WO2013147642A1 - Способ противоопухолевой иммунотерапии - Google Patents

Способ противоопухолевой иммунотерапии Download PDF

Info

Publication number
WO2013147642A1
WO2013147642A1 PCT/RU2012/001039 RU2012001039W WO2013147642A1 WO 2013147642 A1 WO2013147642 A1 WO 2013147642A1 RU 2012001039 W RU2012001039 W RU 2012001039W WO 2013147642 A1 WO2013147642 A1 WO 2013147642A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hla
dcs
patient
tumor
introduction
Prior art date
Application number
PCT/RU2012/001039
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Олег Борисович ЕГОРОВ
Бенджамин Алан ЧЁ
Вильям Алуизиус КАВЕНА III
Original Assignee
Egorov Oleg Borisovich
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Egorov Oleg Borisovich filed Critical Egorov Oleg Borisovich
Publication of WO2013147642A1 publication Critical patent/WO2013147642A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4615—Dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4622—Antigen presenting cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464499—Undefined tumor antigens, e.g. tumor lysate or antigens targeted by cells isolated from tumor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/26—Universal/off- the- shelf cellular immunotherapy; Allogenic cells or means to avoid rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/58—Prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/26—Lymph; Lymph nodes; Thymus; Spleen; Splenocytes; Thymocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells

