RU2565066C2

RU2565066C2 - Производные 1-(2-фторбифенил-4-ил)-алкилкарбоновой кислоты для лечения транстиретинового амилоидоза

Info

Publication number: RU2565066C2
Application number: RU2012144438/04A
Authority: RU
Inventors: Бруно Пьетро Имбимбо; Джино Виллетти; Родольфо БЕРНИ
Original assignee: КЬЕЗИ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.п.А.
Priority date: 2010-04-21
Filing date: 2011-04-19
Publication date: 2015-10-20
Also published as: EP2560942A1; ES2526522T3; CA2796933A1; CN102844290A; RU2012144438A; US20110263711A1; HK1174609A1; CN102844290B; WO2011131661A1; KR20130079353A; US9150489B2; EP2560942B1; AR081893A1; BR112012026803A2

Abstract

Изобретение относится к применению производных 1-(2-фторбифенил-4-ил)-алкилкарбоновой кислоты в качестве средств, способных стабилизировать тетрамерное нативное состояние транстиретина для профилактики и лечения амилоидоза. 9 з.п. ф-лы, 1 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к лечению амилоидоза. Более конкретно, изобретение относится к применению производных 1-(2-фторбифенил-4-ил)-алкилкарбоновой кислоты в качестве средств, способных стабилизировать нативное тетрамерное состояние транстиретина для профилактики и лечения амилоидоза.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Амилоидоз это серьезное заболевание, вызванное внеклеточным отложением нерастворимых атипичных фибрилл. Системный амилоидоз с отложениями во внутренних органах, кровеносных сосудах и соединительной ткани, как правило, приводит к летальному исходу, является причиной примерно одной на тысячу смертей в развитых странах.

Амилоид откладывается, когда существует: (i) устойчивое воздействие либо нормальной, либо повышенной концентрации потенциально амилоидогенного белка; (ii) когда производится атипичный амилоидогенный белок как следствие приобретенного заболевания или (iii), когда генная мутация кодирует амилоидогенную разновидность белка. Фибриллогенез является следствием уменьшения стабильности нативно-свернутого белка - предшественника фибрилл, и, таким образом, при физиологических условиях это дает частично развернутые промежуточные состояния, которые объединяются в виде стабильных амилоидных фибрилл.

Дикий тип транстиретина (WT-TTR) является нормальным белком плазмы, синтезируемым гепатоцитами и хориоидным сплетением, который транспортирует гормон щитовидной железы и ретинол-связывающий белок.

TTR по своей природе является амилоидогенным и образует микроскопические амилоидные отложения неопределенной клинической значимости у всех лиц в возрасте старше 80 лет. Также могут происходить массивные отложения в сердце, вызывая системный летальный старческий амилоидоз (SSA). Свойственная организму амилоидогенность дикого типа транстиретина заметно усиливается большинством зарегистрированных >80 различных точечных мутаций, которые кодируют замены одного остатка в транстиретиновой последовательности. Эти мутации являются причиной аутосомно-доминантного типа наследования амилоидоза во взрослом возрасте, универсально фатальным состоянием, затрагивающим приблизительно 10000 пациентов во всем мире. Указанные заболевания преимущественно сгруппированы в две основные группы: семейную амилоидную полинейропатию (FAP) и семейную амилоидную кардиомиопатию (FAC).

Амилоидогенные мутации наблюдаются во всех этнических группах, но наиболее распространенные на сегодняшний день V30M кластеры локализуются в трех географических районах: Северной Португалии, Северной Швеции и ряде областей Японии. Другими распространенными амилоидогенными разновидностями являются T60A, L58H, L55P, I84S и V112I. Среди идентифицированных патогенных разновидностей TTR V122I разновидность является особо важной, поскольку ее носят 3-4% афро-американцев: 1,3 миллиона человек, в том числе 13000 людей гомозиготных по мутации. Это является второй самой распространенной патогенной мутацией в популяции после серповидно-клеточного гемоглобина.

Разновидность V122I особенно связана с сердечным транстиретиновым амилоидозом, который является прогрессирующим и, в конечном счете, фатальным, вследствие остановки сердца из-за рестриктивной кардиомиопатии. Указанная патология редко подозревается и обычно ошибочно диагностируется как ишемическая болезнь сердца.

