ES2354944T3 - Administración de células dendríticas maduradas parcialmente in vitro para el tratamiento de tumores. - Google Patents
Administración de células dendríticas maduradas parcialmente in vitro para el tratamiento de tumores. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2354944T3 ES2354944T3 ES03790358T ES03790358T ES2354944T3 ES 2354944 T3 ES2354944 T3 ES 2354944T3 ES 03790358 T ES03790358 T ES 03790358T ES 03790358 T ES03790358 T ES 03790358T ES 2354944 T3 ES2354944 T3 ES 2354944T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- dendritic cells
- bcg
- cells
- tumor
- composition according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 107
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 207
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 claims abstract description 58
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 58
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 37
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 37
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 229940124669 imidazoquinoline Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims abstract description 6
- SQQXRXKYTKFFSM-UHFFFAOYSA-N chembl1992147 Chemical compound OC1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=C(C)C(C(O)=O)=NC(C=2N=C3C4=NC(C)(C)N=C4C(OC)=C(O)C3=CC=2)=C1N SQQXRXKYTKFFSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 101000997832 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase JAK2 Proteins 0.000 claims abstract 2
- 102100033444 Tyrosine-protein kinase JAK2 Human genes 0.000 claims abstract 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 25
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 claims description 11
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 claims description 8
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 73
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 48
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 24
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 21
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 14
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 13
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 10
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 9
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 9
- -1 imidazoquinoline-4-amine compound Chemical class 0.000 description 9
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 9
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 9
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 6
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 5
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 5
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 5
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 5
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 5
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 5
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 4
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 4
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 239000000306 component Substances 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- RXNTZIJLOZMJTM-UHFFFAOYSA-N 2-(2h-quinolin-1-yl)ethanol Chemical compound C1=CC=C2N(CCO)CC=CC2=C1 RXNTZIJLOZMJTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 3
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 3
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 3
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropyl acetate Chemical compound CC(=O)OCC(O)CO KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N Metrizamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(=O)N[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)OC2O)O)=C1I BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002725 brachytherapy Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 238000000315 cryotherapy Methods 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960000554 metrizamide Drugs 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001763 2-hydroxyethyl(trimethyl)azanium Substances 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 235000019743 Choline chloride Nutrition 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M choline chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCO SGMZJAMFUVOLNK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960003178 choline chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 210000004544 dc2 Anatomy 0.000 description 1
- 230000001862 defibrillatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000003116 impacting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000110 microvilli Anatomy 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000001617 migratory effect Effects 0.000 description 1
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 1
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000005135 veiled cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/50—Colon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4615—Dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0639—Dendritic cells, e.g. Langherhans cells in the epidermis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/72—Undefined extracts from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/05—Adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
- C12N2501/24—Interferons [IFN]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Una composición comprendiendo células dendríticas maduradas parcialmente in vitro en presencia de un agente de maduración de células dendríticas combinado con un portador farmacéuticamente aceptable para la administración in vivo, donde las células dendríticas maduradas parcialmente presentan un aumento de la expresión de moléculas coestimulantes CD80, CD86 y/o CD54, y fosforilación de JAK2, y conservan la capacidad de captar y procesar el antígeno, para su uso en el tratamiento de tumores, que se caracteriza por el hecho de que la composición es para su administración directa en el tumor o en una región cercana o adyacente al mismo, o en contacto circulatorio o linfático con el tumor, o el lecho tumoral; y donde el agente de maduración de las células dendríticas es el Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e interferon γ (IFNγ); BCG, INFγ e imidazoquinolina R848; o R848 solo.
Description
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Las células dendríticas (DCs, dendritic cells) son consideradas el vehículo de elección para la inmunoterapia activa del cáncer. Los experimentos en animales han demostrado el potencial de la inmunoterapia basada en DCs para proteger a ratones de la formación de tumores y la eliminación de tumores ya establecidos. Estos éxitos se han reproducido por lo menos parcialmente en humanos en ensayos clínicos 5 pequeños. La transición desde los pequeños ensayos de seguridad o de prueba de concepto a ensayos mayores en los que se pueda demostrar la actividad o la eficacia se ha visto obstaculizada por la laboriosa e incómoda naturaleza de la preparación de las DCs (ver más abajo). Como consecuencia, pocas empresas han estado interesadas en desarrollar vacunas del cáncer basadas en DCs a pesar del gran potencial terapéutico de tales productos. 10
La inyección intratumoral (IT) de DCs constituye una forma especial de inmunoterapia basada en DCs. Tras la inyección, las DCs captan el antígeno de las células tumorales apoptóticas o moribundas, y lo presentan a células T tras la migración a los nódulos linfáticos. De hecho se ha observado que la eficacia de tales tratamientos en modelos animales se correlaciona con el grado de apoptosis en el tumor (Candido et al., Cancer Res. 61:228-236, 2001), lo que sugiere que este enfoque es plenamente compatible con el tratamiento 15 de los tumores con agentes quimioterapéuticos o radiación antes de la inyección de DCs. Además, varios grupos han demostrado que esta terapia de combinación resulta especialmente efectiva contra tumores establecidos (Nikitina et a.l, Int. J Cancer 94:825-833, 2001; Tanaka et al., Int. J. Cancer 101:265-269, 2002; Tong et. al., Cancer Res. 61:7530-7535, 2001).
20
Como las células tumorales son la fuente del antígeno, la inyección IT se anticipa a la necesidad de selección y producción de antígenos tumorales tal como son usados actualmente en la mayoría de los enfoques de terapia basada en DCs in vitro. La selección de un antígeno tumoral está a menudo condicionada por la necesidad de las empresas de tener una posición propia, y los pocos antígenos tumorales identificados hasta la fecha no han demostrado todavía que proporcionen un beneficio clínico significativo. Además, el uso 25 de tales antígenos tumorales tiene frecuentemente como resultado una vacuna monovalente, que puede perder su efectividad si las células tumorales reducen la expresión del antígeno utilizado en la inmunización. Naturalmente, la necesidad de producir el antígeno tumoral en las condiciones requeridas en las Buenas Prácticas de Fabricación (Good Manufacturing Practices, GMP) añade un coste adicional a los clásicos métodos de inmunización basados en DCs. 30
La inyección IT de DCs somete a las células dendríticas a un entorno tumoral inmunosupresor. Se sabe que los tumores producen citoquinas que inactivan las DCs, o que tienen la capacidad de sesgar la respuesta de las células T hacia una respuesta tipo T-2 menos efectiva. Varios grupos han utilizado modificación genética de DCs para intentar superar esos efectos supresores, especialmente mediante la 35 producción de la citoquina Interleuquina 12 (IL-12; Nishioka et al., Cancer Res. 59:4035-4041, 1999; Melero et al, Gene Therapy 6:1779-1784, 1999) o la expresión del ligando CD40 (Kikuchi et al., Blood 96:91-99, 2000). Los alentadores resultados descritos por esos grupos demuestran también la viabilidad de la inyección IT de DCs como enfoque terapéutico.
40
Triozzi et al. (Cancer 89:2647-2654, 2000) describen la inyección IT de DCs en pacientes con melanoma metastásico o cáncer de mama. Se constató la regresión tumoral en 4 pacientes con melanoma y en dos pacientes con carcinoma de mama. Las biopsias de las lesiones en regresión mostraron células T infiltrantes, lo que sugiere que las DCs habían realmente activado una respuesta inmune contra las células tumorales. En conjunto, estos datos demostraron que la inyección IT de DCs era factible en humanos, y podía 45 proporcionar un beneficio clínico significativo. No obstante, se ha observado una reducción significativa de antígenos de MHC de Clase II, y de la molécula coestimuladora B7-2 sobre las DCs inyectadas. Cabría esperar que una disminución de esas moléculas críticas redujera el potencial inmunoestimulador de las DCs, pero tal como se presenta en esta invención esto puede evitarse mediante la maduración parcial de las DCs previa a la administración. 50
Las DCs existen en los tejidos periféricos en una forma inmadura, dispuestas a captar y procesar antígeno. Es esta célula inmadura la que es imitada con más precisión por las DCs generadas a partir de monocitos, en presencia de GM-CSF e IL-4. Diversos estímulos pueden iniciar la maduración de las DCs, y durante este proceso las células pierden su capacidad de captar el antígeno de forma eficiente, y adquieren 55 sus funciones estimuladoras de células T. Este proceso es complejo y por lo menos in vitro puede tardar hasta
48 horas en completarse. Otra consecuencia de la maduración es un cambio en las propiedades migratorias de las células. Por ejemplo, la maduración induce varios receptores de citoquinas, incluyendo el CCR7, que dirigen a las células a las regiones de células T de los nódulos linfáticos de drenaje, donde las DCs maduras activan a las células T contra los antígenos presentes en la superficie de las DCs en el contexto de moléculas de MHC de clase I y clase II. 5
La inducción de tolerancia se ha relacionado con la presentación cruzada de (auto) antígenos por las DCs (Kurts et al., J. Exp. Med, 186:239-245, 1997), y la hipótesis prevalente actualmente postula que las DCs inmaduras presentan continuamente antígenos en el sistema inmunitario para mantener la tolerancia (Kurts et al, J. Exp, Med. 184:923-930,1996), sugiriendo que se requiere la maduración de las DCs in vivo para una 10 inmunoestimulación eficiente. Ahora se ha puesto de manifiesto que la maduración de las DCs puede dar como resultado DCs inmunoestimuladoras o inmunosupresoras (Chakraborty et al, Clin. Immunol 94:88-98, 1999). No se ha dilucidado la naturaleza exacta de los estímulos de maduración que producen cualquiera de los dos resultados, pero se acepta en general que las DCs inmunoestimuladoras producen IL-12 y expresan el ligando CD40 (Albert et al, Nature Immunol 2:988-989,2001; Lanzavecchia, Haematologica 84 Suppl EHA 15 4:23-25,1999). Por consiguiente, se deben utilizar DCs maduras para la inyección IT, en especial si se sabe que los estímulos empleados para la maduración de células dendríticas inmaduras dan como resultado la expresión del ligando CD40 y la producción de IL-12.