Definitions

  • the invention relates to medicine, specifically to the treatment of cancer, and can be used for antitumor immunotherapy.
  • Passive antitumor immunotherapy usually refers to the use of components of the immune system (monoclonal antibodies, cytokines, interferons, etc.) prepared outside the patient's body (ex vivo).
  • Active antitumor immunotherapy in turn, is aimed at stimulating antitumor immune response directly in the patient's body (in vivo).
  • One of the promising areas of active antitumor immunotherapy is the creation of antitumor vaccines. Among them, the most promising are vaccines based on dendritic cells (DC vaccines).
  • a DC vaccine refers to dendritic cells (DC) loaded with an ex vivo tumor antigen.
  • DC dendritic cells
  • Such vaccines are known as first-generation DC vaccines.
  • the antigens used in these vaccines are of various origins: tumor lysates, tumor protein extracts and synthetic peptides.
  • various molecular biological methods are also used for this purpose (plasmid transfection, retroviral vectors, recombinant adenoviruses, lentiviruses, electroporation; introduction of tumor RNA).
  • DCs can present antigens without processing, presenting them on their surface as part of antigen-antibody complexes linked through Fc receptors.
  • Another alternative to producing cells representing tumor antigens is the fusion of DCs with tumor cells to produce hybrid cells.
  • first-generation DC vaccines One of the limitations of first-generation DC vaccines is the fact that most vaccines use only one antigenic target.
  • a malignant tumor consists of a heterogeneous population of neoplastic cells differing in different patients. Vaccines that use multiple antigens may be a more suitable choice to activate a more complete immune response.
  • only a limited set of tumor-associated antigens that can be used as antigenic targets for creating a vaccine are currently identified and available. Using a patient’s tumor material as a source of antigens to create a vaccine may provide the opportunity to select and present a variety antigens, including those that are currently not identified.
  • DC vaccines obtained using tumor lysates, irradiated tumor cells, tumor RNA, and hybrid cells are examples of attempts to use the tumor as a source of antigens and to understand that a set of antigens may be specific for each specific tumor.
  • the manufacturing process of such vaccines, and especially the isolation and loading of antigens is often very complex and expensive.
  • a method for producing an antitumor immune response comprises the administration of DCs, wherein DCs are pre-induced in vitro to initiate maturation.
  • DK is obtained from the skin, spleen, bone marrow, thymus, lymph nodes, cord blood or peripheral blood, where DK is obtained from the individual to be treated, or DK is obtained from a healthy individual, HLA-compatible with the individual to be treated.
  • DCs are partially matured in the presence of a DC maturation agent, and the DC maturation agent is Calmette-Guerin bacillus (BCG), interferon- ⁇ (IFNy), lipopolysaccharide (LPS), tumor necrosis factor alpha
  • TNF 0 imidazoquinoline compound
  • TLR Toll-like receptor agonist
  • partially matured DCs are injected directly into the tumor, either in the tumor bed after surgical removal or resection of the tumor, or partially matured DCs are introduced into the tissue surrounding the tumor, or partially matured DCs are introduced into the lymph node directly draining the tumor area, or partially matured DC is injected directly into the blood vessel that feeds the tumor or organ, affected by the tumor, or into the circulatory system, so that the cells are delivered to the tumor or to the organ affected by the tumor.
  • Partially matured DCs are administered as an adjuvant to radiation therapy, chemotherapy, or a combination thereof.
  • Partially matured DCs are administered before, simultaneously with, or after radiation therapy, chemotherapy, or a combination thereof.
  • a variant is possible in which a composition containing DCs induced in vitro to initiate maturation, characterized by the ability to capture and process antigen in vivo, is administered in combination with a pharmaceutically acceptable carrier for administration.
  • partially matured DCs demonstrate increased expression of costimulatory molecules CD80, CD86, and / or CD54 and retain the ability to capture and process antigen.
  • the composition according to the described method contains from about 10 to about 10 partially matured DC.
  • partially matured DCs in one of the solutions were kept at low temperatures after partial maturation, either partially matured DCs were isolated from the patient to whom they should be administered, or partially matured DCs were HLA-compatible with the individual to whom they should be administered.
  • the disadvantage of this method is the low efficiency of the antitumor immune response, since the tumor inhibits the migration of mature DCs into the draining lymph nodes, as well as the launch and development of an effective antitumor immune response.
  • the objective of the invention is to increase the effectiveness of antitumor immunotherapy by overcoming the negative impact of the tumor microenvironment on the maturation, migration and processing of DC antigens.
  • the technical result consists in enhancing the antitumor immune response, both locally and at the systemic level.
  • the technical result is achieved due to the fact that in the claimed method antitumor immunotherapy of patients, including the introduction of a DC to a patient, use a combined method of administering mature allogeneic DCs and immature autologous DCs.
  • This invention is based on the understanding of the fact that the introduction of antigen-presenting cells (APCs), such as DCs into a tumor (intratumoral administration) is the preferred method of active immunotherapy of cancer, since it provides the opportunity to carry out the process of loading APCs with tumor antigens of the patient in situ, without the need for identification, selection, isolation and implementation of the process of loading DC with antigen ex vivo.
  • APCs antigen-presenting cells
  • the above method can be significantly improved by combining it with methods that can release antigens in vivo, such as various methods of tumor ablation, including chemotherapy, radiation therapy, radiofrequency ablation, photodynamic therapy, local hyperthermia, and high-intensity focused ultrasound therapy and them like that.
  • This invention is also based on the understanding of the fact that immature DCs are used for intratumoral administration, based on their ability to absorb antigens by phage and endocytosis directly from tumor cells in situ.
  • the invention is additionally based on the understanding that after antigen absorption in situ, immature DCs must undergo a maturation (activation) process in order to acquire the ability to migrate to the lymph nodes and effectively activate the antigen-specific T-cell response.
  • the present invention relates to the use of allogeneic DCs differentiated ex vivo as a cell adjuvant in an active immunotherapy method using in situ tumor material and autologous immature DCs.
  • the claimed method of immunotherapy involves the administration of DC to a patient. At the same time, DC is introduced in stages.
  • the introduction of mature allogeneic DCs loaded with a tumor-specific antigen is carried out, the maturation of which is carried out ex vivo.
  • allogeneic DCs stimulate an allogeneic response in the patient, which leads to rapid rejection and elimination of allogeneic DCs.
  • the allogeneic response of the patient's immune system against allogeneic DCs includes local and systemic production of pro-inflammatory cytokines.
  • the introduction of mature allogeneic DCs determines both a systemic and local immune response, primarily, providing the cytokine environment of immunocompetent cells at the local level of regional lymphatic pathways and lymph nodes. This is achieved due to the ability to migrate mature DCs to the lymph nodes, which ensures the creation of a microenvironment rich in pro-inflammatory cytokines and other factors that increase the efficiency of the processes of absorption and antigen processing by immature autologous DCs (maturation of DCs), migration of mature DCs to draining lymph nodes without reducing the survival time autologous DCs loaded with antigen in the lymph nodes and activation of antigen-specific T cells. It is under these conditions that the development of an adequate antigen-specific immune response is possible, leading to the destruction of tumor foci, including metastatic ones.
  • the tumor is ablated (cell distress) before or simultaneously with the introduction of the DC, and any of the known methods of exerting physical energy on the tissue to devitalize it (cryoablation, thermal ablation, radiation exposure, radiation) are used to perform ablation exposure, ultrasonic exposure, as well as combinations of these methods) and other processes that lead to the release of one or more tumor antigens.
