RU2487886C2 - Пептид foxm1 и включающее его медицинское средство - Google Patents
Пептид foxm1 и включающее его медицинское средство Download PDFInfo
- Publication number
- RU2487886C2 RU2487886C2 RU2010110567/10A RU2010110567A RU2487886C2 RU 2487886 C2 RU2487886 C2 RU 2487886C2 RU 2010110567/10 A RU2010110567/10 A RU 2010110567/10A RU 2010110567 A RU2010110567 A RU 2010110567A RU 2487886 C2 RU2487886 C2 RU 2487886C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- cancer
- peptides
- peptide
- hla
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 278
- 101150034834 Foxm1 gene Proteins 0.000 title description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 170
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 148
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 119
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 108
- 108010008599 Forkhead Box Protein M1 Proteins 0.000 claims abstract description 100
- 102000007237 Forkhead Box Protein M1 Human genes 0.000 claims abstract description 99
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 76
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 55
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 43
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 18
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 14
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 35
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 30
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 29
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 19
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 14
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 13
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical group CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930182817 methionine Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 31
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 88
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 43
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 36
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 23
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 21
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 21
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 18
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 17
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 16
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 16
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 16
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 12
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 9
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 8
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 6
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 6
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 102000004315 Forkhead Transcription Factors Human genes 0.000 description 5
- 108090000852 Forkhead Transcription Factors Proteins 0.000 description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000010039 intracellular degradation Effects 0.000 description 3
- 210000003228 intrahepatic bile duct Anatomy 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101000907578 Homo sapiens Forkhead box protein M1 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 2
- 108010046117 N-palmitoyl-5,6-dipalmitoyl-S-glycerylcysteinyl-seryl-serine Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 102000044966 human FOXM1 Human genes 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N tripalmitoyl-S-glyceryl-cysteinyl-seryl-serine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CSCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC XVQKZSLOGHBCET-INVHGPFASA-N 0.000 description 2
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-methyl-1-oxob Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(C)C)C1=CN=CN1 RWBLWXCGQLZKLK-USVTTYPOSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010008479 Chest Pain Diseases 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N Chromium-51 Chemical compound [51Cr] VYZAMTAEIAYCRO-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 1
- 208000037051 Chromosomal Instability Diseases 0.000 description 1
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000591385 Homo sapiens Neurotensin receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100033986 Neurotensin receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102100033254 Tumor suppressor ARF Human genes 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 1
- 230000005904 anticancer immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 210000003793 centrosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013000 chemical inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 235000016213 coffee Nutrition 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000001159 endocytotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000003324 growth hormone secretagogue Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010185 immunofluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000014899 intrahepatic bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000007450 intrahepatic cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000006618 mitotic catastrophe Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000006712 oncogenic signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 108091008820 oncogenic transcription factors Proteins 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 208000028591 pheochromocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000010349 pulsation Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 229910052704 radon Inorganic materials 0.000 description 1
- SYUHGPGVQRZVTB-UHFFFAOYSA-N radon atom Chemical compound [Rn] SYUHGPGVQRZVTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000025053 regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000005586 smoking cessation Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 101150095542 tap gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
- A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
- A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены пептиды, выделенные из белка FOXM1, способные активировать цитотоксические (киллерные) Т-клетки человека посредством образования антигенпрезентирующего комплекса с молекулой HLA-A2. Рассмотрены композиции, содержащие пептиды по изобретению, применение пептида для получения средства для индукции иммунитета против рака, лечения и профилактики рака, а также для получения антител, селективно связывающих пептиды по изобретению. Описаны экзосома и выделенная антигенпрезентирующая клетка, презентирующие комплекс пептида по изобретению с молекулой HLA-A2, для индукции цитотоксических Т-клеток, способы индукции антигенпрезентирующей клетки и цитотоксической Т-клетки, а также способ повреждения раковых клеток, экспрессирующих FOXM1 и HLA-A2. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в лечении опухолей, характеризующихся повышенной экспрессией FOXM1. 13 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 пр., 1 ил., 1 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым пептидам, которые пригодны в качестве вакцин против типов рака, в высокой степени экспрессирующих вилкоголовый фактор с блоком M1 (FOXM1), таких как рак желчевыводящих путей, рак легких и рак поджелудочной железы, и к фармацевтическим средствам, включающим пептиды, для лечения и профилактики опухолей.
Известный уровень техники
Количество смертей от вариантов рака желчевыводящих путей (рака желчного пузыря и холангиокарциномы) в Японии растет и 16586 человек умерло от рака в 2005 г. В большинстве случаев рака желчевыводящих путей никаких субъективных симптомов на ранних стадиях не присутствует. По сравнению с типами рака, которые возникают внутри пищеварительного тракта, такими как рак желудка и рак ободочной кишки, точная визуализация и диагностическая визуализация рака желчевыводящих путей затруднена. Следовательно, раннее обнаружение рака желчевыводящих путей затруднено и часто рак уже прогрессировал и является неоперабельным при выявлении. Кроме хирургического вмешательства для лечения рака желчевыводящих путей проводят лучевую терапию и химиотерапию, но они не являются терапевтически эффективными и, таким образом, создание новых терапевтических методов является неотложной необходимостью.
Смертность от рака легких также увеличивается в Японии и 62063 человека умерли от рака в 2005 г. В настоящее время рак легких составляет 19,0% смертей от рака в Японии и он стал лидирующей причиной смерти от рака с 2000 г. Курение считается главной причиной возникновения рака легких. Кроме курения вдыхание асбеста или радона также рассматривается как причина рака легких. В качестве мер по предотвращению рака легких поощряется прекращение курения и осуществление медицинских осмотров. Однако, хотя она снижается, популяция курящих в Японии в 2005 г. все еще насчитывает приблизительно 30 миллионов. Более того, недавно было показано, что простой рентген грудной клетки и тестирование мокроты, широко применяемые при медицинских обследованиях, не эффективны для раннего выявления рака легких, и, следовательно, они не ведут к снижению смертности от рака. Учитывая представленное выше, предсказывается, что количество смертей от рака легких будет продолжать расти в будущем.
Симптомы рака легких включают кашель, мокроту с кровью, одышку и боль в груди, но в большинстве случаев на ранних стадиях симптомы отсутствуют. Когда появляются симптомы, во многих случаях рак уже прогрессировал. Следовательно, более половины больных являются неоперабельными при первичном обнаружении рака, и он рассматривается как один из неподатливых типов рака. Скорость восстановления после операции не настолько хороша как при других типах рака, и суммарный пятилетний коэффициент выживаемости после хирургического вмешательства мал и составляет только 50%. В последние годы пятилетний коэффициент выживаемости для ранних стадий рака легких повышается благодаря достижениям комплексного лечения с помощью лучевой терапии, химиотерапии и тому подобного с использованием в качестве главного лечения хирургической резекции; однако, улучшение терапевтических эффектов в случае прогрессировавшего рака легких недостаточно и создание новых терапевтических стратегий является неотложной необходимостью.
Количество смертей от рака поджелудочной железы также увеличивается в Японии и 22927 человека умерло от рака в 2005 г. В настоящее время рак поджелудочной железы составляет 7,0% смертей от рака в Японии и занимает пятое место после рака легких, рака желудка, рака ободочной кишки и рака печени. Не существует симптомов, специфичных для рака поджелудочной железы, и во многих случаях, когда появляются симптомы, рак уже прогрессировал. Даже в настоящее время при наличии достижений в диагностической визуализации 40% всех больных раком поджелудочной железы в Японии относятся к прогрессирующим случаям болезни с отдаленными метастазами, и многие больные, как обнаружено, обладают неоперабельным местно прогрессирующим раком. Следовательно, суммарный пятилетний коэффициент выживаемости больных составляет 5% или менее и прогноз после диагноза является очень плохим. Из-за трудности диагностики заболеваемость раком поджелудочной железы как причина смерти от рака постепенно повышается, особенно в промышленно развитых странах. Хотя в настоящее время осуществляется комплексное лечение с помощью лучевой терапии, химиотерапии и тому подобного с использованием в качестве основного лечения хирургической резекции, не существует решающего улучшения терапевтических эффектов, и создание новых терапевтических стратегий является неотложной необходимостью. Различные факторы, такие как привычки образа жизни, включая курение, ожирение, диету, употребление алкоголя и употребление кофе, а также хронический панкреатит, диабет, генетические факторы и тому подобное, как предполагается, связаны с причинами возникновения рака поджелудочной железы.
С другой стороны, последние разработки в молекулярной биологии и иммунологии опухолей показали, что цитотоксические (киллерные) Т-клетки и хелперные Т-клетки узнают пептиды, образованные при деградации белков, которые специфически и в высокой степени экспрессируются в раковых клетках и которые презентируются на поверхности раковых клеток или антигенпрезентирующих клеток с помощью молекул HLA, и вызывают иммунологическую реакцию с разрушением раковых клеток. Более того, многие опухолевые белки-антигены и производные от них пептиды, которые стимулируют такую иммунологическую реакцию для борьбы с раком, идентифицированы, и антигенспецифическая терапия опухолей применяется клинически.
Молекула класса I HLA экспрессируется на поверхности всех имеющих ядро клеток организма. Она связывается с пептидом, появляющимся в результате внутриклеточной деградации белков, продуцируемых в цитоплазме или ядре, и экспрессирует пептид на клеточной поверхности. На поверхности нормальной клетки с молекулами класса I HLA связаны пептиды, происходящие от нормальных аутологичных белков, и они не узнаются и не разрушаются Т-клетками иммунной системы. С другой стороны, в процессе превращения в рак раковые клетки иногда экспрессируют большое количество белков, которые почти не экспрессируются или незначительно экспрессируются в нормальных клетках. Когда молекулы класса I HLA связываются с пептидами, возникшими в результате внутриклеточной деградации белков, специфически и в высокой степени экспрессирующихся в раковых клетках, и затем экспрессируют пептиды на поверхности раковых клеток, Т-клетки-киллеры узнают и разрушают только раковые клетки. С помощью введения таких специфичных для рака антигенов или пептидов индивидууму раковые клетки могут быть разрушены, и рост раковой опухоли может быть подавлен без вреда для нормальных клеток. Это называется иммунотерапией рака с использованием канцероспецифичных антигенов. Молекулы класса II HLA экспрессируются главным образом на поверхности антигенпрезентирующих клеток. Молекулы связываются с пептидами, происходящими от канцероспецифичных антигенов, которые возникают в результате внутриклеточной деградации канцероспецифичных антигенов, включенных в антигенпрезентирующие клетки после поступления из внеклеточного окружения, и затем экспонируют пептиды на поверхности клеток. Хелперные Т-клетки, которые их узнают, активируются и индуцируют или усиливают иммунную реакцию против опухолей с помощью продукции различных цитокинов, которые активируют другие иммунокомпетентные клетки.
Соответственно, если разрабатывается иммунотерапия, которая направлена на антигены, специфически и в высокой степени экспрессирующиеся при типах рака, такая терапия может эффективно уничтожать только типы рака, не вызывая какого-либо вредного эффекта в нормальных аутологичных органах. Предполагается также, что терапия может быть полезна для любых больных с терминальной стадией рака, к которым не могут быть применены другие способы лечения. Кроме того, с помощью введения канцероспецифичного антигена и пептида в виде вакцины заранее индивидуумам с высоким риском развития рака развитие рака может быть предотвращено.
Авторы настоящего изобретения сначала провели широкий геномный анализ экспрессии генов на 27648 генах человека с использованием микроматриц кДНК для исследования экспрессионных профилей этих генов в 25 случаях рака внутрипеченочных желчных протоков и в различных нормальных органах, включая органы в эмбриональной стадии. В результате авторы настоящего изобретения раскрыли, что вилкоголовый фактор с блоком m1 (FOXM1) (GenBank No. поступления NM_202003) в высокой степени экспрессировался в тканях во многих случаях рака внутрипеченочных желчных протоков. Сходно с этим и в дополнение к раку внутрипеченочных желчных протоков FOXM1, как обнаружено, в высокой степени экспрессируется почти во всех случаях рака легких, рака мочевого пузыря и рака поджелудочной железы. Более того, высокая экспрессия FOXM1 была обнаружена в 40% или более случаев широкого спектра типов рака, таких как рак шейки матки, рак яичников, злокачественная лимфома, рак молочной железы, рак желудка, рак пищевода, рак простаты, гепатоцеллюлярная карцинома, рак ободочной кишки и хронический миелоидный лейкоз. Эти факты предполагают, что FOXM1 может служить в качестве канцероспецифического антигена при различных типах рака. FOXM1 экспрессируется в эмбриональной печени и в нормальных органах взрослого человека, он незначительно экспрессируется в органах пищеварительного тракта, таких как желудок, тонкий кишечник и толстый кишечник, тимусе и семенниках; однако, уровень экспрессии существенно ниже по сравнению с опухолевыми участками.
Примеры документов, указывающих на то, что FOXM1 относится к возникновению рака и регуляции клеточной пролиферации, включают непатентные документы 1-10. Однако ни один из этих документов не описывает использование FOXM1 в качестве вакцины против рака.
