RU2019102378A - Аспарагиновые протеазы - Google Patents

Claims (34)

1. Рекомбинантная конструкция, содержащая регуляторную последовательность, которая функциональна в хозяине-продуценте, функционально связанную с нуклеотидной последовательностью, кодирующей аспарагиновую протеазу, выбранную из группы, состоящей из

(a) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 75% идентична SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:7,

(b) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 78% идентична SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:9, и

(c) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:8.

2. Рекомбинантная конструкция по п. 1, где указанный хозяин выбран из группы, состоящей из грибов, бактерий, дрожжей и водорослей.

3. Рекомбинантная конструкция по п. 1 или п. 2, отличающаяся тем, что конструкция на основе аспарагиновой протеазы экспрессируется хромосомно или внехромосомно.

4. Способ получения аспарагиновой протеазы, предусматривающий:

(a) трансформацию хозяина-продуцента рекомбинантной конструкцией по п. 1 и

(b) культивирование хозяина-продуцента из стадии (a) в условиях, при которых продуцируется аспарагиновая протеаза.

5. Способ по п. 4, в котором аспарагиновую протеазу необязательно извлекают из хозяина-продуцента.

6. Культуральная надосадочная жидкость, содержащая аспарагиновую протеазу, полученную с помощью способа по любому из п. 4 или п. 5.

7. Рекомбинантный микробный хозяин-продуцент, предназначенный для экспрессии аспарагиновой протеазы, при этом рекомбинантный микробный хозяин-продуцент содержит рекомбинантную конструкцию по п. 1.

8. Хозяин-продуцент по п. 7, где указанный хозяин выбран из группы, состоящей из бактерий, грибов, дрожжей и водорослей.

9. Хозяин-продуцент по п. 7 или п. 8, в котором конструкция на основе аспарагиновой протеазы экспрессируется хромосомно или внехромосомно.

10. Применение аспарагиновой протеазы в корме, кормовом продукте, композиции в виде кормовой добавки или премиксе, где аспарагиновая протеаза выбрана из группы, состоящей из:

(a) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 75% идентична SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:7,

(b) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 78% идентична SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:9, и

(c) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:8,

при этом аспарагиновая протеаза может применяться (i) отдельно, или (ii) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, или (iii) с по меньшей мере одним другим ферментом, или (iv) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, и по меньшей мере одним другим ферментом.

11. Корм для животных, содержащий аспарагиновую протеазу, выбранную из группы, состоящей из:

(a) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 75% идентична SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:7,

(b) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 78% идентична SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:9, и

(c) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:8,

при этом аспарагиновая протеаза присутствует в количестве, составляющем от 1 до 20 г/тонна корма, и при этом дополнительно аспарагиновая протеаза может применяться (i) отдельно, или (ii) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, или (iii) с по меньшей мере одним другим ферментом, или (iv) в комбинации с пробиотиком, содержащим по меньшей мере один бактериальный штамм, и по меньшей мере одним другим ферментом.

12. Выделенный полипептид, характеризующийся протеазной активностью, при этом указанный полипептид содержит аминокислотную последовательность протеазы, выбранной из группы, состоящей из:

(a) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 75% идентична SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:7,

(b) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 78% идентична SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:9, и

(c) аспарагиновой протеазы, последовательность которой по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:8.

13. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид по п. 12.

14. Композиция в виде кормовой добавки для применения в корме для животных, содержащая полипептид по п. 12 и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из белка, пептида, сахарозы, лактозы, сорбита, глицерина, пропиленгликоля, хлорида натрия, сульфата натрия, ацетата натрия, цитрата натрия, формиата натрия, сорбата натрия, хлорида калия, сульфата калия, ацетата калия, цитрата калия, формиата калия, сорбата калия, хлорида магния, сульфата магния, ацетата магния, цитрата магния, формиата магния, сорбата магния, метабисульфита натрия, метилпарабена и пропилпарабена.

15. Гранулированная композиция в виде кормовой добавки для применения в корме для животных, содержащая полипептид по п. 12, где гранулированная композиция в виде кормовой добавки содержит частицы, полученные с помощью способа, выбранного из группы, состоящей из грануляции с высоким усилием сдвига, грануляции в барабане, экструзии, окатывания, агломерации в псевдоожиженном слое, нанесения покрытия распылением в псевдоожиженном слое, высушивания распылением, сублимационной сушки, приллирования, охлаждения распылением, атомизации с помощью вращающегося диска, коацервации, таблетирования или любой комбинации из вышеуказанных способов.

16. Гранулированная композиция в виде кормовой добавки по п. 15, где средний диаметр частиц составляет более 50 микрон и менее 2000 микрон.

17. Композиция в виде кормовой добавки по п. 14, где указанная композиция находится в жидкой форме.

18. Композиция в виде кормовой добавки по п. 17, где указанная композиция находится в жидкой форме, подходящей для высушивания распылением на кормовой пеллете.