  • the introduction of DC in the second stage occurs not less than 24 hours, but not more than 120 hours after the first stage.
  • the time for the introduction of allogeneic DC is selected based on the kinetics of the allogeneic immune response so as to ensure the presence of pro-inflammatory cytokines.
  • Allogeneic DCs are selected based on the type of tissue compatibility antigen (HLA) of the donor and patient.
  • the selection criterion is the presence of at least one mismatch in the HLA-I (HLA-A, HLA-B or HLA-C), and HLA-II (HLA-DR, HLA-DP or HLA-DQ) haplotypes in the patient and donor. These criteria are selected to ensure the induction of CD8 + T-cell and CD4 + T-cell allogeneic responses in a patient.
  • Allogeneic and autologous DCs are obtained ex vivo from skin, spleen, bone marrow, thymus, lymph nodes, cord blood or peripheral blood from progenitor cells including blood mononuclear cells, CD34 + progenitor cells and other cells, using any known methods.
  • a preferred method for the preparation of allogeneic DCs includes methods for producing activated immunostimulatory DCs. In the claimed method, allogeneic DCs and immature autologous DCs are administered to a patient by any known method.
  • DCs are injected directly into the tumor.
  • DCs are injected into the region of tissues surrounding the tumor; in any case, DCs are introduced in such a way as to interact with other components of the immune system directly in the lymph node / group of lymph nodes that drain the tumor and adjacent tissues.
  • DC is introduced into the circulatory system, so that the cells are delivered to the tumor or to the organ affected by the tumor.
  • DCs are injected into the tumor bed after surgical removal or intervention. Any combination of the above administration methods may be used.
  • the tumor is selected from the group consisting of any solid tumors (prostate cancer, liver cancer, kidney cancer, lung cancer, breast cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, bladder cancer, transient urinary cancer , thyroid cancer, soft tissue sarcoma, melanoma, or other solid tumor).
  • solid tumors prostate cancer, liver cancer, kidney cancer, lung cancer, breast cancer, colon cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, bladder cancer, transient urinary cancer , thyroid cancer, soft tissue sarcoma, melanoma, or other solid tumor.
  • radioisotope scintigraphy pathological foci of accumulation of the radiopharmaceutical were noted in the region of the ribs on the right of V — XII and VII-XI on the left, the right humeral head, thoracic spine and lumbar spine (Th IV, Th IX - Th XII, LI - LV), sacrum, pubic and ischial bones, sacroiliac joint on both sides, wing of the right iliac bone, head of the femur on the right.
  • the patient was obtained from monocytes and processed DC culture (dose of therapeutic vaccine).
  • the preparation of autologous immature DCs for a course of active immunotherapy the preparation of DCs obtained from peripheral monocytes of a suitable donor having at least one mismatch in the HLA-I haplotypes (HLA-A, HLA-B or HLA-C) was used as an adjuvant.
  • HLA-II HLA-DR, HLA-DP or HLA-DQ.
  • the patient with intravenous analgesia, under the control of transrectal ultrasound using a template similar to that used for perineal brachytherapy, was introduced a 18 Ch needle 15 cm long transperineally, while the end of the needle was positioned in the area of the prostate tumor.
  • the syringe containing 1.2 million allogeneic DCs obtained from a healthy donor, according to the method described above, the entire dose of the allogeneic DC preparation was injected into the tumor site, as well as peritumorally.
  • cryoablation of the prostate under epidural anesthesia 72 hours after neoadjuvant immunotherapy, the patient underwent cryoablation of the prostate under epidural anesthesia. Under the control of transrectal ultrasound using a template similar to that used for perineal brachytherapy, 6 Ch. 16 cryostats were transperineally introduced. Freezing of the prostate gland and surrounding tissues was performed. The process was monitored using temperature sensors and visually (formation of an ice ball recorded by ultrasound). Cryosamples have been removed. After normalizing the temperature in the area of intervention, autologous DCs were introduced to the patient by a method similar to that described. The dose administered was 10 million cells. Immediately after the introduction of autologous DCs, 1.2 million allogeneic DCs were introduced in the same way.
  • the diagnosis was made two years earlier than this appeal.
  • the patient underwent radical prostatectomy. Subsequently, the patient received hormonal treatment in the volume of MAB, subsequently, a decrease in the effectiveness of the therapy was noted, a relapse of the disease was recorded at the site of the urethrovesical anastomosis, tumor dissemination and the development of hormone resistance.
  • radioisotope scintigraphy pathological foci of accumulation of the radiopharmaceutical in the lumbar spine (L II – L V), sacrum, pubic bones, sacroiliac joint on both sides, and the wing of the right iliac bone were noted.
  • the patient under local anesthesia, under the control of transrectal ultrasound in the area of a tumor in the area of the urethrovesical anastomosis and paraurethrally, as well as subcutaneously in perineal area, 1 million allogeneic DCs were injected, and another 0.5 million allogeneic DCs were intravenously administered.
  • radiofrequency thermal ablation of a prostate tumor was performed on a patient under epidural anesthesia.
  • the bladder was drained by a urethral catheter. Under the control of transrectal ultrasound, an electrode was introduced transperineally sequentially at 3 points using a template similar to that used for perineal brachytherapy. A tissue ablation session was performed in the area of the anastomosis. The temperature in the ablation site was 57-78 ° C. After normalizing the temperature in the intervention area, a dose of autologous DC was introduced into the ablation zone, which amounted to 10 million cells. The course of the postoperative period is smooth. Within three days after the intervention, febrile (up to 38 ° C) fever, moderate pain syndrome, accompanied by neutrophilic leukocytosis, were observed. Self urination recovered on day 3.
  • a tumor cell line was isolated from the postoperative material of the tumor. After 20 passages, a tumor lysate was obtained from the obtained cell line, which was used for antigenic loading of DC in the laboratory to obtain an immunotherapeutic drug.
  • Obtaining a lysate, a method of training DC and obtaining the final drug is not the subject of this application and has a description in the available specialized literature.
  • This immunotherapeutic drug was used as adjuvant therapy to prevent metastasis. According to the method described above in EXAMPLE 1, a preparation was obtained for neoadjuvant immunotherapy with allogeneic DCs obtained from a healthy donor.
  • the neoadjuvant allogeneic response factor is effectively used to enhance the immune response using autologous DCs using certain doses of allogeneic DCs introduced into the tumor before and together with a dose of immature autologous DCs acting in the role of agribusiness.
  • the claimed method provides the ability to use the allogeneic effect (creating an environment rich in pro-inflammatory cytokines that induce the maturation and activation of immature autologous DCs introduced intratumorally) without reducing the survival time of autologous DCs loaded with antigen in the lymph nodes.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, конкретно к лечению онкологических заболеваний, и может быть использовано для противоопухолевой иммунотерапии. Сущность изобретения: способ противоопухолевой иммунотерапии больных, включающий введение больному дендритных клеток (ДК), получаемых из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови больного (аутологичных ДК), при этом ДК больному вводят поэтапно: на первом этапе осуществляют введение зрелых аллогенных ДК, нагруженных опухолеспецифичным антигеном, созревание которых осуществляют ex vivo, на втором этапе не менее чем через 24 часа, но не более чем через 120 часов после первого этапа осуществляют повторное введение зрелых аллогенных ДК одновременно с введением незрелых аутологичных ДК in situ в опухоль, при этом опухоль предварительно или одновременно с введением ДК подвергают воздействию абляции. Аллогенные ДК выбирают на основе типа антигена тканевой совместимости (HLA) донора и пациента, при этом критерием выбора является наличие по крайней мере одного несовпадения в гаплотипах HLA-I (HLA-A, HLA-B или HLA-C), и HLA-II (HLA-DR, HLA-DP или HLA-DQ) у пациента и донора. Для осуществления абляции используют любой из известных способов воздействия физической энергии на ткань с целью ее девитализации (криоабляцию, термоабляцию, лучевое воздействие, радиационное воздействие, ультразвуковое воздействие, а также комбинации этих способов) и другие процессы, которые приводят к высвобождению одного или нескольких опухолевых антигенов.