До сих пор существует только лечение, доступное для FAP, то есть генная терапия, служащая промежуточным звеном при оперативной замене печени пациента, органа, выделяющего TTR при условии неправильного сворачивания в крови. Недостатки этого подхода включают его инвазивность для донора и реципиента, потребность в пожизненном подавлении иммунного ответа и ограниченную эффективность для некоторых мутаций по причинам, которые пока не ясны. В настоящее время не существует эффективного лечения ни для SSA, связанного с WT-TTR осаждением, ни для FAC.

Поэтому, синтетический препарат для терапевтической стратегии для всех TTR-опосредованных амилоидных заболеваний был бы очень полезен.

Наиболее распространенный подход к потенциальному лечению транстиретинового амилоидоза заключается в определении лигандов синтетического препарата, способных стабилизировать тетрамерную структуру нативного TTR и тем самым предотвратить диссоциацию TTR на мономеры, которые в свою очередь склонны к неправильному объединению, приводящему к фибриллогенной агрегации.

В идеале, хорошие ингибиторы образования фибрилл должны связываться с высоким сродством, медленно диссоциировать и проявлять высокую обязательную селективность к TTR в крови.

Например, некоторые нестероидные противовоспалительные лекарственные препараты (NSAIDS), такие как диклофенак, флуфенамовая кислота, диклофенак, флурбипрофен и дифлунизол были показаны в качестве стабилизаторов тетрамерной структуры TTR, препятствующих образованию амилоидных фибрилл TTR in vitro. Однако, поскольку указанные препараты являются ингибиторами циклооксигеназы-2, их длительное применение может привести к желудочно-кишечным побочным эффектам.

Как известно, полифенолы, такие как транс-ресвератрол, специфически связываются с тироксиновыми центрами связывания TTR (Klabunde et al., Nat. Struct Biol 2000, 7, 312). Также известно, что указанный вид препаратов очень аспецифический, они могут иметь низкую биодоступность, а также могут иметь несколько побочных эффектов.

Другие производные, способные связываться с TTR, описаны в патентных документах WO 2004/056315, WO 2006/086517, WO 2007022138 и WO 2009/040405.

Принимая во внимание вышеупомянутые соображения, все еще существует потребность в более эффективных продуктах с достаточными показателями безопасности для человека, которые связываются с TTR и, следовательно, могут быть полезными для лечения TTR амилоидоза.

В патентных документах WO 2004/074232 и WO 2004/073705 описываются лечебные средства для нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера.

Было обнаружено, что некоторые производные галогенов, описанные в этих патентах, могут быть использованы для профилактики и/или лечения TTR амилоидоза.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно первому аспекту, настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы (I)

где

R₁ представляет собой водород или линейный или разветвленный C₁-C₄алкил, предпочтительно, метил;

R₂ представляет собой линейный или разветвленный C₁-C₄алкил, предпочтительно, метил,

или R₁ и R₂, взятые вместе с атомом углерода, с которым они связаны, формируют кольцо из 3-6 углеродных атомов, предпочтительно, циклопропил; и

R₃ представляет одну или более групп, которые одинаковы или отличаются друг от друга, и независимо выбраны из атомов галогена, предпочтительно, хлора;

для использования в профилактике и/или лечении болезней транстиретинового (TTR) амилоидоза.

Во втором аспекте, настоящее изобретение направлено на применение соединений общей формулы (I) в производстве лекарственного средства для профилактики и/или лечения болезней транстиретинового (TTR) амилоидоза.

В другом аспекте настоящее изобретение также направлено на применение вышеуказанных полиморфов, фармацевтически приемлемых солей, и пролекарств из соединений общей формулы (I).

В ином аспекте настоящее изобретение представляет способ для профилактики и/или лечения системного амилоидоза у пациента, включающий применение указанным пациентом эффективного количества соединения общей формулы (I), в том числе их полиморфов, фармацевтически приемлемых солей и пролекарств.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Если иное не предусмотрено в настоящем описании, то в рамках соединения общей формулы (I), фенильное кольцо имеет один или более атомов галогена, называемых R₃ группами.

