RU2469045C2 - Антитела, нейтрализующие цитомегаловирус человека, и их применение - Google Patents
Антитела, нейтрализующие цитомегаловирус человека, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2469045C2 RU2469045C2 RU2009129403/10A RU2009129403A RU2469045C2 RU 2469045 C2 RU2469045 C2 RU 2469045C2 RU 2009129403/10 A RU2009129403/10 A RU 2009129403/10A RU 2009129403 A RU2009129403 A RU 2009129403A RU 2469045 C2 RU2469045 C2 RU 2469045C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- hcmv
- antibodies
- present
- Prior art date
Links
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 title claims abstract description 60
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 59
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 59
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 26
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 30
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 30
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 29
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 29
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 claims description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 20
- 101100315698 Human cytomegalovirus (strain Merlin) UL131A gene Proteins 0.000 claims description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 5
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims 6
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims 6
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 claims 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 43
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 38
- 101150088904 UL130 gene Proteins 0.000 description 22
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- -1 for example Substances 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 5
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 101150082158 UL128 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 3
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 2
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 101150049363 UL131A gene Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 150000002314 glycerols Polymers 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229940036185 synagis Drugs 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N Cidofovir Chemical compound NC=1C=CN(C[C@@H](CO)OCP(O)(O)=O)C(=O)N=1 VWFCHDSQECPREK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OJLOPKGSLYJEMD-LNQMSSPSSA-N Cyotec Chemical compound CCCCC(C)(O)CC=C[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(=O)OC OJLOPKGSLYJEMD-LNQMSSPSSA-N 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Polymers OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Chemical class CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N Sorbitol Polymers OCC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-NQAPHZHOSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001558 benzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005101 cell tropism Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960000724 cidofovir Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000599 controlled substance Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940099378 cytotec Drugs 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960003297 gemtuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002303 glucose derivatives Polymers 0.000 description 1
- 150000002304 glucoses Polymers 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Polymers C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 150000002690 malonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N n,n-dichlorotriazin-4-amine Chemical compound ClN(Cl)C1=CC=NN=N1 ZTLGJPIZUOVDMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960000470 omalizumab Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 108010052044 polyclonal B cell activator Proteins 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940116176 remicade Drugs 0.000 description 1
- 229940107685 reopro Drugs 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- JJICLMJFIKGAAU-UHFFFAOYSA-M sodium;2-amino-9-(1,3-dihydroxypropan-2-yloxymethyl)purin-6-olate Chemical compound [Na+].NC1=NC([O-])=C2N=CN(COC(CO)CO)C2=N1 JJICLMJFIKGAAU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/42—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum viral
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
- C07K16/088—Varicella-zoster virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
- C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
- C07K16/089—Cytomegalovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложено антитело, нейтрализующее инфицирование человеческим цитомегаловирусом (hCMV) эндотелиальных клеток, характеризующееся наличием трех CDR тяжелой цепи и трех CDR легкой цепи. Описаны: нуклеиновая кислота для экспрессии антитела, содержащая кодирующую НК, и клетка на основе такой экспрессирующей НК. Раскрыты: композиция для профилактики и лечения hCMV на основе антитела и применение антитела или НК для создания лекарственного средства для лечения hCMV. Изобретение обеспечивает антитела, концентрация которых, необходимая для 50% нейтрализации hCMV в эндотелиальных клетках, составляет 0,003 мкг/мл или менее, что может найти дальнейшее применение в способах скрининга, а также при диагностике и лечении заболеваний, опосредованных hCMV. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 3 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к антителам, обладающим специфичностью по отношению к человеческому цитомегаловирусу, приемлемым моноклональным антителам, обладающим такой специфичностью, и иммортализованным В-клеткам, которые продуцируют такие моноклональные антитела. Настоящее изобретение также относится к эпитопам, с которыми связываются такие антитела, к применению антител и эпитопов в способах скрининга, а также в диагностике, профилактике и лечении заболевания.
Уровень техники
Человеческий цитомегаловирус (hCMV) является широко распространенным патогеном, который может вызывать тяжелую патологию у взрослых с пониженным иммунитетом и после инфицирования эмбриона, и непосредственно связан с хроническими заболеваниями, такими как атеросклероз. hCMV инфицирует множество типов клеток, включая фибробласты, эндотелиальные, эпителиальные и гемопоэтические клетки [1]. Распространенные аттенуированные in vitro штаммы hCMV, которые были разработаны в качестве кандидатных вакцин, утратили тропизм по отношению к эндотелиальным клеткам, сохраняя при этом способность к инфицированию фибробластов [2]. Недавно было показано, что два вирусных гликопротеиновых комплекса контролируют клеточный тропизм hCMV. Для инфицирования фибробластов необходим комплекс gH, gL и gO, в то время как комплекс gH, gL и протеинов, кодированных UL131-UL128 генами, отвечает за инфицирование эндотелиальных клеток, эпителиальных клеток и дендровидных клеток [2-8].
Гипериммунные глобулины уже введены в коммерческий оборот для применения для профилактики заболевания hCMV, связанного с трансплантацией, а недавно полученные данные указывают на то, что они обладают терапевтическим действием по отношению к беременным [9]. Такой терапевтический подход ограничен малым количеством нейтрализующего антитела, которое может быть перенесено, и по этой причине чрезвычайно желательным было бы наличие человеческих антител (таких как человеческие моноклональные антитела) с высокой нейтрализующей способностью. Однако все еще необходимо определить мишень для нейтрализующих hCMV антител. В предыдущих работах gB и gH были идентифицированы в качестве потенциальных мишеней. Однако гуманизированное антитело к gH (MSL 109) не показало какого-либо значительного эффекта в клинических испытаниях [10, 11]. Все нейтрализующие антитела, описанные до настоящего времени, имели низкую нейтрализующую способность, поскольку они нейтрализуют инфекцию hCMV только при высоких концентрациях. Например, антитело MSL-109 проявляет только 50% нейтрализующей активности при концентрации 10 мкг/мл, что может объяснять отсутствие эффекта in vivo [11]. Нейтрализующую активность анти-hCMV антител, типично, измеряют с использованием фибробластов в качестве клеток-мишеней. Однако известно, что hCMV вызывает патологию путем инфицирования других типов клеток, таких как эндотелиальные, эпителиальные клетки и лейкоциты. Поэтому не очевидно, что не существует каких-либо моноклональных антител, которые могли бы быть способны к высокоэффективной нейтрализации инфицирования нефибробластных клеток-мишеней. Недавно описанные нейтрализующие антитела к UL128 и UL130 также показали очень низкую активность при нейтрализации инфицирования эндотелиальных клеток [7].
Поэтому существует необходимость в получении нейтрализующих антител к hCMV, а также в определении мишени, с которой связываются такие антитела.
Описание изобретения
Настоящее изобретение основано на продуцировании антител и фрагментов антител, которые нейтрализуют hCMV инфекцию и имеют особо высокую активность при нейтрализации инфекции hCMV. Такие антитела являются желательными, поскольку для нейтрализации данного количества вируса необходимы только низкие концентрации. Это способствует образованию более высоких степеней защиты при введении меньших количеств антител. Человеческие моноклональные антитела и клоны иммортализованных В-клеток, которые секретируют такие антитела, также входят в объем настоящего изобретения.
Изобретатели открыли, что антитела, направленные на комбинацию UL130 и UL131A, особо эффективны при нейтрализации hCMV. Такая комбинация может представлять собой комплекс UL130 и UL131A, формирующий эпитоп, распознаваемый антителом, или антитело может быть направлено на один из UL130 и UL131A, наличие других протеинов необходимо для специфичности.
Настоящее изобретение также относится к характеристике эпитопа, с которым связываются антитела, и к применению такого эпитопа при повышении иммунного отклика.
Настоящее изобретение также относится к различным способам и применениям, в которых задействованы антитела в соответствии с настоящим изобретением и эпитопы, с которыми они связываются.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением
Настоящее изобретение обеспечивает моноклональные или рекомбинатные антитела, обладающие особо высокой активностью при нейтрализации hCMV. Настоящее изобретение также обеспечивает фрагменты таких рекомбинантных или моноклональных антител, в особенности фрагменты, сохраняющие антигенсвязывающую активность антител, например сохраняющие, по меньшей мере, один гипервариабельный участок (CDR), обладающий специфичностью по отношению к hCMV протеинам UL130 и UL131A.
В данной заявке под термином "высокая активность при нейтрализации hCMV" подразумевают, что молекула антитела в соответствии с настоящим изобретением нейтрализует hCMV в стандартном анализе при концентрации, значительно более низкой, чем концентрация антител, известных из уровня техники, например, по сравнению с MSL-109.
Предпочтительно, молекула антитела в соответствии с настоящим изобретением может нейтрализовать при концентрации 0,16 мкг/мл или ниже (т.е. 0,15, 0,125, 0,1, 0,075, 0,05, 0,025, 0,02, 0,016, 0,015, 0,0125, 0,01, 0,0075, 0,005, 0,004 или ниже), предпочтительно 0,016 мкг/мл или ниже (концентрация антитела 10-8 или ниже, предпочтительно 10-9 М или ниже, предпочтительно 10-10 М или ниже, т.е. 10-11 М, 10-12 М, 10-13 М или ниже). Это означает, что только очень низкие концентрации антитела необходимы для 50% нейтрализации клинического изолята hCMV in vitro по сравнению с концентрацией MSL-109, необходимой для нейтрализации того же самого титра hCMV. Предпочтительно, концентрация антитела в соответствии с настоящим изобретением, необходимая для 50% нейтрализации инфицирования эндотелиальных клеток, эпителиальных клеток и дендровидных клеток клиническим изолятом hCMV в 50 раз или более (т.е. в 75, 100, 150, 200 или более) ниже, чем концентрация, необходимая для MSL-109. Эффективность может быть измерена при помощи стандартного анализа нейтрализации, как описано в уровне техники.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут нейтрализовать hCMV. Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением предотвращает инфицирование фибробластов или эндотелиальных клеток. Более предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением предотвращает инфицирование эндотелиальных клеток. Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением предотвращает инфицирование как фибробластов, так и эндотелиальных клеток. Антитела в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно, также предотвращают инфицирование дендровидных клеток и эндотелиальных клеток, таких как ретинальные клетки.
Антитела могут быть применены в качестве профилактических или терапевтических средств после получения соответствующего лекарственного средства или в качестве диагностического средства.
"Нейтрализующее антитело" представляет собой антитело, которое может нейтрализовать способность патогена инициировать и/или сохранять инфекцию у хозяина (носителя). Изобретение обеспечивает нейтрализующее моноклональное человеческое антитело, где антитело распознает антиген человеческого цитомегаловируса (hCMV).
Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением обладает специфичностью по отношению к комбинации UL130 и UL131A.
Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением является моноклональным антителом, которое в данной заявке имеет название 1F11 или 2F4. Такие антитела были первоначально выделены из hCMV инфицированного донора, они продуцируются клонами иммортализованных В-клеток, имеющими название 1F11 или 2F4. Было показано, что такие антитела нейтрализуют инфицирование hCMV эндотелиальных клеток, эпителиальных клеток, ретинальных клеток и дендровидных клеток. Дополнительно, антитела 5А2 и 9А11, выделенные из hCMV инфицированного донора, проявляют аналогичную специфичность по отношению к комбинации UL130 и UL131A и способность к нейтрализации инфицирования hCMV эндотелиальных, эпителиальных, ретинальных и дендровидных клеток. Такие антитела продуцируются клонами иммортализованных В-клеток, имеющими название 5А2 и 9А11 соответственно.
1F11 состоит из тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:7, и легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:8. 2F4 состоит из тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:17, и легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:18. CDRs тяжелых цепей антитела имеют название CDRH1, CDRH2 и CDRH3 соответственно. Аналогично, CDRs легких цепей антитела имеют название CDRL1, CDRL2 и CDRL3 соответственно. Положение CDR аминокислот определено в соответствии с системой нумерации IMGT [12, 13, 14] следующим образом: CDR1 - IMGT положения 27-38, CDR2 - IMGT положения 56-65 и CDR3 - IMGT положения 105-117.
5А2 состоит из тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:39, и легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:40.
Аминокислотные последовательности CDRs данных антител показаны в Таблице 1.
