208000025698 brain inflammatory disease Diseases 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 4
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 4
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 4
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000004065 mitochondrial dysfunction Effects 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 3
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 3
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000619542 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase parkin Proteins 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 241000283220 Odobenus rosmarus Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 101150045355 akt1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 239000002021 butanolic extract Substances 0.000 description 3
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 235000013882 gravy Nutrition 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 210000003935 rough endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 description 3
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCUQOPGIJRGJDA-UHFFFAOYSA-N 1-naphthalen-1-ylethane-1,2-diamine Chemical compound C1=CC=C2C(C(N)CN)=CC=CC2=C1 ZCUQOPGIJRGJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000213006 Angelica dahurica Species 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 235000012766 Cannabis sativa ssp. sativa var. sativa Nutrition 0.000 description 2
- 235000012765 Cannabis sativa ssp. sativa var. spontanea Nutrition 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000060234 Gmelina philippensis Species 0.000 description 2
- 101000605835 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 241001251074 Imperator Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010020246 Leucine-Rich Repeat Serine-Threonine Protein Kinase-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100032693 Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 2 Human genes 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 102100036201 Oxygen-dependent coproporphyrinogen-III oxidase, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 241000644027 Perideridia lemmonii Species 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100021117 Serine protease HTRA2, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 102100038376 Serine/threonine-protein kinase PINK1, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 244000150738 Sesamum radiatum Species 0.000 description 2
- 102000000887 Transcription factor STAT Human genes 0.000 description 2
- 108050007918 Transcription factor STAT Proteins 0.000 description 2
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 2
- 235000007215 black sesame Nutrition 0.000 description 2
- 235000021329 brown rice Nutrition 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 235000009120 camo Nutrition 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 235000005607 chanvre indien Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 238000000802 evaporation-induced self-assembly Methods 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000011487 hemp Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008798 inflammatory stress Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- IGWDEVSBEKYORK-UHFFFAOYSA-N isoimperatorin Chemical compound O1C(=O)C=CC2=C1C=C1OC=CC1=C2OCC=C(C)C IGWDEVSBEKYORK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 230000005787 mitochondrial ATP synthesis coupled electron transport Effects 0.000 description 2
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 102000045222 parkin Human genes 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N permethrin Chemical compound CC1(C)C(C=C(Cl)Cl)C1C(=O)OCC1=CC=CC(OC=2C=CC=CC=2)=C1 RLLPVAHGXHCWKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000009822 protein phosphorylation Effects 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 210000000783 smooth endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- QTAGQHZOLRFCBU-CYBMUJFWSA-N (+)-oxypeucedanin Chemical compound CC1(C)O[C@@H]1COC1=C(C=CO2)C2=CC2=C1C=CC(=O)O2 QTAGQHZOLRFCBU-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 10,10-dioxo-2-[4-(N-phenylanilino)phenyl]thioxanthen-9-one Chemical compound O=C1c2ccccc2S(=O)(=O)c2ccc(cc12)-c1ccc(cc1)N(c1ccccc1)c1ccccc1 FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPSAEGUNYMEKBP-UHFFFAOYSA-N 5-Isopentenyloxy-psoralen Natural products CC(C)C=COc1c2C=CC(=O)Oc2cc3occc13 ZPSAEGUNYMEKBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 6-oxabicyclo[3.2.1]oct-3-en-7-one Chemical compound C1C2C(=O)OC1C=CC2 TVEXGJYMHHTVKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- BEYIWVKWKJROGZ-UHFFFAOYSA-N Alloimperatorin Natural products O1C(=O)C=CC2=C1C(O)=C1OC=CC1=C2OCC=C(C)C BEYIWVKWKJROGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000208173 Apiaceae Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006100 Bradykinesia Diseases 0.000 description 1
- 241000202722 Bupleurum falcatum Species 0.000 description 1
- ORBITTMJKIGFNH-LLVKDONJSA-N Byakangelicol Chemical compound C1=2OC(=O)C=CC=2C(OC)=C2C=COC2=C1OC[C@H]1OC1(C)C ORBITTMJKIGFNH-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 244000077995 Coix lacryma jobi Species 0.000 description 1
- 235000007354 Coix lacryma jobi Nutrition 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 1
- 108090000365 Cytochrome-c oxidases Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100022207 E3 ubiquitin-protein ligase parkin Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 101150069138 HtrA2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 101150098499 III gene Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000002 MTT assay Toxicity 0.000 description 1
- 238000000134 MTT assay Methods 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- KGGUASRIGLRPAX-UHFFFAOYSA-N Meranzin hydrate Natural products C1=CC(=O)OC2=C(CC(O)C(C)(C)O)C(OC)=CC=C21 KGGUASRIGLRPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- QTAGQHZOLRFCBU-UHFFFAOYSA-N Oxypeucadanin Natural products CC1(C)OC1COC1=C(C=CO2)C2=CC2=C1C=CC(=O)O2 QTAGQHZOLRFCBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUCBCBCPICFGMZ-UHFFFAOYSA-N Oxypeucedanin Natural products CC1(C)OC1COC1=CC(=O)OC2=C1C=C1C=COC1=C2 NUCBCBCPICFGMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWEVYJRFLDKUCW-UHFFFAOYSA-N Oxypeucedonin-hydrat Natural products CC(C)(O)C(O)Cc1c2C=CC(=O)Oc2cc3occc13 MWEVYJRFLDKUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXARIFJTXNCWNT-UHFFFAOYSA-N Phellopterin Natural products COc1c2C=CC(=O)Oc2c(OC=CC(C)C)c3occc13 XXARIFJTXNCWNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241001417524 Pomacanthidae Species 0.000 description 1
- 244000018795 Prunus mume Species 0.000 description 1
- 235000011158 Prunus mume Nutrition 0.000 description 1
- 240000005049 Prunus salicina Species 0.000 description 1
- 241000405911 Rehmannia glutinosa Species 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- 230000004094 calcium homeostasis Effects 0.000 description 1
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 235000012495 crackers Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000018927 edible plant Nutrition 0.000 description 1
- 230000002884 effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000007902 hard capsule Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000008437 mitochondrial biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004769 mitochondrial stress Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- FCHVXNVDFYXLIL-WRJNSLSBSA-N oxypaeoniflorin Chemical compound C([C@]12[C@H]3O[C@]4(O)C[C@](O3)([C@]1(C[C@@H]42)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FCHVXNVDFYXLIL-WRJNSLSBSA-N 0.000 description 1
- HRWVKZXRZVVBLP-UHFFFAOYSA-N oxypeucedanin hydrate Natural products CC(C)(O)C(O)CCc1c2C=CC(=O)Oc2cc3occc13 HRWVKZXRZVVBLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 229960000342 retinol acetate Drugs 0.000 description 1
- QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N retinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C QGNJRVVDBSJHIZ-QHLGVNSISA-N 0.000 description 1
- 235000019173 retinyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011770 retinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- QLPRYZXNWYTFCI-UHFFFAOYSA-N saikosaponin D Natural products CC1OC(OC2CCC3(C)C(CCC4(C)C3C=CC56OCC7(CCC(C)(C)CC57)C(O)CC46C)C2(C)CO)C(O)C(O)C1OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O QLPRYZXNWYTFCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQPVAGWUNWFCJE-UHFFFAOYSA-N saikosaponin a Natural products CC1OC(OC2CCC3(C)C(C2)C(C)(CO)CC4(C)C3C=CC56OCC7(CCC(C)(C)CC57)C(O)CC46C)C(O)C(OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C1O PQPVAGWUNWFCJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000004371 toothache Diseases 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/65—Paeoniaceae (Peony family), e.g. Chinese peony
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
- A21D13/00—Finished or partly finished bakery products
- A21D13/04—Products made from materials other than rye or wheat flour
- A21D13/047—Products made from materials other than rye or wheat flour from cereals other than rye or wheat, e.g. rice
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
- A21D—TREATMENT, e.g. PRESERVATION, OF FLOUR OR DOUGH, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS; PRESERVATION THEREOF
- A21D13/00—Finished or partly finished bakery products
- A21D13/40—Products characterised by the type, form or use
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
- A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
- A23L13/42—Additives other than enzymes or microorganisms in meat products or meat meals
- A23L13/422—Addition of natural plant hydrocolloids, e.g. gums of cellulose derivatives or of microbial fermentation gums
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
- A23L23/10—Soup concentrates, e.g. powders or cakes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
- A23L7/10—Cereal-derived products
- A23L7/109—Types of pasta, e.g. macaroni or noodles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
- A61K36/232—Angelica
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
- A61K36/233—Bupleurum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
- A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
- A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений содержит экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix) в качестве активного ингредиента в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.), где экстракт экстрагирован с использованием воды, C-Cнизшего спирта или их смеси в качестве растворителя. Способ лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix) в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.) субъекту. Вышеописанная композиция обладает выраженной активностью для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 58 табл., 3 пр., 4 ил.
Description
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Область изобретения
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит смешанный экстракт двух или больше типов, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), или его фракцию в качестве активного ингредиента.
2. Описание связанной области
За последние два десятилетия в мире быстро растет число пациентов с дегенеративными неврологическими нарушениями. При лечении дегенеративного неврологического нарушения наиболее важной стадией является предотвращение. Однако причина заболевания до сих пор не полностью понятна, и, таким образом, способ лечения все еще требует изучения. Общий патологический феномен дегенеративного неврологического нарушения представляет собой гибель клеток центральной нервной системы. В отличие от клеток других органов, регенерация клеток центральной нервной системы почти невозможна после гибели клеток, что ведет к постоянной утрате функции. Способы лечения таких заболеваний головного мозга, разработанные до сегодняшнего времени, преимущественно сосредоточены на анализе механизма гибели самих нервных клеток и предотвращении гибели на основании анализа. В соответствии с результатами последних фундаментальных и клинических исследований болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона, воспалительная реакция в головном мозге является основной причиной гибели нейронов. В действительности, увеличение медиаторов воспаления и реакционно-способного кислорода подтверждено в цереброспинальной жидкости у пациентов с заболеваниями головного мозга. Также множество активных микроглиальных клеток наблюдают в области повреждения головного мозга, которые указывают, что воспаление головного мозга является основной причиной болезни Паркинсона. Следовательно, ингибирование воспаления головного мозга посредством нейроглиальных клеток стало мишенью при лечении дегенеративного неврологического нарушения. Однако терапевтические средства, разработанные до настоящего момента, эффективны только при регулировании симптомов заболевания, но не эффективны при лечении самого дегенеративного неврологического нарушения. Многие загрязнители окружающей среды, воздействию которых постоянно подвержено современное общество, и мутации в генах, являющиеся результатом загрязнителей, вызывают дегенеративное неврологическое нарушение. Следовательно, необходимо разрабатывать профилактическое и терапевтическое средство для дегенеративного неврологического нарушения на основании идеи, полностью отличающейся от стандартных.
Дегенеративное неврологическое нарушение включает болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инсульт, хорею Гентингтона и повреждение спинного мозга и т. д. Среди этих заболеваний болезнь Паркинсона представляет собой второе наиболее распространенное дегенеративное неврологическое нарушение, которое поражает 1-2% корейцев в возрасте старше 60 и 4-5% корейцев в возрасте старше 85. В последнее время болезнь Паркинсона быстро распространяется в Корее среди людей среднего возраста в их 40-50. В предшествующем сообщении предполагалось, что болезнь Паркинсона вызвана недостатком дофамина, который является результатом гибели дофаминергических нейронов в черном веществе и полосатом теле в среднем мозге. Причина избирательной гибели дофаминергических нейронов до сих пор не объяснена. Соответственно, эффективное лечебное средство и диагностический реактив до сих пор не разработаны. Болезнь Паркинсона демонстрирует такие симптомы, как безэмоциональное лицо, ригидность, тремор, согнутая поза и брадикинезия.
В последнее время сделано предположение о том, что нарушение функции митохондрий может быть причиной различных нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Паркинсона. В качестве генов, вызывающих наследственную болезнь Паркинсона (наследственная БП), идентифицировали гены, участвующие в образовании реакционно-способных частиц кислорода (ROS) и протеолизе, такие как PARKl/4 (α-синуклеин), PARK2 (паркин), PARK6 (PTEN-индуцируемая предполагаемая киназа 1, PINK1), PARK7 (DJ-1) и PARK8 (киназа 2 с богатыми лейцином повторами, LRRK2), существующие во внешней мембране митохондрий, и PARK13 (HTRA2/0MI), существующая во внутренней мембране митохондрий (Nat. Clin. Pract. Neurol 2, 136-146, 2006). PINKI, паркин и DJ-1 вовлечены в такие действия в митохондриальной динамике, как разделение и слияние для поддержания сетевой структуры митохондрий (PLoS BioI. 6, e1000298, 2010).
Спорадическая болезнь Паркинсона (спорадическая БП), составляющая 95% всей болезни Паркинсона, также отличается нарушением митохондриальной активности. Известно, что инсектициды/гербициды, такие как паракват и ротенон, являются материалами, вызывающими нарушение активности митохондрий посредством супрессии системы электронного транспорта митохондрий. MPTP (1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин), используемый для создания модели болезни Паркинсона на животных, и его метаболит MPP+ известны в качестве избирательных ингибиторов комплекса 1 системы электронного транспорта митохондрий. Этот пример подсказывает, что избирательная гибель дофаминергических нейронов из-за нарушения митохондриальной функции может являться причиной болезни Паркинсона и одновременно восстановление митохондриальной активности может представлять собой важную мишень для лечения болезни Паркинсона
Внутриклеточную органеллу эндоплазматический ретикулум делят на шероховатый эндоплазматический ретикулум (шероховатый ER, RER) с прикрепленными рибосомами и гладкий эндоплазматический ретикулум (гладкий ER, SER). Основная функция шероховатого эндоплазматического ретикулума состоит в синтезе белка. Синтез приблизительно 1/3 внутриклеточных белков происходит в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме. В то же время, синтез различных липидов и стероидных гормонов происходит в гладком эндоплазматическом ретикулуме. Гладкий ER также играет важную роль в регуляции внутриклеточной концентрации кальция. Однако анормальная укладка белков в силу различных причин вызывает функциональное повреждение эндоплазматического ретикулума, которое называют стрессом эндоплазматического ретикулума. При длительном стрессе эндоплазматического ретикулума, через различные механизмы сигнальной трансдукции, возрастает апоптоз и массивное образование реакционно-способных частиц кислорода (ROS), что ведет к повреждению клеток. Также сообщалось о том, что стресс эндоплазматического ретикулума также является причиной дегенеративных неврологических нарушений, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, инсульт, хорея Гентингтона и повреждение спинного мозга, наряду с метаболическим синдромом, сахарным диабетом, ожирением и дислипидемией, которые опосредованы повреждением митохондрий (Lindholm et al., 2006; Penas et al., 2007; Yoshida, 2007; Zhang et al., 2006).
Кора корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex) представляет собой кору корня Paeonia suffruticosa Andrews, который является лекарственным растением, содержащим пеонол, пеонифлорин, оксипеонифлорин и чесночную кислоту или пеонифлоригенон. В восточной медицине известно, что кора корня пиона полукустарникового эффективна для расслабления, снятия боли, снятия воспаления и, тем самым, лечения воспалительного заболевания. В последнее время стало известно, что кора корня пиона полукустарникового обладает противомикробной, противовоспалительной, антиоксидантной и омолаживающей активностями, а также сообщалось о эффективности лечения ей заболевания головного мозга в качестве компонента различных смесей.
Корень дудника даурского (Angelicae dahuricae Radix) представляет собой сушеный корень Angelica dahurica Bentham et Hooker f. или Angelica dahurica Bentham et Hooker f. var. formosana Shan et Yuan, который представляет собой растение возрастом 2-3 года, которое является эндемиком в Корее, Китае и Японии. Основными биологически активными соединениями корня дудника даурского являются императорин, изоимператорин, оксипеуцеданин, феллоптерин и биакангеликол. В восточной медицине известны различные эффекты корня дудника даурского. В частности, известно, что он эффективен для облегчения потоотделения, успокоения, боли, простуды, головной боли или зубной боли. Однако нет сообщений об участии корня дудника даурского в улучшении митохондриальной функции и снятии стресса эндоплазматического ретикулума с тем, чтобы улучшать эффект лечения нейронального заболевания.
Корень володушки (Bupleuri Radix) представляет собой лекарственное растение, которое относится к корню Bupleurum falcatum Linne или его вариантам (Umbelliferae).
Основные фармакологические активности корня володушки включают различные фармакологические активности, такие как антипиретическая, болеутоляющая, аналгетическая, антибактериальная, противовирусная и противовоспалительная активности. Главными фармакологическими активностями корня володушки являются антипиретическая, болеутоляющая, аналгетическая, антибактериальная, противовирусная и противовоспалительная активности.
Авторы настоящего изобретения пытались разработать терапевтическое средство для дегенеративного неврологического нарушения из съедобных растений. Как результат, авторы изобретения обнаружили, что экстракт смеси из двух или больше типов, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, обладает активностью для восстановления функционального повреждения митохондрий, чтобы ослаблять стресс эндоплазматического ретикулума и одновременно ингибировать воспалительную реакцию, что значительно выше, чем то, что продемонстрировано у каждого отдельного экстракта. Экстракт приведенной выше смеси значительно повышает двигательную координацию и демонстрирует защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны in vivo в модели болезни Паркинсона, так что авторы настоящего изобретения подтвердили, что экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки или их фракция может быть эффективнее в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, что ведет к созданию изобретения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Цель настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить фармацевтическую композицию для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), или его фракцию в качестве активного ингредиента, и здоровой функциональной пище для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит его же.
Для достижения приведенной выше цели настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта приведенной выше смеси в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к здоровой функциональной пище для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к здоровой функциональной пище для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта приведенной выше смеси в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, который включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), субъекту.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), для применения при лечении или предотвращении дегенеративных неврологических нарушений.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, который включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы фракции органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, субъекту.
Кроме того, настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, для применения при лечении или предотвращении дегенеративных неврологических нарушений.
ПОЛЕЗНЫЙ ЭФФЕКТ
Экстракт смеси из двух или больше типов, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), может повышать внутриклеточный уровень АТФ, восстанавливать потенциал поврежденных митохондриальных мембран; и подавлять образование ROS в 1,5 раза сильнее, чем отдельный экстракт, когда функциональное повреждение митохондрий, стресс эндоплазматического ретикулума и воспалительный ответ индуцируют одновременно в модели болезни Паркинсона. Также подтверждали, что экстракт смеси по настоящему изобретению значимо эффективен для улучшения двигательной координации и защиты дофаминергических нейронов в модели болезни Паркинсона на животных, с тем, чтобы экстракт смеси по изобретению или его фракцию можно было эффективно использовать в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для предотвращения и лечения дегенеративного неврологического нарушения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
В заявке предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения легче всего понять со ссылкой на сопроводительные рисунки, на которых:
На фиг. 1 представлено схематическое изображение, которое иллюстрирует процесс создания модели болезни Паркинсона на животном через введение 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (MPTP). В частности, лиофилизированный экстракт в 90% этаноле из смеси, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соотношении 1:1:1, растворяли в 3% HPMC и вводили (перорально, p.o.) тестовой мыши (1, 3 или 10 мг/кг), раз в сутки в течение 14 суток. С 8-х суток эксперимента 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин (MPTP) вводили (интраперитонеально, i.p.) мыши в дозе 30 мг/кг через три часа после перорального введения в течение 5 суток, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Полученную мышиную модель использовали для поведенческого теста. Животное умерщвляли и осуществляли анализ клеток и вестерн-блоттинг.
