RU2146088C1 - Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях (варианты), раствор для хранения в криогенных условиях, способ криогенного хранения клеток (варианты), способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток - Google Patents

Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях (варианты), раствор для хранения в криогенных условиях, способ криогенного хранения клеток (варианты), способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток Download PDF

Info

Publication number
RU2146088C1
RU2146088C1 RU97116829A RU97116829A RU2146088C1 RU 2146088 C1 RU2146088 C1 RU 2146088C1 RU 97116829 A RU97116829 A RU 97116829A RU 97116829 A RU97116829 A RU 97116829A RU 2146088 C1 RU2146088 C1 RU 2146088C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
solution
target cells
storage
serum albumin
Prior art date
Application number
RU97116829A
Other languages
English (en)
Other versions
RU97116829A (ru
Inventor
Р.Половина Мило
Original Assignee
Селокс Лабораториз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селокс Лабораториз, Инк. filed Critical Селокс Лабораториз, Инк.
Publication of RU97116829A publication Critical patent/RU97116829A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2146088C1 publication Critical patent/RU2146088C1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/19—Platelets; Megacaryocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells

Abstract

Изобретение предназначено для использования при хранении при низкой температуре различных типов клеток, циркулирующих в крови или найденных в костном мозгу. Также изобретение относится к способам хранения в криогенных условиях и регенерации клеток, хранимых при низких температурах. Физиологически совместимый раствор для хранения в криогенных условиях содержит безвредные компоненты: глицерин, хлорид щелочного металла, моносахарид, сывороточный альбумин. Представлены соотношения компонентов. Введение размороженных клеток-мишеней субъекту осуществляют без разделения клеток-мишеней раствора для хранения при низкой температуре. Раствор прост, физиологически совместим и способен при хранении в криогенных условиях обеспечить сравнимый уровень жизнеспособности клеток in vivo и in vitro. Способы хранения клеток в этом растворе, а также их регенерации и терапевтического применения обеспечивают достижение оптимальной жизнеспособности клеток и возможность их длительного хранения. 7 с. и 25 з.п. ф-лы.