[Непатентный документ 1] Yoshida Y, Wang I-C, Yoder HM, Davidson NO, Costa RH.: The forkhead box Ml transcription factor contributes to the development and growth of mouse colorectal cancer. Gastroenterology 132: 1420-1431, 2007.
[Непатентный документ 2] Gusarcova GA, Wang I-C, Major ML, Kalinichenko VV, Ackerson T, Petrovi V, Costa RH.: A cell-penetrating ARF peptide inhibitor of FOXM1 in mouse hepatocellular carcinoma treatment. J. Clin. Invest. 117: 99-111, 2007.
[Непатентный документ 3] Radhakrishnan SK, Bhat UG, Hughes DE, Wang I-C, Costa RH, Gartel AL.: Identification of a chemical inhibitor of the oncogenic transcription factor forkhead box Ml. Cancer Res. 66: 9731-9735, 2006.
[Непатентный документ 4] Takahashi К, Furukawa С, Takano A, Ishikawa N, Kato T, Hamaya S, Suzuki C, Yasui W, Inai K, Sone S, Ito T, Nishimura H, Tsuchiya E, Nakamura Y, Daigo Y.: The neuromedin U-growth hormone secretagogue receptor 1b/neurotensin receptor 1 oncogenic signaling pathway as a therapeutic target for lung cancer. Cancer Res. 66: 9408-9419, 2006.
[Непатентный документ 5] Kim I-M, Ackerson Т, Ramakrishna S, Tretiakova M, Wang I-C, Kalin TV, Major ML, Gusarova GA, Yoder HM, Costa RH, Kalinichenko VV.: The forkhead box ml transcription factor stimulates the proliferation of tumor cells during development of lung cancer. Cancer Res. 66: 2153-2161, 2006.
[Непатентный документ 6] Wonsey DR, Folletie M.: Loss of the forkhead transcription factor FoxM1 causes centrosome amplification and mitotic catastrophe. Cancer Res. 65: 5181-5189, 2005.
[Непатентный документ 7] Obama K, Ura K, Li M, Katagiri T, Tsunoda T, Nomura A, Satoh S, Nakamura Y, Furukawa Y: Genome-wide analysis of gene expression in human intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology 41: 1339-1348, 2005.
[Непатентный документ 8] Laoukili J, Kooistra MRH, Bras A, Kauw J, Kerkhoven RM, Morrison A, Clevers H, Medema RH.: Foxm1 is required for execution of the mitotic programme and chromosome stability. Nature Cell Biol. 7: 126-136, 2005.
[Непатентный документ 9] Kalinichenko VV, Major M, Wang X, Petrovic V, Kuechle J, Yoder HM, Shin B, Datta A, Raychaudhuri P, Costa RH.: Foxm1b transcription factor is essential for development of hepatocellular carcinomas and is negatively regulated by the p19ARF tumor suppressor. Genes Dev. 18: 830-850, 2004.
[Непатентный документ 10] Wang X, Kiyokawa H, Dennewitz MB, Costa RH.: The forkhead box mlb transcription factor is essential for hepatocyte DNA replication and mitosis during mouse liver regeneration. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 16881-16886, 2002.
Раскрытие изобретения
[Задачи, решаемые изобретением]
Целью настоящего изобретения является разработка способов осуществления иммунотерапии, которая подавляет рост рака путем повышения противоракового иммунитета больных раком, в качестве нового терапевтического метода лечения метастазирующего или неподатливого типов рака, лечение которых с помощью хирургического вмешательства, химиотерапии и лучевой терапии затруднено, которые осуществляются в качестве терапевтических методов для рака желчевыводящих путей, рака легких, рака поджелудочной железы и тому подобного. Более конкретно, целью настоящего изобретения является идентификация пептидов, которые происходят от белков, в высокой степени и специфично экспрессируемых при типах рака, и могут индуцировать сильную иммунную реакцию против указанных выше типов рака без индукции неблагоприятных эффектов у больных раком, и к применению этих пептидов для иммунотерапии опухолей. Настоящее изобретение дает возможность применения иммунотерапии у приблизительно 30% японцев, больных указанными выше типами рака, путем идентификации пептидов, которые происходят от белка, в высокой степени и специфично экспрессируемого в указанных выше типах рака, и презентируются Т-клеткам-киллерам с помощью HLA-A2.
[Способы осуществления]
В настоящем изобретении авторы индуцировали специфичные для пептида FOXM1 Т-клетки-киллеры путем стимуляции in vitro CD8-позитивных Т-клеток-киллеров человека с помощью их совместного культивирования с дендритными клетками, происходящими от моноцитов периферической крови человека, пульсированными пептидами FOXM1 человека, которые обладают HLA-A2-связывающим мотивом. Будет или нет происходить индукция Т-клеток-киллеров, специфичных для каждого пептида FOXM1, проверяли с помощью определения γ-интерферона (IFN-γ), продуцируемого Т-клетками-киллерами, активированными в результате узнавания пептида, презентируемого с помощью HLA-A2, с использованием теста ELISPOT. В результате были идентифицированы новые пептиды FOXM1, которые являются потенциальными кандидатными антигенами-мишенями, применимыми для иммунотерапии. Более того, было установлено, что CTL, отвечающие на FOXM1, индуцированные с использованием указанных выше пептидов, обладают специфической цитотоксичностью против раковых клеток, экспрессирующих эндогенные молекулы FOXM1 и HLA-A2, и что CTL узнают клетки-мишени способом, ограниченным классом I HLA.
Более конкретно, в настоящем изобретении предлагается следующее:
[1] пептид (А) или (В) ниже:
(A) пептид, включающий любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:1-3;
(B) пептид, который включает любую аминокислотную последовательность из SEQ ID NO:1-3, где одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены и/или добавлены и где пептид проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки;
[2] пептид по [1], где вторая аминокислота с N-конца представляет собой лейцин или метионин;
[3] пептид по [1], где С-концевая аминокислота представляет собой валин или лейцин;
[4] средство для индукции иммунитета против рака, которое включает один или более пептидов по [1] в качестве активного ингредиента;
[5] средство для лечения и/или профилактики рака, которое включает один или более пептидов по [1] в качестве активного ингредиента;
[6] средство для индукции антигенпрезентирующей клетки, которое проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, где указанное средство включает один или более пептидов по [1] в качестве активного ингредиента;
[7] средство для индукции антигенпрезентирующей клетки, который проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, где указанное средство включает один или более полинуклеотидов, кодирующих пептид по [1], в качестве активного ингредиента;
[8] средство для индукции цитотоксической (киллерной) Т-клетки, где указанное средство включает один или более пептидов по [1] в качестве активного ингредиента;
[9] антитело против пептида по [1];
[10] цитотоксическая (киллерная) Т-клетка, хелперная Т-клетка или включающая их популяция иммуноцитов, которые индуцируются с использованием пептида по [1];
[11] антигенпрезентирующая клетка, которая презентирует комплекс, включающий пептид по [1] и антиген HLA;
[12] антигенпрезентирующая клетка по [11], которая индуцируется средством по [6] или [7];
[13] экзосома, которая презентирует комплекс, включающий пептид по [1] и антиген HLA;
[14] экзосома по [13], где антиген HLA представляет собой HLA-A2 (HLA-A*0201);
[15] способ индукции антигенпрезентирующей клетки, которая проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, который включает стадию контактирования антигенпрезентирующей клетки с пептидом по [1];
[16] способ индукции антигенпрезентирующей клетки, которая проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, который включает стадию введения полинуклеотида, кодирующего пептид по [1], в антигенпрезентирующую клетку;
[17] способ индукции цитотоксической (киллерной) Т-клетки, который включает стадию контактирования Т-клетки с пептидом по [1].
В настоящем изобретении также предлагается следующее:
[18] способ индукции иммунитета против рака, который включает стадию введения пептида по [1] индивидууму;
[19] способ лечения и/или профилактики рака, который включает стадию введения пептида по [1] индивидууму;
[20] применение пептида по [1] для получения средства для индукции иммунитета против рака;
[21] применение пептида по [1] для получения средства для лечения и/или профилактики рака;
[22] пептид по [1] для индукции иммунитета против рака;
[23] пептид по [1] для лечения и/или профилактики рака.
Краткое описание фигур
На фиг.1 представлены результаты теста ELISPOT и теста цитотоксичности. CD8-позитивные Т-клетки выделяли из периферической крови HLA-A2-позитивных здоровых индивидуумов и больных раком молочной железы. Т-клетки-киллеры, полученные в результате стимуляции происходящих из моноцитов дендритных клеток, пульсированных каждым пептидом FOXM1, проверяли с помощью метода ELISPOT для определения реагируют ли они специфически на пептиды FOXM1 и продуцируют ли IFN-γ. Более того, с помощью теста цитотоксичности проверяли, будут или нет экспрессирующие FOXM1 клетки специфически повреждаться ограниченным HLA-A2 образом. Клетки Т2-А2 использовали в качестве клеток-мишеней в методе ELISPOT. Клетки Т2-А2 представляют собой клеточную линию, полученную путем введения гена HLA-A2 в линию клеток Т2 мыши с дефицитом экспрессии гена ТАР. Благодаря дефициту ТАР в клетках Т2-А2 комплекс, образованный молекулой HLA-A2 и экзогенно добавленным пептидом, экспрессируется на клеточной поверхности только тогда, когда пептид обладает способностью связываться с молекулой HLA-A2. Для оценки цитотоксической активности использовали клетки Раnс-1, которые являются HLA-A2-позитивными и экспрессируют FOXM1, и клетки РК-8, которые являются HLA-A2-негативными и FOXM1-позитивными. В результате Т-клетки-киллеры от двух здоровых индивидуумов, индуцированные с использованием пептидов FOXM1 362-370, 373-382 и 640-649, продуцировали IFN-γ в результате узнавания пептидов 362-370, 373-382 и 640-649, связанных с HLA-А2 и экспрессируемых на клетках Т2-А2. Более того, Т-клетки-киллеры от больных раком молочной железы, которые были индуцированы с использованием указанных выше пептидов, проявляли сильную цитотоксическую активность против клеток panc-1, но не проявляли цитотоксической активности против клеток РК-8. Таким образом, индуцированные Т-клетки-киллеры, как обнаружено, проявляют сильную цитотоксическую активность против раковых клеточных линий в результате специфического узнавания FOXM1 ограниченным HLA-A2 образом. Из представленного выше выяснено, что пептиды FOXM1 362-370, 373-382 и 640-649 могут индуцировать специфические в отношении FOXM1 Т-клетки-киллеры человека ограниченным HLA-A2 образом и что такие Т-клетки-киллеры могут повреждать экспрессирующие FOXM1 раковые клетки.
Способ осуществления изобретения
Если не указано иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют такое же значение, что и обычно понимаемое специалистом в той области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение.
Пептиды по настоящему изобретению представляют собой эпитопы, ограниченные HLA-A2, который является аллелем HLA, часто обнаруживаемым в популяциях японцев и людей белой расы. Используя связывающее сродство к HLA-A2 в качестве индекса, отбирали кандидатные пептиды, связывающие HLA-A2, происходящие от FOXM1. Т-клетки-киллеры от двух здоровых индивидуумов, которые были индуцированы с использованием пептидов FOXM1 362-370, 373-382 и 640-649 продуцировали IFN-γ в результате узнавания пептидов FOXM1 362-370 (YLVPIQFPV (SEQ ID NO:1)), FOXM1-373-382 (SLVLQPSVKV (SEQ ID NO:2)) и FOXM1-640-649 (GLMDLSTTPL (SEQ ID NO:3)), связанных с HLA-A2 и экспрессируемых на клетках Т2-А2. Т-клетки-киллеры от больных раком молочной железы, которые были индуцированы с использованием указанных выше пептидов, проявляли сильную цитотоксическую активность против клеток раnс-1, но не проявляли цитотоксической активности против клеток РК-8. Таким образом, индуцированные Т-клетки-киллеры, как показано, специфически узнают FOXM1 ограниченным HLA-A2 образом и проявляют сильную цитотоксическую активность против раковых клеточных линий. Соответственно, обнаружено, что любой из пептидов FOXM1-362-370 (YLVPIQFPV (SEQ ID NO:1)), FOXM1-373-382 (SLVLQPSVKV (SEQ ID NO:2)) и FOXM1-640-649 (GLMDLSTTPL (SEQ ID NO:3)) может индуцировать специфические в отношении FOXM1 Т-клетки-киллеры человека ограниченным HLA-A2 образом и что такие Т-клетки-киллеры могут повреждать экспрессирующие FOXM1 раковые клетки. FOXM1, как показано, в высокой степени экспрессируется почти во всех случаях рака легких, рака мочевого пузыря и рака поджелудочной железы, сходно и в дополнение к раку внутрипеченочных желчных протоков. Более того, FOXM1 в высокой степени экспрессируется в 40% или более случаев широкого спектра типов рака, таких как рак шейки матки, рак яичников, злокачественная лимфома, рак молочной железы, рак желудка, рак пищевода, рак простаты, гепатоцеллюлярная карцинома, рак ободочной кишки и хронический миелоидный лейкоз. Эти факты показывают, что FOXM1 пригоден в качестве мишени для иммунотерапии различных типов рака.
