RU2397247C1 - Способ биосинтеза липазы - Google Patents
Способ биосинтеза липазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2397247C1 RU2397247C1 RU2008152363/10A RU2008152363A RU2397247C1 RU 2397247 C1 RU2397247 C1 RU 2397247C1 RU 2008152363/10 A RU2008152363/10 A RU 2008152363/10A RU 2008152363 A RU2008152363 A RU 2008152363A RU 2397247 C1 RU2397247 C1 RU 2397247C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lipase
- hours
- producer
- cultivation
- culture medium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к культивированию продуцента липазы. Способ предусматривает подготовку питательной среды, содержащей рыбную муку, подсолнечное масло, кукурузный экстракт, гидрофосфат аммония и воду в заданном соотношении. Подготовленную питательную среду инокулируют водно-споровой суспензией продуцента липазы, в качестве которого используют Rhizopus oryzae BKM F-1403 и культивируют при аэрации и температуре 30-32°С в течение 48 ч. После чего в культуральную среду вносят тритон Х-305 в заданном количестве и снова культивируют еще 24 ч. По окончании культивирования мицелий и взвешанные частицы отделяют фильтрованием. Изобретение позволяет повысить активность липазы.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве ферментов.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является способ культивирования продуцента липазы гриба Rh. oryzae на питательной среде, содержащей глюкозу (10 г/л), в качестве источника азота и солей - обезжиренный рыбный белковый гидролизат (24 г/л). Активность полученной липазы составляет 394 ед. на 1 см3 культуральной жидкости (Ghorbel Sofiane. Preparation and testing of Sardinella protein hydrolysates as nitrogen source for extracellular lipase production by Rhizopus oryzae [Text] / Ghorbel Sofiane, Souissi Nabil, Triki-Ellouz Yosra, Dufosse Laurent, Guerard Fabienne, Nasri Moncef// World J. Microbiol. and Biotechnol. - 2005. - V. 21, №1. - P.33-38).
Недостатком известного способа является низкая активность липазы.
Техническая задача изобретения - биосинтез липазы с высокой активностью.
Техническая задача достигается тем, что в способе биосинтеза липазы, включающем подготовку питательной среды, инокуляцию ее водно-споровой суспензией продуцента липазы, его глубинное культивирование, фильтрацию культуральной жидкости, новым является то, что в качестве продуцента липазы используют Rhizopus oryzae 1403, а при подготовке питательной среды в нее вносят, мас.%: рыбную муку - 3,0-3,5, подсолнечное масло - 0,2-0,3; кукурузный экстракт - 0,8-0,9 и гидрофосфат аммония - 0,4-0,5, вода - остальное; культивирование осуществляют при аэрации и температуре 30-32°С в течение 48 ч, после чего в культуральную среду вносят тритон Х-305 в количестве 0,008-0,010 мас.% и продолжают культивирование еще 24 ч.
Технический результат изобретения выражается в повышении активности липазы.
Способ реализуется следующим образом.
В способе используется продуцент липазы Rhizopus oryzae BKM F-1403 (Каталог культур микроорганизмов, Пущино - Москва, 1992, с.154).
Чистую культуру продуцета липазы Rhizopus oryzae 1403 выращивают на агаризированном сусле с содержанием сухих веществ 4% в течение 3-4 сут при температуре (30±1)°С.
Готовят питательную среду для продуцента липазы. Для этого в воде растворяют гидрофосфат аммония в количестве 0,4-0,5 мас.%, добавляют (мас.%): кукурузный экстракт - 0,8-0,9; рыбную муку - 3,0-3,5; подсолнечное масло - 0,2-0,3. Среду стерилизуют 1 ч при 0,1 МПа, а потом охлаждают.
Подготовленную питательную среду, содержащую рыбную муку, подсолнечное масло, кукурузный экстракт, гидрофосфат аммония и воду, инокулируют спорами продуцента липазы Rhizopus oryzae 1403 и культивируют при температуре 30-32°С и аэрации в течение 48 ч. Затем в культуральную среду добавляют тритон Х-305 в количестве 0,008-0,010 мас.% и продолжают культивирование еще 24 ч.
После окончания культивирования культуральную жидкость отделяют от биомассы фильтрованием.
В предлагаемом изобретении активность липазы оценивают титриметрическим методом (Таrо Ogiso. Studies on Bile-sensitive Lipase. Purification and Properties of Lipase from Mucor javanicus / Taro Ogiso, Mamori Sugiura // Chem. Pharm.Bull. - 1969. - V. 17, №5. - P.1025-1033).