Таблица 1 | |||
1F11 | 2F4 | 5А2 | |
CDRH1 | GFTFSSYA (SEQ ID NO:1) | GFSFNTYG (SEQ ID NO:11) | GGTFSSYV (SEQ ID NO:33) |
CDRH2 | ISFDGDNK (SEQ ID NO:2) | IWDDGSKM (SEQ ID NO:12) | IIPIFNTA (SEQ ID NO:34) |
CDRH3 | AREELVGLMPPYYNYGLD V (SEQ ID NO:3) | ARDEGAIMLHAMTDYGL DV (SEQ ID NO:13) | ARDFLSGPMEMPGGYYGLD V (SEQ ID NO:35) |
CDRL1 | SSNTGNNF (SEQ ID NO:4) | NLGDEF (SEQ ID NO:14) | QSVLYSSNNKNY (SEQ ID NO:36) |
CDRL2 | DND (SEQ ID NO:5) | QDS (SEQ ID NO:15) | WAS (SEQ ID NO:37) |
CDRL3 | ETWDGSLNPAVV (SEQ ID NO:6) | QAWDSSTAHYV (SEQ ID NO:16) | QQYYSTPIT (SEQ ID NO:38) |
Настоящее изобретение также включает антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую один или более (т.е. один, два или все три) CDRs тяжелой цепи из 1F11 или 2F4 (SEQ ID NO:1-3 или 11-13). Также включено антитело, содержащее тяжелую цепь, содержащую один или более (т.е. один, два или все три) CDRs тяжелой цепи из 5А2 (SEQ ID NO:33-35).
Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит тяжелую цепь, содержащую (i) SEQ ID NO:1 для CDRH1, SEQ ID NO:2 для CDRH2 и SEQ ID NO:3 для CDRH3, или (ii) SEQ ID NO:11 для CDRH1, SEQ ID NO:12 для CDRH2 и SEQ ID NO:13 для CDRH3. Дополнительное предпочтительное антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO:33 для CDRH1, SEQ ID NO:34 для CDRH2 и SEQ ID NO:35 для CDRH3.
Настоящее изобретение также включает антитело, содержащее легкую цепь, содержащую один или более (т.е. один, два или все три) CDRs легкой цепи из 1F11 или 2F4 (SEQ ID NO:4-6 или 14-16). Также включено антитело, содержащее легкую цепь, содержащую один или более (т.е. один, два или все три) CDRs легкой цепи из 5А2 (SEQ ID NO:36-38).
Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит легкую цепь, содержащую (i) SEQ ID NO:4 для CDRL1, SEQ ID NO:5 для CDRL2 и SEQ ID NO:6 для CDRL3, или (ii) SEQ ID NO:14 для CDRL1, SEQ ID NO:15 для CDRL2 и SEQ ID NO:16 для CDRL3. Дополнительное предпочтительное антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит легкую цепь, содержащую SEQ ID NO:36 для CDRL1, SEQ ID NO:37 для CDRL2 и SEQ ID NO:38 для CDRL3.
Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит тяжелую цепь, имеющую последовательность, указанную в SEQ ID NO:7, 17 или 39. Предпочтительно, антитело в соответствии с настоящим изобретением содержит легкую цепь, имеющую последовательность, указанную в SEQ ID NO:8, 18 или 40.
Также могут существовать молекулы гибридного антитела, которые содержат один или более CDRs из 1F11 и один или более CDRs из 2F4. Предпочтительно, такие гибридные антитела содержат три CDRs из 1F11 и три CDRs из 2F4. Таким образом, предпочтительные гибридные антитела содержат i) три CDRs легких цепей из 1F11 и три CDRs тяжелых цепей из 2F4, или ii) три CDRs тяжелых цепей из 1F11 и три CDRs легких цепей из 2F4. В альтернативном варианте такие гибриды могут содержать один или более CDRs из 5А2.
Настоящее изобретение также включает последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие часть или все легкие и тяжелые цепи и CDRs в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительные последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением включают SEQ ID NO:9 (кодирующую 1F11 вариабельный регион тяжелой цепи), SEQ ID NO:10 (кодирующую 1F11 вариабельный регион легкой цепи), SEQ ID NO:19 (кодирующую 2F4 вариабельный регион тяжелой цепи) и SEQ ID NO:20 (кодирующую 2F4 вариабельный регион легкой цепи). Предпочтительные последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих различные CDRs, включают SEQ ID NO:21 (кодирующую 1F11 CDRH1), SEQ ID NO:22 (кодирующую 1F11 CDRH2), SEQ ID NO:23 (кодирующую 1F11 CDRH3), SEQ ID NO:24 (кодирующую 1F11 CDRL1), SEQ ID NO:25 (кодирующую 1F11 CDRL2), SEQ ID NO:26 (кодирующую 1F11 CDRL3), SEQ ID NO:27 (кодирующую 2F4 CDRH1), SEQ ID NO:28 (кодирующую 2F4 CDRH2), SEQ ID NO:29 (кодирующую 2F4 CDRH3), SEQ ID NO:30 (кодирующую 2F4 CDRL1), SEQ ID NO:31 (кодирующую 2F4 CDRL2) и SEQ ID NO:32 (кодирующую 2F4 CDRL3). Дополнительные предпочтительные последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением включают SEQ ID NO:41 (кодирующую 5А2 вариабельный регион тяжелой цепи), SEQ ID NO:42 (кодирующую 5А2 вариабельный регион легкой цепи), SEQ ID NO:43 (кодирующую 5А2 CDRH1), SEQ ID NO:44 (кодирующую 5А2 CDRH2), SEQ ID NO:45 (кодирующую 5А2 CDRH3), SEQ ID NO:46 (кодирующую 5А2 CDRL1), SEQ ID NO:47 (кодирующую 5А2 CDRL2), SEQ ID NO:48 (кодирующую 5А2 CDRL3). Вследствие избыточности генетического кода будут существовать варианты таких последовательностей, которые кодируют те же самые аминокислотные последовательности.
Вариантные антитела также входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, варианты последовательностей, указанные в данной заявке, также входят в объем настоящего изобретения. Такие варианты могут возникать из-за вырожденности генетического кода, как указано выше. Альтернативно, природные варианты могут продуцироваться вследствие ошибок транскрипции или трансляции. Вариант 2F4 также описан в данной заявке. Данный вариант содержит, дополнительно, два сериновых остатка в С-концевой области 2F4 аминокислотной последовательности тяжелой цепи (SEQ ID NO:17). Таким образом, данный вариант 2F4 состоит из тяжелой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:49, и легкой цепи, имеющей аминокислотную последовательность, указанную в SEQ ID NO:18. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вариантную тяжелую цепь, указана в SEQ ID NO:50. Таким образом, антитела, содержащие 2F4 вариантную тяжелую цепь (SEQ ID NO:49), входят в объем настоящего изобретения.
Дополнительные варианты последовательностей антител, имеющих повышенную афинность, могут быть получены при помощи способов, известных из уровня техники, и входят в объем настоящего изобретения. Например, аминокислотные замещения могут быть применены для получения антител с дополнительно повышенной афинностью. Альтернативно, оптимизация кодонов нуклеотидной последовательности может быть применена для повышения эффективности трансляции в системах экспрессии для продуцирования антитела.
Предпочтительно, такие последовательности вариантных антител будут иметь 70% или более (т.е. 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более) идентичность последовательностей с последовательностями, указанными в данной заявке. Предпочтительно, такую идентичность последовательностей рассчитывают по отношению к полному размеру контрольной последовательности (т.е. последовательности, указанной в данной заявке). Предпочтительно, процент идентичности, указанный в данной заявке, является таким, как определено при помощи BLAST, версия 2.1.3, с использованием параметров по умолчанию, указанных NCBI (Национальный Центр Биотехнологической Информации (National Center for Biotechnology Information); http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) [Blosum 62 матрица; штраф за открытие пропуска последовательности = 11, штраф за продолжение пропуска последовательности = 1].
Дополнительно в объем настоящего изобретения входят векторы, например векторы экспрессии, содержащие последовательность нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением. Клетки, трансформированные такими векторами, также входят в объем настоящего изобретения.
Настоящее изобретение также относится к моноклональным антителам, которые связываются с эпитопом, способным связывать моноклональное антитело 1F11 или 2F4. Настоящее изобретение также относится к моноклональным антителам, которые связываются с эпитопом, способным связывать моноклональное антитело 5А2.
Моноклональные и рекомбинантные антитела являются особо полезными при идентификации и очистке индивидуальных полипептидов или других антигенов, на которые они направлены. Антитела в соответствии с настоящим изобретением являются дополнительно полезными, поскольку они могут быть применены в качестве реагентов в иммунном анализе, радиоиммунном анализе (RIA) или твердофазном иммуноферментном анализе (ELISA). В таких применениях антитела могут быть помечены аналитически детектируемым реагентом, таким как радиомеченый изотоп, флуоресцентная молекула или фермент. Антитела могут быть также применены для молекулярной идентификации и характеристики (эпитоп картирования) антигенов.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть включены в состав лекарственного средства для доставки к месту лечения или связаны с детектируемой меткой для облегчения получения изображения места, содержащего рассматриваемые клетки, такие как клетки, инфицированные hCMV. Способы включения антител в состав лекарственных средств и связывания с детектируемыми метками хорошо известны из уровня техники, так же как и способы получения изображения при помощи детектируемых меток. Меченые антитела могут быть применены для широкого диапазона анализов, в которых используют широкий диапазон меток. Детектирование образования комплекса антитело-антиген между антителом в соответствии с настоящим изобретением и рассматриваемым эпитопом (эпитопом hCMV) может быть облегчено путем присоединения детектируемой субстанции к антителу. Приемлемые средства детектирования включают использование таких меток, как радионуклеотиды, ферменты, коферменты, флуоресцентные вещества, хемилюминесцентные вещества, хромогены, ферментные субстраты или кофакторы, ферментные ингибиторы, комплексы простетических групп, свободные радикалы, частицы, красители и т.п. Примеры приемлемых ферментов включают пероксидазу хрена, щелочную фосфатазу, β-галактозидазу или ацетилхолинэстеразу; примеры приемлемых комплексов простетических групп включают стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примеры приемлемых флуоресцентных материалов включают умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламин флуоресцеин, дансил хлорид или фикоэритрин; примером люминесцентного материала является люминол; примеры биолюминисцентных материалов включают люциферазу, люциферин и экворин; и примеры приемлемых радиоактивных материалов включают 125I, 131I, 35S или 3H. Такие меченые реагенты могут быть использованы во множестве хорошо известных анализов, таких как радиоиммунный анализ, ферментные иммуноанализы, например ELISA, флуоресцентные иммуноанализы и т.п. См., например, ссылки 15-18.
Антитело в соответствии с настоящим изобретением может быть конъюгировано с лекарственной группой, такой как цитотоксин, лечебное средство или ион радиоактивного металла или радиоизотоп. Примеры радиоизотопов включают, но не ограничиваются приведенным, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212, Bi-213, Pd-109, Tc-99, In-111 и т.п. Такие конъюгаты антител могут быть использованы для модифицирования данного биологического отклика; лекарственная группа не должна быть истолкована как группа, ограниченная классическими химическими лечебными средствами. Например, лекарственная группа может быть протеином или полипептидом, обладающим желаемой биологической активностью. Такие протеины могут включать, например, токсин, такой как арбин, рицин А, экотоксин синегнойной палочки или дифтерийный токсин.
Методы конъюгирования такой лечебной группы и антител хорошо известны. См., например, Arnon et al. (1985) "Monoclonal Antibody for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy," в Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, ed. Reisfeld et al. (Alan R. Liss, Inc.), pp.243-256; ed. Hellstrom et al. (1987) "Antibodies for Drug Delivery," в Controlled Drug Delivery, ed. Robinson et al. (2d ed; Marcel Dekker, Inc.), pp.623-653; Thorpe (1985) "Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review," в Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, ed. Pinchera et al. pp.475-506 (Editrice Kurtis, Milano, Italy, 1985); "Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy," в Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy, ed. Baldwin et al. (Academic Press, New York, 1985), pp.303-316; и Thorpe et al. (1982) Immunol. Rev. 62:119-158.
Альтернативно, антитело может быть конъюгировано со вторым антителом с образованием гетероконъюгата антител, как описано в ссылке 19. Дополнительно, могут быть использованы линкеры между метками и антителами в соответствии с настоящим изобретением [20]. Антитела или их антигенсвязывающие фрагменты могут быть непосредственно помечены радиоактивным йодом, индием, иттрием или другой радиоактивной частицей, известной из уровня техники [21]. Лечение может состоять из комбинации лечения конъюгированными и неконъюгированными антителами, которые вводят одновременно или последовательно [22, 23].
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть присоединены к твердой подложке.