Из вышеупомянутого, специалистам ясно, что любой из указанных атомов галогена, которые могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга, может, таким образом, присутствовать в любом возможном свободном положении фенильного кольца.

Термин "атомы галогена" включает фтор, хлор, бром и йод.

Выражение "линейный или разветвленный C₁-C₄алкил" относится к алкильным группам с прямой или разветвленной цепью, где число составляющих атомов углерода находится в диапазоне от 1 до 4. Примерами алкильных групп являются: метильная, этильная, n-пропильная, изопропильная и трет-бутильная.

Выражение "кольцо, содержащее от 3 до 6 атомов углерода" относится к циклическим неароматическим углеводным группам, содержащим от 3 до 6 углеродных атомов. Примеры включают: циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную и циклогексильную группы.

Термин "полиморф" относится к различным кристаллическим структурам одного и того же твердого вещества. Они обладают различными температурами плавления, различной растворимостью (которые влияют на скорость растворимости препарата, и, следовательно, на его биодоступность в организме), различными рентгенограммами и картинами дифракции.

Выражение "по существу чистый полиморф" относится к образцу, в котором полиморф присутствует в значительном избытке по сравнению с другими полиморфами того же соединения, то есть в количестве, превышающем 75%, более предпочтительно более 90%, еще более предпочтительно, свыше 95% и, наиболее предпочтительно, свыше 99% по массе в расчете на общую массу соединения в образце.

Термин "пролекарство" относится к веществу, вводимому в неактивной форме, которое затем метаболизируется в организме in vivo в активное соединение с целью оптимизации всасывания, распределения, метаболизма и выведения.

Термин "TTR амилоидоз" относится к форме амилоидозного заболевания, обусловленного неправильным сворачиванием белка транстиретина.

Термин "профилактика" относится к применению для предупреждения возникновения заболевания, в то время как термин "лечение" относится к применению для поллиативного лечения, частичного облегчения симптомов, уменьшение симптомов, терапии, приводящей к ослаблению симптомов болезни (ремиссии).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Транстиретин (TTR) является 55 кДа гомотетрамером, характеризующимся 2,2,2 симметрией, имеющим два одинаковых воронкообразных центра связывания на димер-димерной поверхности раздела, где гормон щитовидной железы L-тироксин (T4) может быть связан в плазме крови и спинномозговой жидкости.

Кроме участия в транспортировке T4, TTR образует высокомолекулярный комплекс с ретинол-связывающим белком, тем самым, участвуя также в транспортировке ретинола. Центры связывания тироксина и ретинол-связывающего белка присутствуют в разных областях TTR, так что не существует взаимозависимости между связыванием гормона и ретинол-связывающего белка.

Неправильная свертываемость TTR, включая диссоциацию тетрамера, в конечном итоге приводит к неправильной сборке и к получению амилоидных аггрегатов.

Неправильная свертываемость транстиретина (TTR), включая диссоциацию тетрамера на мономеры, сопровождаемую третичными структурными изменениями в пределах мономера, является достаточной для превращения TTR неправильной сборки в амилоид и другие аномальные четвертичные структуры, связанные с тремя TTR амилоидными заболеваниями: старческим системным амилоидозом (SSA), семейной амилоидной полинейропатией (FAP) и семейной амилоидной кардиомиопатией (FAC).

Таким образом, настоящее изобретение направлено к соединениям общей формулы (I)

где R₁, R₂ и R₃ имеют вышеупомянутые значения, включая их полиморфы, фармацевтически приемлемые соли и пролекарства для профилактики и/или лечения транстиретиновых (TTR) амилоидных заболеваний.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению указанных соединений и их производных в получении/производстве лекарственного средства для профилактики и/или лечения (TTR) амилоидных заболеваний.

Настоящее изобретение базируется, по меньшей мере, частично на открытии того, что соединения формулы (I) имеют эффект стабилизации тетрамера TTR и, следовательно, являются превосходными ингибиторами диссоциации тетрамера TTR и TTR амилоидогенеза.