(1) Пептиды по настоящему изобретению и включающие их средства для индукции иммунитета против рака
Пептид по настоящему изобретению является любым из от (А) до (D) ниже:
(A) пептид, содержащий любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3;
(B) пептид, который содержит любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3, где одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены и/или добавлены и где пептид проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки;
(C) пептид по (В), в котором вторая аминокислота с N-конца представляет собой лейцин или метионин; и
(D) пептид по (В), в котором С-концевая аминокислота представляет собой валин или лейцин.
В настоящем документе «пептид, который проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки», означает «пептид, обладающий индуцирующей Т-клетки активностью, который стимулирует Т-клетки-киллеры (цитотоксические Т-клетки/CTL)».
Пептид по настоящему изобретению является пептидом (эпитопным пептидом), содержащим менее 40 аминокислот, предпочтительно менее 20 аминокислот, более предпочтительно менее приблизительно 15 аминокислот, и включающим любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3 и проявляющим активность в виде индукции Т-клеток-киллеров. Альтернативно, пептиды по настоящему изобретению (эпитопные пептиды) могут включать пептид, содержащий любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3, где одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены и/или добавлены до тех пор, пока сохраняется способность индуцировать Т-клетки-киллеры. Количество замененных, удаленных, вставленных и/или добавленных остатков обычно составляет пять аминокислот или менее, предпочтительно четыре аминокислоты или менее, более предпочтительно три аминокислоты или менее, даже более предпочтительно одну аминокислоту или две аминокислоты.
Варианты пептидов (т.е. пептиды, содержащие аминокислотные последовательности, полученные в результате модификации исходных аминокислотных последовательностей путем замены, делеции, вставки и/или добавления одного, двух или нескольких аминокислотных остатков), как известно, сохраняют исходную биологическую активность (Mark DF et al., (1984) Proc Natl Acad Sci USA 81:5662-6; Zoller MJ and Smith M, (1982) Nucleic Acids Res 10:6487-500; Dalbadie-McFarland G et al. (1982) Proc Natl Acad Sci USA 79:6409-13). Аминокислотная модификация предпочтительно сохраняет свойства исходных аминокислотных боковых цепей. Примеры свойств аминокислотных боковых цепей представлены ниже: аминокислоты с гидрофобными боковыми цепями (A, I, L, M, F, Р, W, Y, V); аминокислоты с гидрофильными боковыми цепями (R, D, N, С, Е, Q, G, Н, K, S, Т); и боковые цепи, обладающие следующими функциональными группами или характеристиками в целом: алифатические боковые цепи (G, А, V, L, I, P); боковые цепи, содержащие гидроксильные группы (S, Т, Y); боковые цепи, содержащие атом серы (С, М); боковые цепи, содержащие карбоновые кислоты и амиды (D, N, Е, Q); боковые цепи, содержащие основания (R, K, Н); и боковые цепи, содержащие ароматические кольца (Н, F, Y, W). Буквы в скобках представляют собой однобуквенные коды аминокислот.
В предпочтительном варианте осуществления пептиды по настоящему изобретению (иммуногенные пептиды) представляют собой нонапептиды (9-членные) или декапептиды (10-членные).
Для получения пептидов с высоким связывающим сродством и активностью, индуцирующей Т-клетки-киллеры, аминокислотная последовательность пептида - части природного FOXM1 может быть модифицирована путем замены, делеции, вставки и/или добавления одной, двух или нескольких аминокислот. В настоящем документе термин «несколько» относится к пяти или менее, предпочтительно к трем или менее, более предпочтительно к двум или менее. Более того, так как известна упорядоченность пептидных последовательностей, которые обладают высоким сродством к антигенам HLA (Kubo RT, et al., (1994) J. Immunol., 152, 3913-24; Rammensee HG, et al., (1995) Immunogenetics. 41:178-228; Kondo A, et al. (1995) J. Immunol. 155:4307-12), пептиды по настоящему изобретению (эпитопные пептиды) могут быть модифицированы на основе упорядоченности для того, чтобы повысить их сродство к антигенам HLA. Например, пептиды с высоким связывающим сродством к HLA-A2 могут быть получены путем замены второй аминокислоты с N-конца на лейцин или метионин. Сходно, пептиды с высоким связывающим сродством к HLA-A2 могут быть также получены путем замены С-концевой аминокислоты на валин или лейцин.
Когда последовательность эпитопного пептида идентична части аминокислотной последовательности эндогенного или экзогенного белка, обладающего отличной функцией, могут вызываться побочные эффекты, такие как аутоиммунные нарушения или аллергические симптомы против конкретного вещества. Для того чтобы избежать таких побочных эффектов модифицированный эпитопный пептид не должен быть идентичным аминокислотным последовательностям известных белков. Для этой цели необходимо осуществить поиск гомологии с использованием доступных баз данных для подтверждения того, что не существует эндогенного или экзогенного белка с отличной функцией, который имеет 100% гомологию с модифицированным эпитопным пептидом. С помощью этой процедуры можно избежать рисков, обусловленных указанной выше модификацией аминокислотной последовательности для повышения связывающего сродства к антигенам HLA и/или повышения активности, индуцирующей Т-клетки-киллеры.
Хотя указанные выше пептиды, обладающие высоким связывающим сродством к антигенам HLA, как предполагается, являются высокоэффективными в качестве вакцин против рака, кандидатные пептиды, отобранные с использованием в качестве показателя высокое связывающее сродство, необходимо проверить, обладают ли они действительно активностью, индуцирующей Т-клетки-киллеры. Активность, индуцирующая Т-клетки-киллеры, может быть подтверждена с помощью: индукции антигенпрезентирующих клеток, обладающих антигеном МНС человека (например, В-лимфоцитов, макрофагов и дендритных клеток), и более конкретно индукции дендритных клеток, происходящих от мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека; стимуляции их интересующим пептидом; затем смешивания их с CD8-позитивными клетками; и измерения цитотоксической активности в отношении клеток-мишеней. В качестве реакционной системы могут быть использованы трансгенные животные, которые экспрессируют антиген HLA человека (как описано, например, в BenMohamed L, et al. (2000) Hum. Immunol. 61 (8): 764-79, относящихся к этому статьях, книгах и адресах связи). Например, клетки-мишени могут быть помечены радиоактивным изотопом 51Cr или тому подобным, и цитотоксическая активность может быть рассчитана по радиоактивности, высвобождаемой из клеток-мишеней. Альтернативно, клетки-мишени могут быть проверены с помощью: измерения IFN-γ, продуцируемого и секретируемого Т-клетками-киллерами в присутствии антигенпрезентирующих клеток, обладающих иммобилизованным пептидом; и визуализации зоны продукции IFN-γ в культуральной среде с использованием моноклонального антитела против IFN-γ.
Как показано в примерах, данные по тестированию активности пептидов, индуцирующей Т-клетки-киллеры, продемонстрировали, что пептиды, обладающие высоким связывающим сродством к антигену HLA, не обязательно обладают высокой индуцирующей активностью. Однако нонапептиды, содержащие любую из аминокислотных последовательностей FOXM1-362-370 (YLVPIQFPV (SEQ ID NO:1)), FOXM1-373-382 (SLVLQPSVKV (SEQ ID NO:2)) и FOXM1 640-649 (GLMDLSTTPL (SEQ ID NO:3)) проявили особенно высокую активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры.
Как описано выше, в настоящем изобретении предлагаются пептиды, проявляющие активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры, более конкретно, пептиды, содержащие любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3 и их варианты (т.е. аминокислотные последовательности, в которых одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены и/или добавлены). Предпочтительно, аминокислотные последовательности пептидов, содержащие девять аминокислот любой из SEQ ID NO:1-3, или их варианты не идентичны последовательностям других эндогенных белков. Особенно пептиды с высоким связывающим сродством к HLA-A2 могут быть получены путем замены второй аминокислоты с N-конца на лейцин или метионин и/или путем замены С-концевой аминокислоты на валин или лейцин.
Пептиды по настоящему изобретению могут включать модификации, такие как гликозилирование, окисление боковой цепи и фосфорилирование, до тех пор, пока пептиды не потеряют свою активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры. Другие модификации включают, например, D-аминокислоты и другие аминокислотные аналоги, которые могут быть использованы для повышения периода полужизни пептидов в сыворотке.
Методы получения и продукции пептидов по настоящему изобретению особенно не ограничены. Они могут представлять собой химически синтезированные пептиды или рекомбинантные пептиды, продуцируемые с помощью методов рекомбинации генов.
Химически синтезированные пептиды по настоящему изобретению могут быть синтезированы в соответствии с методами химического синтеза, такими как метод Fmoc (флуоренилметилоксикарбонильный метод) и метод t-Boc (трет-бутилоксикарбонильный метод). Пептиды по настоящему изобретению могут быть также синтезированы с использованием различных имеющихся в продаже пептидных синтезаторов.
Пептиды по настоящему изобретению могут быть получены в виде рекомбинантных белков с помощью получения ДНК, обладающих нуклеотидными последовательностями, кодирующими пептиды или их варианты или гомологи, и введения их в подходящую экспрессионную систему.
Используемые экспрессионные векторы могут быть предпочтительно любыми векторами, которые могут автономно дуплицироваться в клетках-хозяевах или могут быть включены в хромосому клеток-хозяев и содержат промотор в положении, подходящем для разрешения экспрессии гена, кодирующего пептид. Трансформированные клетки, обладающие геном, кодирующим пептид по настоящему изобретению, могут быть получены путем введения указанного выше экспрессионного вектора хозяину. Хозяин может представлять собой любое из бактерий, дрожжей, животных клеток и клеток насекомых, и экспрессионный вектор может быть введен хозяину с использованием известных способов в зависимости от хозяина.
В настоящем изобретении рекомбинантные пептиды могут быть выделены путем культивирования трансформированных клеток, полученных, как описано выше, продукции и накопления пептидов в культуре и получения пептидов по настоящему изобретению из культуры.
Когда трансформированной клеткой является прокариот, такой как Е.coli, или эукариот, такой как дрожжи, культуральная среда для этих микроорганизмов может быть либо природной, либо синтетической средой, до тех пор, пока она содержит источник углерода, источник азота, неорганические соединения и тому подобное, что может быть использовано микроорганизмами и позволяет эффективно культивировать трансформированную клетку. Условия культивирования могут быть условиями, традиционно используемыми для культивирования микроорганизмов. После культивирования пептиды по настоящему изобретению могут быть выделены из культуры трансформированных клеток и очищены с использованием общепринятых методов выделения и очистки пептидов.
Пептиды, содержащие аминокислотную последовательность, в которой одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены или добавлены в любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3, могут быть подходящим образом продуцированы или получены специалистом в данной области техники на основе информации о последовательности нуклеотидов в ДНК, кодирующей любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3. Конкретно, ген, который кодирует пептид, содержащий аминокислотную последовательность, в которой одна, две или несколько аминокислот заменены, удалены, вставлены и/или добавлены в любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3, и проявляющий активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры, может быть получен с помощью любых методов, известных специалистам в данной области техники, таких как химический синтез, методы генной инженерии и мутагенез. Например, пригоден метод сайт-направленного мутагенеза, который является одним из методов генной инженерии, так как с его помощью можно вводить конкретную мутацию в конкретное положение. Он может быть осуществлен в соответствии с методами, описанными в руководствах Molecular Cloning: A laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY., 1989 (обозначаемом в настоящем документе далее как Molecular Cloning, 2nd Ed.) и Current Protocols in Molecular Biology, Supplement 1-38, John Wiley & Sons (1987-1997) (обозначаемом в настоящем документе далее как Current Protocols in Molecular Biology) и т.д.
Описанные выше пептиды по настоящему изобретению могут индуцировать иммунитет против рака, как показано в примерах ниже. Следовательно, в настоящем изобретении предлагаются средства для индукции иммунитета против рака, включающие один или более пептидов по настоящему изобретению в качестве активных ингредиентов.
Индуцирующие иммунитет средства по настоящему изобретению могут быть получены в виде смешанного состава, объединяющего с два или более эпитопных пептида. Индуцирующие иммунитет средства, приготовленные путем объединения множественных типов пептидов, могут представлять собой коктейль или могут быть совместно связаны с использованием стандартных методов. Эпитопные пептиды, предназначенные для объединения, могут представлять собой пептиды, обладающие различными аминокислотными последовательностями, происходящими от одного и того же гена, или могут представлять собой пептиды, обладающие аминокислотными последовательностями, происходящими от разных генов. Когда вводят пептиды по настоящему изобретению, вводимые пептиды презентируются на антигенах HLA антигенпрезентирующих клеток с высокой плотностью, и затем индуцируются Т-клетки-киллеры, которые специфически взаимодействуют с комплексами, образованными между вводимыми пептидами и антигенами HLA. Альтернативно, путем контактирования дендритных клеток, отобранных у индивидуума, с пептидами по настоящему изобретению (или путем пульсирования дендритных клеток, отобранных у индивидуума, пептидами по настоящему изобретению) могут быть получены антигенпрезентирующие клетки, которые презентируют пептиды по настоящему изобретению на своей клеточной поверхности. С помощью введения этих антигенпрезентирующих клеток обратно индивидууму в организме индивидуума могут быть индуцированы Т-клетки-киллеры, и в результате может быть увеличен иммунный ответ на клетки-мишени, презентирующие пептиды по настоящему изобретению.