Romaner R. et al: J Urol, Vol. 159, 1998, páginas 1488 a 1492, describe la maduración de células 20 dendríticas con BCG con un periodo de contacto de 48 horas. Las células dendríticas se utilizan para ensayos de proliferación de células T in vitro.
Lutz MB et al; Trends Immunol, Vol. 23, 2002, páginas 445 a 449, describe un estado semimaduro de las células dendríticas que son tolerogénicas, o que requieren más activación, por ejemplo mediante un 25 estímulo LPS secundario in vitro, o que pudieran responder a más estímulos tras la inyección subcutánea.
La presente invención proporciona una composición según las reivindicaciones. La descripción 30 proporciona un método para producir una respuesta inmunitaria antitumoral que consta de la administración de una población celular incluyendo células dendríticas que han sido maduradas parcialmente in vitro, de forma que las células dendríticas parcialmente maduradas conservan la capacidad de captar el antígeno tumoral y pueden inducir una respuesta inmunológica posterior a la administración a un individuo. El método prevé la eficiente captación y procesado de antígenos tumorales en el tumor y en el lecho tumoral, a pesar del 35 entorno inmunosupresor global dentro del tumor. Se espera que este entorno inmunosupresor interfiera en la función de las células dendríticas impactando negativamente sobre sus propiedades inmunoestimuladoras. Además, no se administran células dendríticas maduras a tumores, porque las células no procesan eficientemente el antígeno.
40
La administración de las células dendríticas maduradas parcialmente puede realizarse directamente en un tumor existente. Además, la administración puede ser en el lecho del tumor, la región tisular dentro y alrededor de un tumor, antes o después del tratamiento; es decir, la extracción quirúrgica o resección del tumor, antes, simultáneamente o después de la quimioterapia, la terapia de radiación o combinaciones de ambas, y similares. Las células dendríticas parcialmente maduradas pueden ser también administradas a un 45 nódulo linfático o región linfática que drene directamente el tumor o una región circundante del tumor. Además, las células dendríticas maduradas parcialmente pueden ser administradas en un vaso circulatorio o una región linfática que suministre sangre o linfa directamente al tumor o al lecho tumoral, o al órgano afectado por o con el tumor. Y también, las células dendríticas parcialmente maduradas pueden ser administradas en general en el sistema circulatorio o linfático, de forma que las células sean transportadas a 50 la región tumoral.
Las células dendríticas o sus precursores, útiles en la presente invención, pueden ser obtenidas, por ejemplo, de la piel, el bazo, la médula ósea, el timo, los nódulos linfáticos, la sangre de cordón umbilical o sangre periférica, y similares. Las células dendríticas pueden ser también obtenidas de un individuo que deba 55 ser tratado o de un individuo sano HLA compatible con el individuo a tratar. Las células dendríticas o sus
precursores pueden ser crioconservadas antes de ponerlas en contacto con un agente de maduración y ser formuladas en una composición para su administración a un individuo.
Las células dendríticas utilizadas en los métodos de la descripción son maduradas parcialmente in vitro. Entre los agentes adecuados para la inducción de la maduración de las células dendríticas se incluye, 5 por ejemplo, pero sin limitación a los mismos, el Bacilo Calmette-Guerin (BCG), el interferon γ (IFNγ), los liposacáridos (LPS), el factor de necrosis tumoral a (TNFa), un compuesto de la imidazoquinolina, ej. un compuesto de imidazoquinolina-4-amina, como el 4-amino-2-etoximetil-a,a-dimetil-lH-imidazol[4,5-c]quinolin-l-etanol (denominado R848) o l-(2-metilpropil)-lH-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina, y sus derivados (WO 00/47719, un polirribonucleótido sintético de doble cadena, ej., poli[I]:poli[C(12)U], y similares, agonistas de un 10 receptor tipo Toll (TLR), como TLR-3, TLR-4, TLR-7 y/o TLR-9, una secuencia de ácidos nucleicos comprendiendo motivos CpG no metilados, de los que se sabe que inducen la maduración de las DCs, y similares, o una combinación de ellos.
El BCG, tal como se utiliza en la presente invención, puede constar de BCG completos, 15 constituyentes de la pared celular del BCG, lipoarabidomananos derivados de BCG o cualquier otro componente de BCG. En determinadas realizaciones, el BCG es BCG inactivado por calor o BCG tratado con formalina. Se utilizan combinaciones de BCG e IFNγ para la maduración parcial de las células dendríticas, aunque como una descripción alternativa se puede usar BCG solo. Una cantidad efectiva de BCG es típicamente de 105 a 107 ufc por mililitro de medio de cultivo tisular, y una cantidad efectiva de IFNY es 20 típicamente de 100 a aproximadamente 1000 unidades por mililitro de medio de cultivo tisular. En otra realización, el agente activador de las células dendríticas es la imidazoquinolina R848. Típicamente un cantidad efectiva de R848, un agonista TLR-4, es de aproximadamente 1 a 50 μg/ml, más típicamente se utilizan de 5 a 10 μg/ml de medio de cultivo tisular. La imidazoquinolina puede ser usada sola o puede combinarse con, por ejemplo, una cantidad efectiva de BCG y/o IFNγ. 25
La presente invención consta también de composiciones, la composición consta de células dendríticas parcialmente maduradas in vitro en presencia de un agente de maduración de células dendríticas, combinado con un portador, tampón y/o excipiente fisiológicamente aceptable para su administración a un individuo con un tumor. Las células dendríticas parcialmente maduras utilizadas en las composiciones de la 30 descripción presentan una expresión aumentada de moléculas coestimuladoras, tales como, pero no limitado a CD80, CD86 o CD54. Las células pueden expresar o no el marcador de superficie celular CD83, pero siguen pudiendo captar y procesar el antígeno. La composición constará típicamente de aproximadamente 102 a 1010 de células dendríticas parcialmente maduradas, pero puede comprender más. Posteriormente a la maduración parcial, las células dendríticas pueden ser crioconservadas y guardadas durante un periodo de tiempo antes 35 de su administración al individuo. Las células usadas para producir las células dendríticas parcialmente maduradas comprendidas en las composiciones de la presente invención pueden ser aisladas del paciente que tiene el tumor, o las células dendríticas parcialmente maduradas pueden ser producidas a partir de células que hayan sido aisladas a partir de un individuo que sea compatible para HLA con el paciente.
40
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Las células dendríticas son una población diversa de células que presentan antígeno que se hallan en diversos tejidos linfoides y no linfoides. (Ver Liu, Cell 106:259-62 (2001); Steinman, Ann. Rev. Immunol. 9:271-96 (1991)). Las células dendríticas incluyen células dendríticas linfoides del bazo, células de 45 Langerhans de la epidermis, y células veladas en la circulación de la sangre. Colectivamente las células dendríticas se clasifican como un grupo basado en su morfología, altos niveles de expresión de superficie de MHC clase II, y ausencia de otros determinados marcadores de superficie expresados en células T, células B, monocitos y células natural killer (asesinas naturales). En especial, las células dendríticas derivadas de monocitos (denominadas también células dendríticas monocíticas) habitualmente expresan CD11c, CD80, 50 CD86, y son HLA-DR+, pero son CD14-.
Por el contrario, los precursores de células dendríticas monocíticas (típicamente monocitos) son habitualmente CD14+. Se pueden obtener precursores de células dendríticas monocíticas de cualquier tejido en que residan, en especial tejidos linfoides tales como el bazo, la médula ósea, los nódulos linfáticos y el 55 timo. También se pueden aislar precursores de células dendríticas monocíticas del sistema circulatorio. La sangre periférica es una fuente fácilmente accesible de precursores de células dendríticas. La sangre de cordón umbilical constituye otra fuente de precursores de células dendríticas monocíticas. Se pueden aislar
precursores de células dendríticas monocíticas a partir de diversos organismos en los que se puede provocar una respuesta inmunológica. Tales organismos incluyen animales, por ejemplo, humanos y no humanos, tales como primates, mamíferos (incluyendo perros, gatos, ratones y ratas) pájaros (incluyendo pollos) así como especies transgénicas de los mismos.