Дополнительно, антитела могут быть химически модифицированы путем ковалентной конъюгации с полимером для увеличения их периода полувыведения из кровотока, например. Предпочтительные полимеры и способы их присоединения к пептидам показаны в ссылках 24-27. Предпочтительными полимерами являются полиоксиэтилированные полиолы и полиэтиленгликоль (ПЕГ). ПЕГ растворим в воде при комнатной температуре и имеет общую формулу: R(O-CH2-CH2)n-O-R, где R может быть водородом или защитной группой, такой как алкильная или алканольная группа. Предпочтительно, защитная группа содержит от 1 до 8 атомов углерода, более предпочтительно, она является метилом. Символ n является положительным целым числом, предпочтительно от 1 до 1000, более предпочтительно, от 2 до 500. ПЕГ имеет предпочтительную молекулярную массу от 1000 до 40000, более предпочтительно, от 2000 до 20000, наиболее предпочтительно, от 3000 до 12000. Предпочтительно, ПЕГ имеет, как минимум, одну гидроксигруппу, более предпочтительно, она является концевой гидроксигруппой. Такая гидроксигруппа, предпочтительно, активирована для реакции со свободной аминогруппой в ингибиторе. Однако будет понятно, что вид и количество реакционно-способных групп могут быть различными для получения ковалентно конъюгированного ПЕГ/антитело в соответствии с настоящим изобретением.
Растворимые в воде полиоксиэтилированные полиолы также полезны в данном изобретении. Они включают полиоксиэтилированный сорбитол, полиоксиэтилированную глюкозу, полиоксиэтилированный глицерин (ПОГ) и т.п. ПОГ является предпочтительным. Одной из причин этого является то, что структура глицерина в полиоксиэтилированном глицерине аналогична структуре, которая встречается в природе в, например, моно-, ди- и триглицеридах животных и людей. Поэтому такое разветвление необязательно будет рассматриваться как чужеродный агент в организме. ПОГ имеет предпочтительную молекулярную массу в том же самом диапазоне, что и ПЕГ. Структура ПОГ показана в ссылке 28, а обсуждение ПОГ/IL-2 конъюгатов приведено в ссылке 24.
Другая система доставки лекарств для увеличения периода полувыведения из кровотока представляет собой липосому. Способы получения липосомных систем доставки обсуждены в ссылках 29, 30 и 31. Другие системы доставки лекарств известны из уровня техники и описаны, например, в ссылках 32 и 33.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением, предпочтительно, обеспечены в очищенной форме. Типично, антитело будет присутствовать в композиции, которая, по существу, не содержит другие полипептиды, например, менее 90% (по массе), обычно менее 60% и более обычно менее 50% композиции приготовлено из других полипептидов.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть иммуногенными у нечеловеческих (или гетерологических) хозяев, например у мышей. В частности, антитела могут иметь идиотип, который является иммуногенным у нечеловеческих хозяев, но не у человеческого хозяина. Антитела в соответствии с настоящим изобретением для применения у людей включают антитела, которые не могут быть получены от таких хозяев, как мыши, козы, кролики, крысы, неприматные млекопитающие и т.д., и не могут быть получены гуманизацией или от ксено-мышей.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть антителами любого изотипа (например, IgA, IgG, IgM, т.е., α, γ или µ тяжелой цепью), но, в общем, будут антителами типа IgG. В изотипе IgG антитела могут быть подклассами IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4. Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут иметь κ или λ легкую цепь.
Продуцирование антител
Моноклональные антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены одним из способов, известных из уровня техники. Общая методология получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии хорошо известна [34, 35]. Предпочтительно, используют альтернативный способ иммортализации EBV, описанный в ссылке 36.
Применение способа описано в ссылке 36, В-клетки, продуцирующие антитело в соответствии с настоящим изобретением, могут быть трансформированы EBV в присутствии поликлонального активатора В-клеток. Трансформация EBV является стандартной технологией и может быть легко адаптирована для включения активаторов поликлональных В-клеток.
Дополнительные стимуляторы клеточного роста и дифференциации могут быть добавлены во время стадии трансформации для дополнительного повышения эффективности. Такими стимуляторами могут быть цитокины, такие как IL-2 и IL-15. В особенно предпочтительном аспекте IL-2 добавляют во время стадии иммортализации для дополнительного повышения эффективности иммортализации, но его использование не является существенным.
Иммортализованные В-клетки, продуцируемые при помощи данных способов, могут быть затем культивированы при помощи способов, известных из уровня техники, и из них выделяют антитела.
Моноклональные антитела могут быть дополнительно очищены, при желании, при помощи фильтрования, центрифугирования и различных хроматографических способов, таких как ВЕРХ или аффинная хроматография. Методы очистки моноклональных антител, включая методы продуцирования антител фармацевтической степени чистоты, хорошо известны из уровня техники.
Фрагменты моноклональных антител в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены из моноклональных антител способами, которые включают дигестию ферментами, такими как пепсин или папаин, и/или путем расщепления дисульфидных связей путем химического восстановления. Альтернативно, фрагменты моноклональных антител могут быть получены путем клонирования и экспрессии части последовательностей тяжелых или легких цепей. "Фрагменты" антител включают Fab, Fab', F(ab')2 и Fv фрагменты. Настоящее изобретение также охватывает одноцепочные Fv фрагменты (scFv), полученные из тяжелых и легких цепей моноклонального антитела в соответствии с настоящим изобретением. Например, настоящее изобретение включает scFv, содержащий CDRs из антител в соответствии с настоящим изобретением. Также включены мономеры и димеры тяжелой или легкой цепи, а также антитела легкой цепи, например Fv легкой цепи, в котором вариабельные домены тяжелой и легкой цепей соединены пептидным линкером.
Стандартные методы молекулярной биологии могут быть использованы для получения ДНК последовательностей, кодирующих антитела или фрагменты антител в соответствии с настоящим изобретением. Желаемые ДНК последовательности могут быть синтезированы полностью или частично, используя методы олигонуклеотидного синтеза. В случае необходимости могут быть использованы методы сайт-направленного мутагенеза и полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Для экспрессии ДНК последовательностей, кодирующих молекулы антител в соответствии с настоящим изобретением или их фрагменты, могут быть использованы любые приемлемые системы клетки-хозяина/векторные системы. Могут быть использованы бактериальные, например, Е.coli, и другие микробные системы, частично, для экспрессии фрагментов антител, таких как Fab и F(ab')2 фрагменты, в особенности Fv фрагментов и фрагментов одноцепочных антител, например одноцепочных Fvs. Эукариотные системы экспрессии клеток-хозяев, например млекопитающих, могут быть использованы для продуцирования больших молекул антител, включая молекулы полных антител. Приемлемые клетки-хозяева млекопитающих включают СНО, HEK293T, PER.C6, миеломные или гибридомные клетки.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ продуцирования молекулы антитела в соответствии с настоящим изобретением, включающий культивирование клетки-хозяина, содержащей вектор в соответствии с настоящим изобретением, в условиях, приемлемых для экспрессии протеина из ДНК, кодирующей молекулу антитела в соответствии с настоящим изобретением, и выделение молекулы антитела.
Молекула антитела может содержать только полипептид тяжелой или легкой цепи, в таком случае только последовательность, кодирующая полипептид тяжелой или легкой цепи, должна быть использована для трансфекции клеток-хозяев. Для продуцирования продуктов, содержащих как тяжелые, так и легкие цепи, клеточные линии могут быть трансфицированы двумя векторами, первым вектором, кодирующим полипептид легкой цепи, и вторым вектором, кодирующим полипептид тяжелой цепи. Альтернативно, может быть использован один вектор, где вектор содержит последовательности, кодирующие полипептиды тяжелой и легкой цепи.
Альтернативно, антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть продуцированы путем i) экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты в соответствии с настоящим изобретением в клетке, и ii) выделения экспрессированного продукта антитела. Дополнительно, способ может включать iii) очистку антитела.
Скрининг и выделение В-клеток
Трансформированные В-клетки подвергают скринингу на предмет выявления В-клеток, продуцирующих антитела, обладающих желаемой специфичностью антигенов, и индивидуальные клоны В-клеток затем могут быть продуцированы из позитивных клеток.
Стадия скрининга может быть осуществлена при помощи метода ELISA, путем окрашивания тканей или клеток (включая трансфицированные клетки), анализа нейтрализации или одного из ряда способов, известных из уровня техники для идентификации желаемой специфичности антигена. В анализе отбор может быть произведен на основании простого распознавания антигенов, или отбор может быть произведен на основании дополнительной желаемой функции, например, для отбора нейтрализующих антител, а не просто антигенсвязывающих антител, для отбора антител, которые могут изменять характеристики клеток-мишеней, таких как их сигнальные каскады, их форма, скорость их роста, способность влиять на другие клетки, отклик на влияние других клеток или других реагентов или изменение условий, статус их дифференциации, и т.д.
Стадия клонирования для разделения индивидуальных клонов и смеси позитивных клеток может быть проведена при помощи серийного разведения, микроманипулирования, одноклеточного осаждения путем клеточного сортинга или другого способа, известного из уровня техники. Предпочтительно, клонирование проводят при помощи серийного разведения.
Клоны иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением могут быть применены различными способами, например в качестве источника моноклональных антител, в качестве источника нуклеиновой кислоты (ДНК или иРНК), кодирующей рассматриваемое моноклональное антитело, для исследований и т.д.
Настоящее изобретение обеспечивает композицию, содержащую иммортализованные В-лимфоциты памяти, где лимфоциты продуцируют антитела, обладающие высокой нейтрализующей активностью, специфичной по отношению к hCMV, и где антитела продуцируют при ≥5 пг на одну клетку в день. Настоящее изобретение также обеспечивает композицию, содержащую клоны иммортализованных В-лимфоцитов памяти, где клоны продуцируют моноклональное антитело, обладающее высокой афинностью, специфичной по отношению к hCMV, где антитело продуцируют при ≥10N нг на один клон в день. Предпочтительно, указанные клоны продуцируют моноклональное антитело, обладающее высокой активностью при нейтрализации hCMV инфекции.
Предпочтительными клонами иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением являются 1F11 и 2F4. Дополнительными предпочтительными клонами являются 5А2 и 9А11.
Эпитопы
Как указано выше, антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы для картирования эпитопов, с которыми они связываются. Заявители открыли, что антитела IF 11, 2F4, 5А2 и 9А11, нейтрализующие инфицирование hCMV эндотелиальных клеток, эпителиальных клеток, ретинальных клеток и дендровидных клеток, направлены на эпитоп, обнаруженный в комбинации UL130 и UL131A. Хотя заявитель не стремится быть ограниченным данной теорией, считают, что антитела 1F11 и 2F4 связываются с конформационным эпитопом, образованным данными двумя протеинами. Также считают, что 5А2 и 9А11 также связываются с таким конформационным эпитопом, образованным UL130 и UL131A.
Вследствие того факта, что 1F11, 2F4, 5А2 и 9А11 не нейтрализуют инфицирование фибробластов, теоретически допускают, что данные антитела распознают различные эпитопы к человеческим моноклональным антителам 10С6, 5F1, 6В4 и 7Н3. Дополнительно, считают, что моноклональные антитела 10С6, 5F1, 7Н3 и 6В4 связываются с функциональным эпитопом gB.
Эпитопы, распознанные такими антителами, могут иметь ряд применений. Эпитопы и мимеотопы в очищенной или синтезированной форме могут быть применены для повышения иммунного ответа (т.е. в качестве вакцины, или для продуцирования антител для другого применения) или для скрининга сыворотки пациента для выявления антител, которые иммунореагируют с эпитопами или мимеотопами. Предпочтительно, такой эпитоп, или мимеотоп, или антиген, содержащий такой эпитоп или мимеотоп, используют в качестве вакцины для повышения иммунного отклика. Антитела в соответствии с настоящим изобретением также могут использоваться в способе для мониторинга качества вакцин, в частности для проверки того, что антиген в составе вакцины содержит правильный иммуногенный эпитоп в правильной конформации.
Эпитопы также могут быть полезны при скрининге на предмет выявления лигандов, которые связываются с указанными эпитопами. Такие лиганды, предпочтительно, блокируют эпитопы и, таким образом, предотвращают инфицирование. Такие лиганды входят в объем настоящего изобретения.
Рекомбинантная экспрессия
Иммортализованные В-лимфоциты памяти в соответствии с настоящим изобретением также могут быть использованы в качестве источника нуклеиновой кислоты для клонирования генов антител для последующей рекомбинантной экспрессии. Экспрессия из рекомбинантных источников является более традиционной для применения в фармацевтических целях, чем экспрессия из В-клеток или гибридом, например, по причине стабильности, репродуктивной способности, легкости культивирования и т.д.
Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает способ получения рекомбинантной клетки, содержащий стадии: (1) получения одной или более нуклеиновых кислот (например, генов тяжелой и/или легкой цепи) из клона В-клеток, кодирующего рассматриваемое антитело; и (и) вставку нуклеиновой кислоты в носитель экспрессии для того, чтобы позволить экспрессию рассматриваемого антитела в данном носителе.
Аналогично, настоящее изобретение обеспечивает способ получения рекомбинантной клетки, содержащий стадии: (i) секвенирования нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) из клона В-клеток, который кодирует рассматриваемое антитело; и (ii) использование информации о последовательностях, полученной на стадии (i) для получения нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) для вставки в носитель экспрессии для того, чтобы позволить экспрессию рассматриваемого антитела в данном носителе.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения рекомбинатной клетки, включающий стадию трансформации клетки-хозяина одной или более нуклеиновыми кислотами, которые кодируют рассматриваемое моноклональное антитело, где нуклеиновые кислоты являются нуклеиновыми кислотами, полученными из клона иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, процедуры для первого получения нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) и последующего использования для трансформации клетки-хозяина могут быть осуществлены в разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Такие рекомбинантные клетки в соответствии с настоящим изобретением могут быть затем применены для экспрессии и культивирования. Они, в особенности, полезны для экспрессии антител для широкомасштабного фармацевтического производства. Они также могут быть применены в качестве активного ингредиента фармацевтической композиции. Могут быть применены любые приемлемые средства культивирования, включая, но не ограничиваясь приведенным, стационарное культивирование, культивирование при помощи вращающегося флакона, асцитную жидкость, картридж биореактора мембранного типа, модульный мини-ферментер, реактор с механическим перемешиванием, культуру на микроносителях, перфузию с керамическими заполнителями, и т.д.
Способы получения и секвенирования иммуноглобулиновых генов из В-клеток хорошо известны из уровня техники, например, см. ссылку 37.
Носителем экспрессии, предпочтительно, является эукариотная клетка, включая дрожжевые клетки и клетки животных, в особенности клетки млекопитающих (например, СНО клетки, человеческие клетки, такие как PER.C6 [Crucell; ссылка 38] или HKB-11 [Bayer; ссылки 39 и 40] клетки, миеломные клетки [41 и 42], и т.д.), а также растительные клетки. Предпочтительные носители экспрессии могут гликозилировать антитело в соответствии с настоящим изобретением, в особенности, имеющее углеводные структуры, которые сами по себе не являются иммуногенными у людей. Носители экспрессии, которые могут расти в средах, не содержащих сыворотки, являются предпочтительными. Носители экспрессии, которые могут расти в культуре в отсутствие продуктов, полученных из животных, являются предпочтительными.
Носитель экспрессии может быть культивирован с получением клеточной линии.
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения одной или более молекул нуклеиновой кислоты (например, генов тяжелой и легкой цепей), кодирующих рассматриваемое антитело, содержащий стадии: (i) получения клона иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением; (ii) получения из клона В-клеток нуклеиновой кислоты, кодирующей рассматриваемое антитело. Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей рассматриваемое антитело, содержащий стадии: (i) получения клона иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением; (ii) секвенирования из клона В-клеток нуклеиновой кислоты, кодирующей рассматриваемое антитело.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения молекулы (молекул) нуклеиновой кислоты, кодирующей рассматриваемое антитело, содержащий стадию получения нуклеиновой кислоты из клона В-клетки, полученного из трансформированной В-клетки в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, процедуры первого получения клона В-клетки и последующего получения нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) из нее могут быть осуществлены в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения антитела (например, для фармацевтического применения), включающий стадии: (i) получения и/или секвенирования одной или более нуклеиновых кислот (например, генов тяжелой и легкой цепей) из отобранного клона В-клеток, экспрессирующего рассматриваемое антитело; (ii) вставки нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) в или использование нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) для получения носителя экспрессии, который может экспрессировать рассматриваемое антитело; (iii) культивирования или субкультивирования носителя экспрессии в условиях экспрессии рассматриваемого антитела; и, необязательно, (iv) очистки рассматриваемого антитела.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения антитела, содержащий стадии: культивирования или субкультивирования популяции клеток-носителей экспрессии в условиях экспрессии рассматриваемого антитела и, необязательно, очистки рассматриваемого антитела, где указанную популяцию клеток-носителей экспрессии получают (i) обеспечением нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот), кодирующей (кодирующих) отобранное рассматриваемое антитело В-клетки, продуцированное популяцией В-лимфоцитов памяти, полученными так, как описано выше, (ii) вставкой нуклеиновой кислоты (нуклеиновых кислот) в носитель экспрессии, который может экспрессировать рассматриваемое антитело, и (iii) культивированием или субкультивированием носителей экспрессии, содержащих указанные вставленные нуклеиновые кислоты с получением указанной популяции клеток-носителей экспрессии. Таким образом, процедуры для первого получения рекомбинантного носителя экспрессии и его последующего культивирования для экспрессии антител могут быть осуществлены в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Фармацевтические композиции
Применение антител в качестве активного ингредиента фармацевтических композиций в настоящее время широко распространено, включая продукты Herceptin™ (трастузумаб), Rituxan™, Campath™, Remicade™, ReoPro™, Mylotarg™, Zevalin™, Omalizumab, Synagis™ (палавизумаб), Zenapax™ (даклизумаб) и т.д.
Настоящее изобретение, таким образом, обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую антитела в соответствии с настоящим изобретением и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую такие антитела и/или иммортализованные В-клетки, экспрессирующие такие антитела и/или эпитопы, которые распознаются антителами в соответствии с настоящим изобретением. Фармацевтическая композиция также может содержать фармацевтически приемлемый носитель для того, чтобы позволить введение. Носитель не должен сам вызывать продуцирование антител, вредных по отношению к пациентам, получающим композицию, и не должен быть токсичным. Приемлемые носители могут быть большими макромолекулами с замедленным метаболизмом, такими как протеины, полипептиды, липосомы, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот и частицы неактивных вирусов.
Могут быть использованы фармацевтически приемлемые соли, например соли минеральных кислот, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты и сульфаты, или соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты и бензоаты.
Фармацевтически приемлемые носители в лечебной композиции могут дополнительно содержать жидкости, такие как вода, солевой раствор, глицерин и этиловый спирт. Дополнительно, в таких композициях могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие и эмульгирующие агенты или рН буферные вещества. Такие носители позволяют получать фармацевтические композиции в виде таблеток, пилюлей, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов и суспензий, для приема внутрь пациентом.
Предпочтительные формы введения включают формы, приемлемые для парентерального введения, например путем инъекции или инфузии, например путем болюсной или непрерывной инфузии. Если продукт предназначен для инъекции или инфузии, он может иметь форму суспензии, раствора или эмульсии в носителе на основе масла или воды и может содержать средства для получения композиции, такие как суспендирующие, консервирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие средства. Альтернативно, молекула антитела может находиться в сухой форме, для восстановления перед использованием с использованием соответствующей стерильной жидкости.
После получения композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены непосредственно субъекту. Предпочтительным является, если композиции адаптированы для введения людям.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть введена при помощи любого количества маршрутов, включая, но не ограничиваясь приведенным, пероральный, внутривенный, внутримышечный, внутриартериальный, внутримозговой, интраперитонеальный, интратекальный, интравентрикулярный, трансдермальный, чрескожный, местный, подкожный, интраназальный, энтеральный, подъязычный, интравагинальный или ректальный маршруты. Также для введения фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы безыгольные шприцы. Типично, лечебная композиция может быть получена как композиция для впрыскивания в виде жидких растворов или суспензий. Также могут быть получены твердые формы, приемлемые для растворов или суспензий в жидких основах перед инъекцией.
Непосредственное введение композиции будет, в общем, сопровождаться инъекцией, подкожно, интраперитонеально, внутривенно или внутримышечно, или она будет доставлена в межклеточное пространство тканей. Композиции также могут быть введены в очаг поражения. Дозированное лечение может быть проведено по схеме одноразового приема или по схеме многоразового приема. Известные фармацевтические средства на основе антител обеспечивают рекомендации относительно частоты введения, например касательно того, должны ли лекарственные средства быть доставлены ежедневно, еженедельно, ежемесячно и т.д. Частота и дозировка могут также зависеть от тяжести симптомов.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть получена в различных формах. Например, композиции могут быть получены как впрыскиваемые композиции, в виде жидких растворов или суспензий. Также могут быть получены твердые формы, приемлемые для получения растворов или суспензий в жидких носителях перед инъекцией (например, лиофилизованная композиция, такая как Synagis™ и Herceptin™, для восстановления стерильной водой, содержащей консервант). Может быть получена композиция для местного введения, например, в виде мази, крема или порошка. Может быть получена композиция для перорального введения, например, в виде таблетки или капсулы, в виде спрея, или в виде сиропа (необязательно ароматизированного). Может быть получена композиция для легочного введения, например, в виде ингалятора, с использованием тонкодисперсного порошка или спрея. Может быть получена композиция в виде суппозитория или пессария. Может быть получена композиция для назального введения, введения в уши или глаза, например, в виде капель. Композиция может быть в виде набора, сконструированного таким образом, чтобы объединенная композиция была восстановлена непосредственно перед введением пациенту. Например, может быть обеспечено лиофилизированное антитело в виде набора, содержащего стерильную воду или стерильный буфер.
Будет оценено, что активным ингредиентом в композиции будет молекула антитела. Как таковая, она будет чувствительна к распаду в желудочно-кишечном тракте. Таким образом, если композиция предназначена для введения по маршруту, включающему желудочно-кишечный тракт, то необходимо, чтобы композиция содержала агенты, защищающие антитело от распада, но высвобождающие антитело после его поглощения из желудочно-кишечного тракта.
Подробное обсуждение фармацевтически приемлемых носителей приведено в Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, ISBN: 0683306472.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением, в общем, имеет значение рН от 5,5 до 8,5 предпочтительно от 6 до 8 и более предпочтительно приблизительно 7. Значение рН можно поддерживать путем применения буфера. Композиция может быть стерильной и/или не содержащей пирогенов. Композиция может быть изотонической по отношению к людям. Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно поставляют в герметично закрытых контейнерах.
Фармацевтическая композиция будет содержать эффективное количество одного или более антител в соответствии с настоящим изобретением, и/или одну или более иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением, и/или полипептид, содержащий эпитоп, связывающий антитело в соответствии с настоящим изобретением, т.е. количество, достаточное для лечения, улучшения или профилактики желаемого заболевания или состояния или для проявления детектируемого лечебного эффекта. Лечебные эффекты также включают уменьшение физических симптомов. Точное, эффективное количество для любого конкретного субъекта будет зависеть от его габаритов и состояния здоровья, природы и степени состояния и лечебных средств или комбинации лечебных средств, отобранных для введения. Эффективное количество для данной ситуации определяют при помощи стандартных экспериментов и в рамках оценки, произведенной врачом-клиницистом. Для целей настоящего изобретения эффективная доза будет, в общем, составлять от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг или от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг композиции в соответствии с настоящим изобретением для пациента, которому ее вводят. Известные фармацевтические средства на основе антител обеспечивают рекомендации относительно такой дозы, например, Herceptin™ вводят путем внутривенной инфузии раствора в концентрации 21 мг/мл, где первоначальная ударная доза составляет 4 мг/кг массы тела, а еженедельная поддерживающая доза составляет 2 мг/кг массы тела; Rituxan™ вводят еженедельно в дозе 375 мг/м2 и т.д.