При использовании in vitro или in vivo, предпочтительно in vitro, средства для индукции иммунитета против рака по настоящему изобретению могут индуцировать Т-клетки-хелперы, Т-клетки-киллеры или популяции иммуноцитов, включающие эти клетки, тем самым обеспечивая иммунитет против рака.
(2) Средства по настоящему изобретению для лечения и/или профилактики рака (вакцины против рака)
В примерах показано, что пептиды по настоящему изобретению могут индуцировать in vivo Т-клетки-киллеры, специфичные в отношении раковых клеток. С другой стороны, в предшествующем изобретении было показано, что FOXM1 в высокой степени экспрессировался в большинстве случаев рака легких, холангиоцеллюлярной карциномы, рака мочевого пузыря, почечно-клеточной карциномы, рака простаты, хронического миелогенного лейкоза, злокачественной лимфомы, рака шейки матки, остеосаркомы, рака молочной железы, саркомы мягких тканей, рака ободочной кишки и тому подобное. Соответственно, индуцирующие иммунитет средства, содержащие один или более пептидов по настоящему изобретению, как ожидается, являются эффективными в качестве активного ингредиента как средства для лечения и/или профилактики рака. Это значит, что можно ожидать индукцию и активацию Т-клеток-киллеров, атакующих опухоль, в результате введения в организм пептидов по настоящему изобретению совместно с подходящим адъювантом или в результате пульсирования антигенпрезентирующих клеток, таких как дендритные клетки, пептидами и затем их введения в организм. Таким образом, в конечном итоге могут ожидаться противоопухолевые эффекты. Более того, ген, кодирующий пептид по настоящему изобретению, может быть введен в подходящий вектор. Антигенпрезентирующие клетки человека (дендритные клетки и т.д.) и бактерии, такие как BCG, Mycobacterium tuberculosis, которые трансформированы рекомбинантной ДНК или вирусами, такими как вирусы коровьей оспы, которые содержат ДНК, кодирующую пептид по настоящему изобретению, включенную в их геном, можно эффективно использовать в качестве живых вакцин для лечения и/или профилактики рака человека. Дозировки и методы введения вакцин против рака являются такими же, что и для обычных вакцин против оспы и вакцин BCG.
В настоящем изобретении термин «вакцина» (также называемая «иммуногенной композицией») относится к веществу, которое индуцирует противоопухолевый иммунитет или подавляет различные типы рака при инокуляции животному. По настоящему изобретению предполагается, что пептид, содержащий любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3, представляет собой ограниченный HLA-A2 эпитопный пептид, который может индуцировать сильный и специфичный иммунный ответ против клеток, презентирующих FOXM1. Соответственно, настоящее изобретение также включает способы индукции противоопухолевого иммунитета с помощью использования пептидов, содержащих любую из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3 или их варианты, которые включают замену, делецию, вставку и/или добавление одной, двух или нескольких аминокислот. В целом, противоопухолевый иммунитет включает следующие иммунные ответы:
(1) индукцию Т-клеток-киллеров против опухолей, содержащих клетки, экспрессирующие FOXM1,
(2) индукцию антител, которые узнают опухоли, содержащие клетки, экспрессирующие FOXM1, и
(3) индукцию продукции противоопухолевых цитокинов.
Когда конкретный пептид индуцирует любой из этих иммунных ответов при инокуляции животному, пептид определяется как обладающий эффектом, индуцирующим противоопухолевый иммунитет. Индукция пептидом противоопухолевого иммунитета может быть определена по обнаружению in vivo или in vitro ответа иммунной системы хозяина на пептид.
Например, хорошо известны методы определения индукции Т-клеток-киллеров. Чужеродное вещество, которое вторгается в живой организм, презентируется Т-клеткам и В-клеткам под действием антигенпрезентирующих клеток (АРС). Т-клетки, которые отвечают на антигены, презентируемые антигенпрезентирующими клетками специфическим для антигена образом, дифференцируются в Т-клетки-киллеры (также называемые цитотоксическими Т-клетками или CTL) путем стимуляции антигенами и последующей пролиферации. В настоящем документе этот процесс называется «активацией» Т-клеток. Индукция Т-клеток-киллеров специфическим пептидом может быть оценена по презентации пептида Т-клеткам с использованием пульсированных пептидом антигенпрезентирующих клеток и последующего определения индукции Т-клеток-киллеров. Более того, антигенпрезентирующие клетки обладают эффектом в отношении активации CD4+ Т-клеток, CD8+ Т-клеток, макрофагов, эозинофилов и NK-клеток. Так как CD4+ Т-клетки важны для противоопухолевого иммунитета, действие пептида, индуцирующее противоопухолевый иммунитет, может быть оценено при использовании в качестве показателя действия на активацию этих клеток.
Метод оценки эффекта индукции Т-клеток-киллеров, которые индуцируются с использованием в качестве антигенпрезентирующих клеток дендритных клеток (DC), хорошо известен в данной области техники. Среди антигенпрезентирующих клеток DC обладают наиболее сильным эффектом в плане индукции Т-клеток-киллеров. При этом методе первоначально тестируемый пептид вводят в контакт с DC и затем DC вводят в контакт с Т-клетками. В Т-клетках, контактировавших с DC, определяют Т-клетки, которые обладают цитотоксическим эффектом на клетки-мишени. Если Т-клетки проявляют цитотоксическую активность против клеток-мишеней, это означает, что тестируемый пептид обладает активностью, индуцирующей цитотоксические Т-клетки. Активность Т-клеток-киллеров против клеток-мишеней, таких как клетки опухолей, может быть определена, например, с использованием в качестве показателя лизиса клеток опухолей, меченных 51Cr. Альтернативно, степень повреждения опухолевых клеток может быть оценена с использованием в качестве показателя активности включения 3H-тимидина или секреции LDH (лактатдегидрогеназы).
Тестируемые пептиды, для которых этими методами подтверждена проявляемая активность в отношении индукции Т-клеток-киллеров, представляют собой пептиды, которые проявляют эффект активации DC и последующую активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры. Следовательно, пептиды, которые проявляют активность, индуцирующую Т-клетки-киллеры против опухолевых клеток, пригодны в качестве вакцин против типов рака, презентирующих FOXM1. Более того, антигенпрезентирующие клетки, которые приобрели способность (активность) индуцировать Т-клетки-киллеры против типов рака в результате контакта с пептидами, пригодны в качестве вакцин против типов рака. Кроме того, Т-клетки-киллеры, которые приобрели цитотоксичность в результате презентации пептидов антигенпрезентирующими клетками, также могут быть использованы в качестве вакцин против типов рака, презентирующих FOXM1. Методы лечения рака с использованием противоопухолевого иммунитета, вызываемого антигенпрезентирующими клетками и Т-клетками-киллерами, называются цитоиммунотерапией.
В целом, при использовании пептидов для цитоиммунотерапии эффективность индукции Т-клеток-киллеров может быть повышена путем объединения многих пептидов, имеющих различную структуру. Следовательно, при стимуляции DC фрагментами белка выгодно использовать смесь многих типов пептидных фрагментов.
Индукция противоопухолевого иммунитета пептидами может быть также оценена с помощью выявления индукции продукции антител против опухолей. Например, когда индуцируются антитела против пептидов путем иммунизации лабораторных животных пептидами, и они подавляют рост, пролиферацию и/или метастазирование опухолевых клеток, это свидетельствует о том, что пептиды индуцируют противоопухолевый иммунитет.
Противоопухолевый иммунитет может быть индуцирован путем введения вакцины по настоящему изобретению, и индукция противоопухолевого иммунитета дает возможность лечить и/или предотвращать типы рака. Эффекты лечения рака и/или профилактики развития рака могут включать ингибирование роста раковых клеток, регрессию раковых клеток и подавление развития раковых клеток. Снижение степени смертности индивидуумов от рака, снижение маркеров опухоли в крови и снижение определяемых симптомов, связанных с раком, также включаются в эффекты лечения и/или профилактики рака. Терапевтические и/или профилактические эффекты вакцины против рака являются предпочтительно статистически значимыми по сравнению с эффектами в контроле без введения вакцины. Например, наблюдаются эффекты предпочтительно с уровнем значимости 5% или менее. Для определения статистической значимости могут быть использованы статистические методы, такие как t-критерий Стьюдента, U-критерий Манна-Уитни, ANOVA или тому подобное.
В настоящем изобретении индивидуум представляет собой предпочтительно млекопитающее. Примеры млекопитающих включают людей, нечеловекообразных приматов, мышей, крыс, собак, кошек, лошадей и крупный рогатый скот, но не ограничиваются этим.
Пептиды по настоящему изобретению можно вводить индивидууму in vivo или ex vivo. Более того, для получения иммуногенной композиции для лечения и/или профилактики рака могут быть использованы иммуногенные пептиды по настоящему изобретению, которые представляют собой нонапептиды, выбранные из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:1-3 и их мутантные пептиды.
Более конкретно, в настоящем изобретении предлагаются фармацевтические средства для лечения опухоли или профилактики опухолевого роста, метастазирования и тому подобное, которые включают в качестве активного ингредиента один или более пептидов по настоящему изобретению. Пептиды по настоящему изобретению особенно пригодны для лечения опухолей, таких как рак поджелудочной железы, холангиоцеллюлярная карцинома, рак желудка, рак ободочной кишки, немелкоклеточный рак легких, рак семенников, рак шейки матки, остеосаркома и саркома мягких тканей.
Пептиды по настоящему изобретению можно вводить непосредственно индивидууму в качестве фармацевтических средств, приготовленных с помощью традиционных методов составления. Такие составы могут при необходимости содержать в дополнение к пептидам по настоящему изобретению фармацевтически приемлемые носители, наполнители и тому подобное. Фармацевтические средства по настоящему изобретению можно использовать для лечения и/или профилактики различных опухолей.
Более того, для установления эффективного клеточного иммунитета можно смешивать адъюванты с фармацевтическими средствами для лечения и/или профилактики опухолей, включающими один или более пептидов по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента. Средства можно вводить совместно с другими активными ингредиентами, такими как противоопухолевые средства. Подходящие составы включают также гранулы. Подходящие адъюванты описаны в литературе (Johnson AG. (1994) Clin. Microbiol. Rev., 7:277-89). Примеры адъювантов включают неполный адъювант Фрейнда, BCG, трегалозы димиколат (TDM), липополисахарид (LPS), адъювант квасцовой муки, адъювант диоксида кремния, фосфат алюминия, гидроксид алюминия и квасцы, но не ограничиваются этим. Кроме того, можно легко использовать липосомные составы, гранулярные составы, в которых лекарство связано с шариками, имеющими диаметр несколько микрометров, и составы, в которых липиды связаны с упомянутыми выше пептидами. Методами введения могут быть пероральное введение, внутрикожная инъекция, подкожная инъекция, внутривенная инъекция или тому подобное и могут включать системное введение и местное введение рядом с опухолью-мишенью.
Доза пептидов по настоящему изобретению может быть приведена в соответствие с подлежащим лечению заболеванием, возрастом и массой тела больного, методом введения и тому подобным. Доза обычно составляет от 0,001 мг до 1000 мг, предпочтительно от 0,01 мг до 100 мг и наиболее предпочтительно от 0,1 мг до 10 мг. Предпочтительно введение производят от одного раза в несколько дней до одного раза в несколько месяцев, но специалисты в данной области техники могут легко выбрать подходящую дозу и метод введения; выбор и оптимизация этих параметров полностью входят в объем традиционных методов. Форма составов не является особенно ограниченной, и они могут быть высушенными замораживанием или гранулированными путем добавления наполнителей, таких как сахар.
К фармацевтическим средствам по настоящему изобретению могут быть добавлены вспомогательные средства для повышения индуцирующей киллерную Т-клеточную активность, которые включают бактериальные компоненты бактерий BCG и тому подобного, включающие мурамиловый дипептид (MDP), ISCOM, описанный в Nature, vol.344, р873 (1990), QS-21 ряда сапонина, описанный в J. Immunol. vol.148, р1438 (1992), липосому и гидроксид алюминия. Более того, в качестве вспомогательных средств также могут быть использованы иммуностимуляторы, такие как лентинан, сизофиран и пицибанил. В качестве вспомогательных средств также могут быть использованы цитокины и им подобное, которые повышают рост и дифференцировку Т-клеток, такие как ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-12, ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНО, а также α-галактозилцерамид, который активирует NKT-клетки, и CpG и липополисахариды (LPS), которые активируют систему врожденного иммунитета путем связывания с Toll-подобными рецепторами, и тому подобное.
