RU2348418C2 - Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей - Google Patents
Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2348418C2 RU2348418C2 RU2005121256/14A RU2005121256A RU2348418C2 RU 2348418 C2 RU2348418 C2 RU 2348418C2 RU 2005121256/14 A RU2005121256/14 A RU 2005121256/14A RU 2005121256 A RU2005121256 A RU 2005121256A RU 2348418 C2 RU2348418 C2 RU 2348418C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tumor
- dendritic cells
- cells
- partially matured
- bcg
- Prior art date
Links
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 211
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 134
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 title claims description 9
- 230000032683 aging Effects 0.000 title abstract 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 63
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 claims abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 85
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 39
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 39
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 39
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 18
- -1 imidazoquinoline compound Chemical class 0.000 claims description 17
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 claims description 12
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims description 10
- 229940124669 imidazoquinoline Drugs 0.000 claims description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 claims description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 8
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 6
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 claims description 5
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 5
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Substances C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000002271 resection Methods 0.000 claims description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 5
- RXNTZIJLOZMJTM-UHFFFAOYSA-N 2-(2h-quinolin-1-yl)ethanol Chemical compound C1=CC=C2N(CCO)CC=CC2=C1 RXNTZIJLOZMJTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 47
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 41
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 41
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 24
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 10
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 10
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 10
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 9
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 6
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 6
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 5
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 4
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 4
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 4
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 4
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003970 toll like receptor agonist Substances 0.000 description 4
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- SQQXRXKYTKFFSM-UHFFFAOYSA-N chembl1992147 Chemical group OC1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=C(C)C(C(O)=O)=NC(C=2N=C3C4=NC(C)(C)N=C4C(OC)=C(O)C3=CC=2)=C1N SQQXRXKYTKFFSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 3
- KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropyl acetate Chemical compound CC(=O)OCC(O)CO KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FQYRLEXKXQRZDH-UHFFFAOYSA-N 4-aminoquinoline Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=NC2=C1 FQYRLEXKXQRZDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N Metrizamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(=O)N[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)OC2O)O)=C1I BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002725 brachytherapy Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 238000000315 cryotherapy Methods 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960000554 metrizamide Drugs 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010019437 Janus Kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000003492 pulmonary vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4615—Dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/50—Colon
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/72—Undefined extracts from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/05—Adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения опухоли. Способ по изобретению включает введение дендритных клеток (ДК), индуцированных in vitro для начала созревания и характеризующихся способностью захватывать и процессировать антиген in vivo. Фармацевтическая композиция по изобретению содержит такие ДК в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем для введения. Изобретение обеспечивает индукцию противоопухолевого иммунного ответа за счет эффективного захвата и процессинга ДК опухолевых антигенов в области локализации опухоли, секреции соответствующих цитокинов и контакта с Т-клетками в лимфатическом узле. 2 н. и 30 з.п. ф-лы, 3 табл.
Description
Данная заявка претендует на приоритет предварительной заявки Соединенных Штатов Америки под номером 60/431267, поданной 6 декабря 2002 г., полностью включенной в данное описание для всех целей.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Дендритные клетки (DC) признаны в качестве носителей выбора активной иммунотерапии рака. Эксперименты на животных продемонстрировали потенциал иммунотерапии на основе DC как при защите мышей от бластомогенеза, так и при устранении укоренившихся опухолей. Эти успехи были, по меньшей мере, частично воспроизведены на людях в небольших клинических испытаниях. Переход от небольших испытаний на безопасность или с целью доказательства концепции к массовым испытаниям, в которых может быть продемонстрирована активность или эффективность, был задержан трудоемкими и обременительными особенностями получения DC (смотри ниже). Вследствие этого несколько компаний заинтересовались разработкой противораковой вакцины на основе DC, несмотря на широкие лечебные возможности таких препаратов.
Внутриопухолевая (IT) инъекция DC представляет собой особый вид иммунотерапии на основе DC. После инъекции DC захватывают антиген от апоптических или гибнущих раковых клеток и представляют антиген Т-клеткам после миграции в лимфоузлы. Действительно было обнаружено, что эффективность таких лечений на экспериментальных моделях на животных коррелирует со степенью апоптоза в опухоли (Candido et al., Cancer Res. 61:228-236, 2001), что наводит на мысль о том, что этот подход является абсолютно совместимым с лечением опухолей химиотерапевтическими средствами или облучением перед инъекцией DC. Кроме того, несколько групп продемонстрировали, что такая комбинированная терапия является особенно эффективной против укоренившихся опухолей (Nikitina et at., Int. J. Cancer 94:825-833, 2001; Tanaka et al., Int. J. Cancer 101:265-269, 2002; Tong et al., Cancer Res. 61:7530-7535, 2001).
Поскольку опухолевые клетки являются источником антигена, то внутриопухолевая инъекция (IT) устраняет необходимость как выбора, так и наработки опухолевых антигенов, поскольку они в настоящее время используются в большинстве терапевтических подходов in vitro, основанных на DC. Выбор опухолевого антигена зачастую движется потребностью компаний иметь запатентованную ситуацию, и еще должно быть доказано, что некоторые опухолевые антигены, идентифицированные до настоящего времени, обеспечивают значимый клинический эффект. Кроме того, использование таких опухолевых антигенов часто дает в результате моновалентную вакцину (моновакцину), которая может утрачивать свою действенность, если опухолевые клетки снижают экспрессию антигена, использованного при иммунизации. Конечно, необходимость производства опухолевого антигена в условиях, требуемых надлежащей производственной практикой (GMP), добавляет дополнительную стоимость классическим способам иммунизации, основанным на DC.
Инъекция DC внутрь опухоли подвергает дендритные клетки иммуносупрессивной среде опухоли. Опухоли, как известно, вырабатывают цитокины, которые инактивируют DC, или которые обладают способностью к искажению ответа Т-клеток по направлению к менее эффективному ответу Тh2-типа. Несколько групп использовали генетические модификации DC с целью преодоления этих супрессивных эффектов, в особенности посредством продуцирования цитокина интерлейкина-12 (IL-12; Nishioka et al., Cancer Res. 59:4035-4041, 1999; Melero et al., Gene Therapy 6:1779-1784, 1999) или экспрессии лиганда CD40 (Kikuchi et al., Blood 96:91-99, 2000). Кроме того, обнадеживающие результаты, описанные этими группами, демонстрируют целесообразность IT-инъекций DC в качестве терапевтического подхода.
Triozzi et at. (Cancer 89:2647-2654, 2000) описывает IT-инъекции DC у больных с метастатической меланомой или раком молочной железы. Авторы получили регрессию опухоли у 4 пациентов с меланомой и у двух пациентов с карциномой молочной железы. Биопсии регрессирующих поражений обнаруживали инфильтрирующие Т-клетки, дающие возможность предположить, что DC действительно активировали иммунный ответ против опухолевых клеток. В целом эти данные демонстрировали то, что IT-введение DC осуществимо на людях и могло принести существенную клиническую пользу. Однако наблюдалось существенное снижение экспрессии антигенов главного комплекса гистосовместимости II класса (МНС-антигенов II класса) и костимулирующих молекул В7-2 на инъецированных DC. Можно было бы ожидать, что снижение экспрессии этих критических молекул уменьшает иммуностимулирующий потенциал DC, но, как предусматривается в настоящем изобретении, этого можно избежать путем частичного созревания DC перед введением.
DC существуют в периферических тканях в незрелой форме готовыми захватывать и процессировать антиген. Эта форма является такой формой незрелой клетки, которая наиболее близко имитируется DC, образованными из моноцитов в присутствии GM-CSF и IL-4. Различные стимулы могут инициировать созревание DC, процесс, в течение которого клетки теряют свою способность эффективно захватывать антиген и повышают свои функции стимуляции Т-клеток. Этот процесс является сложным и, по меньшей мере, in vitro может отнимать вплоть до 48 часов до окончания. Другим следствием созревания является изменение миграционных свойств клеток. Например, созревание индуцирует несколько хемокиновых рецепторов, в том числе CCR7, которые направляют клетки к зонам Т-клеток дренирующих лимфоузлов, где зрелые DC активируют Т-клетки против антигенов, которые присутствуют на поверхности DC в контексте МНС-молекул I класса и II класса.