5
En ciertas realizaciones, los precursores de células dendríticas monocíticas y/o las células dendríticas inmaduras pueden aislarse a partir de un sujeto sano, o de un sujeto que requiera inmunoestimulación, como por ejemplo un paciente canceroso o cualquier otro sujeto para el que la inmunoestimulación celular pueda ser beneficiosa o deseable (es decir, un sujeto con una infección bacteriana o viral, o similar). También se pueden obtener precursores de células dendríticas y/o células dendríticas 10 inmaduras de un individuo sano compatible para HLA, para la activación parcial y administración a un sujeto compatible para HLA que necesite inmunoestimulación.
Precursores de Células Dendríticas y Células Dendríticas Inmaduras
15
Son generalmente métodos conocidos para aislar poblaciones celulares enriquecidas para precursores de células dendríticas y células dendríticas inmaduras a partir de diversas fuentes, incluyendo la sangre y la médula ósea. Por ejemplo, se pueden aislar precursores de células dendríticas y células dendríticas inmaduras recogiendo sangre heparinizada, por aféresis o leucoaféresis, por preparación de capas leucocitarias, pruebas de rosetas, centrifugación, centrifugación en gradiente de densidad (ej., 20 utilizando Ficoll® (como FICOLL-PAQUE®), PERCOLL® (partículas de sílice coloidal (15-30 nm de diámetro) recubierto con polivinilpirrolidona (PVP) no dializable, sucrosa y similares), lisis diferencial de células, filtración y similares. En ciertas realizaciones, se puede preparar una población de leucocitos, como por ejemplo, obteniendo sangre de un sujeto, desfibrinando para eliminar las plaquetas y lisando los hematíes. Los precursores de células dendríticas y las células dendríticas inmaduras pueden enriquecerse opcionalmente 25 para precursores de células dendríticas monocíticas, por ejemplo, por centrifugación a través de un gradiente PERCOLL®, adsorción de anticuerpos y similares.
Opcionalmente se pueden preparar precursores de células dendríticas y células dendríticas inmaduras en un sistema cerrado aséptico. Tal como se utilizan aquí, los términos “sistema cerrado aséptico” 30 o “sistema cerrado”, se refieren a un sistema en el que se minimiza o elimina la exposición a aire no estéril, ambiental o circulante u otras condiciones no estériles. Los sistemas cerrados para aislar precursores de células dendríticas y células dendríticas inmaduras excluyen generalmente la centrifugación en gradientes de densidad en tubos, la transferencia al aire libre de células, el cultivo de células en placas de cultivo tisular o frascos no sellados y similares. En una realización típica, los sistemas cerrados permiten la transferencia 35 aséptica de los precursores de células dendríticas y células dendríticas inmad
uras desde un vaso de recogida inicial a un vaso de cultivo tisular sellable sin exposición a aire no estéril.
Otro método comunicado de aislar precursores de células dendríticas es utilizar un sustrato plástico tratado comercialmente (ej., cuentas o cuentas magnéticas) para eliminar selectivamente monocitos 40 adherentes y otros “precursores de células no dendríticas.”(Ver, ej., Patentes estadounidenses Nº 5.994.126 y 5.851.756.) Los monocitos y los precursores de células no dendríticas son desechados, mientras que las células no adherentes son retenidas para cultivo ex vivo y maduración. En otro método, fueron cultivadas células de aféresis en bolsas de cultivo de plástico, a cuyo plástico, te. poliestireno o estireno, se añadieron cuentas microportadoras para aumentar el área de superficie de la bolsa. Las células se cultivaron durante un 45 periodo de tiempo suficiente para que determinadas células se adhirieran a las cuentas, y las no adherentes fueran eliminadas de la bolsa. (Maffei, et al., Transfusion 40:1419-1420 (2000); WO 02/4433)
En determinadas realizaciones, los precursores de células dendríticas monocíticas son aisladas por adherencia a un sustrato que liga monocitos, como se describe en WO 03/010292. Por ejemplo, una población 50 de leucocitos (ej., aislados por leucoféresis) puede ser puesta en contacto con un sustrato adherente de precursores de células dendríticas monocíticas. Cuando la población de leucocitos entra en contacto con el sustrato, los precursores de células dendríticas monocíticas en la población de leucocitos se adhieren preferentemente al sustrato. Otros leucocitos (incluyendo otros potenciales precursores de células dendríticas) muestran una afinidad de unión al sustrato reducida, permitiendo por consiguiente a los precursores de 55 células dendríticas monocíticas ser enriquecidas preferentemente sobre la superficie del sustrato.
Entre los sustratos adecuados se incluyen, por ejemplo, los que tienen una gran área por volumen. El sustrato puede ser, por ejemplo, un sustrato particulado o fibroso. Entre los sustratos particulados se incluyen, por ejemplo, partículas de vidrio, partículas de plástico, partículas de plástico recubiertas de vidrio, partículas de poliestireno recubiertas de vidrio y otras cuenta adecuadas para la absorción de proteínas. Entre los sustratos fibrosos adecuados para su uso en la presente invención se incluyen los tubos microcapilares y las 5 membranas microvellosas y similares. El sustrato particulado o fibroso permite generalmente que los precursores de células dendríticas monocíticas adheridos sean eluidos sin reducir sustancialmente la viabilidad de las células adheridas. Un sustrato particulado o fibroso puede ser sustancialmente no poroso para facilitar la elución de los precursores de las células dendríticas monocíticas o las células dendríticas del sustrato. Un sustrato “sustancialmente no poroso” es un sustrato en el que por lo menos una mayoría de los 10 poros presentes en el sustrato son más pequeños que las células, para minimizar que queden atrapadas las células en el sustrato.
La adherencia de los precursores de células dendríticas monocíticas al sustrato puede incrementarse opcionalmente mediante la adición de un medio de unión. Entre los medios de unión adecuados se incluyen 15 los medios de cultivo de precursores de células dendríticas monocíticas (ej., AIM-V®, RPMI1640, DMEM, X-VIVO 15® y similares) complementados, individualmente o en cualquier combinación con, por ejemplo, citoquinas (ej. Factor Estimulante de Colonias de Granulocitos/Macrófagos (GM-CSF), Interleucina 4 (IL-4),o Interleucina 13 (IL-13)), plasma sanguíneo, suero (ej., suero humano, como sueros autólogos o alogénicos), proteínas purificadas, como la albúmina sérica, cationes divalentes (ej., iones de calcio y/o magnesio) y otras 20 moléculas que favorecen la adherencia específica de los precursores de células dendríticas monocíticas al sustrato, o que eviten la adherencia de precursores de células dendríticas no monocíticas al sustrato. En determinadas realizaciones, el plasma o el suero sanguíneos pueden ser inactivados por calor. El plasma inactivado por calor puede ser autólogo o heterólogo respecto a los leucocitos.
25
Tras la adherencia de los precursores de células dendríticas monocíticas al sustrato, los leucocitos no adherentes son separados de los complejos precursores de las células dendríticas monocíticas/sustrato. Cualquier medio adecuado puede ser utilizado para separar las células no adherentes de los complejos. Por ejemplo, se puede dejar que se pose la mezcla de los leucocitos no adherentes y los complejos, y decantar o drenar los leucocitos no adheridos y el medio. Alternativamente, la mezcla puede ser centrifugada, y decantar 30 o drenar el sobrenadante conteniendo los leucocitos no adheridos de los complejos granulados.
En otro método, los precursores de las células dendríticas monocíticas pueden ser aislados de una población celular preparada enriquecida en leucocitos utilizando un dispositivo de filtración de flujo tangencial como se describe en la Solicitud de Patente Internacional Nº PCT/EEUU03/19428, presentada el 19 de julio 35 de 2003. Un dispositivo de filtración de flujo tangencial útil para aislar una población celular enriquecida en precursores de células dendríticas monocíticas puede constar de una unidad de eliminación con una cámara de flujo cruzado, una cámara de filtrado y un filtro colocado en medio. El filtro tiene comunicación fluida por una parte, la superficie de retención, con la cámara de flujo cruzado, y por la otra parte, la superficie de filtrado, con la cámara de filtrado. La cámara de flujo cruzado tiene una entrada adaptada para introducir los 40 componentes de una muestra de sangre conteniendo leucocitos en la cámara de flujo cruzado, y paralelo a la superficie de retención del filtro. También hay una salida en la cámara de flujo cruzado dispuesta en una parte de la cámara opuesta a la superficie de retención del filtro. El filtro adecuado para su uso en el dispositivo de filtrado de flujo tangencial tiene un tamaño medio de poro que oscila entre 1 y 10 micrones. El filtro puede tener un tamaño de poro medio de aproximadamente de 3 a 7 micrones. Se puede incluir también un medio 45 para proporcionar una tasa de entrada predeterminada de la muestra por la entrada de la cámara de flujo cruzado, y un medio para controlar la tasa de filtración del filtrado a través del filtro y en la cámara de filtrado. El medio de control de la tasa de filtración limita la tasa de filtración a menos que la tasa de filtración sin oposición del filtro. La muestra comprendiendo componentes de la sangre puede ser proporcionada por un dispositivo fuente como un dispositivo de leucoféresis, o un recipiente conteniendo una muestra recogida de 50 un dispositivo de leucoféresis.