Композиции вакцины по настоящему изобретению содержат компонент, который примирует киллерные Т-клетки. В качестве веществ, которые примируют против вирусных антигенов in vivo, были идентифицированы липиды. Например, остатки пальмитиновой кислоты могут связываться с ε-аминогруппой и α-аминогруппой остатка лизина и затем присоединяться к иммуногенному пептиду по настоящему изобретению. Содержащие липиды пептиды можно прямо вводить путем их включения в мицеллу или частичку или их инкапсулирования в липосому или их эмульгирования в адъюванте. Другим примером примирования липидом является примирование липопротеидом Е.coli, таким как трипальмитоил-S-глицерилцистеинил-серил-серин (P3CSS), ковалентно связанным с подходящим пептидом (Deres K., et al., (1989) Nature 342:561-4).
Иммуногенные пептиды по настоящему изобретению могут быть экспрессированы с помощью вирусных векторов или бактериальных векторов. Примеры подходящих экспрессионных векторов включают авирулентные вирусы-хозяева, такие как вирус коровьей оспы и птичьей оспы. Например, в качестве вектора для экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей пептид, может быть использован вирус коровьей оспы. Путем введения рекомбинантного вируса коровьей оспы в клетки-хозяева осуществляется экспрессия иммуногенных пептидов, вызывающих иммунный ответ. Метод иммунизации с использованием векторов коровьей оспы описан, например, в патенте США No. 4722848. Можно также использовать бациллу Кальметта-Герина (BCG). Векторы BCG описаны в Stover СК, et al., (1991) Nature 31:456-60. В данной области техники известно множество других векторов, пригодных для терапевтического введения или иммунизации, включая аденовирусные векторы и аденоассоциированные вирусные векторы, ретровирусные векторы, векторы бациллы тифа (Salmonella typhi) и детоксифицированные токсиновые векторы сибирской язвы. См., например, Shata MT, et al., (2000) Mol. Med. Today 6:66-71; Shedlock DJ and Weiner DB., et al., (2000) J. Leukoc. Biol. 68:793-806; и Hipp JD, et al., (2000) In Vivo 14:571-85.
Киллерные Т-клетки можно эффективно индуцировать в организме больного путем добавления in vitro антигенного пептида к клеткам, выделенным из организма больного, или клеткам от другого индивидуума, имеющим некоторые общие аллели HLA (аллогенным клеткам) и презентирующим антиген, с последующим введением клеток больному в сосуды, местно в опухоль или тому подобное. Альтернативно, после индукции in vitro киллерных Т-клеток добавлением пептида к лимфоцитам периферической крови больного и их культивирования in vitro клетки можно вводить больному в сосуды, местно в опухоль или тому подобное. Такое лечение переносом клеток уже проводилось в качестве противораковой терапии и является хорошо известным для специалистов в данной области техники методом.
Тип рака в настоящем изобретении не является особо ограниченным, и конкретные примеры включают рак пищевода, рак молочной железы, рак щитовидной железы, рак прямой кишки, рак поджелудочной железы, злокачественную меланому (меланому), злокачественную лимфому, остеосаркому, феохромоцитому, рак головы и шеи, рак матки, рак яичника, рак мозга, хронический миелогенный лейкоз, острый миелогенный лейкоз, рак почки, рак простаты, рак легкого, рак желудка, рак печени, рак желчного пузыря, рак семенника, рак щитовидной железы, рак мочевого пузыря, саркому и т.д. Примеры рака, к которому применимо настоящее изобретение, включают рак желчного пути, рак легкого, рак поджелудочной железы и рак мочевого пузыря.
(3) Антитела по настоящему изобретению
Настоящее изобретение также относится к антителам, которые узнают упомянутый выше полноразмерный пептид по настоящему изобретению или его часть в качестве эпитопа (антигена), и относится к киллерным Т-клеткам, которые индуцируются путем стимуляции in vitro белками или пептидами. В целом, киллерные Т-клетки проявляют большую противоопухолевую активность по сравнению с антителами.
Более того, подобно пептидам по настоящему изобретению, антитела по настоящему изобретению пригодны в качестве профилактических и/или терапевтических средств против типов рака, экспрессирующих FOXM1, поскольку они могут ингибировать активность ракового антигена FOXM1. При практическом использовании пептиды или антитела по настоящему изобретению можно вводить в том виде, в котором они находятся, или путем инъекции с фармацевтически приемлемым носителем и/или разбавителем вместе с адъювантом, если это необходимо. Альтернативно, их можно вводить путем чрескожного всасывания через мембраны слизистой с помощью метода распыления или тому подобного. Конкретнее, в настоящем описании примером носителей является человеческий сывороточный альбумин; a PBS, дистиллированная вода и тому подобное служат примерами разбавителей.
Антителами по настоящему изобретению могут быть поликлональные антитела или моноклональные антитела и их можно получать с помощью методов, известных специалистам в данной области техники.
Например, поликлональные антитела могут быть получены путем иммунизации видов млекопитающих или птиц пептидом по настоящему изобретению в качестве антигена, отбора крови от видов млекопитающих или птиц и отделения и очистки антител из собранной крови. Например, можно иммунизировать млекопитающих, таких как мышь, хомячок, морская свинка, цыпленок, крыса, кролик, собака, коза, овца и корова, или виды птиц. Методы иммунизации известны специалистам в данной области техники, и антиген можно вводить, например, два или три раза с интервалом, например, от 7 до 30 дней. Доза может составлять, например, приблизительно от 0,05 мг до 2 мг антигена на введение. Путь введения не является особо ограниченным и может быть подходящим образом выбран из подкожного введения, внутрикожного введения, внутрибрюшинного введения, внутривенного введения, внутримышечного введения и тому подобного. Более того, антиген можно использовать после растворения в подходящем буфере, например, буфере, содержащем традиционный адъювант, такой как полный адъювант Фрейнда и гидроксид алюминия.
Иммунизированные виды млекопитающих или птиц выращивают в течение определенного периода времени, во время которого происходит увеличение титра антитела, после чего их можно дополнительно иммунизировать, например, от 100 мкг до 1000 мкг антигена. Кровь у иммунизированных видов млекопитающих или птиц можно отбирать на протяжении от одного до двух месяцев после последнего введения, и кровь может быть отделена и очищена традиционными методами, такими как центрифугирование, осаждение сульфатом аммония или полиэтиленгликолем, хроматография, такая как хроматография гельфильтрацией, ионообменная хроматография, аффинная хроматография и тому подобное, для получения поликлональных антител, которые узнают пептиды по настоящему изобретению, в виде поликлональной антисыворотки.
С другой стороны, могут быть получены моноклональные антитела путем получения гибридом. Например, гибридомы могут быть получены слиянием клеток, продуцирующих антитело, с клеточными линиями миеломы. Гибридомы, которые продуцируют моноклональные антитела по настоящему изобретению, могут быть получены методами слияния клеток, такими, как указанные ниже.
В качестве продуцирующих антитело клеток используют клетки селезенки, клетки лимфатического узла, В-лимфоциты и тому подобное от иммунизированных животных. В качестве антигенов используют пептиды по настоящему изобретению. В качестве иммунизируемых животных можно использовать таких животных, как мышь и крыса, а введение антигенов этим животным производят традиционными методами. Например, животных иммунизируют введением суспензии или эмульсии пептида по настоящему изобретению, являющегося антигеном, с адъювантом, таким как полный адъювант Фрейнда и неполный адъювант Фрейнда, животным несколько раз внутривенно, подкожно, внутрикожно, внутрибрюшинно или тому подобное. Продуцирующие антитело клетки, такие как клетки селезенки, получают от иммунизированных животных, и они могут быть слиты с миеломными клетками с помощью известных методов (G. Kohler et al., Nature, 256, 495 (1975)) с образованием гибридом.
В случае мышей примеры линий клеток миелом, используемых для слияния клеток, включают, например, линии P3X63Ag8, P3U1, Sp2/0 и т.д. Для слияния клеток используют стимулирующее слияние средство, такое как полиэтиленгликоль и вирус Сендай, а для селекции гибридом с помощью традиционного метода после слияния клеток используют среду гипоксантин/аминоптерин/тимидин (HAT). Гибридомы, полученные слиянием клеток, клонируют методом серийных разведении или тому подобное. При необходимости клеточные линии, продуцирующие моноклональные антитела, которые специфически узнают пептиды по настоящему изобретению, могут быть получены с использованием пептидов по настоящему изобретению для скрининга с помощью иммуноферментного метода.
В дополнение к указанным выше методам иммунизированные клетки можно модулировать стимулирующими лимфоцитами человека, такими как инфицированные вирусом ЕВ лимфоциты, in vitro с использованием пептидов по настоящему изобретению, клеток, экспрессирующих пептиды, или их лизатов. Человеческие антитела, которые связывают пептиды по настоящему изобретению, могут быть получены слиянием иммунизированных лимфоцитов с клетками костного мозга от человека, такими как U266 (патентная заявка Японии, публикация Kokai No. (JP-A) S63-17688 (нерассмотренная опубликованная японская патентная заявка)).
Для получения представляющих интерес моноклональных антител из полученных таким образом гибридом гибридомы можно культивировать с помощью традиционных методов культивирования или методов образования асцитов, и моноклональные антитела могут быть очищены из культурального супернатанта или асцитов. Очистка моноклональных антител из культуральных супернатантов или асцитов может быть осуществлена традиционными методами. Например, могут быть подходящим образом объединены и использованы фракционирование сульфатом аммония, гельфильтрация, ионообменная хроматография, аффинная хроматография и тому подобное.
Трансгенных животных, содержащих группу генов человеческих антител, можно иммунизировать с использованием пептидов по настоящему изобретению, экспрессирующих пептиды клеток или их лизатов. Продуцирующие антитело клетки можно собрать из иммунизированных трансгенных животных и слить с описанными выше миеломными клеточными линиями для получения гибридом. Затем из гибридом можно получить интересующие моноклональные антитела (WO 92/03918; WO 94/02602; WO 94/25585; WO 94/33735; WO 96/34096).
Более того, продуцирующим антитело иммунным клеткам, таким как иммунизированные лимфоциты, может быть придано бессмертие с помощью онкогенов, и их можно использовать для получения моноклональных антител.
Полученные таким образом моноклональные антитела можно также модулировать с помощью методов генной манипуляции (Borrbaeck and Larrick, (1990) Therapeutic Monoclonal Antibodies). Например, рекомбинантные антитела могут быть получены клонированием ДНК, кодирующей антитело из продуцирующих антитело клеток, таких как гибридомы и иммунизированные лимфоциты, ее вставкой в подходящий вектор и его введением в клетки-хозяева.
Антителами по настоящему изобретению могут быть фрагменты антител или модифицированные антитела, если они связывают пептиды по настоящему изобретению. Фрагментами антител могут быть Fab, F(ab')2, Fv или одноцепочечный Fv (scFv), где фрагменты Fv, берущие начало от Н и L цепей, соединены друг с другом с помощью походящего линкера (Huston et al., (1998) Proc Natl Acad Sci USA 85: 5879-83). Конкретнее, фрагменты антител могут быть получены обработкой антител ферментом, таким как папаин и пепсин (Со et al., (1994) J Immunol 152:2968-76; Better and Horwitz, (1989) Methods Enzymol 178: 476-96; Pluckthun and Skerra, (1989) Methods Emzymol 178:497-515; Lamoyi (1986) Methods Enzymol 121:652-63; Rousseaux et al., (1986) Methods Enzymol 121:663-9; Bird and Walker, (1991) Trends Biotech 9:132-7).
Антитела по настоящему изобретению включают модифицированные антитела, полученные путем присоединения антител к различным молекулам, таким как полиэтиленгликоль (ПЭГ). Антитела могут быть модифицированы традиционными методами химической модификации, известными в данной области техники.
Антитела по настоящему изобретению включают химерные антитела, содержащие вариабельную область, берущую начало от антитела, отличного от человеческого, и константную область из антитела человека, и гуманизированные антитела, содержащие область, определяющую комплементарность (CDR), берущую начало от антитела, отличного от человеческого, каркасную область (FR) из человеческого антитела и константную область из антитела человека. Такие антитела могут быть получены традиционными методами, известными в данной области техники. Гуманизированные антитела получают заменой области последовательности CDR антитела человека областью CDR грызуна, обладающей желаемой связывающей активностью (Verhoeyen ek al., (1988) Science 239:1534-6). Соответственно, по сравнению с химерными антителами гуманизированные антитела представляют собой антитела, в которых меньшая область человеческого антитела заменена соответствующей областью с происхождением, отличным от человеческого.
Может быть также получено полностью человеческое антитело, содержащее человеческую вариабельную область в дополнение к человеческим каркасным и константным областям. Например, в методе in vitro может быть проведен скрининг с помощью рекомбинантной библиотеки бактериофагов, в которой представлены фрагменты человеческих антител (Hoogenboom and Winter, (1992) J Mol Biol 227:381-8). Сходным образом человеческие антитела могут быть получены введением иммуноглобулиновых локусов человека трансгенным животным, у которых эндогенные иммуноглобулиновые гены были частично или полностью инактивированы (патенты США No. 6150584, 5545807, 5545806, 5569825, 5625126, 5633425 и 5661016).
