RU2547465C2 - Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения - Google Patents

Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения Download PDF

Info

Publication number
RU2547465C2
RU2547465C2 RU2012155786/04A RU2012155786A RU2547465C2 RU 2547465 C2 RU2547465 C2 RU 2547465C2 RU 2012155786/04 A RU2012155786/04 A RU 2012155786/04A RU 2012155786 A RU2012155786 A RU 2012155786A RU 2547465 C2 RU2547465 C2 RU 2547465C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
zth
pde
cgmp
mol
liter
Prior art date
Application number
RU2012155786/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2012155786A (ru
Inventor
Нань ЧЖАН
Жун ЧЖУН
Original Assignee
Банхэ Фармасьютикал Ко., Лтд
Сучжоу Майдисянь Фармасьютикал Инк.
Нань ЧЖАН
Жун ЧЖУН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Банхэ Фармасьютикал Ко., Лтд, Сучжоу Майдисянь Фармасьютикал Инк., Нань ЧЖАН, Жун ЧЖУН filed Critical Банхэ Фармасьютикал Ко., Лтд
Publication of RU2012155786A publication Critical patent/RU2012155786A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2547465C2 publication Critical patent/RU2547465C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/235—Saturated compounds containing more than one carboxyl group
    • C07C59/245—Saturated compounds containing more than one carboxyl group containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/265—Citric acid