Los precursores de células dendríticas monocíticas y las poblaciones celulares enriquecidas para los precursores pueden ser cultivados ex vivo para diferenciación, y maduración parcial y/o expansión. Tal como se utilizan aquí, las células dendríticas inmaduras aisladas, los precursores de células dendríticas y otras 55 células se refieren a células que, por intervención humana, existen aparte de su entorno nativo, y por consiguiente no son producto de la naturaleza. Las células aisladas pueden existir en forma purificada, en forma semipurificada o en un entorno no nativo. Resumiendo, la diferenciación ex vivo incluye típicamente el
cultivo de precursores de células dendríticas monocíticas, o poblaciones de células con precursores de células dendríticas, en presencia de uno o más agentes de diferenciación. Entre los agentes de diferenciación adecuados se pueden incluir, por ejemplo, factores de crecimiento celular (ej., citoquinas como (GM-CSF), Interleuquina 4 (IL-4), Interleuquina 7 (IL-7), Interleuquina 13 (IL-13), y/o combinaciones de ellas). En determinadas realizaciones, los precursores de células dendríticas monocíticas se diferencian para formar 5 células dendríticas inmaduras derivadas de monocitos.
Los precursores de células dendríticas pueden ser cultivados y diferenciados en condiciones de cultivo adecuadas. Entre los medios de cultivo tisular adecuados se incluyen, pero sin limitación a los mismos, AIM-V®, RPMI1640, DMEM, X-VIVO 15®, y similares. Los medios de cultivo tisular pueden complementarse 10 con suero, aminoácidos, vitaminas, citoquinas, como GM-CSF y/o IL-4, IL-7, IL-13, cationes divalentes y similares, para favorecer la diferenciación celular. En determinadas realizaciones, los precursores de células dendríticas pueden ser cultivados en medios sin suero. Las condiciones de cultivo pueden excluir opcionalmente cualquier producto de origen animal. Una combinación de citoquinas típica utilizada con medio de cultivo de células dendríticas consta aproximadamente de 500 unidades/ml cada una de GM-CSF y EL-4, 15 IL-7, o IL-13. Los precursores de células dendríticas, cuando están diferenciados de las células dendríticas inmaduras, son fenotípicamente similares a las células de Langerhans de la piel. Típicamente, las células dendríticas inmaduras son CD 14- y CD1lc+, expresan bajos niveles de CD86 y CD83, y pueden capturar antígenos solubles por endocitosis especializada.
20
Entre los agentes de maduración de células dendríticas de la descripción se pueden incluir, por ejemplo, pero sin limitación a los mismos, BCG, IFNγ, LPS, TNFa, un compuesto de imidazoquinolina, ej.,un compuesto de imidazoquinolina-4-amina, como el 4-amino-2-etoximethi-a;a-dimetil-lH-imidazol[4,5-c]quinolin-l-etanol (denominado R848) o l-(2-metilpropil)-lH-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amina y sus derivados (WO 00/47719), un polirribonucleótido sintético de doble cadena, ej., poli[I]:poli[C(12)U], y similares, agonistas de 25 un receptor tipo toll (TLR), como TLR-3, TLR-4, TLR-7 y/o TLR-9, una secuencia de ácidos nucleicos conteniendo motivos no metilados CpG de los que se sabe que inducen la maduración de DCs, y similares, o cualquier combinación de los mismos. Las cantidades efectivas de BCG oscilan típicamente de 105 a 107 ufc por mililitro de medio de cultivo tisular, aproximadamente. Las cantidades efectivas de IFNγ son típicamente de unas 100-1000 U por milímetro de medio de cultivo tisular. El Bacilo Calmette-Guerin (BCG) es una cepa 30 avirulenta de M. bovis. Tal como se utiliza aquí, BCG se refiere a BCG completo, así como a componentes de la pared celular, lipoarabidomananos derivados de BCG, y otros componentes de BCG. BCG es opcionalmente inactivado, como BCG inactivado por calor, BCG tratado con formalina y similares. Una cantidad efectiva de un compuesto de imidazoquinolina, ej., un compuesto de imidazoquinolina-4-amina, como 4-amino-2-etoximetil-a,a-dimetil-lH-imidazol[4,5-c]quinolin-l-etanol (denominado R848) puede ser de 35 aproximadamente 1 a 50 μg/ml de medio de cultivo, más típicamente se utilizan de unos 5 a 10 μg/ml de medio de cultivo. El compuesto de imidazoquinolina puede ser utilizado solo o en combinación con, por ejemplo, BCG y/o IFNγ, o un agonista TLR adicional.
Las DCs inmaduras se ponen típicamente en contacto con cantidades efectivas del agente de maduración de células dendríticas, como BCG e IFNγ, durante aproximadamente de 1 a 10 horas. 40 Normalmente se requiere como mínimo un periodo de incubación de 24 horas para una maduración completa. Más típicamente de unas 48 a 72 horas de incubación. Las células dendríticas inmaduras pueden ser cultivadas y maduradas parcialmente en condiciones de cultivo de maduración adecuadas. Entre los medios de cultivo tisular adecuados se incluyen AIM-V®, RPMI 1640, DMEM, X-VIVO 15®, y similares. Los medios de cultivo tisular pueden ser complementados con aminoácidos, vitaminas, citoquinas, como GM-CSF y/o IL-15, 45 cationes divalentes y similares, para favorecer la maduración celular. Una combinación típica de citoquinas es de aproximadamente 500 unidades/ml de GM-CSF y 100 ng/ml de IL-15.
La maduración parcial de células dendríticas inmaduras puede ser controlada mediante métodos conocidos por los expertos para las células dendríticas. Los marcadores de superficie celular pueden ser 50 detectados en ensayos conocidos generalmente, tales como citometría de flujo, inmunohistoquímica y similares. Las células pueden ser también monitorizadas en cuanto a producción de citoquinas (ej., por ELISA, otro inmunoensayo o utilizando una matriz de oligonucleótidos). En DCs cultivadas y parcialmente maduradas según la presente invención, en presencia de un agente de maduración de células dendríticas, como GM-CSF e IL-4, los niveles de JAK2 (kinasa janus 2 activada) fosforilada pueden medirse para indicar el inicio de la 55 maduración por métodos generalmente bien conocidos. La inducción de la expresión de marcadores de superficie celular y citoquinas, así como la fosforilación de moléculas de señalización, ej., jak2, es conocida
también como un indicador de que las células dendríticas están condicionadas para la inducción de una respuesta inmune una vez las células han sido administradas a un individuo.
Las células dendríticas inmaduras son sujetas a maduración sólo por un periodo de tiempo para madurar parcialmente las células dendríticas. Las DCs totalmente maduras pierden la capacidad de captar el 5 antígeno y muestran una expresión aumentada de moléculas coestimuladoras de superficie celular y varias citoquinas. Específicamente, las DCs maduras expresan niveles superiores de antígenos MHC clase I y II que las células dendríticas inmaduras, y las células dendríticas maduras son identificadas generalmente como CD80+, CD83+, CD86+, y CD 14-. Una mayor expresión de MHC conduce a un aumento de la densidad de antígeno sobre la superficie de la DC, mientras que el aumento de moléculas coestimuladoras CD80 y CD86 10 refuerza la señal de activación de las células T, a través de los equivalentes de las moléculas coestimuladoras, como CD28 sobre las células T. Las células dendríticas parcialmente maduras, como se utilizan en la presente invención, comprenden típicamente aquellas células dendríticas que una vez expuestas a un agente de maduración de células dendríticas presentan un incremento de expresión de una molécula coestimuladora, incluyendo, pero sin limitación a las mismas, CD80, CD86 y/o CD54. La célula puede 15 expresar o no CD83, pero mantiene la capacidad de captar y procesar el antígeno. Además, las células dendríticas parcialmente maduras pueden producir TNF-a, IL-6, IL-10 y/o IL-12 que no son producidos típicamente por las células dendríticas inmaduras.