В частности, у некоторых типичных представителей указанного класса соединений имеется более высокое сродство с TTR по сравнению с транс-ресвератролом, в то время как последнее соединение обладает более высоким сродством по сравнению с дифлунизалом и 2-(3,5-дихлорфенил)-1,3-бензоксазол-6-карбоновой кислотой, также известной как тафамидис, основное соединение патентного документа WO 009/040405.

Это в свою очередь может обеспечить лучшую стабилизацию не амилоидогенетической тетрамерной форме TTR.

К первой группе предпочтительных соединений общей формулы (I) относятся соединения, у которых в фенильном кольце имеющиеся один или более заместителей R₃, замещают фенил двумя атомами хлора в положениях 3' и 5', в соответствии с общей формулой (II), представленной ниже:

где R₁ и R₂ являются такими, как определено выше.

В предпочтительных вариантах R₁ является H и R₂ представляет собой метил или, альтернативно, оба R₁ и R₂ представляют собой метил.

В другом предпочтительном варианте осуществления R₁ и R₂ образуют с атомом углерода, с которым они связаны, циклопропильную группу.

Предпочтительными соединениями формулы (II) являются следующие:

2-(3',5'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)пропионовая кислота;

2-метил-(3',5'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)пропионовая кислота (в этом документе упоминается под экспериментальным кодом CHF 4795); и

(3',5'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)циклопропанкарбоновая кислота.

Ко второй группе предпочтительных соединений формулы (I) относятся соединения, у которых в фенильном кольце имеющиеся один или более заместителей R₃ замещают фенил двумя атомами хлора в положениях 3' и 4', в соответствии с общей формулой (III)

В предпочтительном варианте осуществления R₁ является H и R₂ представляет собой метил или, альтернативно, оба R₁ и R₂ представляют собой метил.

В другом предпочтительном варианте осуществления R₁ и R₂ образуют циклопропильную группу.

Предпочтительными соединениями формулы (III) являются следующие:

2-(3',4'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)пропионовая кислота;

2-метил-(3',4'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)пропионовая кислота

и

1-(3',4'-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)циклопропанкарбоновая кислота

(в этом документе также упоминается как под экспериментальным кодом CHF 5074).

CHF 5074 является особенно предпочтительным соединением.

Соединения общей формулы (I) могут с успехом использоваться в любой форме, либо в аморфной, либо в кристаллической, включая их сольваты или гидраты. Предпочтительно, чтобы эти соединения применялись в кристаллической форме.

Например, как описано в одновременно рассматриваемой заявке EP 10158954.7, полное содержание которой включено в качестве ссылки, CHF 5074 может существовать в трех стабильных кристаллических полиморфных состояниях. Соответственно, настоящее изобретение включает применение любых указанных полиморфов либо в чистом виде, либо в виде добавки в любой пропорции.

С учетом тесной взаимосвязи между соединениями формулы (I) в виде свободной кислоты и тех, которые являются солями, настоящее изобретение также направлено на их использование в виде фармацевтически приемлемых солей.

Фармацевтически приемлемые соли, согласно настоящему изобретению, таким образом, включают как соли на обычной органической, так и на неорганической основе.

Например, соли, описанные в одновременно рассматриваемой заявке на патент EP 10158954.7, могут быть с успехом использованы.

Соединения общей формулы (I) могут также применяться в виде пролекарств. Подходящими пролекарствами для фармацевтического использования могут быть сложные эфиры на основе простых спиртов, таких как этанол, или полиспиртов, таких как сорбит, сахаров, таких как глюкоза, или кислых сахаров, таких как аскорбиновая кислота. Другими подходящими пролекарствами могут быть те, которые описаны в заявке на патент WO 2006/016219.

Соединения общей формулы (I) могут быть объединены с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями или наполнителями для получения подходящих фармацевтических композиций.