В качестве субстрата используют 0,1 М эмульсию оливкового масла в 2% растворе поливинилового спирта. Реакционная смесь содержит 2,5 см3 эмульсии, 2 см3 0,05 М фосфатно-цитратного буфера с рН 6,5 и 0,5 см3 культуральной жидкости. Время инкубации составляет 30 мин. После этого для прекращения реакции добавляют 15 см3 смеси этанол-ацетон (1:1 об./об.) и 10 см3 0,05 М гидроксида натрия. Титрование образовавшихся свободных жирных кислот (СЖК) проводят 0,05 М соляной кислоты. Контрольный опыт осуществляют так же, но титрование проводят сразу после добавления культуральной жидкости в реакционную смесь.
За единицу ферментативной активности липазы принимают такое количество фермента, которое освобождает 1 µмоль жирной кислоты за 1 мин.
Состав питательной среды для культивирования продуцента и внесение тритона Х-305 после 48 ч культивирования обеспечивают биосинтез липазы продуцентом Rhizopus oryzae 1403 с высокой активностью.
Способ поясняется следующими примерами.
Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава (мас.%):
Рыбная мука - 3,0
Масло подсолнечное - 0,2
Кукурузный экстракт - 0,8
Гидрофосфат аммония - 0,4
Вода - остальное.
Для инокуляции среды готовят водно-споровую суспензию продуцента липазы Rhizopus oryzae 1403. Для этого скос 4-суточной культуры в пробирках 18×180 мм заливают 10 см3 стерильной воды и смывают споры. В колбы Эрленмейера емкостью 750 см3 вносят по 100 см3 питательной среды, которую инокулируют водно-споровой суспензией в количестве 1% к объему среды. Культивирование продуцента проводят на качалке при скорости 1,7-1,8 с-1 (то есть при аэрации), температуре 30-32°С в течение 48 ч. Затем в культуральную среду добавляют тритон Х-305 в количестве 0,008 мас.% и продолжают культивирование еще 24 ч. По окончании культивирования мицелий и взвешенные частицы отделяют от культуральной жидкости фильтрованием.
Активность липазы в культуральной жидкости составляет 806 ед./см3.
Пример 2. Готовят питательную среду следующего состава (мас.%):
Рыбная мука - 3,5
Масло подсолнечное - 0,3
Кукурузный экстракт - 0,9
Гидрофосфат аммония - 0,5
Вода - остальное.
Для культивирования продуцента липазы Rhizopus oryzae 1403 готовят споровую суспензию, инокулируют питательную среду и проводят процесс культивирования 48 ч аналогично примеру 1. Затем в культуральную среду добавляют тритон Х-305 в количестве 0,010 мас.% и продолжают культивирование еще 24 ч. Затем мицелий и взвешенные частицы отделяют от культуральной жидкости фильтрованием.
Активность липазы в культуральной жидкости составляет 867 ед./см3.
Как видно из примеров, при культивировании продуцента липазы Rhizopus oryzae 1403 при аэрации и температуре 30-32°С на питательной среде состава (мас.%): рыбная мука - 3,0-3,5; масло подсолнечное - 0,2-0,3; кукурузный экстракт - 0,8-0,9; гидрофосфат аммония - 0,4-0,5, остальное вода, внесение после 48 ч культивирования тритона Х-305 в количестве 0,008-0,010% и дальнейшее культивирование еще 24 часа дают повышение активности липазы в культуральной жидкости в 2,0-2,2 раза по сравнению с известным способом.
Уменьшение или увеличение количества компонентов среды приводит к снижению активности липазы на 10-13%. Без внесения тритона Х-305 активность составляет 251 ед./см3.
Если тритон Х-305 вносится в начале культивирования, то активность липазы составляет 467 ед./см3, если он вносится после 24 ч - 655 ед./см3.
Предложенный способ культивирования продуцента липазы позволяет повысить активность липазы по сравнению с известным способом.