Индукция толерантности была связана с перекрестным представлением (ауто) антигенов дендритными клетками (Kurts et al., J. Exp. Med. 186:239-245, 1997), и в основу современной господствующей гипотезы положено то, что созревшая DC непрерывно поставляет антигены иммунной системе для поддержания толерантности (Kurts et al., J. Exp. Med. 184:923-930, 1996), предполагая, что созревание DC in vivo требуется для эффективной иммуностимуляции. Как стало сейчас очевидным, созревание DC может давать в результате или иммуностимулирующие, или иммуносупрессивные DC (Chakraborty et al., Clin. Immunol. 94:88-98, 1999). Точная природа стимула созревания, который производит каждый из двух результатов, не была объяснена, но является общепризнанным, что иммуностимулирующие DC продуцируют IL-12 и экспрессируют лиганд CD40 (Albert et al., Nature Immunol. 2:988-989, 2001; Lanzavecchia, Haematologica 84 Suppl. EHA 4:23-25, 1999). Следовательно, частично созревшие DC должны быть использованы для IT-инъецирования, особенно если известно, что стимул, используемый для созревания незрелых дендритных клеток, приводит к экспрессии лиганда CD40 и продуцированию IL-12.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение предоставляет способ продуцирования противоопухолевого иммунного ответа, включающий введение клеточной популяции, содержащей дендритные клетки, подвергнутые частичному созреванию in vitro, так что частично созревшие дендритные клетки сохраняют способность захватывать антиген и могут индуцировать иммунный ответ после введения индивидууму. Способ предусматривает эффективный захват и процессинг опухолевых антигенов внутри опухоли и ложа опухоли, несмотря на общую иммуносупрессивную среду внутри опухоли. Можно было бы ожидать, что эта иммуносупрессивная среда мешает действию дендритных клеток путем негативного влияния на их иммуностимулирующие свойства. Кроме того, зрелые дендритные клетки не были бы введены в опухоли, поскольку эти клетки неэффективно процессируют антиген.
Введение частично созревших дендритных клеток может быть непосредственно внутрь существующей опухоли. Кроме того, введение может быть внутрь ложа опухоли, тканевую область в опухоли и вокруг нее или до, или после лечения, т.е. хирургического удаления или резекции опухоли, перед, одновременно или после химиотерапии, лучевой терапии или их комбинировании, и тому подобное. Частично созревшие дендритные клетки могут также быть введены в лимфатический узел или лимфатическую область, которая непосредственно дренирует опухоль или область, окружающую опухоль. Кроме того, частично созревшие дендритные клетки могут быть введены внутрь кровеносного сосуда или внутрь лимфатической области, которая поставляет кровь или лимфу непосредственно внутрь опухоли или ложе опухоли, или орган, пораженный опухолью или с опухолью. Более того, частично созревшие дендритные клетки могут быть введены вообще в кровеносную или лимфатическую систему, так что клетки будут доставляться внутрь опухолевой области.
Дендритные клетки, или их предшественники, пригодные в данном изобретении, могут быть получены, например, из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфоузлов, пуповинной крови или периферической крови и т.п. Дополнительно дендритные клетки могут быть получены от индивидуума, который должен быть подвергнут лечению, или от здорового индивидуума, HLA-совместимого с индивидуумом, который должен быть подвергнут лечению. Дендритные клетки, или их предшественники, могут сохраняться при низких температурах перед контактом с фактором созревания и быть приготовлены в виде композиции для введения индивидууму.
Дендритные клетки, используемые в способах данного изобретения, частично подвергают созреванию in vitro. Подходящие агенты для индукции созревания дендритных клеток, например, включают, но не ограничиваются перечисленным, бациллу Кальметта-Герена (BCG) (БЦЖ), гамма-интерферон (IFNy), липополисахарид (LPS), фактор некроза опухоли α (TNFα), соединение имидазохинолин, например, соединение имидазохинолин-4-амин, такое как 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1Н-имидазол[4,5-с]хинолин-1-этанол (обозначенное R848), или 1-(2-метилпропил)-1Н-имидазо[4,5-с]хинолин-4-амин и его производные (заявка WO 00/47719, полностью включенная в данное описание посредством ссылки), синтезированный двунитевой полирибонуклеотид, например, poly[l]:poly[C(12)U] и ему подобные, агонисты Toll-подобного рецептора (TLR), такие как TLR-3, TLR-4, TLR-7 и/или TLR-9, последовательность нуклеиновых кислот, содержащую неметилированные CpG-мотивы, известные для индукции созревания DC, и им подобные, или их сочетание.
BCG (БЦЖ), используемая в данном изобретении, может содержать целую BCG, элементы клеточной стенки BCG, происходящие из BCG липоарабидоманнаны или другие компоненты BCG. В определенных вариантах воплощения изобретения BCG представляет собой термоинактивированную BCG или обработанную формалином BCG. Обычно сочетание BCG и IFNy используют для частичного созревания дендритных клеток, хотя альтернативно может быть использована одна BCG. Эффективное количество BCG составляет обычно приблизительно 105 до 107 КОЕ (колониеобразующих единиц) на миллилитр среды культуры тканей, а эффективное количество IFNy обычно составляет от приблизительно 100 до приблизительно 1000 единиц на миллилитр среды культуры тканей. В другом варианте воплощения активирующим агентом дендритных клеток является имидазохинолин R898. Типично эффективное количество R898, агониста TLR-4, которое является эффективным, составляет от приблизительно 1 до приблизительно 50 мкг/мл, более типично используют от 5 до 10 мкг/мл среды культуры тканей. Имидазохинолин может быть использован один или может быть скомбинирован, например, с эффективным количеством BCG и/или IFNy.
Настоящее изобретение также включает композиции, причем композиция содержит дендритные клетки, частично созревшие in vitro в присутствии агента созревания дендритных клеток, скомбинированные с физиологически приемлемым носителем, буфером и/или наполнителем для введения индивидууму с опухолью. Частично созревшие дендритные клетки, используемые в композициях изобретения, типично имеют повышенную экспрессию костимулирующих молекул, таких как, но не ограничивающихся перечисленным, CD80, CD86 или CD54. Клетки могут экспрессировать или могут не экспрессировать маркер клеточной поверхности CD83, но все-таки могут поглощать и процессировать антиген. Типично композиция будет содержать от приблизительно 102 до приблизительно 1010, но может содержать больше частично созревших дендритных клеток. После частичного созревания дендритные клетки могут сохраняться при низких температурах в течение периода времени перед введением индивидууму. Клетки, используемые для производства частично созревших дендритных клеток, которые содержатся в композиции данного изобретения, могут быть выделены от пациента, имеющего опухоль, или частично созревшие дендритные клетки могут быть произведены из клеток, которые были выделены от индивидуума, который имеет HLA-совместимость к пациенту.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Дендритные клетки представляют собой разнообразную популяцию антигенпредставляющих клеток, обнаруженных в различных лимфоидных и нелимфоидных тканях. (См. Liu, Cell 106:259-62 (2001); Steinman, Ann. Rev. Immunol. 9:271-96 (1991)). Дендритные клетки включают лимфоидные дендритные клетки селезенки, эпидермальные клетки Лангерганса и вуалевые клетки в циркулирующей крови. Собирательно, дендритные клетки классифицируют как группу, основанную на их морфологии, высоких уровнях экспрессии поверхностных МНС-белков II класса и отсутствии определенных других поверхностных маркеров, экспрессирующихся на Т-клетках, В-клетках, моноцитах и естественных клетках-киллерах. В частности, дендритные клетки моноцитарного генеза (называемые также моноцитарными дендритными клетками) обычно экспрессируют CD11c, CD80, CD86 и являются HLA-DR+, но являются CD14-.
Напротив, моноцитарные предшественники дендритных клеток (типично моноциты) обычно являются CD14+. Моноцитарные предшественники дендритных клеток могут быть получены из любой ткани, где они находятся, в частности из лимфоидных тканей, таких как селезенка, костный мозг, лимфоузлы и тимус. Моноцитарные предшественники дендритных клеток также могут быть выделены из кровеносной системы. Периферическая кровь является полностью готовым источником моноцитарных предшественников дендритных клеток. Пуповинная кровь является другим источником моноцитарных предшественников дендритных клеток. Моноцитарные предшественники дендритных клеток могут быть выделены из различных организмов, в которых может быть вызван иммунный ответ. Такие организмы включают животных, например, в том числе принадлежащих к человеческому роду и не принадлежащих к человеческому роду животных, таких как приматы, млекопитающие (в том числе собаки, кошки, мыши и крысы), птицы (в том числе цыплята), а также их трансгенные разновидности.
В конкретных вариантах воплощения изобретения моноцитарные предшественники дендритных клеток и/или незрелые дендритные клетки могут быть получены от здорового субъекта, или от субъекта, нуждающегося в иммуностимуляции, например, ракового больного, или другого субъекта, для которого клеточная иммуностимуляция может быть полезной или желательной (то есть, субъекта, имеющего бактериальную или вирусную инфекцию, и т.п.). Предшественники дендритных клеток и/или незрелые дендритные клетки также могут быть получены от здорового индивидуума с HLA-совместимостью для частичной активации и введения субъекту с HLA-совместимостью, нуждающегося в иммуностимуляции.
Предшественники дендритных клеток и незрелые дендритные клетки
Способы получения клеточных популяций, обогащенных предшественниками дендритных клеток и незрелых дендритных клеток, из различных источников, в том числе крови и костного мозга, известны специалистам в данной области. Например, предшественники дендритных клеток и незрелые дендритные клетки могут быть выделены путем взятия гепаринизированной крови, путем афереза или лейкафереза, путем приготовления лейкоцитарных пленок, реакции розеткообразования, центрифугирования, центрифугирования в градиенте плотности (например, с использованием фиколла (такого как FICOLL-PAQUE®), перколла - PERCOLL® (частицы коллоидного кремнезема (диаметром 15-30 мм), покрытые недиализуемым поливинилпирролидоном (PVP)), сахарозы и т.п.), дифференциального лизиса клеток, фильтрации и т.п. В конкретных вариантах воплощения изобретения популяция лейкоцитов может быть приготовлена, например, путем сбора крови субъекта, дефибринирования для удаления тромбоцитов и лизиса эритроцитов. Предшественники дендритных клеток и незрелые дендритные клетки необязательно могут быть обогащены моноцитарными предшественниками дендритных клеток путем, например, центрифугирования в градиенте PERCOLL®, пэннинга с иммобилизованными антителами и т.п.