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к цитрату соединения, имеющему приведенную ниже формулу (II), и фармацевтической композиции, содержащей заявленный цитрат. Экспериментальные результаты настоящего изобретения доказывают, что заявленный цитрат может подавлять активность фосфодиэстеразы 5 типа и может быть использован для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбозов, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, лечения астмы и диабетического гастропареза. 2 н.п. ф-лы.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к соединению, обладающему ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, его солям, способам его получения и фармацевтическим композициям, содержащим указанное соединение или его соли.
Предшествующий уровень техники
Циклический аденозин монофосфат (цАМФ) и циклический гуанозин монофосфат (цГМФ) являются важными вторичными мессенджерами в клетке, и уровень цАМФ и цГМФ в клетке важен для регулирования различных клеточных функций.
Ферменты, участвующие в регуляции клеточного уровня цАМФ и цГМФ, включают аденилатциклазы (АЦ), гуанилатциклазы (ГЦ) и фосфодиэстеразы (ФДЭ). Баланс этих ферментов поддерживает уровень цАМФ и цГМФ в клетке в пределах нормы. При некоторых болезненных состояниях (например, гипертония, стенокардия и т.д.) обнаружено, что уровень цАМФ и цГМФ в клетке падает. Для повышения уровня цАМФ и цГМФ в клетке могут быть использованы две возможности: 1) активировать АЦ и ГЦ, и 2) ингибировать ФДЭ, из которых вторая возможность имеет лучший эффект. В последние годы существует большой интерес к изучению и разработке ингибиторов ФДЭ, и клиническое применение селективных в отношении изоферментов ингибиторов ФДЭ достигло революционного прогресса. В настоящее время результаты экспериментов по клонированию молекулы кДНК доказали, что существует по крайней мере 10 семейств генов ФДЭ у млекопитающих. Для каждого семейства генов ФДЭ существует множество подтипов изоферментов ФДЭ (сплайсинг-вариантов), из которых фосфодиэстераза 5 типа (ФДЭ-5) может селективно гидролизовать цГМФ и широко распространена в отдельных органах тела.
Ингибитор ФДЭ-5 имеет следующие фармакологические функции и клинические применения:
(1) Ингибирование агрегации тромбоцитов и борьба с тромбозом:
идеальные антитромботические препараты должны подавлять агрегацию тромбоцитов без релаксации гладкой мускулатуры сосудов, чтобы избежать возникновения участка ишемии с дальнейшим развитием ишемии. Как ингибиторы ФДЭ-3, так и ингибиторы ФДЭ-5 ингибируют агрегацию тромбоцитов. Однако учитывая, что ингибитор ФДЭ-5 в меньшей степени расслабляет гладкую мускулатуру сосудов, он имеет существенное преимущество в лечении артериальных тромботических заболеваний. Типичный ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой дипириамол, имеет хороший антитромботический эффект.
(2) Снижение легочной гипертензии и лечение сердечно-сосудистых заболеваний: аномалия легочного сосудистого сопротивления часто является важным фактором, вызывающим сердечно-сосудистые заболевания. В экспериментах на животных моделях селективный ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой запринаст, может существенно увеличить эффективное время и интенсивность оксида азота и оказывает относительно сильное действие на снижение легочной гипертензии. Клинически это используется для лечения стенокардии, гипертонии и инфаркта миокарда. В последнем докладе ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой Е-4010, может увеличить выживаемость крыс, имеющих гипертонию, индуцированную монокроталином.
(3) Противоастматическое действие: Сообщается, что эксперименты с использованием свиней в качестве животной модели показывают, что ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой SR-265579, имеет терапевтический эффект для гистамининдуцированных бронхоэктазов;
(4) Лечение диабетического гастропареза: Сообщается, что у крыс, имеющих диабет, ингибитор ФДЭ-5, представляющий собой силденафила цитрат, может устранить задержку опорожнения желудка и обладает определенными терапевтическими и положительными эффектами на автономную нейропатию пищеварительной системы, осложненную диабетом.
(5) Лечение эректильной дисфункции: Поскольку ФДЭ5 широко распространен в пещеристых телах полового члена, ингибитор ФДЭ5 может вызвать увеличение уровня цГМФ в пещеристых телах полового члена. Вследствие ряда физиологических и биохимических реакций гладкая мускулатура сосудов пениса расслабляется и происходит эрекция пениса. В отличие от простагландина Е1 ингибитор ФДЭ-5 не будет вызывать патологическую эрекцию; ее функция все еще будет нуждаться в сексуальные стимулах.
В свете вышеизложенных фармакологических функций ингибитора ФДЭ5 авторы изобретения модифицировали химическую структуру силденафила методом химической молекулярной модификации и получили новые соединения и их цитраты, т.е. 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-кетон и его цитрат (ZTH). Установлено, что ZTH может эффективно подавлять активность фермента ФДЭ-5. Таковы предпосылки изобретения.