Description

Изобретение относится к растворам для хранения при низкой температуре. Более определенно изобретение направлено на растворы для хранения в криогенных условиях, которые особенно подходят для использования в хранении при низкой температуре различных типов клеток, циркулирующих в крови или найденных в костном мозгу, таких как гематопоэтические стволовые клетки и недифференцированные клетки-предшественники.
Изобретение также относится к способам хранения в криогенных условиях и регенерации клеток, хранимых при низкой температуре.
Предпосылки изобретения
Кровь
Морфологически узнаваемые и функционально активные клетки, циркулирующие в крови включают эритроциты, нейтрофильные, эозинофильные и базофильные гранулоциты, В-лимфоциты, Т-лимфоциты, не-В-лимфоциты, не-Т-лимфоциты и тромбоциты. Эти зрелые клетки происходят и заменяются, если нужно, морфологически узнаваемыми делящимися клетками предшественников при соответственных однолинейных разведениях, такими как эритробласты для серии эритроцитов, миелобласты, промиелоциты или миелоциты для серии гранулоцитов и мегакариоциты для серии тромбоцитов.
Гематопоэтические стволовые клетки и недифференцированные клетки-предшественники.
Клетки-предшественники происходят из более примитивных клеток, которые упрощенно можно разделить на две больших подгруппы: стволовые клетки и недифференцированные клетки-предшественники. Определение стволовых клеток и недифференцированных клеток-предшественников является операционным и зависит скорее от функциональных, чем от морфологических критериев. Стволовые клетки обладают большой способностью к самообновлению и самоподдержанию. Некоторые стволовые клетки дифференцируются при необходимости, но некоторые стволовые клетки или их дочерние клетки производят другие стволовые клетки для поддержания ценного фонда этих клеток. Следовательно, в дополнение к поддержанию собственного вида стволовые клетки имеют большие возможности и способны к дифференциации на несколько подлиний клеток-предшественников с более ограниченной способностью к самообновлению или без способности к самообновлению. Эти клетки-предшественники в конечном итоге приводят к морфологически узнаваемым клеткам- предшественникам. Клетки-предшественники способны к размножению и дифференцированию по одному или больше, чем одному, миелоидному пути дифференциации.
Стволовые клетки и клетки-предшественники составляют очень малый процент ядросодержащих клеток в костном мозгу, селезенке и крови, относительно костного мозга в селезенке присутствует примерно в десять раз меньше таких клеток и еще меньше присутствует в зрелой крови. В качестве примера приблизительно одна из тысячи ядросодержащих клеток костного мозга является клеткой - предшественником; стволовые клетки встречаются еще реже.
Восстановление гематопоэтической системы обеспечивается трансплантацией костного мозга. Лоренц и сотрудники показали, что мыши могут быть защищены от летального облучения внутривенным вливанием костного мозга (Lorenz, 20Е, и др. , 1951, J.NatI. Cancer Inst. 12:197-201). Более позднее исследование продемонстрировало, что защита возникает из-за колонизации костного мозга реципиента введенными клетками (Lindsley, D.L., и др., 1955, Proc.Soc. Exp. Biol.Med. 90:512-515; Nowell, P.С., и др., 1956, Cancer Res. 16:258-261; Mitchison, N. A. , 1956, Br.J.Exp.Pathol. 37:239-247; Thomas, E.D., et al., 1957, N. Engl. J.Med. 257:491-496). Следовательно, стволовые клетки и клетки-предшественники в донорском костном мозгу могут размножаться и заменять клетки крови, ответственные за защитный иммунитет, заживление ткани, свертывание и другие функции крови. При успешной трансплантации костного мозга кровь, костный мозг, селезенка, тимус и другие органы иммунитета вновь заселяются клетками донора.
Костный мозг использовался с возрастающим успехом для лечения смертельных или калечащих заболеваний, включая некоторые типы анемий, таких как гипопластическая анемия (Thomas, E.D., и др., 5 февраля, 1972, The Lancet, с. 284-289), синдром Фанкони (Gluckman, Е., и др., 1980, Brit. J.Haematol. 45: 557-564; Gluckman, Е. , и др. , 1983, Brit.J.Haematol. 54:431-440; Gluckman, Е., и др., 1984, Seminars in Haematology 21(1): 20-26), иммунодефицит (Good, R.A., и др., 1985, Cellular Immunol. 82: 36-54), виды рака, такие как лимфомы или лейкемии (Cahn, J.Y., и др., 1986, Brit.J.Haematol. 63: 457-470; Blume, K.J. and Forman, S.J., 1982, J.Cell.Physioi.Supp. 1:99-102; Chever, M. A. , и др. , 1982, N. Engl.J.Med.307 (8):479-481), карциномы (Blijham, G. , и др. , 1981, Eur.J.Cancer 17(4):433-441), разные твердые опухоли (Ekerz, H. , и др., 1982, Cancer 49:603-609; Spitzer, G., и др., 1980, Cancer 45:3075-3085), и генетические заболевания гематопоэза.
Недавно трансплантация костного мозга была использована для лечения болезней депонирования (Hobbs, J.R., 1981, Lancet 2:735-739), большой талассемии (Thomas, E. D., и др., 1982, Lancet 2:227-229), серповидно-клеточной анемии (Johnson, F.J., и др., 1984, N.Engl.J.Med. 311:780-783) и остеопетроза (Coccia, P.F., и др., 1980, N.Engl.J.Med. 302:701-708) (для общей дискуссии смотри Storb, R. и Thomas, E.D., 1983, Immunol.Rev. 71:77-102;.1984, Sem. Hematol. 21(3): 188-221; 1969. Хранение, культивирование и трансплантация костного мозга. Сообщения экспертов, Москва, Июль 22-26, 1968, Международное Агентство по Атомной Энерги., Вена; McGlave, P.В., и др., 1985, в Недавних Успехах Гематологии, ред. Hoffbrand, А. V., ed., Churchill Livingstone, Лондон, с. 171-197).
В настоящем использование трансплантация костного мозга несколько ограничена, так как очень сложно идеально подобрать (генетически идентичных) доноров, за исключением случаев, когда доступны идентичные близнецы или когда клетки костного мозга пациента в ремиссии хранятся в жизнеспособном замороженном состоянии. Но даже в такой аутогенной системе опасность, обусловленная необнаруживаемым загрязнением злокачественными клетками и необходимостью иметь пациента, здоровье которого позволяет обеспечить такую заготовку, представляет серьезные ограничения. Помимо таких аутогенных случаев существует проблема плохого генетического соответствия, которое влечет за собой серьезные и иногда летальные осложнения. Эти осложнения двух типов. Первый - это когда у больного происходит иммунное отторжение клеток чужого костного мозга (реакция хозяин против трансплантата). Второй - это когда даже в случае адаптации донорных клеток костного мозга они могут поражать больного (заболевание трансплантат против хозяина), которого узнают как чужого. Даже в случае близко подобранных семейных доноров осложнения из-за частичного несоответствия являются причиной смертности и заболеваемости, прямо обусловленных трансплантацией костного мозга от генетически различных индивидуумов.
Периферическая кровь также была исследована как источник стволовых клеток для восстановления гематопоэза (Nothdurtt, W., и др., 1977, Scand.J.Haematol. 19: 470-471; Sarpel, S.C., и др., 1979, Exp.Hematol. 7:113-120; Ragharachar, А. , и др., 1983, J.Cell.Biochem. Suppi. 7A:78; Juttner, C.A., и др. , 1985, Brit.J.Haematol. 61:739-745; Abrams, R.A., и др., 1983, J.Cell. Biochem. Suppi. 7A:53; Prummer, О., и др., 1985, Exp.Hematol. 13:891-898). В некоторых исследованиях хорошие результаты были получены среди больных разными формами лейкемии (Reiffers, J., и др., 1986, Exp.Hematol. 14:312-315 (использование клеток, хранившихся в криогенных условиях); Goidman, J.M., и др. , 1980, Brit.J.Haematol. 45:223-231; Tilly, H., и др., 19 июля 1986, The Lancet, с. 154-55; смотри также То, L.B. и Juttner, C.A., 1987, Brit.J.Haematol. 66: 285-288, и ссылки, цитируемые в ней, и лимфомой (Korbling, М., и др. , 1986, Blood 67:529-532). Это значит, что способность аутогенной периферической зрелой крови восстанавливать гематопоэтическую систему, наблюдаемая у некоторых раковых больных, связана с появлением большого числа циркулирующих клеток-предшественников в периферической крови, получаемых после циторедукции вследствие интенсивной химиотерапии и/или облучения (симптом отдачи) (То, L.B. и Juttner, С.А., 1987, Annot.Brit.J.Haematol. 66:285-288; смотри также 1987, Brit.J.Haematol. 67:252-253 и ссылки, цитируемые там). Другие исследования с использованием периферической крови не дали эффекта восстановления (Hershko, С., и др., 1979, The Lancet 1:945-947; Ochs, H.D., и др., 1981, Pediatr. Res. 15 (4 часть 2): 601).
Изучалась также трансплантация эмбриональных клеток печени (Cain, G.R., и др., 1986, Transplantation 41(1):32-35; Ochs, H.D., и др., 1981, Pediatr. Res. 15(4 часть 2): 601; Paige, C.J., и др., 1981, J.Exp.Med. 153:154-165; Touraine, J.L., 1980, Exerpta Med. 514:277; Touraine, J.L., 1983, Birth Defects 19: 139; смотри также Good R.A., и др., 1983, Cellular Immunol. 82: 44-45 и ссылки, цитированные там) или клеток печени новорожденных (Yunis, E. J. , и др., 1974, Proc. Nati. Acad.Sci. U.S.A. 72:4100) в качестве источника стволовых клеток для восстановления гематопоэза. Клетки тимуса новорожденных также были трансплантированы в опытах по восстановлению иммунитета (Vickery, А. С. , и др., 1983, J.Parasitol. 69(3):478-485; Hirokawa, К., и др., 1982, Clin.lmmunol. Immunopathol. 22:297-304).
Растворы и методы хранения при низкой температуре
Замораживание давно использовали, чтобы сохранить живые клетки, такие как клетки крови, после их удаления и выделения из донора. Хранение при низкой температуре и регенерация живых клеток, однако, как доказано, являются весьма сложными. Клетки подвергаются относительно жестким условиям во время циклов замораживания и размораживания, включаемых в хранение в криогенных условиях, приводя к низкой степени выживаемости.