Предшественники дендритных клеток и незрелые дендритные клетки необязательно могут быть приготовлены в закрытой, асептической системе. Как используют здесь, термин «закрытая, асептическая система» или «закрытая система» относится к системе, в которой воздействие нестерильного, атмосферного или циркулирующего воздуха или других нестерильных условий сводят к минимуму или устраняют. Закрытые системы для выделения предшественников дендритных клеток и незрелых дендритных клеток, как правило, исключают центрифугирование в градиенте плотности в открытых сверху пробирках, перенос клеток на открытом воздухе, культивирование клеток в чашках для культуры тканей или открытых колбах и тому подобное. В типичном варианте воплощения изобретения закрытая система обеспечивает асептический перенос предшественников дендритных клеток и незрелых дендритных клеток из исходного сосуда для сбора в укупориваемый сосуд для культуры тканей без воздействия нестерильного воздуха.
Другим опубликованным способом выделения предшественников дендритных клеток является использование обработанного в промышленных условиях пластикового субстрата (например, бус или намагниченных бус) для селективного удаления адгезивных моноцитов и других «предшественников недендритных клеток» (см., например, патенты США № 5994126 и 5851756). Адгезивные моноциты и предшественники недендритных клеток отбрасывают, тогда как неадгезивные клетки сохраняют для культивирования ex vivo и созревания. В другом способе, аферезные клетки культивировали в пластиковых культуральных мешках, в которые пластмассовые, т.е. полистирольные или стирольные бусы с микроносителем, добавляли для увеличения площади поверхности мешка. Клетки культивировали в течение достаточного периода времени для адгезии определенных клеток к бусам, а неприлипшие клетки смывали с мешка. (Maffei, et al., Transfusion 40:1419-1420 (2000); заявка WO 02/44338, включенная в описание изобретения путем ссылки).
В определенных других вариантах воплощения изобретения, моноцитарные предшественники дендритных клеток выделяют адгезией к субстрату, связывающему моноциты, как раскрыто в заявке WO 03/010292, раскрытие которой включено в описание изобретения путем ссылки. Например, популяцию лейкоцитов (например, выделенная лейкаферезом) можно контактировать с субстратом для адгезии моноцитарных предшественников дендритных клеток. При контактировании популяции лейкоцитов с субстратом моноцитарные предшественники дендритных клеток в популяции лейкоцитов предпочтительно прилипают к субстрату. Другие лейкоциты (в том числе другие потенциальные предшественники дендритных клеток) демонстрируют сниженную аффинность связывания с субстратом, тем самым позволяя моноцитарным предшественникам дендритных клеток предпочтительно накапливаться на поверхности субстрата.
Подходящие субстраты включают, например, субстраты, имеющие большое соотношение площади поверхности к объему. Субстрат может быть, например, в виде частиц или волокон. Подходящие субстраты в виде частиц включают, например, стеклянные частицы, пластмассовые частицы, пластмассовые частицы, покрытые стеклом, покрытые стеклом полистирольные частицы, и другие бусы, подходящие для абсорбции белка. Волокнистые субстраты, подходящие для использования в данном изобретении, включают микрокапиллярные трубки и микроворсовые мембраны и тому подобное. Субстрат в виде частиц или волокон обычно дает возможность элюировать прилипшие моноцитарные предшественники дендритных клеток без существенного снижения жизнеспособности прилипших клеток. Субстрат в виде частиц или волокон может быть, по существу, непористым для облегчения элюции моноцитарных предшественников дендритных клеток или дендритных клеток с субстрата. «По существу непористым» субстратом является субстрат, в котором, по меньшей мере, большая часть пор, присутствующих в субстрате, является меньшей по размеру, чем клетки для минимизации включения клеток в субстрат.
Адгезия моноцитарных предшественников дендритных клеток к субстрату может необязательно быть увеличена путем добавления среды для связывания. Подходящая среда для связывания включает культуральную среду моноцитарных предшественников дендритных клеток (например, AIM-V®, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15® и тому подобное), дополненную, по отдельности или в произвольной комбинации, например, цитокинами (например, гранулоцитарно/макрофагальным колониестимулирующим фактором (GM-CSF), интерлейкином 4 (IL-4) или интерлейкином 13 (IL-13)), плазмой крови, сывороткой (например, сывороткой человека, такой как аутологичная или аллогенная сыворотка), очищенными белками, такими как сывороточный альбумин, двухвалентными катионами (например, ионами кальция и/или магния) и другими молекулами, которые способствуют специфической адгезии моноцитарных предшественников дендритных клеток к субстрату или предотвращают адгезию немоноцитарных предшественников дендритных клеток к субстрату. В конкретных вариантах воплощения изобретения плазма крови или сыворотка могут быть термоинактивированы. Термоинактивированная плазма может быть аутологичной или гетерологичной по отношению к лейкоцитам.
После адгезии моноцитарных предшественников дендритных клеток к субстрату неприсоединенные лейкоциты отделяют от комплексов моноцитарные предшественники дендритных клеток/субстрат. Любые подходящие способы могут быть использованы для отделения несвязавшихся клеток от комплексов. Например, смеси несвязавшихся лейкоцитов и комплексов может быть предоставлена возможность осаждения, и несвязавшиеся лейкоциты и среду декантируют или сливают. Альтернативно, смесь может быть отцентрифугирована, и супернатант, содержащий несвязавшиеся лейкоциты, декантируют или сливают с осажденных центрифугированием комплексов.
В другом способе моноцитарные предшественники дендритных клеток могут быть выделены из клеточной популяции, обогащенной лейкоцитами, приготовленной путем использования устройства для тангенциальной фильтрации в потоке, как описано в международной заявке на патент PCT/US03/19428, поданной 19 июня 2003, включенной в изобретение путем ссылки. Устройство для тангенциальной фильтрации в потоке, пригодное для выделения популяции клеток, обогащенной моноцитарными предшественниками дендритных клеток, может содержать отделение для удаления, имеющее модуль с перпендикулярным потоком, камеру для фильтрата и фильтр, расположенный между ними. Фильтр находится в контакте с жидкостью с одной стороны, ретентатная поверхность, с камерой с перпендикулярным потоком, а с другой стороны, - фильтратная поверхность, с камерой для фильтрата. Камера с перпендикулярным потоком имеет входное отверстие, приспособленное для введения образца компонентов крови, включающих лейкоциты, внутрь камеры с перпендикулярным потоком и параллельно к ретентатной поверхности фильтра. Также является предусмотренным выходное отверстие в камере с перпендикулярным потоком, расположенное по центру в области камеры напротив ретентатной поверхности фильтра. Фильтр, подходящий для использования в приспособлении для тангенциальной фильтрации в потоке, обычно имеет средний размер пор от приблизительно 1 до приблизительно 10 микрон. Фильтр может иметь средний размер пор от приблизительно 3 до приблизительно 7 микрон. Также могут быть включены приспособления для обеспечения заданной скорости ввода пробы во входное отверстие камеры с перпендикулярным потоком и приспособления для управления скоростью фильтрации фильтрата через фильтр и внутрь камеры для фильтрата. Приспособления, контролирующие скорость фильтрации, ограничивают скорость фильтрации до скорости меньшей, чем беспрепятственная скорость фильтрации для фильтра. Проба, содержащая компоненты крови, может быть приготовлена с помощью исходного устройства, такого как устройство для лейкафереза, или контейнера, содержащего пробу, собранную с устройства для лейкафереза.
Моноцитарные предшественники дендритных клеток и популяции клеток, обогащенные ради предшественников, можно культивировать ex vivo для дифференциации и частичного созревания и/или размножения. Как используют здесь, выделенные незрелые дендритные клетки, предшественники дендритных клеток и другие клетки относятся к клеткам, которые при помощи рук человека существуют отдельно от их естественной среды и по этой причине не являются естественным продуктом. Выделенные клетки могут существовать в очищенном виде, в полуочищенном виде или в ненативной среде. Вкратце, дифференциация ех vivo обычно включает культивирование моноцитарных предшественников дендритных клеток или популяций клеток, имеющей предшественники дендритных клеток, в присутствии одного или нескольких агентов дифференциации. Подходящие агенты дифференциации могут включать, например, клеточные факторы роста (например, цитокины, такие как (GM-CSF), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-7 (IL-7), интерлейкин-13 (IL-13) и/или их комбинации). В определенных вариантах воплощения изобретения моноцитарные предшественники дендритных клеток дифференцируются с образованием незрелых дендритных клеток, полученных из моноцитов.