Description

СПОСОБ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ИММУНОТЕРАПИИ
Изобретение относится к медицине, конкретно к лечению онкологических заболеваний, и может быть использовано для противоопухолевой иммунотерапии.
Наиболее активно используемые нехирургические подходы к лечению раковых опухолей (радиационная и химиотерапия) вызывают повреждение не только злокачественно перерождённых, но и здоровых тканей больного, что приводит к развитию побочных эффектов, ограничивающих применение этих методов. Альтернативный подход к лечению онкологических заболеваний - использование высокоспецифичных механизмов самой иммунной системы человека для селективного воздействия на раковые клетки без отрицательного влияния на здоровые ткани (противоопухолевая иммунотерапия).
Выделяют два вида противоопухолевой иммунотерапии: пассивную и активную. Под пассивной противоопухолевой иммунотерапией обычно подразумевается использование компонентов иммунной системы (моноклональных антител, цитокинов, интерферонов и др.), подготовленных вне организма пациента (ex vivo). Активная противоопухолевая иммунотерапия, в свою очередь, направлена на стимуляцию противоопухолевого иммунного ответа непосредственно в организме пациента (in vivo). Одним из перспективных направлений активной противоопухолевой иммунотерапии является создание противоопухолевых вакцин. Среди них наиболее перспективными являются вакцины на основе дендритных клеток (ДК вакцины).
В большинстве случаев, под ДК-вакциной подразумевают дендритные клетки (ДК), нагруженные опухолевым антигеном ex vivo. Такие вакцины известны как ДК-вакцины первого поколения. В этом случае все этапы выделения, обработки антигена и нагрузки им ДК проводятся вне организма человека и требуют значительных затрат. Антигены, используемые в этих вакцинах, имеют различное происхождение: лизаты опухолей, экстракты опухолевых белков и синтетические пептиды. Помимо обычной «нагрузки» ДК опухолевыми антигенами с этой целью применяют, также, различные молекулярно-биологические методы (плазмидную трансфекцию, ретровирусные векторы, рекомбинантные аденовирусы, лентивирусы, электропорацию; введение опухолевой РНК). Кроме того, ДК могут презентировать антигены без процессинга, представляя их на своей поверхности в составе комплексов «антиген-антитело», связанных через Fc- рецепторы. Ещё один альтернативный вариант получения клеток, представляющих опухолевые антигены - слияние ДК с опухолевыми клетками для получения гибридных клеток.
Были разработаны методы получения больших количеств ДК из моноцитов или CD34+ клеток предшественников ex vivo. В большинстве клинических исследований в настоящее время используются ДК, полученные из моноцитов с использованием гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF) и интерлейкина-4. После 3-5 -суточной инкубации с упомянутыми факторами моноциты дифференцируются в незрелые ДК. Поскольку мигрировать в дренирующие лимфатические узлы и активировать Т-клеточный ответ способны только зрелые ДК, большинство методов получения препаратов ДК-вакцин включает дополнительную стадию созревания ДК продолжительностью 1- 2 суток, требующую применения специфических ростовых факторов.
К настоящему времени уже проведен ряд клинических исследований безопасности и эффективности различных типов ДК-вакцин для некоторых онкологических заболеваний. Вакцины при этом вводили различными путями: подкожно, внутрикожно, внутривенно и напрямую в лимфатические узлы. Безопасность использования ДК-вакцин подтверждена результатами клинических исследований с участием более 1000 пациентов, обобщенными Ridgway D. в обзоре, напечатанном в 2003 г. [Ridgway D. The first 1000 dendritic cell vaccinees // Cancer investigation. 2003, 21(6): 873-886]. Наблюдались незначительные побочные эффекты в виде лихорадки, местных реакций, аденопатии и усталости. Серьёзные, угрожающие жизни побочные эффекты не наблюдались. В некоторых случаях наблюдался измеряемый иммунологический эффект. Клиническая эффективность вакцин была различной и в некоторых случаях наблюдались клинически значимые эффекты лечения. Тем не менее, лишь в небольшом проценте случаев клинические эффекты были продолжительными или полными.
Одним из ограничений ДК вакцин первого поколения, является то обстоятельство, что большинство вакцин используют лишь одну антигенную мишень. Злокачественная опухоль состоит из гетерогенной популяции неопластических клеток различающихся у разных пациентов. Вакцины, использующие несколько антигенов, могут являться более подходящим выбором для активации более полного иммунного ответа. Кроме того, в настоящее время идентифицирован и доступен лишь ограниченный набор опухоль-ассоциированных антигенов, которые могут использоваться в качестве антигенных мишеней при создании вакцины. Использование материала опухоли пациента как источника антигенов для создания вакцины может предоставить возможность выбора и презентации множества антигенов, включая и те которые в настоящее время не являются идентифицированными.
ДК вакцины полученные с использованием лизатов опухоли, облучённых опухолевых клеток, опухолевых РНК и гибридных клеток ДК/опухолевые клетки представляю собой примеры попыток использования опухоли как источника антигенов и понимания того что набор антигенов может быть специфичным для каждой конкретной опухоли. Тем не менее, процесс изготовления таких вакцинных препаратов, и особенно выделения и нагрузки антигенами зачастую является весьма сложным и дорогостоящим.
Для преодоления указанных недостатков было предложено интратуморальное введение аутологичных ДК, что позволяет осуществлять процесс представления антигена in situ и даёт доступ к спектру аутологичных опухоль специфичных антигенов. Этот подход устраняет необходимость процедур идентификации, выбора, выделения, переработке и ex vivo презентации антигенов ДК, что существенно упрощает и удешевляет производство вакцины. Вакцины на основе этого подхода были названы ДК вакцинами второго поколения.
Были опубликованы результаты четырёх клинических исследований с использованием интратуморального введения ДК. Эти исследования подтвердили безопасность данного метода (только 4 случая побочных эффектов III степени в когорте из 57 пациентов). Triozzi, et. al. впервые опубликовали результаты интратуморального введения аутологичных незрелых ДК пациентам, страдающим метастатической меланомой и опухолью молочной железы [Triozzi P., Khurram R., Aldrich W., Walker, M., Kim, J., and Jaynes, S. Intratumoral injection of dendritic cells derived in vitro in patients with metastatic cancer // Cancer. 2000, 89(12): 2646-2654]. Mazzolini et. al. опубликовали исследование с участием 17 пациентов с метастатическим раком поджелудочной железы, колоректальным раком и первичным раком печени [Mazzolini et al. Intratumoral injection of dendritic cells engineered to secrete interleukin-12 by recombinant adenovirus in patients with metastatic gastrointestinal carcinomas // Journal of Clinical Oncology. 2005, 23(5): 999-1010].
Для того чтобы усилить процесс высвобождения и поглощения антигенов ДК, было предложено предварительно подвергать опухоль воздействию стандартных аблятивных процедур (например химиотерапии, лучевой терапии, криотерапии, радиочастотной абляции, термоабляции и фотодинамической терапии), проводимых непосредственно перед процедурой введения ДК в опухоль. Присутствие большого числа мертвых и умирающих опухолевых клеток в ткани подвергшейся абляции предоставляет широкий набор индивидуальных аутологичных антигенов для их поглощения и процессирования ДК, введенными в очаг абляции. Эта гипотеза была подтверждена целым рядом исследований на животных.
Известен «Способ противоопухолевой иммунотерапии больных солидными опухолями», патент РФ N° 2376033, класс А 61 К 39/395, 38/38, А 61 Р 37/00, 35/00, А 61 N 5/067, 2008, реализующий вышеописанную схему. Недостатком известного способа является недостаточная эффективность противоопухолевого иммунного ответа по причине использования костно- мозговых предшественников ДК, требующих особых факторов в окружении для превращения в незрелые ДК.