На фиг. 2 представлено схематическое изображение, которое иллюстрирует процесс создания модели болезни Паркинсона на животном через введение 6-OHDA (6-гидроксидофамин). В частности, 16 мкг 6-OHDA (6-гидроксидофамин) разводили в 2 мл 0,1% аскорбиновой кислоты и инъецировали посредством стереотактического хирургического вмешательства тестовому животному один раз, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Через одну неделю после хирургического вмешательства лиофилизированный экстракт в 90% этаноле из смеси, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соотношении 1:1:1, растворяли в воде и вводили (перорально, p.o.) мыши в дозе 3 мг/кг раз в сутки в течение 7 суток. Полученную мышиную модель использовали для поведенческого теста. Животное умерщвляли и осуществляли анализ клеток и вестерн-блоттинг.
На фиг. 3 представлено схематическое изображение, которое иллюстрирует процесс создания модели болезни Паркинсона на животном через введение ротенона. В частности, лиофилизированный экстракт в 90% этаноле из смеси, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соотношении 1:1:1, растворяли в воде и вводили (перорально, p.o.) крысе в дозе 10 мг/кг раз в сутки в течение 6 недель. Через одну неделю после перорального введения, ротенон инъецировали (интраперитонеально, i.p.) крысе в дозе 2,5 мг/кг раз в сутки в течение 5 недель, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Полученную крысиную модель использовали для поведенческого теста. Животное умерщвляли и осуществляли анализ клеток и вестерн-блоттинг.
На фиг. 4 представлено схематическое изображение, которое иллюстрирует процесс создания модели болезни Паркинсона на животном через введение LPS (липополисахарид). В частности, лиофилизированный экстракт в 90% этаноле из смеси, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соотношении 1:1:1, растворяли в воде и вводили (перорально, p.o.) мыши в дозе 10 или 30 мг/кг раз в сутки в течение 3 суток. После последнего введения LPS (липополисахарид) вводили один раз (интраперитонеально, i.p.) мыши в дозе 5 мг/кг, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Полученную мышиную модель использовали для теста на эффективность снятия воспаления головного мозга.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Далее в настоящем документе настоящее изобретение описано подробно.
Настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в качестве активного ингредиента.
Предпочтительно смешивать кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.). Более предпочтительно, кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивают в соотношении 1:0,5-2:0,5-2 (масс.:масс.:масс.), и наиболее предпочтительно в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.), но не всегда с таким ограничением.
Два материала, выбранные из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, предпочтительно смешивают в массовом соотношении 1:0,2-5 (масс.:масс.), более предпочтительно в соотношении 1:0,5-2 (масс.:масс.) и наиболее предпочтительно в соотношении 1:1 (масс.:масс.), но не всегда с таким ограничением.
Экстракт приведенной выше смеси предпочтительно экстрагируют с использованием воды, C1-C4 низшего спирта или их смеси в качестве растворителя, и в этот момент низший спирт предпочтительно представляет собой этанол, метанол или бутанол.
Экстракт смеси предпочтительно экстрагируют из смеси, состоящей по меньшей мере из двух материалов, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, но его можно экстрагировать из смеси, состоящей из по меньшей мере двух экстрактов, помимо каждого экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки.
Экстракт приведенной выше смеси предпочтительно получают способом, который включает следующие стадии, но не всегда с таким ограничением:
1) добавление экстракционного растворителя в смесь, состоящую по меньшей мере из двух из тех материалов, которые выбирают из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, после чего следует экстрагирование;
2) фильтрование экстракта со стадии 1); и
3) концентрирование фильтрата, получаемого на стадии 2), при пониженном давлении, после чего следует его сушка.
В приведенном выше способе кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки со стадии 1) приобретают или культивируют.
В приведенном выше способе, способ экстрагирования экстракта представляет собой любой из таких стандартных способов, как фильтрование, экстрагирование горячей водой, анфлераж, экстрагирование с обратным холодильником и ультразвуковое экстрагирование.
В этом способе концентрирование при пониженном давлении на стадии 3) предпочтительно осуществляют с использованием вакуумного концентратора или вакуумного роторного испарителя, но не всегда с таким ограничением. Сушку в настоящем документе предпочтительно осуществляют посредством сушки при пониженном давлении, вакуумной сушки, сушки кипячением, распылительной сушки или лиофилизационной сушки, но не всегда с таким ограничением.
Указанную фракцию предпочтительно получают из экстракта посредством добавления органического растворителя. Органический растворитель в настоящем документе предпочтительно представляет собой один или несколько растворителей, выбранных из группы, состоящей из гексана, хлороформа, этилацетата и бутанола, и более предпочтительно бутанол, но не всегда с таким ограничением.
Указанный экстракт предпочтительно содержит одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из пеонола (2ʹ-гидрокси-4ʹ-метоксиацетофенон), представленного формулой 1, пеонифлорина, представленного формулой 2, пеонифлоригенона ([(2s,3as,5s,7ar,8s)-3a-гидрокси-7a-метил-6-оксогексагидро-2,5-метано-1,3-бензодиоксол-8-ил]метилбензоат), представленного формулой 3, императорина (9-[(3-метил-2-бутен-1-ил)окси]-7h-фуро[3,2-g][1]бензопиран-7-он), представленного формулой 4, сайкосапонина A ((3бета,4альфа,16бета)-13,28-эпокси-16,23-дигидроксиолеан-11-ен-3-ил-6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил-бета-D-галактопиранозид), представленного формулой 5, сайкосапонина B2 ((3b,4a,16a)-16,23,28-тригидроксиолеана-11,13(18)-диен-3-ил-6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил-бета-D-галактопиранозид), представленного формулой 6, сайкосапонина B4 ((3β,11α,16α)-16,23,28-тригидрокси-11-метоксиолеан-12-ен-3-ил-6-дезокси-3-O-β-D-глюкопиранозил-β-D-галактопиранозид), представленного формулой 7, и сайкосапонина D ((3b,4a,16a)-13,28-эпокси-16,23-дигидроксиолеан-11-ен-3-ил 6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил бета-D-галактопиранозид), представленного формулой 8, но не всегда с таким ограничением:
[Формула 1]
[Формула 2]
[Формула 3]
[Формула 4]
[Формула 5]
[Формула 6]
[Формула 7]
[Формула 8]
Приведенный выше экстракт предпочтительно ингибирует функциональное повреждение митохондрий, стресс эндоплазматического ретикулума или воспалительную реакцию, но не всегда с таким ограничением.
Дегенеративное неврологическое нарушение в настоящем документе предпочтительно выбирают из группы, состоящей из деменции, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, инсульта, болезни Лу Герига (амиотрофического бокового склероза) и повреждения спинного мозга, но не всегда с таким ограничением.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения авторы настоящего изобретения исследовали восстановление нервных клеток, в которых индуцировали функциональное повреждение для того, чтобы подтверждать эффект отдельного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского или корня володушки.
Как результат, подтверждено, что отдельный экстракт коры корня пиона полукустарникового оказывал восстанавливающий эффект на функциональное повреждение митохондрий (см. таблицы 2-7), тогда как отдельный экстракт корня дудника даурского оказывал восстанавливающий эффект на стресс эндоплазматического ретикулума (см. таблицы 8-13). Также подтверждали, что отдельный экстракт корня володушки оказывал восстанавливающий эффект на воспаление (см. таблицы 14-20).
Экстракт смеси, состоявшей по меньшей мере из двух тех материалов, которые выбирали из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в соответствии с настоящим изобретением демонстрировал эффект восстановления уровня АТФ и подавлял образование реакционно-способных частиц кислорода в клеточной модели болезни Паркинсона. В частности, экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки демонстрировал значимый восстанавливающий эффект, оказываемый на функциональное повреждение митохондрий (см. таблицы 21-24).
Авторы настоящего изобретения также исследовали восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на функцию клеток в клеточной модели болезни Паркинсона в соответствии с соотношением смешивания. Как результат, когда эти растительные материалы смешивали в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.), эффект восстановления функции клеток наиболее выражен (см. таблицы 24-26). Авторы изобретения также исследовали восстанавливающий эффект смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на функцию клеток в клеточной модели болезни Паркинсона в соответствии с концентрацией этанола. Как результат, когда обрабатывали экстракт смеси, которую экстрагировали с использованием 90% этанола, комбинированный эффект восстановления функции клеток возрастал наиболее значительно (см. таблицы 28-30). Этаноловый экстракт может увеличивать восстанавливающий эффект наиболее значительно, по сравнению с водным экстрактом, метаноловым экстрактом и бутаноловым экстрактом (см. таблицы 31-33).
Для того чтобы подтверждать эффект смешанного экстракта в 90% этаноле, полученного из смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.), восстанавливающий эффект изучали в нейрональной клеточной линии, в которой индуцировали повреждение функции клеток. Как результат, подтверждено, что экстракт смеси оказывал восстанавливающий эффект на функциональное повреждение митохондрий, стресс эндоплазматического ретикулума и воспаление (см. таблицы 34-38).
Кроме того, модели болезни Паркинсона на животных, которые создавали с использованием 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (MPTP), 6-гидроксидофамина (6-OHDA), ротенона и липополисахарида (LPS), использовали для того, чтобы подтверждать терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый болезнь Паркинсона in vivo. Экстракт смеси вводили в модель болезни Паркинсона на мышах, созданную посредством обработки MPTP, после чего следовал поведенческий тест. Как результат, происходило улучшение двигательной координации в модели болезни Паркинсона по сравнению с животной моделью, которую не лечили экстрактом смеси по изобретению. Также подтверждали, что экстракт смеси по изобретению имеет защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны, и восстанавливающий эффект, оказываемый на повреждение системы сигнальной трансдукции в полосатом теле (ST), черном веществе (SN) и мозжечке (см. таблицы 39-47). Поведенческий тест также осуществляли для модели болезни Паркинсона на мышах, которую создавали посредством обработки 6-OHDA. Как результат, подтверждали, что экстракт смеси по изобретению оказывает эффект улучшения на двигательную координацию и защитный эффект на дофаминергические нейроны в полосатом теле и черном веществе (см. таблицы 48-52). Поведенческий тест также осуществляли для модели болезни Паркинсона на мышах, которую создавали посредством обработки ротеноном. Как результат, происходило улучшение двигательной функции, подавляемой ротеноном, и снижение накопления олигомера α-синуклеина, основного патогенного фактора болезни Паркинсона, в черном веществе (см. таблицы 53-54). В то же время, в модели нейровоспаления на мышах, которую создавали посредством введения LPS, активацию микроглии и астроцитов, индуцируемую в черном веществе и гиппокампе, ингибировали с помощью экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, что указывает на то, что там продемонстрировали эффект снятия воспаления (см. таблицы 55-58).
Экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению оказывает восстанавливающий эффект на повреждение митохондриальной функции, облегчающий эффект на стресс эндоплазматического ретикулума и также одновременно оказывает ингибирующий эффект на воспалительную реакцию, которые удивительно улучшены по сравнению с тем, что оказывает отдельный экстракт in vitro, и экстракт смеси значимо оказывает эффект улучшения на двигательную координацию и защитный эффект на дофаминергические нейроны в модели болезни Паркинсона на животных, и, таким образом, экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракцию можно использовать в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений.
Композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально и использовать в фармацевтическом составе в основных формах. То есть, композицию по настоящему изобретению можно получать для орального или парентерального введения посредством смешивания с обычно используемыми разбавителями или эксципиентами, такими как наполнители, разбавители, связывающие средства, увлажняющие средства, средства для улучшения распадаемости и поверхностно-активные средства.
Твердые составы для перорального введения представляют собой таблетки, пилюли, порошки, гранулы и капсулы. Эти твердые составы получают посредством смешивания указанного бетаина с одним или несколькими подходящими эксципиентами, такими как крахмал, карбонат кальция, сахароза или лактоза, желатин и т. д. Помимо простых эксципиентов, можно использовать смазывающие средства, например, стеарат магния, тальк и т. п. Жидкие составы для перорального введения представляют собой суспензии, растворы, эмульсии и сиропы, и указанные выше составы могут содержать различные эксципиенты, такие как увлажняющие средства, подсластители, ароматические средства и консерванты, в дополнение к обычно используемым простым разбавителям, таким как вода и жидкий парафин.
Составы для парентерального введения представляют собой стерилизованные водные растворы, водонерастворимые эксципиенты, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты и суппозитории. Водонерастворимые эксципиенты и суспензии могут содержать, в дополнение к активному соединению или соединениям, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, такое как оливковое масло, инъецируемый сложный эфир, такой как этилолеат, и т. д. Суппозитории могут содержать, в дополнение к активному соединению или соединениям, витепсол, макрогол, Tween 61, масло какао, лауриновое масло, глицерин, желатин и т. д.
Композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально, и парентеральное введение предпочтительно приведено в качестве примера посредством внешнего нанесения на кожу, интраперитонеальной инъекции, интраректальной инъекции, внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции, подкожной инъекции, внутриматочной инъекции и интрацеребровентрикулярной инъекции. Среди них, внешнее нанесение на кожу является более предпочтительным.
Композицию по настоящему изобретению предпочтительно вводят в фармацевтически эффективной дозе. Термин «фармацевтически эффективная доза» в настоящем документе обозначает количество, достаточное для того, чтобы лечить заболевание применимой, обоснованной или рискованной концентрацией. Дозу можно определять, учитывая многие факторы, такие как тип заболевания, тяжесть заболевания, активность лекарственного средства, чувствительность к лекарственному средству, частота и путь введения, экскреция, условия лечения, лекарственное средство для совместного лечения и другие факторы, рассматриваемые как релевантные в области медицины. Композицию по настоящему изобретению можно вводить отдельно или вместе с другими лекарственными средствами. Если необходимо совместное лечение, введение можно осуществлять поэтапно или одновременно. Композицию можно вводить однократно или многократно. Важно учитывать все приведенные выше факторы и вводить количество, при котором можно получать максимальный эффект в минимальном количестве без побочных эффектов, которые может легко определять специалист в данной области.
Эффективную дозу соединения по настоящему изобретению можно определять в соответствии с массой, возрастом, полом, состоянием здоровья, диетой, частотой введения, способом введения, экскрецией и тяжестью заболевания. Доза составляет 0,01-1000 мг/кг в сутки, предпочтительно 30-500 мг/кг в сутки и более предпочтительно 50-300 мг/кг в сутки, а частота введения предпочтительно составляет 1-6 раз в сутки. Однако эффективную дозу можно увеличивать или уменьшать в соответствии с путем введения, тяжестью ожирения, полом, массой тела и возрастом пациента и т. п. с тем, чтобы приведенная выше эффективная доза не могла ограничивать настоящее изобретение в каких-либо аспектах.
Композицию по настоящему изобретению можно вводить отдельно или лечение можно осуществлять вместе с хирургической операцией, гормональной терапией, химиотерапией и биологическими регуляторами.
Настоящее изобретение также относится к здоровой функциональной пище для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в качестве активного ингредиента.
Настоящее изобретение также относится к здоровой функциональной пище для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в качестве активного ингредиента.
Предпочтительно смешивать кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.). Более предпочтительно кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивают в соотношении 1:0,5-2:0,5-2 (масс.:масс.:масс.) и наиболее предпочтительно в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.), но не всегда с таким ограничением.
Два материала, выбранные из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, предпочтительно смешивают в массовом соотношении 1:0,2-5 (масс.:масс.), более предпочтительно в соотношении 1:0,5-2 (масс.:масс.) и наиболее предпочтительно в соотношении 1:1 (масс.:масс.), но не всегда с таким ограничением.
Экстракт приведенной выше смеси предпочтительно экстрагируют с использованием воды, C1-C4 низшего спирта или их смеси в качестве растворителя, и в этот момент низший спирт предпочтительно представляет собой этанол, метанол или бутанол.
Экстракт смеси предпочтительно экстрагируют из смеси, состоящей по меньшей мере из двух материалов, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, но его можно экстрагировать из смеси, состоящей по меньшей мере из двух экстрактов, помимо каждого экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки.
Указанный смешанный экстракт предпочтительно содержит одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из пеонола, представленного формулой 1, пеонифлорина, представленного формулой 2, пеонифлоригенона, представленного формулой 3, императорина, представленного формулой 4, сайкосапонина A, представленного формулой 5, сайкосапонина B2, представленного формулой 6, сайкосапонина B4, представленного формулой 7, и сайкосапонина D, представленного формулой 8, но не всегда с таким ограничением
Экстракт приведенной выше смеси предпочтительно ингибирует функциональное повреждение митохондрий, стресс эндоплазматического ретикулума и воспалительную реакцию, но не всегда с таким ограничением.
Дегенеративное неврологическое нарушение в настоящем документе предпочтительно выбирают из группы, состоящей из деменции, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, инсульта, болезни Лу Герига (амиотрофического бокового склероза) и повреждения спинного мозга, и болезнь Паркинсона является более предпочтительной, но не всегда с таким ограничением.
Экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению оказывает восстанавливающий эффект на повреждение митохондриальной функции, облегчающий эффект на стресс эндоплазматического ретикулума и также одновременно оказывает ингибирующий эффект на воспалительную реакцию, которые удивительно улучшены по сравнению с тем, что оказывает отдельный экстракт in vitro, и экстракт смеси значимо оказывает эффект улучшения на двигательную координацию и защитный эффект на дофаминергические нейроны в модели болезни Паркинсона на животных, и, таким образом, экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракцию можно использовать в качестве активного ингредиента здоровой функциональной пищи для улучшения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, который включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), субъекту.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, которая содержит экстракт смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix), для использования при лечении или предотвращении дегенеративных неврологических нарушений.
Настоящее изобретение также относится к способу лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, который включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы фракции органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, субъекту.
Кроме того, настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую композицию, которая содержит фракцию органического растворителя из экстракта смеси из двух или больше, выбранных из группы, состоящей из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, для использования при лечении или предотвращении дегенеративных неврологических нарушений.
Экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению оказывает восстанавливающий эффект на повреждение митохондриальной функции, облегчающий эффект на стресс эндоплазматического ретикулума и также одновременно оказывает ингибирующий эффект на воспалительную реакцию, которые удивительно улучшены по сравнению с тем, что оказывает отдельный экстракт in vitro, и экстракт смеси значимо оказывает эффект улучшения на двигательную координацию, защитный эффект на дофаминергические нейроны и противовоспалительный эффект в модели болезни Паркинсона на животных, и, таким образом, экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракцию можно использовать в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений.
Практические и в настоящее время предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения являются иллюстративными, как показано в дальнейших примерах.
Однако следует принимать во внимание, что специалисты в данной области, по соображениям этого раскрытия, могут выполнять модификации и усовершенствования в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Пример 1: получение отдельного экстракта каждого из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
<1-1> Получение этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового
90% этанол добавляли к коре корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex; Jeungdo Herb Medicine Co., Korea), после чего следовало экстрагирование при комнатной температуре в течение 110 минут. Этаноловый экстракт получали посредством фильтрования экстракта. Получаемый экстракт лиофилизировали и хранили. Во время использования экстракт растворяли в буфере. В качестве маркерного компонента экстракта использовали пеонол для подтверждения чистоты.