Предшественники дендритных клеток могут быть культивированы и дифференцированы в подходящих условиях культивирования. Подходящая среда для культуры тканей включает, но не ограничивается перечисленным, AIM-V®, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15® и т.п. Среда для культуры тканей может быть дополнена сывороткой, аминокислотами, витаминами, цитокинами, такими как GM-CSF и/или IL-4, IL-7, IL-13, двухвалентными катионами и тому подобное, для активации дифференциации клеток. В конкретных вариантах воплощения изобретения предшественники дендритных клеток можно культивировать в среде, не содержащей сыворотку. Условия культивирования могут при желании исключать любые продукты животного происхождения. Типичная комбинация цитокинов, используемая со средой для культуры дендритных клеток, содержит приблизительно 500 единиц/мл каждого из GM-CSF и IL-4, IL-7 или IL-13. Предшественники дендритных клеток при дифференциации с образованием незрелых дендритных клеток являются фенотипически сходными с клетками Лангерганса кожи. Незрелые дендритные клетки типично являются CD14- и CD11c+, экспрессируют низкие уровни CD86 и CD83 и обладают способностью захватывать растворимые антигены посредством специфического эндоцитоза.
Агенты созревания дендритных клеток могут включать, например, но не ограничиваются перечисленным, BCG, IFNy, LPS, TNFα, соединение имидазохинолин, например, соединение имидазохинолин-4-амин, такое как 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1Н-имидазол[4,5-с]хинолин-1-этанол (обозначенное R848) или 1-(2-метилпропил)-1Н-имидазо[4,5-с]хинолин-4-амин и их производные (заявка WO 00/47719, полностью включенная в данное описание посредством ссылки), синтезированный двунитевой полирибонуклеотид, например, poly[l]:poly[C(12)U] и тому подобные, агонисты Toll-подобного рецептора (TLR), такие как TLR-3, TLR-4, TLR-7 и/или TLR-9, последовательность нуклеиновых кислот, содержащую неметилированные CpG-мотивы, известные для индукции созревания DC и тому подобное, или их сочетание. Эффективные количества BCG обычно находятся в пределах от приблизительно 105 до 107 КОЕ (колониеобразующих единиц) на миллилитр среды для культуры тканей. Эффективные количества IFNy обычно находятся в пределах от приблизительно 100-1000 ЕД на миллилитр среды для культуры тканей. Бацилла Кальметта-Герена (BCG) является авирулентным штаммом M.bovis. Как используют здесь, BCG относится к целой BCG, также как и к элементам клеточной стенки, происходящим из BCG липоарабидоманнанам и другим компонентам BCG. BCG при желании инактивируют, например, термоинактивированная BCG, обработанная формалином BCG и т.п. Эффективное количество соединения имидазохинолина, например, соединение имидазохинолин-4-амин, такое как 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1Н-имидазол[4,5-с]хинолин-1-этанол (обозначенное R848), может быть от приблизительно 1 до приблизительно 50 мкг/мл культуральной среды, более типично используют от 5 до приблизительно 10 мкг/мл культуральной среды. Соединение имидазохинолин может быть использовано одно или может быть скомбинировано, например, с BCG и/или IFNy или дополнительно с агонистом TLR.
Незрелые DC обычно контактируют с эффективными количествами агента созревания дендритных клеток, например, BCG и IFNy, в течение от приблизительно одного часа до приблизительно 10 часов. Обычно, по меньшей мере, 24-х часовой период инкубации необходим для полного созревания. Более типично от 48 до приблизительно 72 часов инкубации. Незрелые дендритные клетки можно культивировать и подвергнуть частичному созреванию в подходящих условиях для созревания культуры. Подходящая среда для культуры тканей включает AIM-V®, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15® и т.п. Среда для культуры тканей может быть дополнена аминокислотами, витаминами, цитокинами, такими как GM-CSF и/или IL-15, двухвалентными катионами и тому подобное, для активации созревания клеток. Типичная комбинация цитокинов содержит приблизительно 500 единиц/мл GM-CSF и 100 нг/мл IL-15.
Частичное созревание незрелых дендритных клеток может быть проконтролировано методами, известными в области дендритных клеток. Маркеры клеточной поверхности могут быть обнаружены анализами, хорошо известными в данной области, такими как проточная цитометрия, иммуногистохимия и т.п. Клетки могут также быть проконтролированы на продуцирование цитокинов (например, методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), другим иммунным анализом или путем использования олигонуклеотидной матрицы). У DC, культивированных и частично созревших в соответствии с настоящим изобретением в присутствии агента созревания дендритных клеток, такого как GM-CSF и IL-4, уровни фосфорилированной JAK2 (активированная Янус-киназа 2) могут быть измерены для определения инициации созревания методами, хорошо известными в данной области. Индукция экспрессии маркеров клеточной поверхности и цитокинов, также как и фосфорилирование сигнальных молекул, например, jak2, также являются известными в качестве индикатора того, что дендритные клетки будут обуславливать индукцию иммунного ответа после введения этих клеток индивидууму.
Незрелые дендритные клетки подвергают созреванию только в течение периода времени до частичного созревания дендритных клеток. Полностью созревшие DC теряют способность захватывать антиген и обнаруживают повышение экспрессии костимулирующих поверхностных клеточных молекул и различных цитокинов. Конкретно, зрелые DC экспрессируют более высокие уровни МНС - антигенов I и II классов, чем незрелые дендритные клетки и созревшие дендритные клетки, как правило, определяются как CD80+, CD83+, CD86+ и CD14-. Интенсивная экспрессия МНС ведет к увеличению плотности антигена на поверхности DC, в то время как увеличение экспрессии костимулирующих молекул CD80 и CD86 усиливает сигнал активации Т-клеток с помощью аналогов костимулирующих молекул, таких как CD28 на Т-клетках. Частично созревшие дендритные клетки, используемые в данном изобретении, обычно включают такие дендритные клетки, которые, как только оказываются под воздействием агента созревания дендритных клеток, демонстрируют увеличение экспрессии костимулирующих молекул, в том числе, но не ограничиваясь перечисленным, CD80, CD86 и/или CD54. Клетка может экспрессировать или может не экспрессировать CD83, но сохраняет способность поглощать и процессировать антиген. Кроме того, частично созревшие дендритные клетки могут продуцировать TNFα, IL-6, IL-10 и или IL-12, которые обычно не продуцируются незрелыми дендритными клетками.
Полностью созревшие дендритные клетки не являются предпочтительными для данного изобретения, поскольку они не эффективно процессируют антиген. Кроме того, незрелые дендритные клетки, используемые в предшествующих способах, являются нежелательными, поскольку известно, что иммуносупрессивная среда, обычно обнаруживаемая внутри опухоли, содержащая существенные концентрации цитокинов, препятствует процессингу антигена незрелыми дендритными клетками. В данном изобретении частичное созревание незрелых дендритных клеток ингибирует цитокиновые рецепторы на поверхности клетки, превращая их в менее чувствительные или реагирующие на любые иммуносупрессивные эффекты цитокинов, которые присутствуют во внутриопухолевом пространстве, и обеспечивает клетками, которые могут эффективно процессировать опухолевые антигены, присутствующие во внутриопухолевом пространстве. Как только частично созревшие дендритные клетки созреют внутри опухоли, что измеряемо по образованию, например, TNFα и IL-12, и экспрессии хемокинового рецептора CCR7, клетки могут мигрировать в лимфоузлы, где клетки будут контактировать с Т-клетками для стимуляции иммунного ответа на опухолевые антигены.
Кроме того, в соответствии с другим аспектом изобретения, DC могут сохраняться, например, при низких температурах, или перед созреванием, или после частичного созревания перед введением пациенту. Агенты для сохранения при низких температурах, которые могут быть использованы, включают, но не ограничиваются перечисленным, диметилсульфоксид (ДМСО), глицерин, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль, альбумин, декстран, сахарозу, этиленгликоль, i-эритрит, D-рибит, D-маннит, D-сорбит, i-инозит, D-лактозу, холинхлорид, аминокислоты, метанол, ацетамид, глицеринмоноацетат и неорганические соли. Контролируемая медленная скорость охлаждения может быть критической. Различные криопротекторы и различные типы клеток обычно имеют различные оптимальные скорости охлаждения. Нагрев фазы слияния там, где вода превращается в лед, обычно должен быть минимальным. Процедура охлаждения может быть осуществлена с использованием, например, программируемой морозильной камеры или процедуры с использованием метанольной бани. Программируемые аппараты для замораживания позволяют определять оптимальные скорости охлаждения и обеспечивать стандартное воспроизводимое охлаждение. Программируемые аппараты для замораживания с контролируемой скоростью замораживания, такие как Cryomed или Planar, позволяют настраивать режим замораживания до желаемой кривой скорости охлаждения.