Известен также «Способ лечения опухолей млекопитающих», заявка США Ж 2005/0214268 А1, класс А 61 К 48/00А, 61 К 39/00, 2005. Недостатком известного способа является невысокая эффективность противоопухолевого иммунного ответа.
Очевидно, для наиболее полной и успешной реализации потенциала ДК вакцин второго поколения необходимо решить следующие проблемы:
1) улучшить эффективность процесса поглощения и процессирования антигена (созревание ДК) in vivo при интратуморальном введении незрелых ДК. 2) обеспечить надёжную миграцию зрелых ДК в дренирующие регионарные лимфатические узлы для запуска и развития эффективного противоопухолевого иммунного ответа.
Обе эти проблемы успешно решаются в предлагаемом способе иммунотерапии.
Наиболее близким к предлагаемому является «Способ введения дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию». Патент РФ Ν° 2348418, С2, класс А 61 К 35/14, 35/36, 35/26, 35/39, 35/28, 38/18, А 61 Р 35/00, опубликован в 2009 году.
По данному патенту способ продуцирования противоопухолевого иммунного ответа включает введение ДК, при этом ДК предварительно индуцируют in vitro для инициирования созревания. ДК получают из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови, где ДК получают от индивидуума, которого будут лечить, либо ДК получают от здорового индивидуума, HLA- совместимого с индивидуумом, которого будут лечить. При этом ДК являются частично созревшими в присутствии агента созревания ДК, а агентом созревания ДК является бацилла Кальметта-Герена (BCG), γ- интерферон (IFNy), липополисахарид (LPS), фактор некроза опухоли альфа
(TNF0 ), соединение имидазохинолин, искусственный двунитевой полирибонуклеотид, агонист Toll-подобного рецептора (TLR), последовательность нуклеиновых кислот, содержащая неметилированные
CpG-мотивы, известные для индукции созревания ДК, или любая их комбинация. После чего частично созревшие ДК вводят прямо в опухоль, либо в ложе опухоли после хирургического удаления или резекции опухоли, либо частично созревшие ДК вводят в область тканей, окружающих опухоль, либо частично созревшие ДК вводят в лимфатический узел, непосредственно дренирующий область опухоли, либо частично созревшие ДК вводят непосредственно в кровеносный сосуд, питающий опухоль или орган, поражённый опухолью, либо в кровеносную систему, так что клетки доставляются к опухоли или к органу, поражённому опухолью. Частично созревшие ДК вводят в качестве адъюванта лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации. Частично созревшие ДК вводят перед, одновременно с, или после лучевой терапии, химиотерапии или их комбинации. Возможен вариант, при котором композиция, содержащая ДК, индуцированные in vitro для инициирования созревания, характеризующиеся способностью захватывать и процессировать антиген in vivo, вводится в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем для введения. При этом частично созревшие ДК демонстрируют увеличенную экспрессию костимулирующих молекул CD80, CD86 и/или CD54 и сохраняют способность захватывать и процессировать антиген. Композиция по описываемому способу содержит от приблизительно 10 до приблизительно 10 частично созревших ДК. В описываемом способе частично созревшие ДК в одном из решений сохранялись при низких температурах после частичного созревания, либо частично созревшие ДК выделялись из пациента, которому они должны быть введены, либо частично созревшие ДК были HLA-совместимы с индивидуумом, которому они должны быть введены.
Недостатком известного способа является невысокая эффективность противоопухолевого иммунного ответа, поскольку опухоль подавляет миграцию зрелых ДК в дренирующие лимфоузлы, а также запуск и развитие эффективного противоопухолевого иммунного ответа.
Задачей данного изобретения является повышение эффективности противоопухолевой иммунотерапии за счёт преодоления негативного влияния микроокружения опухоли на процессы созревания, миграции и процессирования антигенов ДК.
Технический результат состоит в усилении противоопухолевого иммунного ответа, как на местном, так и на системном уровне. Технический результат достигается за счёт того, что в заявленном способе противоопухолевой иммунотерапии больных, включающем введение больному ДК, используют комбинированный способ введения зрелых аллогенных ДК и незрелых аутологичных ДК.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение основано на понимании того факта, что введение антигенпрезентирующих клеток (АПК), таких как ДК в опухоль (интратуморальное введение) является преимущественным способом активной иммунотерапии рака, поскольку предоставляет возможность осуществлять процесс нагрузки АПК опухолевыми антигенами самого пациента in situ, без необходимости идентификации, селекции, выделения и выполнения процесса нагрузки ДК антигеном ex vivo.
При этом вышеописанный способ может быть существенно улучшен за счёт его комбинации со способами, способными высвобождать антигены in vivo, такими как различные методы абляции опухоли, включая химиотерапию, лучевую терапию, радиочастотную абляцию, фотодинамическую терапию, локальную гипертермию, и высокоинтенсивную фокусированную ультразвуковую терапию и им подобные. Это изобретение также основывается на понимании того факта, что незрелые ДК используются для интратуморального введения, исходя из их возможности поглощать антигены путём фаго- и эндоцитоза непосредственно из опухолевых клеток in situ.
Изобретение дополнительно основано на понимании того, что после поглощения антигена in situ, незрелые ДК должны пройти процесс созревания (активации), для приобретения способности к миграции в лимфатические узлы и эффективной активации антигенспецифичного Т- клеточного ответа.
Настоящее изобретение относится к использованию аллогенных ДК, дифференцированных ex vivo, как клеточного адъюванта в методе активной иммунотерапии, использующем опухолевый материал in situ и аутологичных незрелых ДК. Заявленный способ иммунотерапии включает введение ДК пациенту. При этом ДК вводят поэтапно.
На первом этапе осуществляют введение зрелых аллогенных ДК нагруженных опухолеспецифичным антигеном, созревание которых осуществляют ex vivo.
Инъекция аллогенных ДК стимулирует аллогенный ответ у пациента, что ведёт к быстрому отторжению и выведению аллогенных ДК. Аллогенный ответ иммунной системы пациента против аллогенных ДК включает локальное и системное продуцирование провоспалительных цитокинов.
На втором этапе осуществляют повторное введение зрелых аллогенных ДК одновременно с введением незрелых аутологичных ДК in situ в опухоль.
Введение зрелых аллогенных ДК обуславливает как системный, так и местный иммунный ответ, в первую очередь, обеспечивая цитокиновое окружение иммунокомпетентных клеток на локальном уровне регионарных лимфатических путей и лимфоузлов. Это достигается за счёт способности к миграции зрелых ДК в лимфатические узлы, что обеспечивает создание микроокружения, богатого провоспалительными цитокинами и другими факторами, повышающими эффективность процессов поглощения и процессирования антигена незрелыми аутологичными ДК (созревания ДК), миграции зрелых ДК в дренирующие лимфоузлы без снижения срока выживаемости нагруженных антигеном аутологичных ДК в лимфатических узлах и активации антигенспецифичных Т-клеток. Именно в этих условиях возможно развитие адекватного антигенспецифичного иммунного ответа, приводящего к разрушению очагов опухоли, в том числе и метастатических.
Кроме того на втором этапе предварительно или одновременно с введением ДК проводят абляцию опухоли (клеточный дистресс), а для осуществления абляции используют любой из известных способов воздействия физической энергии на ткань с целью ее девитализации (криоабляцию, термоабляцию, лучевое воздействие, радиационное воздействие, ультразвуковое воздействие, а также комбинации этих способов) и другие процессы, которые приводят к высвобождению одного или нескольких опухолевых антигенов.