<1-2> Получение этанолового экстракта корня дудника даурского
90% этанол добавляли к корню дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix; Jeungdo Herb Medicine Co., Korea). Этаноловый экстракт корня дудника даурского получали таким же образом, как описано в примере <1-1>. В качестве маркерного компонента экстракта корня дудника даурского использовали императорин для подтверждения чистоты.
<1-3> Получение этанолового экстракта корня володушки
90% этанол добавляли к корню володушки (Bupleuri Radix; Jeungdo Herb Medicine Co., Korea). Этаноловый экстракт корня володушки получали таким же образом, как описано в примере <1-1>. В качестве маркерного компонента экстракта корня володушки использовали сайкосапонин A для подтверждения чистоты.
Пример 2: получение смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского
Кору корня пиона полукустарникового и корень дудника даурского смешивали в соотношении 1:5, 1:1 или 1:0,2 (масс.:масс.) и добавляли 90% этанол, после чего следовало экстрагирование при комнатной температуре в течение 110 минут. Смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского получали посредством фильтрования экстракта. Полученный смешанный этаноловый экстракт лиофилизировали и хранили. Во время использования экстракт растворяли в воде или буфере. В качестве маркерных компонентов смешанного экстракта для подтверждения чистоты использовали пеонол и императорин.
Пример 3: получение смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового и корня володушки
Кору корня пиона полукустарникового и корень володушки смешивали в соотношении 1:5, 1:1 или 1:0,2 (масс.:масс.) и добавляли 90% этанол, после чего следовало экстрагирование при комнатной температуре в течение 110 минут. Смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового и корня володушки получали посредством фильтрования экстракта. Полученный смешанный этаноловый экстракт лиофилизировали и хранили. Во время использования экстракт растворяли в буфере. В качестве маркерных компонентов смешанного экстракта для подтверждения чистоты использовали пеонол и сайкосапонин A.
Пример 4: получение смешанного экстракта корня дудника даурского и корня володушки
Корень дудника даурского и корень володушки смешивали в соотношении 1:5, 1:1 или 1:0,2 (масс.:масс.) и добавляли 90% этанол, после чего следовало экстрагирование при комнатной температуре в течение 110 минут. Смешанный этаноловый экстракт корня дудника даурского и корня володушки получали посредством фильтрования экстракта. Полученный смешанный этаноловый экстракт лиофилизировали и хранили. Во время использования экстракт растворяли в буфере. В качестве маркерных компонентов смешанного экстракта для подтверждения чистоты использовали императорин и сайкосапонин A.
Пример 5: получение смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
<5-1> Получение смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивали в соотношении, представленном далее в таблице 1, и добавляли 10, 30, 50, 70 или 90% этанол, после чего следовало экстрагирование при комнатной температуре в течение 110 минут. Смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки получали посредством фильтрования экстракта. Полученный смешанный этаноловый экстракт лиофилизировали и хранили. Во время использования экстракт растворяли в буфере. В качестве маркерных компонентов смешанного экстракта для подтверждения чистоты использовали пеонол, сайкосапонин A и императорин.
Таблица 1
Соотношение смешивания коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
№ | Соотношение смешивания (%, масс.:масс.:масс.) | ||
Кора корня пиона полукустарникового | Корень дудника даурского | Корень володушки | |
1 | 1 | 2 | 1 |
2 | 1 | 1 | 2 |
3 | 1 | 2 | 2 |
4 | 1 | 0,5 | 1 |
5 | 1 | 1 | 0,5 |
6 | 1 | 0,5 | 0,5 |
7 | 1 | 3 | 1 |
8 | 1 | 1 | 3 |
9 | 1 | 3 | 3 |
10 | 1 | 0,33 | 1 |
11 | 1 | 1 | 0,33 |
12 | 1 | 0,33 | 0,33 |
13 | 1 | 4 | 1 |
14 | 1 | 1 | 4 |
15 | 1 | 4 | 4 |
16 | 1 | 0,25 | 1 |
17 | 1 | 1 | 0,25 |
18 | 1 | 0,25 | 0,25 |
19 | 1 | 5 | 1 |
20 | 1 | 1 | 5 |
21 | 1 | 5 | 5 |
22 | 1 | 0,2 | 1 |
23 | 1 | 1 | 0,2 |
24 | 1 | 0,2 | 0,2 |
25 | 1 | 1 | 1 |
<5-2> Получение смешанного водного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивали в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) и добавляли воду. Смешанный водный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки получали таким же образом, как описано в примере <5-1>.
<5-3> Получение смешанного метанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивали в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) и добавляли 90% метанол. Смешанный метаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки получали таким же образом, как описано в примере <5-1>.
<5-4> Получение смешанного бутанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки смешивали в соотношении 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) и добавляли 90% бутанол. Смешаный бутаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки получали таким же образом, как описано в примере <5-1>.
Экспериментальный пример 1: оценка внутриклеточной эффективностивности экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента
<1-1> Эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Для того чтобы оценивать внутриклеточную эффективностость экстракта коры корня пиона полукустарникового по настоящему изобретению и его активного компонента, изучали цитотоксичность в клетках нейробластомы человека.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (модифицированная Дульбекко среда Игла и среда Хэма F12; Gibco, USA) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 2,5×104 клеток/лунка. Клетки обрабатывали экстрактом коры корня пиона полукустарникового, полученным в примере <1-1>, или его активным компонентом, пеонолом, пеонифлорином или пеонифлоригеноном в концентрации 1,0 мкг/мл в течение 4 часов. Клетки собирали и коэффициент выживаемости клеток измеряли с использованием кальцеина. Коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, приведенным выше, и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%).
Как результат, как показано далее в таблице 2, экстракт коры корня пиона полукустарникового и его активный компонент не демонстрируют цитотоксичность в нормальных клетках (таблица 2).
Таблица 2
Эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | |
Нормальная контрольная группа | - | 100,0±7,35 | |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового и активный ингредиент | 90% этаноловый экстракт | 1 | 105,4±6,83 |
Пеонол | 1 | 102,2±9,10 | |
Пеонифлорин | 1 | 97,9±7,34 | |
Пеонифлоригенон | 1 | 98,9±8,10 |
<1-2> Ингибирующий эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на гибель клеток, индуцированную митохондриальным повреждением
Для того чтобы исследовать эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного ингредиента, оказываемый на восстановление митохондриального функционального повреждения, MTT анализ осуществляли для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на повреждение митохондриального комплекса 1 в клетках.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1, модифицированная Дульбекко среда Игла и среда Хэма F12; Gibco, USA) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали экстрактом коры корня пиона полукустарникового в 90% этаноле, полученным в примере <1-1>, или его активным компонентом, пеонолом, пеонифлорином или пеонифлоригеноном в концентрации 1,0 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. Затем клетки обрабатывали с использованием 50 мкг/мл атразина (2-хлор-4-(этиламин)-6-(изопропиламин)-s-триазин, ATZ), после чего следовало культивирование в течение 24 часов для того, чтобы индуцировать нарушение функции митохондрий. Клетки с митохондриями с нарушением функции обрабатывали с использованием 0,2 мг/мл MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2H-тетразолия бромид, MTT; Sigma, USA), после чего следовало культивирование в течение 4 часов. Затем MTT формазановый преципитат, образованный выжившими клетками, растворяли в 100 мл 0,04 Н HCl/изопропаноле. OD540 измеряли на считывателе микропланшетов ELISA (Molecular Devices, USA). Повреждение митохондриального комплекса 1 подтверждали для того, чтобы видеть, как увеличивался или снижался уровень повреждения, по сравнению с нормальной контрольной группой, которую обрабатывали DMSO без экстракта или его активного компонента. В то же время, группу отрицательного контроля обрабатывали только атразином 50 мкг/мл для того, чтобы индуцировать митохондриальное повреждение, и не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. Затем MTT анализ осуществляли таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано далее в таблице 3, митохондриальное повреждение, индуцированное атразином, восстанавливали до нормального уровня посредством обработки экстрактом коры корня пиона полукустарникового в 90% этаноле, пеонолом, пеонифлорином или пеонифлоригеноном (таблица 3).
Таблица 3
Восстанавливающий эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на повреждение митохондриального комплекса 1
Обработка | Индуктор (атразин, мкг/мл) | MTT (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,0±2,79 |
Отрицательный контроль | - | 50 | 76,7±7,35 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | 1 | 50 | 94,3±5,55 |
Пеонол | 1 | 50 | 101,8±7,21 |
Пеонифлорин | 1 | 50 | 96,4±7,44 |
Пеонифлоригенон | 1 | 50 | 95,5±6,09 |
<1-3> Восстанавливающий эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на утрату АТФ в результате повреждения митохондрий
Для того чтобы исследовать эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного ингредиента, оказываемый на восстановление митохондриального функционального повреждения, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату АТФ в клетках.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-2>, которые обрабатывали 50 мкг/мл атразина для того, чтобы индуцировать нарушение функции митохондрий. Затем 100 мл клеточного лизата, полученного из клеток с митохондриями с нарушением функции, смешивали с 100 мл люциферин-люциферазы, используя набор для биолюминесцентного анализа АТФ в соматических клетках (Sigma, USA), после чего следовало культивирование при 20°C в течение 10 минут. Получали супернатант. Сигнал флуоресценции измеряли с использованием люминометра LB 9501 Lumat (Berthold, Germany). Флуоресценцию контрольной лунки, содержащей среду без клеток, использовали в качестве фона. Измеряемые значения вычисляли посредством вычитания фона и нормализовали количество АТФ по концентрации белка. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению или его активным компонентом, но вместо этого обрабатывали только DMSO. Все результаты представлены в виде % от нормального контроля, чтобы представлять внутриклеточный уровень АТФ. Отрицательный контроль обрабатывали только 50 мкг/мл атразина для того, чтобы индуцировать митохондриальное повреждение, и не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. Внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано далее в таблице 4, митохондриальное повреждение, индуцированное атразином, восстанавливали до нормального уровня посредством обработки экстрактом коры корня пиона полукустарникового в 90% этаноле, пеонолом, пеонифлорином или пеонифлоригеноном (таблица 4).
Таблица 4
Восстанавливающий эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового и его активного компонента, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ
Обработка | Индуктор (атразин, мкг/мл) | Внутриклеточное содержание АТФ (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,0±6,45 |
Отрицательный контроль | - | 50 | 68,7±8,09 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | 1 | 50 | 91,2±4,08 |
Пеонол | 1 | 50 | 101,9±7,42 |
Пеонифлорин | 1 | 50 | 94,3±6,44 |
Пеонифлоригенон | 1 | 50 | 89,1±7,97 |
<1-4> Экспрессия гена, вовлеченного в болезнь Паркинсона или митохондрии, соответствующая экстракту коры корня пиона полукустарникового и его активному компоненту
Для того чтобы исследовать эффект экстракта коры корня пиона полукустарникового по настоящему изобретению и его активного компонента, оказываемый на восстановление функции поврежденных митохондрий, уровни экспрессии гена субъединицы III цитохром c-оксидазы (COX III), кодируемого митохондриальным геном, и Park7 (DJ-1), одного из генов, вызывающих наследственную болезнь Паркинсона, измеряли с помощью ПЦР в реальном времени (RT-ПЦР).
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-2>, и индуцировали нарушение функции митохондрий. После этого клетки с митохондриями с нарушением функции суспендировали в TRIzol (Invitrogen, USA) и из них экстрагировали общую РНК в соответствии с протоколом прозводителя. Общую кДНК синтезировали с использованием 1 мкг экстрагированной РНК. ПЦР осуществляли в GeneAmp PCR system 9700 (Applied Biosystem, USA) при требуемых оптимальных условиях, используя синтезированную кДНК в качестве матрицы в присутствии прямого и обратного праймеров, перечисленных далее в таблице 5, что вело к амплификации генов COX III и Park7 (DJ-1). Электрофорез амплифицированных продуктов ПЦР проводили на 1,5% агарозном геле. Относительную концентрацию измеряли с использованием прибора для измерения оптической плотности изображений (программное обеспечение Alpha Ease FC; Alpha Innotech, USA) под УФ. Уровень мРНК стандартизовали посредством сравнения с уровнем 18S рРНК. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению или его активным компонентом, но вместо этого обрабатывали только DMSO. Отрицательный контроль обрабатывали только 50 мкг/мл атразина для того, чтобы индуцировать митохондриальное повреждение, и не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. Уровень экспрессии генов изучали таким же образом, как описано выше.
Таблица 5
Последовательности праймеров, используемых в этом изобретении
Название гена | Название праймера | Последовательность праймера | SEQ. ID. NO: | Длина продукта (п. о.) | Температура (°C) |
COX III | COX III_F | 5ʹ-CAATGATGGCGCGATGTAAC-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 1 | 270 | 60 |
COX III_R | 5ʹ-GGTGATTGATACTCCTGATG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 2 | |||
PARK7 | PARK7_F | 5ʹ-CGAGCTGGGATTAAGGTCAC-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 3 | 267 | 60 |
PARK7_R | 5ʹ-TTCATGAGCCAACAGAGCAG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 4 | |||
GRP78 | GRP78_F | 5ʹ-GAGATCATCGCCAACGATCAG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 5 | 188 | 55 |
GRP78_R | 5ʹ-ACTTGATGTCCTGCTGCACAG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 6 | |||
XBP1p | XBP1p_F | 5ʹ-GGTCTGCTGAGTCCGCAGCAGG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 7 | 335 | 60 |
XBP1p_R | 5ʹ-GGGCTTGGTATATATGTGG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 8 | |||
iNOS | iNOS_F | 5ʹ-CCTGGAGGTTCTGGATGAGA-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 9 | 320 | 60 |
iNOS_R | 5ʹ-GTAGTAGCGGGGCTTCAAGA-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 10 | |||
IL-6 | IL-6_F | 5ʹ-CTGGAGTACCATAGCTACCTGGAG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 11 | 190 | 60 |
IL-6_R | 5ʹ-GTCCTTAGCCACTCCTTCTGTG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 12 | |||
p65/RELA | p65/RELA_F | 5ʹ-GACCAACAATAACCCCTTTCAC-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 13 | 700 | 60 |
p65/RELA_R | 5ʹ-GTTTGAGATCTGCCCTGATGG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 14 | |||
18s рРНК | 18s рРНК_F | 5ʹ-GAGCGAAAGCATTTGCCAAG-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 15 | 101 | 60 |
18s рРНК_R | 5ʹ-GGCATCGTTTATGGTCGGAA-3ʹ | SEQ. ID. NO:: 16 |
Как результат, как показано в таблице 6 и таблице 7, сниженные экспрессии COX III, кодируемой митохондриальным геном, и Park7 (DJ-1), одного из генов, вызывающих наследственную болезнь Паркинсона, восстанавливали до нормального уровня (таблицы 6 и 7).
Таблица 6
Экспрессия COX III, соответствующая экстракту коры корня пиона полукустарникового и его активному компоненту
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | рРНК COX III/18S | |
Нормальный контроль | - | - | 1,00±0,04 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | - | 1 | 0,93±0,06 |
Пеонол | - | 1 | 1,05±0,03 |
Пеонифлорин | - | 1 | 1,11±0,04 |
Пеонифлоригенон | - | 1 | 1,04±0,05 |
Отрицательный контроль | атразин | - | 0,52±0,08 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | атразин | 1 | 0,91±0,08 |
Пеонол | атразин | 1 | 1,07±0,07 |
Пеонифлорин | Атразин | 1 | 0,92±0,08 |
Пеонифлоригенон | Атразин | 1 | 0,86±0,07 |
Таблица 7
Экспрессия Park7 (DJ-1), соответствующая экстракту коры корня пиона полукустарникового и его активному компоненту
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | рРНК Park7(DJ-1)/18S | |
Нормальный контроль | - | - | 1,00±0,08 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | - | 1 | 0,98±0,07 |
Пеонол | - | 1 | 1,22±0,08 |
Пеонифлорин | - | 1 | 1,05±0,08 |
Пеонифлоригенон | - | 1 | 0,98±0,08 |
Отрицательный контроль | атразин | - | 0,39±0,02 |
Экстракт коры корня пиона полукустарникового | атразин | 1 | 1,30±0,08 |
Пеонол | атразин | 1 | 0,95±0,07 |
Пеонифлорин | атразин | 1 | 2,03±0,07 |
Пеонифлоригенон | атразин | 1 | 0,45±0,02 |
Экспериментальный пример 2: оценка внутриклеточной эффективностивности экстракта корня дудника даурского и его активного компонента
<2-1> Эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Для того чтобы оценивать внутриклеточную эффективностость экстракта корня дудника даурского по настоящему изобретению и его активного компонента, изучали цитотоксичность в клетках нейробластомы человека.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-1>. Культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 2,5×104 клеток/лунка. Клетки обрабатывали с использованием 1,0 мкг/мл экстракта корня дудника даурского, полученного в примере <1-2>, или 0,5 мкг/мл или 1,0 мкг/мл его активного компонента, императорина, в течение 4 часов. Собирали клетки и измеряли коэффициент выживаемости клеток с использованием кальцеина. Коэффициент выживаемости клеток, который увеличивался или уменьшался по сравнению с таковым у нормальной контрольной группы, которую не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%).
Как результат, как показано в таблице 8, экстракт корня дудника даурского и императорин не вызывают цитотоксичность в нормальных клетках в концентрации 0,5 мкг/мл. Однако императорин вызывает токсичность на низком уровне в концентрации 1 мкг/мл (таблица 8).
Таблица 8
Коэффициент выживаемости клеток, соответствующий экстракту корня дудника даурского и его активному компоненту
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | |
Нормальный контроль | - | 100,00±0,89 | |
Экстракт корня дудника даурского и активный ингредиент | Экстракт в 90% этаноле | 1,0 | 99,50±1,02 |
Императорин | 0,5 | 101,16±0,59 | |
Императорин | 1,0 | 79,16±1,39 |
<2-2> Ингибирующий эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на гибель клеток, индуцированную стрессом эндоплазматического ретикулума
Для того чтобы исследовать, может ли экстракт корня дудника даурского по изобретению и его активный компонент индуцировать восстановление от стресса эндоплазматического ретикулума или нет, осуществляли MTT анализ с клетками, которые имеют стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный обработкой туникамицином (Tuni), который, как известно, индуцирует стресс эндоплазматического ретикулума посредством ингибирования N-гликозилирования, или посредством обработки тапсигаргином (Thap), который, как известно, индуцирует стресс эндоплазматического ретикулума посредством нарушения гомеостаза кальция, чтобы подтверждать восстановление повреждения митохондриального комплекса 1 в живых клетках.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-2>. Клетки обрабатывали с использованием 1,0 мкг/мл экстракта корня дудника даурского, полученного в примере <1-2>, или 0,5 мкг/мл или 1,0 мкг/мл императорина, его активного компонента, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. Клетки обрабатывали с использованием 0,5 мкг/мл тапсигаргина (Thap) или 1 мкг/мл туникамицина (Tuni), после чего следовало культивирование в течение 24 часов для того, чтобы индуцировать стресс эндоплазматического ретикулума. После этого осуществляли MTT анализ таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-2>. По сравнению с нормальными контрольными клетками, которые не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, изучали повреждение митохондриального комплекса 1 в клетках, будь то увеличение или уменьшение. Отрицательный контроль обрабатывали с использованием 0,5 мкг/мл тапсигаргина или 1 мкг/мл туникамицина для того, чтобы вызывать стресс эндоплазматического ретикулума, но не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, после чего следовал MTT анализ таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 9 и таблице 10, функциональное повреждение митохондрий и гибель клеток, индуцированные стрессом эндоплазматического ретикулума, обусловленным тапсигаргином или туникамициномом, восстанавливали до нормального уровня посредством обработки экстрактом корня дудника даурского в 90% этаноле и императорином (таблицы 9 и 10).