Краткое описание изобретения
Первой задачей настоящего изобретения является создание нового соединения, которое может ингибировать активность фосфодиэстеразы 5 типа и его соли, такой как цитрат. Второй задачей настоящего изобретения является разработка способа получения нового соединения и его цитрата. Третьей задачей настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции, которая содержит новое соединение или его соль, такую как цитрат.
Настоящее изобретение предлагает соединение формулы I и его фармацевтический цитрат формулы II:
Figure 00000001
Figure 00000002
Химическое название соединения, представленного формулой I: 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-он. Для иллюстрации его структуры использован метод ядерного магнитного резонанса и для вычисления молекулярной массы использована масс-спектрометрия:
[013]1H-NMR (400MHz, MeOD) δ 8,180-8,185 (d, J=2Hz, 1H), 7,880-7,908 (dd, J1=2,4Hz, J2=8,8Hz, 1H), 7,356- 7,379 (d, J=9,2Hz, 1H), 4,284- 4,337 (q, J=14Hz, 2H), 4,234 (s, 3H), 3,575-3,603 (d, J=11,2Hz, 2H), 2,865-2,902 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,377 (br, 2H), 2,261 (s, 3H), 2,112-2,168 (t, J=11,2Hz, 2H), 1,795-1,851 (m, 2H), 1,465-1,500 (t, J=7,2Hz, 3H), 1,090-1,105 (d, J=6Hz, 6H), 0,978-1,015 (t, J=7,2Hz, 3H). MS 503 [M+H]+
Цитрат формулы II получают в результате реакции соединения формулы I и лимонной кислоты. Химическое название цитрата, представленного формулой II: 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-онацитрат. Анализ выполнен с помощью ядерного магнитного резонанса: 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ8,164-8,170 (d, J=2,4Hz, 1H), 7,914-7,942 (dd, J1=2,4Hz, J2=8,8Hz, 1H), 7,363-7,385 (d, J=8,8Hz, 1H), 4,276-4,329 (q, J=14Hz, 2H), 4,231 (s, 3H), 3,746-3,776 (d, J=11,2Hz, 2H), 2,986 (br, 2H), 2,858-2,895 (t, J=7,2Hz, 2H), 2,792 (s, 2H), 2,739 (s, 2H), 2,590 (s, 3H), 2,406-2,464 (t, J=11,6Hz, 2H), 1,784-1,839 (m, 2H), 1,448-1,483 (t, J=7,2Hz, 3H), 1,253-1,269 (d, J=6,4Hz, 6H), 0,972-1,009 (t, J=7,2Hz, 3H).
Соединение формулы I получают главным образом, используя цис-2, 6-диметилпиперазин и 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-е]пиримидин-7-кетон в качестве исходных материалов и синтезируют в несколько этапов. Путь синтеза выглядит следующим образом:
Figure 00000003
В 2,6-диметилпиперазин и ди-трет-бутилдикарбонат добавляют тетрагидрофуран, проводят реакцию при комнатной температуре, а затем максимально концентрируют тетрагидрофуран и получают 3,5-диметил-1-трет-бутоксикарбонил-пиперазин (ZTH-1). По данным ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ3,8-4,1 (br, 2H), 2,75-2,80 (м, 2Н), 2,2-2,5 (br, 2H), 1,45 (с, 9H), 1,052-1,067 (d, J=6 Гц, 6H). MS 215 [M+H]+ .
К ZTH-1 последовательно добавляют тетрагидрофуран, углекислый калий и йодистый метил, и проводят реакцию при комнатной температуре в течение ночи; затем фильтруют и концентрируют, добавляют воду и дихлорметан в осадок и промывают дихлорметаном, соединяют органические слои, промывают насыщенным раствором соли и сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и остаток очищают колоночной хроматографией (метанол:дихлорметан = 1:20) и получают 3,4,5-триметил-1-трет-бутил-карбонилпиперазидин (ZTH-2). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-NMR (400MHz, MeOD), 54,505-4,533 (m, 2H), 4,110-4,134 (m, 2H), 2,943 (s, 3H), 2,779 (br, 2H), 2,196 (s, 9H), 1,782-1,797 (d, J=6Hz, 6H). MS 229 [M+H]+.
ZTH-2 растворяют в диоксане, охлаждают, медленно по каплям добавляют концентрированный раствор соляной кислоты в диоксане, перемешивают при комнатной температуре и затем выпаривают растворитель при пониженном давлении и получают 1,2,6-триметилпиперазин (ZTH-3). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1Н- NMR (400MHz, MeOD) δ4,505-4,533 (m, 2Н), 3,722 (br, 2Н), 3,611-3,644 (m, 2Н), 3,310-3,423 (m, 2Н), 2,937 (s, 3Н), 1,493-1,506 (d, J=5,2Hz, 6H). MS 129 [M+H]+.
По каплям добавляют 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразол[4,3-D]пиримидин-7-он в хлорсульфоновую кислоту, поддерживая температуру реакционного раствора не выше 25°C, проводят реакцию при комнатной температуре, а затем заливают реакционный раствор в колотый лед, механически перемешивают при комнатной температуре, поддерживая температуру не выше 25°C, а затем фильтруют и сушат и получают 5-(2-этоксифенил-5-хлорсульфонил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он (ZTH-4). По данным спектрометрии ядерно-магнитного резонанса и масс-спектрометрии: 1H-NMR (400MHz, DMS0) δ 7,871-7,876 (s, 1Η), 7,700-7,727 (dd, J1=2Hz, J2=8,4Hz, 1H), 7,098-7,119 (d, J=8,4Hz, 1H), 4,125-4,161 (m, 5H), 2,778-2,816 (t, J=7,6Hz, 2H), 1,700-1,756 (m, 2H), 1,303- 1,337 (t, J=6,8Hz, 3H), 0,919-0,956 (t, J=7,6Hz, 3H). MS 411 [M+H]+.