После полного замораживания моноцитарные клетки-предшественники, незрелые DC или частично созревшие DC, могут быть быстро перемещены в сосуд для длительного хранения при низких температурах. В типичном варианте воплощения изобретения, пробы могут криогенно храниться в жидком азоте (-196°С) или в его парах (-165°С). Соображения и процедуры манипуляции, сохранения при низких температурах и длительного хранения гемопоэтических стволовых клеток, в частности из костного мозга или периферической крови, являются в значительной степени применимыми для клеток данного изобретения. Такое обсуждение может быть найдено, например, в следующих ссылках, включенных в данное описание посредством ссылки: Taylor et al., Cryobilogy 27:269-78 (1990); Gorin, Clinics in Haematology 15:19-48 (1986); Bone-Marrow Conservation, Culture and Transplantation, Proceedings of a Panel, Moscow, Jul. 22-26, 1968, International Atomic Energy Agency, Vienna, pp.107-186.
Замороженные клетки предпочтительно быстро оттаивают (например, на водяной бане, поддерживаемой при 37-41°С) и охлаждают немедленно после оттаивания. Может быть желательной обработка клеток для предотвращения агглютинации клеток при оттаивании. Для предотвращения агглютинации могут быть использованы различные процедуры, в том числе, но не ограничиваясь перечисленным, добавление перед замораживанием и/или после замораживания ДНКазы (Spitzer et at., Cancer 45:3075-85 (1980)), добавление низкомолекулярного декстрана и цитрата, гидроксиэтилированного крахмала (Stiff et al., Criobiology 20:17-24 (1983)), и т.п. Криопротекторы, если токсичны для человека, должны быть удалены перед терапевтическим использованием частично созревших DC после оттаивания. Один способ, которым удаляют криопротектор, представляет собой разбавление до ничтожной концентрации. После того как замороженные, частично созревшие DC были оттаяны и восстановлены, они могут быть введены, как описано здесь для незамороженных частично созревших DC.
Ведение in vivo частично созревших дендритных клеток
Предоставляют способы введения частично созревших дендритных клеток или популяции клеток, обогащенной такими клетками и содержащей такие клетки, субъекту, имеющему опухоль. В конкретных вариантах воплощения изобретения такие способы выполняют путем получения предшественников дендритных клеток или незрелых дендритных клеток, дифференциации и частичного созревания таких клеток в присутствии агента созревания дендритных клеток, такого как BCG и IFNy или любого другого агента созревания, типа упомянутых выше. Частично созревшие дендритные клетки могут быть приготовлены с физиологически приемлемыми носителями, наполнителями, буферами и/или разбавителями с использованием способов и композиций, хорошо известных специалистам в данной области. Частично созревшие дендритные клетки могут быть введены непосредственно субъекту, который нуждается в иммуностимуляции. Обычно суспендируют от приблизительно 102 до приблизительно 1010 клеток в фармацевтически приемлемом носителе. Клетки инъецируют или прямо в опухоль, или в область рядом с опухолью, смежную с опухолью, или в циркуляторный или лимфатический контакт с опухолью, или ложе опухоли для обеспечения клеткам доступа к опухолевым антигенам.
К примеру, но не для ограничения, клетки могут быть введены непосредственно в опухоль, в ложе опухоли после хирургического удаления или резекции опухоли, периопухолево, в дренирующий лимфоузел, непосредственно контактирующий с опухолью, в кровеносный сосуд, или в лимфатический проток, ведущий в опухоль или питающий опухоль или орган, пораженный опухолью, например, воротную вену, или в легочную вену, или артерию и т.п. Введение частично созревших дендритных клеток настоящего изобретения может быть или одновременным с другими лечениями, или после других лечений опухоли, таких как химиотерапия или лучевая терапия. Кроме того, частично созревшие дендритные клетки настоящего изобретения могут быть введены совместно с другим агентом, который действует в качестве адъюванта по отношению к созреванию дендритной клетки и/или процессингу антигена внутри опухоли или области рядом, или прилегающей к опухоли. Кроме того, дендритные клетки могут быть также приготовлены или скомбинированы в виде медленно высвобождающегося матрикса для имплантации в область опухоли, или вокруг опухоли, или ложе опухоли, так, что клетки медленно высвобождаются внутрь опухоли или ложе опухоли для контакта с опухолевыми антигенами.
Частично созревшие дендритные клетки настоящего изобретения могут быть введены любым способом, подходящим для технологии приготовления и способа введения. Например, клетки можно комбинировать с фармацевтически приемлемым носителем и вводить с помощью шприца, катетера, канюли и т.п. Как указано выше, клетки могут быть приготовлены в виде медленно высвобождающегося матрикса. При введении таким образом лекарственная форма может быть введена посредством способа, подходящего для используемого матрикса. Другие методы и способы введения, применимые в данном изобретении, являются хорошо известными специалистам в данной области.
Композиции данного изобретения могут быть использованы в чистом виде при лечении индивидуума. Кроме того, композиции могут быть использованы в сочетании с любым другим способом лечения опухоли. Например, способы данного изобретения могут быть использованы в комбинации с хирургической резекцией опухоли, химиотерапией (цитотоксическими лекарствами, апоптическими агентами, антителами и т.п.), лучевой терапией, криотерапией, брахитерапией, иммунотерапией (введением антиген-специфических зрелых активированных дендритных клеток, NK-клеток, специфических к опухолевым антигенам антител, и так далее), и т.п. Любой из этих способов и все эти способы также могут быть использованы в любой комбинации. Комбинированное лечение может быть одновременным или последовательным и может быть применено в любом порядке, как определено лечащим врачом.
В другом варианте воплощения изобретения дендритные клетки и реципиентный субъект имеют один и тот же МНС(HLA)-галлотип. Способы определения HLA-гаплотипа субъекта являются известными в данной области. В родственном варианте воплощения изобретения частично созревшие дендритные клетки являются аллогенными по отношению к реципиентному субъекту.
Аллогенные клетки являются обычно совместимыми для, по меньшей мере, одной МНС-аллели (например, совместное использование, по меньшей мере, одной, но не всех МНС-аллелей). В менее типичном варианте воплощения изобретения дендритные клетки и репициентный субъект являются полностью аллогенными относительно друг друга, но все имеют, по меньшей мере, одну общую МНС-аллель.
Примеры
Нижеследующие примеры предоставляют исключительно как иллюстративные для различных аспектов данного изобретения и они ни в коем случае не должны быть истолкованы как ограничение изобретения.
Пример 1
В данном примере моноцитарные предшественники дендритных клеток, выделенные тангенциальной фильтрацией в потоке, культивировали при концентрации 106 моноцитов/мл в X-VIVO 15®, дополненной 2% сывороточным альбумином человека (HAS) и 500 ЕД/мл GM-CSF, в колбах или в контейнерах для клеток. Через 5 дней DC из колб и контейнеров или оставляли необработанными (iDC), или подвергали частичному созреванию в течение 4 часов в присутствии BCG (при разведении 1:400) и y-интерферона (IFNy, 500 ЕД/мл), (pmDC). Клетки собирали, промывали и смешивали в течение 48 часов с равным числом облученных, флуоресцентномеченных опухолевых клеток РКН67-А549. После инкубации клетки отмывали, окрашивали с помощью специфичных к CD11c, меченных фикоэритрином (РЕ) моноклональных антител и анализировали с помощью проточной цитометрии. Значения, представленные в таблице 1, представляют процент клеток CD11c+ в пределах DC-щели, которые также были положительными в отношении РКН67-антигена (MFI = значение интенсивности флуоресценции). Контроли включали в себя DC, смешанные с клетками РКН67-А549 непосредственно перед анализом.
| Таблица 1 | ||
| Обработка | % клеток CD11c+ PKH67+ | MFI |
| iDC-колба | 87,6 | 235,2 |
| pmDC-колба | 90,7 | 610,2 |
| iDC-контейнер | 72,8 | 403,5 |
| pmDC-контейнер | 91,3 | 557,5 |
Эти данные показывают, что в этом анализе частично созревшие дендритные клетки лучше захватывают антиген, чем незрелые дендритные клетки, как определено по процентному содержанию клеток, которые захватывают антиген, или по количеству материала, задержанного опухолевыми клетками.
В другом примере проводили лейкаферез у пациента после операции по удалению опухолевого роста. Из продукта лейкафереза очищали моноциты путем тангенциальной фильтрации в потоке. Очищенные моноциты дифференцировали, как описано выше, и подвергали частичному созреванию экспонированием убитой нагреванием и фиксированной в формалине BCG (5×106 кое/мл) и IFNy (500 ЕД/мл). Частично созревшие дендритные клетки готовили для введения и инъецировали внутрь ложа опухоли индивидуума при ультразвуковом контроле направления. Обнаружили, что дендритные клетки, выделенные из индивидуума, способны к индуцированию опухолеспецифичного Т-клеточного цитотоксического ответа при измерении in vitro. Кроме того, обнаружили, что время рецидива опухоли было предотвращено или существенно замедлено.
Пример 2
В этом примере клетки раковой опухоли кишечника человека трансплантировали мышам для образования опухолевых ксенотрансплантатов хорошо известными способами. После внедрения опухолей животных делили на группы и животным каждой из групп вводили внутрь опухоли или плацебо, незрелые дендритные клетки, или частично созревшие дендритные клетки. Затем измеряли размер опухоли и сравнивали для каждой группы.