Замораживание разрушительно для большинства живых клеток. Как только внешняя среда замерзает, клетки пытаются поддержать равновесие и теряют воду, таким образом увеличивая концентрацию внутриклеточного растворенного вещества, при этом внутриклеточное замораживание происходит при примерно минус 10-15oC. Обычно считают, что как внутриклеточное замораживание, так и действие раствора, ответственны за повреждение клеток. Например, предполагали, что разрушение при замораживании от внеклеточного льда является по существу повреждением плазматической мембраны вследствие осмотической дегидратации клетки.
Много времени и усилий было затрачено на то, чтобы максимизировать жизнеспособность оттаявших клеток. Такие усилия обычно фокусировали на разработке криозащитных средств и установлении оптимальных скоростей охлаждения.
Криозащита добавлением растворенного вещества, как полагают, протекает по двум возможным механизмам: (i) внутриклеточном - снижением количества льда, образующегося внутри клетки; и/или (ii) внеклеточном - уменьшением воды, выходящей из клетки в ответ на пониженное давление пара, обусловленное образованием льда в растворенном веществе, окружающем клетки.
Различные оптимальные скорости охлаждения были описаны для разных клеток. Разные группы рассматривали влияние скорости охлаждения или хранения при низкой температуре на выживание или эффективность трансплантации замороженных клеток костного мозга и красных клеток крови (Lovelock, J.E., и Bishop, M.W.H., 1959, Nature 183:1394-1395; Ashwood-Smith, M.J., 1961, Nature 190: 1204-1205; Rowe, A.W. и Rinfret A.P., 1962, Blood 20:636; Rowe, A.W. и Felling, J. , 1962, Fed.Proc. 21:157; Rowe, A.W., 1966, Cryobiology 3(1): 12-18; Lewis, J.P., и др., 1967, Transfusion 7(l):17-32; Rapatz, G., и др., 1968, Cryobiology 5(1):18-25; Mazyr, P., 1970, Science 168:939-949; Mazur, P., 1977, Cryobiology 14:251-272; Rowe, A.W., и Lenny, L.L., 1983, Cryobiology 20: 717; Stiff, P.J., и др., 1983, Cryobiology 20:17-24; Gorin, N.C., 1986, Clinics in Haematology 15(1):19-48). Обычно, оптимальные результаты по замораживанию гематопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников могут быть достигнуты при скорости охлаждения примерно 1-2oC в минуту и конечной температуре хранения от примерно -70 до примерно -196oC; для других клеток крови интервалы обычно такие же.
Описана успешная регенерация клеток костного мозга человека после длительного хранения в жидком азоте (1983, Американская Коллекция Типов Культур, Квартальный выпуск 3(4):1). В дополнение, стволовые клетки в костном мозгу, как было показано, способны выдерживать хранение при низкой температуре и размораживании (Fabian, 1., и др., 1982, Exp. Hematol. 10(l):119-122).
Широко применяемым промышленным стандартным криопротектором для использования в хранении в криогенных условиях большинства клеток, включая цельную кровь, пуповинную кровь, костный мозг, гранулоциты, нейтрофилы, тромбоциты и гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники, является диметилсульфоксид (ДМСО). Это объясняется широким распространением опыта и мнением, что ДМСО обеспечивает наилучшую защиту и максимальную жизнеспособность клеток. Однако при том, что ДМСО весьма эффективен для этих целей, также известно, что он является физиологически вредным, особенно при высокой концентрации, и имеет тенденцию вызывать раздражение как в системе, подвергаемой хранению при низких температурах, так и у больного, которому вводят клетки хранившихся при низкой температуре, приводя к гипертензии, рвоте и тошноте. Пернициозная природа ДМСО, как полагают, приводит к более низкой in vitro жизнеспособности клеток, хранившихся при низкой температуре.
Соответственно, существует необходимость в простом, физиологически совместимом, альтернативном растворе для криогенного хранения, способном обеспечить сравнимый уровень жизнеспособности клеток in vivo и in vitro.
Сущность изобретения
Был разработан простой, недорогой, физиологически совместимый раствор для хранения при низкой температуре, который включает безвредные компоненты (i) глицерин, (ii) хлорид щелочного металла, (iii) моносахарид и (iv) сывороточный альбумин.
Основным компонентом раствора для хранения в криогенных условиях является глицерин (также известный как глицерол). Хлорид щелочного металла повышает жизнеспособность клеток в цикле замораживание-размораживание. Моносахарид является источником углерода для клеток. Сывороточный альбумин действует как источник белка, который покрывает мембрану клетки-мишени, так чтобы обеспечить ее защиту в течение цикла замораживание-размораживание и хранение замороженных клеток. Сывороточный альбумин, как полагают, также действует как ловушка свободных радикалов кислорода, которые, как известно, отрицательно воздействуют на жизнеспособность различных клеток-мишеней, таких как эритроцит, нейтрофильный, эозинофильный и базофильный гранулоциты, В-лимфоциты, Т-лимфоциты, не-В-лимфоциты, не-Т- лимфоциты и тромбоциты, указанные ранее. Источник сывороточного альбумина предпочтительно подбирают в соответствии с особенностями субъекта, которому защищенные клетки-мишени будут введены.
Раствор для хранения при низкой температуре может быть как концентрированным, так и сильно разбавленным.
Концентрированный раствор может быть разбавлен до необходимой концентрации просто добавлением разбавителя, такого как вода, которую соответственно обрабатывали для инъекции. Разбавителем является предпочтительно физиологически уравновешенный солевой раствор, такой как физиологический раствор.
Использование раствора для хранения при низкой температуре и последующее терапевтическое использование клеток-мишеней, таких как цельная кровь, умбиликальная пуповинная кровь, костный мозг, гранулоциты, нейтрофилы, тромбоциты и гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники, включая клетки, идентифицированные как клетки CD 34+, включает стадии (i) соответствующего разбавления концентрированного раствора для хранения в криогенных условиях, (ii) введения клеток-мишеней в разбавленный раствор, (iii) замораживания защищенных клеток-мишеней, (iv) размораживания раствора до комнатной температуры, (v) введение размороженных клеток-мишеней субъекту, нуждающемуся в таких клетках-мишенях. Размороженные клетки-мишени и раствор для хранения при низкой температуре предпочтительно нагревают до температуры тела (т.е., примерно, 37oC) перед введением субъекту. Физиологическая совместимость раствора для хранения при криогенной температуре позволяет вводить субъекту размороженные клетки-мишени без разделения клеток-мишеней и раствора для хранения при низкой температуре.
Подробное описание изобретения.
Был получен простой, недорогой, физиологически совместимый раствор для хранения в криогенных условиях, который состоит из (i) глицерина, (ii) хлорида щелочного металла, (iii) моносахарида и (iv) сывороточного альбумина.
Как предусмотрено здесь, за исключением формулы изобретения, "вес.%", использование в связи с компонентами раствора для хранения при низкой температуре основывается на общем весе концентрированного раствора для хранения при низкой температуре, если не оговорено особо.
Концентрированный раствор для хранения при низкой температуре включает от примерно 60 до примерно 80 вес.% глицерина. Концентрации, меньше примерно 60 вес.%, приводят к снижению жизнеспособности клеток, в то время как растворы, содержащие больше примерно 80 вес.%, глицерина, приводят к образованию раствора с неприемлемо высоким осмотическим давлением (т.е. больше примерно 2000 мОсм/кг).
Хлориды щелочных металлов, пригодные для использования в этом изобретении, включают хлорид натрия и хлорид калия. Хлорид щелочного металла, как полагают, повышает жизнеспособность клеток в цикле замораживания-размораживания установлением осмотического давления раствора для хранения при низкой температуре между примерно 500 и 2000 мОсм/кг, которое измеряют на осмометре давления пара, модель Вескор 5500 в соответствии с протоколом, имеющемся в инструкции/руководстве по эксплуатации прибора. По имеющимся данным физиологическое осмотическое давление крови обычно находится в интервале от примерно 260 до 320 мОсм/кг. Оптимальное осмотическое давление в этом общем интервале зависит от нескольких факторов, включающих специфические клетки-мишени, специфический состав раствора для хранения в криогенных условиях и скорость замораживания-размораживания. В качестве примера осмотическое давление от примерно 700 до 1700 обычно предпочтительно для криогенного хранения гематопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников.
Концентрированный раствор для хранения при низкой температуре содержит от примерно 5 до примерно 10 вес.% хлорида щелочного металла. Концентрация меньше примерно 5 вес.% и больше 10 вес.% хлорида щелочного металла приводят к снижению жизнеспособности клеток в цикле замораживания-размораживания, причем при концентрации больше 10 вес.% они также чувствительны к повреждающей кристаллизации.
Моносахарид, такой как глюкоза, действует как источник углерода для клеток. Доступность моносахарида способствует сохранению клеток в цикле замораживания-размораживания и хранению замороженных клеток, гарантируя присутствие достаточного количества питательных веществ внутри клетки.
Альбумин сыворотки действует как источник белка, который обеспечивает покрытие вокруг мембраны клетки-мишени для того, чтобы защитить мембрану во время цикла замораживания-размораживания и хранения замороженных клеток. Сывороточный альбумин, как полагают, также действует как ловушка свободных радикалов кислорода, которые, как известно, отрицательно влияют на жизнеспособность различных клеток-мишеней, таких как эритроцит, нейтрофильный, эозинофильный и базофильный гранулоциты, В-лимфоциты, Т-лимфоциты, не-В-лимфоциты, не-Т-лимфоциты и тромбоциты, указанные ранее. Источник сывороточного альбумина предпочтительно подбирают в соответствии с особенностями субъекта, которому защищенные клетки-мишени будут введены.