В тетрагидрофуран добавляют ZTH-4, ZTH-3 и триэтиламин, перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем выпаривают растворитель, в остаток добавляют воду и метиленхлорид, отделяют и последовательно промывают слой метиленхлорида насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде, насыщенным раствором соли, и затем сушат и концентрируют, после перекристаллизации образовавшегося остатка из этанола получают соединение формулы I (ZTH-5).
В ZTH-5 добавляют безводный метанол, перемешивают, нагревая до растворения, добавляют лимонную кислоту после осветления раствора; по окончании реакции растворения, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, промывают метанолом и сушат и получают соединение формулы II (ZTH).
ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, являются пиразоло-пиримидино-кетоновыми соединениями, химическая структура которых схожа с химической структурой цГМФ и они могут конкурировать с цГМФ за связывание каталитического домена ФДЭ-5 и, таким образом, препятствовать деградации цГМФ на ФДЭ-5, увеличивать концентрацию цГМФ и поддерживать концентрацию цГМФ в пределах нормы. ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, могут эффективно ингибировать активность фосфодиэстеразы 5 типа и, таким образом, могут быть использованы как ингибиторы фосфодиэстеразы 5 типа или в качестве эффективного компонента депрессанта фосфодиэстеразы 5 типа. ZTH-5, соли ZTH-5, такие как ZTH, потенциально могут быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбоза, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, для лечения астмы и лечения диабетического гастропареза.
Подробное описание изобретения
(1) Получение ZTH-5(5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-он):
1. Получение 3,5-диметил-1-трет-бутоксикарбонил-пиперазина (ZTH-1):
В 250 мл колбу добавляют 2,6-диметилпиперазин (11,4 г, 100 ммоль, 1 экв) и дитретбутилбутилдикарбонат (21,8 г, 100 ммоль, 1 экв), затем добавляют 100 мл тетрагидрофурана, проводят реакцию при комнатной температуре в течение 4 часов и концентрируют тетрагидрофуран (пока тетрагидрофуран не израсходуется полностью) и получают 21,4 г ZTH-1 в виде оранжевого маслянистого вещества, в котором выход целевого вещества составляет 100%.
2. Получение 3,4,5-триметил-1-трет-бутил-карбонильной пиперазидина (ZTH-2):
В 250 мл колбу добавляют ZTH-1 (10,7 г, 50 ммоль, 1 экв); последовательно добавляют 100 мл тетрагидрофурана, карбонат калия (10,35 г, 75 ммоль, 1,5 экв.) и йодистый метил (8,52 г, 60 ммоль, 1,2 экв.), проводят реакцию при комнатной температуре в течение ночи; фильтруют и концентрируют, к осадку добавляют 100 мл воды и 100 мл дихлорметана и промывают дихлорметаном (50 мл×дважды), соединяют органические слои, промывают насыщенным раствором соли, сушат над безводным сульфатом натрия, концентрируют и осадок очищают колоночной хроматографией (метанол: дихлорметан=1:20), и получают 5,7 г ZTH-2 в виде оранжевого маслянистого вещества, в котором выход целевого вещества составляет 50%.
3. Получение 1,2,6-триметилпиперазина (ZTH-3):
ZTH-2 (11,4 г, 50 ммоль, 1 экв) растворяют в 100 мл диоксана, охлаждают до 0°C и медленно по каплям добавляют насыщенный раствор соляной кислоты в диоксане (4М, 25 мл, 2 экв.), перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и выпаривают растворитель при пониженном давлении и получают ZTH-3 в виде твердого сырого продукта белого цвета, который непосредственно, без очистки используют на следующей стадии.
4. Получение 5-(2-этоксифенил-5-хлорсульфонил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4, 3-е]пиримидин-7-она(ZTH-4):
При температуре -10°C к 100 мл хлорсульфоновой кислоты добавляют по каплям 5-(2-этоксифенил)-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразол[4,3-D]пиримидин-7-он(50 г, 160 ммоль), в процессе капания температуру реакционного раствора поддерживают не выше 25°C, по завершении капания проводят реакцию при комнатной температуре в течение 3 часов; затем заливают реакционный раствор в колотый лед, механически перемешивают, поддерживая температуру не выше 25°C, а затем перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, фильтруют и сушат и получают 50 г ZTH-4 в виде твердого вещества белого цвета, в котором выход целевого продукта составляет 75,9%.
5. Получение 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-она(ZTH-5):
В 500 мл тетрагидрофурана добавляют ZTH-4 (36 г, 10 ммоль, 1 экв), ZTH-3 (17,6 г, 10 ммоль, 1 экв), и триэтиламин (60,6 г, 60 ммоль, 6 экв.), перемешивают при комнатной температуре в течение ночи; выпаривают растворитель, добавляют 200 мл воды и 200 мл метиленхлорида, отделяют и последовательно промывают слой метиленхлорида насыщенным раствором бикарбоната натрия в воде затем насыщенным солевым раствором, а затем сушат и концентрируют, после перекристаллизации из 10-кратного количества этанола получают 32 г ZTH-5 в виде белого кристаллического остатка, затем после перекристаллизации из 50- кратного количества этанола получают 16,5 г белого кристаллического ZTH-5, при этом при этом выход целевого вещества составляет 37%.
(2) Получение ZTH (5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-D]пиримидин-7-онцитрат):