Таблица 9
Восстанавливающий эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на стресс эндоплазматического ретикулума, опосредованный повреждением митохондриального комплекса 1, индуцированным тапсигаргином
Обработка | Индуктор (тапсигаргин, мкг/мл) | MTT (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±4,09 |
Отрицательный контроль | - | 0,5 | 65,61±1,37 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | 0,5 | 82,45±3,80 |
Императорин | 0,5 | 0,5 | 86,23±5,31 |
Таблица 10
Восстанавливающий эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на стресс эндоплазматического ретикулума, опосредованный повреждением митохондриального комплекса 1, индуцированным туникамицином
Обработка | Индуктор (туникамицин, мкг/мл) | MTT (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±5,73 |
Отрицательный контроль | - | 1,0 | 69,63±3,42 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | 1,0 | 83,99±2,01 |
Императорин | 0,5 | 1,0 | 84,93±3,68 |
<2-3> Восстанавливающий эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на утрату АТФ в результате стресса эндоплазматического ретикулума
Для того чтобы исследовать эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на восстановление стресса эндоплазматического ретикулума, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату АТФ в клетках.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <2-2>, и индуцировали стресс эндоплазматического ретикулума. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-3>. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению или его активным компонентом, но обрабатывали только DMSO. Все результаты представлены в виде % от нормального контроля, чтобы представлять внутриклеточный уровень АТФ. Отрицательный контроль не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только 0,5 мкг/мл тапсигаргина или 1,0 мкг/мл туникамицина для того, чтобы индуцировать стресс эндоплазматического ретикулума. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 11, функциональное повреждение митохондрий и гибель клеток у клеток нейробластомы человека, индуцированные стрессом эндоплазматического ретикулума, обусловленным тапсигаргином или туникамицином, восстанавливали до нормального уровня посредством обработки экстрактом корня дудника даурского в 90% этаноле и императорином (таблица 11).
Таблица 11
Восстанавливающий эффект экстракта корня дудника даурского и его активного компонента, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ
Обработка | Индуктор (мкг/мл) | Внутриклеточное содержание АТФ (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±6,06 |
Отрицательный контроль | - | тапсигаргин, 0,5 | 77,89±3,28 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | тапсигаргин, 0,5 | 112,05±7,21 |
Императорин | 0,5 | тапсигаргин, 0,5 | 104,85±5,13 |
Отрицательный контроль | - | туникамицин, 1,0 | 69,25±2,09 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | туникамицин, 1,0 | 84,85±3,05 |
Императорин | 0,5 | туникамицин, 1,0 | 86,00±1,18 |
<2-4> Экспрессия маркерного гена стресса эндоплазматического ретикулума, соответствующая экстракту корня дудника даурского и его активному компоненту
Для того чтобы исследовать эффект экстракта корня дудника даурского по настоящему изобретению и его активного компонента, оказываемый на восстановление стресса эндоплазматического ретикулума, измеряли уровни экспрессии маркерных генов стресса эндоплазматического ретикулума GRP78 и XBP1p.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <2-2>, и индуцировали стресс эндоплазматического ретикулума. После этого осуществляли RT-ПЦР с клетками, имеющими стресс эндоплазматического ретикулума, таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-4>, после чего следовал электрофорез для того, чтобы исследовать уровни экспрессии генов GRP78 и XBP1p, на 1,5% агарозном геле под УФ. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению или его активным компонентом, но обрабатывали только DMSO. Отрицательный контроль не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только 0,5 мкг/мл тапсигаргина для того, чтобы индуцировать стресс эндоплазматического ретикулума. После этого экспрессию маркерного гена стресса эндоплазматического ретикулума подтверждали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 12 и таблице 13, уровни экспрессии маркерных генов стресса эндоплазматического ретикулума GRP78 и XBP1p восстанавливали до нормального уровня в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный в них, посредством обработки экстрактом корня дудника даурского в 90% этаноле и императорином (таблицы 12 и 13).
Таблица 12
Экспрессия мРНК GRP78 в соответствии с экстрактом корня дудника даурского и его активным компонентом в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный тапсигаргином
Обработка | Индуктор (тапсигаргин, мкг/мл) | мРНК GRP78/18S | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 1,93±0,03 |
Отрицательный контроль | - | 0,5 | 100,00±2,37 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | 0,5 | 2,78±0,03 |
Императорин | 0,5 | 0,5 | 2,97±0,05 |
Таблица 13
Экспрессия мРНК XBP1p, соответствующая экстракту корня дудника даурского и его активному компоненту, в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный тапсигаргином
Обработка | Индуктор (тапсигаргин, мкг/мл) | мРНК XBP1p/18S | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 3,58±0,06 |
Отрицательный контроль | - | 0,5 | 100,00±3,18 |
Экстракт корня дудника даурского | 1,0 | 0,5 | 4,89±0,07 |
Императорин | 0,5 | 0,5 | 4,01±0,05 |
Экспериментальный пример 3: оценка внутриклеточной эффективности экстракта корня володушки и его активного компонента
<3-1> Эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Для того чтобы оценивать внутриклеточную эффективность экстракта корня володушки по настоящему изобретению и его активного компонента, изучали цитотоксичность в микроглиальных клетках мыши.
В частности, BV2, микроглиальную клеточную линию мыши, инокулировали в 1:1 DMEM (модифицированная Дульбекко среда Игла; Gibco, USA) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 2,5×104 клеток/лунка. Клетки обрабатывали экстрактом корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере <1-3>, сайкосапонином A, сайкосапонином B2, сайкосапонином B4 или сайкосапонином D в концентрации 1,0 мкг/мл в течение 4 часов. Клетки собирали и коэффициент выживаемости клеток измеряли с использованием кальцеина. Коэффициент выживаемости клеток, который увеличивался или уменьшался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%).
Как результат, как показано далее в таблице 14, экстракт корня володушки и его активный компонент не демонстрируют цитотоксичность в нормальных клетках (таблица 14).
Таблица 14
Эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | |
Нормальный контроль | - | 100,00±6,48 | |
Экстракт корня володушки и его активного компонента | Экстракт в 90% этаноле | 1,0 | 101,46±9,38 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 98,38±7,69 | |
сайкосапонин B2 | 1,0 | 102,74±8,55 | |
сайкосапонин B4 | 1,0 | 97,99±2,86 | |
сайкосапонин D | 1,0 | 97,45±3,99 |
<3-2> Ингибирующий эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на гибель клеток, индуцируемую воспалительной реакцией
Для того чтобы исследовать ингибирующий эффект экстракта корня володушки по настоящему изобретению и его активного ингредиента, оказываемый на воспалительную реакцию, осуществляли MTT анализ с клетками, которые имеют воспалительную реакцию, индуцированную липополисахаридом (LPS), для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на повреждение митохондриального комплекса 1 в живых клетках.
В частности, клетки BV2 культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-1>. Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали экстрактом корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере <1-3>, сайкосапонином A, сайкосапонином B2, сайкосапонином B4 или сайкосапонином D в концентрации 1,0 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. Затем клетки обрабатывали с использованием 100 нг/мл липополисахарида (LPS), после чего следовало культивирование в течение 20 часов для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию. Осуществляли MTT анализ с клетками, у которых индуцировали воспалительную реакцию таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-2>. Повреждение митохондриального комплекса 1 подтверждали, чтобы видеть как повышается или снижается уровень повреждения по сравнению с нормальной контрольной группой, которую обрабатывали DMSO без экстракта или его активного компонента. В то же время, группу отрицательного контроля обрабатывали только 100 нг/мл LPS для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию и не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого MTT анализ осуществляли таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано далее в таблице 15, воспалительную реакцию, которую индуцировали посредством LPS, восстанавливали до нормального уровня посредством обработки экстрактом корня володушки в 90% этаноле, сайкосапонином A, сайкосапонином B2, сайкосапонином B4 или сайкосапонином D (таблица 15).
Таблица 15
Восстанавливающий эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на повреждение митохондриального комплекса 1
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | MTT (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±9,56 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 52,17±7,86 |
Экстракт корня володушки | 1,0 | 100 | 89,06±6,78 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 91,49±6,20 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 88,85±6,48 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 87,12±2,56 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 86,73±1,25 |
<3-3> Снижение воспалительной реакции, зависящей от оксида азота (II) (NO), экстрактом корня володушки и его активным компонентом
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта корня володушки по настоящему изобретению и его активного компонента, оказываемый на воспалительную реакцию, способ Грисса осуществляли для того, чтобы измерять концентрацию нитрита/нитрата(NOx) в клеточной культуральной среде.
В частности, клетки BV2 культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-1>, и индуцировали воспалительную реакцию. После этого получали 100 мл клеточной культуральной среды, в которую добавляли 100 мл реактива Грисса, содержащего соляную кислоту, 5% сульфаниламид и 2% нафтилэтилендиамин, после чего следовала реакция в темном помещении в течение 30 минут. По завершении реакции, OD540 измеряли с использованием считывателя микропланшетов EISA (Versamax, USA). Концентрацию оксида азота (II) в среде вычисляли с использованием стандартной калибровочной кривой для нитрита натрия. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO. Отрицательный контроль обрабатывали только 100 нг/мл LPS для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию, но не обрабатывали экстрактом или активным компонентом. После этого изучали эффект снижения концентрации оксида азота (II) таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 16, подтверждали, что экстракт корня володушки в 90% этаноле, сайкосапонин A, сайкосапонин B2, сайкосапонин B4, и сайкосапонин D обладают эффектом подавления LPS-опосредованного образования NO (таблица 16).
Таблица 16
Эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на снижение концентрации оксида азота (II) (NO)
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | NO (мМ) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 3,29±0,03 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 28,17±4,73 |
Экстракт корня володушки | 1,0 | 100 | 13,06±2,34 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 10,75±3,60 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 18,97±2,68 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 17,21±2,11 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 18,12±2,93 |
<3-4> Экспрессия маркерного гена воспалительной реакции, соответствующая экстракту корня володушки и его активному компоненту
Для того чтобы исследовать эффект экстракта корня володушки по настоящему изобретению и его активного компонента, оказываемый на восстановление воспалительной реакции, уровни экспрессии маркерных генов воспалительной реакции индуцибельной синтазы оксида азота (II) (iNOS), интерлейкина-6 (IL-6) и NF-kB p65/ReIA.
В частности, клетки BV2 культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-1>, и индуцировали воспалительную реакцию. После этого осуществляли RT-ПЦР с клетками таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-4>, после чего следовал количественный анализ уровней экспрессии генов iNOS, IL-6 и NF-kB p65/ReIA. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению или его активным компонентом, но обрабатывали только DMSO. Отрицательный контроль не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только 100 нг/мл LPS для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию. После этого экспрессию маркерного гена воспалительной реакции подтверждали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблицах 17-19, уровни экспрессии маркерных генов воспалительной реакции iNOS, IL-6 и NF-kB p65/ReIA восстанавливали до нормального уровня в клетках, имеющих воспалительную реакцию, индуцированную в них, посредством обработки экстрактом корня володушки в 90% этаноле, сайкосапонином A, сайкосапонином B2, сайкосапонином B4 и сайкосапонином D (таблицы 17-19).
Таблица 17
Экспрессия мРНК iNOS, соответствующая экстракту корня володушки и его активному компоненту
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | мРНК iNOS (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 0,52±0,01 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 100,00±1,82 |
Экстракт корня володушки | 1,0 | 100 | 15,25±0,11 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 14,85±1,47 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 18,11±2,39 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 26,06±3,27 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 21,23±1,99 |
Таблица 18
Экспрессия мРНК IL-6, соответствующая экстракту корня володушки и его активному компоненту
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | мРНК IL-6 (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 1,18±0,07 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 100,00±3,73 |
Экстракт корня володушки | 1,0 | 100 | 26,30±2,37 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 18,05±1,23 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 29,67±2,39 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 28,53±1,92 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 26,58±1,75 |
Таблица 19
Экспрессия мРНК p65/ReIA, соответствующая экстракту корня володушки и его активному компоненту
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | мРНК p65/ReIA (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 11,48±0,53 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 100,00±1,12 |
Экстракт корня володушки | 1,0 | 100 | 46,01±3,19 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 40,38±1,05 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 50,18±2,67 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 53,70±4,72 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 49,80±3,54 |
<3-5> Снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS) экстрактом корня володушки и его активным компонентом
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта корня володушки по настоящему изобретению и его активного компонента, оказываемый на воспалительную реакцию, концентрацию внутриклеточных ROS измеряли с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, клетки BV2 культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-1>, и индуцировали воспалительную реакцию. После этого клетки, в которых индуцировали воспалительную реакцию, обрабатывали 1 мкМ DCF-DA и 0,05 мкМ бисбензимида (Hoechst 33342), после чего следовало окрашивание при 37°C в течение 1 часа. После окрашивания интенсивность флуоресценции DCF-DA измеряли на 485 нм/535 нм и интенсивность флуоресценции бисбензимида измеряли на 335 нм/460 нм. На основании соотношения DCF-DA/бисбензимид определяли количество ROS. Количество ROS, повышенное или пониженное, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, и результаты представляли в виде %. Отрицательный контроль обрабатывали только 100 нг/мл LPS для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию, но не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого образование ROS изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 20, подтверждали, что экстракт корня володушки в 90% этаноле по настоящему изобретению, сайкосапонин A, сайкосапонин B2, сайкосапонин B4 и сайкосапонин D обладают эффектом снижения образования ROS, опосредованного DCF-DA, которое обусловлено воспалительной реакцией и стрессом (таблица 20).
Таблица 20
Эффект экстракта корня володушки и его активного компонента, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (LPS, г/мл) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±1,09 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 412,31±4,26 |
экстракт в 90% этаноле | 1,0 | 100 | 235,45±2,27 |
Сайкосапонин A | 1,0 | 100 | 198,24±3,72 |
Сайкосапонин B2 | 1,0 | 100 | 214,22±1,87 |
Сайкосапонин B4 | 1,0 | 100 | 223,26±2,86 |
Сайкосапонин D | 1,0 | 100 | 218,61±2,71 |
Экспериментальный пример 4: оценка внутриклеточной эффективности смешанного экстракта, содержащего по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
<4-1> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта, содержащего по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси, содержащей по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона, исследовали показатель митохондриальной активности в клеточной модели болезни Паркинсона.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, полученным в примере 2, смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 3, смешанным экстрактом корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 4, или смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере <5-1>, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования клетки обрабатывали 1-метил-4-фенилпиридинием (MPP+) в концентрации 1 мМ, после чего следовало культивирование в течение 24 часов. Как результат, создавали клеточную модель болезни Паркинсона. После этого коэффициент выживаемости клеток измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-1>, с использованием кальцеина. Коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого коэффициент выживаемости клеток также измеряли, повышенный или пониженный, по сравнению с таковым у нормального контроля, таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 21, коэффициент выживаемости клеток клеточной модели болезни Паркинсона, соответствующий снижению митохондриальной активности, обусловленной MPP+, восстанавливали до 65-70% посредством обработки смешанным экстрактом, а именно этаноловым экстрактом смеси, содержащей кору корня пиона полукустарникового, корень дудника даурского и корень володушки, при различных соотношениях смешивания. В то же время, восстанавливающий эффект был повышен и достигал 77-81% посредством обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и корня володушки, экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского и экстрактом смеси корня дудника даурского и корня володушки. В частности, восстанавливающий эффект был наивысшим и составлял 92,84% при обработке экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (таблица 21).
Таблица 21
Эффект смешанного экстракта, содержащего по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Обработка | Индуктор (MPP+, M) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±4,70 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 51,56±2,24 |
Кора корня пиона полукустарникового | - | 1,0 | 1,0 | 69,91±2,18 |
Корень дудника даурского | - | 1,0 | 1,0 | 65,19±2,87 |
Корень володушки | - | 1,0 | 1,0 | 68,68±1,78 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 78,33±3,89 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 80,45±4,02 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 78,24±3,59 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 78,36±2,35 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 81,00±4,08 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 78,31±3,16 | |
Корень дудника даурского+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 78,22±2,14 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 79,26±3,18 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 77,98±1,91 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 92,84±5,51 |
<4-2> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта, содержащего по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на утрату АТФ в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать эффект экстракта смеси, содержащей по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на восстановление митохондриального функционального повреждения в клеточной модели болезни Паркинсона, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату АТФ в клетках.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, полученным в примере 2, смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 3, смешанным экстрактом корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 4, или смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере <5-1>, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-3>. Увеличение или снижение внутриклеточного уровня АТФ вычисляли посредством сравнения такового у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только DMSO. Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, но не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, после чего следовало исследование восстановления уровня АТФ таким же образом, как описано выше. Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого восстанавливающий эффект, оказываемый на внутриклеточный уровень АТФ, изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 22, утрату внутриклеточного АТФ, соответствующую снижению митохондриальной активности, обусловленному 1-метил-4-фенилпиридинием (MPP+), восстанавливали посредством обработки отдельным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского или корня володушки в 90% этаноле вплоть до 68-69% от уровня нормальной группы. В то же время, степень восстановления возрастала вплоть до 78-83% посредством обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и володушки, экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и дудника даурского и экстрактом смеси корня дудника даурского и корня володушки. В частности, наивысшая степень восстановления составляла вплоть до 95,82% при обработке экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (таблица 22).
Таблица 22
Восстанавливающий эффект экстракта смеси, содержащей по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Внутриклеточный АТФ (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±2,99 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 57,13±3,17 |
Кора корня пиона полукустарникового | - | 1,0 | 1,0 | 69,28±2,37 |
Корень дудника даурского | - | 1,0 | 1,0 | 68,99±3,57 |
Корень володушки | - | 1,0 | 1,0 | 68,63±2,49 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 78,44±3,44 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 79,84±3,01 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 78,50±2,68 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 80,93±1,25 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 83,56±3,15 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 81,43±2,36 | |
Корень дудника даурского+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 78,29±1,11 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 81,39±2,89 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 79,92±2,31 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 95,82±3,61 |
<4-3> Снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS) в клеточной модели болезни Паркинсона экстрактом смеси, содержащей по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать эффект снижения, оказываемый на образование ROS, обусловленное митохондриальным функциональным повреждением в клеточной модели болезни Паркинсона, который соответствует обработке экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и володушки, экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и дудника даурского, экстрактом смеси корня дудника даурского и корня володушки и экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, измеряли концентрацию внутриклеточных ROS с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, полученным в примере 2, смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 3, смешанным экстрактом корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере 4, или смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, полученным в примере <5-1>, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого ROS количественно определяли на основании соотношения DCF-DA/бисбензимида таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-5>. Уровень ROS, повышенный или пониженный, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, и результаты представлены в виде % от нормального контроля. Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого изучали эффект снижения образования ROS таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 23, образование ROS в результате сниженной митохондриальной активности, обусловленной 1-метил-4-фенилпиридинием (MPP+), восстанавливали даже до 144-146% от нормального уровня после обработки отдельным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского или корня володушки в 90% этаноле, тогда как образование ROS восстанавливали даже до 120-132% от нормального уровня после обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и володушки, экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового и дудника даурского и экстрактом смеси корня дудника даурского и корня володушки. В частности, образование ROS восстанавливали почти до нормального уровня, что составляло 108,20%, посредством обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, что подсказывает, что экстракт приведенной выше смеси имел наибольший восстанавливающий эффект (таблица 23).