Эффективные концентрации могут быть достигнуты введением от примерно 0,2 до 1 вес.% моносахарида в концентрированный раствор для хранения при низкой температуре. Концентрация меньше примерно 0,2 вес.% не является достаточной и снижает жизнеспособность в цикле замораживания- размораживания, в то время как концентрации больше примерно 1 вес.% не дают пропорционального роста жизнеспособности клеток и вредно действуют на концентрации других компонентов.
Альбумин сыворотки действует как источник белка, который обеспечивает покрытие вокруг мембраны клетки-мишени для того, чтобы защитить мембрану во время цикла замораживания-размораживания и хранения замороженных клеток.
Эффективные концентрации могут быть достигнуты введением от примерно 20 до 30 вес.% сывороточного альбумина. Концентрации меньше примерно 20 вес.% альбумина сыворотки приводят к снижению жизнеспособности, в то время как концентрации больше примерно 30 вес.% не дают пропорционального повышения жизнеспособности клеток и имеют тенденцию увеличивать осмотическое давление раствора выше верхнего предела примерно 2000 мОсм/кг.
Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях может быть разбавлен до концентрации использования добавлением подходящего растворителя (например, 0,9 вес.% физиологического раствора, состоящего из ультрафильтрованной воды, воды для инъекции и аутогенной плазмы) при отношении примерно 1-10 частей, обычно 1-2 части, разбавителя к 1 части концентрированного раствор для хранения при низкой температуре. Обычно разбавленный раствор для хранения в криогенных условиях состоит существенным образом из (i) примерно 20-40 вес.% глицерина, (ii) примерно 1,5-5 вес.% хлорида щелочного металла, (iii) примерно 0,1-0,5 вес.% моносахарида и (iv) примерно 6-15 вес.% сывороточного альбумина в расчете на разбавленный раствор для хранения при низкой температуре. Разбавителем доводят раствор до конечного общего количества.
Концентрированный раствор для хранения при низкой температуре должен быть составлен так, чтобы обеспечить pH между примерно 7 и 7,5.
Клетки-мишени обычно могут быть криогенно сохранены с использованием раствора для хранения при низкой температуре просто (i) введением клеток-мишеней в разбавленный раствор для хранения в криогенных условиях и (ii) замораживанием или криогенным хранением защищенных клеток-мишеней. Объем разбавленного раствора для хранения при низкой температуре, который следует добавить к клеткам-мишеням, зависит от объемного отношения раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения в криогенных условиях и отношения клетки-мишени к раствору для хранения при низкой температуре.
Объемное отношение раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения при низкой температуре обычно должно быть примерно 1:1-1:10, а отношение клеток-мишеней к раствору для хранения при низкой температуре 1•105 клеток/мл - 1•109 клеток/мл, предпочтительно 2•108 клеток/мл - 3•108 клеток/мл. Отношения, превышающие указанные, приводят к уменьшению концентрации жизнеспособных клеток, вследствие несоответствия раствора для хранения при низкой температуре, в то время как отношения меньше указанных просто приводят к неэффективному использованию раствора и необходимости вводить избыточный раствор для хранения при низкой температуре субъекту для того, чтобы ввести эффективное количество клеток-мишеней. Клетки-мишени часто используют для хранения в разбавленной форме, в качестве основного компонента биологической жидкости (например, стволовые клетки, концентрированные из периферической крови, обычно содержат стволовые клетки в концентрации от примерно 1•106 клеток/мл до 3•108 клеток/мл с остатком из других компонентов крови, таких как плазма и тромбоциты). Эти биологически разбавленные образцы обычно должны быть смешаны с раствором для хранения при низкой температуре в объемном соотношении от примерно 2:1 до 1:4 (зависящим, от ряда факторов, включая специфический состав разбавленного раствора для хранения при низкой температуре, концентрации клеток-мишеней в биологически разбавленном образце, типа клеток-мишеней т. д. ), чтобы достичь оптимального отношения клеток-мишеней к раствору для хранения при низкой температуре. Конечный раствор, содержащий клетки-мишени, обычно должен содержать примерно 4-12 вес. % глицерина и примерно 2-10 вес.% альбумина, с различными внешними границами этого общего интервала, рассматриваемыми для определенных применений.
Хранившиеся в криогенных условиях защищенные клетки-мишени должны быть разморожены перед их введением субъекту. Благодаря физиологической совместимости раствора для хранения при низкой температуре размороженные клетки-мишени могут быть введены субъекту без их разделения с раствором. Размороженные клетки-мишени могут находится несколько часов при комнатной температуре без заметной потери их жизнеспособности. Размороженный раствор может быть медленно разбавлен физиологическим раствором или другим ионным раствором для того, чтобы уменьшить осмотическое давление с давления криогенного хранения 500-2000 мОсм/кг до физиологического 260-320 мОсм/кг. Таким образом снижается опасность разрушения клеточных стенок, вызванная быстрыми изменениями осмотического давления.
Регулированная медленная скорость охлаждения часто может быть эффективной для достижения оптимальной жизнеспособности клеток. Обычно считают, что разные типы клеток имеют разные скорости охлаждения (смотри, например, Rowe, A. W. и Rinfret, A.P., 1962, Blood 20:636; Rowe, A.W., 1966, Cryo Biology 3(l): 12-18; Lewis, J.P., и др., 1967, Transfusion 7(l):17-32; Mazur, P. , 1970, Science 168:939-949 по влиянию скорости охлаждения на выживание стволовых клеток мозга и возможности трансплантации).
Раствор для хранения в криогенных условиях может находиться при комнатной температуре перед использованием, а смешиваемые клетки-мишени могут быть выдержаны при комнатной температуре в течение тридцати минут перед началом замораживания без заметной потери жизнеспособности клеток. Это контрастирует с токсичным криопротектором ДМСО, который должен быть охлажден до примерно 4oC перед добавлением клеток-мишеней для того, чтобы ускорить процесс замораживания, при этом необходимо, чтобы процесс замораживания начался немедленно после добавления ДМСО к клеткам, снижая таким образом гибель клеток, вызываемую ДМСО.
Регулируемое замораживание может быть выполнено с использованием замораживающего прибора с программным управлением. Программируемый аппарат замораживания позволяет определять оптимальные скорости охлаждения и облегчает стандартное воспроизводимое охлаждение.
Контейнер, содержащий клетки должен быть устойчивым к криогенным условиям и должен обеспечивать быстрый теплоперенос для эффективного контроля как замораживания, так и размораживания. Для малых количеств (1-2 мл) можно использовать герметичные пластмассовые ампулы (например, ампулы Нанка и Уитона) или стеклянные ампулы, а большие объемы от 100 до 200 мл можно замораживать в полиолефиновых мешках, таких как выпускает Фенвал, которые находятся между металлическими пластинами.
Замороженные клетки затем можно перенести в криогенный сосуд длительного хранения. В предпочтительном варианте образцы можно криогенно хранить в жидком азоте (-196oC) или парах жидкого азота (-105oC). Такое хранение значительно облегчается доступностью высокоэффективных холодильников на жидком азоте.
Если необходимо, замороженные клетки быстро размораживают и сохраняют при 37oC до использования. Так как раствор для хранения при низкой температуре физиологически совместим, то его не надо удалять перед введением субъекту.
Криогенно сохраненные и размороженные умбиликальные пуповинные клетки, тромбоциты и гематопоэтические стволовые клетки и клетки-предшественники могут быть использованы терапевтически для восстановления гематопоэтических систем у подходящих больных. Клетки можно вводить любым известным методом, но системное вливание обычно предпочтительно.
Восстановление гематопоэтической системы (или иммунной системы) может иметь терапевтическую ценность для большого числа заболеваний и нарушений. Вливание криогенно сохраненных гематопоэтических стволовых клеток и клеток-предшественников для восстановления гематопоэза может быть с пользой использовано для лечения тех заболеваний, которые, как известно, в настоящее время излечиваются трансплантацией костного мозга.
Заболевания, которые могут быть вылечены вливанием стволовых клеток, включают, но не ограниваются ими, пять широких категорий. Первая - это заболевания, возникающие от недостаточности или дисфункции нормального производства клеток крови и созревания (например, гипопластическая анемия и гипопролиферативные заболевания стволовых клеток). Вторая группа включает опухолевые злокачественные заболевания в гематопоэтических органах (например, лейкемия и лимфомы). Третья группа включает больных с широким спектром злокачественных твердых опухолей негематопоэтической природы. Вливание стволовых клеток этим больным служит процедурой спасения костного мозга, которая назначается больному после химиотерапии и облучения злокачественной опухоли. Четвертая группа заболеваний состоит из аутоиммунных состояний, когда стволовые клетки служат в качестве источника замещения аномальной иммунной системы. Пятая группа заболеваний содержит ряд генетических заболеваний, которые могут быть исправлены вливанием гематопоэтических стволовых клеток, предпочтительно сингенных, которые перед трансплантацией подвергались генной терапии.