Вследствие этого, после введения незрелых аутологичных ДК, в опухоли происходит их созревание in situ за счёт поглощения антигенов, специфичных для данной конкретной опухоли, путём фаго- и эндоцитоза непосредственно из подвергшихся воздействию абляции опухолевых клеток. Затем за счёт взаимодействия созревших аутологичных ДК и Т-клеток в лимфатических узлах происходит формирование противоопухолевых клонов Т-клеточного звена. Таким образом, осуществляется запуск и развитие эффективного противоопухолевого иммунного ответа.
Введение ДК на втором этапе происходит не менее чем через 24 часа, но не более чем через 120 часов после первого этапа. Время для введения аллогенных ДК выбирается на основе данных кинетики аллогенного иммунного ответа так, чтобы обеспечить наличие провоспалительных цитокинов.
Аллогенные ДК выбирают на основе типа антигена тканевой совместимости (HLA) донора и пациента. Критерий выбора— наличие по крайней мере одного несовпадения в гаплотипах HLA-I (HLA-A, HLA-B или HLA-C), и HLA-II (HLA-DR, HLA-DP или HLA-DQ) у пациента и донора. Эти критерии выбраны для обеспечения индукции CD8+ Т-клеточного и CD4+ Т-клеточного аллогенного ответов у пациента.
Аллогенные и аутологичные ДК получают ex vivo из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови из клеток-предшественников, включающих мононуклеары крови, CD34+ клетки-предшественники и другие клетки, с использованием любых известных способов. Предпочтительный метод получения аллогенных ДК включает способы, позволяющие получить активированные иммунностимуляторные ДК. В заявленном способе аллогенные ДК и незрелые аутологичные ДК вводят пациенту любым известным способом.
В одном решении ДК вводят непосредственно в опухоль. В другом решении ДК вводят в область тканей, окружающих опухоль, в любом случае ДК вводят таким образом, чтобы осуществить взаимодействие с другими компонентами иммунной системы непосредственно в лимфатическом узле/группе лимфатических узлов, дренирующих опухоль и прилежащие ткани. В следующем решении ДК вводят в кровеносную систему, так что клетки доставляются к опухоли или к органу, поражённому опухолью. В одном из решений ДК вводят в ложе опухоли после хирургического удаления или вмешательства. Возможно использование любой комбинации вышеописанных способов введения.
Во всех случаях опухоль выбирается из группы, состоящей из любых солидных опухолей (рак предстательной железы, рак печени, рак почки, рак легких, рак молочной железы, рак толстого кишечника, рак поджелудочной железы, рак яичников, рак мочевого пузыря, переходноклеточный рак мочевыводящих путей, рак щитовидной железы, саркомы мягких тканей, меланомы или другой солидной опухоли).
ПРИМЕР 1.
Больной Т, 69 лет, диагноз рак предстательной железы, T3bNxMl . Глисон 7.
Диагноз был установлен тремя годами ранее настоящего обращения. В течение данного времени получал гормональное лечение в объёме максимальной андрогенной блокады (МАБ), впоследствии было отмечено снижение эффективности проводимой терапии в результате развития гормонорезистентности. В этой связи было проведено 6 циклов химиотерапии таксанами с непродолжительным эффектом.
На момент обращения у пациента имелся болевой синдром (для купирования которого проводилась терапия опиатами, среднесуточная потребность в морфине 30 мг), параплегия. Индекс Карновского 4. Морфологически темноклеточная аденокарцинома предстательной железы, с признаками периваскулярной и периневральной инвазии, более 50%, индекс Глисона 7 (3+4). По данным лабораторных методов исследования: PSA 150 нг/мл, ALP 380 Ед/л, РАР 10,5 Ед/л, анемия средней степени тяжести, тромбоцитопения легкой степени. По данным радиоизотопной сцинтиграфии были отмечены патологические очаги накопления радиофармпрепарата в области ребер справа V— XII и VII-XI слева, правой головки плечевой кости, грудного отдела и поясничного позвоночника (Th IV, Th IX - Th XII, L I - L V), крестца, лонных и седалищных костей, крестцово-подвздошного сочленения с обеих сторон, крыла правой подвздошной кости, головки бедренной кости справа. При проведении магнитно-резонансной томографии были выявлены множественные гипоинтенсивные очаги в костях, соответствующие специфическим очагам поражения, патологический компрессионный перелом тела L II позвонка, на уровне L III - L IV наблюдалось сужение просвета спинномозгового канала, с плотным контактом с элементами конского хвоста спинного мозга, по-видимому, определявшее, имевшуюся у пациента параплегию нижних конечностей.
По способу, описанному, выше у пациента была получена из моноцитов и переработана культура ДК (доза терапевтической вакцины). После получения препарата аутологичных незрелых ДК для проведения курса активной иммунотерапии, в качестве адъюванта использовали препарат ДК, полученных из периферических моноцитов подходящего донора, имеющего хотя бы одно несоответствие в гаплотипах HLA-I (HLA-A, HLA-B или HLA-C), и HLA-II (HLA-DR, HLA-DP или HLA-DQ.
Затем пациенту, при внутривенной анальгезии, под контролем трансректального ультразвука с использованием шаблона, аналогичного используемому при промежностной брахитерапии, трансперинеально вводили иглу 18 Ch длиной 15 см, при этом конец иглы позиционировали в область опухоли предстательной железы. Из шприца, содержащего 1,2 миллиона аллогенных ДК (полученных от здорового донора, по описанному выше способу) в опухолевый очаг, а также перитуморально, вводили всю дозу препарата аллогенных ДК.
Физическое состояние пациента после проведения неоадъювантной терапии существенно не изменилось, была отмечена субфебрильная лихорадка в течение первых суток после введения препарата аллогенных ДК, не потребовавшая дополнительной терапии. Лабораторные показатели крови существенно не изменились.
Через 72 часа после проведения неоадъювантной иммунотерапии пациенту под перидуральной анестезией была выполнена криоабляция предстательной железы. Под контролем трансректального ультразвука посредством шаблона, аналогичного используемому при промежностной брахитерапии, трансперинеально были введены 6 криостатов 16 Ch. Было выполнено замораживание предстательной железы и окружающих тканей. Процесс контролировался с помощью температурных датчиков и визуально (образование ледяного шара зарегистрированного при ультразвуковом исследовании). Криопробы были удалены. После нормализации температуры в области вмешательства, пациенту введены аутологичные ДК по способу, аналогичному описанному. Введённая доза составляла 10 миллионов клеток. Сразу после введения аутологичных ДК тем же способом вводили 1,2 миллиона аллогенных ДК. Для дренирования мочевых путей выполняли пункционную цистостомию. Протекание послеоперационного периода - гладкое. В течение трёх суток после вмешательства наблюдалась фебрильная (до 38°С) лихорадка, умеренный болевой синдром, сопровождавшиеся незначительным нейтрофильным лейкоцитозом. Был отмечен резкий подъем уровня ПСА (более 500 нг/мл). Самостоятельное мочеиспускание восстановилось на 14 сутки.
Через 1 месяц после проведённого лечения было отмечено снижение уровня ПСА до 30 нг/мл. С целью уменьшения костных болей пациент получал диклофенак по 100 мг/сутки, потребность в опиатных анальгетиках отпала. Через 3 месяца отмечалось дальнейшее снижение уровня ПСА до 22 нг/мл. Отмечено полное купирование болевого синдрома. Отмечена частичная регрессия неврологической симптоматики, восстановление чувствительности и частичное восстановление двигательной активности. Индекс Карновского 3. Других существенных изменений физического состояния пациента и отклонений лабораторных показателей не было зарегистрировано.
По данным радиоизотопной сцинтиграфии было отмечено уменьшение числа патологических очагов накопления радиофармпрепарата в области рёбер, тазовых костей, очаги в области головки бедренной кости справа и правой головки плечевой кости не визуализируются. При проведении повторной магнитно-резонансной томографии было отмечено уменьшение размеров измеряемых очагов более чем на 50%, выявлено уменьшение сужения просвета спинномозгового канала. ПРИМЕР 2.
Больной В, 72 года, диагноз: рак предстательной железы, T2cNlMl . Глисон 8.