Полученные как указано выше антитела могут быть очищены до гомогенности традиционными для данной области техники методами. Например, могут быть использованы общие методы выделения и очистки белков. Антитела могут быть выделены и очищены с помощью сочетания колоночной хроматографии, такой как аффинная хроматография, фильтрации, ультрафильтрации, высаливания, диализа, электрофореза в полиакриламидном геле с SDS, электрофокусирования и тому подобного; однако методы выделения и очистки этим не ограничиваются (Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow and David Lane, (1988) Cold Spring Harbor Laboratory). В качестве аффинных колонок могут быть использованы колонки протеина А и колонки протеина G. Примеры колонок протеина А включают HyperD, POROS, и сефарозу F.F (Pharmacia).
Примеры хроматографии, отличной от аффинной хроматографии, включают ионообменную хроматографию, гидрофобную хроматографию, гельфильтрацию, хроматографию с обращенной фазой, адсорбционную хроматографию и тому подобное (Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. et al.). Для хроматографии может быть также использована жидкостная хроматография, такая как ВЭЖХ и FPLC.
Сродство связывания антигена антителами по настоящему изобретению может быть измерено с помощью, например, измерения поглощения, твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), иммуноферментного анализа (EIA), радиоиммунологического анализа (RIA) и иммунофлуоресцентного анализа; однако, методы этим не ограничиваются. Для ELISA антитела по настоящему изобретению иммобилизуют на планшете и добавляют пептиды по настоящему изобретению, после чего добавляют образец, содержащий культуральный супернатант продуцирующих антитело клеток или очищенные антитела. Затем добавляют меченое второе антитело, которое узнает и выявляет антитело, сродство которого к связываемому антигену измеряют. После промывки планшета добавляют реагенты для выявления метки второго антитела и измеряют поглощение или тому подобное. Например, в качестве метки для второго антитела могут быть использованы ферменты, такие как щелочная фосфатаза, а в качестве реагентов для выявления могут быть использованы субстраты ферментов, такие как п-нитрофенилфосфат. Для оценки активности антител может быть также использован BIAcore (Pharmacia).
Антитела по настоящему изобретению могут определять пептиды по настоящему изобретению, содержащиеся в образцах. Конкретно, наличие пептидов по настоящему изобретению в раковых тканях может быть подтверждено, например, введением в контакт биоптатов раковых тканей с антителами по настоящему изобретению.
Перед использованием пептидов по настоящему изобретению в терапии для лечения и/или профилактики рака возможно предсказание перспективности действия для тестируемого индивидуума до начала лечения путем оценки экспрессии пептидов по настоящему изобретению в раковой ткани, подлежащей лечению с помощью антител по настоящему изобретению.
Более того, поскольку антитела по настоящему изобретению узнают пептидные фрагменты FOXM1, экспрессия которого усилена в различных раковых клетках, ожидается, что их использование применимо не только для диагностики, но и для лечения.
(4) Хелперные Т-клетки, киллерные Т-клетки или включающие их популяции иммуноцитов
Настоящее изобретение также относится к киллерным Т-клеткам и хелперным Т-клеткам, индуцированным путем стимуляции in vitro с помощью пептидов по настоящему изобретению, а также к популяциям иммуноцитов, включающим киллерные Т-клетки и хелперные Т-клетки. Например, Т-клетки с активированным ответом на опухоль индуцируются, когда лимфоциты периферической крови или инфильтрированные в опухоль лимфоциты стимулируют in vitro с помощью пептидов по настоящему изобретению, и эти активированные Т-клетки могут быть эффективно использованы для адоптивной иммунотерапии, при которой клетки вводят больному раком внутрь сосудов, местно в опухоль или тому подобное. Альтернативно, дендритные клетки, которые являются эффективными антигенпрезентирующими клетками, могут быть пульсированы пептидами по настоящему изобретению или генетически трансформированы для экспрессии пептидов, и противоопухолевый иммунный ответ может быть индуцирован стимуляцией Т-клеток in vivo или in vitro с использованием дендритных клеток.
Киллерные Т-клетки, хелперные Т-клетки или включающие их популяции иммуноцитов могут быть предпочтительно индуцированы стимуляцией in vivo или in vitro с помощью пептидов по настоящему изобретению и адъювантов. Примеры используемых в настоящем описании адъювантов включают минеральное масло, гидроксид алюминия, составы Mycobacterium tuberculosis, гемолитические составы стрептококка, составы Polyporaceae, другие адъюванты, факторы роста клеток и цитокины.
Опухоли могут быть подавлены, и рак может быть предотвращен и/или излечен путем трансфузии полученных таким образом хелперных Т-клеток, киллерных Т-клеток или включающих их популяций иммуноцитов больному раком внутрь сосудов, местно в опухоль или тому подобного.
Киллерные Т-клетки, хелперные Т-клетки или включающие их популяции иммуноцитов, которые способны подавлять опухоли, как описано выше, могут быть получены с помощью пептидов по настоящему изобретению. Таким образом, в настоящем изобретении предлагаются среды клеточных культур, содержащие пептиды по настоящему изобретению. Киллерные Т-клетки, хелперные Т-клетки или включающие их популяции иммуноцитов, способные подавлять опухоли, могут быть получены с помощью сред клеточных культур. Более того, в настоящем изобретении предлагается набор для клеточной культуры, включающий упомянутую выше среду для клеточной культуры и сосуд для клеточной культуры, для получения киллерных Т-клеток, хелперных Т-клеток или включающих их популяций иммуноцитов.
(5) Антигенпрезентирующие экзосомы
В настоящем изобретении дополнительно предлагается эндоцитозная везикула, называемая «экзосомой», которая презентирует на своей поверхности комплекс, образованный из пептида по настоящему изобретению и антигена HLA. Экзосомы могут быть получены, например, с помощью методов, подробно описанных в Японских переводах патентных заявок Японии, публикации Kokai No. (JP-A) H11-510507 (нерассмотренной публикации национальной фазы, соответствующей отличной от Японской международной публикации) и JP-A (Kohyo) 2000-512161. Предпочтительно экзосомы получают с использованием антигенпрезентирующих клеток, полученных от индивидуума, подлежащего лечению и/или профилактике. Экзосомы по настоящему изобретению можно инъецировать в качестве противораковой вакцины способом, сходным с введением пептидов по настоящему изобретению.
Антигенный тип HLA, используемый в настоящем изобретении, должен совпадать с антигенным типом HLA индивидуума, нуждающегося в лечении и/или профилактике. Например, антигенный тип HLA представляет собой HLA-A2 и, предпочтительно, HLA-A2 (HLA-A*0201). "HLA-A2" означает белок, тогда как (HLA-A*0201)" означает ген, соответствующий сегменту белка, из-за отсутствия в настоящее время терминологии для экспрессии сегментов белка.
(6) Методы индукции антигенпрезентирующих клеток и киллерных Т-клеток
В настоящем изобретении предлагаются способы индукции антигенпрезентирующих клеток с использованием одного или более пептидов по настоящему изобретению. Антигенпрезентирующие клетки могут быть индуцированы путем введения в контакт дендритных клеток, индуцированных из моноцитов периферической крови, с одним или более пептидами по настоящему изобретению для стимуляции дендритных клеток. Когда пептиды по настоящему изобретению вводят индивидууму, антигенпрезентирующие клетки, презентирующие пептиды по настоящему изобретению на своей поверхности, могут быть индуцированы в организме индивидуума. Альтернативно, может быть использован метод ex vivo, в котором антигенпрезентирующие клетки вводят в контакт с пептидами по настоящему изобретению (или пульсируют антигенпрезентирующие клетки пептидами по настоящему изобретению), после чего клетки вводят индивидууму в качестве вакцины. Например, введение ех vivo может включать стадии:
(1) сбора антигенпрезентирующих клеток от индивидуума; и
(2) введения в контакт антигенпрезентирующих клеток со стадии (1) с пептидом по настоящему изобретению (или пульсирования антигенпрезентирующих клеток со стадии (1) пептидом по настоящему изобретению).
Антигенпрезентирующие клетки, полученные на стадии (2), можно вводить индивидууму в качестве вакцины.
В настоящем изобретении также предлагаются способы индукции антигенпрезентирующих клеток, которые проявляют индуцирующую киллерные Т-клетки активность. Методы включают стадию трансфекции антигенпрезентирующих клеток in vitro геном, включающим полинуклеотид, кодирующий один или более пептидов по настоящему изобретению. Предназначенный для трансфекции ген может представлять собой ДНК или РНК. Для трансфекции могут быть соответствующим образом использованы различные методы, традиционно применяемые в данной области техники, такие как липофекция, электропорация и метод фосфата кальция, но этим методы не ограничиваются. Конкретнее, трансфекцию можно произвести, как описано в Reeves ME, et al., (1996) Cancer Res., 56:5672-7; Butterfield LH, et al., (1998) J. Immunol., 161:5607-13; Boczkowski D, et al., (1996) J Exp.Med., 184:465-72; и опубликованном Японском переводе WO 2000/509281. Когда гены трансфицируют в антигенпрезентирующие клетки, они транскрибируются и транслируются в клетках. Полученные белки затем подвергаются процессингу через пути МНС класса I и класса II и презентируются на поверхности антигенпрезентирующих клеток в виде частичных пептидов посредством пути презентации антигена.
В настоящем изобретении также предлагаются способы индукции киллерных Т-клеток с использованием одного или более пептидов по настоящему изобретению. Путем введения одного или более пептидов по настоящему изобретению индивидууму киллерные Т-клетки могут быть индуцированы в организме индивидуума, что тем самым усиливает иммунную систему против раковых клеток, презентирующих FOXM1 в опухолевых тканях. Альтернативно, активированные киллерные Т-клетки могут быть индуцированы путем введения в контакт антигенпрезентирующих клеток и CD8-позитивных клеток от индивидуума с одним или более пептидами по настоящему изобретению in vitro и путем введения в контакт мононуклеарных лейкоцитов периферической крови с антигенпрезентирующими клетками in vitro для стимуляции клеток. В терапевтических методах ex vivo иммунная система, которая направлена против раковых клеток, презентирующих FOXM1 в опухолевых тканях у индивидуума, может быть усилена возвращением активированных киллерных Т-клеток в организм индивидуума. Например, методы включают стадии:
(1) сбора антигенпрезентирующих клеток от индивидуума;
(2) введения в контакт антигенпрезентирующих клеток со стадии (1) с пептидом по настоящему изобретению (или пульсирования антигенпрезентирующих клеток со стадии (1) пептидом по настоящему изобретению);
(3) смешивания и совместного культивирования антигенпрезентирующих клеток со стадии (2) с CD8+ Т-клетками для индукции цитотоксических Т-клеток; и
(4) сбора CD8+ Т-клеток из совместной культуры стадии (3).
CD8+ Т-клетки с цитотоксической активностью, полученные на стадии (4), могут быть введены индивидууму в качестве вакцины.
В настоящем изобретении также предлагаются выделенные киллерные Т-клетки, индуцированные с использованием одного или более пептидов по настоящему изобретению. Предпочтительно киллерные Т-клетки, индуцированные методом по настоящему изобретению, получают от индивидуума, который подвергается лечению и/или профилактике. Клетки можно вводить в сочетании с другими средствами, содержащими антигенпрезентирующие клетки или экзосомы, презентирующие один или более пептидов по настоящему изобретению. Полученные киллерные Т-клетки специфичны в отношении клеток-мишеней, презентирующих тот же пептид, который использовался для индукции. Клетками-мишенями являются клетки, эндогенно экспрессирующие FOXM1, или клетки, трансфицированные геном FOXM1. Путем стимуляции пептидом по настоящему изобретению клетки, презентирующие пептид по настоящему изобретению на своей поверхности, такие как раковые клетки из рака поджелудочной железы, холангиоцеллюлярной карциномы, рака желудка, немелкоклеточного рака легкого, рака семенника, рака шейки матки, остеосаркомы и саркомы мягких тканей могут стать мишенью для атаки.
В настоящем изобретении также предлагаются антигенпрезентирующие клетки, презентирующие комплекс, образованный антигеном HLA и одним или более пептидами по настоящему изобретению. Антигенпрезентирующие клетки, экспрессирующие один или более пептидов по настоящему изобретению или нуклеотиды, кодирующие такие пептиды, предпочтительно получают от индивидуума, подвергаемого лечению и/или профилактике. Пептиды по настоящему изобретению, антигенпрезентирующие клетки, презентирующие пептиды, экзосомы или активированные киллерные Т-клетки можно вводить в качестве вакцины в сочетании с другими лекарствами.
Настоящее изобретение будет дополнительно описано со ссылкой на примеры ниже; однако их не следует рассматривать ограничивающие его.
Все ссылки на предшествующий уровень техники, цитированные в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылок.
Примеры
[Пример 1]
(1) Отбор пептидов FOXM1, которые проявляют сродство к HLA-А2
Аминокислотные последовательности FOXM1 человека анализировали с помощью системы BIMAS, и было отобрано 23 типа пептидов, обладающих предсказанным сродством связывания к HLA-А2, равным 20 или более.