Таблица 23
Эффект экстракта смеси, содержащей по меньшей мере два из коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±3,60 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 165,85±4,67 |
Кора корня пиона полукустарникового | - | 1,0 | 1,0 | 146,91±5,05 |
Корень дудника даурского | - | 1,0 | 1,0 | 144,44±2,97 |
Корень володушки | - | 1,0 | 1,0 | 145,67±5,88 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 125,01±2,39 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 124,69±2,79 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 128,55±1,75 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 122,23±1,03 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 120,82±2,37 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 123,82±1,23 | |
Корень дудника даурского+корень володушки | 1:5 | 1,0 | 1,0 | 131,86±1,67 |
1:1 | 1,0 | 1,0 | 130,99±3,78 | |
1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 132,71±4,54 | |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 108,20±1,90 |
Экспериментальный пример 5: оценка внутриклеточной эффективности смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соответствии с различными соотношениями смешивания
<5-1> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона, показатель митохондриальной активности сначала подтверждали для того, чтобы сравнивать восстанавливающий эффект.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали различными смешанными экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, имеющими различные соотношения смешивания и полученными в примере 5, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого коэффициент выживаемости клеток измеряли с использованием кальцеина таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-1>. Коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальной контрольной группы, которую не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальной контрольной группы, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%) таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 24, сниженную митохондриальную активность, обусловленную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 93,22% от нормального контроля после обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1), что было выше всего (таблица 24).
Таблица 24
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания* | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±4,55 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 55,24±3,74 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 93,22±3,92 |
1:1:2 | 1,0 | 1,0 | 84,26±2,62 | |
1:2:1 | 1,0 | 1,0 | 85,61±2,44 | |
1:2:2 | 1,0 | 1,0 | 86,30±5,38 | |
1:1:0,5 | 1,0 | 1,0 | 84,27±4,51 | |
1:0,5:1 | 1,0 | 1,0 | 83,72±4,65 | |
1:0,5:0,5 | 1,0 | 1,0 | 86,88±0,42 | |
1:1:3 | 1,0 | 1,0 | 86,78±2,71 | |
1:3:1 | 1,0 | 1,0 | 84,87±2,92 | |
1:3:3 | 1,0 | 1,0 | 84,06±3,25 | |
1:1:0,33 | 1,0 | 1,0 | 84,50±4,83 | |
1:0,33:1 | 1,0 | 1,0 | 86,16±3,99 | |
1:0,33:0,33 | 1,0 | 1,0 | 83,89±4,83 | |
1:1:4 | 1,0 | 1,0 | 87,56±2,82 | |
1:4:1 | 1,0 | 1,0 | 84,88±3,59 | |
1:4:4 | 1,0 | 1,0 | 85,65±5,92 | |
1:1:0,25 | 1,0 | 1,0 | 86,30±2,42 | |
1:0,25: 1 | 1,0 | 1,0 | 87,99±2,92 | |
1:0,25:0,25 | 1,0 | 1,0 | 85,17±1,76 | |
1:1:5 | 1,0 | 1,0 | 86,22±0,82 | |
1:5:1 | 1,0 | 1,0 | 86,21±0,72 | |
1:5:5 | 1,0 | 1,0 | 86,31±2,19 | |
1:1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 84,14±1,81 | |
1:0,2:1 | 1,0 | 1,0 | 85,20±3,02 | |
1:0,2:0,2 | 1,0 | 1,0 | 84,47±1,21 |
* Соотношение смешивания экстракта смеси представляет собой массовое соотношение коры корня пиона полукустарникового:корня дудника даурского:корня володушки (масс.:масс.:масс.).
<5-2> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на восстановление митохондриального функционального повреждения в клеточной модели болезни Паркинсона, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали различными смешанными экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, имеющими различные соотношения смешивания и полученными в примере 5, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-3>. Внутриклеточный уровень АТФ, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальной контрольной группы, которую не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. Затем восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ, подтверждали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 25, утрату внутриклеточного АТФ, обусловленную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 94,10% от нормального контроля после обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1), что было выше всего (таблица 25).
Таблица 25
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Внутриклеточное содержание АТФ (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания* | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,73 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 60,88±1,35 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 94,10±3,56 |
1:1:2 | 1,0 | 1,0 | 85,22±1,89 | |
1:2:1 | 1,0 | 1,0 | 87,47±2,61 | |
1:2:2 | 1,0 | 1,0 | 87,00±2,18 | |
1:1:0,5 | 1,0 | 1,0 | 85,18±1,89 | |
1:0,5:1 | 1,0 | 1,0 | 90,22±3,96 | |
1:0,5:0,5 | 1,0 | 1,0 | 86,32±2,12 | |
1:1:3 | 1,0 | 1,0 | 88,14±2,44 | |
1:3:1 | 1,0 | 1,0 | 87,21±2,39 | |
1:3:3 | 1,0 | 1,0 | 87,47±1,92 | |
1:1:0,33 | 1,0 | 1,0 | 88,17±2,15 | |
1:0,33:1 | 1,0 | 1,0 | 88,24±2,59 | |
1:0,33:0,33 | 1,0 | 1,0 | 86,99±1,44 | |
1:1:4 | 1,0 | 1,0 | 86,21±3,60 | |
1:4:1 | 1,0 | 1,0 | 84,51±0,13 | |
1:4:4 | 1,0 | 1,0 | 86,99±1,39 | |
1:1:0,25 | 1,0 | 1,0 | 87,72±4,32 | |
1:0,25: 1 | 1,0 | 1,0 | 85,14±1,84 | |
1:0,25:0,25 | 1,0 | 1,0 | 87,45±3,44 | |
1:1:5 | 1,0 | 1,0 | 86,29±3,92 | |
1:5:1 | 1,0 | 1,0 | 84,01±1,85 | |
1:5:5 | 1,0 | 1,0 | 87,70±1,59 | |
1:1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 87,38±2,60 | |
1:0,2:1 | 1,0 | 1,0 | 87,68±3,14 | |
1:0,2:0,2 | 1,0 | 1,0 | 89,34±3,12 |
* Соотношение смешивания экстракта смеси представляет собой массовое соотношение коры корня пиона полукустарникового:корня дудника даурского:корня володушки (масс.:масс.:масс.).
<5-3> Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS) в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, в клеточной модели болезни Паркинсона, концентрацию внутриклеточных ROS измеряли с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, BV2, микроглиальную клеточную линию мыши, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали различными смешанными экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле, имеющими различные соотношения смешивания, полученными в примере 5, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого ROS количественно определяли на основании соотношения DCF-DA/бисбензимида таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-5>. Уровень ROS, повышенный или пониженный, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, и результаты представлены в виде % от нормального контроля. Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого эффект снижения образования ROS изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 26, образование ROS в результате сниженной митохондриальной активности, обусловленной 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 106,23% от нормального контроля после обработки экстрактом смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1), что было выше всего (таблица 26).
Таблица 26
Эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующий различным соотношениям смешивания, оказываемый на снижение образования реакционноспособных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | ||
Смешанная композиция | Соотношение смешивания* | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,78 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 162,14±0,33 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки | 1:1:1 | 1,0 | 1,0 | 106,23±1,76 |
1:1:2 | 1,0 | 1,0 | 112,70±2,46 | |
1:2:1 | 1,0 | 1,0 | 114,79±1,79 | |
1:2:2 | 1,0 | 1,0 | 111,66±1,73 | |
1:1:0,5 | 1,0 | 1,0 | 114,60±1,39 | |
1:0,5:1 | 1,0 | 1,0 | 112,24±2,03 | |
1:0,5:0,5 | 1,0 | 1,0 | 114,84±3,51 | |
1:1:3 | 1,0 | 1,0 | 112,02±2,65 | |
1:3:1 | 1,0 | 1,0 | 113,82±2,11 | |
1:3:3 | 1,0 | 1,0 | 112,51±2,67 | |
1:1:0,33 | 1,0 | 1,0 | 109,39±1,01 | |
1:0,33:1 | 1,0 | 1,0 | 115,92±1,73 | |
1:0,33:0,33 | 1,0 | 1,0 | 115,92±2,94 | |
1:1:4 | 1,0 | 1,0 | 112,51±3,39 | |
1:4:1 | 1,0 | 1,0 | 113,73±2,78 | |
1:4:4 | 1,0 | 1,0 | 113,94±2,77 | |
1:1:0,25 | 1,0 | 1,0 | 113,39±2,71 | |
1:0,25: 1 | 1,0 | 1,0 | 112,78±1,79 | |
1:0,25:0,25 | 1,0 | 1,0 | 113,77±1,86 | |
1:1:5 | 1,0 | 1,0 | 110,71±2,87 | |
1:5:1 | 1,0 | 1,0 | 113,86±2,75 | |
1:5:5 | 1,0 | 1,0 | 113,28±2,86 | |
1:1:0,2 | 1,0 | 1,0 | 112,75±1,11 | |
1:0,2:1 | 1,0 | 1,0 | 115,85±1,01 | |
1:0,2:0,2 | 1,0 | 1,0 | 112,72±3,66 |
* Соотношение смешивания экстракта смеси представляет собой массовое соотношение коры корня пиона полукустарникового:корня дудника даурского:корня володушки (масс.:масс.:масс.).
Экспериментальный пример 6: оценка внутриклеточной эффективности смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) в соответствии с концентрацией этанола
<6-1> Изменения активных компонентов в смешанном экстракте коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующие концентрации этанола
Исследовали изменения активных компонентов в экстракте смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, соответствующие концентрации этанола.
В частности, экстракционный растворитель этанол добавляли в смесь коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) в различных концентрациях 10%, 30%, 50%, 70% и 90%, после чего следовало экстрагирование таким же образом, как описано в примере <5-1>. Полученные смешанные экстракты поступали на количественный анализ с использованием ВЭЖХ.
Как результат, как показано в таблице 27, смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1) демонстрировал наибольшие содержание пеонола, пеонифлорина, сайкосапонина A и императорина (таблица 27).
Таблица 27
Изменения активных компонентов в смешанном экстракте коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующие концентрации этанола
Концентрация этанола (%) | Содержание маркерного компонента (%) | |||
Пеонол | Пеонифлорин | Императорин | Сайкосапонин A | |
10 | 1,2 | 2,7 | 0,0 | 0,1 |
30 | 2,5 | 2,2 | 0,2 | 1,0 |
50 | 4,2 | 2,7 | 0,4 | 1,8 |
70 | 4,4 | 2,2 | 0,6 | 1,5 |
90 | 4,9 | 4,2 | 1,1 | 1,7 |
<6-2> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона, исследовали показатель митохондриальной активности в клеточной модели болезни Паркинсона.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанными этаноловыми экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского (1:1:1), полученными в примере <5-1>, с использованием различных концентраций этанола в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого коэффициент выживаемости клеток измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-1>, используя кальцеин. Коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого коэффициент выживаемости клеток также измеряли, повышенный или пониженный, по сравнению с таковым у нормального контроля, таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 28, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 95,02% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), что было выше всего (таблица 28).
Таблица 28
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), оказываемый на коэффициент выживаемости клеток, соответствующий концентрации этанола
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Концентрация этанола (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±2,05 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 53,73±2,39 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | 10 | 1,0 | 1,0 | 88,22±1,47 |
30 | 1,0 | 1,0 | 89,85±1,55 | |
50 | 1,0 | 1,0 | 90,11±1,14 | |
70 | 1,0 | 1,0 | 92,39±1,74 | |
90 | 1,0 | 1,0 | 95,02±2,61 |
<6-3> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на утрату АТФ в клеточной модели болезни Паркинсона
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на митохондриальное функциональное повреждение в клеточной модели болезни Паркинсона, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанными этаноловыми экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского (1:1:1), полученными в примере <5-1>, с использованием различных концентраций этанола в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-3>. Увеличение или снижение внутриклеточного уровня АТФ вычисляли посредством сравнения с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только DMSO. Внутриклеточный уровень АТФ, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого восстанавливающий эффект, оказываемый на внутриклеточный уровень АТФ, изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 29, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 96,45% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом в 90% этаноле, что было выше всего (таблица 29).
Таблица 29
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Внутриклеточный АТФ (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Концентрация этанола (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,34 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 59,28±2,45 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | 10 | 1,0 | 1,0 | 89,31±2,33 |
30 | 1,0 | 1,0 | 89,34±1,68 | |
50 | 1,0 | 1,0 | 90,14±1,47 | |
70 | 1,0 | 1,0 | 93,81±2,59 | |
90 | 1,0 | 1,0 | 96,45±2,41 |
<6-4> Снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS) в клеточной модели болезни Паркинсона смешанным этаноловым экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1) в соответствии с концентрацией этанола
Для того чтобы исследовать снижающий эффект смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1), оказываемый на образование ROS, обусловленное митохондриальным функциональным повреждением, в клеточной модели болезни Паркинсона в соответствии с концентрацией этанола, концентрацию внутриклеточных ROS измеряли с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, BV2, микроглиальную клеточную линию мыши, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали различными смешанными этаноловыми экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского, имеющими различные соотношения смешивания, которые получали в примере 5, с использованием различных концентраций этанола, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого ROS количественно определяли на основании соотношения DCF-DA/бисбензимида таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-5>. Уровень ROS, повышенный или пониженный, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, и результаты представлены в виде % от нормального контроля. Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого эффект снижения образования ROS изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 30, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 106,06% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), что было выше всего (таблица 30).
Таблица 30
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.), соответствующий концентрации этанола, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Концентрация этанола (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,05 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 161,71±1,88 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | 10 | 1,0 | 1,0 | 111,22±1,58 |
30 | 1,0 | 1,0 | 110,67±2,23 | |
50 | 1,0 | 1,0 | 108,27±2,98 | |
70 | 1,0 | 1,0 | 108,75±2,24 | |
90 | 1,0 | 1,0 | 105,06±1,55 |
Экспериментальный пример 7: оценка внутриклеточной эффективности смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соответствии с типом экстракционного растворителя
<7-1> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона, в соответствии с типом экстракционного растворителя
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на митохондриальную активность в клеточной модели болезни Паркинсона, в соответствии с типом экстракционного растворителя, исследовали показатель митохондриальной активности в клеточной модели болезни Паркинсона.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанными этаноловыми экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского (1:1:1), полученными в примере <5-1>, с использованием различных концентраций этанола, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого коэффициент выживаемости клеток измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-1>, с использованием кальцеина. Коэффициент выживаемости клеток, который повышался или снижался по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого коэффициент выживаемости клеток также измеряли, повышенный или пониженный, по сравнению с таковым у нормального контроля, таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 31, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 93,09% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, что было выше всего (таблица 31).
Таблица 31
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на коэффициент выживаемости клеток, в соответствии с типом экстракционного растворителя
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Коэффициент выживаемости клеток (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Экстракционный растворитель и концентрация (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,22 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 55,29±1,06 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+ корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | Вода | 1,0 | 1,0 | 87,80±2,83 |
90% этанол | 1,0 | 1,0 | 93,09±1,52 | |
90% метанол | 1,0 | 1,0 | 87,15±1,36 | |
90% бутанол | 1,0 | 1,0 | 89,76±2,95 |
<7-2> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ в клеточной модели болезни Паркинсона, в соответствии с типом экстракционного растворителя
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на митохондриальное функциональное повреждение в клеточной модели болезни Паркинсона, в соответствии с типом экстракционного растворителя, осуществляли анализ АТФ для того, чтобы подтверждать восстанавливающий эффект, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанными экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского (1:1:1), полученными в примере 5, с использованием различных экстракционных растворителей, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого внутриклеточный уровень АТФ измеряли таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-3>. Внутриклеточный уровень АТФ, повышенный или пониженный по сравнению с таковым у нормальных контрольных клеток, которые не обрабатывали приведенным выше экстрактом или его активным компонентом и вместо этого обрабатывали DMSO, вычисляли и представляли в виде процентной доли (%). Отрицательный контроль обрабатывали только 1 мМ MPP+, что вело к созданию клеточной модели болезни Паркинсона, которую не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом. После этого восстанавливающий эффект, оказываемый на внутриклеточный уровень АТФ, изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 32, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 95,90% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом в 90% этаноле, что было выше всего (таблица 32).
Таблица 32
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на утрату внутриклеточного АТФ в соответствии с типом экстракционного растворителя
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | Внутриклеточный АТФ (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Экстракционный растворитель и концентрация (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±1,78 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 54,10±1,69 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | Вода | 1,0 | 1,0 | 89,21±2,34 |
90% этанол | 1,0 | 1,0 | 95,90±3,64 | |
90% метанол | 1,0 | 1,0 | 90,87±1,86 | |
90% бутанол | 1,0 | 1,0 | 88,97±1,78 |
<7-3> Снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS) в клеточной модели болезни Паркинсона смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соответствии с типом экстракционного растворителя
Для того чтобы исследовать снижающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на образование ROS, обусловленное митохондриальным функциональным повреждением, в клеточной модели болезни Паркинсона в соответствии с типом экстракционного растворителя, концентрацию внутриклеточных ROS измеряли с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, BV2, микроглиальную клеточную линию мыши, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали смешанными экстрактами коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского, полученными в примере 5, с использованием различных экстракционных растворителей, в концентрации 1 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого ROS количественно определяли на основании соотношения DCF-DA/бисбензимида таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-5>. Уровень ROS, повышенный или пониженный, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом или его активным компонентом, но обрабатывали DMSO, и результаты представлены в виде % от нормального контроля. Создавали отрицательный контроль для клеточной модели болезни Паркинсона посредством обработки только 1 мМ MPP+, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого эффект снижения образования ROS изучали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 33, митохондриальную активность, сниженную 1-метил-4-фенилпиридинием, восстанавливали до 106,82% от нормального контроля после обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, что было выше всего (таблица 33).
Таблица 33
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в соответствии с типом экстракционного растворителя, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (MPP+, мМ) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | ||
Вещество для обработки | Экстракционный растворитель и концентрация (%) | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | - | 100,00±5,55 |
Отрицательный контроль | - | - | 1,0 | 161,78±7,06 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1; масс.:масс.:масс.) | Вода | 1,0 | 1,0 | 112,71±3,28 |
90% этанол | 1,0 | 1,0 | 106,82±2,22 | |
90% метанол | 1,0 | 1,0 | ||
90% бутанол | 1,0 | 1,0 |
Экспериментальный пример 8: оценка внутриклеточной эффективности смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
<8-1> Улучшение митохондриальной активности смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы оценивать внутриклеточную эффективность экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, уровни экспрессии TFAM и H2AX, репрезентативных маркеров биогенеза митохондрий, в клетках нейробластомы человека измеряли с помощью вестерн-блоттинга.