Claims (32)

1. Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях, содержащий глицерин, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла в количестве, эффективном для повышения жизнеспособности клеток, моносахарид, способный к биологическому метаболизму, в количестве, эффективном для поддержания клетки в окружающих условиях, и сывороточный альбумин в количестве, эффективном для сохранения целостности мембраны плазмы.
2. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит разбавитель.
3. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что pH раствора составляет примерно 7-7,5.
4. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что концентрат содержит (а) примерно 60-80 вес.% глицерина, (б) примерно 5-10 вес.% хлорида щелочного металла, (в) примерно 0,2-1 вес.% моносахарида и (г) примерно 20-30 вес.% сывороточного альбумина.
5. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.2, отличающийся тем, что он содержит (а) примерно 20-40 вес.% глицерина, (б) примерно 1,5-5 вес.% хлорида щелочного металла, (в) примерно 0,1-0,5 вес.% моносахарида и (г) примерно 6-15 вес.% сывороточного альбумина и (д) остаток - разбавитель.
6. Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что хлорид щелочного металла представляет собой хлорид натрия.
7. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.2, отличающийся тем, что хлорид щелочного металла представляет собой хлорид натрия.
8. Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что моносахаридом является глюкоза.
9. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.2, отличающийся тем, что моносахаридом является глюкоза.
10. Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях по п.1, отличающийся тем, что сывороточным альбумином является альбумин сыворотки человека.
11. Раствор для хранения в криогенных условиях по п.2, отличающийся тем, что сывороточным альбумином является альбумин сыворотки человека.
12. Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях, содержащий глицерин, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла, глюкозу и сывороточный альбумин, при этом соотношение компонентов составляет примерно 60-80 вес.% глицерина, примерно 5-10 вес.% хлорида щелочного металла, примерно 0,2-1 вес.% глюкозы, примерно 20-30 вес.% сывороточного альбумина.
13. Раствор для хранения в криогенных условиях, содержащий глицерин, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла, глюкозу, сывороточный альбумин и разбавитель, при этом соотношение компонентов составляет примерно 20-40 вес. % глицерина, примерно 1,5-5 вес.% хлорида щелочного металла, примерно 0,1-0,5 вес. % глюкозы, примерно 6-15 вес.% сывороточного альбумина и остаток - разбавитель.
14. Способ криогенного хранения клеток, включающий в себя введение клеток-мишеней в раствор для хранения в криогенных условиях, содержащий глицерин, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла в количестве, эффективном для повышения жизнеспособности клеток, моносахарид, способный к биологическому метаболизму в количестве, эффективном для поддержания клетки в окружающих условиях, и сывороточный альбумин в количестве, эффективном для сохранения целостности мембраны плазмы, и дополнительно разбавитель, причем хранение защищенных клеток-мишеней осуществляют при криогенных температурах.
15. Способ по п.14, отличающийся тем, что объемное отношение раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения в криогенных условиях составляет примерно 1: 1 - 1:10, а отношение клеток-мишеней к раствору для хранения в криогенных условиях составляет примерно 1 • 105 - 1 • 109 клеток/мл.
16. Способ по п.14, отличающийся тем, что клетки-мишени являются гематопоэтическими стволовыми клетками или клетками-предшественниками.
17. Способ по п.14, отличающийся тем, что клетки-мишени являются клетками тромбоцитов крови.
18. Способ по п.14, отличающийся тем, что клетки-мишени являются клетками, идентифицируемыми как клетки CD 34+.
19. Способ по п. 14, отличающийся тем, что клетки-мишени получают из пуповинной крови.
20. Способ криогенного хранения клеток, включающий в себя введение клеток-мишеней в раствор для хранения, содержащий глицерин, отличающийся тем, что раствор содержит также хлорид щелочного металла, глюкозу, сывороточный альбумин и разбавитель, при этом соотношение компонентов составляет примерно 20-40 вес.% глицерина, примерно 1,5-5 вес.% хлорида щелочного металла, примерно 0,1-0,5 вес. % глюкозы, примерно 6-15 вес.% сывороточного альбумина и остаток - разбавитель, причем хранение защищенных клеток-мишеней осуществляют при криогенных температурах.
21. Способ по п.20, отличающийся тем, что объемное отношение раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения в криогенных условиях составляет примерно 1: 1 - 1:10, а отношение клеток-мишеней к раствору для хранения в криогенных условиях составляет примерно 1 • 105 - 1 • 109 клеток/мл.
22. Способ по п.20, отличающийся тем, что защищенные клетки-мишени охлаждают со скоростью 1-2oС в минуту до температуры примерно (-70) - (-196)oС.
23. Способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, включающий введение клеток-мишеней в раствор для хранения в криогенных условиях, содержащий глицерин, хранение и размораживание защищенных клеток-мишеней, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла в количестве, эффективном для повышения жизнеспособности клеток, моносахарид, способный к биологическому метаболизму, в количестве, эффективном для поддержания клетки в окружающих условиях, сывороточный альбумин в количестве, эффективном для сохранения целостности мембраны плазмы, и дополнительно разбавитель, причем хранение защищенных клеток-мишеней осуществляют при криогенных температурах.
24. Способ по п.23, отличающийся тем, что объемное отношение раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения при низкой температуре составляет примерно 1: 1 - 1:10, а отношение клеток-мишеней к раствору для хранения при низкой температуре составляет примерно 1 • 105 - 1 • 109 клеток/мл.
25. Способ по п.23, отличающийся тем, что клетки-мишени являются гематопоэтическими стволовыми клетками или клетками-предшественниками.
26. Способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток, включающий введение клеток-мишеней в раствор для хранения при низкой температуре, содержащий глицерин, хранение защищенных клеток-мишеней, размораживание защищенных клеток-мишеней и введение размороженных клеток-мишеней субъекту, отличающийся тем, что указанный раствор является физиологически совместимым и содержит также хлорид щелочного металла в количестве, эффективном для повышения жизнеспособности клеток, моносахарид, способный к биологическому метаболизму, в количестве, эффективном для поддержания клетки в окружающих условиях, сывороточный альбумин в количестве, эффективном для сохранения целостности мембраны плазмы, и дополнительно разбавитель, а введение размороженных клеток-мишеней субъекту осуществляют без разделения клеток-мишеней и раствора для хранения при низкой температуре, причем хранение защищенных клеток-мишеней осуществляют при криогенных температурах.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что объемное отношение раствора, содержащего клетки-мишени, к раствору для хранения при низкой температуре составляет примерно 1: 1 - 1:10, а отношение клеток-мишеней к раствору для хранения при низкой температуре составляет примерно 1 • 105 - 1 • 109 клеток/мл.
28. Способ по п.26, отличающийся тем, что клетки-мишени являются гематопоэтическими стволовыми клетками или клетками-предшественниками.
29. Способ по п.26, отличающийся тем, что клетки-мишени являются клетками тромбоцитов крови.
30. Способ по п.26, отличающийся тем, что клетки-мишени являются клетками, идентифицируемыми как клетки CD 34+.
31. Способ по п. 26, отличающийся тем, что клетки-мишени получают из пуповинной крови.
32. Способ по п.26, отличающийся тем, что субъектом является человек.
RU97116829A 1995-03-08 1996-03-07 Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях (варианты), раствор для хранения в криогенных условиях, способ криогенного хранения клеток (варианты), способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток RU2146088C1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/399,077 1995-03-08
US08/399,077 US5580714A (en) 1995-03-08 1995-03-08 Cryopreservation solution
PCT/US1996/003153 WO1996027287A1 (en) 1995-03-08 1996-03-07 Cryopreservation solution