В 500 мл реакционный сосуд (бутылку) добавляют 15 г соединения ZTH-5, 270 мл безводного метанола, перемешивают, нагревая до растворения, добавляют 12,5 г лимонной кислоты после осветления раствора; в ходе реакции растворения в течение примерно 1,5 часов, охлаждают до комнатной температуры, фильтруют, промывают метанолом (три раза×5 мл) и сушат с получением 15 г ΖΤΗ в виде белого твердого вещества.
(1) и (2) указанные выше являются вариантами получения и (3), указанный ниже является экспериментальным воплощением.
(3) Исследования ингибирующего эффекта ΖΤΗ на ФДЭ-5
1. Ингибирующий эффект ΖΤΗ на действие ФДЭ-5 на цГМФ: Экспериментальный метод:
Для обнаружения in vitro ингибирующих эффектов различных концентраций ZTH на деградацию цГМФ под действием ФДЭ-5 используют иммуноферментный анализ. Концентрацию цГМФ определяют в соответствии с процедурой, предусмотренной для набора для иммуноферментного анализа биотрансформации цГМФ (набор ИФА) (также называемого: cGMP biotrack enzymeimmuoassy system, EIA), изготовленного компанией Amersham (компания). В качестве положительного контроля используют силденафила цитрат.
Получение реагента:
Получение ZTH и силденафил цитрата с различной концентрацией лекарственного средства:
Делают навеску ZTH для растворения в дистиллированной деминерализованной воде, соответственно, добавляют ДМСО для его растворения (препарат: ДМСО=1 моль:1 литр) в 100 мкл микролунки, конечные концентрации: 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр.
Препарат сравнения, представляющий собой силденафил цитрат, готовится таким же образом, как описано выше.
Получение рабочего раствора ФДЭ-5:
Отбирают определенное количество ФДЭ-5, разбавленного соответствующим объемом буферного раствора для ИФА, где конечная концентрация составляет 1 Ед/мкл, причем раствор хранится при низкой температуре -80°C для последующего использования.
Получение цГМФ:
Делают навеску цГМФ (цГМФ, Na), растворяют в соответствующем объеме буферного раствора для ИФА, конечная концентрация цГМФ составляет 3200 фемтомоль/50 мкл, раствор хранится при низкой температуре -20°C для последующего использования.
Эксперимент:
Деградирующее действие ФДЭ5 на цГМФ:
ФДЭ-5 и цГМФ смешивают, 100 мкл микролунка содержит 3200 фмоль цГМФ, деградирующее действие ФДЭ5 на цГМФ детектируется в ходе реакции при 30°C в течение 20 минут.
Ингибирующее действие ZTH на ФДЭ5:
ZTH и силденафила цитрат, представляющий собой положительный контроль, смешивают с цГМФ соответственно и хорошо перемешивают (предполагают использование раствора ДМСО в дистиллированной деминирализованной воде в качестве отрицательного контроля) и 3 Ед ФДЭ-5 добавляют и проводят реакцию при 30°C в течение 20 мин. В 100 мкл микролунке содержатся 3200 фмоль цГМФ. Концентрация препарата может быть 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр для выявления ингибирующего действия различных концентраций ZTH и положительного контроля на вызываемую ФДЭ-5, деградацию цГМФ. Вышеуказанные образцы добавляют в микролунки, покрытые антителами, а затем 100 мкл антисыворотки добавляют соответственно, чтобы приостановить реакцию, которая осуществляется при 4°C в течение 15-18 ч, а затем добавляют 50 мкл цГМФ, конъюгированного с пероксидазой, чтобы приостановить реакцию, протекавшую в течение 3 часов, а затем промывают, добавляют 200 мкл ТМБ для развития окраски и используют BIORAD 450 ИФА ридер для чтения поглощения при длине волны 630 нм. На основании измеренного значения поглощения цГМФ рассчитывают отношение В/ВО % по формуле поглощения ИФА [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП О стандарта - ОП NSB)] (NSB - фон, характеризующий неспецифическое связывание). IC50 для ZTH, силденафил цитрата, представляющего собой положительный контроль испытуемого препарата ФДЭ-5, рассчитывают с использованием линейной регрессии для аппроксимации S-кривой и кривой регрессии, построенной методом пробит.
Результаты эксперимента:
Деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ
ФДЭ-5 реагирует с цГМФ при 30°C в течение 20 минут и затем ФДЭ-5 мог разрушать 3200 фмоль цГМФ до 1600 фмоль.
Ингибирующее действие ZTH на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ:
Сравнивают ингибирующее действие различных концентраций (10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр), соответствующих групп ZTH, контроля испытуемого препарата и раствора ДМСО в дистиллированной деминерализованной воде на деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ.
Значение IC50 препарата рассчитывают на основе различий в поглощении (значения ОП) при разных концентрациях препарата ZTH, подавляющего способность ФДЭ-5 деградировать цГМФ, используя формулу поглощения ИФА для расчета % В/ВО [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП 0 стандарта - ОП NSB)]. Данные могут быть аппроксимированы S кривой (p<0,05) с использованием линейной регрессии; IC50 рассчитывают с помощью регрессии, построенной методом пробит. Значение IC50 для ZTH составляет 2,12×10-9, и силденафил цитрата, представляющего собой положительный контроль испытуемого препарата, составляет 6,958×10-9 М.