Claims (1)
- Способ биосинтеза липазы, включающий подготовку питательной среды, инокуляцию ее водно-споровой суспензией продуцента липазы, его глубинное культивирование, фильтрацию культуральной жидкости, отличающийся тем, что в качестве продуцента липазы используют Rhizopus oryzae 1403, а при подготовке питательной среды в нее вносят, мас.%: рыбную муку 3,0-3,5; подсолнечное масло 0,2-0,3; кукурузный экстракт 0,8-0,9; гидрофосфат аммония 0,4-0,5; вода остальное, культивирование осуществляют при аэрации и температуре 30-32°С в течение 48 ч, после чего в культуральную среду вносят тритон Х-305 в количестве 0,008-0,010 мас.% и продолжают культивирование еще 24 ч.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008152363/10A RU2397247C1 (ru) | 2008-12-29 | 2008-12-29 | Способ биосинтеза липазы |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008152363/10A RU2397247C1 (ru) | 2008-12-29 | 2008-12-29 | Способ биосинтеза липазы |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008152363A RU2008152363A (ru) | 2010-07-10 |
| RU2397247C1 true RU2397247C1 (ru) | 2010-08-20 |
Family
ID=42684231
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008152363/10A RU2397247C1 (ru) | 2008-12-29 | 2008-12-29 | Способ биосинтеза липазы |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2397247C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2549681C1 (ru) * | 2014-07-25 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение научно-исследовательский институт кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИКП Россельхозакадемии) | Способ получения питательной среды для определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы |
| RU2566561C1 (ru) * | 2014-07-25 | 2015-10-27 | Государственное научное учреждение научно-исследовательский институт кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИКП Россельхозакадемии) | Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108483680B (zh) * | 2016-02-29 | 2019-09-13 | 江苏迪赛司自动化工程有限公司 | 处理重金属废水用生物吸附器及其制备方法 |
-
2008
- 2008-12-29 RU RU2008152363/10A patent/RU2397247C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2549681C1 (ru) * | 2014-07-25 | 2015-04-27 | Государственное научное учреждение научно-исследовательский институт кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИКП Россельхозакадемии) | Способ получения питательной среды для определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы |
| RU2566561C1 (ru) * | 2014-07-25 | 2015-10-27 | Государственное научное учреждение научно-исследовательский институт кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИКП Россельхозакадемии) | Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2008152363A (ru) | 2010-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11859230B2 (en) | Compositions and methods for microbial co-culture | |
| WO2007073371A1 (en) | Sophorolipids as protein inducers and inhibitors in fermentation medium | |
| EP0384717A1 (en) | Thermostable lipase and its production | |
| RU2397247C1 (ru) | Способ биосинтеза липазы | |
| JP2022519874A (ja) | 微生物脂質を生産するための方法 | |
| Paranthaman et al. | Optimization of various culture media for tannase production in submerged fermentation by Aspergillus flavus | |
| CN116396988B (zh) | 一种微芒藻属微生物产多不饱和脂肪酸的方法 | |
| JP2005516585A (ja) | 共培養による没食子酸の調製法 | |
| RU2500811C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент фосфолипазы с | |
| EP2329029A1 (en) | Methods and compositions for increasing toxin production | |
| RU2310685C1 (ru) | Штамм бактерий serratia marcescens, продуцирующий липолитические ферменты, для получения препарата для очистки сточных вод от жиров | |
| RU2308485C1 (ru) | Штамм бактерий serratia species - продуцент липазы | |
| RU2500812C1 (ru) | Рекомбинантный штамм бактерий bacillus licheniformis - продуцент термостабильной липазы | |
| SU958498A1 (ru) | Способ получени @ -маннаназы | |
| Farahbakhsh et al. | Using Fermentation Processes for Production of Lipase by Aspergillus niger | |
| RU2676144C1 (ru) | Способ получения инвертазы и лимонной кислоты | |
| NZ221455A (en) | Microbial production of cellulose | |
| Choi et al. | Tylosin production by Streptomyces fradiae using raw cornmeal in airlift bioreactor | |
| Roy et al. | Production of lipase in a fermentor using a mutant strain of Corynebacterium species: its partial purification and immobilization. | |
| RU2605635C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА С ЭНДОИНУЛИНАЗНОЙ И САХАРАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПУТЕМ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА PENICILLIUM CANESCENS Sopp INUA3 | |
| JP2964163B2 (ja) | Ｒ（―）―１，３―ブタンジオールの製造法 | |
| RU2186850C2 (ru) | Способ получения лимонной кислоты | |
| RU2233324C1 (ru) | Способ получения ферментного препарата липоксигеназы | |
| RU2614263C1 (ru) | Штамм базидиального гриба Trametes hirsuta - продуцент этилового спирта | |
| CN110699390A (zh) | 芽孢杆菌dl-1的胞外蛋白酶在催化拆分乙酸苏合香酯的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20101230 |