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU97116829A RU97116829A (ru) 1999-08-20
RU2146088C1 true RU2146088C1 (ru) 2000-03-10

Family

ID=23578046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97116829A RU2146088C1 (ru) 1995-03-08 1996-03-07 Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях (варианты), раствор для хранения в криогенных условиях, способ криогенного хранения клеток (варианты), способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток

Country Status (13)

Country Link
US (2) US5580714A (ru)
EP (1) EP0813361B1 (ru)
JP (1) JP3165863B2 (ru)
AT (1) ATE253818T1 (ru)
AU (1) AU693339B2 (ru)
BR (1) BR9607147A (ru)
CA (1) CA2214280C (ru)
DE (1) DE69630679T2 (ru)
ES (1) ES2210352T3 (ru)
NO (1) NO974108L (ru)
NZ (1) NZ304628A (ru)
RU (1) RU2146088C1 (ru)
WO (1) WO1996027287A1 (ru)

Families Citing this family (103)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE206583T1 (de) * 1994-11-09 2001-10-15 Celadon Science Llc Wundbesserungsverband und verfahren zur dessen konservierung
US6713084B1 (en) 1997-01-17 2004-03-30 Celadon Science, Llc Methods for promoting healing of skin resurfacing wounds
AU6242298A (en) 1997-01-17 1998-08-07 Celadon Science, Llc Methods for promoting healing of corneal resurfacing wounds
EP1028622A1 (en) 1997-09-22 2000-08-23 University Of Guelph Reduction of sperm sensitivity to chilling
US5955257A (en) * 1997-10-21 1999-09-21 Regents Of The University Of Minnesota Infusible grade short-term cell storage medium for mononuclear cells
US5972592A (en) * 1997-12-29 1999-10-26 Cornell Research Foundation, Inc. Increasing reproductive efficiency of bull semen using fucose or a compound with a fucose moiety
ES2257050T3 (es) * 1998-05-26 2006-07-16 Lifecell Corporation Conservacion por el frio de hematies humanos.
US6248585B1 (en) * 1998-11-19 2001-06-19 Thomas Jefferson University Compositions for preserving haptenized tumor cells for use in vaccines
US6267925B1 (en) 1998-12-07 2001-07-31 Haemonetics Corporation Method for cryopreservation and recovery of red blood cells
US6365385B1 (en) 1999-03-22 2002-04-02 Duke University Methods of culturing and encapsulating pancreatic islet cells
US6303355B1 (en) 1999-03-22 2001-10-16 Duke University Method of culturing, cryopreserving and encapsulating pancreatic islet cells
US6358739B1 (en) 1999-04-12 2002-03-19 Modex Therapeutiques, S.A. Transiently immortalized cells
US6878543B1 (en) 1999-10-25 2005-04-12 Nsgene Sa Cultures of GFAP+ nestin+ cells that differentiate to neurons
US7112576B1 (en) 1999-12-10 2006-09-26 Regents Of The University Of Minnesota Compositions and methods for cryopreservation of peripheral blood lymphocytes
DE10041515A1 (de) 2000-08-24 2002-03-14 Gerold Schuler Verfahren zur Herstellung gebrauchsfertiger, Antigen-beladener oder -unbeladener, kryokonservierter reifer dendritischer Zellen
KR100414184B1 (ko) * 2000-10-30 2004-01-07 대한민국 사슴 정액 냉동 보존액 및 이를 이용하여 사슴정액을 냉동보존하는 방법, 및 사슴의 인공수정방법
AU2002214443B2 (en) * 2000-11-03 2005-12-15 Vitrolife Ab Evaluation and preservation solution
WO2002054864A1 (en) * 2001-01-12 2002-07-18 Abs Corporation Semen extender composition and methods for manufacturing and using
US6702744B2 (en) 2001-06-20 2004-03-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Agents that stimulate therapeutic angiogenesis and techniques and devices that enable their delivery
US8608661B1 (en) 2001-11-30 2013-12-17 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method for intravascular delivery of a treatment agent beyond a blood vessel wall
US8062837B2 (en) * 2002-02-14 2011-11-22 Stemcyte, Inc. Plasma-depleted, not erythrocyte-depleted, cord blood compositions and method of making
PL212661B1 (pl) 2002-05-16 2012-11-30 Absorber Sposób izolacji komórki prekursorowej sródblonka
US7361368B2 (en) 2002-06-28 2008-04-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Device and method for combining a treatment agent and a gel
US20040063204A1 (en) * 2002-08-14 2004-04-01 Lijun Yang Bone marrow cell differentiation
EP2782337A3 (en) * 2002-10-15 2014-11-26 Verance Corporation Media monitoring, management and information system
AU2003302898A1 (en) 2002-12-11 2004-06-30 Cryolife, Inc. Radical retardant cryopreservation solutions
US20040151706A1 (en) * 2003-01-27 2004-08-05 Alex Shakhov Collection and storage of biological specimens containing stem cells from healthy individuals for future use in treatment of their own cytopathological illnesses or other medical conditions
US7641643B2 (en) 2003-04-15 2010-01-05 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions to treat myocardial conditions
US8821473B2 (en) 2003-04-15 2014-09-02 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions to treat myocardial conditions
US8038991B1 (en) 2003-04-15 2011-10-18 Abbott Cardiovascular Systems Inc. High-viscosity hyaluronic acid compositions to treat myocardial conditions
EP1747265B1 (en) 2004-04-23 2011-04-20 BioE LLC Multi-lineage progenitor cells
US7622108B2 (en) 2004-04-23 2009-11-24 Bioe, Inc. Multi-lineage progenitor cells
US20060281068A1 (en) * 2005-06-09 2006-12-14 Chemimage Corp. Cytological methods for detecting a disease condition such as malignancy by Raman spectroscopic imaging
US9115382B2 (en) * 2004-06-03 2015-08-25 Leroy E. Mosher Kit for detection of hemolytic Streptococcus
US20080125745A1 (en) 2005-04-19 2008-05-29 Shubhayu Basu Methods and compositions for treating post-cardial infarction damage
US8828433B2 (en) * 2005-04-19 2014-09-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hydrogel bioscaffoldings and biomedical device coatings
US8303972B2 (en) 2005-04-19 2012-11-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Hydrogel bioscaffoldings and biomedical device coatings
US8187621B2 (en) 2005-04-19 2012-05-29 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods and compositions for treating post-myocardial infarction damage
US9539410B2 (en) 2005-04-19 2017-01-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions for treating post-cardial infarction damage
US8048619B2 (en) * 2005-06-02 2011-11-01 Stemcyte, Inc. Method of treating a hematopoietic associated disease or disorder with plasma-depleted, but not erythrocyte-depleted cord blood compositions
US8253936B2 (en) * 2008-08-08 2012-08-28 Chemimage Corporation Raman characterization of transplant tissue
EP1926366A4 (en) * 2005-09-22 2011-12-28 Transfert Plus Soc En Commandite PLANT EXTRACT AND ITS USE AS A CRYOPROTECTIVE AGENT
ES2668551T3 (es) * 2005-09-26 2018-05-18 Lifecell Corporation Composición seca de plaquetas
US7854754B2 (en) * 2006-02-22 2010-12-21 Zeltiq Aesthetics, Inc. Cooling device for removing heat from subcutaneous lipid-rich cells
CA2646491A1 (en) 2006-04-17 2007-10-25 Bioe, Inc. Differentiation of multi-lineage progenitor cells to respiratory epithelial cells
DE102006033098A1 (de) * 2006-07-14 2008-01-24 Rebholz, Erich, Dr. Verfahren und Einrichtung zum Zwischenlagern von Mikroben
US7732190B2 (en) 2006-07-31 2010-06-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Modified two-component gelation systems, methods of use and methods of manufacture