Фармацевтически приемлемые носители или наполнители могут быть выбраны преимущественно из группы, состоящей из: разбавителей, увлажняющих веществ, эмульгаторов, связующих, покрывающих материалов, наполнителей, веществ, лубрикантов, смазывающих веществ, разрыхлителей, консервантов, стабилизаторов, поверхностно-активных веществ, веществ для создания pH буферных растворов, ароматизаторов и т.п. Всеобъемлющее руководство по фармацевтическим наполнителям приведено в справочнике Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed. Mack Pub., N.Y., U.S.A.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть изготовлены для введения любым удобным путем, например, пероральным, парентеральным, местным, ингаляционным, буккальным, назальным, ректальным, вагинальным, трансдермальным. Подходящие лекарственные формы могут включать таблетки, капсулы, пастилки, суппозитории, растворы, эмульсии, суспензии, сиропы, мази, кремы, масла и порошки. Предпочтительно, чтобы фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно было вводить перорально с помощью соответствующих лекарственных форм, таких как капсулы, таблетки, каплеты и т.д.

Дозировка соединений общей формулы (I), их солей и пролекарств может варьироваться в широких пределах в зависимости от характера заболевания, подлежащего лечению, конституции пациента и способа введения. Специалист в данной области может определить терапевтически эффективное количество для каждого пациента и, тем самым, определить соответствующую дозировку. Например, когда соединение, помеченное кодом CHF 5074, применяется людьми перорально, то типичная суточная доза может находиться в диапазоне 5-2000 мг, предпочтительно между 100 мг и 1000 мг и вводится одноразово или несколько раз в пределах суточной дозы. Таким образом, однократная доза фармацевтических препаратов настоящего изобретения для удобства включает в себя приблизительно от 100 до 1000 мг CHF 5074 или ее соли.

Соединения настоящего изобретения могут быть использованы для лечения или профилактики любого дикого типа TTR амилоидного заболевания. Они могут также применяться для задержки начала или замедления прогрессирования указанного заболевания.

В предпочтительном варианте осуществления дикий тип TTR амилоидного заболевания является старческим системным амилоидозом или семейной амилоидной полинейропатией.

Более конкретно, семейная амилоидная полинейропатия (FAP) характеризуется V30M мутацией.

В другом предпочтительном варианте осуществления транстиретиновое амилоидное заболевание является семейной амилоидной кардиомиопатией (FAC). Более конкретно, семейная амилоидная кардиомиопатия характеризуется V122I мутацией.

Следующие примеры подробно иллюстрируют настоящее изобретение.

ПРИМЕРЫ

Пример 1 - Анализ взаимодействия с диким типом человеческого транстиретина (TTR), используя флуорометрическую методику.

Целью данного исследования является изучение способности представленных соединений настоящего изобретения стабилизировать олигомерное нативное состояние TTR посредством взаимодействия с тироксиновым центром связывания, по сравнению с эталонными соединениями.

Рекомбинантный человеческий TTR дикого типа и некоторые из его основных амилоидогенных генетических разновидностей были получены, используя E.coli в качестве экспрессирующего организма, как описано в публикации (Zanotti et al., FEBS J. 2008, 275, 5841).

Для сравнения связывающих свойств соединений CHF 5074 и CHF 4795 с таковыми свойствами у транс-ресвератрола, дифлунизала и тафамидиса, были проанализированы взаимодействия этих соединений с TTR дикого типа.

Анализ взаимодействий был проведен на основе измерений флуоресценции.

Известно, что флуоресцентная эмиссия двух флуоресцентных проб 8-анилино-1-нафталинсульфоната (ANS) и транс-ресвератрола значительно возрастает, когда эти соединения особым образом связываются внутри тироксиновых связывающих центров в TTR (Smith et al., Biochim Biophys Acta 1994, 1199, 76, and Reixach et al., J. Biol. Chem. 2008, 283:2098, соответственно).

В то время как ANS обладает относительно низким сродством к TTR, транс-ресвератрол имеет более высокое сродство, больше, чем у тироксина.

В экспериментах по конкурентному связыванию с использованием сигналов флуоресценции от двух флуоресцентных проб или сигналов от сравнительных соединений, авторы смогли оценить взаимосвязь CHF 5074, CHF 4795, транс-ресвератрола, дифлунизала, тафамидиса и человеческого TTR.

Все данные были получены при 20°C в присутствии буфера из 50 мМ Na фосфата, pH 7,2, 150 мМ NaCl.