Вкратце, карциномы кишечника человека СТ26 внедряли самкам мышей Balb/с путем инъецирования 100000 опухолевых клеток в правый бок под кожу. Лечение начинали на 15-й день, время при котором все мыши имели пальпируемые опухоли размерами, варьирующими между 10 мм2 и 45 мм2.
Дендритные клетки готовили из костного мозга бедренной кости самок мышей Balb/c исходя из стандартных протоколов. Вкратце, клетки костного мозга после лизиса эритроцитов инкубировали с мышиными GM-CSF (200 ЕД/мл) и IL-4 (200 ЕД/мл) в RPMI 1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, в течение 13-14 дней, с добавлением свежей среды с цитокинами через 3 и 7 дней. Для получения частично созревших дендритных клеток клетки подвергали 400-кратному разбавлению инактивированными бациллами Кальметта-Герена (BCG), которые имели активность 0,5-1×106 колониеобразующих единиц на миллилитр перед инактивацией, и до 500 единиц мышиного гамма-интерферона (IFNy) на миллилитр. Клетки инкубировали в течение 8 часов, а затем наслаивали поверх 14,5% метризамида и центрифугировали в течение 15 минут при 4°С и 1750 об./мин. Интерфазу собирали, и клетки промывали и замораживали с сохранением жизнеспособности в 10% диметилсульфоксиде (ДМСО) в емкости с жидким азотом. После оттаивания при 37°С клетки дважды отмывали и ресуспендировали при концентрации 1 миллион клеток на 50 микролитров.
Мышей, несущих опухоль, лечили циклофосфамидом (50 мг/кг) при внутрибрюшинном введении на 15 день и 17. Инъекцию дендритных клеток в опухоль (или имитирующую инъекцию 50 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора, незрелых DC, или созревших в течение 8 часов DC) проводили на 16, 17, 18 и 21 дни. Рост опухоли измеряли через день в течение 60 дней.
В группе, которой внутрь опухоли вводили забуференный фосфатом физиологический раствор, все 4 мыши имели опухоль, большую, чем 100 мм2, на 40-й день или перед 40-м днем. В отличие от этого мыши, которым вводили внутрь опухоли незрелые дендритные клетки, имели уменьшенный рост опухоли, а 2 из 4-х мышей имели опухоли размерами меньше, чем 100 мм2 на 40-й день. Три из 4-х мышей, которым вводили частично созревшие DC, имели на 40-й день опухоли размерами меньше, чем 100 мм2, а двое из этих животных на 50-й день не имели пальпируемых опухолей.
Пример 3
В этом примере клетки раковой опухоли кишечника человека вводили мышам для образования опухолевых ксенотрансплантатов хорошо известными способами. После первого инъецирования опухолевых клеток животным вводили вторую дозу опухолевых клеток. Через 15 дней животных делили на группы, и животным каждой из групп вводили внутрь опухоли или плацебо, незрелые дендритные клетки, или частично созревшие дендритные клетки. Затем измеряли размер опухоли и сравнивали для каждой группы.
Вкратце, карциномы кишечника человека СТ26 внедряли самкам мышей Balb/c путем инъецирования 100000 опухолевых клеток в правый бок под кожу с последующим инъецированием 100000 опухолевых клеток в левый бок на 3-й день. Лечение начинали на 15-й день, время при котором все мыши имели пальпируемые опухоли на правом боку размерами, варьирующими между 10 мм2 и 45 мм2.
Дендритные клетки готовили из костного мозга бедренной кости самок мышей Balb/c исходя из стандартных протоколов. Вкратце, клетки костного мозга после лизиса эритроцитов инкубировали с мышиными GM-CSF (200 ЕД/мл) и IL-4 (200 ЕД/мл) в RPMI 1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой, в течение 13-14 дней, с добавлением свежей среды с цитокинами через 3 и 7 дней. Для получения частично созревших дендритных клеток клетки подвергали 400-кратному разбавлению инактивированными бациллами Кальметта-Герена (BCG), которые имели активность 0,5-1×106 колониеобразующих единиц на миллилитр перед инактивацией, и до 500 единиц мышиного гамма-интерферона на миллилитр. Затем клетки наслаивали поверх 14,5% метризамида и центрифугировали в течение 15 минут при 4°С и 1750 об./мин. Интерфазу собирали, и клетки промывали и замораживали с сохранением жизнеспособности в 10% диметилсульфоксиде (ДМСО) в емкости с жидким азотом. После оттаивания при 37°С клетки дважды отмывали и ресуспендировали при концентрации 1 миллион клеток на 50 микролитров.
Мышей, несущих опухоль, лечили циклофосфамидом (50 мг/кг) при внутрибрюшинном введении на 15-й день и 17-й. Инъекцию дендритных клеток в опухоль на правом боку (или имитирующую инъекцию 50 мкл забуференного фосфатом физиологического раствора, незрелых DC, или созревших в течение 8 часов DC, или DC, созревших в течение 24 часов) проводили на 16, 17, 18 и 21 дни. Рост опухоли измеряли через день в течение 60-ти дней.
В группе, которой внутрь опухоли вводили забуференный фосфатом физиологический раствор, все 5 мышей имели на правом боку опухоли размерами больше, чем 100 мм2 перед 35 днем, а 3/5 животных имели на левом боку опухоли > 100 мм2 на 40-й день или перед 40-м днем. В отличие от этого, мыши, которым вводили внутрь опухоли незрелые дендритные клетки (только в правый бок), имели уменьшенный рост опухоли: одна мышь не имела пальпируемой опухоли ни на одном из боков на 60-й день, а 4 из 5 мышей имели опухоли < 100 мм2 на обоих боках на 40-й день. Три из 5 мышей, которым вводили частично созревшие в течение 8 часов DC, имели полностью рассосавшиеся обе опухоли к 50-тому дню. В группе, которой вводили DC, которые частично созревали в течение 24 часов, рост опухоли был уменьшен еще больше. У трех из 5-ти мышей опухоли полностью рассосались с обеих сторон к 50-тому дню, у одного животного полностью рассосалась опухоль на левом боку и частично ликвидировалась опухоль на правом боку (< 100 мм2 на 40-й день) и у одного животного частично ликвидировались обе опухоли (< 50 мм2 с обеих сторон на 40-й день).
Пример 4
В этом примере использовали опухолевые клетки человека для образования ксенотрансплантантных опухолей у мышей, как описано выше. Дифференцированные незрелые дендритные клетки подвергали частичному созреванию путем воздействия на клетки агентом созревания дендритных клеток, имидазохинолином R898 или R898, в сочетании с BCG и IFNy. Частично созревшие дендритные клетки, незрелые дендритные клетки и плацебо вводили в опухоль, и сравнивали размеры опухолей в каждой группе.
Вкратце, опухоли внедряли мышам как в примере 2. Дендритные клетки готовили как в примерах 2 и 3, но частичного созревания клеток достигали путем экспонирования клеток 5 мкг/мл иммуномодулятора (агента созревания дендритных клеток) R848, или 5 мкг/мл иммуномодулятора R848 вместе с BCG и гамма-интерфероном в концентрациях в соответствии с примерами 2 и 3 в течение 8 часов.
Режим лечения был идентичен режиму в примере 3. Ни одна из мышей, инъецированных внутриопухолево забуференным фосфатом физиологическим раствором, не сдерживала рост опухоли. Только у одной из пяти мышей, которых лечили частично созревшими с R848 DC, полностью останавливался рост опухоли, как это произошло у 3 из 5 мышей, которым вводили внутриопухолево частично созревшими с R848 DC с BCG и IFNy. Девяти мышам примеров 3 и 4, которые имели полностью рассосавшиеся опухоли, вводили приблизительно через 30 дней после рассасывания опухоли в правый бок 1 миллион опухолевых клеток. Ни одно из животных не показывало заметный рост опухоли, проявляя иммунологическую защиту против опухолевых клеток СТ26.
Пример 5
В этом примере дендритные клетки, приготовленные как в вышеприведенных примерах, характеризовали на экспрессию поверхностных молекул. Вкратце, мышиные дендритные клетки, приготовленные как в экспериментах 2-4, характеризовали на экспрессию молекул клеточной поверхности после окрашивания флуоресцентными антителами и анализа проточной цитометрии. Результаты представлены в виде процентного содержания клеток, позитивных в отношении фенотипических поверхностных маркеров, и средней интенсивности флуоресценции для конкретных поверхностных маркеров в таблицах 2 и 3.
| Таблица 2 | ||||||
| Процент позитивных клеток | ||||||
| лечение | CD11c | MHC-II | CD80 | CD86 | CD54 | CD40 |
| Незрелые | 66,9 | 68,1 | 62,2 | 28,1 | 62,6 | 1,4 |
| R848 (8 часов) | 60,7 | 76,4 | 73,4 | 31,3 | 96,6 | 1,5 |
| BCG/IFN( 8 часов) | 59,5 | 85,5 | 84,9 | 66,0 | 96,0 | 2,0 |
| BCG/IFN/R848 (8 часов) | 58,4 | 88,8 | 82,4 | 61,8 | 96,6 | 2,6 |
| BCG/IFN (24 часа) | 66,3 | 91,5 | 90,0 | 84,4 | 95,3 | 3,3 |
| Таблица 3 | |||||
| Средняя интенсивность флуоресценции | |||||
| лечение | МНС-II | CD80 | CD86 | CD54 | CD40 |
| Незрелые | 395,7 | 50,0 | 30,7 | 53,8 | 3,0 |
| R848 (8часов) | 515,5 | 54,7 | 30,0 | 90,0 | 8,0 |
| BCG/IFN (8 часов) | 751,1 | 79,1 | 74,6 | 120,3 | 7,2 |
| BCG/IFN/R848 (8 часов) | 757,8 | 79,3 | 66,4 | 132,9 | 13,9 |
| BCG/IFN (24 часа) | 876,8 | 97,9 | 99,0 | 126,9 | 11,4 |
Пример 7
Пациента, диагносцированного с солидной опухолью, лечат с помощью химиотерапии, лучевой терапии, криотерапии или брахитерапии и затем частично созревшими дендритными клетками, вводимыми внутриопухолево. После лечения опухоль рассасывается, и пациент защищен от рецидива опухоли.