Para la presente invención no se prefieren células dendríticas totalmente maduras, porque no 20 procesan eficientemente el antígeno. Además, no son deseables células dendríticas inmaduras, como se utilizaban en métodos anteriores, debido al entorno inmunosupresor que se encuentra típicamente dentro de un tumor, incluyendo concentraciones importantes de citoquinas de las que se sabe que evitan el procesado del antígeno por parte de las células dendríticas inmaduras. En la presente invención, la maduración parcial de las células dendríticas inmaduras reduce los receptores de citoquinas de la superficie de la célula, 25 haciéndolos menos sensibles o capaces de responder a cualquier efecto inmunosupresor de citoquinas presentes en el espacio intratumoral, y procura células que puedan procesar eficientemente los antígenos tumorales presentes en el espacio intratumoral. Cuando las células dendríticas parcialmente maduras han madurado dentro del tumor, como se mide por la producción de, por ejemplo, TNF-a e IL-12, y la expresión del receptor de quimioquinasa CCR7, las células pueden emigrar a los nódulos linfáticos, donde entrarán en 30 contacto con las células T para incrementar la respuesta inmune a los antígenos tumorales.
Según otro aspecto más de la invención, las DCs pueden ser conservadas, por ej., por crioconservación antes de la maduración o siguiendo la maduración parcial, antes de la administración a un paciente. Entre los agentes de crioconservación que pueden utilizarse, se incluyen, pero sin limitación a los 35 mismos, dimetil sulfuro (DMSO), glicerol, polivinilpirrolidona, polietilenglicol, albúmina, dextrano, sucrosa, etilenglicol, i-eritritol, D-ribitol, D-manitol, D-sorbitol, i-inositol, D-lactosa, cloruro de colina, aminoácidos, metanol, acetamida, monoacetato de glicerol y sales inorgánicas. Una velocidad de enfriamiento lenta controlada puede ser crítica. Distintos agentes crioprotectores y distintos tipos de células tienen típicamente diferentes velocidades de enfriamiento óptimas. El calor de la fase de fusión, donde el agua se convierte en 40 hielo, debe ser normalmente mínimo. El proceso de enfriamiento puede ser llevado a cabo utilizando, p.ej., un dispositivo de congelación programable o un procedimiento de baño de metanol. Los aparatos de congelación programables permiten la determinación de las velocidades óptimas de enfriamiento y facilitan un enfriamiento reproducible estándar. Los congeladores de velocidad controlada programables, como Cryomed o Planar, permiten adaptar el régimen de congelación a la curva deseada de velocidad de enfriamiento. 45
Tras una congelación completa, las células precursoras monocíticas, las DCs inmaduras o parcialmente maduras pueden ser transferidas rápidamente a un recipiente de almacenamiento criogénico a largo plazo. En una realización típica, las muestras pueden ser conservadas criogénicamente en nitrógeno líquido (-196° C) o su vapor (-165° C). Las condiciones y procedimientos para la manipulación, crioconservación y almacenamiento a largo plazo de células madres hematopoyéticas, particularmente de 50 médula ósea o sangre periférica, son ampliamente aplicables a las células de la invención. Esta discusión puede hallarse, por ejemplo, en las siguientes referencias: Taylor et al., Cryobiology 27:269-78 (1990); Gorin, Clinics in Haematology 15:19-48 (1986); Bone-Marrow Conservation, Culture and Transplantation, Proceedings of a Panel, Moscú, Jul. 22-26, 1968, International Atomic Energy Agency, Viena, pp. 107-186.
55
Las células congeladas se descongelan de preferencia rápidamente (ej., en un baño de agua mantenido a 37°-41° C) y refrigeradas inmediatamente al descongelarse. Para evitar la aglutinación se pueden aplicar varios procedimientos, incluyendo pero sin limitación a los mismos, la adición antes y/o
después de la congelación de DNasa (Spitzer et al.,Cancer 45: 3075-85 (1980)), dextrano y citrato de bajo peso molecular, almidón hidroxietilo (Stiffs al, Cryobiology 20: 17-24 (1983)), y similares. El agente crioprotector, si es tóxico en humanos, debe ser eliminado antes del uso terapéutico de las DCs parcialmente maduradas descongeladas. Una vez descongeladas y recuperadas, las DCs parcialmente maduradas congeladas pueden ser administradas como se describe aquí, respecto a las DCs parcialmente maduradas no 5 congeladas.
Administración in vivo de Células Dendríticas Parcialmente Maduradas
Se proporcionan métodos para la administración de células dendríticas parcialmente maduras, o una 10 población celular enriquecida y que contenga tales células, a un sujeto que tenga un tumor. En determinadas realizaciones, se llevan a cabo tales métodos obteniendo precursores de células dendríticas o células dendríticas inmaduras, diferenciando y parcialmente madurando esas células en presencia de un agente de maduración de células dendríticas, como BCG e IFNγ, o cualquier otro agente de maduración como los indicados anteriormente. Las células dendríticas maduradas parcialmente pueden ser formuladas con 15 portadores, excipientes, tampones y/o diluyentes fisiológicamente aceptables, utilizando métodos y composiciones bien conocidos por los expertos. Las células dendríticas parcialmente maduras pueden ser administradas directamente a un sujeto que requiera inmunoestimulación. Típicamente se suspenden aproximadamente de 102 a 1010 células en un portador farmacéuticamente aceptable. Las células son inyectadas directamente en el tumor o en una región próxima o adyacente, o en contacto circulatorio o linfático 20 con el tumor o el lecho tumoral, para garantizar que las células tienen acceso a los antígenos tumorales.
Por ejemplo, aunque sin limitación, las células pueden ser administradas directamente en un tumor, en el lecho tumoral después de la extirpación quirúrgica o resección del tumor, peritumoralmente, en un nódulo linfático de drenaje en contacto directo con el tumor, en un vaso sanguíneo o conducto linfático que 25 conduzca a o alimente un tumor u órgano afectado por el tumor, ej., la vena portal o una vena o arteria pulmonar, y similares. La administración de las células dendríticas parcialmente maduras de la descripción puede ser simultánea o posterior a otros tratamientos del tumor, tales como quimioterapia o radiación. Además las células dendríticas parcialmente maduras de la invención pueden ser coadministradas con otro agente, que actúe como adyuvante de la maduración de la célula dendrítica y/o el procesado del antígeno 30 dentro del tumor o la región próxima o adyacente al tumor. Además, las células dendríticas pueden ser también formuladas o compuestas en una matriz de liberación retardada para su implantación en una región del tumor, a su alrededor o en el lecho tumoral, para su contacto con los antígenos tumorales.
Las células dendríticas parcialmente maduras de la presente invención pueden ser administradas por 35 cualquier medio apropiado para la formulación y modo de administración. Por ejemplo, las células pueden combinarse con un portador farmacéuticamente aceptable y administrarlas con una jeringa, un catéter, una cánula o similares. Como se ha dicho antes, las células pueden ser formuladas en una matriz de liberación retardada. Cuando se administran de esta manera, la formulación puede ser administrada por un medio apropiado para la matriz usada. Otros métodos y modos de administración aplicables a la presente 40 descripción son bien conocidos por los expertos.
Las composiciones de la presente invención se pueden usar por sí solas en el tratamiento de un individuo. Además, las composiciones pueden ser usadas en combinación con cualquier otro método de tratamiento de un tumor. Por ejemplo, los métodos de la presente invención pueden ser usados en 45 combinación con la resección quirúrgica de un tumor, quimioterapia (fármacos citotóxicos, agentes apoptóticos, anticuerpos y similares), terapia de radiación, crioterapia, braquiterapia, inmunoterapia (administración de células dendríticas maduras activadas específicas del antígeno, células NK, anticuerpos específicos para antígenos tumorales, etc.), y similares. Cada uno de esos métodos y todos ellos pueden usarse también en cualquier combinación. Los tratamientos combinados pueden ser simultáneos o 50 secuenciales, y pueden ser administrados siguiendo cualquier orden, según determine el médico responsable.
En otra realización, las células dendríticas y el sujeto receptor tienen el mismo haplotipo MHC (HLA). Los métodos para la determinación del haplotipo HLA de un sujeto son generalmente conocidos. En una realización relacionada, las células dendríticas parcialmente maduras son alogénicas respecto al sujeto receptor. Típicamente las células alogénicas coinciden por lo menos en un alelo MHC (ej., compartiendo por lo 55 menos uno pero no todos los alelos MHC). En una realización menos típica, las células dendríticas y el sujeto receptor son todos alogénicos entre sí, pero todos tienen por lo menos en común un alelo MHC.
Ejemplos
Los siguientes ejemplos se aportan simplemente a efectos ilustrativos de diversos aspectos de la presente invención, y no deben ser interpretados como limitación de la invención en modo alguno. Todos los ejemplos que quedan fuera del ámbito de las reivindicaciones se aportan solamente a efectos de 5 comparación.