2. Действие ZTH на вызываемый ФДЭ 5 распад цГМФ:
Экспериментальный метод:
Для обнаружения in vitro эффектов различных концентраций ZTH на деградацию цГМФ под действием ФДЭ-5 используют иммуноферментный анализ. Концентрацию цГМФ определяют в соответствии с процедурой, предусмотренной для набора для иммуноферментного анализа биотрансформации цГМФ (набор ИФА) (также называемого: cGMP biotrack enzymeimmuoassy system, EIA), сделанного Amersham. В качестве контроля используют силденафила цитрат.
Получение реагента:
Получение цАМФ:
Определенное количество цАМФ (цАМФ, Na) взвешивают и растворяют в соответствующем объеме буферного раствора для ИФА, соответственно. Конечная концентрация цАМФ составляет 1600 фмоль/50 мкл. Продукт хранят при низкой температуре -20°C для последующего использования.
Получение ZTH и силденафил цитрата и получение рабочего раствора ФДЭ-5 представляют собой такие же, как описано выше.
Эксперимент:
Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ:
ФДЭ-5 и цАМФ смешивают, 100 мкл микролунка содержит 1600 фмоль цАМФ. Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ обнаруживается в ходе реакции при 30°C в течение 20 минут.
Эффект ZTH на действие ФДЭ-5 по отношению к цАМФ:
ZTH и положительный контроль испытуемого препарата соединяют с цАМФ и тщательно перемешивают (в качестве отрицательного контроля используют раствор ДМСО в дистиллированной деминерализованной воде), и добавляют 3 Ед ФДЭ-5 и проводят реакцию при 30°C в течение 20 мин. 100 мкл микролунка содержит 1600 фмоль цАМФ. Концентрация препарата может быть 10-4 моль/литр, 10-5 моль/литр, 10-6 моль/литр, 10-7 моль/литр, 10-8 моль/литр, 10-9 моль/литр, 10-10 моль/литр, 10-11 моль/литр, 10-12 моль/литр. Перечисленные выше образцы добавляют в тестовые лунки, покрытые антителами, затем добавляют 100 мкл антисыворотки, чтобы приостановить реакцию, длившуюся при 4°C в течение 2 часов, а затем добавляют 50 мкл цАМФ, конъюгированного с пероксидазой, чтобы приостановить реакцию, осуществлявшуюся в течение 1 ч, а затем промывают, добавляют 150 мкл ТМВ для развития окраски и результаты спектрофотометрируют при длине волны 630 нм на ИФА планшет-ридере. Основываясь на измеренной величине поглощения цАМФ отношение %В/ВО рассчитывают, используя формулу поглощения ИФА [(ОП стандарта или образца - ОП NSB)×100/(ОП 0 стандарта - ОП NSB)]. Значение IC50 для ZTH, силденафил цитрата, являющегося положительным контролем испытуемого препарата, по отношению к ФДЭ-5 рассчитывают с использованием линейной регрессии для аппроксимации S кривой и регрессии, построенной методом пробит.
Результаты эксперимента:
Деградирующее действие ФДЭ-5 на цАМФ:
ФДЭ-5 не разрушает цАМФ.
Эффект ZTH на действие ФДЭ-5 по отношению к цАМФ:
Не наблюдается существенного различия в значениях ОП между ZTH группой, контрольной медицинской группой и отрицательной контрольной группой, представляющей собой дистиллированную деминерализованную воду (р>0,05), и данные не могут быть аппроксимированы S кривой (р>0,05).
Выводы:
ZTH является пиразоло-пиримидино-кетоновым соединением, химическая структура которого похожа на цГМФ и которое может конкурировать с цГМФ за связывание каталитического домена ФДЭ-5 и, таким образом, подавлять деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ и увеличивать концентрацию цГМФ.
В ходе изучения ингибирующего эффекта ZTH на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ, IC50 для ZTH (концентрация ZTH, необходимая для ингибирования ФДЭ5 на 50%) определена как 2,12 х 10-9 моль, а для положительного контроля испытуемого препарата IC50 определена как 6,958 х 10-9 моль. Результат показывает, что ZTH может подавлять деградирующее действие ФДЭ-5 на цГМФ, имеет зависимость доза-эффект и является очень хорошим ингибитором ФДЭ-5. Его ингибирующая активность по отношению к ферменту ФДЭ-5 значительно лучше, чем ингибирующая активность силденафил цитрата. Таким образом, ZTH потенциально может быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и борьбы с тромбозом, для снижения легочной гипертензии и борьбы с сердечно-сосудистыми заболеваниями, для борьбы с астмой и лечения диабетического гастропареза.
В приведенных выше экспериментальных воплощениях изобретения, хотя раскрыты только экспериментальные данные, касающиеся ZTH, ввиду того, что ZTH является цитратом ZTH-5 и ZTH-5 имеет схожую структуру с ZTH (т.е. ZTH-5 и соли ZTH-5, кроме цитрата, имеют структуру, аналогичную ZTH, и имеют общую пиразоло-пиримидин-кетоновую структуру), из экспериментальных эффектов ZTH может быть сделано заключение, что ZTH-5, соли ZTH-5, кроме цитрата, обладают ингибирующим действием на вызываемую ФДЭ-5 деградацию цГМФ и являются ингибитором ФДЭ-5 и потенциально могут быть основой для разработки препаратов нового поколения для лечения эректильной дисфункции, для ингибирования агрегации тромбоцитов и лечения тромбоза, для снижения легочной гипертензии и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, для лечения астмы и лечения диабетического гастропареза.