US9242005B1 (en) 2006-08-21 2016-01-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Pro-healing agent formulation compositions, methods and treatments
US8192474B2 (en) 2006-09-26 2012-06-05 Zeltiq Aesthetics, Inc. Tissue treatment methods
US9132031B2 (en) 2006-09-26 2015-09-15 Zeltiq Aesthetics, Inc. Cooling device having a plurality of controllable cooling elements to provide a predetermined cooling profile
US9005672B2 (en) 2006-11-17 2015-04-14 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods of modifying myocardial infarction expansion
US8741326B2 (en) 2006-11-17 2014-06-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Modified two-component gelation systems, methods of use and methods of manufacture
US8192760B2 (en) 2006-12-04 2012-06-05 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods and compositions for treating tissue using silk proteins
US20080287839A1 (en) 2007-05-18 2008-11-20 Juniper Medical, Inc. Method of enhanced removal of heat from subcutaneous lipid-rich cells and treatment apparatus having an actuator
US8523927B2 (en) 2007-07-13 2013-09-03 Zeltiq Aesthetics, Inc. System for treating lipid-rich regions
WO2009026471A1 (en) 2007-08-21 2009-02-26 Zeltiq Aesthetics, Inc. Monitoring the cooling of subcutaneous lipid-rich cells, such as the cooling of adipose tissue
US20090123436A1 (en) * 2007-11-08 2009-05-14 Surmodics, Inc. Cryopreservative compositions and methods
JP5726525B2 (ja) 2008-06-27 2015-06-03 株式会社バイオベルデ 細胞および組織の凍結保存用組成物
US8416405B2 (en) * 2008-08-08 2013-04-09 Chemimage Corporation Raman chemical imaging of implantable drug delivery devices
US8956867B2 (en) 2008-11-07 2015-02-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Method for culturing stem cells
US8603073B2 (en) 2008-12-17 2013-12-10 Zeltiq Aesthetics, Inc. Systems and methods with interrupt/resume capabilities for treating subcutaneous lipid-rich cells
EP4066797A1 (en) 2009-04-30 2022-10-05 Zeltiq Aesthetics, Inc. Device for removing heat from subcutaneous lipid-rich cells
JP5630979B2 (ja) * 2009-08-04 2014-11-26 株式会社バイオベルデ 動物幹細胞凍結保存液
KR20120051737A (ko) * 2009-08-19 2012-05-22 다카라 바이오 가부시키가이샤 세포의 보존 방법
WO2011091293A1 (en) * 2010-01-21 2011-07-28 Zeltiq Aesthetics, Inc. Compositions for use with a system for improved cooling of subcutaneous lipid-rich tissue
MX2012008660A (es) 2010-01-25 2013-02-26 Zeltiq Aesthetics Inc Aplicadores de uso para remover de manera no invasiva calor celulas subcutaneas ricas en lipido a traves de enfriadores de cambio de face, y dispositivos, sistemas y metodos asociados.
US8676338B2 (en) 2010-07-20 2014-03-18 Zeltiq Aesthetics, Inc. Combined modality treatment systems, methods and apparatus for body contouring applications
KR101900116B1 (ko) 2010-09-01 2018-09-18 리전츠 오브 더 유니버스티 오브 미네소타 개선된 이식가능성을 위한 조직 또는 장기의 재세포화 방법
JP5796290B2 (ja) * 2010-12-03 2015-10-21 公益財団法人先端医療振興財団 膵島組織保存溶液及びそれを用いる方法
WO2012103242A1 (en) 2011-01-25 2012-08-02 Zeltiq Aesthetics, Inc. Devices, application systems and methods with localized heat flux zones for removing heat from subcutaneous lipid-rich cells
JP6103648B2 (ja) * 2011-02-07 2017-03-29 リッチ テクノロジーズ ホールディング カンパニー リミテッド ライアビリティー カンパニー 細胞の保存及び細胞培養のための方法
CN102487939B (zh) * 2011-12-29 2014-04-09 上海润生生物技术有限公司 一种间充质干细胞储存液
EP3492084B1 (en) 2012-08-01 2021-02-17 United Therapeutics Corporation Treatment of pulmonary arterial hypertension with prostacyclin-treated endothelial progenitor cells
CA2880808C (en) 2012-08-01 2023-01-24 United Therapeutics Corporation Treatment of pulmonary arterial hypertension with mesenchymal stem cells
ES2697573T3 (es) 2013-01-09 2019-01-25 United Therapeutics Corp Tratamiento de la vasculopatía con prostaciclina y células madre mesenquimatosas
US9844460B2 (en) 2013-03-14 2017-12-19 Zeltiq Aesthetics, Inc. Treatment systems with fluid mixing systems and fluid-cooled applicators and methods of using the same
US9545523B2 (en) 2013-03-14 2017-01-17 Zeltiq Aesthetics, Inc. Multi-modality treatment systems, methods and apparatus for altering subcutaneous lipid-rich tissue
EP3035798B1 (en) 2013-08-20 2018-09-19 Yeditepe Universitesi Boron added cell cryopreservation medium
WO2015117032A1 (en) 2014-01-31 2015-08-06 Zeltiq Aesthestic, Inc. Treatment systems for treating glands by cooling
US10675176B1 (en) 2014-03-19 2020-06-09 Zeltiq Aesthetics, Inc. Treatment systems, devices, and methods for cooling targeted tissue
USD777338S1 (en) 2014-03-20 2017-01-24 Zeltiq Aesthetics, Inc. Cryotherapy applicator for cooling tissue
US10952891B1 (en) 2014-05-13 2021-03-23 Zeltiq Aesthetics, Inc. Treatment systems with adjustable gap applicators and methods for cooling tissue
US10935174B2 (en) 2014-08-19 2021-03-02 Zeltiq Aesthetics, Inc. Stress relief couplings for cryotherapy apparatuses
US10568759B2 (en) 2014-08-19 2020-02-25 Zeltiq Aesthetics, Inc. Treatment systems, small volume applicators, and methods for treating submental tissue
EP3274007B1 (en) 2015-03-26 2020-09-30 Miromatrix Medical Inc. Gas filled decellularized extracellular matrix
ES2892598T3 (es) 2015-10-19 2022-02-04 Zeltiq Aesthetics Inc Métodos de tratamiento vascular para enfriar estructuras vasculares
CN105394026B (zh) * 2015-10-31 2017-09-29 北京军科联合干细胞生物科技有限公司 一种造血干细胞冻存新方法
US10524956B2 (en) 2016-01-07 2020-01-07 Zeltiq Aesthetics, Inc. Temperature-dependent adhesion between applicator and skin during cooling of tissue
US10765552B2 (en) 2016-02-18 2020-09-08 Zeltiq Aesthetics, Inc. Cooling cup applicators with contoured heads and liner assemblies
US11382790B2 (en) 2016-05-10 2022-07-12 Zeltiq Aesthetics, Inc. Skin freezing systems for treating acne and skin conditions
US10682297B2 (en) 2016-05-10 2020-06-16 Zeltiq Aesthetics, Inc. Liposomes, emulsions, and methods for cryotherapy
US10555831B2 (en) 2016-05-10 2020-02-11 Zeltiq Aesthetics, Inc. Hydrogel substances and methods of cryotherapy
CA3041514A1 (en) 2016-10-24 2018-05-03 United Therapeutics Corporation Enhancement of msc immunomodulatory properties by treprostinil
CN108235981B (zh) * 2016-12-23 2021-07-23 西比曼生物科技（香港）有限公司 一种可临床使用的细胞冻存液
CN110198954A (zh) 2017-01-13 2019-09-03 艾吉纳斯公司 与ny-eso-1结合的t细胞受体和其使用方法
JP6626225B2 (ja) 2017-01-31 2019-12-25 サラヤ株式会社 細胞の凍結保存組成物および凍結保存方法
US11076879B2 (en) 2017-04-26 2021-08-03 Zeltiq Aesthetics, Inc. Shallow surface cryotherapy applicators and related technology
JP7387585B2 (ja) 2017-09-04 2023-11-28 アジェナス インコーポレイテッド 混合系統白血病（ｍｌｌ）特異的ホスホペプチドに結合するｔ細胞受容体およびその使用方法
US11773374B2 (en) 2017-09-19 2023-10-03 Megakaryon Corporation Method for producing purified platelets, method for producing platelet product, method for producing blood product, platelet preserving solution, platelet preserving agent, and method for preserving platelets
CN112789013A (zh) 2018-07-31 2021-05-11 斯尔替克美学股份有限公司 改善肤质的方法、装置和系统
CN114007416A (zh) * 2019-04-30 2022-02-01 明尼苏达大学董事会 用于细胞的冷冻保存的组合物和方法
KR102274228B1 (ko) 2019-12-04 2021-07-06 고려대학교 산학협력단 황산화 히알루론산을 포함하는 세포 동결보존용 조성물
KR102298738B1 (ko) 2019-12-13 2021-09-03 고려대학교 산학협력단 올리고펩티드 자기조립 나노 구조체를 포함하는 결빙 제어용 조성물