Композиция может содержать более одного (например, 2, 3, 4, 5 и т.д.) антител в соответствии с настоящим изобретением, в особенности, когда такие антитела связываются с различными антигенами (или различными эпитопами в том же самом антигене) для обеспечения аддитивного или синергического лечебного эффекта. Например, одно антитело может связываться с комбинацией (или комплексом) UL130-UL131A, в то время как другое антитело может связываться с gH. В дополнительном примере одно антитело может связываться с комбинацией (или комплексом) UL130-UL131A, в то время как другое антитело может связываться с gB. Таким образом, одно антитело может быть направлено на механизм, опосредующий инфицирование фибробластов, в то время как другое антитело может быть направлено на механизм, опосредующий инфицирование эндотелиальных клеток. Для оптимального клинического эффекта полезным может быть применение механизмов инфицирования и сохранения hCMV.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены (в комбинации или отдельно) с другими лекарственными средствами, например с химиотерапевтическими соединениями, с лучевой терапией и т.д. Предпочтительные лекарственные соединения включают противовирусные соединения, такие как ганцикловир, фоскамед и цидофовир. Такая комбинированная терапия обеспечивает аддитивное или синергическое повышение терапевтической активности по отношению к индивидуальным лекарственным средствам при введении по отдельности. Термин "синергия" используют для описания комбинированного эффекта двух или более активных средств, превышающего сумму индивидуальных эффектов каждого соответствующего активного средства. Таким образом, если комбинированный эффект двух или более средств приводит к "синергическому ингибированию" активности или процесса, подразумевается, что ингибирование активности или процесса превышает сумму ингибирующих эффектов каждого соответствующего активного средства. Термин "синергический лечебный эффект" относится к лечебному эффекту, наблюдаемому при использовании комбинации двух иди более лекарственных средств, где лечебный эффект (который измеряют при помощи любого количества параметров) превышает сумму отдельных лечебных эффектов, наблюдаемых при использовании соответствующих отдельных лекарственных средств.
Антитела могут быть введены тем пациентам, для которых предварительно было показано отсутствие реакции на лечение hCMV инфекции, т.е. было показано, что они не поддаются анти-hCMV лечению. Такое лечение может включать предварительное лечение противовирусным агентом. Это может быть вызвано, например, инфекцией стойкого к противовирусному лечению штамма hCMV.
В композиции в соответствии с настоящим изобретением, которая включает антитела в соответствии с настоящим изобретением, антитела предпочтительно составляют, как минимум, 50% по массе (например, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% или более) от общего содержания протеина в композиции. Антитела, таким образом, находятся в очищенной форме.
Настоящее изобретение обеспечивает способ получения фармацевтического средства, включающий стадии: (i) получения антитела в соответствии с настоящим изобретением; и (ii) смешивания очищенного антитела с одним или более фармацевтически приемлемым носителем.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения фармацевтического средства, включающий стадию смешивания антитела с одним или более фармацевтически приемлемым носителем, где антитело является моноклональным антителом, полученным из трансформированной В-клетки в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, процедуры для первого получения моноклонального антитела и последующего получения фармацевтического средства могут быть осуществлены в совершенно разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
В качестве альтернативы доставке антител или В-клеток в лечебных целях возможно доставлять субъекту нуклеиновую кислоту (типично, ДНК), кодирующую рассматриваемое моноклональное антитело (или его активный фрагмент), таким образом, что нуклеиновая кислота может быть экспрессирована в организме субъекта in situ для обеспечения желаемого лечебного эффекта. Приемлемая генная терапия и векторы доставки нуклеиновых кислот известны из уровня техники.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть иммуногенной композицией, более предпочтительно композицией вакцины, содержащей антиген, содержащий эпитоп, обнаруженный в комбинации hCMV протеинов UL130 и UL131A. Альтернативная композиция может содержать (i) антиген, содержащий эпитоп, обнаруженный в комбинации hCMV протеинов UL130 и UL131A, и (ii) антиген, содержащий эпитоп, обнаруженный в hCMV gB. Вакцины в соответствии с настоящим изобретением могут быть профилактическими (т.е. предотвращать инфицирование) или лечебными (т.е. для лечения инфекции), но, типично, будут профилактическими.
Композиции могут включать антимикробные композиции, в особенности, если они упакованы в формат для многократного приема.
Композиция может содержать детергент, например Tween (полисорбат), такой как Tween 80. Детергенты, в общем, присутствуют в малых количествах, например <0,01%.
Композиции могут содержать соли натрия (например, хлорид натрия) для обеспечение тоничности. Концентрация 10±2 мг/мл NaCl является типичной.
Композиции могут содержать сахарный спирт (например, маннитол) или дисахарид (например, сахарозу или трегалозу), например, приблизительно 15-30 мг/мл (например, 25 мг/мл), в особенности, если они предназначены для лиофилизации, или содержать вещество, восстановленное из лиофилизованного вещества. Значение рН композиции для лиофилизации может быть отрегулировано перед лиофилизацией до значения приблизительно 6,1.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут также содержать одно или более иммунорегуляторных средств. Предпочтительно, одно или более иммунорегуляторных средств включает адъювант.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением будут предпочтительно вызывать опосредованный клетками иммунный отклик, а также гуморальный иммунный отклик для эффективной направленности на hCMV инфекцию. Данный иммунный отклик будет предпочтительно индуцировать длительный иммунитет, опосредованный антителами (например, нейтрализующими), и клетками, которые могут быстро реагировать на воздействие hCMV.
Лечение и медицинское применение
Антитела в соответствии с настоящим изобретением или их фрагменты могут быть применены для лечения hCMV инфекции, для профилактики hCMV инфекции или для диагностики hCMV инфекции.
Способы диагностики могут включать контактирование антитела или фрагмента антитела с пробой. Такие пробы могут быть пробами тканей, взятых из, например, слюнных желез, легких, печени, панкреазы, почек, уха, глаза, плаценты, пищеварительного тракта, сердца, яичников, гипофиза, надпочечной железы, щитовидной железы, мозгов или кожи. Способы диагностики могут также включать детектирование комплекса антиген/антитело.
Поэтому изобретение обеспечивает (i) антитело в соответствии с настоящим изобретением, (ii) клон иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением, (iii) эпитоп, способный к связыванию одного из 1F11 или 2F4, или (iv) эпитоп, способный к связыванию одного из 5А2 или 9А11, для применения в терапии.
Также обеспечен способ лечения пациента, включающий введение данному пациенту (i) антитела в соответствии с настоящим изобретением, (ii) эпитопа, способного к связыванию одного из 1F11 или 2F4, или (iii) эпитопа, способного к связыванию одного из 5А2 или 9А11.
Настоящее изобретение также обеспечивает применение (i) антитела в соответствии с настоящим изобретением, (ii) клона иммортализованных В-клеток в соответствии с настоящим изобретением, (iii) эпитопа, способного к связыванию одного из 1F11 или 2F4, (iv) антитела, связывающего эпитоп, способный к связыванию одного из 1F11 или 2F4, (v) эпитопа, способного к связыванию одного из 5А2 или 9А11, или (vi) антитела, которое связывается с эпитопом, способным к связыванию одного из 5А2 или 9А11, при производстве лекарственного средства для профилактики или лечения hCMV инфекции.
Настоящее изобретение обеспечивает композицию в соответствии с настоящим изобретением для применения в качестве лекарственного средства. Оно также обеспечивает применение антитела в соответствии с настоящим изобретением и/или протеина, содержащего эпитоп, с которым связывается данное антитело, при производстве лекарственного средства для лечения пациента и/или диагностики пациента. Оно также обеспечивает способ лечения субъекта и/или осуществления диагностики субъекта, включающий стадию введения субъекту композиции в соответствии с настоящим изобретением. Субъектом, предпочтительно, является человек. Один из способов проверки эффективности терапевтического лечения включает мониторинг симптомов заболевания после введения композиции в соответствии с настоящим изобретением. Лечение может быть осуществлено в режиме введения однократных доз или в режиме введения многократных доз. Настоящее изобретение является полезным для CMV инфекции.
Предпочтительно, антитело, клон иммортализованных В-клеток, эпитоп или композицию в соответствии с настоящим изобретением, вводят группе субъектов, в особенности, имеющих риск возникновения или чувствительных к hCMV инфекции. Такие группы субъектов включают субъектов со сниженным иммунитетом, таких как страдающие от ВИЧ или проходящие иммуноподавляющую терапию, как, например, пациенты после трансплантации.
Антитела в соответствии с настоящим изобретением могут быть применены для пассивной иммунизации.
Антитела и их фрагменты, как описано в данном изобретении, могут быть также применены в наборе для диагностики hCMV инфекции.
Эпитопы, способные к связыванию моноклонального антитела 1F11 или 2F4, описанные в данном изобретении, могут быть применены в наборе для мониторинга эффективности процедур вакцинации путем детектирования наличия защитных анти-hCMV антител.
Эпитопы, способные к связыванию моноклонального антитела 5А2 или 9А11, описанные в данном изобретении, могут быть применены в наборе для мониторинга эффективности процедур вакцинации путем детектирования наличия защитных анти-hCMV антител.
Антитела и их фрагменты, как описано в данном изобретении, могут быть также применены в наборе для мониторинга производства вакцины с желаемой иммуногенностью.
Настоящее изобретение также обеспечивает способ получения фармацевтических средств, включающий стадию смешивания моноклонального антитела с одним или более фармацевтически приемлемым носителем, где моноклональное антитело является моноклональным антителом, которое было получено от носителя экспрессии в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, процедуры для первого получения моноклонального антитела (например, его экспрессии и/или очистки) и его последующего смешивания с фармацевтическим носителем (носителями) могут быть проведены в разное время разными людьми в разных местах (например, в разных странах).
Начиная с трансформированной В-клетки в соответствии с настоящим изобретением, различные стадии культивирования, субкультивирования, клонирования, субклонирования, секвенирования, получения нуклеиновых кислот и т.д. могут быть осуществлены для сохранения антитела, экспрессирующегося трансформированной В-клеткой, с необязательной оптимизацией на каждой стадии. В предпочтительном осуществлении вышеуказанные способы дополнительно включают методы оптимизации (например, созревание или оптимизацию афинности), которые применяют к нуклеиновым кислотам, кодирующим антитело. Изобретение охватывает все клетки, нуклеиновые кислоты, векторы, последовательности, антитела и т.д., которые используют и получают на этих стадиях.
Во всех таких способах нуклеиновая кислота, которую применяют в носителе экспрессии, может быть обработана между стадиями (ii) и (iii) для вставки, исключения или изменения конкретных последовательностей нуклеиновых кислот. Изменения в результате такой обработки включают, но не ограничиваются приведенным, изменения для введения сайтов рестрикции, изменения применения кодонов, для добавления или оптимизации регуляторных последовательностей транскрипции и/или трансляции и т.д. Также возможным является изменение нуклеиновой кислоты для изменения кодированных аминокислот. Например, может быть полезным введение одного или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) аминокислотных замещений, одной или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) аминокислотных делеций и/или одной или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 и т.д.) аминокислотных вставок в аминокислотную последовательность антитела. Такие точечные мутации могут модифицировать функции эффектора, антигенсвязывающую афинность, пост-трансляционные модификации, иммуногенность и т.д., могут вводить аминокислоты для присоединения ковалентных групп (например, меток) или могут вводить маркеры (например, с целью очистки). Мутации могут быть введены в специфичные сайты или могут быть введены случайным образом, с последующим отбором (например, молекулярная эволюция).
Общая часть
Термин "содержащий" охватывает "включающий", а также "состоящий", например, композиция "содержащая" X, может состоять исключительно из Х или может содержать нечто дополнительное, например Х+Y.
Словосочетание "по существу" не исключает "полностью", например, композиция, которая "по существу не содержит" Y, может вообще не содержать Y. При необходимости, слово "по существу" может отсутствовать в определении в соответствии с настоящим изобретением.
Термин "приблизительно" по отношению к численному значению x означает, например, x±10%.
Термин "заболевание", как используют в данной заявке, предназначен для того, чтобы быть, в общем, синонимичным, и его используют в качестве взаимозаменяемого с терминами "расстройство" и "состояние" (как в медицинском состоянии), в том, что все эти термины отражают ненормальное состояние человеческого или животного организма или одной из его частей, которое ухудшает нормальное функционирование, которые типично проявляются путем различения признаков и симптомов, и приводят к уменьшению продолжительности жизни и качества жизни человека или животного.
Как используют в данной заявке, ссылка на термин "лечение" пациента предназначена для включения предупреждения и профилактики. Термин "пациент" означает всех млекопитающих, включая людей. Примеры пациентов включают людей, коров, собак, котов, коней, козлов, овец, свиней и кроликов. Предпочтительно, пациентом является человек.
Краткое описание чертежей
На Фигуре 1 показан SDS-PAGE, где продемонстрировано, что человеческие моноклональные антитела (1) 1FI1 и (2) 2F4 осаждают комплексы hCMV протеинов, в то время как нерелевантные IgG не осаждают.
На Фигуре 2 показан FACS-анализ, где продемонстрировано, что человеческие моноклональные антитела (А) 1F11 и 2F4 и (В) 5А2 и 9А11 распознают конформационный эпитоп, полученный из генных продуктов UL130 и UL131A.
На Фигуре 3 показаны нуклеотидные и аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей 1F11 и 2F4. CDR последовательности выделены жирным шрифтом.
На Фигуре 4 показан FACS-анализ, где продемонстрировано, что человеческие моноклональные антитела 7Н3, 10С6, 5F1 и 6В4 распознают эпитоп hCMV протеина gB.