Диагноз был установлен двумя годами ранее настоящего обращения. Больному выполнена радикальная простатэктомия. В дальнейшем пациент получал гормональное лечение в объёме МАБ, впоследствии было отмечено снижение эффективности проводимой терапии, зарегистрирован рецидив заболевания в месте уретровезикального анастомоза, диссеминация опухоли и развитие гормонорезистентности.
На момент обращения у пациента отмечалась умеренная астения и умеренный болевой синдром (для купирования которого проводилась терапия нестероидными противовоспалительными средствами (НСПВС), среднесуточная потребность в диклофенаке 50 мг). Индекс Карновского 3. Морфологически темноклеточная аденокарцинома предстательной железы, с признаками периваскулярной и периневральной инвазии, более 70%, индекс Глисона 8 (3+5). По данным лабораторных методов исследования: PSA 70 нг/мл, ALP 310 Ед/л, РАР 8,0 Ед/л, анемия лёгкой степени тяжести. По данным радиоизотопной сцинтиграфии были отмечены патологические очаги накопления радиофармпрепарата в области поясничного позвоночника (L II— L V), крестца, лонных костей, крестцово-подвздошного сочленения с обеих сторон, крыла правой подвздошной кости.
По способу, описанному выше в примере 1, были получены доза терапевтической вакцины аутологичных ДК и препарат для неоадъювантной иммунотерапии аллогенными ДК, полученными от здорового донора.
Пациенту, под местной анестезией, под контролем трансректального ультразвука в область опухолевого новообразования в зоне уретровезикального анастомоза и парауретрально, а также подкожно в области промежности, был введён 1 миллион аллогенных ДК, а также внутривенно введено ещё 0,5 миллиона аллогенных ДК.
Физическое состояние пациента после проведения неоадъювантной терапии не изменилось. Отклонений лабораторных анализов не отмечено.
Через 96 часов после проведения неоадъювантной иммунотерапии пациенту под перидуральной анестезией была выполнена радиочастотная термоабляция опухоли предстательной железы.
Мочевой пузырь был дренирован уретральным катетером. Под контролем трансректального ультразвука посредством шаблона, аналогичного используемого при промежностной брахитерапии, трансперинеально последовательно в 3 точках был введён электрод. Выполнен сеанс абляции тканей в области анастомоза. Температура в очаге абляции составляла 57-78°С. После нормализации температуры в области вмешательства, в зону абляции была введена доза аутологичных ДК, которая составила 10 миллионов клеток. Протекание послеоперационного периода - гладкое. В течение трёх суток после вмешательства наблюдалась фебрильная (до 38°С) лихорадка, умеренный болевой синдром, сопровождавшиеся нейтрофильным лейкоцитозом. Самостоятельное мочеиспускание восстановилось на 3 сутки.
Через 1 месяц после проведённого лечения отмечено снижение уровня ПСА до 12 нг/мл. Зарегистрировано прекращение болевого синдрома. Через 6 месяцев состояние пациента улучшилось. Отмечено дальнейшее снижение уровня ПСА до 6 нг/мл. Индекс Карновского 2. Существенных изменений физического состояния пациента и отклонений лабораторных показателей не зарегистрировано.
По данным радиоизотопной сцинтиграфии было отмечено уменьшение числа патологических очагов накопления радиофармпрепарата в области позвоночника и тазовых костей. При повторной биопсии зоны анастомоза опухолевых элементов не выявлено. ПРИМЕР 3.
Больной К, 62 года, диагноз рак предстательной железы, TlbNlMl . Глисон 9.
Больному выполнена радикальная простатэктомия. Из послеоперационного материала опухоли была выделена клеточная линия опухоли. После 20 пассажей из полученной клеточной линии получен лизат опухоли, который был использован для антигенной нагрузки ДК в лабораторных условиях для получения иммунотерапевтического препарата. Получение лизата, способ обучения ДК и получение конечного препарата не является предметом настоящей заявки и имеет описание в доступной специальной литературе. Данный иммунотерапевтический препарат был использован в качестве адъювантной терапии с целью профилактики метастазирования. По методике описанной выше в ПРИМЕРЕ 1 был получен препарат для неоадъювантной иммунотерапии аллогенными ДК, полученными от здорового донора.
Пациенту, под местной анестезией, под контролем трансректального ультразвука в область опухолевого новообразования в зоне уретровезикального анастомоза и парауретрально, а также подкожно в области промежности и внутрикожно в области мошонки, был введён 1 миллион аллогенных ДК. Физическое состояние пациента после проведения неоадъювантной терапии не изменилось. Отмечена умеренная реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЧЗТ) в месте внутрикожного введения. Отклонений лабораторных анализов не отмечено.
Через 48 часов после проведения неоадъювантной иммунотерапии пациенту внутривенно введена доза зрелых аутологичных ДК, нагруженных лизатом опухоли пациента, совместно с 1 миллионом аллогенных ДК в качестве адъюванта. Технический результат заявленного способа достигнут за счёт эффективного использования неоадъювантного фактора аллогенного ответа для усиления иммунного ответа с использованием аутологичных ДК, что позволило использовать аллогенный эффект (создание окружения, богатого провоспалительными цитокинами, индуцирующими созревание и активацию незрелых аутологичных ДК, введённых интратуморально), без снижения срока выживаемости аутологичных ДК, нагруженных антигеном в лимфатических узлах.
При реализации данного способа улучшается эффективность процесса поглощения и процессирования антигена (созревание ДК) при интратуморальном введении незрелых ДК и обеспечивается, таким образом, надёжная миграцию зрелых ДК в дренирующие лимфоузлы для запуска и развития эффективного противоопухолевого иммунного ответа.
Таким образом, по сравнению с ранее описанным в аналогах и прототипе, в настоящем изобретении неоадъювантный фактор аллогенного ответа эффективно использован для усиления иммунного ответа с использованием аутологичных ДК, при использовании определённых доз аллогенных ДК, вводимых в опухоль до и вместе дозой незрелых аутологичных ДК, выступающих в роли АПК.
Заявленный способ предоставляет возможность использования аллогенного эффекта (создание окружения, богатого провоспалительными цитокинами, индуцирующими созревание и активацию незрелых аутологичных ДК, введённых интратуморально), без снижения срока выживаемости аутологичных ДК, нагруженных антигеном в лимфатических узлах.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ противоопухолевой иммунотерапии больных, включающий введение больному дендритных клеток (ДК), получаемых из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови больного (аутологичных ДК), отличающийся тем, что ДК больному вводят поэтапно: на первом этапе осуществляют введение зрелых аллогенных ДК, нагруженных опухолеспецифичным антигеном, созревание которых осуществляют ех vivo, на втором этапе не менее чем через 24 часа, но не более чем через 120 часов после первого этапа осуществляют повторное введение зрелых аллогенных ДК одновременно с введением незрелых аутологичных ДК in situ в опухоль, при этом опухоль предварительно подвергают воздействию абляции.
2. Способ по п. 1. отличающийся тем, что аллогенные ДК выбирают на основе типа антигена тканевой совместимости (HLA) донора и пациента, при этом критерием выбора является наличие по крайней мере одного несовпадения в гаплотипах HLA-I (HLA-A, HLA-B или HLA-C), и HLA-II (HLA-DR, HLA-DP или HLA-DQ) у пациента и донора.
3. Способ по п. 1. отличающийся тем, на втором этапе одновременно с введением ДК проводят абляцию опухоли.
4. Способ по п. 1. отличающийся тем, что для осуществления абляции используют любой из известных способов воздействия физической энергий на ткань с целью её девитализации (криоабляцию, термоабляцию, лучевое воздействие, радиационное воздействие, ультразвуковое воздействие, а также комбинации этих способов) и другие процессы, которые приводят к высвобождению одного или нескольких опухолевых антигенов.
20
ЗАМЕНЯЮЩИЙ ЛИСТ (ПРАВИЛО 26)
PCT/RU2012/001039 2012-03-29 2012-12-10 Способ противоопухолевой иммунотерапии WO2013147642A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2012112032 2012-03-29
RU2012112032/15A RU2530523C2 (ru) 2012-03-29 2012-03-29 Способ противоопухолевой иммунотерапии