В частности, SH-SY5Y, клеточную линию нейробластомы человека, инокулировали в DMEM/F12 (1:1) с добавлением 10% FBS, после чего следовало культивирование в инкубаторе при 37°C, 5% CO2/95% воздуха (O2). Затем культивируемые клетки переносили в бессывороточную среду с плотностью 1×105 клеток/лунка. Клетки обрабатывали лиофилизатом смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового и корня дудника даурского в 90% этаноле (1:1:1), полученным в примере <5-1>, в концентрации 1,0 мкг/мл, после чего следовало культивирование в течение 4 часов. По завершении культивирования, создавали клеточную модель болезни Паркинсона таким же образом, как описано в экспериментальном примере <4-1>. После этого предварительно обработанные клетки обрабатывали 0,5 мМ MPP+, после чего следовало культивирование в течение 24 часов для того, чтобы индуцировать нарушение функции митохондрий. Из клеток получали внутриклеточный белок, после чего следовал вестерн-блоттинг для того, чтобы исследовать фосфорилирование белка STAT (S727 и Y705), фосфорилирование белка AKT (T308 и S473) и уровни экспрессии белков TH, TFAM, и H2AX. β-актин использовали в качестве контрольного белка для сравнения экспрессии. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению, но обрабатывали DMSO. Отрицательный контроль обрабатывали только 0,5 мМ MPP+, чтобы вызывать митохондриальное повреждение, и в этот момент отрицательный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению.
Как результат, как показано в таблице 34, когда смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле обрабатывали клетки в концентрации 1,0 мкг/мл, восстанавливали фосфорилирование белка STAT (Y705), фосфорилирование белка AKT (T308 и S473) и уровни экспрессии TH, TFAM, и H2AX почти до нормального уровня (таблица 34).
Таблица 34
Уровни экспрессии белков с генов, связанных с митохондриальной активностью, соответствующие смешанному экстракту коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | pSTAT(S727)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,04 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 95,24±5,27 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 106,82±2,98 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | pSTAT(Y705)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,18 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 7,41±0,91 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 42,54±5,33 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | STAT3/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,86 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 101,27±4,05 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 99,39±2,02 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | pAKT(T308)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,08 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 10,45±0,82 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 98,42±3,07 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | pAKT(S473)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,10 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 8,13±0,72 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 95,32±3,09 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | AKT1/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,06 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 96,21±3,07 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 99,41±2,02 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | TH/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,06 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 9,28±1,01 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 97,38±4,37 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | TFAM/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,97 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 15,83±2,12 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 97,21±3,05 |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | Концентрация индуктора (MPP+, 0,5 мМ) | H2AX/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,07 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 4,11±0,72 |
Кора корня пиона полукустарникового+корень дудника даурского+корень володушки (1:1:1, масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 89,32±2,73 |
<8-2> Экспрессия маркерного гена стресса эндоплазматического ретикулума, соответствующая смешанному экстракту коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на восстановление стресса эндоплазматического ретикулума, измеряли уровни экспрессии маркерных генов стресса эндоплазматического ретикулума GRP78 и XBP1p.
В частности, клетки SH-SY5Y культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <2-2>, и индуцировали стресс эндоплазматического ретикулума. После этого осуществляли RT-ПЦР с использованием клеток, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, таким же образом, как описано в экспериментальном примере <1-4>, после чего следовал электрофорез для того, чтобы исследовать уровни экспрессии генов GRP78 и XBP1p, на 1,5% агарозном геле под УФ. Нормальный контроль не обрабатывали экстрактом по изобретению, но обрабатывали только DMSO. Отрицательный контроль не обрабатывали экстрактом или активным компонентом, но обрабатывали только 0,5 мкг/мл тапсигаргина для того, чтобы индуцировать стресс эндоплазматического ретикулума. После этого экспрессию маркерного гена стресса эндоплазматического ретикулума подтверждали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 35 и таблице 36, уровни экспрессии маркерных генов стресса эндоплазматического ретикулума GRP78 и XBP1p восстанавливали до нормального уровня в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный в них, посредством обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле в концентрации 1,0 мкг/мл (таблицы 35 и 36).
Таблица 35
Экспрессия мРНК GRP78, соответствующая смешанному экстракту коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный тапсигаргином
Обработка | Индуктор (тапсигаргин, мкг/мл) | мРНК GRP78/18S | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 2,01±0,04 |
Отрицательный контроль | - | 0,5 | 100,0±3,05 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 0,5 | 3,12±0,02 |
Таблица 36
Экспрессия мРНК XBP1p, соответствующая смешанному экстракту коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в клетках, имеющих стресс эндоплазматического ретикулума, индуцированный тапсигаргином
Обработка | Индуктор (тапсигаргин, мкг/мл) | XBP1P/18S мРНК | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 3,46±0,03 |
Отрицательный контроль | - | 0,5 | 100,0±2,79 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 0,5 | 2,98±0,01 |
<8-3> Противовоспалительный эффект и антиоксидантный эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать восстанавливающий эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на воспалительную реакцию, способ Грисса осуществляли для того, чтобы измерять концентрацию нитрита/нитрата(NOx) в клеточной культуральной среде и концентрацию внутриклеточных ROS с использованием 2ʹ,7ʹ-дихлорфлуоресцеина диацетата (DCF-DA).
В частности, клетки BV2 культивировали таким же образом, как описано в экспериментальном примере <3-1>, и индуцировали воспалительную реакцию. После этого получали 100 мл клеточной культуральной среды, в которые добавляли 100 мл реактива Грисса, содержащего соляную кислоту, содержащую 5% сульфаниламид и 2% нафтилэтилендиамин, после чего следовала реакция в темном помещении в течение 30 минут. По завершении реакции, OD540 измеряли с использованием считывателя микропланшетов EISA (Versamax, USA). Концентрацию оксида азота (II) в среде вычисляли с использованием стандартной калибровочной кривой для нитрита натрия. Для того чтобы измерять концентрацию ROS, клетки обрабатывали 1 мкМ DCF-DA и 0,05 мкМ бисбензимида (Hoechst 33342), после чего следовало окрашивание при 37°C в течение 1 часа. После окрашивания интенсивность флуоресценции DCF-DA измеряли на 485 нм/535 нм, а интенсивность флуоресценции бисбензимида измеряли на 335 нм/460 нм. На основании соотношения DCF-DA/бисбензимида, количественно определяли ROS. Количество ROS, повышенное или пониженное, сравнивали с таковым у нормального контроля, который не обрабатывали экстрактом, но обрабатывали DMSO, и результаты представлены в виде %. Отрицательный контроль обрабатывали с использованием только 100 нг/мл LPS для того, чтобы индуцировать воспалительную реакцию, но без обработки экстрактом или его активным компонентом. После этого эффект снижения концентрации оксида азота (II) и эффект снижения концентрации ROS исследовали таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 37, подтверждали, что экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению оказывает эффект снижения LPS-опосредованного образования NO (таблица 37) и эффект снижения опосредованного DCF-DA образования ROS, обусловленных воспалительной реакцией и стрессом (таблица 38).
Таблица 37
Эффект снижения концентрации оксида азота (II) (NO) у смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | NO (мМ) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 46,79±3,45 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 200,32±10,24 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 100 | 42,67±2,09 |
Таблица 38
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на снижение образования реакционно-способных частиц кислорода (ROS)
Обработка | Индуктор (LPS, нг/мл) | DCF-DA-ROS (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Концентрация (мкг/мл) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,24±6,79 |
Отрицательный контроль | - | 100 | 134,09±19,13 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 100 | 115,83±8,09 |
Экспериментальный пример 9: терапевтический эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на болезнь Паркинсона in vivo
<9-1> Создание модели болезни Паркинсона на животном: MPTP-индуцированная модель болезни Паркинсона на мышах
Как показано на фиг. 1, модель болезни Паркинсона на животных создавали для того, чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона (фиг. 1).
В частности, распределяли самцов мышей C57BL/6 в возрасте 5 недель (масса: приблизительно 19-22 г), после чего следовала адаптация в лаборатории для животных Dong-A ST Research Division в течение по меньшей мере 1 недели. В этот момент, регулировали температуру в помещении 22±2°C и контролировали влажность 53±3%. Задавали цикл света-темноты 12 ч/12 ч. Воду и корм предоставляли свободно. После адаптации мышей группировали по 5 группам, и в каждую группу распределяли 6 мышей. Лиофилизат смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), полученного в примере <5-1>, растворяли в 3% HPMC и вводили перорально (p.o.) мышам в дозе 1, 3 и 10 мг/кг раз в сутки в течение 14 суток. После этого мышам вводили (интраперитонеально, i.p.) 1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин (MPTP) в дозе 30 мг/кг через 3 часа после перорального введения в течение 5 суток с 8-х суток эксперимента, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Нормальный контроль вводили в 3% HPMC в дозе 5 мл/кг без смешанного экстракта, и после этого интраперитонеально вводили PBS без MPTP.
<9-2> Улучшение двигательной координации в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, поведенческий тест (тест с шестом, тест с вращающимся стержнем) осуществляли для MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах после введения экстракта приведенной выше смеси.
В частности, модель болезни Паркинсона на мышах создавали в экспериментальном примере <8-1>. Животную модель через 14 суток после создания помещали на верхнюю часть шеста, имеющего шероховатую поверхность (диаметр: 8 мм, высота: 55 см). Время, необходимое мыши для перемещения полностью вниз, измеряли каждые 30 секунд, и определяли его как время для поворота (T-turn), а также измеряли время, необходимое мыши для того, чтобы попасть на пол, которое определяли как время локомоторной активности (T-LA). Животное помещали на колесо, у которого можно регулировать об./мин. Измеряли время для падения животного вниз (задержку падения). Нормальный контроль обрабатывали наполнителем 3% HPMC. Отрицательному контролю интраперитонеально вводили (i.p.) MPTP в дозе 30 мг/кг в течение 5 суток, но без обработки экстрактом смеси после этого. Затем тест с шестом осуществляли с использованием контролей для того, чтобы измерять T-turn и T-LA, а тест с вращающимся стержнем осуществляли для того, чтобы измерять задержку падения таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 39 и таблице 40, по сравнению с нормальной контрольной группой, которую обрабатывали наполнителем, T-turn и T-LA были значительно увеличены в отрицательном контроле, который обрабатывали только MPTP. В то же время, в модели болезни Паркинсона на мышах, которых обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, T-turn и T-LA были снижены (таблица 39 и таблица 40). Как показано в таблице 41, в тесте с вращающимся стержнем подтверждали, что задержка падения значительно снижена в отрицательном контроле, который обрабатывали только MPTP, тогда как задержка падения увеличена в модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле. Следовательно, подтверждено, что двигательную координацию восстанавливали в модели болезни Паркинсона на мышах посредством обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (таблицы 39-41).
Таблица 39
Снижение T-turn с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | T-turn (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 1,96±0,17 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 4,79±0,41 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 4,06±0,36 |
3 | 30 | 3,74±0,42 | |
10 | 30 | 2,84±0,19 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которой обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
Таблица 40
Снижение T-LA с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | T-turn (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 4,63±0,37 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 8,27±0,18 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 7,93±0,63 |
3 | 30 | 7,27±0,27 | |
10 | 30 | 6,43±0,44 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которой обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
Таблица 41
Снижение задержки падения с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Задержка падения (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 211,03±4,69 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 99,87±32,47 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 153,34±27,13 |
3 | 30 | 187,06±24,94 | |
10 | 30 | 181,76±19,81 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которым обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
<9-3> Защитный эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на дофаминергические нейроны in vivo
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый болезнь Паркинсона, получали ткань головного мозга MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали экстрактом смеси по изобретению, с использованием которой подтверждали защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны в полосатом теле (ST) и черном веществе (SN).
В частности, мышиной модели, которая закончила поведенческий тест в экспериментальном примере <8-2>, вводили золетил (50 мг/кг) через внутримышечную инъекцию для анестезии. PBS, содержащий 4% параформальдегид, перфузировали через сердце и после этого извлекали головной мозг. Извлеченный головной мозг фиксировали в 4% параформальдегиде еще раз и затем погружали в 30% раствор сахарозы при 4°C до тех пор, пока головной мозг не утопал, затем его замораживали. Замороженную ткань головного мозга резали на 30 мкм коронарные срезы с использованием микротома-криостата (название продукта: CM3000, Leica, Germany), и срезы хранили в стоковом растворе, содержащем глицерин, этиленгликоль и PBS при 4°C. Срезы помещали на покровное стекло и промывали в PBS, после чего следовала обработка PBS, содержащим 1% H2O2 в течение 15 минут для того, чтобы устранять пероксидазную активность в ткани. После этого его обрабатывали антителом против тирозингидроксилазы (anti-TH; 1:2000, кроличьего происхождения; Millipore, USA) в качестве первичного антитела, после чего следовала реакция в течение ночи. Его обрабатывали биотинилированным антителом против IgG кролика в качестве вторичного антитела, после чего следовала реакция при комнатной температуре в течение 90 минут. По завершении реакции, ткань обрабатывали раствором авидин-биотинового комплекса, содержащимся в наборе Vectastain ABC (Vector Laboratories, USA), после чего следовала реакция в течение 1 часа. Развитие окраски индуцировали с использованием диаминобензидина. Для того чтобы исследовать эффект защиты дофаминовых клеток, измеряли оптическую плотность полосатого тела (ST) и затем в черном веществе (SN) подсчитывали положительные по тирозингидроксилазе (TH) клетки. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю интраперитонеально вводили (i.p.) MPTP в дозе 30 мг/кг в течение 5 суток, но без обработки экстрактом смеси после этого.
Как результат, как показано в таблице 42, оптическая плотность окрашенной TH в полосатом теле (ST) модели болезни Паркинсона на животном, которому вводили смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, возрастала в зависимости от дозы, что подсказывает, что экстракт имеет защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны. Как показано в таблице 43, положительные по TH клетки в черном веществе (SN) также возрастали в соответствии со введением смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в зависимости от дозы (таблицы 42 и 43).
Таблица 42
Увеличение TH оптической плотности в полосатом теле (ST) с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Оптическая плотность (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00± 4,33 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 43,48±4,02 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 52,70±2,39 |
3 | 30 | 66,45±5,23 | |
10 | 30 | 72,00±4,21 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которым обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
Таблица 43
Увеличение TH-положительных клеток в черном веществе (SN) с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | TH-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,99 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 52,83±6,42 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 62,27±2,78 |
3 | 30 | 73,20±3,93 | |
10 | 30 | 85,14±4,69 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которым обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
<9-4> Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на количество дофамина in vivo
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, получали ткань головного мозга MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали экстрактом смеси по изобретению, и измеряли в ней уровень дофамина.
В частности, головный мозг извлекали у мыши, закончившей поведенческий тест в экспериментальном примере <8-2>. ST отделяли от извлеченного головноо мозга, после чего следовала гомогенизация. В него добавляли перхлорную кислоту (Sigma), после чего следовало культивирование. Культивированное ST фильтровали и к нему прикладывали давление/концентрировали. Концентрированный экстракт поступал на хроматографию для того, чтобы измерять уровень дофамина. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю интраперитонеально вводили (i.p.) MPTP в дозе 30 мг/кг в течение 5 суток, но без обработки экстрактом смеси после этого.
Как результат, как показано в таблице 44, уровень дофамина значительно снижен в модели болезни Паркинсона на животных, которую не обрабатывали смешанным этаноловым экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, но уровень дофамина значительно повышен, когда животному вводили смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (таблица 44).
Таблица 44
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на количество дофамина в MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Содержание дофамина (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг*) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,02±7,69 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 34,16±4,77 |
Смешанный экстракт кора корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 49,87±3,86 |
3 | 30 | 53,77±2,09 | |
10 | 30 | 57,02±2,76 |
* Доза представляет массу (мг) экстракта смеси, которым обрабатывают кг массы тела мыши животной модели
<9-5> Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на TH, митохондрий и систему передачи инсулиновых сигналов in vivo
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, получали ткань головного мозга MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали экстрактом смеси по изобретению, и измеряли уровни экспрессии TH и ND9, митохондриального маркера и уровень фосфорилирования Akt1, маркера системы передачи инсулиновых сигналов.
В частности, получали срезы черного вещества (SN), полосатого тела (ST) и мозжечка таким же образом, как описано в экспериментальном примере <8-3>, из которых получали белок ткани головного мозга. Осуществляли вестерн-блоттинг белка для того, чтобы измерять уровни экспрессии TH и ND9 и уровень фосфорилирования Akt1 (S473 и T308). В этот момент, β-актин использовали в качестве контрольного белка для сравнения экспрессии. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю интраперитонеально вводили (i.p.) MPTP в дозе 30 мг/кг в течение 5 суток, но без обработки экстрактом смеси после этого.
Как результат, как показано в таблицах 45-47, уровни экспрессии TH и ND9 в SN, ST и мозжечке животной модели, которой вводили смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле в дозе 10 мг/кг, восстанавливали почти до нормального уровня как у нормального контроля, и уровень фосфорилирования белка Akt1 также восстанавливали до нормального уровня (таблицы 45-47).
Таблица 45
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на повреждение TH, митохондрий и системы передачи инсулиновых сигналов в SN из MPTP-индуцированой модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(T308)/β-актин | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±1,31 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 5,65±0,97 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 67,43±4,62 |
3 | 30 | 71,07±3,99 | |
10 | 30 | 79,03±3,12 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(S473)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±1,82 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 2,90±0,37 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 72,74±6,81 |
3 | 30 | 83,62±2,95 | |
10 | 30 | 87,78±4,12 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Akt/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,95 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 101,94±1,17 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 103,71±3,95 |
3 | 30 | 97,34±2,60 | |
10 | 30 | 97,82±3,78 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | TH/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±1,25 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 3,79±0,06 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 76,62±5,65 |
3 | 30 | 88,76±5,57 | |
10 | 30 | 80,27±4,96 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | ND9/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,81 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 6,17±0,57 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 83,42±2,53 |
3 | 30 | 86,03±2,78 | |
10 | 30 | 87,71±3,76 |
Таблица 46
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на повреждение TH, митохондрий и системы передачи инсулиновых сигналов в ST из MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(T308)/β-актин | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00± 3,73 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 8,82±0,41 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 76,83±3,96 |
3 | 30 | 88,86± 4,94 | |
10 | 30 | 82,53±7,71 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(S473)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,97 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 6,05±1,03 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 72,53±5,71 |
3 | 30 | 86,77±2,65 | |
10 | 30 | 96,18±6,11 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Akt/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,11 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 101,34±4,14 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 96,35±6,44 |
3 | 30 | 104,85±2,24 | |
10 | 30 | 103,51±3,91 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | TH/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,61 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 5,41±1,72 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 87,02±5,97 |
3 | 30 | 93,53±2,59 | |
10 | 30 | 92,79±5,41 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | ND9/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±4,88 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 5,03±0,74 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 79,33±1,18 |
3 | 30 | 86,85± 2,63 | |
10 | 30 | 92,31±3,68 |
Таблица 47
Восстанавливающий эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на повреждение TH, митохондрий и системы передачи инсулиновых сигналов в мозжечке у MPTP-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(T308)/β-актин | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00± 3,73 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 8,82±0,41 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 76,83±3,96 |
3 | 30 | 88,86± 4,94 | |
10 | 30 | 82,53±7,71 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | pAkt(S473)/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±3,97 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 6,05±1,03 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 72,53±5,71 |
3 | 30 | 86,77±2,65 | |
10 | 30 | 96,18±6,11 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | Akt/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,11 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 101,34±4,14 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 96,35±6,44 |
3 | 30 | 104,85±2,24 | |
10 | 30 | 103,51±3,91 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | TH/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±2,61 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 5,41±1,72 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 87,02±5,97 |
3 | 30 | 93,53±2,59 | |
10 | 30 | 92,79±5,41 | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | Доза индуктора (MPTP, мг/кг 5×, ip) | ND9/β-актин |
Нормальный контроль | - | - | 100,00±4,88 |
Отрицательный контроль | - | 30 | 5,03±0,74 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 1 | 30 | 79,33±1,18 |
3 | 30 | 86,85± 2,63 | |
10 | 30 | 92,31±3,68 |
Экспериментальный пример 10: терапевтический эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на болезнь Паркинсона in vivo
<10-1> Создание модели болезни Паркинсона на животном: 6-OHDA-индуцированной (6-гидроксидофамином) модели болезни Паркинсона на мышах
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, модель болезни Паркинсона на животных конструировали, как показано на фиг. 2 (фиг. 2).