Результаты были следующие:

Флуоресценция (возбуждение в 320 нм) несвязанного транс-ресвератрола (10 мкМ) была довольно низкой и существенно увеличилась при связывании с TTR (5 мкМ]). Эмиссионный пик TTR-связанного транс-ресвератролом (максимум приблизительно в 390 нм), почти полностью отсутствовал в присутствии 10 мкМ CHF 5074 или CHF 4795, что соответствовало более высокому сродству указанных соединений по отношению к таковому у транс-ресвератрола.

Флуоресценция (возбуждение в 360 нм) несвязанного ANS (10 мкМ) была совершенно низкая и существенно повысилась при связывании с TTR (5 мкМ).

Эмиссионный пик TTR-связанного с ANS, почти полностью отсутствовал в присутствии 10 мкМ CHF 5074 или CHF 4795, что соответствовало более высокому сродству указанных соединений по отношению к таковому у ANS.

Флуоресценция (возбуждение в 320 нм) несвязанного тафамидиса (10 мкМ) характеризуется максимумом приблизительно около 375 нм, тогда как в присутствии 10 мкМ TTR его излучение было значительно выше, причем красная область спектра была сдвинута приблизительно на 40 нм. Эмиссионный пик TTR-связанного тафамидисом (10 мкМ), был почти полностью перемещен в сторону такового у несвязанного тафамидиса в присутствии 10 мкМ CHF 5074 или CHF 4795, что соответствовало повышенному сродству связывания CHF 5074 и CHF 4795 по отношению к таковому у тафамидиса. Флуоресценция 10 мкМ TTR-связанного тафамидисом (максимум приблизительно около 415 нм) была почти полностью смещена в сторону таковой у TTR-связанного транс-ресвератролом и несвязанного тафамидиса (максимум приблизительно около 380 нм) при инкубации TTR-связанного тафамидисом, с 10 мкМ ресвератролом, что соответствовало более высокому сродству связывания транс-ресвератрола по отношению к таковому у тафамидиса.

Флуоресценция в результате возбуждения при 320 нм связанного и несвязанного дифлунизала (10 мкМ) характеризовалась аналогичными интенсивностями и максимумами (приблизительно около 420 нм); интенсивность флуоресценции эмиссии TTR-связанного дифлунизалом, была значительно снижена после возбуждения при 340 нм. При последнем условии возбуждения, когда TTR-связанный дифлунизалом (10 мкМ), подвергался действию эквимолярного транс-ресвератрола, получили спектр похожий скорее на спектр TTR-связанного транс-ресвератролом, чем на спектр TTR-связанного дифлунизалом, в соответствии с более высоким сродством связывания транс-ресвератрола по отношению к таковому у дифлунизала.

Взятые вместе данные сравнительных испытаний связывания показали, что CHF 5074 и CHF 4795 имеют более высокое сродство связывания к TTR по сравнению с транс-ресвератролом, тогда как последнее соединение показывает более высокое сродство связывания по сравнению с тафамидисом и дифлунизалом.

Довольно высокое сродство, показанное CHF 5074 и CHF 4795, имеет большое преимущество по двум причинам: i) поскольку стабилизация TTR существует за счет связывания лигандов внутри тироксиновых центров связывания, то большой стабилизационный эффект ожидается для лигандов с наибольшим сродством, по крайней мере, при нейтральном pH (близко к pH плазмы крови), используемом в сравнительных экспериментах по связыванию; ii) более высокая селективность связывания для TTR ожидается при высоком сродстве лигандов в плазме крови, где другие связывающие белки, особенно сывороточный альбумин, могут конкурировать с TTR за ингибиторы связывания фибриллогенеза TTR.

Пример 2 - Оценка ингибирующего эффекта в отношении фибриллогенеза (образования фибрилл) ТТР дикого типа человека и двух основных амилоидогенных разновидностей (V30M и V122I) in vitro

Целью данного исследования являлась оценка ингибирующего эффекта тех же представителей соединений настоящего изобретения, испытанных в примере 1, на образование фибрилл ТТР дикого типа и двух основных амилоидогенных разновидностей (V30M и V122I) in vitro при умеренно кислом рН по сравнению с эталонными соединениями.