На Фигуре 5 показаны нуклеотидные и аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей 5А2. CDR последовательности выделены жирным шрифтом.
Способы реализации изобретения
Пример 1: Клонирование В-клеток и скрининг нейтрализующей активности по отношению к hCMV
Было идентифицировано два донора, имеющих высокие титры нейтрализующих антител к hCMV в сыворотке. В-клетки памяти выделяли и иммортализовали при помощи EBV и CpG, как описано в ссылке 36. Кратко, В-клетки памяти выделяли путем негативного отбора при помощи подложек CD22, с последующим удалением IgM+, IgD+ IgA+ В-клеток, используя специфичные антитела и клеточный сортинг. Отсортированные клетки (IgG+) иммортализовали EBV в присутствии CpG 2006 и облученных аллогенных моноядерных клеток. Репликатные культуры, каждая из которых содержит 50 В-клеток памяти, помещали в двадцать планшет на 96 лунок с U-образным дном. Через две недели культуральные супернатанты собирали и анализировали на предмет их способности к нейтрализации инфицирования hCMV фибробластов или эпителиальных клеток путем проведения отдельных анализов. Клоны В-клеток выделяли из позитивных поликлональных культур, как описано в ссылке 36. Концентрации IgG в супернатанте отобранных клонов определяли при помощи IgG-специфичного анализа ELISA.
Для анализа нейтрализации вирусов оттитрованное количество клинического изолята hCMV смешивали с равным объемом культурального супернатанта или с разведениями человеческих сывороток, содержащих нейтрализующие антитела. Через 1 час инкубации при комнатной температуре смесь добавляли к конфлюэнтным монослоям эндотелиальных клеток (например, HUVEC клеток) или фибробластов в планшетах на 96 лунок с плоским дном и инкубировали при 37°C в течение двух дней. Супернатант удаляли, клетки фиксировали охлажденным метанолом и окрашивали смесью мышиных моноклональных антител к hCMV ранним антигенам, а затем меченным флуоресцеином козлиным антимышиным Ig. Планшеты анализировали при помощи флуоресцентного микроскопа. В отсутствие нейтрализующих антител количество инфицированных клеток составляло ~1000/поле, в то время как в присутствии насыщенных концентраций нейтрализующих антител инфекция была полностью ингибирована. Нейтрализующий титр показан как концентрация антитела (мкг/мл), при которой происходит 50% уменьшение hCMV инфекции.
В Таблице 2 показано, что были идентифицированы три разных типа антител. Антитела, которое могут нейтрализовать инфицирование фибробластов, антитела, которые могут нейтрализовать инфицирование эндотелиальных клеток, и антитела, которые могут нейтрализовать инфицирование и тех, и других. Это согласуется с ранее полученными данными о том, что различные протеины отвечают за тропизм по отношению к конкретному типу клеток [7]. Дополнительно к нейтрализации эндотелиальных клеток, наблюдали 1F11 и 2F4 для нейтрализации инфицирования эпителиальных клеток, таких как ретинальные клетки, и дендровидных клеток (данные не показаны).
Таблица 2 | |||
50% нейтрализация (мкг/мл) | |||
Клон | Специфичность | Фибробласты | Эндотелиальные клетки |
1F11 | UL130/UL131A | * | 0,001 |
2F4 | UL130/UL131A | * | 0,003 |
5А2 | UL130/UL131A | * | 0,002 |
9А11 | UL130/UL131A | * | 0,001 |
7Н3 | gB | 2 | * |
10С6 | gB | 0,3 | 0,3 |
5F1 | gB | 0,3 | 0,3 |
6В4 | gB | 0,5 | 2 |
Cytotec^ | 5000 | 50 | |
Донорская сыворотка | 33 | 1 | |
* отсутствие нейтрализации при наиболее высоких проанализированных концентрациях (т.е. >2 мкг/мл). | |||
^ Cytotect (Biotest) является пулом hCMV гипериммунного IgG. |
Некоторые антитела нейтрализовали инфицирование как фибробластов, так и эндотелиальных клеток при концентрациях IgG в диапазоне от 0,3 до 0,5 мкг/мл. Другие антитела (1F11, 5А2, 9А11 и 2F4) не были способны нейтрализовать инфицирование hCMV фибробластов, но нейтрализовали инфицирование эндотелиальных клеток при чрезвычайно низких концентрациях в диапазоне от 0,001 до 0,004 мкг/мл (более чем в 1000 раз более эффективно, чем ранее известные антитела).
Следует отметить, что при изначальной характеристике было определено, что 5F1 связывается с эпитопом gB, а не gH. Это согласуется с результатами, которые демонстрируют, что блокирование gB позволяет нейтрализацию инфицирования фибробластов, которую наблюдали для 7Н3, 10С6 и 6В4.
Пример 2: Идентификация антигенов-мишеней, распознанных моноклональными антителами
Человеческие MRC-9 фибробласты инфицировали клиническим hCMV изолятом. Через 3 дня клетки метаболически помечали 35S метионином и цистеином. После предварительного выведения лизата добавляли человеческие моноклональные антитела 1F11 и 2F4, а иммунокомплексы осаждали путем добавления подложек протеина А и разлагали на SDS-PAGE (Фигура 1). Человеческое моноклональное IgG антитело с нерелевантной специфичностью использовали в качестве негативного контроля. Результаты показывают, что человеческие моноклональные антитела 1F11 и 2F4 осаждают комплексы CMV протеинов.
Для картирования специфичности человеческих моноклональных антител конструировали векторы экспрессии, кодирующие маркированные геммаглютинином (НА) UL128Δ1-27, UL130Δ1-25 и UL131AΔ1-18 hCMV протеины, у которых отсутствовали сигнальные пептиды. HEK293T клетки трансфицировали данными векторами отдельно или в комбинации. Через 36 часов клетки фиксировали, перегородку делали проницаемой и окрашивали их анти-НА антителом (для контроля эффективности трансфекции) и моноклональным антителом, а затем козлиным античеловеческим IgG. HuMab IgG, обладающие нерелевантной специфичностью, использовали в качестве негативного контроля. На Фигуре 2А показано, что человеческие моноклональные антитела 1F11 и 2F4 распознают конформационный эпитоп, созданный UL130 и UL131A генными продуктами. На Фигуре 2В показано, что человеческие моноклональные антитела 5А2 и 9А11 распознают конформационный эпитоп, полученный из UL130 и UL131A генных продуктов.
Заключение
Вышеуказанные результаты определяют два человеческих моноклональных антитела, способные к высокоэффективной нейтрализации и селективности по отношению к hCMV инфекции человеческих эндотелиальных клеток. Для идентификации распознанного эпитопа антитела анализировали на их способность к иммуноосаждению протеинов из инфицированных клеток hCMV (Фигура 1). Человеческие Mabs 1F11 и 2F4 осаждали несколько протеинов, имеющих кажущуюся молекулярную массу ~15, 33-35 и ~100 кДа. Данные модели согласуются с осаждением комплекса, содержащего gH, gL и UL128, UL130 и, возможно, UL131 А.
Для более точного определения мишени таких антител мы охарактеризовали их способность к окрашиванию HEK293T клеток, трансфицированных векторами, кодирующими НА-маркированный UL128, UL130 и UL131A. Как показано на Фигуре 2А, 1F11 и 2F4 окрашивали только клетки, которые коэкспрессировали UL130 и UL131A, что предполагает распознавание ими конформационного эпитопа, определенного такими двумя генными продуктами. Данное заключение подтверждено тем фактом, что данные антитела не реагируют в анализе вестерн-блоттинг с лизатами инфицированных или трансфицированных клеток в условиях восстановления и денатурации (данные не показаны).
Аналогичные результаты получали для 5А2 и 9А11. На Фигуре 2b показано, что такие антитела окрашивали только клетки, коэкспрессирующие UL130 и UL131A, что предполагает распознавание ими конформационного эпитопа, определенного такими двумя генными продуктами.
Пример 3: Дополнительная идентификация антигенов-мишеней, распознанных моноклональными антителами
Для картирования специфичности человеческих моноклональных антител, нейтрализующих инфицирование фибробластов, был сконструирован вектор экспрессии, кодирующий полноразмерный gB. НЕК293Т клетки были трансфицированы данным вектором. Через 36 часов клетки фиксировали, нарушали проницаемость стенок и окрашивали человеческим моноклональным антителом (HuMab), а затем козлиным античеловеческим IgG. На Фигуре 4 показано, что моноклональные антитела 7Н3, 10С6, 5F1 и 6В4 (но не IgG антитело, обладающее нерелевантной специфичностью) специфично окрашивали клетки, трансфицированные gB, что указывает на то, что они распознают эпитоп gB. Следует особо отметить, что моноклональные антитела 10С6, 5F1 и 6В4 нейтрализуют инфицирование фибробластов и эндотелиальных клеток, в то время как моноклональное антитело 7Н3 нейтрализует инфицирование фибробластов (но не эндотелиальных клеток). Настоящее изобретение предполагает, что моноклональные антитела 10С6, 5F1 и 6В4 связываются с функциональным эпитопом gB, отличным от эпитопа, связанного моноклональным антителом 7Н3.
Будет понятно, что изобретение было описано только при помощи примеров, а модификации могут быть сделаны, не выходя за рамки и сущность настоящего изобретения.
Claims (13)
1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, нейтрализующее инфицирование человеческим цитомегаловирусом (hCMV) эндотелиальных клеток, причем концентрация антитела, необходимая для 50%-ной нейтрализации hCMV, составляет 0,003 мкг/мл или менее, содержащее:
а) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, и SEQ ID NO:3 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, указанные в SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6 соответственно;
б) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цели, указанные в SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 и SEQ ID NO:16 соответственно; или
в) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34 и SEQ ID NO:35 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, указанные в SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37 и SEQ ID NO:38 соответственно.
а) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, и SEQ ID NO:3 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, указанные в SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:6 соответственно;
б) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 и SEQ ID NO:13 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цели, указанные в SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15 и SEQ ID NO:16 соответственно; или
в) последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, указанные в SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34 и SEQ ID NO:35 соответственно, и последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, указанные в SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37 и SEQ ID NO:38 соответственно.
2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, отличающееся тем, что оно специфично для комбинации hCMV протеинов ULI30 и UL131A, при этом указанное антитело ингибирует инфекции клеток человеческим цитомегаловирусом (hCMV).
3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, отличающееся тем, что концентрация антитела, необходимая для 50%-ного ингибирования hCMV, составляет 0,002 мкг/мл или менее.
4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.2, отличающееся тем, что антитело связывается с конформационным эпитопом, образованным двумя указанными протеинами.
5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, отличающееся тем, что содержит:
а) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:8 соответственно;
б) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:17 и SEQ ID NO:18 соответственно; или
в) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:39 и SEQ ID NO:40 соответственно.
а) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:7 и SEQ ID NO:8 соответственно;
б) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:17 и SEQ ID NO:18 соответственно; или
в) тяжелую и легкую цепи, содержащие последовательности SEQ ID NO:39 и SEQ ID NO:40 соответственно.
6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что антитело представляет собой человеческое антитело, моноклональное антитело, одноцепочное антитело, Fab, Fab', F(ab')2, Fv или scFv.
7. Изолированная молекула нуклеиновой кислоты для экспрессии антитела, связывающегося с hCMV, содержащая нуклеотидную последовательность, обеспечивающую кодирование вариабельных регионов тяжелой и легкой цепей антитела или фрагмента антитела по любому из пп.1-5, при этом указанная нуклеотидная последовательность включает последовательности SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10, или SEQ ID NO:19 и SEQ ID NO:20, или SEQ ID NO:41 и SEQ ID NO:42, соответственно кодирующие вариабельные регионы тяжелой и легкой цепей.
8. Изолированная клетка для экспрессии антитела, связывающегося с hCMV, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.7.
9. Композиция для профилактики или лечения hCMV-инфекции, содержащая терапевтически эффективное количество антитела или антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.
10. Композиция по п.9, отличающаяся тем, что дополнительно содержит терапевтически эффективное количество второго анти-hCMV-антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, ингибирующего hCMV-инфекцию.
11. Композиция по п.10, отличающаяся тем, что второе антитело специфично к hCMV-протеину gB.
12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5 для лечения hCMV-инфекции.
13. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-5 или нуклеиновой кислоты по п.7 для производства лекарственного средства для лечения hCMV-инфекции.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0700133.2 | 2007-01-04 | ||
GBGB0700133.2A GB0700133D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-01-04 | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
PCT/IB2008/001111 WO2008084410A2 (en) | 2007-01-04 | 2008-01-03 | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009129403A RU2009129403A (ru) | 2011-02-10 |
RU2469045C2 true RU2469045C2 (ru) | 2012-12-10 |
Family
ID=37801734
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009129403/10A RU2469045C2 (ru) | 2007-01-04 | 2008-01-03 | Антитела, нейтрализующие цитомегаловирус человека, и их применение |
Country Status (32)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US7955599B2 (ru) |
EP (3) | EP2118140B1 (ru) |
JP (2) | JP5710123B2 (ru) |
KR (2) | KR101541927B1 (ru) |
CN (1) | CN101657467B (ru) |
AU (1) | AU2008204258B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0806185A2 (ru) |
CA (1) | CA2673755C (ru) |
CO (1) | CO6220862A2 (ru) |
CR (1) | CR10961A (ru) |
CY (1) | CY1114271T1 (ru) |
DK (1) | DK2118140T3 (ru) |
EC (1) | ECSP099547A (ru) |
ES (2) | ES2426987T3 (ru) |
GB (1) | GB0700133D0 (ru) |
GT (1) | GT200900188A (ru) |
HK (2) | HK1139158A1 (ru) |
HR (1) | HRP20130877T1 (ru) |
IL (1) | IL199585A (ru) |
MA (1) | MA31225B1 (ru) |
MX (1) | MX2009007320A (ru) |
MY (2) | MY150709A (ru) |
NZ (1) | NZ578844A (ru) |
PL (1) | PL2118140T3 (ru) |
PT (2) | PT2118140E (ru) |
RU (1) | RU2469045C2 (ru) |
SG (3) | SG191635A1 (ru) |
SI (1) | SI2118140T1 (ru) |
TN (1) | TN2009000285A1 (ru) |
UA (1) | UA100682C2 (ru) |
WO (1) | WO2008084410A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200905408B (ru) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7704510B2 (en) * | 2006-06-07 | 2010-04-27 | The Trustees Of Princeton University | Cytomegalovirus surface protein complex for use in vaccines and as a drug target |
US7947274B2 (en) | 2007-01-04 | 2011-05-24 | Humabs, LLC. | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
GB0700133D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Humabs Llc | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
WO2009021150A2 (en) | 2007-08-08 | 2009-02-12 | California Pacific Medical Center | Platelet derived growth factor receptor supports cytomegalovirus infectivity |
AU2008359583B2 (en) * | 2008-07-16 | 2012-04-05 | Institute For Research In Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
AU2012203417B2 (en) * | 2008-07-16 | 2014-07-10 | Institute For Research In Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and use thereof |
EP3178845A1 (en) | 2008-07-16 | 2017-06-14 | Institute for Research in Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and use thereof |
CA2731686C (en) | 2008-07-25 | 2020-04-07 | Institute For Research In Biomedicine | Neutralizing anti-influenza a virus antibodies and uses thereof |
US8871207B2 (en) | 2008-07-25 | 2014-10-28 | Humabs, LLC | Neutralizing anti-influenza A virus antibodies and uses thereof |
EP2420572B1 (en) | 2009-04-01 | 2015-03-25 | Evec Incorporated | Monoclonal antibody capable of binding to specific discontinuous epitope occurring in ad1 region of human cytomegalovirus gb glycoprotein, and antigen-binding fragment thereof |
SG181901A1 (en) | 2009-12-23 | 2012-08-30 | 4Antibody Ag | Binding members for human cytomegalovirus |
RU2613421C2 (ru) | 2010-06-16 | 2017-03-16 | ТРЕЛЛИС БАЙОСАЙЕНС, ЭлЭлСи | Высокоаффинные антитела человека к белку gb цитомегаловирусу (cmv) человека |
HUE044089T2 (hu) | 2011-07-18 | 2019-09-30 | Inst Res Biomedicine | Neutralizáló anti-influenza A antitestek és alkalmazásaik |
US9139659B2 (en) | 2012-03-28 | 2015-09-22 | Genentech, Inc. | Idiotypic antibodies and uses thereof |
WO2014099908A1 (en) * | 2012-12-17 | 2014-06-26 | Genentech, Inc. | Methods for inhibiting viral infection in transplant patients |
SG11201602522VA (en) | 2013-10-02 | 2016-04-28 | Medimmune Llc | Neutralizing anti-influenza a antibodies and uses thereof |
WO2016011035A2 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Medlmmune, Llc | Neutralizing anti-influenza b antibodies and uses thereof |
US20160069643A1 (en) * | 2014-09-06 | 2016-03-10 | Philip Lyren | Weapon Targeting System |
MX2017015189A (es) | 2015-06-01 | 2018-04-13 | Medimmune Llc | Neutralizacion de moleculas de union anti-influenza y usos de las mismas. |
KR20180101483A (ko) | 2016-01-08 | 2018-09-12 | 에임 쎄라퓨틱스 비.브이. | 치료적 항-cd9 항체 |
CN116271017A (zh) | 2016-01-13 | 2023-06-23 | 免疫医疗有限责任公司 | 治疗甲型流感的方法 |
US10611800B2 (en) | 2016-03-11 | 2020-04-07 | Pfizer Inc. | Human cytomegalovirus gB polypeptide |
US11230591B2 (en) | 2016-04-20 | 2022-01-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | CMV neutralizing antigen binding proteins |
EP3749690A1 (en) * | 2018-02-05 | 2020-12-16 | Stichting VU | Inverse agonistic anti-us28 antibodies |
CN109580944A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-04-05 | 潍坊医学院 | 一种人巨细胞病毒检测试纸及其制造方法 |
US11629172B2 (en) | 2018-12-21 | 2023-04-18 | Pfizer Inc. | Human cytomegalovirus gB polypeptide |
CN109738631A (zh) * | 2019-01-21 | 2019-05-10 | 潍坊医学院 | 一种人巨细胞病毒IgM抗体检测试纸的制备方法 |
CN112898414B (zh) * | 2019-12-04 | 2024-05-10 | 珠海泰诺麦博制药股份有限公司 | 抗人巨细胞病毒抗体及其用途 |
US11857622B2 (en) | 2020-06-21 | 2024-01-02 | Pfizer Inc. | Human cytomegalovirus GB polypeptide |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994009136A1 (en) * | 1992-10-15 | 1994-04-28 | Scotgen Limited | Recombinant humanized anti-cytomegalovirus antibodies |
US5750106A (en) * | 1993-01-28 | 1998-05-12 | Novartis Ag | Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus |
RU2239453C2 (ru) * | 2002-12-03 | 2004-11-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие " Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам " Микроген" | Препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса и способ его получения |
Family Cites Families (86)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1061943A (en) | 1964-09-10 | 1967-03-15 | Carter S Ink Co | Marking composition |
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3766162A (en) | 1971-08-24 | 1973-10-16 | Hoffmann La Roche | Barbituric acid antigens and antibodies specific therefor |
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4294817A (en) | 1977-11-25 | 1981-10-13 | International Diagnostic Technology, Inc. | Method of fluoro immunoassay |
US4233402A (en) | 1978-04-05 | 1980-11-11 | Syva Company | Reagents and method employing channeling |
US4313927A (en) | 1979-10-19 | 1982-02-02 | Ames-Yissum Ltd. | Immunoassay method for detecting viral antibodies in whole blood samples |
US4334016A (en) | 1980-06-19 | 1982-06-08 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Human osteogenic sarcoma cell line and use thereof for immunofluorescent antibody test |
JPS5896026A (ja) | 1981-10-30 | 1983-06-07 | Nippon Chemiphar Co Ltd | 新規ウロキナ−ゼ誘導体およびその製造法ならびにそれを含有する血栓溶解剤 |
US4609546A (en) | 1982-06-24 | 1986-09-02 | Japan Chemical Research Co., Ltd. | Long-acting composition |
FR2543570B1 (fr) | 1983-03-31 | 1985-08-09 | Pasteur Institut | Anticorps monoclonaux anticytomegalovirus humains, hybridomes secreteurs de ces anticorps et polypeptides porteurs d'un determinant antigenique sequentiel de cytomegalovirus humains |
US4617379A (en) | 1983-06-14 | 1986-10-14 | Miles Laboratories, Inc. | High titer cytomegalovirus immune serum globulin |
GB8404368D0 (en) | 1984-02-20 | 1984-03-28 | Cogent Ltd | Monoclonal antibodies to human cytomegalovirus |
US6100064A (en) | 1984-04-06 | 2000-08-08 | Chiron Corporation | Secreted viral proteins useful for vaccines and diagnostics |
FR2563630B1 (fr) | 1984-04-27 | 1988-02-19 | Pasteur Institut | Anticorps monoclonaux anticytomegalovirus et procedes pour le diagnostic in vitro des infections par les cytomegalovirus humains et d'une proteine-kinase inductible par les cytomegalovirus et susceptible d'etre reconnue par les susdits anticorps monoclonaux |
US4783399A (en) | 1984-05-04 | 1988-11-08 | Scripps Clinic And Research Foundation | Diagnostic system for the detection of cytomegalovirus |
US4743562A (en) | 1984-08-21 | 1988-05-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Purified human cytomegalovirus protein |
US5807715A (en) | 1984-08-27 | 1998-09-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin |
DE3581400D1 (de) | 1984-09-28 | 1991-02-21 | Teijin Ltd | Maus/mensch-hybridoma mit erzeugung von antiviralen menschlichen antikoerpern, deren herstellung und antivirale menschliche monoklonale antikoerper. |
US4808518A (en) | 1985-02-11 | 1989-02-28 | University Of Tennessee Research Corporation | Recovery of cytomegalovirus antigen and use thereof in an assay |
US4804627A (en) | 1985-05-09 | 1989-02-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method for cloning lymphoblastoid cells |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
KR910000736B1 (ko) | 1985-12-06 | 1991-02-06 | 데이진 가부시키가이샤 | 사이토메갈로 바이러스에 대한 사람·모노클로날 항체와 그 제조방법 |
US4831175A (en) | 1986-09-05 | 1989-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate |
US5153311A (en) | 1986-11-24 | 1992-10-06 | The Children's Hospital, Incorporated | Immunogenic glycoproteins of human cytomegalovirus gCII |
US5126130A (en) | 1986-11-24 | 1992-06-30 | The Childrens Hospital Incorporated | Monoclonal antibodies reactive with specific antigenic sites on human cytomegalovirus glycoprotein a |
LU86752A1 (fr) | 1987-01-30 | 1988-08-23 | Univ Bruxelles | Procede de production d'anticorps monoclonaux humains(igg)anticytomegalovirus et anticorps monoclonaux ainsi obtenus |
NZ226694A (en) | 1987-10-28 | 1994-04-27 | Oncogen | Human immunoglobulin produced by recombinant dna techniques |
US5180813A (en) | 1989-03-24 | 1993-01-19 | University Of Iowa Research Foundation | Early envelope glycoprotein of human cytomegalovirus (hmcv) and monoclonal antibodies to the glycoproteins |
US5194654A (en) | 1989-11-22 | 1993-03-16 | Vical, Inc. | Lipid derivatives of phosphonoacids for liposomal incorporation and method of use |
WO1991004277A1 (en) | 1989-09-14 | 1991-04-04 | Children's Biomedical Research Institute | Monoclonal antibodies specific to cytomegalovirus glycoprotein |
WO1991005876A1 (en) | 1989-10-20 | 1991-05-02 | Children's Biomedical Research Institute | Human cytomegalovirus-specific monoclonal antibody cocktail |
GB9008223D0 (en) | 1990-04-11 | 1990-06-13 | Royal Free Hosp School Med | Improvements relating to the detection of viruses |
DE4035174A1 (de) | 1990-11-06 | 1992-05-07 | Biotest Ag | Verfahren zur bestimmung von proteinen in koerperfluessigkeiten und mittel zur durchfuehrung des verfahrens |
US5997878A (en) | 1991-03-07 | 1999-12-07 | Connaught Laboratories | Recombinant poxvirus-cytomegalovirus, compositions and uses |
JPH053794A (ja) * | 1991-06-26 | 1993-01-14 | Green Cross Corp:The | 抗サイトメガロウイルスヒトモノクローナル抗体およびその産生細胞 |
DE4128684A1 (de) | 1991-08-29 | 1993-03-04 | Behringwerke Ag | Hcmv-spezifische peptide, mittel dazu und ihre verwendung |
ATE173543T1 (de) | 1992-04-10 | 1998-12-15 | Thomas Totterman | Verfahren zum nachweis einer cmv-infektion |