Предшествующие результаты представлены для иллюстрации, но не для ограничения объема заявленного изобретения. Другие варианты изобретения будут полностью очевидны специалистам в данной области и охватываются прилагаемой формулой изобретения. Все публикации, патенты, заявки на патент и другие ссылки, процитированные здесь, также полностью включены в данное описание путем ссылки.
Claims (32)
1. Способ продуцирования противоопухолевого иммунного ответа, отличающийся тем, что дендритные клетки, индуцированные in vitro для инициирования созревания, характеризующиеся способностью захватывать и процессировать антиген in vivo, вводят индивидууму с опухолью.
2. Способ по п.1, где дендритные клетки получают из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови.
3. Способ по п.2, где дендритные клетки получают от индивидуума, которого будут лечить.
4. Способ по п.2, где дендритные клетки получают от здорового индивидуума, HLA-совместимого с индивидуумом, которого будут лечить.
5. Способ по п.1, где дендритные клетки являются частично созревшими в присутствии агента созревания дендритных клеток.
6. Способ по п.5, где агентом созревания дендритных клеток является бацилла Кальметта-Герена (BCG), y-интерферон (IFNy), липополисахарид (LPS), фактор некроза опухоли a (TNFα), соединение имидазохинолин, искусственный двунитевой полирибонуклеотид, агонист Toll-подобного рецептора (TLR), последовательность нуклеиновых кислот, содержащая неметилированные CpG-мотивы, известные для индукции созревания дендритных клеток, или любая их комбинация.
7. Способ по п.6, где BCG включает целую BCG, элементы клеточной стенки BCG, происходящие из BCG липоарабидоманнаны или компоненты BCG.
8. Способ по п.6, где BCG является термоинактивированной BCG или BCG, обработанной формалином.
9. Способ по п.6, где эффективное количество BCG составляет от приблизительно 105 до 107 КОЕ на миллилитр среды культуры тканей, а эффективное количество IFNy составляет от приблизительно 100 до приблизительно 1000 единиц на миллилитр среды культуры тканей.
10. Способ по п.6, где соединение имидазохинолин представляет собой соединение имидазохинолин-4-амин.
11. Способ по п.10, где соединение имидазохинолин-4-амин означает 4-амино-2-этоксиметил-α,α-диметил-1Н-имидазол[4,5-с]хинолин-1-этанол или 1-(2-метилпропил)-1Н-имидазо[4,5-с]хинолин-4-амин, или их производное.
12. Способ по п.6, где синтетический двунитевой полирибонуклеотид означает poly[l]:poly[C(12)U].
13. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят прямо в опухоль.
14. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят в ложе опухоли после хирургического удаления или резекции опухоли.
15. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят в область тканей, окружающих опухоль.
16. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят в лимфатический узел, непосредственно дренирующий область опухоли.
17. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят непосредственно в кровеносный сосудистый проток, который доставляет кровь или лимфу к опухоли или к органу, пораженному опухолью.
18. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят в кровеносную систему, так что клетки доставляются к опухоли или к органу, пораженному опухолью.
19. Способ по п.1, где частично созревшие дендритные клетки вводят в качестве адъюванта для лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации.
20. Способ по п.19, где частично созревшие дендритные клетки вводят перед, одновременно с, или после лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации.
21. Композиция, содержащая дендритные клетки, индуцированные in vitro для инициирования созревания, характеризующиеся способностью захватывать и процессировать антиген in vivo, в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем для введения.
22. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки демонстрируют увеличенную экспрессию костимулирующих молекул CD80, CD86 и/или CD54 и сохраняют способность захватывать и процессировать антиген.
23. Композиция по п.21, содержащая от приблизительно 102 до приблизительно 1010 частично созревших дендритных клеток.
24. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки сохранялись при низких температурах после частичного созревания.
25. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки выделялись из пациента, которому они должны быть введены.
26. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки были HLA-совместимы с индивидуумом, которому они должны быть введены.
27. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят непосредственно в опухоль.
28. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят в ложе опухоли после хирургического удаления или резекции опухоли.
29. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят в область тканей, окружающих опухоль.
30. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят в лимфатический узел, непосредственно дренирующий область опухоли.
31. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят непосредственно в кровеносный сосудистый проток, который доставляет кровь или лимфу к опухоли, ложу опухоли или к органу, пораженному опухолью.
32. Композиция по п.21, где частично созревшие дендритные клетки вводят в кровеносную систему, так что клетки доставляются к опухоли, ложу опухоли или к органу, пораженному опухолью.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US43126702P | 2002-12-06 | 2002-12-06 | |
| US60/431,267 | 2002-12-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005121256A RU2005121256A (ru) | 2006-02-10 |
| RU2348418C2 true RU2348418C2 (ru) | 2009-03-10 |
Family
ID=32507696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005121256/14A RU2348418C2 (ru) | 2002-12-06 | 2003-12-05 | Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20060057120A1 (ru) |
| EP (2) | EP1567155B1 (ru) |
| JP (2) | JP4859169B2 (ru) |
| KR (1) | KR101144196B1 (ru) |
| CN (2) | CN102600461B (ru) |
| AT (1) | ATE486125T1 (ru) |
| AU (2) | AU2003293411B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0317064B8 (ru) |
| CA (1) | CA2509058A1 (ru) |
| DE (1) | DE60334725D1 (ru) |
| DK (1) | DK1567155T3 (ru) |
| ES (1) | ES2354944T3 (ru) |
| HK (1) | HK1082180A1 (ru) |
| IL (1) | IL169002A (ru) |
| MX (1) | MXPA05006042A (ru) |
| PL (1) | PL377209A1 (ru) |
| PT (1) | PT1567155E (ru) |
| RU (1) | RU2348418C2 (ru) |
| WO (1) | WO2004053072A2 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013147642A1 (ru) * | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Egorov Oleg Borisovich | Способ противоопухолевой иммунотерапии |
| RU2565542C2 (ru) * | 2010-02-10 | 2015-10-20 | Иммуникум Аб | Улучшенная композиция для ингибирования пролиферации опухолевых клеток |
| RU2610427C2 (ru) * | 2009-07-09 | 2017-02-10 | Тихеникс С.А. | Способы и композиции для применения в клеточной терапии |
| RU2733886C2 (ru) * | 2016-06-07 | 2020-10-07 | Куратис Инк. | КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ СТИМУЛИРОВАНИЯ СОЗРЕВАНИЯ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК Rv2299c/ESAT-6 |
| RU2749610C2 (ru) * | 2015-09-15 | 2021-06-16 | Нортвест Байотерапьютикс, Инк. | Способы, относящиеся к композициям активированных дендритных клеток и к иммунотерапевтическому лечению индивидуумов с прогрессирующим раком |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1567155T3 (da) * | 2002-12-06 | 2011-02-14 | Northwest Biotherapeutics Inc | Administration of dendritiske celler, der er delvist modnet in vitro til behandlingen af tumorer |
| US20070134273A1 (en) * | 2004-02-10 | 2007-06-14 | Francois Romagne | Composition and method for the treatment of carcinoma |
| US20060216269A1 (en) * | 2004-09-17 | 2006-09-28 | Kenichiro Hasumi | Dendritic cell tumor injection (DCTI) therapy |
| US8076132B2 (en) | 2004-09-17 | 2011-12-13 | Hasumi International Research Foundation | Dendritic cell tumor injection (DCTI) therapy |
| WO2006095330A2 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and immunogenic cell preparations for treating antigen-associated diseases |
| WO2007001200A1 (fr) * | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetsvennostyu 'rusgen' | Cellules dendritiques matures chargees d'un polylysat de tumeurs, et vaccin antitumoral a base desdites cellules |
| AR060424A1 (es) * | 2007-04-11 | 2008-06-18 | Consejo Nac Invest Cient Tec | Lineas celulares , composiciones para el tratamiento de melanomas que las comprenden procedimientos para preparar las composiciones y metodos de tratamiento |
| WO2008133595A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-06 | Newbiomed Pika Pte Ltd | Compositions and methods for stimulating an immune response in-vivo and in-vitro |