В частности, распределяли самцов мышей ICR в возрасте 8 недель (масса: приблизительно 19-22 г), после чего следовала адаптация в лаборатории для животных Kyung Hee University College of Pharmacy в течение по меньшей мере 1 недели. В этот момент регулировали температуру в помещении 22±2°C и контролировали влажность 53±3%. Задавали цикл света-темноты 12 ч/12 ч. Воду и корм предоставляли свободно. После адаптации мышей разделяли на 3 группы, и в каждую группу распределяли 6 мышей. 16 мкг 6-OHDA (6-гидроксидофамин) разводили в 2 мл 0,1% аскорбиновой кислоты и инъецировали каждой мыши посредством стереотактического хирургического вмешательства, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Лиофилизат смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), полученного в примере <5-1>, растворяли в воде и вводили перорально (p.o.) мышам в дозе 3 мг/кг раз в сутки в течение 7 суток. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю инъецировали 0,1% аскорбиновую кислоту, содержащую 6-OHDA, посредством стереотактического хирургического вмешательства.
<10-2> Улучшение двигательной координации с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, поведенческий тест (тест с шестом, тест с вращающимся стержнем) осуществляли с использованием 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах после введения экстракта приведенной выше смеси.
В частности, модель болезни Паркинсона на мышах создавали в экспериментальном примере <9-1>. Животную модель через 7 суток после создания помещали на верхнюю часть шеста, имеющего шероховатую поверхность (диаметр: 8 мм, высота: 55 см). Время, необходимое мыши для перемещения полностью вниз, измеряли каждые 30 секунд, и определяли его как время для поворота (T-turn), а также измеряли время, необходимое мыши для того, чтобы попасть на пол, которое определяли как время локомоторной активности (T-LA). Животное помещали на колесо, у которого можно регулировать об./мин. Измеряли время для падения животного вниз (задержку падения). Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю инъецировали 0,1% аскорбиновую кислоту, содержащую 6-OHDA, посредством стереотактического хирургического вмешательства. Затем тест с шестом осуществляли с использованием контролей для того, чтобы измерять T-turn и T-LA, а тест с вращающимся стержнем осуществляли для того, чтобы измерять задержку падения таким же образом, как описано выше.
Как результат, как показано в таблице 48 и таблице 49, по сравнению с нормальной контрольной группой, которую обрабатывали растворителем, T-turn и T-LA значительно увеличены в группе отрицательного контроля, которую обрабатывали только 6-OHDA. В то же время, в модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле, T-turn и T-LA были снижены (таблица 48 и таблица 49). Как показано в таблице 50, в тесте с вращающимся стержнем подтверждали, что задержка падения значительно снижена в отрицательном контроле, который обрабатывали только 6-OHDA, тогда как задержка падения увеличена в модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле. Следовательно, подтверждено, что двигательную координацию восстанавливали в модели болезни Паркинсона на мышах посредством обработки смешанным экстрактом коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (таблицы 48-50).
Таблица 48
Снижение T-turn с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (6-OHDA, мкг) | T-turn (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 3,75±0,76 |
Отрицательный контроль | - | 16 | 15,64±4,01 |
Смешанный экстракт кора корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 3 | 16 | 4,71±1,65 |
Таблица 49
Снижение T-LA с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (6-OHDA, мкг) | T-LA (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 9,54±1,67 |
Отрицательный контроль | - | 16 | 17,24±7,01 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 3 | 16 | 7,87±3,08 |
Таблица 50
Снижение задержки падения с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (6-OHDA, мкг) | Задержка падения (с) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 46,08±19,24 |
Отрицательный контроль | - | 16 | 3,11±0,38 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 3 | 16 | 17,20±3,19 |
<10-3> Защитный эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на дофаминергические нейроны in vivo
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, получали ткань головного мозга 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах, которую обрабатывали экстрактом смеси по изобретению, с использованием которого подтверждали защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны в полосатом теле (ST) и черном веществе (SN).
В частности, мышиной модели, закончившей поведенческий тест в экспериментальном примере <9-2>, вводили золетил (50 мг/кг) через внутримышечную инъекцию для анестезии. PBS, содержащий 4% параформальдегид, перфузировали через сердце и после этого извлекали головной мозг. Извлеченный головной мозг фиксировали в 4% параформальдегиде еще раз и затем погружали в 30% раствор сахарозы при 4°C до тех пор, пока головной мозг не утопал, затем его замораживали. Замороженную ткань головного мозга нарезали на 30 мкм коронарные срезы с использованием микротома-криостата (название продукта: CM3000, Leica, Germany), и срезы хранили в стоковом растворе, содержащем глицерин, этиленгликоль и PBS, при 4°C. Срезы помещали на покровное стекло и промывали в PBS, после чего следовала обработка PBS, содержащим 1% H2O2, в течение 15 минут для того, чтобы устранять пероксидазную активность в ткани. После этого их обрабатывали антителом против тирозингидроксилазы (anti-TH; 1:2000, кроличьего происхождения; Millipore, USA) в качестве первичного антитела, после чего следовала реакция в течение ночи. Их обрабатывали биотинилированным антителом против IgG кролика в качестве вторичного антитела, после чего следовала реакция при комнатной температуре в течение 90 минут. По завершении реакции, ткань обрабатывали раствором авидин-биотинового комплекса, входящим в набор Vectastain ABC (Vector Laboratories, USA), после чего следовала реакция в течение 1 часа. Развитие окраски индуцировали с использованием диаминобензидина. Для того чтобы исследовать эффект защиты дофаминовых клеток, измеряли оптическую плотность полосатого тела (ST) и затем в черном веществе (SN) подсчитывали положительные по тирозингидроксилазе (TH) клетки. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю инъецировали 0,1% аскорбиновую кислоту, содержащую 6-OHDA, посредством стереотактического хирургического вмешательства.
Как результат, как показано в таблице 51 и таблице 52, возрастала оптическая плотность окрашенной TH в полосатом теле (ST) модели болезни Паркинсона на животном, которой вводили смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в зависимости от дозы, что подсказывает, что экстракт имел защитный эффект, оказываемый на дофаминергические нейроны. Положительные по TH клетки в черном веществе (SN) также возрастали в соответствии со введением смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, в зависимости от дозы (таблицы 51 и 52).
Таблица 51
Увеличение TH оптической плотности в полосатом теле (ST) с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (6-OHDA, мкг) | Оптическая плотность (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,01±6,58 |
Отрицательный контроль | - | 16 | 58,46±4,09 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 3 | 16 | 76,84±5,37 |
Таблица 52
Увеличение TH-положительных клеток в черном веществе (SN) с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 6-OHDA-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах
Обработка | Доза индуктора (6-OHDA, мкг) | TH-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,00±7,94 |
Отрицательный контроль | - | 16 | 63,67±3,08 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 3 | 16 | 76,90±2,18 |
Экспериментальный пример 11: терапевтический эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на болезнь Паркинсона in vivo
<11-1> Создание модели болезни Паркинсона на животном: индуцированная ротеноном модель болезни Паркинсона на крысах
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый болезнь Паркинсона, модель болезни Паркинсона на животных создавали как показано на фиг. 3 (фиг. 3).
В частности, распределяли самцов крыс SD в возрасте 7 недель (масса: 200-220 г), после чего следовала адаптация в лаборатории для животных Dong-A ST Research Division в течение по меньшей мере 1 недели. В этот момент регулировали температуру в помещении 22±2°C и контролировали влажность 53±3%. Задавали цикл света-темноты 12 ч/12 ч. Воду и корм предоставляли свободно. После адаптации крыс разделяли на 3 группы, и в каждую группу распределяли 6 крыс. Лиофилизат смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), полученного в примере <5-1>, растворяли в воде и вводили перорально (p.o.) крысам в дозе 10 мг/кг раз в сутки в течение 6 недель. После этого крысам вводили (интраперитонеально, i.p.) ротенон в дозе 2,5 мг/кг через 1 неделю после перорального введения раз в сутки в течение 5 недель, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю вводили (интраперитонеально, i.p.) ротенон в дозе 2,5 мг/кг раз в сутки в течение 5 недель.
<11-2> Улучшение двигательной координации в индуцированной ротеноном модели болезни Паркинсона на крысах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, осуществляли поведенческий тест (тест с цилиндром) с использованием индуцированной ротеноном модели болезни Паркинсона на крысах после введения экстракта приведенной выше смеси.
В частности, тест с цилиндром осуществляли с использованием модели болезни Паркинсона на крысах, созданной в экспериментальном примере <11-1>. Крыс помещали в цилиндр (высота: 30 см, диаметр: 20 см). Считали, сколько раз крыса поднимала туловище и помещала лапы на стенку в течение 5 минут. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю интраперитонеально вводили ротенон в дозе 2,5 мг/кг раз в сутки в течение 5 недель. Аналогичным образом, с использованием контролей подсчитывали, сколько раз крыса поднимала туловище и помещала лапы на стенку в течение 5 минут.
Как результат, как показано в таблице 53, число подъемов в группе отрицательного контроля, которой вводили только ротенон, было значительно снижено, по сравнению с таковым в нормальной контрольной группе, которую обрабатывали только растворителем, которое повышалось при введении смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (таблица 53).
Таблица 53
Эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на число раз, когда лапы помещали на стенку в течение 5 минут в индуцированной ротеноном модели болезни Паркинсона на крысах
Обработка | Доза индуктора (ротенон, мг/кг) | № подъемов на задние лапы за 5 мин | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 13,75±2,14 |
Отрицательный контроль | - | 2,5 | 2,19±0,49 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 2,5 | 6,05±1,85 |
<11-3> Снижение накопления α-синуклеина с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, ткани головного мозга получали из индуцированной ротеноном модели болезни Паркинсона на крысах, которую обрабатывали смешанным экстрактом. Изучали паттерн накопления олигомеров α-синуклеина в черном веществе (SN) ткани головного мозга.
В частности, крысиной модели, которая заканчивала поведенческий тест в экспериментальном примере <11-2>, вводили золетил (50 мг/кг) через внутримышечную инъекцию для анестезии. PBS, содержщий 4% параформальдегид, перфузировали через сердце и после этого извлекали головной мозг. Извлеченный головной мозг фиксировали в 4% параформальдегиде еще раз и затем погружали в 30% раствор сахарозы при 4°C до тех пор, пока головной мозг не утопал, затем его замораживали. Замороженную ткань головного мозга нарезали на 30 мкм коронарные срезы с использованием микротома-криостата (название продукта: CM3000, Leica, Germany), и срезы хранили в глицерине, этиленгликоле и PBS при 4°C. Срезы помещали на покровное стекло и промывали в PBS, после чего следовала обработка PBS, содержащим 1% H2O2, в течение 15 минут для того, чтобы устранять пероксидазную активность в ткани. После этого их обрабатывали антителом против α-синуклеина (1:2000; мышиного происхождения, abcam, England) в качестве первичного антитела, после чего следовала реакция в течение ночи. Их обрабатывали биотинилированным антителом против IgG мыши в качестве вторичного антитела, после чего следовала реакция при комнатной температуре в течение 90 минут. По завершении реакции, ткань обрабатывали раствором авидин-биотинового комплекса, содержащимся в наборе Vectastain ABC (Vector Laboratories, USA), после чего следовала реакция в течение 1 часа. Развитие окраски индуцировали с использованием диаминобензидина. Накопление олигомера α-синуклеина измеряли посредством подсчета положительных по α-синуклеину клеток. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю интраперитонеально вводили ротенон в дозе 2,5 мг/кг раз в сутки в течение 5 недель.
Как результат, как показано в таблице 54, число положительных по α-синуклеину клеток снижено в черном веществе (SN) модели болезни Паркинсона на животном, которой вводили смешанный этаноловый экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки (таблица 54).
Таблица 54
Снижение положительных по α-синуклеину клеток в черном веществе (SN) модели болезни Паркинсона на животном с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Доза индуктора (ротенон, мг/кг) | Положительные по α-синуклеину клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 100,27±1,86 |
Отрицательный контроль | - | 2,5 | 241,76±15,24 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 2,5 | 116,45±9,08 |
Экспериментальный пример 12: терапевтический эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки, оказываемый на болезнь Паркинсона (воспаление головного мозга) in vivo
<12-1> Создание животной модели нейровоспаления: LPS-индуцированная модель болезни Паркинсона на мышах
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, модель болезни Паркинсона на животных создавали как показано на фиг. 4 (фиг. 4).
В частности, распределяли самцов мышей C57BL/6 в возрасте 8 недель (масса: приблизительно 19-22 г), после чего следовала адаптация в лаборатории для животных Kyung Hee University College of Pharmacy в течение по меньшей мере 1 недели. В этот момент регулировали температуру в помещении 22±2°C и контролировали влажность 53±3%. Задавали цикл света-темноты 12 ч/12 ч. Воду и корм предоставляли свободно. После адаптации мышей разделяли на 4 группы, и в каждую группу распределяли 6 мышей. Лиофилизат смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в 90% этаноле (1:1:1), полученного в примере <5-1>, растворяли в воде и перорально вводили (p.o.) мышам в дозе 10 или 30 мг/кг раз в сутки в течение 3 суток. После этого мышам вводили (интраперитонеально, i.p.) LPS (липополисахарид) в дозе 5 мг/кг после перорального введения, что вело к созданию модели болезни Паркинсона на животном. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю вводили LPS в дозе 5 мг/кг, но без обработки экстрактом смеси после этого.
<12-2> Снятие воспаления головного мозга эффект смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Для того чтобы исследовать in vivo терапевтический эффект экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки по настоящему изобретению, оказываемый на болезнь Паркинсона, ткани головного мозга получали из модели болезни Паркинсона на крысах, которую обрабатывали смешанным экстрактом. Эффект снятия воспаления головного мозга у экстракта смеси подтверждали посредством исследования активации астроцитов и микроглии в черном веществе (SN) и гиппокампе тканей головного мозга, полученных выше.
В частности, животной модели нейровоспаления, созданной в экспериментальном примере <12-1>, вводили золетил (50 мг/кг) через внутримышечную инъекцию для анестезии. PBS, содержащий 4% параформальдегид, перфузировали через сердце и после этого извлекали головной мозг. Извлеченный головной мозг фиксировали в 4% параформальдегиде еще раз и затем погружали в 30% раствор сахарозы при 4°C до тех пор, пока головной мозг не утопал, затем его замораживали. Замороженную ткань головного мозга нарезали на 30 мкм коронарные срезы с использованием микротома-криостата (название продукта: CM3000, Leica, Germany) и хранили срезы в глицерине, этиленгликоле и PBS при 4°C. Срезы помещали на покровное стекло и промывали в PBS, после чего следовала обработка PBS, содержащим 1% H2O2, в течение 15 минут для того, чтобы устранять пероксидазную активность в ткани. После этого их обрабатывали антителом против GFAP (1:5000; кроличьего происхождения, Neuromics, USA) или антителом против Iba-1 (1:1000; кроличьего происхождения, Dako, Japan) в качестве первичного антитела, после чего следовала реакция в течение ночи. Их обрабатывали биотинилированным антителом против IgG кролика в качестве вторичного антитела, после чего следовала реакция при комнатной температуре в течение 90 минут. По завершении реакции, ткань обрабатывали раствором авидин-биотинового комплекса, содержащимся в наборе Vectastain ABC (Vector Laboratories, USA), после чего следовала реакция в течение 1 часа. Развитие окраски индуцировали с использованием диаминобензидина. Уровни астроцитов и микроглии, активированных в SN и гиппокампе измеряли посредством подсчета числа положительных по GFAP и Iba-1 клеток. Нормальную контрольную группу обрабатывали растворителем и отрицательному контролю вводили LPS в дозе 5 мг/кг и после этого не обрабатывали его экстрактом смеси по изобретению.
Как результат, как показано в таблице 55 и таблице 56, положительные по GFAP и lba-1 клетки, повышенные с помощью LPS в черном веществе (SN) модели болезни Паркинсона на мышах, снижали посредством введения смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в зависимости от дозы. Приведенные выше результаты показывают, что активация астроцитов и микроглии снижена, то есть воспаление головного мозга снижено (таблица 55 и таблица 56). Как показано в таблице 57 и таблице 58, положительные по GFAP и lba-1 клетки, повышенные с помощью LPS в гиппокампе модели болезни Паркинсона на мышах, снижали посредством введения смешанного этанолового экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки в зависимости от дозы. Аналогичным образом, снижали активацию астроцитов и микроглии, что подсказывает, что воспаление головного мозга было снижено (таблица 57 и таблица 58).
Таблица 55
Снижение GFAP-положительных клеток (астроцитов) в черном веществе (SN) LPS-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Доза индуктора (LPS, мг/кг) | GFAP-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 5,76±0,75 |
Отрицательный контроль | - | 5 | 38,15±4,97 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 5 | 14,28±2,68 |
30 | 5 | 9,41±1,04 |
Таблица 56
Снижение положительных по Iba-1 клеток в черном веществе (SN) LPS-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Доза индуктора (LPS, мг/кг) | Iba-1-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 8,79±0,75 |
Отрицательный контроль | - | 5 | 28,67±0,49 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 5 | 22,09±2,04 |
30 | 5 | 17,08±1,39 |
Таблица 57
Снижение GFAP-положительных клеток в гиппокампе LPS-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Доза индуктора (LPS, мг/кг) | GFAP-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 20,48±4,98 |
Отрицательный контроль | - | 5 | 71,18±3,63 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 5 | 38,05±3,91 |
30 | 5 | 21,24±2,87 |
Таблица 58
Снижение положительных по Iba-1 клеток в гиппокампе LPS-индуцированной модели болезни Паркинсона на мышах с помощью смешанного экстракта коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки
Обработка | Доза индуктора (LPS, мг/кг) | Iba-1-положительные клетки (% от контроля) | |
Вещество для обработки | Доза экстракта (мг/кг) | ||
Нормальный контроль | - | - | 18,67±5,44 |
Отрицательный контроль | - | 5 | 58,15±4,76 |
Смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового+корня дудника даурского+корня володушки 1:1:1 (масс.:масс.:масс.) | 10 | 5 | 24,70±3,31 |
30 | 5 | 14,75±3,08 |
Производственный пример 1: получение фармацевтических составов
<1-1> Получение порошков
Смешанный экстракт по изобретению или его фракция: 0,1 г
Лактоза: 1,5 г
Тальк: 0,5 г
Порошки получали смешиванием всех приведенных выше компонентов, которыми заполняли воздухонепроницаемые упаковки в соответствии со стандартным способом получения порошков.