Ejemplo 1
En el presente ejemplo, precursores de células dendríticas monocíticas, aisladas por filtración de flujo 10 tangencial, fueron cultivadas a una concentración de 106 monocitos/ml en X-VIVO 15® complementado con albúmina sérica humana (HSA) al 2%, y 500 U/ml de GM-CSF en matraces o bolsas de células. Al cabo de 5 días, las DCs de los matraces y las bolsas se dejaron sin tratar (IDCs) y se maduraron parcialmente durante 4 horas en presencia de BCG (dilución 1:400) e interferon γ (TFNy, 500 U/ml)(pmDCs). Las células fueron recogidas, lavadas y mezcladas con un número igual de células tumorales PKH67-A549 marcadas por 15 fluorescencia e irradiadas durante 48 horas. Tras la incubación, las células fueron lavadas, teñidas con un anticuerpo monoclonal marcado con ficoeritrina (PE) específico para CD11c, y analizadas por citometría de flujo. Los valores que se presentan en la Tabla 1 representan el porcentaje de células CD1lc+ dentro del límite de DCs que eran también positivas para antígeno PKH67 marcado (MFI = intensidad media de fluorescencia). Los controles incluyeron DCs mezcladas con células PKH67-A549 justo antes del análisis. 20
Tabla 1.
- Tratamiento
- % de células CDllc+PKH67+ MFI
- Matraz iDCs
- 87,6 235,2
- Matraz pmDCs
- 90,7 610,2
- Bolsa iDCs
- 72,8 403,5
- Bolsa pmDCs
- 91,3 557,5
Estos datos demuestran que las DCs maduradas parcialmente fueron mejores captando el antígeno en este ensayo que las células dendríticas inmaduras, medido por el porcentaje de células que captan 25 antígeno o por la cantidad de material captado por las células tumorales.
En otro ejemplo, se realizo una leucoféresis en un paciente tras la cirugía para extirpar un crecimiento tumoral. Se purificaron monocitos del producto de la leucoféresis por filtración de flujo tangencial. Los monocitos purificados fueron diferenciados como se describe más arriba y madurados parcialmente por 30 exposición a BCG muertos por calor y fijados con formalina (5 x 106 ufc/ml) e IFNγ (500 U/ml). Las células dendríticas maduradas parcialmente fueron formuladas para su administración e inyectadas en el lecho tumoral del individuo, con guía ultrasónica. Se comprobó que células dendríticas aisladas del individuo podían inducir una respuesta citotóxica de las células T específica del tumor cuando se medía in vitro. Además, se observó que se prevenía o se retrasaba de forma importante la recurrencia tumoral. 35
Ejemplo 2
En este ejemplo, células cancerígenas de colon humano fueron injertadas en ratones para formar xenoinjertos tumorales por métodos bien conocidos. Una vez establecidos los tumores, los animales fueron 40 divididos en grupos, y a los de cada grupo se les administró en el tumor placebo, o células dendríticas inmaduras o células dendríticas maduradas parcialmente. El tamaño del tumor fue posteriormente medido y comparado en cada grupo.
Resumiendo, fueron establecidos carcinomas de colon CT26 humanos en ratones hembra Balb/c 45 inyectando 100.000 células tumorales en el flanco derecho bajo la piel. El tratamiento se inició el día 15, momento en el que todos los ratones presentaban tumores palpables con tamaños que oscilaban entre 10 mm2 y 45 mm2.
Se prepararon células dendríticas a partir de la médula ósea femoral de ratones Balb/c hembra 50 siguiendo protocolos estándar. Resumiendo, células de médula ósea tras lisis de hematíes fueron incubadas
con GM-CSF murino (200 U/ml) e IL-4 (200 U/ml) en RPMI1640 complementado con suero bovino fetal al 10% durante 13 -14 días, con adición de medio fresco con citoquinas tras 3 y 7 días. Para obtener células dendríticas parcialmente maduradas, las células fueron expuestas a una dilución 400 veces de Bacilo Calmette-Guerin (BCG) inactivado que tenía una actividad de 0,5 - 1 x 106 unidades formadoras de colonias por mililitro antes de la inactivación, y a 500 unidades de interferon gamma ( FNγ) murino por mililitro. Las 5 células fueron incubadas durante 8 horas y luego extendidas sobre metrizamida al 14,5%, y centrifugadas durante 15 minutos a 4 °C y 1750 rpm. Se recogió la interfaz y las células se lavaron y congelaron viablemente en sulfóxido de dimetilo al 10% (DMSO) en conservación en nitrógeno líquido. Tras descongelarlas a 37°C, las células fueron lavadas dos veces y resuspendidas a una concentración de 1 millón de células por 50 microlitros. 10
Los ratones que presentaban tumores fueron tratados con ciclofosfamida (50 mg/kg) intraperitonealmente los días 15 y 17. Se procedió a la inyección de células dendríticas en el tumor (inyección simulada de 50 μl de salina con tampón fosfato, DCs inmaduras o DCs maduradas durante 8 horas) los días 16, 17, 18 y 21. Se midió el crecimiento tumoral a días alternos durante 60 días. 15
En el grupo tratado intratumoralmente con salina con tampón fosfato, los 4 ratones presentaron tumores mayores de 100 mm2 el día 40 o antes. Por el contrario, los ratones tratados intratumoralmente con DCs inmaduras presentaron un crecimiento tumoral reducido, y 2 de 4 ratones tenían tumores más pequeños de 100 mm2 el día 40. Tres de los 4 ratones tratados con DCs parcialmente maduradas tenían tumores más 20 pequeños de 100 mm2 el día 40, y dos de esos animales no tenían tumores palpables el día 50.
Ejemplo 3
En este ejemplo, se inyectaron células cancerígenas de colon humano en ratones para formar 25 xenoinjertos tumorales por métodos bien conocidos. Posteriormente a la primera inyección de células tumorales se administró a los animales una segunda dosis de células tumorales. Al cabo de 15 días, los animales fueron divididos en grupos y a los de cada grupo se les administro placebo, o células dendríticas inmaduras o células dendríticas maduradas parcialmente en el tumor. El tamaño del tumor fue posteriormente medido y comparado en cada grupo. 30
Resumiendo, carcinomas de colon CT26 humanos fueron establecidos en ratones Balb/c hembra inyectando 100.000 células tumorales en el flanco derecho bajo la piel, seguido de inyección de 100.000 células tumorales en el flanco izquierdo el día 3. El tratamiento se inició el día 15, momento en el cual todos los ratones tenían tumores palpables en el flanco derecho, con tamaños que oscilaban entre 10 mm2 y 45 35 mm2.
Se prepararon células dendríticas a partir de médula ósea femoral de ratones Blab/c hembra siguiendo protocolos estándar. Resumiendo, células de médula ósea, tras lisis de hematíes, se incubaron con GM-CSF (200 U/ml) murino e IL-4 (200 U/ml) en RPMI1640, complementado con suero fetal bovino al 10% 40 durante 13 - 14 días, con adición de medio fresco con citoquinas tras 3 y 7 días. Para obtener células dendríticas maduradas parcialmente, las células fueron expuestas a una dilución de 400 veces de Bacilo Calmette-Guerin (BCG) inactivado, que tenía una actividad de 0,5 - 1 x 106 unidades formadoras de colonias por mililitro antes de la inactivación, y a 500 unidades de interferon gamma murino por mililitro. Las células fueron extendidas sobre metrizamida al 14,5% y centrifugadas durante 15 minutos a 4 °C y 1750 rpm. La 45 interfaz fue recogida y las células fueron lavadas y congeladas viablemente en sulfóxido de dimetilo (DMSO) al 10% en conservación de nitrógeno líquido. Tras la descongelación a 37 °C, las células fueron lavadas dos veces y resuspendidas a una concentración de 1 millón de células por 50 microlitros.
Los ratones que presentaban tumor fueron tratados con ciclofosfamida (50 mg/kg) 50 intraperitonealmente el día 15 y 17. Se procedió a la inyección de células dendríticas en el tumor del flanco derecho (inyección simulada de 50 μl de salina tamponada con fosfato, DCs inmaduras, DCs maduradas durante 8 horas o DCs maduradas durante 24 horas, los días 16, 17, 18 y 21). El crecimiento tumoral fue medido a días alternos durante 60 días.
55
En el grupo tratado intratumoralmente con salina tamponada con fosfato, los 5 ratones presentaron tumores en el flanco derecho mayores de 100 mm2 antes del día 35, y 3/5 animales tenían tumores en el flanco izquierdo > 100 mm2 el día 40 o antes. Por el contrario, los ratones tratados intratumoralmente (sólo
lado derecho) con DCs inmaduras presentaban un crecimiento tumoral reducido: un ratón no presentaba tumor palpable en ningún lado el día 60, y 4 de 5 ratones presentaban tumores < 100 mm2 a ambos lados el día 40. Tres de los 5 ratones tratados con DCs maduradas parcialmente durante 8 horas presentaban ambos tumores completamente resueltos el día 50. En el grupo tratado con DCs que habían sido maduradas parcialmente durante 24 horas, el crecimiento tumoral se redujo aún más. Tres de 5 ratones tenían los 5 tumores completamente resueltos a ambos lados el día 50, en un animal el tumor del flanco izquierdo estaba completamente resuelto y el del flanco derecho parcialmente controlado (< 100 mm2 el día 40) y en un animal ambos tumores estaban parcialmente controlados (< 50 mm2 en ambos lados el día 40).