| WO2008151389A1 (en) * | 2007-06-15 | 2008-12-18 | Macfarlane Burnet Institute For Medical Research And Public Health Limited | Chemically modified macromolecules |
| EP2072617A1 (en) * | 2007-12-12 | 2009-06-24 | Trimed Biotech GmbH | Method for producing dendritic cells |
| CA3123228A1 (en) * | 2008-03-27 | 2009-10-01 | Asterias Biotherapeutics, Inc. | Differentiation of primate pluripotent stem cells to hematopoietic lineage cells |
| RU2678083C2 (ru) * | 2012-06-27 | 2019-01-23 | Кенитиро Хасуми | Терапия и способ внутриопухолевого введения цитотоксического т-лимфоцита и/или nkt-клетки с антителом против tnf и/или антителом против il-10 |
| GB201300049D0 (en) * | 2013-01-03 | 2013-02-20 | Transimmune Ag | Method for obtaining immuno-stimulatory dendritic cells |
| CN105828834A (zh) | 2013-11-05 | 2016-08-03 | 同源生物服务股份有限公司 | 检查点抑制剂和治疗剂的组合以治疗癌症 |
| GB201413665D0 (en) * | 2014-07-03 | 2014-09-17 | Transimmune Ag And Yale University | Method for obtaining globally activated monocytes |
| BR112017028602A2 (pt) * | 2015-06-30 | 2018-09-04 | Northwest Biotherapeutics Inc | células dendríticas devidamente ativadas que induzem uma resposta imune antitumoral aperfeiçoada ou aumentada |
| WO2018160666A1 (en) * | 2017-02-28 | 2018-09-07 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Short-term activated dc1s and methods for their production and use |
| GB201711379D0 (en) * | 2017-07-14 | 2017-08-30 | Univ Cape Town | Maturation of dendritic cells |
| CN109957548B (zh) * | 2017-12-26 | 2022-03-18 | 上海尚泰生物技术有限公司 | 一种基因修饰的树突状细胞疫苗 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0633929B1 (en) | 1992-04-01 | 2004-03-03 | The Rockefeller University | METHOD FOR $i(IN VITRO) PROLIFERATION OF DENDRITIC CELL PRECURSORS AND THEIR USE TO PRODUCE IMMUNOGENS |
| US5788963A (en) * | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
| US6797488B1 (en) * | 1997-12-08 | 2004-09-28 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Methods of producing anti-angiogenic proteins |
| US6482405B1 (en) * | 1998-09-15 | 2002-11-19 | University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education | In situ injection of antigen-presenting cells with genetically enhanced cytokine expression |
| CN1321189A (zh) * | 1998-10-02 | 2001-11-07 | 三菱化学株式会社 | 细胞性免疫的诱导方法以及被诱导了细胞免疫的细胞 |
| US6649158B1 (en) * | 1998-10-15 | 2003-11-18 | Canji, Inc. | Methods and compositions to induce antitumor response |
| US6558951B1 (en) * | 1999-02-11 | 2003-05-06 | 3M Innovative Properties Company | Maturation of dendritic cells with immune response modifying compounds |
| BR0009772A (pt) * | 1999-04-14 | 2002-01-08 | Us Health | Composições contendo imunotoxinas e agentes que inibem a maturação de células dendrìticas para induzir tolerância imune a um enxerto |
| US20030108527A1 (en) * | 1999-12-28 | 2003-06-12 | Tsukasa Seya | Maturation-promoting agent for immature dendrtic cells |
| JP2002069001A (ja) * | 2000-08-29 | 2002-03-08 | Asahi Kasei Corp | 樹状細胞を主成分とする細胞ワクチン |
| US20020094545A1 (en) | 2000-11-30 | 2002-07-18 | Harris Paul E. | Growth of human dendritic cells for cancer immunotherapy in closed system using microcarrier beads |
| AU2002326463A1 (en) * | 2001-07-25 | 2003-02-17 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Methods and apparatus for enrichment and culture of monocytic dendritic cell precursors |
| ES2766299T3 (es) * | 2001-09-06 | 2020-06-12 | Northwest Biotherapeutics Inc | Composiciones y procedimientos para la activación linfocitaria de células dendríticas monocíticas y células T para generar una respuesta Th-1 |
| DK1567155T3 (da) * | 2002-12-06 | 2011-02-14 | Northwest Biotherapeutics Inc | Administration of dendritiske celler, der er delvist modnet in vitro til behandlingen af tumorer |
| EP1604016B1 (en) * | 2003-02-27 | 2009-01-14 | NorthWest Biotherapeutics, Inc. | Generation of dendritic cells from monocytic dendritic precursor cells with gm-csf in the absence of additional cytokines |
-
2003
- 2003-12-05 DK DK03790358.0T patent/DK1567155T3/da active
- 2003-12-05 CA CA002509058A patent/CA2509058A1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 JP JP2004559310A patent/JP4859169B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 PL PL377209A patent/PL377209A1/pl not_active Application Discontinuation
- 2003-12-05 CN CN201210027703.4A patent/CN102600461B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-12-05 WO PCT/US2003/038672 patent/WO2004053072A2/en active Application Filing
- 2003-12-05 BR BRPI0317064A patent/BRPI0317064B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-12-05 EP EP03790358A patent/EP1567155B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 EP EP20100176476 patent/EP2260861A1/en not_active Ceased
- 2003-12-05 AT AT03790358T patent/ATE486125T1/de active
- 2003-12-05 ES ES03790358T patent/ES2354944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 MX MXPA05006042A patent/MXPA05006042A/es active IP Right Grant
- 2003-12-05 RU RU2005121256/14A patent/RU2348418C2/ru active IP Right Revival
- 2003-12-05 DE DE60334725T patent/DE60334725D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 CN CN2003801089756A patent/CN1738619B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-12-05 KR KR1020057010303A patent/KR101144196B1/ko active IP Right Grant
- 2003-12-05 US US10/538,226 patent/US20060057120A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-05 AU AU2003293411A patent/AU2003293411B2/en not_active Ceased
- 2003-12-05 PT PT03790358T patent/PT1567155E/pt unknown
-
2005
- 2005-06-05 IL IL169002A patent/IL169002A/en active IP Right Grant
-
2006
- 2006-02-02 HK HK06101427.5A patent/HK1082180A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-01-28 AU AU2011200352A patent/AU2011200352B2/en not_active Ceased
- 2011-09-08 JP JP2011196385A patent/JP5707284B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-06-04 US US13/488,388 patent/US20120251561A1/en not_active Abandoned
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KADOWAKI et al. Distinct CpG DNA and polyinosinic-polycytidilic acid double steanded RNA, respectively stimulate CD11c-type 2 dendritic cell precursors and CD11+ dendritic cells to produce type I IFN // The Jour, of Immunology. 2001, vol.166(4), с 2291-2295. TJOA et al. Dendritic cell-based immunotherapy for prostate cancer // CA Cancer J. Clin. 1999, vol.49, с 117-128. * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2610427C2 (ru) * | 2009-07-09 | 2017-02-10 | Тихеникс С.А. | Способы и композиции для применения в клеточной терапии |
| RU2565542C2 (ru) * | 2010-02-10 | 2015-10-20 | Иммуникум Аб | Улучшенная композиция для ингибирования пролиферации опухолевых клеток |
| WO2013147642A1 (ru) * | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Egorov Oleg Borisovich | Способ противоопухолевой иммунотерапии |
| RU2530523C2 (ru) * | 2012-03-29 | 2014-10-10 | Олег Борисович Егоров | Способ противоопухолевой иммунотерапии |
| RU2749610C2 (ru) * | 2015-09-15 | 2021-06-16 | Нортвест Байотерапьютикс, Инк. | Способы, относящиеся к композициям активированных дендритных клеток и к иммунотерапевтическому лечению индивидуумов с прогрессирующим раком |
| RU2733886C2 (ru) * | 2016-06-07 | 2020-10-07 | Куратис Инк. | КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ СТИМУЛИРОВАНИЯ СОЗРЕВАНИЯ ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩАЯ ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК Rv2299c/ESAT-6 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2348418C2 (ru) | Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей | |
| EP1604016B1 (en) | Generation of dendritic cells from monocytic dendritic precursor cells with gm-csf in the absence of additional cytokines | |
| KR20240005984A (ko) | 미성숙 단핵구성 수지상 세포의 활성화를 유도하기 위한 조성물 및 방법 | |
| JP2006510667A5 (ru) | ||
| AU2023202977A1 (en) | Optimally activated dendritic cells that induce an improved or increased anti-tumor immune response | |
| JP2024019229A (ja) | 進行したがんを有する被験体のための活性化樹状細胞組成物および免疫療法処置に関する方法 | |
| US20040197903A1 (en) | Method for induction of proliferation of natural killer cells by dendritic cells cultured with GM-CSF and IL-15 | |
| AU2018260971B2 (en) | Administration of dendritic cells partially matured in vitro for the treatment of tumors | |
| AU2013234394B2 (en) | Administration of dendritic cells partially matured in vitro for the treatment of tumors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20111206 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20121120 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161206 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20170821 |