<1-2> Получение таблеток
Смешанный экстракт по изобретению или его фракция: 0,1 г
Лактоза: 7,9 г
Кристаллическая целлюлоза: 1,5 г
Стеарат магния: 0,5 г
Таблетки получали смешиванием всех приведенных выше компонентов стандартным способом прямого таблетирования.
<1-3> Получение капсул
Смешанный экстракт по изобретению или его фракция: 0,1 г
Кукурузный крахмал: 5 г
Карбоксицеллюлоза: 4,9 г
Капсулы получали смешиванием всех приведенных выше компонентов, которыми заполняли твердые капсулы в соответствии со стандартным способом получения капсул.
<1-4> Получение инъецируемых растворов
Смешанный экстракт по изобретению или его фракция: 0,1 г
Стерилизованная дистиллированная вода: надлежащее количество
Регулятор pH: надлежащее количество
Инъецируемые растворы получали смешиванием всех приведенных выше компонентов, помещали смесь в 2 мл ампулы и стерилизовали их с помощью стандартного способа получения инъецируемых растворов.
<1-5> Получение жидких составов
Смешанный экстракт по изобретению или его фракция: 0,1 г
Изомеризованный сахар: 10 г
Маннит: 5 г
Очищенная вода: надлежащее количество
Все приведенные выше компоненты растворяли в очищенной воде. После добавления лимонного аромататизатора общий объем корректировали до 100 мл посредством добавления очищенной воды. Жидкие составы получали, помещая смесь в коричневые бутылки и стерилизуя ее с помощью стандартного способа получения жидких составов.
Производственный пример 2: получение здоровой функциональной пищи
<2-1> Получение мучной пищи
В муку добавляли 0,5-5,0 массовой части экстракта смеси по настоящему изобретению или его фракции. Пищу, улучшающую здоровье, такую как хлеб, пирог, печенье, крекеры и лапша, получали с использованием мучной смеси в соответствии со стандартным способом.
<2-2> Получение супов и подливок
В супы и подливки добавляли 0,1-5,0 массовой части экстракта смеси по настоящему изобретению или его фракции. Мясные продукты, супы и подливки, улучшающие здоровье, получали с использованием этой смеси стандартным способом.
<2-3> Получение говяжьего фарша
Говяжий фарш, улучшающий здоровье, получали посредством смешивания 10 массовых частей экстракта смеси по настоящему изобретению или его фракции с говяжьим фаршем в соответствии со стандартным способом.
<2-4> Получение говяжьего фарша
5-10 массовых частей экстракта смеси по настоящему изобретению или его фракции добавляли в молоко. Молочные продукты, улучшающие здоровье, такие как сливочное масло и мороженое, получали с использованием молочной смеси в соответствии со стандартным способом.
<2-5> Получение Sun-Sik
Коричневый рис, ячмень, клейкий рис и юлму (слезы Иова) желатинизировали в соответствии со стандартным способом, сушили и пульверизовали для получения порошков 60 меш.
Черсные соевые бобы, черный кунжут и дикий кунжут обрабатывали паром и сушили в соответствии со стандартным способом и пульверизовали для получения порошков 60 меш.
Экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракцию концентрировали при пониженном давлении, сушили распылением и пульверизовали для получения сухих порошков 60 меш.
Sun-Sik получали посредством смешивания сухих порошков злаков, семян и экстракта смеси по настоящему изобретению или его фракции в соответствии со следующим соотношением.
Злаки (коричневый рис: 30 массовых частей, юлму: 15 массовых частей, ячмень: 20 массовых частей),
Семена (дикий кунжут: 7 массовых частей, черные соевые бобы: 8 массовых частей, черный кунжут: 7 массовых частей),
Экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракция (3 массовые части),
Ganoderma lucidum (0,5 массовой части),
Rehmannia glutinosa (0,5 массовой части)
<2-6> Получение здоровых пищевых добавок
Экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракция: 100 мг
Витаминный комплекс: надлежащее количество
Ацетат витамина A: 70 мкг
Витамин E: 1,0 мг
Витамин B1: 0,13 мг
Витамин B2: 0,15 мг
Витамин B6: 0,5 мг
Витамин B12: 0,2 мкг
Витамин C: 10 мг
Биотин: 10 мкг
Амид никотиновой кислоты: 1,7 мг
Фолиевая кислота: 50 мкг
Пантотенат кальция: 0,5 мг
Минералы: надлежащее количество
Сульфат железа (II): 1,75 мг
Оксид цинка: 0,82 мг
Карбонат магния: 25,3 мг
Фосфат калия одноосновный: 15 мг
Фосфат калия двухосновный: 55 мг
Цитрат калия: 90 мг
Карбонат кальция: 100 мг
Хлорид магния: 24,8 мг
Витамины и минералы смешивали в соответствии с предпочтительным соотношением для композиции здоровой пищи. Однако соотношение для композиции можно корректировать. Составляющие смешивали в соответствии со стандартным способом получения здоровой пищи и затем композицию для здоровой пищи получали в соответствии со стандартным способом.
Производственный пример 3: получение здоровых напитков
Экстракт смеси по настоящему изобретению или его фракция: 100 мг
Лимонная кислота: 100 мг
Олигосахарид: 100 мг
Экстракт сливы китайской (Prunus mume): 2 мг
Таурин: 100 мг
Очищенная вода: вплоть до 500 мл
Приведенные выше составляющие смешивали в соответствии со стандартным способом получения здоровых напитков. Смесь нагревали при 85°C в течение 1 часа при перемешивании и затем фильтровали. Фильтрат загружали в 1 л стерилизованные контейнеры, которые герметизировали и стерилизовали снова, хранили в холодильнике до их использования для получения композиции для здоровых напитков.
Составляющие, подходящие для выбранных напитков, смешивали в соответствии с предпочтительным соотношением смешивания, но соотношение для композиции можно корректировать в соответствии с региональными и национальными предпочтениями и т. д.
Специалисты в данной области примут во внимание, что идеи и конкретные варианты осуществления, раскрытые в приведенном выше описании легко можно использовать в качестве основы для модификации или разработки других вариантов осуществления для достижения тех же целей по настоящему изобретению. Специалисты в данной области также примут во внимание, что такие эквивалентные варианты осуществления не отступают от сущности и объема изобретения, как изложено в приложенной формуле изобретения.
Claims (30)
1. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит экстракт смеси коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix) в качестве активного ингредиента в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.), где экстракт экстрагирован с использованием воды, C1-C4 низшего спирта или их смеси в качестве растворителя.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где низший спирт представляет собой этанол, метанол или бутанол.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой экстракт содержит одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из
пеонола (2'-гидрокси-4'-метоксиацетофенона), представленного формулой 1,
пеонифлорина, представленного формулой 2,
пеонифлоригенона ([(2s,3as,5s,7ar,8s)-3a-гидрокси-7a-метил-6-оксогексагидро-2,5-метано-1,3-бензодиоксол-8-ил]метилбензоата), представленного формулой 3,
императорина (9-[(3-метил-2-бутен-1-ил)окси]-7h-фуро[3,2-g][1]бензопиран-7-она), представленного формулой 4,
сайкосапонина A ((3бета,4альфа,16бета)-13,28-эпокси-16,23-дигидроксиолеан-11-ен-3-ил-6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил-бета-D-галактопиранозида), представленного формулой 5,
сайкосапонина B2 ((3b,4a,16a)-16,23,28-тригидроксиолеана-11,13(18)-диен-3-ил-6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил-бета-D-галактопиранозида), представленного формулой 6,
сайкосапонина B4 ((3β,11α,16α)-16,23,28-тригидрокси-11-метоксиолеан-12-ен-3-ил-6-дезокси-3-O-β-D-глюкопиранозил-β-D-галактопиранозида), представленного формулой 7, и
сайкосапонина D ((3b,4a,16a)-13,28-эпокси-16,23-дигидроксиолеан-11-ен-3-ил 6-дезокси-3-O-бета-D-глюкопиранозил-бета-D-галактопиранозида), представленного формулой 8:
[Формула 1]
[Формула 2]
[Формула 3]
[Формула 4]
[Формула 5]
[Формула 6]
[Формула 7]
[Формула 8]
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, в которой экстракт ингибирует функциональное повреждение митохондрий, стресс эндоплазматического ретикулума или воспалительную реакцию.
5. Фармацевтическая композиция по п. 1, где дегенеративное неврологическое нарушение выбрано из группы, состоящей из деменции, хореи Гентингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, инсульта, болезни Лу Герига (амиотрофического бокового склероза) и повреждения спинного мозга.
6. Способ лечения или предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, который включает стадию введения фармацевтически эффективной дозы экстракта смеси коры корня пиона полукустарникового (Moutan Radicis Cortex), корня дудника даурского (Angelicae Dahuricae Radix) и корня володушки (Bupleuri Radix) в массовом соотношении 1:0,2-5:0,2-5 (масс.:масс.:масс.) субъекту, где экстракт экстрагирован с использованием воды, C1-C4 низшего спирта или их смеси в качестве растворителя.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20140124860 | 2014-09-19 | ||
KR10-2014-0124860 | 2014-09-19 | ||
KR10-2015-0130107 | 2015-09-15 | ||
KR1020150130107A KR101721696B1 (ko) | 2014-09-19 | 2015-09-15 | 목단피, 백지 및 시호의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 신경 퇴행성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물 |
PCT/KR2015/009717 WO2016043517A1 (ko) | 2014-09-19 | 2015-09-16 | 목단피,백지 및 시호의 혼합 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는,신경 퇴행성 질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2668135C1 true RU2668135C1 (ru) | 2018-09-26 |
Family
ID=55652236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017108582A RU2668135C1 (ru) | 2014-09-19 | 2015-09-16 | Фармацевтическая композиция для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит, в качестве активного ингредиента, смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки или его фракцию |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10660928B2 (ru) |
EP (1) | EP3199171B1 (ru) |
JP (1) | JP6449448B2 (ru) |
KR (1) | KR101721696B1 (ru) |
CN (1) | CN108064160B (ru) |
BR (1) | BR112017005416B1 (ru) |
ES (1) | ES2720055T3 (ru) |
PL (1) | PL3199171T3 (ru) |
RU (1) | RU2668135C1 (ru) |
WO (1) | WO2016043517A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108815145A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-11-16 | 深圳市万骐海洋生物科技有限公司 | 海马提取物2h5m在制备预防和治疗神经退行性疾病的药物及其保健品中的用途 |
CN110179809A (zh) * | 2019-06-18 | 2019-08-30 | 山西大学 | 柴胡皂苷b2在制备抗抑郁症药物中的应用 |
JP7275016B2 (ja) * | 2019-12-11 | 2023-05-17 | アズビル株式会社 | スペクトル測定装置およびスペクトル測定方法 |
WO2022196609A1 (ja) * | 2021-03-16 | 2022-09-22 | 学校法人慶應義塾 | 網膜変性抑制用組成物 |
CN116726041A (zh) * | 2023-08-11 | 2023-09-12 | 青岛农业大学 | 一种牡丹花蕊多糖及其在伤口愈合中的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20020092147A (ko) * | 2001-06-01 | 2002-12-11 | 주식회사 유젠바이오 | 시호추출물 및 사이코사포닌을 함유하는 신경세포 보호 및재생용 조성물 |
KR20100060279A (ko) * | 2008-11-27 | 2010-06-07 | 경희대학교 산학협력단 | 백지 추출물 또는 임페레이토린을 함유하는 소포체 스트레스 완화 또는 미토콘드리아 기능개선용 조성물 |
KR20110125706A (ko) * | 2010-05-14 | 2011-11-22 | 경희대학교 산학협력단 | 목단피 추출물을 함유하는 파킨슨병 예방 및 치료용 조성물 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20050021026A (ko) * | 2001-06-15 | 2005-03-07 | 주식회사 장생도라지 | 장생도라지 추출물을 포함하는 면역계의 이상으로부터발생하는 질병의 예방 및 치료용 약제학적 조성물 |
KR100564904B1 (ko) * | 2003-11-18 | 2006-03-30 | 주식회사 에스티씨나라 | 생약 추출물을 유효 성분으로 포함하는 치매 예방 또는치료 및 인지 기능 개선용 조성물 |
CN101461899A (zh) * | 2007-12-23 | 2009-06-24 | 黄付兴 | 中医药氧急救总程第一分程 |
US8252290B2 (en) * | 2008-03-04 | 2012-08-28 | Vita Green Health Products Company Limited | Herbal composition for treatment of insomnia and other related disorders and a method of preparing the same |
KR101059471B1 (ko) * | 2008-07-22 | 2011-08-25 | 주식회사 바이오랜드 | 피부 노화 방지용 화장료 조성물 |
JP2011037722A (ja) * | 2009-08-06 | 2011-02-24 | Osaka Univ | 小胞体ストレスによる神経細胞死の予防又は抑制剤 |
KR20130070871A (ko) * | 2011-12-20 | 2013-06-28 | 가천대학교 산학협력단 | Dsx 추출물을 유효성분으로 함유하는 골다공증 억제 효과를 가지는 건강식품 조성물 |
-
2015
- 2015-09-15 KR KR1020150130107A patent/KR101721696B1/ko active IP Right Grant
- 2015-09-16 RU RU2017108582A patent/RU2668135C1/ru active
- 2015-09-16 WO PCT/KR2015/009717 patent/WO2016043517A1/ko active Application Filing
- 2015-09-16 EP EP15842648.6A patent/EP3199171B1/en active Active
- 2015-09-16 BR BR112017005416-7A patent/BR112017005416B1/pt active IP Right Grant
- 2015-09-16 CN CN201580050749.XA patent/CN108064160B/zh active Active
- 2015-09-16 JP JP2017513810A patent/JP6449448B2/ja active Active
- 2015-09-16 PL PL15842648T patent/PL3199171T3/pl unknown
- 2015-09-16 ES ES15842648T patent/ES2720055T3/es active Active
-
2017
- 2017-03-08 US US15/453,511 patent/US10660928B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20020092147A (ko) * | 2001-06-01 | 2002-12-11 | 주식회사 유젠바이오 | 시호추출물 및 사이코사포닌을 함유하는 신경세포 보호 및재생용 조성물 |
KR20100060279A (ko) * | 2008-11-27 | 2010-06-07 | 경희대학교 산학협력단 | 백지 추출물 또는 임페레이토린을 함유하는 소포체 스트레스 완화 또는 미토콘드리아 기능개선용 조성물 |
KR20110125706A (ko) * | 2010-05-14 | 2011-11-22 | 경희대학교 산학협력단 | 목단피 추출물을 함유하는 파킨슨병 예방 및 치료용 조성물 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
KIM HG et al. Effects of the root bark of Paeonia suffruticosa on mitochondria-mediated neuroprotection in an MPTP-induced model of Parkinson,s disease //Food Chem Toxicol. 2014 Mar, 65: 293-300. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2016043517A1 (ko) | 2016-03-24 |
JP6449448B2 (ja) | 2019-01-09 |
US20170224754A1 (en) | 2017-08-10 |
BR112017005416A2 (pt) | 2018-04-24 |
EP3199171B1 (en) | 2018-12-26 |
CN108064160B (zh) | 2021-05-11 |
KR101721696B1 (ko) | 2017-03-31 |
EP3199171A4 (en) | 2017-08-02 |
ES2720055T3 (es) | 2019-07-17 |
EP3199171A1 (en) | 2017-08-02 |
BR112017005416B1 (pt) | 2021-05-04 |
PL3199171T3 (pl) | 2019-05-31 |
KR20160035615A (ko) | 2016-03-31 |
CN108064160A (zh) | 2018-05-22 |
US10660928B2 (en) | 2020-05-26 |
JP2017529344A (ja) | 2017-10-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2668135C1 (ru) | Фармацевтическая композиция для лечения и предотвращения дегенеративных неврологических нарушений, которая содержит, в качестве активного ингредиента, смешанный экстракт коры корня пиона полукустарникового, корня дудника даурского и корня володушки или его фракцию | |
KR101805801B1 (ko) | 틸리아닌을 유효성분으로 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
Ferro et al. | A new steroidal saponin from Solanum sisymbriifolium roots | |
KR101793503B1 (ko) | 퇴행성 뇌질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
Upendra et al. | Healthcare prominence and immune boosting activity of ashwagandha against various clinical conditions and covid 19 disease outbreak | |
US7731994B2 (en) | Pharmaceutical composition for protecting neurons comprising extract of lithospermum erythrothizon SIEB. ET. Zucc or acetylshikonin isolated therefrom as an effective ingredient | |
TWI438001B (zh) | 用於治療糖尿病之植物萃取物及其製備方法 | |
KR20140119934A (ko) | 엉겅퀴 추출물을 함유하는 허혈성 뇌졸중 개선용 조성물 | |
KR20110095765A (ko) | 현삼 추출물을 포함하는 항알레르기 조성물 | |
RU2657439C2 (ru) | Экстракт семян сои, способ его получения, композиция экстракта семян сои, способ стимуляции пролиферации нейронов, лечения заболеваний головного мозга и лечения нейродегенеративных заболеваний (варианты) | |
US10064908B2 (en) | Method for preventing, improving or treating liver disease | |
KR101894540B1 (ko) | 반하, 백출, 천마, 진피, 복령, 산사, 희렴 및 황련을 혼합한 약재의 추출물을 포함하는, 코엔자임 q10 증진용 조성물 | |
JP7361903B2 (ja) | 芫花、威霊仙、及び天麻の複合生薬抽出物を含む神経変性疾患の予防または治療用組成物 | |
KR101667873B1 (ko) | 한방 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 파킨슨 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR20030020585A (ko) | 중추신경세포의 뉴로제네시스를 촉진하고 아폽토시스를억제하는 생약 조성물 | |
Kumar et al. | The Pharmacological activities of mother of thousand (Kalanchoe pinnata) | |
CN107648482A (zh) | 一种用于治疗神经退行性疾病的中药组合物 | |
CN109303790B (zh) | 刺山柑或刺山柑提取物的医药用途 | |
KR102148960B1 (ko) | 블랙베리 추출물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
CN101138587A (zh) | 白首乌或白首乌二酮a在制备治疗神经退行性疾病药物中的应用 | |
KR100646078B1 (ko) | 광나무 추출물을 함유하는 퇴행성 뇌신경계 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
KR20230137654A (ko) | 뇌졸중의 예방 및 치료용 조성물 | |
KR20220136604A (ko) | 배암차즈기 추출물 또는 이의 유래 화합물을 유효성분으로 포함하는 근위축 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
Suloev et al. | Isolation of individual flavonoids from Solidago canadensis L | |
RU2599482C1 (ru) | Сбор лекарственных растений для лечения функционального расстройства желчного пузыря при гипотонически-гипокинетическом типе дискинезии |