Таблица 1 | ||
Положение пептида | Аминокислотная последовательность пептида | Показатель сродства связывания |
FOXM1 42-50 | NQAEASKEV (SEQ ID NO:4) | 29 |
FOXM1 241-249 | YMAMIQFAI (SEQ ID NO:5) | 201 |
FOXM1 256-264 | RMTLKDIYT (SEQ ID NO: 6) | 30 |
FOXM1 288-296 | NLSLHDMFV (SEQ ID NO:7) | 383 |
FOXM1 290-299 | SLHDMFVRET (SEQ ID NO:8) | 53 |
FOXM1 355-363 | LLPRVSSYL (SEQ ID NO:9) | 200 |
FOXM1 355-364 | LLPRVSSYLV (SEQ ID NO:10) | 118 |
FOXM1 362-370 | YLVPIQFPV (SEQ ID NO:1) | 1856 |
FOXM1 366-375 | IQFPVNQSLV (SEQ ID NO:11) | 44 |
FOXM1 373-382 | SLVLQPSVKV (SEQ ID NO:2) | 70 |
FOXM1 374-382 | LVLQPSVKV (SEQ ID NO:12) | 38 |
FOXM1 409-418 | LLAEEGIAPL (SEQ ID NO:13) | 342 |
FOXM1 429-438 | LLFGEGFSPL (SEQ ID NO:14) | 255 |
FOXM1 545-553 | LLFSEGPST (SEQ ID NO:15) | 47 |
FOXM1 571-579 | SQLSYSQEV (SEQ ID NO:16) | 26 |
FOXM1 616-625 | KVGGIDFSPV (SEQ ID NO:17) | 40 |
FOXM1 640-649 | GLMDLSTTPL (SEQ ID NO:3) | 324 |
FOXM1 660-669 | RLLSSEPLDL (SEQ ID NO: 18) | 79 |
FOXM1 661-669 | LLSSEPLDL (SEQ ID NO:19) | 36 |
FOXM1 702-711 | SLTEGLVLDT (SEQ ID NO:20) | 70 |
FOXM1 711-719 | TMNDSLSKI (SEQ ID NO:21) | 71 |
FOXM1 719-728 | ILLDISFPGL (SEQ ID NO:22) | 1047 |
FOXM1 720-728 | LLDISFPGL (SEQ ID NO:23) | 28 |
Подчеркнуты выявленные в настоящем изобретении ограниченные HLA-A2 эпитопы киллерных Т-клеток.
[Пример 2]
Индукция киллерных Т-клеток человека связываемыми HLA-A2 пептидами FOXM1
(1) Сбор крови
Образцы крови (50 мл) отбирали с информированного согласия у здоровых индивидуумов и позитивных по HLA-A2 больных раком молочной железы, лечившихся в госпитале медицинского факультета университета Kumamoto. После этого выделяли мононуклеарные клетки периферической крови с помощью метода центрифугирования в градиенте плотности фиколла-конрей в соответствии с ранее сообщавшимся методом (Nakatsura, Т. et a1., Eur. J. Immunol. 32, 826-836, 2002).
(2) Выделение CD8-позитивных клеток из мононуклеарных клеток периферической крови и индукция киллерных Т-клеток
Киллерные Т-клетки, специфичные в отношении пептида FOXM1, индуцировали из выделенных мононуклеарных клеток периферической крови. Киллерные Т-клетки индуцировали в соответствии с сообщением Komori H et al. (Komori H et al. Clinical Cancer Research 12: 2689-2697, 2006). Во-первых, CD8-позитивные клетки в мононуклеарных клетках периферической крови отделяли с помощью MACS. CD8-негативные клетки культивировали в течение четырех дней в присутствии GM-CSF (100 нг/мл) и ИЛ-4 (20 нг/мл) для дифференцировки в дендритные клетки. После этого добавляли ОК-432 (0/1 КЕ/мл) для созревания дендритных клеток. На седьмой день добавляли каждый из пептидов FOXM1 (10 мкМ), и затем дендритные клетки совместно культивировали с CD8-позитивными клетками в присутствии ИЛ-7 (10 нг/мл). Через два дня совместного культивирования с CD8-позитивными клетками добавляли ИЛ-2 (20 МЕ/мл). Стимуляцию антигеном с помощью дендритных клеток, полученных из аутологичных CDS-негативных клеток, повторяли три раза с однонедельным интервалом для индукции специфичных в отношении пептида киллерных Т-клеток.
(3) Оценка специфичной в отношении FOXM1 активности киллерных Т-клеток с помощью анализа ELISPOT
Анализ ELISPOT использовали для определения того, действительно ли и специфично ли индуцированные пептидами FOXM1 киллерные Т-клетки продуцируют IFN-γ в ответ на эти пептиды из FOXM1. Анализ ELISPOT проводили в соответствии с ранее описанным методом (Komori H et al. Clinical Cancer Research 12: 2689-2697, 2006). В результате специфичная для пептидов FOXM1 активация киллерных Т-клеток наблюдалась для киллерных Т-клеток, индуцированных пептидами FOXM1 362-370, 373-382 и 640-649 (фиг.1). На фиг.1 представлены репрезентативные результаты анализа индуцированных пептидом FOXM1 киллерных Т-клеток.
(4) Оценка цитотоксической активности киллерных Т-клеток с помощью теста цитотоксичности
Цитотоксическую активность индуцированных, специфичных в отношении пептидов FOXM1 киллерных Т-клеток оценивали с помощью теста цитотоксичности с использованием позитивной в отношении HLA-A2 и экспрессирующей FOXM1 линии клеток раnс-1 и негативной в отношении HLA-A2 и экспрессирующей FOXM1 линии клеток рака поджелудочной железы РК-8 в качестве стимулирующих клеток. Цитотоксическую активность киллерных Т-клеток оценивали с помощью теста цитотоксичности по анализу высвобождения хрома. Анализ высвобождения хрома проводили с помощью ранее описанного метода (Monji, M. et al., Clin. Cancer. Res. 10: 6047-6057, 2004). В результате ограниченная HLA-A2 и специфичная в отношении FOXM1 цитотоксическая активность наблюдалась у киллерных Т-клеток, индуцированных пептидами FOXM1 362-370, 373-382 и 640-649 (фиг.1).
Промышленная применимость
В настоящем изобретении были разработаны противораковые пептидные вакцины, которые направлены против рака у приблизительно 30% японских больных раком желчного пути, раком легкого, раком поджелудочной железы и тому подобным с высокой экспрессией FOXM1, путем выявления пептидов FOXM1, которые связываются с HLA-A2 и активируют повреждающие раковые клетки киллерные Т-клетки. Если в современной медицине удастся продемонстрировать эффективность пептидов FOXM1, презентируемых киллерным Т-клеткам с помощью HLA-A2, может быть подтверждена возможность клинического применения для европейцев. Путем идентификации пептидов, презентируемых киллерным Т-клеткам с помощью HLA-A2, который встречается с высокой частотой у европейцев, пептиды могут быть применимы не только для приблизительно 30% японских больных раком с высокой экспрессией FOXM1, но и для многих больных раком европейцев.
Claims (14)
1. Пептид для индукции цитотоксической Т-клетки при связывании с HLA-А2 согласно (А) или (В) ниже:
(A) пептид, состоящий из любой аминокислотной последовательности из SEQ ID NO:1-3;
(B) пептид, состоящий из любой аминокислотной последовательности из SEQ ID NO:1-3, в котором вторая аминокислота с N-конца замещена лейцином или метионином, и/или С-концевая аминокислота замещена валином или лейцином, и где пептид проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки.
(A) пептид, состоящий из любой аминокислотной последовательности из SEQ ID NO:1-3;
(B) пептид, состоящий из любой аминокислотной последовательности из SEQ ID NO:1-3, в котором вторая аминокислота с N-конца замещена лейцином или метионином, и/или С-концевая аминокислота замещена валином или лейцином, и где пептид проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки.
2. Композиция для индукции иммунитета против рака, экспрессирующего FOXM1 и HLA-A2, которая содержит эффективное количество одного или более пептидов по п.1 в качестве активного ингредиента.
3. Композиция для лечения и/или профилактики рака, экспрессирующего FOXM1 и HLA-A2, которая содержит эффективное количество одного или более пептидов по п.1 в качестве активного ингредиента.
4. Композиция для индукции антигенпрезентирующей клетки, которая экспрессирует HLA-A2 и проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, где указанная композиция содержит эффективное количество одного или более пептидов по п.1 в качестве активного ингредиента.
5. Композиция для индукции цитотоксической (киллерной) Т-клетки, где указанная композиция содержит эффективное количество одного или более пептидов по п.1 в качестве активного ингредиента, где указанная композиция применяется в присутствии антигенпрезентирующих клеток, экспрессирующих HLA-A2.
6. Применение пептида по п.1 для получения антитела, селективно связывающегося с пептидом по п.1.
7. Экзосома для индукции цитотоксических Т-клеток, специфичных в отношении раковых клеток, экспрессирующих FOXM1 и HLA-A2, которая презентирует комплекс, включающий пептид по п.1 и HLA-A2.
8. Способ индукции антигенпрезентирующей клетки, которая проявляет активность, индуцирующую цитотоксические (киллерные) Т-клетки, который включает стадию контактирования антигенпрезентирующей клетки, экспрессирующей HLA-A2, с пептидом по п.1.
9. Способ индукции цитотоксической (киллерной) Т-клетки, который включает стадию совместного культивирования антигенпрезентирующей клетки, подвергшейся контактированию с пептидом по п.1 и экспрессирующей HLA-A2, с CD8+Т-клетками.
10. Выделенная антигенпрезентирующая клетка для индукции цитотоксических Т-клеток, специфичных в отношении раковых клеток, экспрессирующих FOXM1 и HLA-A2, которая презентирует комплекс, включающий пептид по п.1 и HLA-A2.
11. Выделенная антигенпрезентирующая клетка по п.10, которая индуцируется способом по п.8.
12. Способ повреждения раковых клеток, экспрессирующих FOXM1 и HLA-A2, который включает стадию введения пептида по п.1 индивидууму.
13. Применение пептида по п.1 для получения средства для индукции иммунитета против рака, экспрессирующего FOXM1 и HLA-A2.