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4059967A (en) * 1976-02-19 1977-11-29 The Community Blood Council Of Greater New York, Inc. Process for freezing blood platelets
DE2929278A1 (de) * 1979-07-19 1981-01-29 Forschungsgesellschaft Fuer Bi Verfahren zum eingefrieren von zellsuspensionen
US4764463A (en) * 1986-10-30 1988-08-16 The University Of Tennessee Research Corporation Platelet cyropreservation
US4980277A (en) * 1987-10-16 1990-12-25 Cultor Ltd. Cryoprotectant solution and method
US5004681B1 (en) * 1987-11-12 2000-04-11 Biocyte Corp Preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood
US5192553A (en) * 1987-11-12 1993-03-09 Biocyte Corporation Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use
JPH0727700B2 (ja) * 1988-05-24 1995-03-29 パイオニア株式会社 ディスクプレーヤのキャリッジ駆動装置
WO1991003935A1 (en) * 1989-09-22 1991-04-04 Tsi-Mason Research Institute Method and compositions for one-step cryopreservation of embryos
US5160312A (en) * 1990-02-09 1992-11-03 W. R. Grace & Co.-Conn. Cryopreservation process for direct transfer of embryos
CA2051092C (en) * 1990-09-12 2002-07-23 Stephen A. Livesey Method and apparatus for cryopreparation, dry stabilization and rehydration of biological suspensions
US5242792A (en) * 1991-02-25 1993-09-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Method for the preservation of red blood cells by lyophilization using glycerol or inositol with disaccharides
EP0594669B9 (en) * 1991-07-08 2008-03-19 NeuroSpheres Holdings Ltd. Growth factor-responsive neural progenitor cells which can be proliferated in vitro.
US5328821A (en) * 1991-12-12 1994-07-12 Robyn Fisher Cold and cryo-preservation methods for human tissue slices

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Т.Н.Юрченко, В.Ф.Козлова, Б.А.Скорняков, В.И.Стропа, Н.В.Репин. Влияние криопротекторов на биологические системы. - К.: Наукова думка, 1983, с.117-119, 190-193. *

Also Published As

Publication number Publication date
NO974108D0 (no) 1997-09-05
US5580714A (en) 1996-12-03
CA2214280C (en) 2001-01-02
EP0813361B1 (en) 2003-11-12
CA2214280A1 (en) 1996-09-12
JP3165863B2 (ja) 2001-05-14
AU5186996A (en) 1996-09-23
DE69630679T2 (de) 2004-10-21
ES2210352T3 (es) 2004-07-01
JPH10511402A (ja) 1998-11-04
DE69630679D1 (de) 2003-12-18
EP0813361A4 (en) 2000-01-05
AU693339B2 (en) 1998-06-25
ATE253818T1 (de) 2003-11-15
WO1996027287A1 (en) 1996-09-12
US5759764A (en) 1998-06-02
BR9607147A (pt) 1997-11-25
EP0813361A1 (en) 1997-12-29
MX9706843A (es) 1998-06-30
NO974108L (no) 1997-11-06
NZ304628A (en) 1998-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2146088C1 (ru) Концентрированный раствор для хранения в криогенных условиях (варианты), раствор для хранения в криогенных условиях, способ криогенного хранения клеток (варианты), способ криогенного хранения и регенерации жизнеспособных клеток, способ криогенного хранения, регенерации и терапевтического применения клеток
Stiff et al. Unfractionated human marrow cell cryopreservation using dimethylsulfoxide and hydroxyethyl starch
Korbling et al. Autologous transplantation of blood-derived hemopoietic stem cells after myeloablative therapy in a patient with Burkitt's lymphoma
Hubel Parameters of cell freezing: implications for the cryopreservation of stem cells
JP2008528034A (ja) 直ぐに利用可能な臍帯血から誘導される細胞物質、及びその組成物の提供方法
JPS63503381A (ja) 合成の、血漿不含有で輸血可能な血小板貯蔵用媒質
JP6531256B2 (ja) 臍帯血および末梢血の凍結保存方法および凍結保存用溶液
Lazarus et al. Therapeutic effectiveness of frozen platelet concentrates for transfusion
CN112998009A (zh) Nk细胞冻存液及其制备方法和应用
Cannas et al. Supportive care in patients with acute leukaemia: historical perspectives
CN104222069A (zh) 红系祖细胞冻存液及其应用
Rowley et al. Post-thaw removal of DMSO does not completely abrogate infusional toxicity or the need for pre-infusion histamine blockade
CN115039763A (zh) 一种免疫细胞冻存液
Ragab et al. Factors in the cryopreservation of bone marrow cells from children with acute lymphocytic leukemia
Galmeas et al. A Simplified Method for Cryopreservation of Hematopoietic Stem Cells with-80dGC Mechanical Freezer with Dimethyl Sulfoxide as the Sole Cryoprotectant
CN101188941A (zh) 用于治疗糖尿病的方法和组合物
Valeri et al. Recent advances in freeze-preservation of red blood cells
Grilli et al. Role of serum on cryopreservation and subsequent viability of mouse bone marrow hemopoietic stem cells
Watanabe et al. Autologous and allogeneic transplantation with peripheral blood CD34+ cells: a pediatric experience
CN1177905A (zh) 冷冻保存溶液
RU2303631C1 (ru) Среда для криоконсервирования мезенхимальных стволовых клеток и биотрансплантат с ее использованием
Balint et al. Stem cell transplant: from cell harvesting to cryopreservation
RE et al. Long-term cryopreservation: successful trilineage engraftment after autologous bone marrow transplantation with bone marrow cryopreserved for seven years
MXPA97006843A (en) Criopreservac solution
KR102430646B1 (ko) 환원성 이당류를 포함하는 모유두 세포의 동결보존용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20090308