Чтобы подчеркнуть ингибирующий эффект CHF 5074 и CHF4795 по сравнению с дифлунизалом и тафамидисом на образование фибрилл дикого типа, V30M и V122I TTR in vitro при умеренно кислом pH, авторы следили за кинетикой образования фибрилл этих белков, контролируя увеличение мутности при 400 нм в результате инкубации выше названных соединений с TTR, как описывается в публикации Johnson et al., 2008, J Med Chem. 5:260.

Конечная концентрация TTR была 3,6 мкМ, которая близка к его физиологической концентрации в плазме, а с ингибиторами образования фибрилл конечная концентрации составляла 10,8 мкМ. Согласно процедуре, принятой для других ингибиторов образования фибрилл в публикации (Johnson et al., 2008, J Med Chem. 51:260), TTR инкубировали с каждым ингибитором при нейтральном pH (10 мМ Na фосфатный буфер, pH 7,2, 100 мМ KCl, 1 мМ EDTA) в течение 30 минут при температуре окружающей среды, прежде чем инкубировать белок в кислом pH (200 мМ Na ацетатного буфера, pH 4,4, 100 мМ KCl, 1 мМ EDTA) при 37ºC в целях создания благоприятных условий для образования фибрилл.

Ингибирующий эффект представляет собой средний результат двух независимых измерений для каждого соединения.

Результаты измерений следующие

Кинетика образования фибрилл TTR дикого типа почти полностью завершилась в течение 100 часов после инкубации при кислом pH. Соединения CHF 5074, CHF 4795 и эталонные соединения дифлунизала и тафамидиса показали схожие ингибирующие эффекты (около 75% ингибирования) на образование фибрилл.

Кинетика V30M образования фибрилл TTR была такой же, как полученная с TTR дикого типа. CHF 5074, CHF 4795 и эталонные соединения дифлунизал и тафамидис показали ингибирующие эффекты подобные тем, которые наблюдались с TTR дикого типа.

Кинетика V122I образования фибрилл TTR прошла на удивление быстрее по сравнению с TTR дикого типа при тех же условиях, наряду с этим CHF 5074, CHF 4795 и эталонные соединения дифлунизал и тафамидис показали более выраженный ингибирующий эффект (около 92% ингибирования) на образование фибрилл.

Взятые вместе данные показывают замечательный ингибирующий эффект CHF 5074 и CHF 4795 на фибриллогенез (образование фибрилл) TTR, подобный тем эталонным соединениям, которые в настоящее время изучены при лечении TTR амилоидоза.

Claims

1. Средство для профилактики и/или лечения транстиретиновых (TTR) амилоидных заболеваний, где заболевания выбраны из группы старческого системного амилоидоза, семейной амилоидной полинейропатии и семейной амилоидной кардиомиопатии, представляющее собой соединение общей формулы (I)

где
R₁ и R₂ предствляют собой метил;
или R₁ и R₂, взятые вместе с атомом углерода, с которым они связаны образуют кольцо циклопропила; и
R₃ представляет собой одну или более групп хлора или его фармацевтически приемлемые соли.

2. Средство по п. 1, где заболевание является семейной амилоидной полинейропатией.

3. Средство по п. 2, где семейная амилоидная полинейропатия характеризуется V30M мутацией.

4. Средство по п. 2, где семейная амилоидная кардиомиопатия характеризуется V122I мутацией.

5. Средство по п. 1, имеющее формулу (II)

6. Средство по п. 5, в котором R₁ и R₂ образуют с атомом углерода, с которым они связаны, циклопропильную группу.

7. Средство по п. 5, представляющее собой 2-метил-(3′,5′-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)пропионовой кислоты (CHF 4795).

8. Средство по п. 1, имеющее формулу (III)

9. Средство по п. 8, в котором оба R₁ и R₂ являются метилом.

10. Средство по п. 8, представляющее собой 1-(3′,4′-дихлор-2-фторбифенил-4-ил)циклопропанкарбоновой кислоты (CHF 5074).