SE9201281L (sv) | 1992-04-23 | 1993-10-24 | Bioinvent Int Ab | Nya humana monoklonala antikroppar och förfarande för framställning därav |
JPH05260961A (ja) * | 1992-05-21 | 1993-10-12 | Teijin Ltd | サイトメガロウイルスに対するヒト・モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ |
WO1994016724A1 (en) | 1993-01-21 | 1994-08-04 | Zaia John A | Prevention and treatment of cytomegalovirus using aminopeptidase |
WO1994016730A1 (en) | 1993-01-28 | 1994-08-04 | Sandoz Pharmaceutical Corporation | Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus |
WO1994025490A1 (en) | 1993-04-30 | 1994-11-10 | The Scripps Research Institute | Human monoclonal antibodies to human cytomegalovirus, and methods therefor |
US5595721A (en) | 1993-09-16 | 1997-01-21 | Coulter Pharmaceutical, Inc. | Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20 |
EP0702083A3 (de) | 1994-07-26 | 1997-01-15 | Biotest Ag | Polypeptide und Fusionsproteine bestehend aus dem UL 57 Leserahmen bzw. dem C-terminalen Bereich des Tegumentproteins pp150 aus HCMV, entsprechende Oligonucleotide und Nachweis reagentien |
US5783383A (en) | 1995-05-23 | 1998-07-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of detecting cytomegalovirus (CMV) |
US6019980A (en) | 1995-06-07 | 2000-02-01 | Connaught Laboratories Limited | Nucleic acid respiratory syncytial virus vaccines |
US5800981A (en) | 1996-02-22 | 1998-09-01 | University Of Limburg | Human cytomegalovirus antigen and its use |
WO1998002746A1 (en) | 1996-07-12 | 1998-01-22 | Akzo Nobel N.V. | Peptide reagent for the detection of human cytomegalovirus (cmv) |
WO1998006408A1 (en) | 1996-08-14 | 1998-02-19 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Methods and compositions for preventing or retarding the development of atherosclerotic lesions |
EP1003841A4 (en) | 1997-01-30 | 2002-04-17 | Cedars Sinai Medical Center | CREATION OF A HSV-8 + LYMPHOMATORY CELL LINE, PRODUCT VIRUS, ANTIBODIES, DIAGNOSTIC METHOD AND KIT FOR DETECTING HSV-8 INFECTION |
US6183752B1 (en) | 1997-02-05 | 2001-02-06 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Restenosis/atherosclerosis diagnosis, prophylaxis and therapy |
US6300104B1 (en) | 1997-06-19 | 2001-10-09 | The Regents Of The University Of California | Secretory immunoglobulin produced by single cells and methods for making and using same |
AU756222B2 (en) | 1997-07-18 | 2003-01-09 | Connaught Laboratories Limited | Nucleic acid vaccines encoding G protein of respiratory syncytial virus |
US6475780B1 (en) | 1997-11-14 | 2002-11-05 | Aventis Pasteur Limited | Alphavirus vectors for paramyxovirus vaccines |
DE19756214C1 (de) | 1997-12-17 | 1999-02-25 | Biotest Ag | Polypeptide mit Aminosäuresequenzen aus dem N-terminalen Bereich von gp116 und deren Verwendung bei der Diagnostik, Prophylaxe und Therapie |
JP3764047B2 (ja) | 1998-03-12 | 2006-04-05 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 網膜ニューロン死の防止及び眼病の治療方法 |
AU5503899A (en) | 1998-06-29 | 2000-01-17 | Wolfgang Bergter | Antiviral and antiretroviral radioimmunomedicaments based on alpha-emitters and beta-emitters |
RU2133472C1 (ru) | 1998-09-16 | 1999-07-20 | Унитарное государственное Московское предприятие по производству бактерийных препаратов | Способ диагностики активной стадии цитомегаловирусной инфекции человека |
US20020102208A1 (en) | 1999-03-01 | 2002-08-01 | Paul Chinn | Radiolabeling kit and binding assay |
MY133346A (en) | 1999-03-01 | 2007-11-30 | Biogen Inc | Kit for radiolabeling ligands with yttrium-90 |
ITMI20012160A1 (it) | 2001-10-18 | 2003-04-18 | Edoardo Marchisio | Sistema immunoenzimatico per la caratterizzazione antigenica dell'infezione attiva da cytomegalovirus e cmv confirmation test |
US6828113B2 (en) | 2002-03-21 | 2004-12-07 | Cornell Research Foundation, Inc. | IgM antibodies to the 70 kDa heat shock protein as a marker for cytomegalovirus infection |
WO2003085121A2 (en) | 2002-04-01 | 2003-10-16 | Agensys, Inc. | Nucleic acid and corresponding protein entitled 213p1f11 useful in treatment and detection of cancer |
WO2004076677A2 (en) | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Institute For Research In Biomedicine | Monoclonal antibody production by ebv transformation of b cells |
WO2004076645A2 (en) | 2003-02-27 | 2004-09-10 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for cytomegalovirus treatment |
WO2004078926A2 (en) | 2003-02-28 | 2004-09-16 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Immunologigal markers |
KR101541658B1 (ko) | 2004-06-21 | 2015-08-07 | 메다렉스, 엘.엘.시. | 인터페론 알파 수용체 1 항체 및 그의 용도 |
BE1016287A6 (nl) | 2004-07-14 | 2006-07-04 | Picanol Nv | Gaapvormingsonderdeel voor een weefmachine en weefmachine. |
US7976845B2 (en) | 2004-11-29 | 2011-07-12 | The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research | Human cytomegalovirus immunotherapy |
ATE503770T1 (de) | 2005-03-14 | 2011-04-15 | Us Gov Health & Human Serv | Humane monoklonale antikörper gegen hendra- und nipah-viren |
JP5431730B2 (ja) | 2005-12-16 | 2014-03-05 | リボバックス バイオテクノロジーズ ソシエテ アノニム | 不死化された抗体分泌細胞を得る方法 |
WO2007094423A1 (ja) | 2006-02-15 | 2007-08-23 | Evec Incorporated | ヒトサイトメガロウイルスに結合するヒトのモノクローナル抗体並びにその抗原結合部分 |
EP2024507B1 (en) | 2006-05-19 | 2015-07-22 | Technion Research and Development Foundation Ltd. | Fusion proteins, uses thereof and processes for producing same |
US7704510B2 (en) | 2006-06-07 | 2010-04-27 | The Trustees Of Princeton University | Cytomegalovirus surface protein complex for use in vaccines and as a drug target |
US8153129B2 (en) | 2006-12-15 | 2012-04-10 | Ribovax Biotechnologies S.A. | Antibodies against human cytimegalovirus (HCMV) |
GB0700133D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Humabs Llc | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
US7947274B2 (en) * | 2007-01-04 | 2011-05-24 | Humabs, LLC. | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
US8361473B2 (en) | 2007-03-29 | 2013-01-29 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Antibodies and their uses for diagnosis and treatment of cytomegalovirus infection and associated diseases |
US20080248042A1 (en) | 2007-04-05 | 2008-10-09 | Irccs Centro Di Riferimento Oncologico Di Aviano, | Monoclonal antibody cross-reactive against infective agent causing a B-cell expansion and IgG-Fc |
WO2009024445A1 (en) | 2007-08-22 | 2009-02-26 | Ribovax Biotechnologies Sa | Antibodies against human cytomegalovirus (hcmv) |
US7763261B2 (en) | 2007-12-19 | 2010-07-27 | Dcb-Usa Llc | Anti-human cytomegalovirus antibodies |
AU2008359583B2 (en) | 2008-07-16 | 2012-04-05 | Institute For Research In Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |
EP3178845A1 (en) | 2008-07-16 | 2017-06-14 | Institute for Research in Biomedicine | Human cytomegalovirus neutralizing antibodies and use thereof |
-
2007
- 2007-01-04 GB GBGB0700133.2A patent/GB0700133D0/en not_active Ceased
-
2008
- 2008-01-03 NZ NZ578844A patent/NZ578844A/xx not_active IP Right Cessation
- 2008-01-03 EP EP08737590.3A patent/EP2118140B1/en active Active
- 2008-01-03 SG SG2013042486A patent/SG191635A1/en unknown
- 2008-01-03 WO PCT/IB2008/001111 patent/WO2008084410A2/en active Application Filing
- 2008-01-03 ES ES08737590T patent/ES2426987T3/es active Active
- 2008-01-03 SI SI200831025T patent/SI2118140T1/sl unknown
- 2008-01-03 SG SG2013042544A patent/SG192399A1/en unknown
- 2008-01-03 PT PT87375903T patent/PT2118140E/pt unknown
- 2008-01-03 KR KR1020097016334A patent/KR101541927B1/ko active IP Right Grant
- 2008-01-03 RU RU2009129403/10A patent/RU2469045C2/ru active
- 2008-01-03 KR KR1020147021517A patent/KR101659306B1/ko active IP Right Grant
- 2008-01-03 PT PT121560486T patent/PT2487187E/pt unknown
- 2008-01-03 BR BRPI0806185-8A patent/BRPI0806185A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2008-01-03 PL PL08737590T patent/PL2118140T3/pl unknown
- 2008-01-03 SG SG2011097805A patent/SG177943A1/en unknown
- 2008-01-03 EP EP12156048.6A patent/EP2487187B1/en not_active Not-in-force
- 2008-01-03 CA CA2673755A patent/CA2673755C/en active Active
- 2008-01-03 UA UAA200908229A patent/UA100682C2/ru unknown
- 2008-01-03 MX MX2009007320A patent/MX2009007320A/es active IP Right Grant
- 2008-01-03 EP EP14188865.1A patent/EP2860189A3/en not_active Withdrawn
- 2008-01-03 MY MYPI20092825 patent/MY150709A/en unknown
- 2008-01-03 AU AU2008204258A patent/AU2008204258B2/en not_active Ceased
- 2008-01-03 ES ES12156048.6T patent/ES2526907T3/es active Active
- 2008-01-03 MY MYPI2013003538A patent/MY161200A/en unknown
- 2008-01-03 CN CN2008800071531A patent/CN101657467B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-01-03 DK DK08737590.3T patent/DK2118140T3/da active
- 2008-01-03 JP JP2009544477A patent/JP5710123B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-01-03 US US11/969,104 patent/US7955599B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-06-25 IL IL199585A patent/IL199585A/en not_active IP Right Cessation
- 2009-07-01 GT GT200900188A patent/GT200900188A/es unknown
- 2009-07-03 TN TNP2009000285A patent/TN2009000285A1/fr unknown
- 2009-07-29 EC EC2009009547A patent/ECSP099547A/es unknown
- 2009-07-31 CR CR10961A patent/CR10961A/es unknown
- 2009-08-03 ZA ZA200905408A patent/ZA200905408B/xx unknown
- 2009-08-04 CO CO09081236A patent/CO6220862A2/es not_active Application Discontinuation
- 2009-08-04 MA MA32141A patent/MA31225B1/fr unknown
-
2010
- 2010-05-18 HK HK10104864.3A patent/HK1139158A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-04-22 US US13/092,364 patent/US8309089B2/en active Active
-
2012
- 2012-09-14 US US13/619,305 patent/US8545848B2/en active Active
-
2013
- 2013-02-08 HK HK13101783.4A patent/HK1174344A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2013-08-26 CY CY20131100726T patent/CY1114271T1/el unknown
- 2013-09-18 HR HRP20130877AT patent/HRP20130877T1/hr unknown
- 2013-09-30 US US14/041,799 patent/US9149524B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-03-05 JP JP2014043126A patent/JP2014141501A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1994009136A1 (en) * | 1992-10-15 | 1994-04-28 | Scotgen Limited | Recombinant humanized anti-cytomegalovirus antibodies |
US5750106A (en) * | 1993-01-28 | 1998-05-12 | Novartis Ag | Human monoclonal antibodies to cytomegalovirus |
RU2239453C2 (ru) * | 2002-12-03 | 2004-11-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие " Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам " Микроген" | Препарат иммуноглобулина человека против цитомегаловируса и способ его получения |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
WANG et al. Human cytomegalovirus virion protein complex required for epithelial and endothelial cell tropism // PNAS, 13.12.2005, vol.102, no.50, cnh.18153-18158. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2469045C2 (ru) | Антитела, нейтрализующие цитомегаловирус человека, и их применение | |
JP6703037B2 (ja) | ヒトサイトメガロウイルス中和抗体およびその使用 | |
EP2334700B1 (en) | Dengue virus neutralizing antibodies and uses thereof | |
EP2303923B1 (en) | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof | |
US9611316B2 (en) | Human cytomegalovirus neutralising antibodies and use thereof |