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013147642A1 true WO2013147642A1 (ru) 2013-10-03

Family

ID=49260760

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2012/001039 WO2013147642A1 (ru) 2012-03-29 2012-12-10 Способ противоопухолевой иммунотерапии

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2530523C2 (ru)
WO (1) WO2013147642A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018078145A1 (en) * 2016-10-28 2018-05-03 Bergen Teknologioverføring As Novel immunotherapeutic treatments for tumours

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050214268A1 (en) * 2004-03-25 2005-09-29 Cavanagh William A Iii Methods for treating tumors and cancerous tissues
US20080171023A1 (en) * 2000-05-12 2008-07-17 Northwest Biotherapeutics, Inc. Method to increase class i presentation of exogenous antigens by human dendritic cells
RU2348418C2 (ru) * 2002-12-06 2009-03-10 Норсуэст Байотерапьютикс, Инк. Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080171023A1 (en) * 2000-05-12 2008-07-17 Northwest Biotherapeutics, Inc. Method to increase class i presentation of exogenous antigens by human dendritic cells
RU2348418C2 (ru) * 2002-12-06 2009-03-10 Норсуэст Байотерапьютикс, Инк. Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей
US20050214268A1 (en) * 2004-03-25 2005-09-29 Cavanagh William A Iii Methods for treating tumors and cancerous tissues

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018078145A1 (en) * 2016-10-28 2018-05-03 Bergen Teknologioverføring As Novel immunotherapeutic treatments for tumours

Also Published As

Publication number Publication date
RU2530523C2 (ru) 2014-10-10
RU2012112032A (ru) 2013-10-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2012343536B2 (en) Immunogenic treatment of cancer
Berd et al. Active immunotherapy of human melanoma exploiting the immunopotentiating effects of cyclophosphamide
CN109568570B (zh) 一种抗肿瘤疫苗复合物及制备方法、注射剂及应用
KR20080091427A (ko) 동시 화학요법 및 면역요법
EP1119365A1 (en) Composition and method of using tumor cells
Appelbe et al. Radiation-enhanced delivery of systemically administered amphiphilic-CpG oligodeoxynucleotide
WO2014075631A1 (zh) 一种自体肿瘤疫苗的制备方法及其应用
Korbelik et al. N-dihydrogalactochitosan as immune and direct antitumor agent amplifying the effects of photodynamic therapy and photodynamic therapy-generated vaccines
Ollila et al. Overview of melanoma vaccines: active specific immunotherapy for melanoma patients
Aiken et al. Atim-33. Interim results of a phase II multi-center study of oncolytic adenovirus Dnx-2401 with pembrolizumab for recurrent glioblastoma; captive study (Keynote-192)
RU2530523C2 (ru) Способ противоопухолевой иммунотерапии
WO2008098183A2 (en) Combination therapy for treating cancer
JP2024506914A (ja) がんの処置のための多重免疫療法とがんワクチンとを組み合わせた治療用組成物及び方法
Das et al. Immunotherapeutic treatment strategies for primary brain tumors
AU2003277641B2 (en) Remedy for cancer
Mastrangelo et al. Cellular vaccine therapies for cancer
US20210154296A1 (en) Vaccine or immunotherapeutic agent composition containing photothermally treated cell lysates as active ingredients
Demierre et al. Vaccine therapy of melanoma: an update
KR100522526B1 (ko) 면역 치료용 수지상 세포의 제조방법
RU2203683C1 (ru) Способ иммунотерапии костно-мозговыми дендритными клетками больных солидными опухолями
KR100530576B1 (ko) 수지상세포를 이용한 암 면역 치료방법
Irie et al. Immunotherapy of melanoma: current status and prospects for the future
He et al. Anti-tumor immune responses in immune-reconstituted mice injected with a tumor vaccine
CN115364204A (zh) 个体化抗癌主动免疫的综合调动及抗癌免疫力的监测
US20030082136A1 (en) Anti-tumor vaccine

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12872530

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 12872530

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1