Ejemplo 4 10
En este ejemplo, se utilizaron células tumorales humanas para formar tumores xenógrafos en ratones, como se describe más arriba. Las células dendríticas inmaduras diferenciadas fueron maduradas parcialmente exponiéndolas al agente de maduración de células dendríticas imidazoquinolina R848 o R848 combinado con BCG e IFNy. Las células dendríticas maduradas parcialmente, células dendríticas inmaduras y un placebo fueron administrados en el tumor, y se comparó el tamaño de los tumores en cada grupo. 15
Resumiendo, se establecieron tumores en ratones como en el ejemplo 2. Las células dendríticas se prepararon como en los ejemplos 2 y 3, pero la maduración parcial de las células se logró exponiéndolas a 5 μg/ml del modificador de respuesta inmune (agente de maduración de células dendríticas) R848, o 5 μg/ml del modificador de respuesta inmune R848 junto con interferon gamma a las concentraciones señaladas en los 20 ejemplos 2 y 3, durante 8 horas.
El esquema de tratamiento fue idéntico al del ejemplo 3. En ninguno de los ratones inyectados intratumoralmente con salina tamponada con fosfato se controló el crecimiento tumoral. En uno de los cinco ratones tratados con DCs maduradas parcialmente con R848 solo se resolvió completamente el crecimiento 25 tumoral, al igual que en 3 de 5 ratones tratados intratumoralmente con DCs maduradas parcialmente con R848 con BCG e IFNγ. Nueve ratones de los ejemplos 3 y 4 que presentaban sus tumores completamente resueltos, aproximadamente 30 días tras la resolución del tumor fueron expuestos a 1 millón de células tumorales en el flanco derecho. Ninguno de los animales mostró un crecimiento tumoral detectable, demostrando protección inmunológica contra las células tumorales CT26. 30
Ejemplo 5
En este ejemplo, las células dendríticas preparadas en los ejemplos anteriores se caracterizaron por la expresión de moléculas de superficie. Resumiendo, las células dendríticas murinas, preparadas como en los experimentos 2-4, se caracterizaron por la expresión de moléculas de superficie celular, tras tinción con 35 anticuerpos fluorescentes y análisis de citometría de flujo. Los resultados se presentan como el porcentaje de células positivas para los marcadores de superficie fenotípicos y la media de intensidad de fluorescencia para determinados marcadores de superficie en las Tablas 2 y 3.
Tabla 2. 40
- Porcentaje de células positivas
- tratamiento
- CDllc MHC-II CD80 CD86 CD54 CD40
- Inmaduras
- 66,9 68,1 62,2 28,1 62,6 1,4
- R848 (8 hrs)
- 60,7 76,4 73,4 31,3 96,6 1,5
- BCG/IFN (8 hrs)
- 59,5 85,5 84,9 66,0 96,0 2,0
- BCG/IFN/R848 (8 hrs)
- 58,4 88,8 82,4 61,8 96,6 2,6
- BCG/IFN (24 hrs)
- 66,3 91,5 90,0 84,4 95,3 3,3
Tabla 3
- Media de Intensidad de fluorescencia
- tratamiento
- MHC-H CD80 CD86 CD54 CD40
- Inmaduras
- 395,7 50,0 30,7 53,8 3,0
- R848 (8 hrs)
- 515,5 54,7 30,0 90,0 8,0
- BCG/IFN(8hrs)
- 751,1 79,1 74,6 120,3 7,2
- BCG/IFN/R848 (8 hrs)
- 757,8 79,3 66,4 132,9 13,9
- BCG/IFN(24hrs)
- 876,8 97,9 99,0 126,9 11,4
Ejemplo 7
Un paciente, al que se le ha diagnosticado un tumor sólido, es tratado con quimioterapia, terapia de radiación, crioterapia o braquiterapia, y posteriormente con células dendríticas maduradas parcialmente administradas intratumoralmente. Tras el tratamiento el tumor se resuelve y el paciente está protegido contra la recurrencia tumoral. 5
Los ejemplos previos se proporcionan para ilustrar, pero sin limitar el ámbito de las invenciones reivindicadas. Otras variantes de las invenciones resultarán evidentes para los expertos en el tema e incluidas en las reivindicaciones adjuntas.
Claims (9)
- REIVINDICACIONES1. Una composición comprendiendo células dendríticas maduradas parcialmente in vitro en presencia de un agente de maduración de células dendríticas combinado con un portador farmacéuticamente aceptable para la administración in vivo, donde las células dendríticas maduradas parcialmente presentan un aumento de la expresión de moléculas coestimulantes CD80, CD86 y/o CD54, y fosforilación de JAK2, y 5 conservan la capacidad de captar y procesar el antígeno, para su uso en el tratamiento de tumores, que se caracteriza por el hecho de que la composición es para su administración directa en el tumor o en una región cercana o adyacente al mismo, o en contacto circulatorio o linfático con el tumor, o el lecho tumoral; y donde el agente de maduración de las células dendríticas es el Bacilo Calmette-Guerin (BCG) e interferon γ (IFNγ); BCG, INFγ e imidazoquinolina R848; o R848 solo. 10
- 2. La composición según la reivindicación 1, donde las células dendríticas se obtienen de la piel, el bazo, la médula ósea, el timo, los nódulos linfáticos, la sangre de cordón umbilical o sangre periférica.
- 3. La composición según la reivindicación 2, donde las células dendríticas se obtienen del 15 individuo a tratar.
- 4. La composición según la reivindicación 2, donde las células dendríticas se obtienen de un individuo sano compatible para HLA con el individuo a tratar.20
- 5. La composición según la reivindicación 1, donde el BCG comprende BCG entero, componentes de pared celular de BCG, lipoarabidomananos derivados de BCG, componentes de BCG, o el BCG es BCG inactivado por calor o BCG tratado con formalina.
- 6. La composición según la reivindicación 1, donde la cantidad efectiva de BCG es de 25 aproximadamente 105 a107 ufc por mililitro de medio de cultivo tisular, la cantidad efectiva de IFNγ es de aproximadamente 100 a 1000 unidades por mililitro de medio de cultivo tisular.
- 7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde las células dendríticas maduradas parcialmente son administradas como un adyuvante a la terapia de radiación, la 30 quimioterapia o combinaciones de ellas.