Claims (2)

1. Соединение, представляющее собой 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он цитрат формулы II:
Figure 00000004
2. Фармацевтическая композиция для ингибирования фосфодиэстеразы 5 типа, включающая 5-[2-этоксифенил-5-(3,4,5-триметилпиперазинил)-сульфонил]-1-метил-3-пропил-1,6-дигидро-7Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7-он цитрат по п.1 в качестве эффективного компонента и общеизвестный носитель лекарственного средства и/или эксципиент.
RU2012155786/04A 2010-07-02 2010-07-30 Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения RU2547465C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010221658.7 2010-07-02
CN2010102216587A CN101891747B (zh) 2010-07-02 2010-07-02 抑制5型磷酸二酯酶的化合物及制备方法
PCT/CN2010/075587 WO2012000212A1 (zh) 2010-07-02 2010-07-30 抑制5型磷酸二酯酶的化合物及制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2012155786A RU2012155786A (ru) 2014-08-10
RU2547465C2 true RU2547465C2 (ru) 2015-04-10

Family

ID=43101120

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2012155786/04A RU2547465C2 (ru) 2010-07-02 2010-07-30 Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения

Country Status (10)

Country Link
US (1) US8859565B2 (ru)
EP (1) EP2589601B1 (ru)
JP (1) JP5715247B2 (ru)
KR (1) KR20130044314A (ru)
CN (1) CN101891747B (ru)
AU (1) AU2010356747B2 (ru)
BR (1) BR112013000042A2 (ru)
CA (1) CA2803660C (ru)
RU (1) RU2547465C2 (ru)
WO (1) WO2012000212A1 (ru)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3099689B1 (en) 2014-01-30 2022-01-26 Council of Scientific and Industrial Research Pyrazolopyrimidinones for the treatment of impotence and process for the preparation thereof
CN113493459B (zh) * 2020-04-07 2022-12-13 广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂 Pde5抑制剂化合物及其制备方法和应用
CN113461694A (zh) * 2021-08-05 2021-10-01 广东西捷药业有限公司 一种伐地那非类似物及其合成方法和应用
CN114163493B (zh) * 2021-11-18 2023-09-15 浙大宁波理工学院 一种可作为5型磷酸二酯酶抑制剂的多肽及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0463756A1 (en) * 1990-06-20 1992-01-02 Pfizer Limited Pyrazolopyrimidinone antianginal agents
EP1400522A1 (en) * 2001-06-29 2004-03-24 Baoshun Liu New compounds for treating impotence
CN1517349A (zh) * 2003-01-16 2004-08-04 刘宝顺 两种治疗阳痿的新化合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9301192D0 (en) * 1993-06-09 1993-06-09 Trott Francis W Flower shaped mechanised table
US6077841A (en) * 1998-09-04 2000-06-20 Janssen Pharmaceutica, N.V. 5-heterocyclyl pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-ones for the treatment of male erectile dysfunction
CN1094492C (zh) * 1999-06-21 2002-11-20 杭州神鹰医药化工有限公司 西地那非的制备方法
US20060205733A1 (en) * 2004-08-26 2006-09-14 Encysive Pharmaceuticals Endothelin a receptor antagonists in combination with phosphodiesterase 5 inhibitors and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0463756A1 (en) * 1990-06-20 1992-01-02 Pfizer Limited Pyrazolopyrimidinone antianginal agents
EP1400522A1 (en) * 2001-06-29 2004-03-24 Baoshun Liu New compounds for treating impotence
CN1517349A (zh) * 2003-01-16 2004-08-04 刘宝顺 两种治疗阳痿的新化合物