14. Применение пептида по п.1 для получения средства для лечения и/или профилактики рака, экспрессирующего FOXM1 и HLA-A2.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007-214001 | 2007-08-20 | ||
JP2007214001 | 2007-08-20 | ||
PCT/JP2008/064437 WO2009025196A1 (ja) | 2007-08-20 | 2008-08-12 | Foxm1ペプチドおよびこれを含む薬剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010110567A RU2010110567A (ru) | 2011-09-27 |
RU2487886C2 true RU2487886C2 (ru) | 2013-07-20 |
Family
ID=40378102
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010110567/10A RU2487886C2 (ru) | 2007-08-20 | 2008-08-12 | Пептид foxm1 и включающее его медицинское средство |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8569244B2 (ru) |
EP (3) | EP2189471B1 (ru) |
JP (2) | JP5555952B2 (ru) |
KR (1) | KR101543624B1 (ru) |
CN (3) | CN104774261B (ru) |
AU (1) | AU2008290049B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0815577A2 (ru) |
CA (1) | CA2696597C (ru) |
HK (1) | HK1244819A1 (ru) |
IL (1) | IL203899A (ru) |
MX (1) | MX2010002002A (ru) |
RU (1) | RU2487886C2 (ru) |
SG (1) | SG183717A1 (ru) |
TW (1) | TWI558411B (ru) |
WO (1) | WO2009025196A1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10702530B2 (en) | 2013-08-19 | 2020-07-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Screening method |
RU2737732C2 (ru) * | 2016-05-25 | 2020-12-02 | Ивокс Терапьютикс Лтд | Экзосомы, содержащие терапевтические полипептиды |
RU2738418C2 (ru) * | 2015-10-08 | 2020-12-14 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Пептид, полученный из foxm1, и включающая его вакцина |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1907581A2 (en) * | 2005-07-27 | 2008-04-09 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of diagnosing small cell lung cancer |
WO2009025196A1 (ja) | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Oncotherapy Science, Inc. | Foxm1ペプチドおよびこれを含む薬剤 |
TWI469791B (zh) | 2009-02-18 | 2015-01-21 | Oncotherapy Science Inc | Foxm1胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
KR20140138900A (ko) | 2012-03-09 | 2014-12-04 | 온코세라피 사이언스 가부시키가이샤 | 펩티드를 포함한 의약 조성물 |
US20150308094A1 (en) * | 2014-02-21 | 2015-10-29 | Thermaco, Inc. | System and control for grease removal |
WO2016122738A1 (en) | 2015-01-31 | 2016-08-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for t cell delivery of therapeutic molecules |
CN110049774A (zh) | 2016-10-07 | 2019-07-23 | 恩特罗姆公司 | 肿瘤相关抗原表位的小型生物群序列变体 |
EP3522916A2 (en) | 2016-10-07 | 2019-08-14 | Enterome S.A. | Immunogenic compounds for cancer therapy |
EP3522915A2 (en) | 2016-10-07 | 2019-08-14 | Enterome S.A. | Immunogenic compounds for cancer therapy |
CA3071642A1 (en) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | Idp Discovery Pharma, S.L. | Anticancer peptides |
JP7232825B2 (ja) * | 2017-10-09 | 2023-03-03 | エンテローム エスエー | 腫瘍関連抗原エピトープの微生物叢(microbiota)配列変異体 |
CN108440671B (zh) * | 2018-03-05 | 2020-03-06 | 长沙新生康源生物医药有限公司 | 一种来源于foxm1蛋白的抗肿瘤多肽 |
CN108273062A (zh) * | 2018-03-29 | 2018-07-13 | 浙江大学 | Foxm1抑制剂在肝内胆管细胞癌治疗中的作用 |
EP3773689B1 (en) * | 2018-04-11 | 2022-11-09 | Enterome S.A. | Antigenic peptides for prevention and treatment of cancer |
JPWO2020091052A1 (ja) | 2018-11-02 | 2021-10-07 | 国立大学法人大阪大学 | 関節炎治療剤 |
CN112500457B (zh) * | 2020-11-02 | 2022-06-17 | 长沙新生康源生物医药有限公司 | 一种双重靶向foxm1/cdk1的抗肿瘤多肽 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5861278A (en) * | 1996-11-01 | 1999-01-19 | Genetics Institute, Inc. | HNF3δ compositions |
WO2004100977A1 (en) * | 2003-03-25 | 2004-11-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Inhibition of tumor cell proliferation by foxm1b inhibitors |
Family Cites Families (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
JPS60217905A (ja) | 1984-04-13 | 1985-10-31 | のむら産業株式会社 | 自動包装機 |
EP0239102A3 (en) | 1986-03-28 | 1989-07-12 | Tsuji, Kimiyoshi | Process for the formation of human-human hybridoma |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
WO1992003918A1 (en) | 1990-08-29 | 1992-03-19 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
NZ255101A (en) | 1992-07-24 | 1997-08-22 | Cell Genesys Inc | A yeast artificial chromosome (yac) vector containing an hprt minigene expressible in murine stem cells and genetically modified rodent therefor |
EP0754225A4 (en) | 1993-04-26 | 2001-01-31 | Genpharm Int | HETEROLOGIC ANTIBODY-PRODUCING TRANSGENIC NON-HUMAN ANIMALS |
EP1978033A3 (en) | 1995-04-27 | 2008-12-24 | Amgen Fremont Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
CA2219486A1 (en) | 1995-04-28 | 1996-10-31 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
US20030198642A1 (en) * | 1995-08-03 | 2003-10-23 | Johannes J. Geuze | Cell derived antigen presenting vesicles |
US5853719A (en) | 1996-04-30 | 1998-12-29 | Duke University | Methods for treating cancers and pathogen infections using antigen-presenting cells loaded with RNA |
EP0846761A1 (en) * | 1996-12-09 | 1998-06-10 | Introgene B.V. | A novel transcription factor expressed in cycling cells, nucleic acid molecules encoding said transcription factor and its promoter region and uses thereof |
FR2766205B1 (fr) | 1997-07-16 | 2002-08-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Nouveau procede de sensibilisation de cellules presentatrices d'antigene et nouveaux moyens pour la mise en oeuvre du procede |
US6747137B1 (en) * | 1998-02-13 | 2004-06-08 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences relating to Candida albicans for diagnostics and therapeutics |
US20030235557A1 (en) * | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
WO2002092013A2 (en) | 2001-05-17 | 2002-11-21 | Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Methods for treating liver disease and liver damage with growth hormone and foxm1b |
AU2002305858B2 (en) * | 2001-06-04 | 2007-08-23 | Basf Plant Science Gmbh | Sugar and lipid metabolism regulators in plants II |
US20040142325A1 (en) * | 2001-09-14 | 2004-07-22 | Liat Mintz | Methods and systems for annotating biomolecular sequences |
CA2469274A1 (en) * | 2001-12-10 | 2003-06-19 | Kyogo Itoh | Tumor antigens |
US20040109844A1 (en) | 2002-08-28 | 2004-06-10 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Methods of treating age-related defects and diseases |
DK1548032T3 (da) | 2002-09-12 | 2009-08-17 | Oncotherapy Science Inc | KDR-peptider og vacciner indeholdende disse |
US20050260639A1 (en) | 2002-09-30 | 2005-11-24 | Oncotherapy Science, Inc. | Method for diagnosing pancreatic cancer |
US20060024692A1 (en) | 2002-09-30 | 2006-02-02 | Oncotherapy Science, Inc. | Method for diagnosing non-small cell lung cancers |
CA2500472A1 (en) | 2002-09-30 | 2004-04-15 | Oncotherapy Science, Inc. | Genes and polypeptides relating to human pancreatic cancers |
TW200413725A (en) | 2002-09-30 | 2004-08-01 | Oncotherapy Science Inc | Method for diagnosing non-small cell lung cancers |
ATE402956T1 (de) * | 2002-10-02 | 2008-08-15 | Hoffmann La Roche | Neue, mhc klasse ii assoziierte peptide |
JP4579246B2 (ja) | 2003-09-24 | 2010-11-10 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 乳癌を診断する方法 |
JP4046067B2 (ja) * | 2003-11-04 | 2008-02-13 | ソニー株式会社 | 固体撮像素子の製造方法 |
EP1697399B1 (en) * | 2003-12-12 | 2016-11-23 | GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as repr. by THE SECR. OF THE DEPT. OF HEALTH AND HUMAN SERVICES AND HIS SUCCESSORS | A human cytotoxic t-lymphocyte epitope and its agonist epitope from the non-variable number of tandem repeat sequence of muc-1 |
EP1747284A4 (en) * | 2004-02-06 | 2009-03-11 | Wyeth Corp | DIAGNOSTICS AND THERAPEUTICS OF CANCER |
JP4938451B2 (ja) * | 2004-03-23 | 2012-05-23 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 非小細胞肺癌の診断のための方法 |
JP2007530921A (ja) | 2004-03-24 | 2007-11-01 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 非小細胞肺癌に対する腫瘍マーカーおよび治療標的としてのadam8 |
US20090208517A1 (en) * | 2004-08-19 | 2009-08-20 | Bernhard Moser | Preparation Of Antigen-Presenting Human Gamma-Delta T Cells And Use In Immunotherapy |
JP2006141208A (ja) * | 2004-11-16 | 2006-06-08 | Univ Of Tokushima | 多発性骨髄腫、白血病、悪性リンパ腫、肺癌等の免疫療法剤 |
EP1856278A2 (en) | 2005-02-10 | 2007-11-21 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of diagnosing bladder cancer |
EP2295602B1 (en) | 2005-07-27 | 2012-07-11 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of prognosing cancers |
EP1907581A2 (en) | 2005-07-27 | 2008-04-09 | Oncotherapy Science, Inc. | Method of diagnosing small cell lung cancer |
EP1806413A1 (en) | 2006-01-06 | 2007-07-11 | Oligene GmbH | An in-vitro-method and means for determination of different tumor types and predicting success of surgical procedures in ovarian cancer |
US20090311685A1 (en) | 2006-04-20 | 2009-12-17 | Oncotherapy Science, Inc | NMU-GHSR1b/NTSR1 oncogenic signaling pathway as a therapeutic target for lung cancer |
PL2186889T3 (pl) | 2007-08-20 | 2015-09-30 | Oncotherapy Science Inc | Peptyd CDCA1 i środek farmaceutyczny go zawierający |
WO2009025196A1 (ja) | 2007-08-20 | 2009-02-26 | Oncotherapy Science, Inc. | Foxm1ペプチドおよびこれを含む薬剤 |
TWI469791B (zh) | 2009-02-18 | 2015-01-21 | Oncotherapy Science Inc | Foxm1胜肽以及含此胜肽之疫苗 |
-
2008
- 2008-08-12 WO PCT/JP2008/064437 patent/WO2009025196A1/ja active Application Filing
- 2008-08-12 EP EP08827699.3A patent/EP2189471B1/en active Active
- 2008-08-12 BR BRPI0815577-1A2A patent/BRPI0815577A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-08-12 RU RU2010110567/10A patent/RU2487886C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-08-12 SG SG2012059549A patent/SG183717A1/en unknown
- 2008-08-12 CN CN201510127580.5A patent/CN104774261B/zh active Active
- 2008-08-12 CA CA2696597A patent/CA2696597C/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-08-12 EP EP21215908.1A patent/EP4032899A1/en not_active Withdrawn
- 2008-08-12 CN CN200880112387.2A patent/CN101835792B/zh active Active
- 2008-08-12 EP EP17181139.1A patent/EP3263585B1/en active Active
- 2008-08-12 AU AU2008290049A patent/AU2008290049B2/en not_active Ceased
- 2008-08-12 MX MX2010002002A patent/MX2010002002A/es active IP Right Grant
- 2008-08-12 CN CN201810072215.2A patent/CN108117584B/zh active Active
- 2008-08-12 US US12/673,432 patent/US8569244B2/en active Active
- 2008-08-12 JP JP2009529008A patent/JP5555952B2/ja active Active
- 2008-08-12 KR KR1020107005389A patent/KR101543624B1/ko active IP Right Grant
- 2008-08-13 TW TW097130788A patent/TWI558411B/zh active
-
2010
- 2010-02-11 IL IL203899A patent/IL203899A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-07-20 HK HK18104014.4A patent/HK1244819A1/zh unknown
-
2013
- 2013-09-25 US US14/036,879 patent/US9073968B2/en active Active
-
2014
- 2014-05-19 JP JP2014103000A patent/JP5909767B2/ja active Active
-
2015
- 2015-06-03 US US14/729,752 patent/US9415096B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5861278A (en) * | 1996-11-01 | 1999-01-19 | Genetics Institute, Inc. | HNF3δ compositions |
WO2004100977A1 (en) * | 2003-03-25 | 2004-11-25 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Inhibition of tumor cell proliferation by foxm1b inhibitors |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
ANDRE F. et al. Exosomes as potent cell-free peptide-based vaccine. I. Dendritic cell-derived exosomes transfer functional MHC class I/peptide complexes to dendritic cells. J. Immunol. (2004); 172(4):2126-36. * |
KIM I.-M. et al. The Forkhead Box m1 Transcription Factor Stimulates the Proliferation of Tumor Cells during Development of Lung Cancer. Cancer Res. 2006; 66:2153-2161. Published online February 17, 2006. * |
KOMORI H. et al. Identification of HLA-A2- or HLA-A24-Restricted CTL Epitopes Possibly Useful for Glypican-3-Specific Immunotherapy of Hepatocellular Carcinoma Cancer Res. (2006); 12: 2689-2697. * |
LAOUKILI J. et al. FoxM1: At the crossroads of ageing and cancer. Biochimica et Biophysica Acta (2007, available online 30 August 2006) 1775: 92-102. * |
LAOUKILI J. et al. FoxM1: At the crossroads of ageing and cancer. Biochimica et Biophysica Acta (2007, available online 30 August 2006) 1775: 92-102. KIM I.-M. et al. The Forkhead Box m1 Transcription Factor Stimulates the Proliferation of Tumor Cells during Development of Lung Cancer. Cancer Res. 2006; 66:2153-2161. Published online February 17, 2006. KOMORI H. et al. Identification of HLA-A2- or HLA-A24-Restricted CTL Epitopes Possibly Useful for Glypican-3-Specific Immunotherapy of Hepatocellular Carcinoma Cancer Res. (2006); 12: 2689-2697. ANDRE F. et al. Exosomes as potent cell-free peptide-based vaccine. I. Dendritic cell-derived exosomes transfer functional MHC class I/peptide complexes to dendritic cells. J. Immunol. (2004); 172(4):2126-36. АБЕЛЕВ Г.И. Иммунология опухолей человека Природа (2000), 2:20-25. * |
АБЕЛЕВ Г.И. Иммунология опухолей человека Природа (2000), 2:20-25. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10702530B2 (en) | 2013-08-19 | 2020-07-07 | Hoffmann-La Roche Inc. | Screening method |
RU2738418C2 (ru) * | 2015-10-08 | 2020-12-14 | Онкотерапи Сайенс, Инк. | Пептид, полученный из foxm1, и включающая его вакцина |
US11242365B2 (en) | 2015-10-08 | 2022-02-08 | Oncotherapy Science, Inc. | FOXM1-derived peptide, and vaccine including same |
RU2737732C2 (ru) * | 2016-05-25 | 2020-12-02 | Ивокс Терапьютикс Лтд | Экзосомы, содержащие терапевтические полипептиды |
US11534499B2 (en) | 2016-05-25 | 2022-12-27 | Evox Therapeutics Ltd. | Exosomes comprising therapeutic polypeptides |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2487886C2 (ru) | Пептид foxm1 и включающее его медицинское средство | |
RU2486195C2 (ru) | Пептид cdca1 и включающее его фармацевтическое средство | |
RU2483078C2 (ru) | Cdh3-пептид и включающее его лекарственное средство |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170813 |