- 8. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde la composición consta aproximadamente de 102 a 1010 de células dendríticas maduradas parcialmente.35
- 9. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, donde las células dendríticas maduradas parcialmente han sido crioconservadas después de la maduración parcial.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US43126702P | 2002-12-06 | 2002-12-06 | |
| US431267P | 2002-12-06 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2354944T3 true ES2354944T3 (es) | 2011-03-21 |
Family
ID=32507696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES03790358T Expired - Lifetime ES2354944T3 (es) | 2002-12-06 | 2003-12-05 | Administración de células dendríticas maduradas parcialmente in vitro para el tratamiento de tumores. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20060057120A1 (es) |
| EP (2) | EP2260861A1 (es) |
| JP (2) | JP4859169B2 (es) |
| KR (1) | KR101144196B1 (es) |
| CN (2) | CN1738619B (es) |
| AT (1) | ATE486125T1 (es) |
| AU (2) | AU2003293411B2 (es) |
| BR (1) | BRPI0317064B8 (es) |
| CA (1) | CA2509058A1 (es) |
| DE (1) | DE60334725D1 (es) |
| DK (1) | DK1567155T3 (es) |
| ES (1) | ES2354944T3 (es) |
| HK (1) | HK1082180A1 (es) |
| IL (1) | IL169002A (es) |
| MX (1) | MXPA05006042A (es) |
| PL (1) | PL377209A1 (es) |
| PT (1) | PT1567155E (es) |
| RU (1) | RU2348418C2 (es) |
| WO (1) | WO2004053072A2 (es) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2348418C2 (ru) * | 2002-12-06 | 2009-03-10 | Норсуэст Байотерапьютикс, Инк. | Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей |
| US20070134273A1 (en) * | 2004-02-10 | 2007-06-14 | Francois Romagne | Composition and method for the treatment of carcinoma |
| US8076132B2 (en) | 2004-09-17 | 2011-12-13 | Hasumi International Research Foundation | Dendritic cell tumor injection (DCTI) therapy |
| US20060216269A1 (en) * | 2004-09-17 | 2006-09-28 | Kenichiro Hasumi | Dendritic cell tumor injection (DCTI) therapy |
| WO2006095330A2 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Methods and immunogenic cell preparations for treating antigen-associated diseases |
| WO2007001200A1 (fr) * | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetsvennostyu 'rusgen' | Cellules dendritiques matures chargees d'un polylysat de tumeurs, et vaccin antitumoral a base desdites cellules |
| AR060424A1 (es) * | 2007-04-11 | 2008-06-18 | Consejo Nac Invest Cient Tec | Lineas celulares , composiciones para el tratamiento de melanomas que las comprenden procedimientos para preparar las composiciones y metodos de tratamiento |
| WO2008133595A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-11-06 | Newbiomed Pika Pte Ltd | Compositions and methods for stimulating an immune response in-vivo and in-vitro |
| WO2008151389A1 (en) * | 2007-06-15 | 2008-12-18 | Macfarlane Burnet Institute For Medical Research And Public Health Limited | Chemically modified macromolecules |
| EP2072617A1 (en) * | 2007-12-12 | 2009-06-24 | Trimed Biotech GmbH | Method for producing dendritic cells |
| CN102016007B (zh) * | 2008-03-27 | 2019-04-19 | 阿斯特利亚斯生物治疗股份公司 | 使灵长类多能干细胞分化成为造血谱系细胞 |
| CN107007626A (zh) * | 2009-07-09 | 2017-08-04 | 蒂盖尼克斯公司 | 用于细胞治疗的方法和组合物 |
| DK2534242T3 (en) * | 2010-02-10 | 2016-07-18 | Immunicum Ab | Improved composition for the inhibition of tumor cell proliferation |
| CN102933228A (zh) * | 2010-03-15 | 2013-02-13 | 宾夕法尼亚大学董事会 | 制备和储存活化的、成熟树突细胞的体系和方法 |
| RU2530523C2 (ru) * | 2012-03-29 | 2014-10-10 | Олег Борисович Егоров | Способ противоопухолевой иммунотерапии |
| RU2678083C2 (ru) * | 2012-06-27 | 2019-01-23 | Кенитиро Хасуми | Терапия и способ внутриопухолевого введения цитотоксического т-лимфоцита и/или nkt-клетки с антителом против tnf и/или антителом против il-10 |
| GB201300049D0 (en) * | 2013-01-03 | 2013-02-20 | Transimmune Ag | Method for obtaining immuno-stimulatory dendritic cells |
| BR112016010224A2 (pt) | 2013-11-05 | 2018-05-02 | Cognate Bioservices, Inc. | combinações de inibidores do ponto de verificação e produtos terapêuticos para tratar o câncer. |
| GB201413665D0 (en) * | 2014-07-03 | 2014-09-17 | Transimmune Ag And Yale University | Method for obtaining globally activated monocytes |
| MX2018000056A (es) * | 2015-06-30 | 2018-05-28 | Northwest Biotherapeutics Inc | Celulas dendriticas optimamente activadas que inducen una respuesta inmunologica antitumoral mayor o mejorada. |
| WO2017048875A1 (en) * | 2015-09-15 | 2017-03-23 | Northwest Biotherapeutics, Inc | Methods relating to activated dendritic cell compositions and immunotherapeutic treatments for subjects with advanced cancers |
| KR101749165B1 (ko) * | 2016-06-07 | 2017-06-23 | 충남대학교산학협력단 | Rv2299c 또는 Rv2299c와 ESAT-6 융합한 단백질을 포함하는 수지상 세포의 성숙화 촉진용 조성물 |
| WO2018160666A1 (en) * | 2017-02-28 | 2018-09-07 | University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Short-term activated dc1s and methods for their production and use |
| GB201711379D0 (en) * | 2017-07-14 | 2017-08-30 | Univ Cape Town | Maturation of dendritic cells |
| CN109957548B (zh) * | 2017-12-26 | 2022-03-18 | 上海尚泰生物技术有限公司 | 一种基因修饰的树突状细胞疫苗 |
| GB2624871A (en) * | 2022-11-29 | 2024-06-05 | Alv B As | Process for preparing a population of dendritic cells and immunotherapy using the same |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3649335B2 (ja) | 1992-04-01 | 2005-05-18 | ザ ロックフェラー ユニバーシティー | 樹枝状細胞前駆体のインビトロ増殖の方法およびその免疫原製造への使用 |
| US5788963A (en) * | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
| US6797488B1 (en) * | 1997-12-08 | 2004-09-28 | Beth Israel Deaconess Medical Center | Methods of producing anti-angiogenic proteins |
| CN1330557A (zh) * | 1998-09-15 | 2002-01-09 | 匹兹堡大学联邦系统高等教育 | 原位注射具有基因上增进细胞因子表达的抗原呈递细胞 |
| EP1126023A4 (en) * | 1998-10-02 | 2005-02-16 | Mitsubishi Chem Corp | METHOD FOR THE INDUCTION OF CELLULAR IMMUNITY AND CELLS WITH INDUCED CELLULAR IMMUNITY |
| US6649158B1 (en) * | 1998-10-15 | 2003-11-18 | Canji, Inc. | Methods and compositions to induce antitumor response |
| US6558951B1 (en) * | 1999-02-11 | 2003-05-06 | 3M Innovative Properties Company | Maturation of dendritic cells with immune response modifying compounds |
| BR0009772A (pt) * | 1999-04-14 | 2002-01-08 | Us Health | Composições contendo imunotoxinas e agentes que inibem a maturação de células dendrìticas para induzir tolerância imune a um enxerto |
| US20030108527A1 (en) * | 1999-12-28 | 2003-06-12 | Tsukasa Seya | Maturation-promoting agent for immature dendrtic cells |
| JP2002069001A (ja) * | 2000-08-29 | 2002-03-08 | Asahi Kasei Corp | 樹状細胞を主成分とする細胞ワクチン |
| US20020094545A1 (en) | 2000-11-30 | 2002-07-18 | Harris Paul E. | Growth of human dendritic cells for cancer immunotherapy in closed system using microcarrier beads |
| WO2003010292A2 (en) | 2001-07-25 | 2003-02-06 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Methods and apparatus for enrichment and culture of monocytic dendritic cell precursors |
| BRPI0212545B8 (pt) * | 2001-09-06 | 2021-05-25 | Northwest Biotherapeutics Inc | método ex vivo ou in vitro para produzir uma população de célula dendrítica madura e método para produzir células t |
| RU2348418C2 (ru) * | 2002-12-06 | 2009-03-10 | Норсуэст Байотерапьютикс, Инк. | Введение дендритных клеток, подвергнутых частичному созреванию in vitro, для лечения опухолей |
| ATE420946T1 (de) * | 2003-02-27 | 2009-01-15 | Northwest Biotherapeutics Inc | Erzeugung dendritischer zellen aus monozytischen dendritischen vorläuferzellen mit gm-csf ohne anwesenheit zusätzlicher zytokine |
-
2003
- 2003-12-05 RU RU2005121256/14A patent/RU2348418C2/ru active IP Right Revival
- 2003-12-05 DK DK03790358.0T patent/DK1567155T3/da active
- 2003-12-05 BR BRPI0317064A patent/BRPI0317064B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-12-05 EP EP20100176476 patent/EP2260861A1/en not_active Ceased
- 2003-12-05 CA CA002509058A patent/CA2509058A1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 CN CN2003801089756A patent/CN1738619B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-12-05 US US10/538,226 patent/US20060057120A1/en not_active Abandoned
- 2003-12-05 JP JP2004559310A patent/JP4859169B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 KR KR1020057010303A patent/KR101144196B1/ko active IP Right Grant
- 2003-12-05 PL PL377209A patent/PL377209A1/pl not_active Application Discontinuation
- 2003-12-05 MX MXPA05006042A patent/MXPA05006042A/es active IP Right Grant
- 2003-12-05 AU AU2003293411A patent/AU2003293411B2/en not_active Ceased
- 2003-12-05 EP EP03790358A patent/EP1567155B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 AT AT03790358T patent/ATE486125T1/de active
- 2003-12-05 ES ES03790358T patent/ES2354944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 DE DE60334725T patent/DE60334725D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-12-05 CN CN201210027703.4A patent/CN102600461B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-12-05 WO PCT/US2003/038672 patent/WO2004053072A2/en active Application Filing
- 2003-12-05 PT PT03790358T patent/PT1567155E/pt unknown
-
2005
- 2005-06-05 IL IL169002A patent/IL169002A/en active IP Right Grant
-
2006
- 2006-02-02 HK HK06101427.5A patent/HK1082180A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-01-28 AU AU2011200352A patent/AU2011200352B2/en not_active Ceased
- 2011-09-08 JP JP2011196385A patent/JP5707284B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-06-04 US US13/488,388 patent/US20120251561A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2354944T3 (es) | Administración de células dendríticas maduradas parcialmente in vitro para el tratamiento de tumores. | |
| JP2006510667A5 (es) | ||
| JP2024101059A (ja) | 改善または増大した抗腫瘍免疫応答を誘導する最適に活性化された樹状細胞 | |
| AU2016323066B2 (en) | Methods relating to activated dendritic cell compositions and immunotherapeutic treatments for subjects with advanced cancers | |
| AU2018260971B2 (en) | Administration of dendritic cells partially matured in vitro for the treatment of tumors | |
| AU2013234394B2 (en) | Administration of dendritic cells partially matured in vitro for the treatment of tumors |