Also Published As

Publication number Publication date
AU2010356747B2 (en) 2014-10-30
CA2803660C (en) 2016-10-18
WO2012000212A1 (zh) 2012-01-05
EP2589601B1 (en) 2015-09-09
EP2589601A4 (en) 2013-11-13
RU2012155786A (ru) 2014-08-10
JP2013529651A (ja) 2013-07-22
CN101891747A (zh) 2010-11-24
US8859565B2 (en) 2014-10-14
CN101891747B (zh) 2012-04-25
AU2010356747A1 (en) 2012-06-07
JP5715247B2 (ja) 2015-05-07
BR112013000042A2 (pt) 2018-08-28
CA2803660A1 (en) 2012-01-05
KR20130044314A (ko) 2013-05-02
US20130116265A1 (en) 2013-05-09
EP2589601A1 (en) 2013-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2965404T3 (es) Inhibidor de la SSAO
JP6501209B2 (ja) キナーゼ阻害剤としてのプリノン化合物
JP5711813B2 (ja) βセクレターゼ（ＢＡＣＥ）の阻害剤として有用な５，６−ジヒドロ−２Ｈ−［１，４］オキサジン−３−イル−アミン誘導体
RU2719422C2 (ru) Необязательно конденсированные гетероциклил-замещенные производные пиримидина, пригодные для лечения воспалительных, метаболических, онкологических и аутоиммунных заболеваний
CA2907243C (en) Substituted dihydropyrimidopyrimidinone compounds and pharmaceutical compositions thereof use fgfr4 inhibitor
KR20120124428A (ko) 치환된 피롤로-아미노피리미딘 화합물
BR112018011969B1 (pt) Compostos heteroaromáticos como inibidores de btk, seu uso, seu processo para preparação e composição farmacêutica que os compreende
AU2017319080B2 (en) Pyrazolo[1,5-a]pyrimidine compound
KR20090122964A (ko) 아자-피리도피리미딘온 유도체
CN105452251B (zh) 作为β‑分泌酶(BACE)抑制剂的4‑氨基‑6‑苯基‑5,6‑二氢咪唑并[1,5‑A]吡嗪‑3(2H)‑酮衍生物
JP2012516321A (ja) デルター５−デサチュラーゼ阻害薬
JP2008543828A (ja) ドーパミン作動薬としての３−フェニルアゼチジン誘導体
RU2547465C2 (ru) Соединение, обладающее ингибирующим действием в отношении фосфодиэстеразы 5 типа, и способ его получения
CN113906020A (zh) 用于治疗皮肤病的缓激肽（bk）b2受体拮抗剂的(r)-3-(氯-5-氟-2-((4-(1h-吡唑-1-基)-2-甲基喹啉-8-基氧基)甲基)苯基）吗啉衍生物及相关的化合物
IL190456A (en) Pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl derivative, a pharmaceutical composition, the derivative for use as a medicament, the derivative for use in the manufacture of a medicament and a method of preparing the derivative
KR100997033B1 (ko) 도파민 아고니스트의 신규한 염 형태
CN107987072A (zh) 作为crth2抑制剂的吲哚类化合物
EP3998257A1 (fr) Dérivés de flavaglines
CN110078663A (zh) 一种母核为四氢喹啉的磺酰胺类化合物及其制备方法和应用
EP4069697A1 (en) Crf receptor antagonists and methods of use
CN112194660B (zh) 一种pde2抑制剂苯基吡唑并嘧啶类化合物及其制备方法
ES2649438T3 (es) Derivados de benzo[1,3]dioxina y su uso como antagonistas de LPAR5
WO2023222137A1 (zh) 新型四氢异喹啉类化合物、其制备方法、包含此类化合物的药物组合物及其用途
KR20170102360A (ko) 피라졸 화합물
JP6449470B2 (ja) Ｎ−安息香酸基置換のベンゾピロリン−２−オン誘導体及びその用途

Legal Events

Date Code Title Description
TK4A Correction to the publication in the bulletin (patent)

Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 10-2015

MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20160731