CN102199648A - 两种酶依次水解鹿血蛋白获取活性肽的方法 - Google Patents
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Abstract
两种酶依次水解鹿血蛋白获取活性肽的方法属于分子生物学领域。现有单一酶解猪血蛋白技术其水解度仅有10％。而对鹿血资源的利用仅限于直接利用。本发明为：(1)原料为鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5～10％的质量浓度配制鹿血水溶液；(2)向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分质量的2～6％，水解温度35～40℃，pH值6.5～7.5，水解时间为2～3小时，得到一次水解液；(3)向一次水解液加入碱性蛋白酶，加入量依然占鹿血成分质量的2～6％，水解温度50～55℃，pH值8.5～9.5，水解时间为2～3小时，得到二次水解液；(4)经水浴使二次水解液残余酶失活，采用膜技术纯化，获得活性肽溶液。
Description
技术领域
本发明涉及一种两种酶依次水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，实现了对鹿血资源的生物学利用，获得具有高生物活性的肽产物，属于分子生物学领域。
背景技术
氨基酸彼此以酰胺键相互连接形成的化合物称作肽，其中含10个以上氨基酸残基的肽称为多肽，而含10个以下氨基酸残基的称为寡肽或者低聚肽。由于肽的分子相对于蛋白质小得多，但生物活性很高，因而又称之为生物活性肽。生物活性肽对机体具有一定生理功能，在生命活动中起着传递生理信息，调节生理功能的作用，对维持人体正常的生理活动具有重要意义。近年来，已有100多种生物活性肽被发现和识别，有些已应用于食品工业。
动物血液如猪血是一种重要的生物资源，现有技术采用酶水解蛋白方法已经使得40％的猪血得到开发。例如将猪血配成5％的水溶液，加入胰酶，胰酶占猪血成分质量的10％，用碱控制该水溶液的pH值在7～8范围内，在40～50℃的温度下保温水解，水解5小时后得猪血蛋白水解液。不过，该单一酶解技术其酶解程度并不彻底，猪血蛋白的水解度仅有10％，造成资源浪费。
相对于猪血来说，具有更重要的生物成分的鹿血资源其利用要滞后得多，现有技术仅限于对鹿血原血液的直接利用，例如与酒混合配制鹿血酒。
发明内容
为了实现对鹿血资源的生物学利用，使其有益生物成分得以充分利用，据此获取具有很高生物活性的肽，我们发明了一种两种酶依次水解鹿血蛋白获取活性肽的方法。
本发明是一种酶水解蛋白方法，其特征在于：
(1)配制鹿血水溶液：原料为鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5～10％的质量浓度配制；
(2)木瓜酶水解鹿血蛋白：向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分质量的2～6％，水解温度35～40℃，pH值6.5～7.5，水解时间为2～3小时，得到一次水解液；
(3)碱性蛋白酶水解鹿血蛋白：向一次水解液加入碱性蛋白酶，加入量占步骤(2)中所述鹿血成分质量的2～6％，水解温度50～55℃，pH值8.5～9.5，水解时间为2～3小时，得到二次水解液；
(4)纯化二次水解液：首先经水浴使二次水解液残余酶失活，其次采用膜技术纯化二次水解液，获得活性肽溶液，再经干燥获得固态粉末状活性肽产物。
本发明之方法其效果在于，原料为来自鹿饲养场的新鲜鹿血，作为鹿血原血液直接用于鹿血蛋白酶水解，或者先行将新鲜鹿血制成鹿血粉储存，供日后进行酶水解之用。经过所述两种酶依次水解，获得固态粉末状活性肽产物，鹿血蛋白水解度达到30％，测得产物中游离氮含量高达50.43％，说明产物主要成分为活性肽。本发明不仅使得鹿血资源获得生物学利用，而且使其有益生物成分得以充分利用，同时能够满足市场对生物活性肽的需求。本发明之方法水解技术参数容易实现，水解工艺简单，生产成本低，适合规模化工业生产。
具体实施方式
本发明之方法具体实施方式如下：
(1)配制鹿血水溶液：原料为鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5～10％的质量浓度配制。
其中，鹿血粉是由鹿血原血液经离心喷雾干燥所制取，具体方法是将鹿血原血液通入高速离心喷雾干燥装置，设置入口温度为160～200℃，出口温度为70～90℃，转数为2700～3000rpm，流速为30～60ml/min，获得鹿血粉，得率为15.61％。
(2)木瓜酶水解鹿血蛋白：向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分质量的2～6％，水解温度35～40℃，pH值6.5～7.5，水解时间为2～3小时，用0.1mol/L的HCl使pH值保持在所述范围内，得到一次水解液。
(3)碱性蛋白酶水解鹿血蛋白：向一次水解液加入碱性蛋白酶，加入量占步骤(2)中所述鹿血成分质量的2～6％，水解温度50～55℃，pH值8.5～9.5，水解时间为2～3小时，用0.1mol/L的NaOH使pH值保持在所述范围内，得到二次水解液。
(4)纯化二次水解液：首先经水浴使二次水解液残余酶失活，其次采用膜技术纯化二次水解液，获得活性肽溶液，再经干燥获得固态粉末状活性肽产物。
其中的干燥方法为，干燥过程在冷冻干燥装置中进行，用0.1mol/L的酸如HCl调整活性肽溶液pH值为7.0，设置冷冻干燥温度为-60～-80℃，压强为20～50Pa，经3～5小时冷冻后加热到30～45℃，完成干燥。
将获得的固态粉末状活性肽产物密封，低温避光保存。
Claims (5)
1.一种两种酶依次水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，是一种酶水解蛋白方法，其特征在于：
(1)配制鹿血水溶液：原料为鹿血原血液或者鹿血粉，按鹿血成分5～10％的质量浓度配制；
(2)木瓜酶水解鹿血蛋白：向所配制的鹿血水溶液中加入木瓜酶，加入量占鹿血成分质量的2～6％，水解温度35～40℃，pH值6.5～7.5，水解时间为2～3小时，得到一次水解液；
(3)碱性蛋白酶水解鹿血蛋白：向一次水解液加入碱性蛋白酶，加入量占步骤(2)中所述鹿血成分质量的2～6％，水解温度50～55℃，pH值8.5～9.5，水解时间为2～3小时，得到二次水解液；
(4)纯化二次水解液：首先经水浴使二次水解液残余酶失活，其次采用膜技术纯化二次水解液，获得活性肽溶液，再经干燥获得固态粉末状活性肽产物。
2.根据权利要求1所述的酶水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，其特征在于，鹿血粉是由鹿血原血液经离心喷雾干燥所制取，具体方法是将鹿血原血液通入高速离心喷雾干燥装置，设置入口温度为160～200℃，出口温度为70～90℃，转数为2700～3000rpm，流速为30～60ml/min，获得鹿血粉。
3.根据权利要求1所述的酶水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，其特征在于，步骤(2)用0.1mol/L的HCl使pH值保持在所述范围内。
4.根据权利要求1所述的酶水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，其特征在于，步骤(3)用0.1mol/L的NaOH使pH值保持在所述范围内。
5.根据权利要求1所述的酶水解鹿血蛋白获取活性肽的方法，其特征在于，其中的干燥方法为，干燥过程在冷冻干燥装置中进行，用0.1mol/L的酸如HCl调整活性肽溶液pH值为7.0，设置冷冻干燥温度为-60～-80℃，压强为20～50Pa，经3～5小时冷冻后加热到30～45℃，完成干燥。
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